Le produit selon l'invention (concept général) Elle concerne des substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains.

Elle a plus particulièrement pour objet l'utilisation des substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, en vue de la réalisation de nouvelles compositions topiques destinées à être appliquées sur la peau, les muqueuses ou les téguments.

Le problème posé : L'inflammation cutanée L'explication des mécanismes physiologiques En effet, on vient de trouver-et c'est ce qui constitue la base de la présente invention-que certaines substances jouent un rôle important en antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains, Au cours de l'inflammation cutanée, de nombreux cellules polynucléaires migrent dans le derme et l'épiderme. L'infiltration de cellules circulantes dans la peau joue un rôle important dans la physiopathologie de diverses affections cutanées : dermatite atopique, psoriasis, eczéma, etc. et dans les réactions inflammatoires cutanées.

L'adhésion des cellules circulantes humaines est impliquée dans toutes les étapes qui concourent à l'afflux des cellules circulantes humaines dans le derme et l'épiderme : adhésion aux cellules endothéliales, chimiotactisme, adhésion aux molécules de la matrice extracellulaire (fibrinogène, collagène, fibronectine, laminine,...) et adhésion aux kératinocytes. C'est ainsi qu'au cours des dermatoses inflammatoires, 1'expression des molécules d'adhésion est augmentée-en particulier par les cytokines inflammatoires- et favorise ainsi le recrutement des cellules circulantes.

L'adhésion cellulaire joue un rôle important dans le recrutement de ces cellules à partir des vaisseaux.

La solution général : des substances antagonisant l'effet d'adhesion La réalisation de nouvelles compositions topiques destinées à être appliquées sur la peau, les muqueuses ou les téguments et comportant des des substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, constitue donc un remède dans le cas d'affections cutanées.

De plus, on vient de trouver que parmi les substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines, le pidolate d'arginine joue un rôle important.

La solution particuliere : le pyrrolidone carboxylate d'arginine Le pyrrolidone carboxylate d'arginine ou pidolate d'arginine est un composé connu depuis longtemps et commercialisé sous la dénomination Argidone par la firme UCB. Il s'agit d'une poudre blanc crème très soluble dans l'eau. Sa formule brute est Cll H21 Nus 05. Son poids moléculaire est de 303,3. Une revue sur ce produit a été publiée en particulier par Zanotti, Prodotto chimico, mars 1982 p. 25-28.

Par pyrrolidone carboxylate d'arginine, on entend tout sel formé par neutralisation de l'acide pyrrolidone 2-carboxylique (ou acide pyroglutamique) par l'arginine.

L'arginine peut exister sous forme L (forme naturelle), sous forme D ou sous forme DL (arginine synthétique).

Le pyrrolidone-2 carboxylate d'arginine répond à une des formules suivantes : L'acide pyrrolidone carboxylique présente un carbone asymétrique et comme tel peut être dédoublé en sa forme lévogyre ou dextrogyre, ou exister sous forme de racémate.

Le pyrrolidone carboxylate d'arginine a déjà été décrit dans la littérature pour des applications en cosmétique : -émollient pour la peau et les cheveux (Ajinomoto KK-Shiseido EX), brevet japonais 56/071020 ; -applications cosmétiques (Shisheido KK), brevet japonais JP A-61/30509 ; -système antioxydant (L'Oréal), brevet français 2.675.695 ; c'est-à-dire qu'il renforce 1'effet antioxydant de substances polyphénoliques comme le tocophérol, le BHT et ses dérivés, et les esters ou amides de l'acide caféique pour stabiliser les acides gras ou les matières grasses employées dans les compositions cosmétiques.

On a décrit dans le brevet français 2.778.562 l'utilisation des sels d'arginine, en association ou non, avec de 1'eau de mer pour inhiber l'activation des mastocytes induite par les neuropeptides, en particulier la dégranulation des mastocytes cutanés induite par la substance P. Les sels d'arginine sont des inhibiteurs de la libération d'histamine induite par la substance P.

Toutefois, selon l'invention, on vient de trouver que le pidolate d'arginine joue en outre un rôle important en antagonisant l'adhésion des cellules

circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains.

L'invention revendiquée Procédé L'invention concerne un procédé de traitement de peaux sensibles et/ou réactives au moyen de substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains.

L'invention concerne plus particulièrement un procédé de traitement de peaux sensibles et/ou réactives aux fumées, notamment aux fumées de tabac, au moyen de substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains.

En effet, la fumée de tabac favorise l'adhésion des cellules circulantes humaines aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire. Le procédé selon l'invention est donc particulièrement approprié au traitement des affections cutanées ayant pour origine la fumée de tabac.

De préférence, selon l'invention les substances antagonisant 1'effet d'adhésion contiennent un principe actif composé de pyrrolidone-2 carboxylate d'arginine, notamment le pyrrolidone-2 carboxylate L-arginine.

Composition L'invention concerne également une composition dermatologique et/ou cosmétique pour la mise en oeuvre d'un procédé de traitement de peaux sensibles et/ou réactives. La composition contient un principe actif composé de substances antagonisant 1'effet d'adhésion des cellules circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les

monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains.

L'invention concerne plus particulièrement une composition dermatologique et/ou cosmétique pour la mise en oeuvre d'un procédé de traitement de peaux sensibles et/ou réactives aux fumées, notamment aux fumées de tabac. La composition contient un principe actif composé de substances antagonisant un effet d'adhésion, induit par lesdites fumées, des cellules circulantes humaines, notamment les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles, aux autres cellules ou molécules de la matrice extracellulaire, notamment avec des kératinocytes humains.

De préférence la composition selon l'invention est telle que les substances antagonisant ledit effet d'adhésion sont des composés de pyrrolidone-2 carboxylate d'arginine, notamment le pyrrolidone-2 carboxylate L-arginine.

De préférence, la concentration en pyrrolidone-2 carboxylate d'arginine varie de 0,001 à 10%.

De préférence, la concentration en pyrrolidone-2 carboxylate d'arginine varie de 0,01 à 5%.

La composition cosmétique et/ou dermatologique se présente sous forme solide, liquide ou gazéifiée.

Selon une variante de réalisation, la composition cosmétique et/ou dermatologique se présente sous forme solide et plus particulièrement sous la forme de pommades grasses ou non grasses, de crèmes, de gels, de poudres ou d'émulsions solides.

Selon une variante de réalisation, la composition cosmétique et/ou dermatologique se présente sous forme liquide et plus particulièrement sous la forme de laits, de solutions, de suspensions, de lotions, d'émulsions eau dans 1'huile, d'émulsions huile dans 1'eau ou de microémulsions.

Selon une variante de réalisation, la composition cosmétique et/ou dermatologique se présente sous forme gazéifiée et plus particulièrement

sous la forme d'aérosols distribués à l'aide d'un gaz propulseur ou à l'aide d'air sous pression. Panni les gaz propulseurs, on citera les hydrocarbures chlorés et/ou fluorés, le protoxyde d'azote, le gaz carbonique ou l'azote.

Selon une variante de réalisation, la composition cosmétique et/ou dermatologique se présente sous forme de comprimés ou de gélules. Il est ainsi possible d'administrer la composition par voie orale et de l'utiliser en cosmétique orale ou en nutraceutique.

De préférence, la composition cosmétique et/ou dermatologique selon l'invention est telle qu'aux substances antagonisant ledit effet d'adhésion, notamment composées de pyrrolidone-2 carboxylate d'arginine, sont associés un ou des agents actifs supplémentaires choisis parmi les agents antibactériens, les antiparasitaires, les antifongiques, les antiprurigineux, les anti-radicaux libres, les anesthésiques locaux, les antiviraux, les agents antipelliculaires, les agents anti-acné, les agents antiséborrhéiques, les agents cicatrisants et les agents vitaminiques (vitamines A, E, Bl, B2, B6, PP, BI), agents anti-irritant, anti-rougeur, vasculoprotecteur, anti- metalloprotéinases.

De préférence, la composition cosmétique et/ou dermatologique, selon l'invention, comporte un agent régulant le PH. Le pH de la composition selon l'invention est réglé dans une zone s'étendant de 5,5 à 9, et de préférence dans la zone de pH compatible avec le pH de la peau allant de 6 à 8. L'agent régulateur est par exemple un agent tampon comme un phosphate de métal alcalin ou un mélange de phosphate mono et dialcalin, ou un mélange acétate de métal alcalin-acide acétique.

Les nouvelles compositions topiques, à base de sel d'arginine, sont destinées à être appliquées sur la peau, les muqueuses ou les téguments, en particulier les yeux et le nez en cas d'inflammation.

Les nouvelles compositions topiques, dont le principe actif est un pyrrolidone carboxylate d'arginine, sont utilisés, en dermato-cosmétologie,

dans un excipient, un diluant ou un véhicule approprié pour l'application topique.

Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter.

EXEMPLE 1 Etude pharmacologique des compositions selon l'invention Le pyrrolidone carboxylate d'arginine est utilisé en solution. La solution et le solvant sont dilués dans le milieu de culture ; à Jo on ajoute à chacun des puits d'une plaque à 24 puits contenant une monocouche de kératinocytes humains à confluence, 50 µl de substance à tester (10 x concentrées) à différentes concentrations, en présence de LPS à raison de 3 jug/ml. Le sulfate de dextranne (1 uM) est utilisé comme inhibiteur de référence.

Chaque point expérimental est réalisé en double. Le volume total de l'essai est de 500, ul. Les cellules sont ensuite placées dans un incubateur à 37°C sous 5 % de C02 pendant 24 heures.

Au jour Jades neutrophiles sont isolés à partir du sang de donneurs volontaires selon les techniques usuelles, puis ajustés à la concentration de 20 x 106 cellules par ml. Les cellules sont ensuite marquées par un réactif fluorescent (Calcéine) pendant 30 minutes à 37'C puis lavées.

Cinq cent mille cellules sont récoltées dans chaque essai. Les neutrophiles non adhérents sont ensuite éliminés par lavage et aspiration. Deux ml d'eau distillée sont ajoutés dans chacun des puits, puis chaque plaque est soumise à deux opérations de congélation/décongélation, afin de lyser les cellules. Le contenu de chaque puits est centrifugé. La fluorescence de chaque liquide surnageant est mesurée (excitation à 494 nm, émission à 517 nm). Le nombre de neutrophiles ayant adhéré est calculé en rapportant la valeur de la fluorescence à la fluorescence globale de 500.000 neutrophiles marqués et lysés dans les mêmes conditions.

L'intérêt d'inhiber les molécules d'adhésion, dans le but de diminuer les dégâts tissulaires liés à l'inflammation, a été mis en évidence par l'utilisation

dans des modèles animaux d'anticorps monoclonaux dirigés contre les molécules d'adhésion vasculaires (ICAM-1, E-sélectine...) et les intégrines leucocytaires (LFA-1, Mac-1-.). Des actifs, pour lesquels une action anti- adhésive sur les neutrophiles peut être démontrée, peuvent revendiquer des effets apaisants, anti-irritants, anti-inflammatoires et anti-vieillissement sur la peau.

EXEMPLE II collyre -Pyrrolidone carboxylate d'arginine 2% -Sulfate de dextranne 1% -Agent conservateur 0,01% -Eau distillée, qsp 100% EXEMPLE III Emulsion adoucissante pour peaux sensibles -Pyrrolidone carboxylate d'arginine 2% -Emulsion cosmétique pour peaux sensibles (alcools gras, alcools gras polyoxyéthylénés, huile minérale, palmitate d'isopropyle, glycérine, gélifiant, parfums, eau) qsp 100% -Agent conservateur (Germaben II) 0,07% EXEMPLE IV Crème protectrice de jour -Pyrrolidone carboxylate d'arginine 4g -Stéarate de polyéthylèneglycol auto-émulsionnable 4g -Alcool cétylique 1g -Alcool stéarylique lg -Huile de vaseline 8g -Dimethicone 0,5g -Acide stéarique 4g -Ascorbate de palmityle 0,2g

-Parfum -Eau déminéralisée qsp 100ml EXEMPLE V Crème à base de pyrrolidone carboxylate d'arginine -Lanette 16 (alcool cetylique) 2% -Incroquat Behenyl TMC (mélange de chlorure de béhényltrimonium et d'alcool cétéarylique) 2% -Lecinol S-10 (lecithine hydrogénée) 0,30% -Amphisol K (Cetyl phosphate de potassium) 1% -Transcutol (ethoxydiglycol) 0,15% -Glycyrrhétinate de stéaryle -Cetiol OE (éther dicaprylique) -Cosmacol ELI (lactate d'alkyle en Cl2-Cl3) -DC-1403 fluide (mélange de diméthiconol et de diméthicone) 0,75% -Salcare SC96 (mélange de dicaprate de propylène glycol, de polyquaternium-37 et de PPG-1 Trideceth-6) 2% -Complexe photoprotecteur 5% -Propylène glycol 2% -Arlatone 2121 (mélange de stéarate de sorbitane et de Cocoate de sucrose) 4% -Germaben II 0,70% -Parfum 0,05% -Pyrrolidone carboxylate d'arginine 2,5% -Eau qs 100% EXEMPLE VI Il a été mis en évidence que la fumée de tabac (goudron, nicotine) agresse la peau en favorisant l'adhésion des cellules de la peau (kératinocytes) aux cellules circulantes, soit directement soit indirectement en provoquant la libération des neuromédiateurs par les nerfs sensitifs de la peau. A cet effet,

on a procédé à une co-culture de kératinocytes avec des neurones de souris. Il a été constaté que les fumées de tabac provoquent la stimulation des neurones et favorise, via la libération de neuromédiateurs, l'adhésion des cellules de la peau (kératinocytes) aux cellules circulantes. Par conséquent, les effets antagonisant des substances selon l'invention ont une action bénéfique sur les dégâts des fumées.

Description des protocoles expérimentaux A. Adhésion des kératinocytes humains aux neutrophiles humains induites par les fumées du tabac Les kératinocytes humains sont cultivés jusqu'à confluence. Cette culture est exposée à des fumées de cigarette pendant 15 min, à 37 °C. puis les neutrophiles isolés du sang humain marqués à la calcine sont ajoutés aux kératinocytes. Les neutrophiles non adhérents sont éliminés par lavage et aspiration. Deux ml d'eau distillée sont ajoutés dans chacun des puits puis les cellules sont lysées ; le nombre de neutrophiles ayant adhéré est calculé en rapportant la valeur de la fluorescence à la fluorescence globale de 500 000 neutrophiles marqués et lysés dans les mêmes conditions.

B. Adhésion d'une coculture neurones-kératinocytes à des neutrophiles humains induite par les fumées du tabac Les neurones sensitifs sont isolés à partir de ganglions rachidiens prélevés sur des embryons de rat puis mis en culture en présence de kératinocytes humains. cette coculture est exposée à des fumées de cigarette qui stimule la libération de neuropeptides (substance P...) dans les surnageants de culture. La coculture préalablement exposée aux fumées du tabac est mise en présence de neutrophiles humains marquées à la calcine. Le calcul du nombre de neutrophiles adhérents est effectué comme précédemment.