L'invention concerne une composition et un procédé de dispersion d'agents de contrôle biologique vivants de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus.

Lors de la dispersion des acariens prédateurs du genre Phytoseiulus, sont traditionnellement utilisées des bouteilles contenant du support dans lequel se déplacent les acariens. Les acariens vont se déplacer vers le haut du conditionnement et cela aboutit à une répartition très hétérogène des acariens lors de leur sortie des bouteilles.

Il existe donc un besoin de moyens de pulvérisation des acariens vivants et mobiles en milieu aqueux sur des végétaux ou supports de cultures dans le cadre d'une stratégie de biocontrôle.

Or, les acariens du genre Phytoseiulus sont connus pour être fragiles, strictement aériens, peu adaptables à une forte hygrométrie (par exemple du sol).

Contre toute attente, les inventeurs ont tout d'abord observé que des acariens Phytoseiulus persimilis peuvent être dispersés de façon homogène et survivre sans diminution de leurs caractéristiques biologiques (longévité, fécondité) plusieurs heures dans un gel aqueux d'amidon de maïs modifié.

En outre, ils ont observé que la sortie du gel de ces acariens rendue difficile par l'action collante du gel lors du séchage est possible avec un taux de sortie satisfaisant et peut être facilitée par l'ajout d'une enzyme de dégradation du gel.

On entend par « taux de sortie satisfaisant » un taux de sortie supérieur à 50 %, de préférence supérieur à 80 %.

La solution proposée par l'invention présente donc les avantages suivants : o Homogénéité de la dispersion des acariens et homogénéité des lâchers o Facilité d'utilisation : survie des acariens pendant plusieurs heures sans effet notables sur les traits d'histoire de vie o Accessibilité sur des cultures sur lesquelles le poudrage n'est pas aisé : ex- framboisiers o Gain de temps de l'application RESUME DE L'INVENTION

Un premier objet de l'invention concerne une composition aqueuse pulvérisable destinée à épandre des agents de contrôle biologique comprenant des agents de contrôle biologique vivants de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus dispersés de façon homogène dans un gel préparé à partir d'un ou plusieurs épaississants et/ou gélifiants et d'une solution aqueuse, lesdits épaississants et/ou gélifiants étant non toxiques pour lesdits agents de contrôle biologique et ledit gel présentant une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 1 et 30 000 mPa.s.

Un autre objet de l'invention concerne un procédé de préparation d'une composition selon l'invention, comprenant les étapes successives de :

1. Dissolution de ou des épaississants et/ou gélifiants dans une base aqueuse, de préférence dans l'eau, jusqu'à formation d'un gel,

2. Ajout des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus et leur dispersion de façon homogène dans ledit gel,

3. Éventuellement ajout d'une enzyme capable de dégrader ledit gel à une concentration permettant une dégradation totale dudit gel en moins de 12 heures, de préférence en moins de 2h.

Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation d'une composition selon l'invention, pour améliorer l'efficacité des procédés de contrôle biologique.

Un autre objet de l'invention concerne une méthode de contrôle biologique comprenant une étape d'application sur les plantes d'une composition selon l'invention.

DESCRIPTION DETAILLEE

L'invention concerne une composition aqueuse pulvérisable destinée à épandre des agents de contrôle biologique comprenant des agents de contrôle biologique vivants de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus dispersés de façon homogène dans un gel préparé à partir d'un ou plusieurs épaississants et/ou gélifiants et d'une solution aqueuse, lesdits épaississants et/ou gélifiants étant non toxiques pour lesdits agents de contrôle biologique et ledit gel présentant une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 1 et 30 000 mPa.s. De préférence, ledit gel présente une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 10 et 25 000, de manière encore préférentielle comprise entre 2 et 5 000 mPa.s, de manière encore préférentielle comprise entre 60 et 4 500 mPa.s, de manière encore préférentielle comprise entre 80 et 150 mPa.s.

De préférence, la composition selon l'invention permet de maintenir au moins 60 %, de préférence au moins 70 %, de manière encore préférée au moins 80 %, de manière particulièrement préférée au moins 90 % des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus vivants pendant au moins 2h, de préférence 6h, de manière encore préférée 12h.

De préférence, la composition selon l'invention permet de maintenir au moins 60 %, de préférence au moins 70 %, de manière encore préférée au moins 80 %, de manière particulièrement préférée au moins 90 % de la longévité témoin des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus pendant au moins 2h, de préférence 6h, de manière encore préférée 12h.

La « longévité témoin » est définie comme une mortalité inférieure à 20% à 5 jours.

De préférence, la composition selon l'invention permet de maintenir au moins 60 %, de préférence au moins 70 %, de manière encore préférée au moins 80 %, de manière particulièrement préférée au moins 90 % de la fécondité témoin des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus pendant au moins 2h, de préférence 6h, de manière encore préférée 12h.

La « fécondité témoin » est définie comme une fécondité supérieure ou égale à 10 œufs/femelle/5 jours.

La composition selon l'invention permet, après sa dispersion ou pulvérisation en gouttes, un taux de sortie du gel des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus vivants supérieur à 60 %.

De préférence, lesdits agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus sont choisis dans le groupe constitué de Phytoseiulus persimilis, Phytoseiulus macropilis, Phytoseiulus longipes et Phytoseiulus fragariae. Les épaississants/gélifiants

Les épaississants/gélifiants appropriés et leur concentration pour préparer la composition selon l'invention sont sélectionnés pour satisfaire au critère de viscosité décrit ci-dessus, pour permettre une dispersion de façon homogène dans la composition des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus et pour être non- toxiques pour lesdits agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus.

« Non-toxique » signifie moins de 20 % d'agents de contrôle biologique morts au bout de 12h.

En outre, les épaississants/gélifiants appropriés pour préparer la composition selon l'invention sont sélectionnés pour n'ê tre ni toxiques pour les plantes de culture visées, ni pour le consommateur desdites plantes ou sous-produits desdites plantes.

De préférence, les épaississants/gélifiants appropriés pour préparer la composition selon l'invention sont des épaississants/gélifiants alimentaires.

De manière plus préférée, les épaississants/gélifiants appropriés pour préparer la composition selon l'invention sont choisis dans le groupe constitué des : polyosides et osides

On peut citer dans cette famille à titre d'exemples : alginate, amidon de mais modifié, amylopectine, carraghénanes, chitosan, dextrine, gomme de guar, gomme de xanthane, glycérol, gomme de konjac. sels de polyacrylate

On peut citer dans cette famille à titre d'exemples : Carbomer 940 (acide polyacrylique), Gel maker emu (polyacrylate de sodium). dérivés de la povidone

On peut citer dans cette famille à titre d'exemples : PVP (Polyvinylpyrrolidone). dérivés de la cellulose

On peut citer dans cette famille à titre d'exemples : Carboxyméthylcellulose, hydroxypropylcellulose. sels métalliques

On peut citer dans cette famille à titre d'exemples : Chlorure de calcium, chlorure de potassium, sulfate d'aluminium.

De préférence, lesdits épaississants/gélifiants sont utilisés dans la composition selon l'invention à une concentration comprise entre 0,5 et 200 g/L, de préférence entre 1 et 90 g/L, de préférence encore entre 2 et 40 g/L.

De manière plus préférée, les épaississants/gélifiants appropriés pour préparer la composition selon l'invention sont choisis dans le groupe constitué des polyosides et des osides.

De manière particulièrement préférée, lesdits polyosides et osides sont choisis dans le groupe constitué de l'amidon de maïs modifié, des carraghénanes, de la gomme xanthane et de la gomme de konjac.

De préférence, l'amidon de maïs modifié est utilisé à une concentration comprise entre 30 et 90 g/L, de préférence à 34 g/L.

De préférence, un gel d'amidon de maïs modifié est utilisé à une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 60 et 25 100 mPa.s, de préférence à 80 mPa.s.

De préférence, les carraghénanes sont utilisées à une concentration comprise entre 1 et 10 g/L, de préférence à 3 g/L.

De préférence, un gel de carraghénanes est utilisé à une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 1 et 4 900 mPa.s, de préférence à 2 mPa.s.

De préférence, la gomme xanthane est utilisée à une concentration comprise entre 0,5 et 5 g/L, de préférence à 2 g/L. De préférence, un gel de gomme xanthane est utilisé à une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 7 et 1680 mPa.s, de préférence à 135 mPa.s.

De préférence, la gomme de konjac est utilisée à une concentration comprise entre 0,5 et 10 g/ L, de préférence à 4 g/L.

De préférence, un gel de gomme de konjac est utilisé à une viscosité dynamique à gradient de vitesse nulle comprise entre 1 et 450 mPa.s, de préférence à 27 mPa.s.

Les enzymes

La composition selon l'invention peut en outre comprendre une enzyme capable de dégrader ledit gel préparé à partir d'un ou plusieurs épaississants et/ou gélifiants et d'une solution aqueuse à une concentration permettant une dégradation totale dudit gel en moins de 12 heures, de préférence en moins de 6h, de manière encore préférée en moins de 2h.

L'ajout de l'enzyme à la composition permet d'améliorer le taux de sortie du gel des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus vivants après dispersion ou pulvérisation de la composition.

De préférence, le taux de sortie d'une composition selon l'invention avec enzyme est supérieur à 80 %.

De préférence, l'enzyme est ajoutée en dernier à la composition selon l'invention.

De préférence, l'enzyme est ajoutée à la composition selon l'invention moins de 2h avant sa dispersion/pulvérisation, de préférence juste avant sa dispersion/pulvérisation. L'enzyme est bien entendu appropriée pour dégrader ledit épaississant/gélifiant de la composition.

Les conditions les plus favorables sont obtenues lorsque l'enzyme dégrade rapidement le gel puisque plus le gel est rapidement dégradé, plus les agents de contrôle biologique sont rapidement libérés. L'homme du métier saura choisir la concentration de l'enzyme en fonction de son activité enzymatique, de la température optimale, des concentrations en épaississant et de la durée d'hydrolyse souhaitée.

De préférence, la concentration de l'enzyme est choisie pour dégrader 100 % du gel en moins de 12h, de préférence en moins de 6h, de manière encore préférée en moins de 2h, de manière particulièrement préférée en moins de 1 min.

Par exemple, on utilisera des enzymes :

Hydrolysant les liaisons osidiques pour la famille des osides/polyosides.

Dans le cas de l'alginate, l'alginate lyase dégrade l'alginate par β-élimination des liaisons osidique.

Dans le cas de l'amidon modifié de maïs, l'alpha-amylase hydrolyse les liaisons osidiques alpha (1,4). Par exemple, on utilise une alpha-amylase à une activité enzymatique de 800 FAU/g à 20°C, 1 FAU hydrolysant 17 mg d'amidon par minute. Pour dégrader 100 mL d'amidon de maïs modifié à 34 g/L en 1 minute, il faut 200 FAU soit 0,25 g d'alpha-amylase. Pour une dégradation en deux heures, il faut 1,6 FAU soit 0,002 g d'alpha-amylase. Enfin, pour une dégradation en 12h, il faut 0,27 FAU soit 0,3 mg d'alpha-amylase.

Dans le cas de l'amylopectine, l'alpha-amylase hydrolysant les liaisons osidiques alpha (1,4).

Dans le cas des dextrines, la glycose hydrolase limite dextrinase qui hydrolyse les liaisons osidiques alpha (1,6).

Dans le cas des carraghénanes, la k-carraghénase qui hydrolyse les liaisons osidiques alpha (1 ,4).

Dans le cas des gommes de Guar et de Xanthane, la bêta-mannanase qui hydrolyse de manière aléatoire les liaisons (1,4)- β-D-mannosidique. Pour la Gomme de Xathane, la xanthane lyase hydrolyse les liaisons beta-D-mannosyle-beta-D-1,4-glucuronosyle.

Dans le cas du chitosan, la chitosanase qui hydrolyse les liaisons osidiques beta (1,4) entre les résidus de D-glucosamine. Dans le cas du konjac, l'endo-1,4 beta-mannanase hydrolyse les liaisons osidiques beta (1,4) des résidus glucomannane.

Pour les dérivés de la cellulose :

L’Endo-cellulase : brise la structure cristalline de la cellulose en chaînes polysaccharidiques. L’Exo-cellulase : coupe 2-4 unités aux terminaisons des chaînes polysaccharides. La β-glucosidase : hydrolyse les chaînes polysaccharidiques en monosaccharides.

L’Oxidative cellulase : dépolymérise la cellulose

La cellulose phosphorylase : dépolymérise la cellulose en utilisant des phosphates.

Le procédé de préparation de la composition

Le procédé de préparation de la composition selon l'invention comprend les étapes suivantes : - Dissolution de ou des épaississants et/ou gélifiants dans une base aqueuse, de préférence dans l'eau, jusqu'à formation d'un gel,

- Ajout des agents de contrôle biologique de la famille des phytoséides du genre Phytoseiulus et leur dispersion de façon homogène dans ledit gel,

Éventuellement ajout d'une enzyme capable de dégrader ledit gel à une concentration permettant une dégradation totale dudit gel en moins de 12 heures, de préférence en moins de 2h.

Ce procédé de préparation est réalisé de préférence entre 18°C et 25°C, de manière particulièrement préférée à 20 °C.

Ce procédé de préparation est réalisé de préférence à une humidité relative supérieure à

30 %, de préférence 60 %.

Le procédé de dispersion de la composition De préférence, les compositions selon l'invention sont appliquées sur les plantes par pulvérisation.

Pour pulvériser cette solution sans blesser ou tuer les acariens, la pression utilisée doit être faible et les buses ne doivent pas présenter de partie pouvant les heurter. Une solution de pulvérisateur à basse pression type pistolet à peinture peut par exemple être utilisée. Le liquide est entraîné par le passage de l'air et ne peut en aucune manière blesser les acariens.

Utilisations

La composition selon l'invention peut être utilisée pour améliorer l'efficacité des procédés de contrôle biologique.

Les compositions selon l'invention sont adaptées pour être dispersées sur des cultures choisies parmi les arbres fruitiers, la vigne, les cultures légumières, les cultures de plein champ, les cultures sous-abri et les cultures ornementales.

Les compositions selon l'invention sont adaptées pour la lutte biologique contre les espèces d'acarien du genre Tetranychus, en particulier Tetranychus urticae.

FIGURES

Figure 1 A : Effet d'un gel d'amidon de maïs modifié à 34 g/L sur la fécondité de Phytoseiulus persimilis sans pulvérisation ± alpha-amylase A. = répétition 1

FigurelB : Effet d'un gel d'amidon de maïs modifié à 34 g/L sur la fécondité de Phytoseiulus persimilis sans pulvérisation ± alpha-amylase B. = répétition 2

Figure 2 : Effet d'un gel d'amidon de maïs modifié à 34 g/L sur la fécondité de Phytoseiulus persimilis avec pulvérisation ± alpha-amylase

Figure 3 : Etude de la répartition homogène des Phytoseiulus persimilis

EXEMPLES

Exemple 1 : études des effets d'un gel d'amidon de maïs modifié sur les caractéristiques biologiques de Phytoseiulus persimilis

Matériel et méthodes

Conditions expérimentales : 25° C et 75 % RH, photopériode de 16/8

Etude de la fécondité et de la longévité : n = 33 individus par modalité, 2 répétitions Etude du pourcentage de sortie des acariens du dispositif : n = 100 individus par modalité, 4 répétitions

Etude de la répartition homogène des Phytoseiulus persimilis dans la composition : Répétition = 1 , Réplicas = 2 dans le temps t=0 (juste après la répartition) et t= 30 minutes, 5 fractions avec 590 persimilis comptés par réplica. Les Phytoseiulus persimilis sont répartis dans le gel 30 minutes après réalisation du gel.

Epaississant = amidon de maïs modifié Concentration de l'epaississant : 34 g/L Enzyme = alpha-amylase d’Aspergillus oryzae, > 800 FAU/g Concentration de l'enzyme : 480 μL/L

Résultats

Les résultats sont décrits aux figures 1 , 2 et 3 et dans le tableau 1 ci-dessous.

Aucune différence significative n'est observée quelle que soit les conditions sur la fécondité des acariens et sur la longévité des acariens femelles.

La répartition est homogène.

Tableau 1 . Effet de la solution sur la longévité de Phytoseiulus persimilis avec ou sans pulvérisation Exemple 2 : Test de survie des Phytoseiulus persimilis dans différents épaississants

Matériel et méthodes : 18 épaississants autorisés dans l'alimentation ont été sélectionnés :

Les concentrations testées sont :

Dans les solutions sont ajoutés 500 persimilis.

Le mélange est noté « homogène » si les persimilis se répartissent de façon homogène dans l'epaississant sans, ou avec peu d'amas pendant plus de 20 minutes.

Dans le cas où les persimilis se répartissent de manière homogène, on réalise un test de sortie de goutte. C'est-à-dire, on prélève à l'aide d'une pipette automatique 2 mL de la solution contenant les persimilis que l'on répartit sous forme de gouttes (30 gouttes sur une feuille de papier A4).

On conserve un peu de solution contenant les persimilis pour évaluer une possible « toxicité » à 12h. On compte la totalité des individus présents dans les gouttes après le dépôt. Puis on laisse sortir les persimilis que l'on comptera après séchage complet des gouttes à 25 °C 75 %RH.

Les résultats nous permettrons d'obtenir un taux de sortie des individus. Résultats :

Les 4 épaississants répondant au plus de critères sont : l'amidon de maïs modifié ; les carraghénanes ; la gomme de xanthane et la gomme de konjac. (En gris dans le tableau)

Par exemple : dans le cas de l'amidon de maïs modifié, on passe de 31 % de sortie sans enzyme à 94 % de sortie avec enzyme (alpha-amylase).

Par exemple : Pour l'amidon de maïs modifié, on passe de 52 % de sortie à 94 % de sortie avec enzyme sur test en gouttes Exemple 3 : Mesure de viscosité de différents épaississants

Les viscosités sont mesurées à 22 °C avec un viscosimètre rotationnelle (ROTAVISC de la marque IKA) et à une vitesse de rotation observée comprise entre 3 rpm et 15 rpm (l'appareil ajuste la vitesse pour avoir une donnée stable).