技术领域

本发明属医药技术领域， 涉及化学领域化合物的分离提取方法， 具体涉及植物天然 生理活性物质芍药苷和芍药内酯苷的制备工艺 。 背景技术

芍药是毛茛科芍药亚科芍药属多年生草本植物 ， 常用其干燥根入药。中国药典 2010 年版中收录 2种芍药。 一种是白芍 （Radix Paeoniae Alba), 为毛茛科植物芍药 Paeow'a lactiflora Pall. 的干燥根； 一种是赤芍 （Radix Paeoniae Rubra) , 为毛茛科植物川赤芍 Paeonia veitchii Lynch 的干燥根。 目前市场上己有多种含芍药的中药制剂，如脑 血栓片、 益脑复健胶囊、 偏瘫复原片、 回生再造丸、 大活络丸等。 主要用于治疗心脑血管疾病、 神经痛、 高血压、 流产、 痛经等症。 现代化学研究表明： 芍药主要含有芍药苷 (paeonif lorin) , 芍药内酯苷 (albif lorin)、 羟基芍药苷、 苯甲酰芍药苷等成分。 由于 芍药苷在药材中含量高， 纯品较易获得， 所以对芍药苷的研究报道较多。 芍药苷具有镇 痛、 镇静、 保肝、 抗炎、 免疫调节、 扩张血管、 改善学习记忆行为等活性， 可用于治疗 类风湿性关节炎、 肝炎和老年性相关疾病等。 长期以来， 大多数研究认为芍药苷是芍药 的主要有效成分， 从而以芍药苷作为指标来测量含芍药药物， 并以其含量的高低来评价 药物的质量性能。

芍药内酯苷（Albiflorin)为单萜类化合物，其分� ��式为 C ₂₃ H ₂₈ O _U ，分子量为 480.46， 分子结构如式（ I )所示，芍药苷（Paeoniflorin)为单萜类化合物，� ��分子式为 C H OU ,

近年来， 现代药理研究发现芍药内酯苷具有镇痛、 镇静、 抗惊厥作用， 对免疫 系统的作用， 对平滑肌的作用， 抗炎作用， 抗病原微生物， 护肝作用， 临床上主 要用于抗癫痫， 镇痛、 戒毒， 止眩暈， 治疗类风湿性关节炎， 治疗细菌性痢疾及 肠炎， 治疗病毒性肝炎， 老年性疾病， 抗硫酸钡絮凝和溶解粘液的作用。

因此， 对芍药内酯苷的药理研究越来越受到重视， 芍药内酯苷的研究日益增多， 例 如： 申请号为 200510045840.0的发明专利申请公开了一种从白芍 (毛茛科芍药属植物芍 药 Paeonia lactifora Pal l)中提取分离得到的含有活性化合物芍药苷和� ��药内酯苷 的组合物，两组分含量之和在 50 %— 95 %之间， 并且芍药苷与芍药内酯苷在该组合物中 的比例为 1： 10〜10： 1，该组合物用于制备治疗各种原因引起的白� �胞减少、血小板和 血红球蛋白降低的病症的药物。又如： 申请号为 200710132810.2的发明专利申请公开了 一种含有芍药苷和芍药内酯苷药物组合物， 该组合物中芍药苷与芍药内酯苷的重量之比 为 10: 1-50: 1， 该明药物组合物可用于预防和治疗心脑血管疾 病。但是上述研究仅仅是对 芍药苷、 芍药内酯苷的药理用途进行了研究， 制备的是芍药苷和芍药内酯苷的组合物。

由于芍药内酯苷的化学特性， 制备纯度高的芍药内酯苷的方法困难， 现有的研究中 还没有一种简便易行的工艺方法， 可以低成本、 大规模制备得到高纯度的芍药内酯苷。 例如申请号为 200910100680.3 的发明专利申请公开了一种模拟移动床色谱法 分离制备 芍药内酯苷的方法。 该方法模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷 ， 采用白芍总苷提取 物作为原料， 应用模拟移动床色谱法分离制备芍药内酯苷， 模拟移动床色谱的固定相采 用 C18硅胶， 流动相采用甲醇或乙腈与水、 甲酸、 异丙醇的混合溶液， 混合溶液中按体 积百分计： 甲醇或乙腈 10 %〜50 %、 水 50 %〜90 %、 甲酸 0〜1 %、 异丙醇 0〜2 %， 上 述的各组分的总和为 100 %， 该方法制备的芍药内酯苷的纯度虽然可以达到 90 %以上， 但因为该技术需要使用大量价格昂贵的反相硅 胶 （RP-C18 ), 且制备工艺流程复杂， 操 作工艺控制条件苛刻， 导致产品成本高， 不适合大规模生产。

迄今为止， 尚未有一种适合产业化生产同时制备高纯度芍 药内酯苷和高纯度芍药苷 的工艺路线披露。 发明内容

本发明的目的在于提供一种同时制备高纯度芍 药苷和芍药内酯苷的方法，本发明方 法操作工艺过程简单， 生产周期短。 运用本发明方法， 可在一个工艺流程中， 分别制备 得到公斤级的芍药苷和芍药内酯苷， 且所得到的芍药苷和芍药内酯苷的含量高， 纯度可 达到 90%以上。采取这种制备方法提取纯化芍药苷和 芍药内酯苷， 显著地降低了生产成 本， 适宜批量制备和工业化生产。 为实现本发明的目的， 本发明一方面提供一种制备芍药内酯苷和芍药 苷的方法， 该 方法包括如下顺序进行的步骤： a) 采用渗漉提取法对芍药药材进行渗漉提取， 得到芍 药渗漉液； b) 将芍药渗漉液依次进行大孔树脂柱分离、 氧化铝柱层析和硅胶柱层析。

其中， 步骤 a) 中采用水、 乙醇或甲醇为渗漉提取溶液进行所述的渗漉提 取， 优选 为水。

特别是， 所述渗漉提取溶液的体积与芍药药材的重量之 比为 5-20: 1， 即当芍药药 材重量 （干重） 为 1kg时， 渗漉提取溶液的体积为 5-20L, 当芍药药材重量 （干重） 为 lg时， 渗漉提取溶液的体积为 5-20ml。

尤其是， 渗漉提取过程中每小时渗漉液的流量与芍药药 材的重量之比为 0.5-8: 1， 优选为 1-5: 1， 即当芍药药材重量（干重） 为 lkg时， 渗漉提取过程中每小时渗漉液的 流量为 0.5-8L, 当芍药药材重量 （干重） 为 lg时， 渗漉液的流量为 0.5-8ml。

特别是， 还包括将芍药药材用水浸泡处理后， 在进行所述的渗漉提取， 其中浸泡芍 药药材的水的体积与芍药药材的重量之比为 2-3 : 1， 即当芍药药材重量 （干重） 为 lkg 时， 渗漉提取溶液的体积为 2-3L, 当芍药药材重量 （干重） 为 lg时， 渗漉提取溶液的 体积为 2-3ml。

其中， 步骤 b) 中所述的大孔树脂柱分离包括如下顺序进行的 步骤：

1 ) 将所述芍药渗漉液加入到大孔树脂柱内；

2) 采用水为洗脱剂对大孔树脂柱进行洗脱， 除杂；

3 )采用乙醇溶液为洗脱溶剂对大孔树脂柱进行� �脱， 收集洗脱液， 合并洗脱液 中含有芍药苷和 /或芍药内酯苷的流份， 干燥后， 得到大孔树脂柱分离混合物。 特别是， 步骤 1 ) 中所述的大孔树脂选择 D101、 D-20K AB-8或 HP-20型非极性大 孔吸附树脂中的一种。

尤其是， 大孔树脂柱内所述的大孔吸附树脂的体积与芍 药药材的重量之比为 0.5-5: 1， 即当芍药药材重量 （干重） 为 lkg时， 大孔吸附树脂的体积为 0.5-5L, 当芍药药材 重量 （干重） 为 lg时， 大孔吸附树脂的体积为 0.5-5ml， 优选为 1-2 : 1。

特别是， 大孔树脂柱分离过程中洗脱液流速为 0.5-5 倍柱床体积 /h， 即每小时洗脱 液的流量为大孔树脂柱内大孔吸附树脂的体积 的 0.5-5倍。

特别是， 步骤 2) 中洗脱剂水与大孔树脂的体积之比为 3-5: 1； 步骤 3 ) 中所述的 乙醇溶液的质量百分比浓度为 30-70%， 优选为 40-60%; 步骤 3 ) 中所述乙醇溶液与大 孔树脂的体积之比为 3-5: 1。 其中， 步骤 b) 中所述的氧化铝柱层析包括如下顺序进行的步 骤：

1 ) 将大孔树脂柱分离混合物溶解后， 拌入氧化铝， 干燥得到氧化铝层析样品；

2)将氧化铝层析样品置于氧化铝柱顶部， 以乙酸乙酯为洗脱剂， 进行氧化铝层 析， 收集洗脱液， 合并洗脱液中含有芍药苷和 /或芍药内酯苷的流份， 得到氧化铝层 析洗脱液；

3 ) 将氧化铝层析洗脱液蒸干后， 得到氧化铝层析混合物。

特别是， 步骤 1 ) 中大孔树脂柱分离混合物与氧化铝拌合的比例 为 1 : 0.5-5； 步骤 2) 中所述氧化铝柱内的氧化铝与大孔树脂柱分离 混合物的重量之比为 5-30: 1， 优选为 8-25： 1， 进一步优选为 10-25 : 1。

尤其是， 氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝的高度之比为 1 :6-10。

其中， 步骤 b) 中所述的硅胶柱层析包括如下顺序进行的步骤 ：

1 ) 将氧化铝层析提取物溶解后， 拌入硅胶， 干燥得到硅胶层析样品；

2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部， 以乙酸乙酯为洗脱剂， 进行硅胶层析， 收 集洗脱液， 分别合并只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液 流份；

3 )将只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液分别� �干后， 得到芍药苷或芍药内酯 苷。

特别是， 步骤 1 ) 中氧化铝层析提取物与硅胶拌合的比例为 1 : 0.5-5； 步骤 2) 中 硅胶柱内的硅胶与氧化铝层析混合物的重量之 比为 5-30: 1， 优选为 12-30: 1。

尤其是， 硅胶柱的柱直径与柱内硅胶的高度之比为 1 :6-10， 优选为 1 :8-10。

本发明另一方面提供一种制备芍药内酯苷和芍 药苷的方法，包括如下顺序进行的步 骤：

a) 以乙醇或甲醇溶液为提取溶剂， 对芍药药材进行加热回流提取， 得到芍药提取 液；

b) 浓缩芍药提取液， 去除乙醇或甲醇后， 加水稀释得到芍药醇提稀释液； c) 将芍药醇提稀释液依次进行大孔树脂柱分离、 氧化铝柱层析和硅胶柱层析。 其中， 步骤 a) 中所述的乙醇溶液的质量百分比浓度为 30-100%; 所述的甲醇醇溶 液的质量百分比浓度为 30-100%。

特别是， 步骤 a)中所述的提取溶剂的体积与药材的重量（干� ��）之比为 5-12: 1 (即 如果药材的重量（干重）为 1公斤， 则提取溶剂的体积为 5-12升； 如果药材的重量（干 重） 为 1克， 则提取溶剂的体积为 5-12毫升）； 提取次数为 2-3次， 提取时间为 2-4小 时 /次。

特别是， 步骤 b) 中所述芍药醇提稀释液体积与芍药药材重量 （干重） 之比为 1-8: 1， 优选为 2-8: 1， 即当药材的重量（干重）为 1公斤时， 芍药醇提稀释液的体积为 1-8L, 当药材的重量 （干重） 为 1克时， 芍药醇提稀释液的体积为 l-8ml。

特别是， 步骤 c) 中所述的大孔树脂柱分离包括如下顺序进行的 步骤：

1 ) 将所述芍药醇提稀释液加入到大孔树脂柱内；

2) 采用水为洗脱剂对大孔树脂柱进行洗脱， 除杂；

3 )采用乙醇溶液为洗脱溶剂对大孔树脂柱进行� �脱， 收集洗脱液， 合并洗脱液 中含有芍药苷和 /或芍药内酯苷的流份， 干燥后， 得到大孔树脂柱分离混合物。 特别是， 步骤 c) 中所述的氧化铝柱层析包括如下顺序进行的步 骤：

1 ) 将大孔树脂柱分离混合物溶解后， 拌入氧化铝， 干燥得到氧化铝层析样品；

2)将氧化铝层析样品置于氧化铝柱顶部， 以乙酸乙酯为洗脱剂， 进行氧化铝层 析， 收集洗脱液， 合并洗脱液中含有芍药苷和 /或芍药内酯苷的流份， 得到氧化铝层 析洗脱液；

3 ) 将氧化铝层析洗脱液蒸干后， 得到氧化铝层析混合物。

特别是， 步骤 c) 中所述的硅胶柱层析包括如下顺序进行的步骤 ：

1 ) 将氧化铝层析提取物溶解后， 拌入硅胶， 干燥得到硅胶层析样品；

2)将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部， 以乙酸乙酯为洗脱剂， 进行硅胶层析， 收 集洗脱液， 分别合并只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液 流份；

3 )将只含有芍药苷或芍药内酯苷的洗脱液分别� �干后， 得到芍药苷或芍药内酯 苷。 本发明具有如下优点：

1、 应用本发明方法， 可在同一个工艺流程中， 制备得到芍药苷和芍药内酯苷， 并 且可以分别得到公斤级的芍药苷和公斤级的芍 药内酯苷， 充分利用药材资源的综合使用 价值， 适宜工业化生产。

2、 应用本发明方法， 制备的芍药苷和芍药内酯苷纯度高， 采用硅胶柱层析法纯化 处理后的芍药苷和芍药内酯苷含量达到 90%以上。

3、 本发明制备方法采用水为芍药苷和芍药内酯苷 的提取液， 以无毒、 无害的乙醇、 乙酸乙酯为纯化洗脱溶剂， 既节约了成本， 而且还对环境友好， 符合绿色经济、 环境保 护的发展要求。

4、 本发明制备工艺方法简单， 精制效率高， 耗能低， 环保， 操作工艺条件容易控 制， 质量可控性强。

5、 本发明所述的高纯度芍药苷和芍药内酯苷， 可以单独用于制备药物和功能性保 健食品， 也可以与其它任何中西药物或食物， 尤其是与某些具有活血化淤和保护心脑血 管疾病的中药或是与镇静安神和抗抑郁抗焦虑 的中药配伍， 起到协同或者增效之目的， 用于制备药物和功能性保健食品。 附图说明

图 1为本发明芍药苷、 芍药内酯苷制备工艺流程图；

图 2为实施例 1制备所得芍药苷的 HPLC检测图谱；

图 3为实施例 1制备所得芍药内酯苷的 HPLC检测图谱；

图 4为实施例 4制备所得芍药苷的 HPLC检测图谱；

图 5为实施例 4制备所得芍药内酯苷的 HPLC检测图谱；

图 6为实施例 5制备所得芍药苷的 HPLC检测图谱；

图 7为实施例 5制备所得芍药内酯苷的 HPLC检测图谱。 具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行进一步说明，本 发明的优点和特点将会随着描述而更 为清楚。 但这些实施例仅是范例性的， 并不对本发明的范围构成任何限制。 本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和 范围下可以对本发明技术方案的细节和形 式进行修改或替换， 但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内 。 实施例 1

1、 药材的提取

1 ) 干燥的白芍药材 3公斤， 粉碎成粗粉后， 装入不锈钢中药渗漉罐 （容积为 12L) 中， 加入 6L纯净水浸泡 2小时；

2) 加入纯净水， 对芍药粗粉进行渗漉提取， 获得芍药渗漉液， 其中， 渗漉液的流 速为 6L/h， 渗漉提取液纯净水的体积与药材白芍的重量之 比为 10: 1， 即当白芍的重量

(干重） 为 1公斤时， 纯净水的体积为 10L; 白芍的重量 （干重） 为 1克时， 纯净水的 体积为 10ml。

2、 大孔树脂柱粗分离

1 )将渗漉液直接采用大孔吸附树脂柱进行分离� �理，其中，大孔吸附树脂选择 D101 型大孔吸附树脂， 大孔吸附树脂柱内的 D101型大孔吸附树脂的柱体积为 4L (层析柱的 直径 8cm， 高 1.5m)， 树脂体积与药材重量 （干重） 之比为 4: 3， 即如果药材 （干重） 3公斤， 大孔树脂的体积是 4L; 如果药材（干重） 30克， 则大孔树脂的体积为 40毫升， 待渗漉液以 8L/h的流速完全流入树脂柱后， 先用 12L的纯净水洗涤至流出液澄清后， 弃去水洗脱的流出液； 然后再用 12L质量百分比浓度为 50%的乙醇洗脱， 洗脱流速为 8L/h， 收集乙醇洗脱的流出液， 每 3L流出液收集为一流份；

2)采用薄层色谱法（TLC法）检测收集的大孔树� ��柱乙醇洗脱流份中芍药苷和芍药 内酯苷的含有情况，将含有芍药苷或 /和芍药内酯苷的洗脱液流份合并，得到树脂� �洗脱 液， 其中， TLC法使用的薄层板为硅胶 G板， 展开剂为氯仿、 甲醇的混合液， 氯仿与 甲醇的体积比为 4: 1，上行展开后， 喷以 5%的硫酸乙醇溶液， 150°C加热 5分钟后显色； 3 ) 将含芍药苷和芍药内酯苷组分的树脂柱洗脱液 置于真空减压浓缩罐内进行减压 浓缩， 浓缩后水浴蒸干、 粉碎， 得到大孔树脂柱分离混合物 210g， 其中， 减压浓缩的温 度为 70°C， 相对压力为 -0.09〜- 0.075MPa。

3、 氧化铝柱层析

1 ) 将大孔树脂柱分离混合物用适量甲醇全部溶解 后加入 210g氧化铝粉 （100-200 目）， 搅拌均匀， 干燥， 磨碎， 得到氧化铝柱层析样品；

2) 将氧化铝柱层析样品置于氧化铝柱顶部， 以乙酸乙酯为洗脱剂， 进行氧化铝柱 层析， 其中， 氧化铝柱内的吸附剂氧化铝的粒度为 100-200目， 氧化铝柱的柱直径与柱 内氧化铝高之比 1 : 10； 吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的重量 之比为 20: 1， 洗脱剂为乙酸乙酯， 用量 100L, 每 1L洗脱液收集一流份；

3 ) 采用薄层色谱法 （TLC法） 检测氧化铝柱洗脱流份中芍药苷和芍药内酯苷 的含 有情况， 将含有芍药苷、 芍药内酯苷的流份合并， 制得氧化铝层析洗脱液， 其中， TLC 法使用的薄层板为硅胶 G板， 展开剂为氯仿、 甲醇的混合液， 氯仿与甲醇的体积比为 4: 1， 上行展开后， 喷以 5%的硫酸乙醇溶液， 150°C加热 5分钟后显色；

4) 将氧化铝层析洗脱液蒸干， 得到氧化铝层析混合物 121g。

4、 硅胶柱层析

1 )将氧化铝层析混合物用质量百分比浓度为 95%的乙醇溶解后加入 120g层析用硅 胶粉 （200-300目）， 搅拌均匀， 干燥， 磨碎， 得到硅胶层析样品；

2) 将硅胶层析样品置于硅胶柱顶部， 以乙酸乙酯为洗脱剂， 进行硅胶柱层析， 其 中， 硅胶柱内的吸附剂硅胶的粒度为 100-200目， 硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为 1： 8； 吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量之比 为 24: 1， 流速为 10L/h。 洗脱剂 乙酸乙酯的用量为 96L， 每 1L洗脱液收集为一流份；

3 ) 采用薄层色谱法 （TLC法） 检测硅胶柱洗脱流份中芍药苷和芍药内酯苷的 含有 情况， 将只含有芍药苷单一成分的洗脱流份合并为第 一部分 （即芍药苷部分）； 将只含 有芍药内酯苷单一成分的洗脱流份合并为第二 部分 （即芍药内酯苷部分）， 其中， TLC 法使用的薄层板为硅胶 G板， 展开剂为氯仿、 甲醇的混合液， 氯仿与甲醇的体积比为 4: 1， 上行展开后， 喷以 5%的硫酸乙醇溶液， 150°C加热 5分钟后显色；

4)将合并后的 2部分分别蒸干，重量为 83.9g芍药苷；重量为 25.3g的芍药内酯苷。 采用 HPLC法检查制得的芍药苷、 芍药内酯苷的含量， HPLC检测条件为： 仪器：

Water 515泵， 2487检测器； 色谱柱： Hyper ODS2 C18; 流动相： 乙腈： 0.1%磷酸溶液 ( 14： 86)； 检测波长： 230nm _; 流速： 1.0ml/min。

经 HPLC检测芍药苷含量为 96.7%， 见附图 2; 芍药内酯苷的含量为 98.6%， 见附 图 3。 实施例 2

药材的渗漉提取步骤，除了渗漉提取液纯净水 的体积与药材白芍的重量之比为 5: 1， 渗漉液的流速为 4L/h之外， 其余与实施例 1相同；

大孔树脂柱粗分离步骤，除了选用 HP-20型大孔吸附树脂，树脂体积与药材重量（� �� 重）之比为 1 : 1， 洗脱液乙醇的质量百分比浓度为 30%， 洗脱液乙醇的用量为 20L; 粗 分离得到的大孔树脂柱分化混合物为 189g之外， 其余与实施例 1相同；

氧化铝柱层析步骤， 除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的 重量之比为 10: 1 ; 氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比 1 : 6； 乙酸乙酯的用量为 53L; 洗脱流速为 8L/h; 得到的氧化铝柱层析混合物为 105g之外， 其余与实施例 1相同；

硅胶柱层析步骤， 除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量 之比为 15: 1， 洗 脱剂乙酸乙酯的用量为 62L，洗脱流速为 6L/h;硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为 1 : 10； 得到重量为 74.3g的芍药苷； 重量为 23.6g的芍药内酯苷之外， 其余与实施例 1相 同。 实施例 3

药材的渗漉提取步骤， 除了渗漉提取液纯净水的体积与药材白芍的重 量之比为 15: 1， 渗漉液的流速为 3L/h之外， 其余与实施例 1相同；

大孔树脂柱粗分离步骤，除了选用 D-201型大孔吸附树脂，树脂体积与药材重量（� �� 重）之比为 5: 3， 洗脱液乙醇的质量百分比浓度为 70%， 洗脱液乙醇的用量为 12L， 洗 脱流速为 4L/h; 粗分离得到的大孔树脂柱分化混合物为 243g之外， 其余与实施例 1相 同；

氧化铝柱层析步骤， 除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的 重量之比为 25: 1 ; 乙酸乙酯的用量为 168L, 洗脱流速为 8L/h; 得到的氧化铝柱层析混合物为 124g之 外， 其余与实施例 1相同；

硅胶柱层析步骤， 除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量 之比为 30: 1， 洗 脱剂乙酸乙酯的用量为 120L, 洗脱流速为 6L/h， 得到重量为 84.3g的芍药苷； 重量为 27.9g的芍药内酯苷之外， 其余与实施例 1相同。

经 HPLC检测芍药苷含量为 97.5%; 芍药内酯苷的含量为 96.7%。 实施例 4

1、 药材的提取

1 ) 干燥的白芍药材 1公斤， 粉碎成粗粉后， 装入 10L圆底烧瓶中， 加热进行乙醇 热回流提取， 共提起三次， 其中提取溶剂乙醇的质量百分比浓度 50%， 三次提取溶剂乙 醇的用量为 5L， 5L， 5L， 三次提取时间为 3h， 3h， 2h _;

2) 将三次提取液合并后， 采用真空减压浓缩罐 （无锡市华新药化设备有限公司产） 进行减压浓缩，去除乙醇，浓缩至无醇味，制 得芍药浓缩液，其中减压浓缩的温度为 70°C， 相对真空度为 -0.09〜 -0.075MPa _;

3 ) 向芍药浓缩液中加入纯净水至总体积为 2L， 制成芍药醇提稀释液， 备用， 其中， 芍药醇提稀释液的体积与芍药药材的重量之比 为 2: 1。

本发明对药材进行加热回流提取处理时的提取 溶剂除了选用质量百分比浓度为 50% 的乙醇溶液之外， 其他质量百分比浓度范围为 30-100%的乙醇溶液均适用于本发明。

2、 大孔树脂柱粗分离 1 )将芍药醇提稀释液采用大孔吸附树脂柱进行� �离处理， 其中， 大孔吸附树脂选择 D-201型大孔吸附树脂，大孔吸附树脂柱内的 D-201型大孔吸附树脂的柱体积为 1.5L (层 析柱的直径 5.5cm， 高 1200cm)， 树脂体积与药材重量 （干重） 之比为 1.5: 1， 即药材 (干重） 1公斤， 大孔树脂的体积是 1.5L, 待芍药醇提稀释液以 lL/h的流速完全流入树 脂柱后， 先用 5L的纯净水洗涤至流出液清澈透明后， 弃去水流出液， 再用 5L质量百分 比浓度为 50%的乙醇洗脱， 洗脱流速为 1.5L/h， 收集乙醇洗脱液；

2 )将含芍药苷和芍药内酯苷组分的树脂柱乙醇� �脱液置于真空减压浓缩罐内进行减 压浓缩， 浓缩后水浴蒸干、 粉碎， 得到大孔树脂柱分离混合物 71g， 其中， 减压浓缩的 温度为 70。C， 相对压力为 -0.09〜 - 0.075MPa。

3、 氧化铝柱层析

除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的 重量之比为 8: 1； 氧化铝层析柱的直 径 5.5cm， 氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比 1 : 10； 乙酸乙酯的用量为 48L; 洗 脱流速为 4L/h; 得到的氧化铝柱层析混合物为 41g之外， 其余与实施例 1相同。

4、 硅胶柱层析

除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量 之比为 12: 1， 层析柱的直径 7.6cm， 硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为 1 : 10； 洗脱剂乙酸乙酯的用量为 36L， 洗脱流速 为 3L/h， 得到重量为 26.13g的芍药苷； 重量为 9.12g的芍药内酯苷之外， 其余与实施例 1相同。

经 HPLC检测芍药苷含量为 94.05%， 见附图 4; 芍药内酯苷的含量为 92.25%， 见 附图 5。 实施例 5

药材的热回流提取步骤， 除了提取溶剂选用质量百分比浓度为 70%的乙醇溶液， 热 回流提取 2次， 2次提取溶剂乙醇的用量为 12L， 10L, 2次提取时间为 4h， 3h， 减压回 收乙醇至无醇味， 加水稀释制得总体积为 8L的芍药醇提稀释液之外， 其余与实施例 4 相同；

大孔树脂柱粗分离步骤， 除了选用 AB-8型大孔吸附树脂，树脂体积与药材重量（� � 重） 之比为 2: 1， 芍药醇提稀释液以 2L/h的流速完全流入树脂柱， 纯净水洗脱时， 水 的用量为 8L; 乙醇洗脱时乙醇溶液的质量百分比浓度为 70%， 用量为 6L， 洗脱流速为 2L/h _; 粗分离得到的大孔树脂柱分化混合物为 83g之外， 其余与实施例 1相同； 氧化铝柱层析步骤， 除了吸附剂氧化铝与大孔树脂柱分离混合物的 重量之比为 20: 1 ; 氧化铝层析柱的直径 7.6cm， 氧化铝柱的柱直径与柱内氧化铝高之比 1 : 10； 乙酸乙 酯的用量为 66L; 洗脱流速为 4L/h; 得到的氧化铝柱层析混合物为 37.2g之外， 其余与 实施例 1相同；

硅胶柱层析步骤， 除了吸附剂硅胶与氧化铝柱层析混合物的重量 之比为 28: 1， 硅 胶层析柱的直径 10cm， 硅胶柱的柱直径与柱内硅胶高之比为 1 : 10； 洗脱剂乙酸乙酯的 用量为 86L， 洗脱流速为 3L/h， 得到重量为 25.12g的芍药苷； 重量为 8.38g的芍药内酯 苷之外， 其余与实施例 1相同。

经 HPLC检测芍药苷含量为 98.5%， 见附图 6; 芍药内酯苷的含量为 94.1%， 见附 图 7。