以下実施例により、本発明を更に詳しく� ��明するが、本発明はこれらに限定されるも� ��ではない。

[参考例:硫酸化セルロースカルシウム塩の製� ��:CaCS-005(Lot.IK031215)]
 {第一段階:硫酸化工程}
 40℃で真空乾燥した結晶性セルロース(旭化� ��製、商品名:セオラスPH-101) 20.0g(123.5mmol(グ� �コース換算))を500mLセパラブルフラスコに入� ��、DMF 100mLにて4日間攪拌下含浸を行なった� �
 この懸濁液を5℃まで冷却した。次に攪拌し たまま、セパラブルフラスコに接続した滴下 ロートから、20%無水硫酸-DMF錯体溶液 371.8g(SO ₃ :0.929mol)を、系内温度を5℃に維持しながら徐� ��に滴下した。滴下終了後、恒温槽にて16~17� �に調整し、6時間攪拌した。
 次にイソプロパノール 500mLをこの反応液に 加えた。反応液中からの析出物をろ別した。 ろ過物を水 500mLにて溶解し、飽和塩化カル� �ウム水溶液 137.0gを加え、カルシウム化を行 ない、粗生成物を析出させ、ろ別し目的物を 得た。さらにイソプロパノール(500mL×2回)で� �浄した。濾過操作にてイソプロパノールを� �去後、真空乾燥器にて乾燥させ、27.5gの硫酸 化セルロースカルシウム塩を得た。元素分析 を行ったところ、S;16.0%、Ca;12.4%、置換度は、 1.6であった。

{第二段階:UF膜限外ろ過工程}
 第一段階で得られた硫酸化セルロースカル� ��ウム塩 25.05g(78.18mmol(グルコース換算))を冷� ��下イオン交換水 2000mLにて溶解した。
 次にUF膜(旭化成製:ペンシル型モジュールACP -0013,公称分画分子量:13,000)を用いて、流速1.88 ~1.92L/minで限外ろ過を行なった。原液が200mLに なるまで循環濃縮した。200mL分を凍結乾燥に� ��け最終的に17.68gの白色粉末を得た。
 元素分析を行なったところ、S;18.3%、Ca;12.4%� ��置換度は、2.1であった。

[本発明例:架橋硫酸化セルロースカルシウム� ��の製造:CaCS-006(Lot.IK031224)]
 {第一段階;架橋工程}
 結晶性セルロース(旭化成製、商品名:セオ� �スPH-101) 5.0g(30.8mmol(グルコース換算))を500mL� �口フラスコに入れ、冷却管、滴下ロートを� �続した。別途、水酸化ナトリウム(96%品) 8.6g (206mmol)を水 50mLに溶解した。この調製した水 酸化ナトリウム水溶液を滴下ロートに移し、 結晶性セルロースに加えた。室温で10分間攪� ��し、懸濁状態を維持した。
 次に反応系にn-ヘプタン 50mLとメタノール  50mLを加え、50℃に昇温した。そこへ滴下ロー トを用いて、エピクロロヒドリン 8.5g(92mmol)� ��メタノール 50mLに溶解したものを懸濁液に� ��やかに滴下した。二層が良く混合するよう� ��しながら、50~60℃を保持して3時間攪拌した� ��
 室温まで冷却後、攪拌したまま濃塩酸を徐� ��に加え、水層のpHが、7.0付近にした。一旦� �減圧濾過し、濾過物を水で洗浄し、さらに� �タノールで洗浄した。濾過操作にてメタノ� �ルを除去後、真空乾燥機にて充分乾燥させ� �6.1gの架橋セルロースを得た。架橋度は、0.17 4であった。

{第二段階;硫酸化工程}
 第一段階で得られた架橋セルロース 4g(0.024 7mol(グルコース換算))を500mLセパラブルフラス コに入れ、DMF 20mLにて攪拌下3日間含浸した� �その後この懸濁液を5℃まで冷却した。次に� ��拌したまま、セパラブルフラスコに接続し� ��滴下ロートから、20%無水硫酸-DMF錯体溶液 7 4.12g(SO ₃ :0.185mol)を徐々に滴下した。このとき、反応� �度は5℃を維持した。滴下終了後、恒温槽に� ��16~17℃に調整し、24時間攪拌した。
 次にイソプロパノール 100mLをこの反応液に 添加した。反応液中からの析出物をろ過分別 した。ろ過物を水 250mL加え、攪拌した。さ� �に、飽和塩化カルシウム水溶液 27.45gを添加 し2時間攪拌した。不溶物をろ別し、さらに� �ソプロパノール(100mL×2回)で洗浄した。濾過� ��作にてイソプロパノールを除去後、真空乾� ��器にて充分乾燥させ、8.09gの架橋硫酸化セ� �ロースカルシウム塩を得た。元素分析を行� �たところ、S;17.6%、Ca;10.8%、置換度は、2.3で� �った。

[参考例:架橋硫酸化セルロースカルシウム塩� ��製造:CaCS-007(Lot.IK040113)]
 {第一段階;架橋工程}
 結晶性セルロース(旭化成製、商品名:セオ� �スPH-101) 16.0g(99mmol(グルコース換算))を500mL三 口フラスコに入れ、冷却管、滴下ロートを接 続した。次に反応系にn-ヘプタン 300mLとイソ プロパノール 10mLを加えた。30分攪拌後、別� ��、水酸化ナトリウム(96%品) 32.0g(768mmol)を水� �100mLに溶解した。この調製した水酸化ナトリ ウム溶液の半量を滴下ロートに移し懸濁液に 加え、室温で1時間攪拌した。
 滴下ロートを用いて、エピクロロヒドリン� �26.0g(281mmol)を懸濁液に速やかに滴下後、50℃� ��昇温した。二層が良く混合するようにしな� ��ら、50~60℃を保持して3時間攪拌した。次に� ��りの水酸化ナトリウム溶液を滴下し、1.5時� ��攪拌した。これにエピクロロヒドリン 26.0g (281mmol)を加え、さらに2時間攪拌した。
 室温まで冷却後、不溶物をろ別し、濾過物� ��水、2N塩酸、水で順次洗浄し、洗液のpHが中 性付近になるまで洗浄した。さらにメタノー ルで洗浄した。真空乾燥機にて乾燥させ、18. 1gの架橋セルロースを得た。架橋度は、0.198� �あった。

{第二段階;硫酸化工程}
 第一段階で得られた架橋セルロース 10g(0.06 17mol(グルコース換算))を500mLセパラブルフラ� �コに入れ、DMF 50mLにて攪拌下3日間含浸した� ��その後この懸濁液を5℃まで冷却した。次に 攪拌したまま、セパラブルフラスコに接続し た滴下ロートから、18%無水硫酸-DMF錯体溶液  206.04g(SO ₃ :0.463mol)を徐々に滴下した。このとき、反応� �度は5℃を維持した。滴下終了後、恒温槽に� ��16~17℃に調整し、24時間攪拌した。
 次にイソプロパノール 250mLをこの反応液に 添加した。反応液中からの析出物をろ過分別 した。ろ過物を水 625mL加え、攪拌した。さ� �に、飽和塩化カルシウム水溶液 68.60gを添加 し2時間攪拌した。不溶物をろ別し、さらに� �ソプロパノール(100mL×2回)で洗浄した。濾過� ��作にてイソプロパノールを除去後、真空乾� ��器にて充分乾燥させ、13.7gの架橋硫酸化セ� �ロースカルシウム塩を得た。元素分析を行� �たところ、S;7.40%,Ca;5.38%、置換度は、0.58であ った。

[本発明例:架橋硫酸化セルロースカルシウム� ��の製造:Lot.IK-40223]
 {第一段階;架橋工程}
 結晶性セルロース(旭化成製、商品名:セオ� �スPH-101) 80.0g(0.494mol(グルコース換算))を3L三� ��フラスコに入れ、MeOH 800mLとn-ヘキサン 800m Lに懸濁した。冷却管、攪拌羽根(攪拌モータ� ��付)、滴下ロートを接続し、攪拌した。別途 、水酸化ナトリウム(96%品) 140.0g(3.36mol)を水  1600mLに溶解しておいた。この調製した水酸化 ナトリウム水溶液を滴下ロートに移し、懸濁 液に加えた。室温で30分間攪拌し、懸濁状態� ��維持した。
 次に反応系を50℃に昇温し、そこへ滴下ロ� �トを用いて、エピクロロヒドリン 138.8g(1.5mo l)をメタノール 200mLに溶解したものを懸濁液 に滴下した。二層が良く混合するようにしな がら、50~60℃を保持して3時間攪拌した。
 室温まで冷却後、洗液がpH=7.0付近になるま� ��、水、2N塩酸、水で順次洗浄した。
 減圧濾過し、濾過物をメタノールで洗浄し� ��。濾過操作にてメタノールを除去後、真空� ��燥機にて乾燥させ、84.4gの架橋セルロース� �得た。架橋度は、0.053であった。

{第二段階;硫酸化工程}
 第一段階で得られた架橋セルロース、40g(0.2 47mol(グルコース換算))を500mLセパラブルフラ� �コに入れ、DMF 200mLにて攪拌下3日間含浸した 。その後この懸濁液を5℃まで冷却した。次� �攪拌したまま、セパラブルフラスコに接続� �た滴下ロートから、18%無水硫酸-DMF錯体溶液� �900g(SO ₃ :2.025mol)を徐々に滴下した。このとき、反応� �度は5℃を維持した。滴下終了後、恒温槽に� ��16~17℃に調整し、一昼夜攪拌した。
 次にイソプロパノール 1000mLをこの反応液� �添加した。反応液中からの析出物をろ過分� �した。ろ過物を水 1000mLにて溶解し、飽和塩 化カルシウム水溶液 274.5gを添加しカルシウ� ��化を行ない、粗生成物を析出させ、ろ過分� ��し目的物を得た。さらにイソプロパノール( 1000mL×2回)で洗浄した。濾過操作にてイソプ� �パノールを除去後、真空乾燥器にて充分乾� �させ、76.8gの架橋硫酸化セルロースカルシウ ム塩を得た。元素分析を行ったところ、S;16.8 %、Ca;12.8%、置換度は、1.9であった。

[本発明例:架橋硫酸化セルロースカルシウム� ��の製造:Lot.SS-1054]
 {第一段階;架橋工程}
 結晶性セルロース(旭化成製、商品名:セオ� �スPH-101) 80.0g(0.494mol(グルコース換算))を3L三� ��フラスコに入れ、冷却管、攪拌羽根(攪拌モ ーター付)、滴下ロートを接続した。そこへ� �タノール 800mLおよびn-ヘキサン 800mLを加え� ��拌し、懸濁液とした。別途、水酸化ナトリ� ��ム(96%品) 144.0g(3.457mol)を氷冷下で水 800mLに� ��解した。この調製した水酸化ナトリウム水� ��液を滴下ロートに移し、懸濁液に加えた。� ��温で60分間攪拌し、懸濁状態を維持した。
 次に反応系を50℃に昇温し、そこへ滴下ロ� �トを用いて、エピクロロヒドリン 159.9g(1.728 mol)をメタノール 200mLに溶解したものを懸濁� ��に速やかに滴下した。二層が良く混合する� ��うにしながら、50~60℃を保持して6時間攪拌� ��た。
 室温まで冷却し、さらに20時間攪拌を続け� �後、5Lビーカーに移し4時間静置した。上澄� �液をデカンテーションによって除去し、残� �を水で懸濁後、減圧濾過した。濾過物を水� �再度懸濁後、攪拌したまま濃塩酸を徐々に� �え、pHが、7.0付近にした。一旦、減圧濾過し 、濾過物を水で洗浄し、さらにメタノールで 洗浄した。濾過操作にてメタノールを除去後 、真空乾燥機にて充分乾燥させ、80.8gの架橋� ��ルロースを得た。架橋度は、0.01未満であっ た。

{第二段階;硫酸化工程}
 第一段階で得られた架橋セルロース 30g(0.18 mol(グルコース換算))を2L三口フラスコに入れ� ��DMF 150mLを加えて室温で21時間攪拌した。こ� ��懸濁液を5℃まで冷却した。次に攪拌したま ま、三口フラスコに接続した滴下ロートから 、無水硫酸DMF錯体DMF溶液(18.5%品)、721.0g(0.871mo l)を徐々に滴下した。このとき、反応温度は5 ±5℃を維持した。滴下終了後、室温まで昇温 し、24時間攪拌した。
 次にイソプロパノール 1000mLを洗浄液に用� �て加圧濾過した。濾過物を水 750mLに溶解後� ��別に調製した塩化カルシウム水溶液(31.1%) 1 98.0g(0.555mol)を加えた。そこへ攪拌しながらイ ソプロパノール 1000mLを加え結晶を析出させ� ��後、60分間静置した。上澄み液をデカンテ� �ションによって除去し、残渣をイソプロパ� �ールで懸濁後、減圧濾過した。さらにイソ� �ロパノールで洗浄した。濾過操作にてイソ� �ロパノールを除去後、真空乾燥機にて充分� �燥させ、79.8gの架橋硫酸化セルロースカルシ ウム塩を得た。元素分析を行ったところ、S;1 7.8%、Ca;12.4%、置換度は、2.0であった。

[本発明例:架橋硫酸化セルロースカルシウム� ��の製造:Lot.Type-007]
 {第一段階;架橋工程}
 結晶性セルロース(旭化成製、商品名:セオ� �スPH-101)、80.0g(0.494mol(グルコース換算))を3L三 口フラスコに入れ、冷却管、攪拌羽根(攪拌� �ーター付)、滴下ロートを接続した。別途、� ��酸化ナトリウム(96%品)、329.2g(7.901mol)を水 80 0mLに溶解した。この調製した水酸化ナトリウ ム水溶液を滴下ロートに移し、結晶性セルロ ースに加えた。室温で30分間攪拌し、懸濁状� ��を維持した。
 次に反応系を50℃に昇温し、そこへ滴下ロ� �トを用いて、エピクロロヒドリン 228.4g(2.469 mol)をn-ヘプタン 1,600mLに溶解したものを懸濁 液に速やかに滴下した。二層が良く混合する ようにしながら、50~60℃を保持して3時間攪拌 した。
 室温まで冷却後、攪拌したまま濃塩酸を徐� ��に加え、水層のpHが、7.0付近にした。一旦� �減圧濾過し、濾過物を水で洗浄し、さらに� �タノールで洗浄した。濾過操作にてメタノ� �ルを除去後、真空乾燥機にて充分乾燥させ� �94.9gの架橋セルロースを得た。本化合物のX� �回折を行って得られた結晶性が無くなった� �とを示すチャートから、架橋が進んだこと� �確認された。架橋度は、0.180であった。

{第二段階;硫酸化工程}
 第一段階で得られた架橋セルロース 25g(0.13 0mol(グルコース換算))を塩化カルシウム 34.3g( 0.309mol)とともに500mL三口フラスコに入れ、DMF� �300mLを加えて室温で24時間攪拌した。この懸� ��液を5℃まで冷却した。次に攪拌したまま、 三口フラスコに接続した滴下ロートから、無 水硫酸 28.9mL(0.694mol)を徐々に滴下した。この とき、反応温度は20±5℃を維持した。滴下終� ��後、室温まで昇温し、24時間攪拌した。
 次にイソプロパノール 1000mLを洗浄液に用� �て減圧濾過した。濾過物を水(1000mL×3回)で洗 浄した。さらにメタノール(500mL×2回)で洗浄� �た。濾過操作にてメタノールを除去後、真� �乾燥機にて充分乾燥させ、48.0gの架橋硫酸化 セルロースカルシウム塩を得た。元素分析を 行ったところ、S;16.7%、Ca;9.7%、置換度は、1.9� ��あった。    

[本発明例:架橋硫酸化セルロースカリウム塩� ��製造:Lot.KCS01-001]
 {第二段階;硫酸化工程}
 攪拌機、温度計及び滴下ロートを備えた2L� �ラスコに本発明例Lot.Type-007の{第一段階;架橋 工程}の製造法と同様に製造した架橋セルロ� �ス 50.0g(0.260mol(グルコース換算))及び塩化カ� ��シウム 68.5g(0.617mol)を入れた。窒素気流下� �した後、氷冷しながらDMF 800mLを加えて懸濁� ��とした。5℃まで冷却した後、室温まで昇温 し、窒素気流下で24時間攪拌した。この懸濁� ��を-20℃まで冷却した。次に攪拌したまま、� ��パラブルフラスコに接続した滴下ロートか� ��、無水硫酸 59.0mL(1.42mol)を徐々に滴下した� �このとき、反応温度は-20~0℃を維持した。滴 下終了後、20±5℃まで昇温し、24時間攪拌し� �。
 次に反応系内にメタノール 1000mLを加えた� �、加圧濾過した。イソプロパノール 1000mLで 洗浄した後、濾過物を水 800mLに加え、攪拌� �懸濁液とした。この懸濁液に水酸化カリウ� �水溶液を徐々に加え、水層のpHを7.0付近にし た。加圧濾過し、得られた濾過物に25%塩化カ リウム水溶液、400gを加え2時間攪拌状態を保� ��した。減圧濾過し、再び得られた濾過物に2 5%塩化カリウム水溶液、400gを加え2時間攪拌� �態を保持した。減圧濾過し、さらに水及び� �セトンで洗浄した後、真空乾燥機にて充分� �燥した。その結果、109.8gの架橋硫酸化セル� �ースカリウム塩を得た。元素分析を行った� �ころ、S;15.7%、K;20.2%、Ca;0.45%、置換度は、1.89 であった。

[製造例:架橋アルキル硫酸化セルロースカル� ��ウム塩の製造]
〔本発明例:架橋プロピル硫酸化セルロース� �ルシウム塩:Lot.ME13-138〕

{第一段階;架橋工程}

{第二段階;硫酸化工程}
 7.8g(0.20mol)のNaHを100mLのヘキサンで洗浄後、2 00mLのDMSOに懸濁し、アルゴン置換した。この� ��液に、30gの架橋化セルロース(上記化学反応 式中の化合物1;本発明例Lot.Type-007の{第一段階 ;架橋工程}の製造法と同様に製造した架橋セ� ��ロース(0.156mol(グルコース換算)))を加え、50� ��で1時間攪拌し、さらに、23.7g(0.19mol)の1,3-プ ロパンスルトンのDMSO(25mL)溶液を滴下し、50℃ で16時間攪拌した。この反応液を700mLの冷メ� �ノールに加え、得られた結晶(上記化合物2)� �減圧濾過し、メタノールで洗浄後(100mL×3)、7 0℃で2時間真空乾燥した。
 収量は、51.4gであった。元素分析を行った� �ころ、Na;6.1%、S;8.9%、置換度は、0.9であった� ��
 117g(0.80mol)のCaCl ₂ ・2H ₂ Oの水溶液(350mL)に、50gの化合物2(0.149mol(グル� �ース換算))を加え、50℃で12時間攪拌した。� �応液を遠心分離(3000rpm/20分/4℃)し、得られた 残渣を250mLの水で洗浄・遠心分離し(それぞれ 3回実施)、450mLのメタノールに加え、室温下30 分間攪拌し、化合物3を得た。得られた化合� �3を減圧濾過し、メタノール(100mL×2)で洗浄し 、70℃で4時間真空乾燥した。
 収量は、47.3gであった。元素分析を行った� �ころ、Ca;5.5%、S;8.7%、置換度は、0.8であった� ��

〔本発明例:架橋プロピル硫酸化セルロー� �カルシウム塩 Lot.ME13-138の硫酸化:Lot.ME13-135� �ME13-141〕

2.0gの上記化合物3(6.00mmol(グルコース換算))と0 .98g(8.8mmol)のCaCl ₂ を無水DMF 15mLに懸濁し、アルゴン置換下、室 温で12時間攪拌した。この懸濁液に、3.1g(20mmo l)の無水硫酸DMF錯体を加え、室温で1時間、50� ��で10時間攪拌した。この反応液に30mLのイソ� ��ロパノールを加え、結晶を減圧濾過した。� ��られた残渣に30mLの水に加え、水酸化カルシ ウム水溶液で中和した。この溶液を、遠心分 離(3000rpm/30min./4℃)した。残渣に50mLの水を加� �攪拌後、同条件で遠心分離した。水での洗� �操作を再度行い遠心分離し、得られた化合� �4をメタノール100mLに懸濁した後、減圧濾過� �、60℃で10時間真空乾燥した。(ME13-135)
 収量は、1.9gであった。元素分析を行ったと ころ、Ca;8.5%、S;13%、置換度は、1.7であった。
 また、同様の方法によって45gの化合物3から 49gの化合物4を得た。(ME13-141)
 元素分析を行ったところ、Ca;10.7%、S;12.6%、� ��換度は、1.6であった。

〔本発明例:架橋化ビスプロピル硫酸化カ� �シウム塩の製造:Lot.ME13-147〕

 17.6g(0.44mol)のNaHを120mLのヘキサンで洗浄後、 200mLのDMSOに懸濁し、アルゴン置換した。この 溶液に30gの化合物1;本発明例Lot.Type-007の{第一 段階;架橋工程}の製造法と同様に製造した架� ��セルロース(0.156mol(グルコース換算))を加え� ��50℃で1時間攪拌し、さらに、53.8g(0.44mol)の1, 3-プロパンスルトンのDMSO(50mL)溶液を滴下し、 50℃で24時間攪拌した。反応液を400mLの冷メタ ノールに加え、得られた結晶(上記化合物5)を 減圧濾過し、メタノール(250mL×2)とジエチル� �ーテル(200mL)で洗浄し、70℃で1時間真空乾燥� ��た。(ME13-146)
 収量は、73.9gであった。元素分析を行った� �ころ、Na;9.1%、S;12%、置換度は、1.6であった� �
 229g(1.5mol)のCaCl ₂ ・2H ₂ Oの水溶液(300mL)に、70gの化合物5(0.146mol(グル� �ース換算))を加え、50℃で12時間攪拌した。� �応液を遠心分離(3000rpm/20分/4℃)し、得られた 残渣を水(250mL)で洗浄・遠心分離し(それぞれ3 回実施)、400mLのメタノールに加えた。得られ た化合物6を減圧濾過し、メタノール(100mL×2)� ��洗浄し、70℃で4時間真空乾燥した。(ME13-147)
 収量は、46.8gであった。元素分析を行った� �ころ、Ca;7.2%、S;11%、置換度は、1.3であった� �

[本発明例:架橋6-ヒドロキシカルボニルメ� �ルオキシセルロースカルシウム塩の製造]

{第1工程;6-ヒドロキシカルボニルメチルオキ� ��セルロースの製造}
 攪拌機、温度計及び滴下ロートを備えた1L� �底フラスコにヒドロキシエチルセルロース(� ��光純薬製) 10.2g(0.0495mol(グルコース換算))を� ��オン交換水 700mLに分散させ、これにTEMPO 28 mgと臭化ナトリウム 260mgを加え、室温で攪拌 した。これに5%次亜塩素酸ナトリウム水溶液( 和光純薬製) 77gを加えた。
 反応液のpHが徐々に下がっていくので、0.2M- 水酸化ナトリウム水溶液を適宜加えて、pH10.5 程度を維持した。約1時間後、あまりpHが変化 しないことを確認後、0.2M-水酸化ナトリウム� ��溶液を10mL加え、室温で一晩攪拌した。翌朝 、pHが9.9になっていた反応液を1N-塩酸を用い� ��、pH1.8まで下げた。
 反応液を3Lビーカーに移し、1400mLの2-プロパ ノールを加え、晶析を行った。二晩静置後、 上澄み液をデカンテーションし、残分を吸引 濾過した。濾過物をエタノールで洗浄し、60� ��で一晩減圧乾燥した。白色粉末 10.8gを得た 。
 IRを測定したところ、1730cm ^-1 にカルボキシル基由来のC=O伸縮由来の強い吸 収ピークを確認した。

{第2工程;6-ヒドロキシカルボニルメチルオキ� ��セルロースの架橋}
 第1工程で得られた6-ヒドロキシカルボニル� ��チルオキシセルロース 10.8g(0.049mol(グルコ� �ス換算))を1L三口フラスコに入れ、冷却管、� ��拌羽根(攪拌モーター付)、滴下ロートを接� �した。別途、水酸化ナトリウム(96%品) 4.2g(0. 1mol)を水 200mLに溶解した。この調製した水酸 化ナトリウム水溶液を結晶性セルロースに加 えた。室温で30分間攪拌した。
 次に反応系を50℃に昇温し、そこへ滴下ロ� �トを用いて、エピクロロヒドリン 12g(0.13mol) をn-ヘプタン 160mLに溶解したものを懸濁液に 速やかに滴下した。二層が良く混合するよう にしながら、50~60℃を保持して3時間攪拌した 。
 室温まで冷却後、攪拌したまま濃塩酸を徐� ��に加え、水層のpHを、7.0付近にした。一旦� �減圧濾過し、濾過物を水で洗浄し、さらに� �タノールで洗浄した。濾過操作にてメタノ� �ルを除去後、減圧乾燥機で60℃で一晩減圧乾 燥した。その結果、12.8gの6-ヒドロキシカル� �ニルメチルオキシセルロースを得た。本化� �物のX線回折を行って得られた結晶性が無く� ��ったことを示すチャートから、架橋が進ん� ��ことが確認された。

{第3工程;架橋6-ヒドロキシカルボニルメチル� ��キシセルロースのカルシウム化}
 この白色粉体 12g(0.05mol(グルコース換算))を 純水 100mLに溶解し、塩化カルシウム 30gと水 酸化カルシウム 4gを加えた。この懸濁液を3� ��間攪拌後、一晩静置した。1N-塩酸を用いて� ��懸濁液のpHを11.5から7.5に下げて中和した。� ��れを吸引濾過し、濾過物をエタノールで洗� ��した。60℃で一晩減圧乾燥し、白色微粉末  12gを得た。
 元素分析を行ったところ、Ca;7.2%、置換度は 、1.0であった。また本化合物のIRを測定した� ��ころ、1730cm ^-1 にカルボキシル基由来のC=O伸縮由来の強い吸 収ピークを確認した。

<有用性に関する試験1>
 {架橋型硫酸化セルロース(Ca)の正常ラット� �糞便への電解質排泄に及ぼす影響}
 〔方法〕
 動物は日本チャールスリバー(株)より購入� �たSD系雄性ラットを用いた。ラットは一夜絶 食飼育した後3日間、精製飼料(Casein 25.0%、ア ルファコーンスターチ 51.5%、大豆油 6.0%、� �ュクロース 5.0%、AIN76ミネラル混合 3.5%、AIN 76ビタミン混合 1.0%、セルロース8.0%)の1%をNaC l、5%をCelluloseで置換したセルロース食を用い て制限給餌下に粉末飼料へ馴化させた。その 後、動物の体重を測定し、馴化期間中の摂餌 量および体重を指標に群分けした。即ち、セ ルロース食を摂取させたコントロール群、精 製飼料セルロースの、1%をNaCl、5%を試験物質� ��置換させた飼料を摂取させた試験物質(SS1054 , IK-40223, Type007)群を設けた。各群のラット� �一夜絶食飼育させた後、各試験食で4日間制� ��給餌(20g/day)させた。試験食飼育の3日目には 17時から48時間採糞を行った。尚、試験期間� �、各群のラットには蒸留水を自由に摂取さ� �た。採取した糞便は50℃の乾燥機内で5日間� �燥させた後、乾燥重量を求めた後、灰化(500� ��、36時間以上)し、蒸留水にて懸濁し、遠心� ��離した後その上清のNaおよびK濃度をイオン� ��極法で測定しそれぞれの含量を求めた。Pに ついては濃硝酸による可溶化処理の後、酵素 法により溶液中濃度を測定し含量を求めた。

 〔結果〕
 セルロース群(n=4)の糞便電解質排泄量(mg/day� ��平均値±標準偏差)はそれぞれ1.0±0.4(Na)、0.9� �0.3(K)、34.9±2.0(P)であり、SS-1054群(n=4)の糞便� �解質排泄(mg/day)はそれぞれ29.6±8.5(Na)、17.3±3. 1(K)、48.3±5.7(P)、IK-40233群(n=4)の糞便電解質排� ��(mg/day)はそれぞれ18.2±5.2(Na)、10.5±2.2(K)、44.8 ±4.2(P)、Type007群(n=4)の糞便電解質排泄(mg/day)� �それぞれ30.6±2.7(Na)、10.2±1.9(K)、45.4±0.9(P)で� ��り、試験物質群で各種電解質の糞便排泄の� ��加が認められた。これらの結果をグラフ化� ��て、図1の(a)および図2~図3に示す。
 また、試験物質群の尿中電解質排泄は糞便� ��泄の増加に応じた低下がみられた。後記す� ��<有用性に関する試験6>に用いたCaCS006に ついても同様の効果が認められた。

<参考試験>
 {硫酸化セルロース(Ca)の正常ラットの糞便� �の電解質排泄に及ぼす影響}
 (硫酸化セルロースカルシウム塩の製造)
 蒸留水(D.W.)1Lの入った5L容ビーカーに硫酸化 セルロースナトリウム塩(米 Acros社製)50gを入 れ攪拌し、完全に溶解させた。その後、塩化 カルシウム・2水和物(片山化学社製)93gの水溶 液300mLを投入し、30分間攪拌した。これに、� �ソプロピルアルコール1Lを加え、更に1時間� �拌後、1晩静置した。上清をデカンテーショ� ��により除去し、さらに残渣を遠心分離して� ��殿を得た。再度この沈殿をイソプロピルア� ��コール1Lに懸濁し、30分間攪拌後、1晩静置� �た。上清をデカンテーションにより除去し� �さらに残渣を遠心分離して沈殿を得た。こ� �沈殿を減圧乾燥して、硫酸化セルロースカ� �シウム塩44gを白色粉末として得た。

 〔方法〕
 実験動物は9週齢のウィスター(Wistar)系雄性� ��ット(日本チャールスリバー(株))を用いた。 動物は一夜絶食した後、個別代謝ゲージに移 し、3日間セルロース食(カゼイン 20%(w/w以下� ��じ)、αコーンスターチ 59.5%、大豆油 5%、� �ュークロース 5%、AIN-76ビタミン混合 1%、AIN -76ミネラル混合 3.5%、食塩 1%及びセルロー� � 5%)を用いて制限給餌下(20g/ラット/日)に粉� �飼料へ馴化させた。その後、動物の体重を� �定し、訓化期間中の摂餌量及び体重を指標� �群分け(n=5/群)した。即ち、セルロース食を� �取させたセルロース群、該セルロース食の� �ルロースを硫酸化セルロースカルシウム塩� �40%置換した飼料又は全量置換した飼料を摂� �させた、硫酸化セルロースカルシウム塩2%群 及び硫酸化セルロースカルシウム塩5%群をそ� ��ぞれ設けた。

 各群のラットは一夜絶食させた後、各試� ��食で2日間制限給餌下(20g/ラット/日)に飼育� �た。試験食飼育の2日目には、午後7時より24� ��間尿及び糞便の採取を行った。尚、試験期� ��中各群のラットには蒸留水を自由に摂取さ� ��た。摂取した糞便は、70℃、4日間の乾燥処� ��を施し乾燥重量を求めた後、灰化(500℃以上 、36時間)し、原子吸光法によるナトリウムの 測定を行った。採取した尿は採尿カップの重 量差より比重1.0と仮定して尿中ナトリウムを イオン電極法により測定した。

 〔結果〕
 図1(b)に各群の糞便ナトリウム排泄を示した 。図1(b)中では、硫酸化セルロースカルシウ� �塩を「Ca化硫酸セルロース」と記載した。
 糞便ナトリウム排泄は、セルロース群の0.2� �0.1mg/日に比し、硫酸化セルロースカルシウ� �塩2%群は10.4±2.2mg/日、硫酸化セルロースカル シウム塩5%群では29.9±7.5mg/日であり、硫酸化� ��ルロースカルシウム塩摂取による用量依存� ��な糞便ナトリウム排泄の増加が確認された� ��
 一方、尿中ナトリウム排泄は、セルロース� ��では、89.6±6.5mg/日の尿中ナトリウム排泄が� ��られたのに比し、硫酸化セルロースカルシ� ��ム塩2%群で65.3±4.5mg/日、硫酸化セルロース� �ルシウム塩5%群では40.3±3.4mg/日と、カルシウ ム化硫酸セルロース摂取による用量依存的な 尿中ナトリウム排泄の低下が確認された。

<有用性に関する試験2>
 〔方法〕
 前記<有用性に関する試験1>と同様の方� ��により試験を実施した。精製飼料(950gあた� �の原材料がCasein 200g、アルファコーンスタ� �チ 595g、大豆油 50g、シュクロース 50g、AIN7 6ミネラル混合 35g、AIN76ビタミン混合 10g、Na Cl 10g)を9の割合に対しME13-147を1の割合で混ぜ た飼料を2日間経口摂取(20g/day)させ、試験食� �育の2日目に採糞した。

 〔結果〕
 Cellulose群(0.8±0.1(Na)、0.5±0.1(K))に比して、ME1 3-147群(4.3±1.3(Na)、4.2±1.7(K))とそれぞれの電解 質で糞便排泄の増加がみられた。

<有用性に関する試験3>
 〔方法〕
 前記<有用性に関する試験1>と同様の方� ��により試験を実施した。精製飼料(Casein 20%� ��アルファコーンスターチ 59.5%、大豆油 5%� �シュクロース 5%、AIN76ミネラル混合 3.5%、AI N76ビタミン混合 1%、NaCl 1.0%、CelluloseまたはM E13-141 5.0%)を4日間経口摂取(20g/day)させ、試験 食飼育の3日目と4日目に採糞した。

 〔結果〕
 Cellulose群(0.5±0.1(Na)、0.4±0.1(K))に比して、ME1 3-141群(23±6(Na)、6±2(K))とそれぞれの電解質で� ��便排泄の増加がみられた。

<有用性に関する試験4>
 〔方法〕
 前記<有用性に関する試験1>と同様の方� ��により試験を実施した。精製飼料(Casein 20%� ��アルファコーンスターチ 59.5%、大豆油 5%� �シュクロース 5%、AIN76ミネラル混合 3.5%、AI N76ビタミン混合 1%、NaCl 1.0%、CelluloseまたはK CS01-001 5.0%)を4日間経口摂取(20g/day)させ、試� �食飼育の3日目と4日目に採糞した。

 〔結果〕
 Cellulose群(0.3±0.0(Na)、0.6±0.1(K))に比して、KCS 01-001群(47±7(Na)、34±5(K))はそれぞれの電解質� �糞便排泄の増加がみられた。

<有用性に関する試験5>
 {架橋型硫酸化セルロース(Ca)の正常ラット� �消化管に及ぼす影響}
 〔方法〕
 動物は日本チャールスリバー(株)より購入� �た7-9週齢CBA系雄性マウスを用いて、体重を� �標に群分けした。各群のマウスには市販の� �末飼料(オリエンタル酵母工(株)、粉末CRF1)の 10%をセルロース(粉末、ナカライテスク(株))� �たは試験物質(SS1054, IK-40223, Type007)でそれぞ れ置換した試験食を1週間自由摂取させた。� �験食摂取終了の後、それぞれのマウスより� �便を一つ以上採取し、スライドを用いた化� �法による便潜血検査(便潜血スライドシオノ� ��II、シオノギ製薬)を実施し、色調の変化の� ��度に応じて0(変化なし)~5(濃)まで点数化した 。

 〔結果〕
 セルロース群は全例、便性状は正常であり� ��便潜血反応スコアは0.5±0.0(n=8、平均値±標� �偏差)であった。SS-1054群は、8例中6例に肛門� ��囲に血液の付着が見られるほど消化管症状� ��悪化し、試験開始4日目以後、摂餌量の明ら かな低下を認めるほど全身症状が重篤化した 。IK-40223群は7日間の試験期間中に摂餌量の低 下は見られず、便潜血反応スコアも1.5±0.8(8)� ��あった。Type007群ではいずれのマウスの便も 正常であり、便潜血反応スコアも0.5±0.3(10)で あった。

<有用性に関する試験6>
 {架橋型硫酸化セルロース(Ca)の正常ラット� �消化管に及ぼす影響}
 〔方法〕
 動物は日本チャールスリバー(株)より購入� �た9週齢CBA系雄性マウスを用いて、体重を指� ��に群分けした。各群のマウスには市販の粉� ��飼料(オリエンタル酵母工(株)、粉末CRF1)の10 %をセルロース(粉末、ナカライテスク(株))ま� ��は試験物質(CaCS005, CaCS006, CaCS007)でそれぞ� �置換した試験食を6日間自由摂取させた。試� ��食摂取終了の後、それぞれのマウスより糞� ��を一つ以上採取し、スライドを用いた化学� ��による便潜血検査(便潜血スライドシオノギ II、シオノギ製薬)を実施し、色調の変化の程 度に応じて0(変化なし)~5(濃)まで点数化した� �

 〔結果〕
 セルロース群は全例、便性状は正常であり� ��試験終了時の便潜血反応スコアは0.3±0.3(n=5� ��平均値±標準偏差)であった。CaCS005群は試験 開始二日目より便潜血反応(スコア1.8±0.5(n=4)) がみられた。以降、CaCS005群の動物では摂餌� �の低下が著明であり、粘血便がみられるほ� �重篤化する動物もみられ、全例で貧血によ� �手足が白色化した。試験終了時における便� �血反応スコアは3.3±1.3(n=4)であった。CaCS006群 およびCaCS007群の試験期間中における便性状� �ほぼ正常に推移し、試験終了時におけるス� �アはCaCS006群で0.5±0.0(n=3,ただし試験開始5日� �)、CaCS007群で0.2±0.3(n=3)と明らかに消化管へ� �障害性は軽減されていた。貧血は見られな� �った。

<有用性に関する試験7>
 〔方法〕
 前記<有用性に関する試験5>と同様の方� ��により試験物質(KCS01-001)を市販の粉末飼料(� ��リエンタル酵母工業(株)、粉末CRF1)に10%混ぜ た飼料をマウスに一週間自由摂取させた。

 〔結果〕
 セルロース群は全例、便性状は正常であり� ��便潜血反応スコアは0.5~1(n=8)であった。KCS01- 001群も便性状は正常であり便潜血反応スコア も0.5~1(n=8)と便潜血検査は軽微な反応であっ� �。

<有用性に関する試験8>
 〔方法〕
 前記<有用性に関する試験5>と同様の方� ��により試験物質(ME13-147、ME13-141)を市販の粉� ��飼料(オリエンタル酵母工業(株)、粉末CRF1)� �10%混ぜた飼料をマウスに一週間自由摂取さ� �た。

 〔結果〕
 いずれの試験物質を摂取させた場合も血便� ��みられず、便潜血検査も軽微な反応であっ� ��。