技术领域

本发明涉及一种制备果蔬发酵转化液的方法。

背景技术

目前研究表明果蔬酵素具有如下生理作用：

(1) 整理人体内环境， 净化血液、 改善体质， 分解排除异物， 防止 慢性病、 退化性疾病；

说

(2) 提高白细胞运送能力、 促进白细胞功能， 提高机体抗炎、 抗菌 能力和自愈能力；

(3) 多因子参与食物分解、 消化，书使食物更易消化、 吸收， 促进体 力恢复；

(4) 促进细胞新陈代谢， 产生能量， 促进亚健康细胞再生；

(5) 复活衰退的生殖细胞， 增进生殖功能；

(6) 解酒、 防醉；

(7) 补充营养及能量来源。

传统的酵素制备工艺是将水果、 蔬菜粉碎后， 加水在无氧的条件下发 酵， 这种发酵对发酵过程无法控制， 参与发酵的菌种也无法控制可能会有 些菌产生对人体有害物质， 发酵时间也较长 （一般需要 3-6个月） 发明内容

本发明的目的是提供一种制备果蔬发酵转化液 的方法。

本发明提供的方法， 包括如下步骤：

所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜乳酸杆菌 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为嗜乳酸杆菌 sc ic^ ^)菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;

所述发酵的温度为 18°C-37°C， 所述发酵的温度具体为 18°C、 23°C或 37°C， 所述发酵时间为 10天 -180天， 所述发酵时间具体为 10天、 15天 或 180天， 所述发酵方式为边搅拌边发酵。

在所述发酵之前， 还包括将果蔬粉碎成 40-50目大小的步骤； 在所述发酵之后，还包括如下步骤：将所述发 酵产物过滤、收集滤液、 超滤、 收集超滤后液体， 即为果蔬发酵转化液。

超滤为将滤液经 10万分子量分超滤（进液压力 1.3 kg, 出液压力 0.5 所述果蔬为如下 54种果蔬的混合物：

魔芋、 茄子、 笋、 菝菜、 豆芽、 花椰菜、 甘蓝、 萝卜、 黄瓜、 豌豆、 红椒、 芹菜、 葱、 蒜、 葡萄、 柚子、 西瓜、 桃、 橘、 蓝莓、 甜橙、 香蕉、 说

荔枝、 苦瓜、 韭菜、 石榴、 火龙果、 胡萝卜、 蕃茄、 白菜、 西芹、 甜椒、 莴苣、 梨、 姜、 芋头、 菜豆、 南瓜明、 莲藕、 樱桃、 猕猴桃、 酸梅、 草莓、

2

无花果、 金桔、 芦柑、 南国梨、 香瓜、 书哈密瓜、 木瓜、 洋葱、 桑椹、 甜菜 和柠檬。

所述果蔬中每种果蔬的质量相同。

所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilusH 所述长双歧杆 菌 iBifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种

{Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌 Streptococcus ther ophilus) 菌液、 所述果蔬禾卩水的配比为

(2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml:

(1000-1500) kg: (1000-1500) kg;

所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilusH 所述长双歧杆 菌 iBifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种

{Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 0 (Streptococcus thermophilus) 菌液、 所述果蔬水的配比为 （2000、 5000或 8000) ml: (2000、 5000或 8000) ml, (2000、 5000或 8000) ml:

(2000、 5000或 8000) ml: (1000、 1200或 1500) kg: (1000、 1200或 1500) kg。

所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜乳酸杆菌 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为嗜乳酸杆菌 sc ic^ ^)菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵时间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;

所述长双歧杆菌 fidobactreiim longum ) 菌液按照如下方法制 说 明 书 备： 将长双歧杆菌 fidobactreiiM longum ) 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为长双歧杆菌 Bifidobactreium longum ) 菌液； 所述发酵温度 为 20°C_4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;

所 述 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液按照如下方法制备： 将德氏乳杆菌 保力口禾I亚禾中 i actobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 发酉孝培养， 得到发酵产物， 即为德氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus^菌液； 所述发酵温度为 20Ό_41 Ό， 所述 发酵温度具体为 20°C、 37 °C或 41 °C， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发 酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;

所述嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜热链球菌（^ire^ ococttw e2m¾。 i/s)发酵培养， 得到发酵产 物， 即为嗜热链球菌（S re^iococct/s ther卿 hilus、智痕', 所述发酵温度 为 20°C_4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h。

所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)为嗜乳酸杆菌 {Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854， 所述长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) 为长双歧杆菌 i. Bif idobactreium longum ) CGMCC 1. 2186 ， 所述德 氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) 为德氏乳杆菌保力口禾 'J亚种 ( Lactobaci l lus delbruecki isubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 ， 所述嗜热链球菌 {Streptococcus thermophilus) 为 嗜 热 链 球 菌 {Streptococcus thermophilus) CGMCC 1. 2471。

所述发酵培养的培养基配方： 将 10g蛋白胨、 10g牛肉膏、 5g酵母抽提 物、 20g葡萄糖、 lg吐温 -80、 2gK ₂ HP04、 lg吐温 _80、 5gNaAC 2g柠檬酸三 铵、 0. 2gMgS0 ₄ 、 0. 05gMnS0 ₄ 和水混合， 用水补至 1L得到的培养基。

由所述的方法制备的果蔬发酵转化液也是本发 明保护的范围。

所述方法和 /或所述的果蔬发酵转化液在制备提高免疫能� �药物、 改 善疲劳药物、 健脾和胃药物和 /或祛黄褐斑药物中的应用也是本发明保护 的范围。 说 明 书 本发明的实验证明， 本发明通过选择嗜酸乳杆菌、 长双歧杆菌、 德氏 乳杆菌保加利亚种、 嗜热链球菌 4种益生菌， 进行发酵。 使得发酵过程可 控、 发酵时间縮短为 15天， 益生菌代谢物是对人体有益的物质。 本发明 的果蔬酵素 （发酵转化液） 是萃取自 80多种天然蔬果植物精华， 再加以 植入有益菌种发酵熟成的全机能性天然食品， 富含完整的维生素、矿物质、 氨基酸， 能供应细胞完整的营养素， 修复细胞， 增加细胞反应其它有益成 份的 (生化反应)效率。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明 ， 均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、 试剂等， 如无特殊说明， 均可从商业途径 得到。

实施例 1、 果蔬发酵转化物制备

方法一、

一、 选用的果蔬材料

所述 54种果蔬如下：

说 明 书

二、 果蔬发酵转化

1、 菌种选择与购买

益生菌购于中科院微生物所， 益生菌分别为嗜乳酸杆菌

(Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1.1854 、 长 双 歧 杆 菌 { Bifidobactreium longum ) CGMCC 1.2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) CGMCC 1.1480、 嗜热链球 菌（St eptococcis thermophilus) CGMCC 1.2471， 所有菌种结尾砂土管保 存菌种， 作为出发菌株；

2、 主种子制备

益生菌主种子制备 （主种子传代不超过 10代， 本制备传 4代）

①用无菌不锈钢匙分别取嗜乳酸杆菌

acidophilus) CGMCC 1.1854、 长双歧杆菌 Bifidobactreium longum ) CGMCC 1.2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobacillus

delbrueckiisubsp. bulgaricus) CGMCC 1.1480、 (¾¾¾| ^1¾ {Streptococcus thermophilus) CGMCC 1.2471砂土管 1/10量，其余冻存，分别接在 50ml (250 三角瓶) MRS液体培养基 （10g/l蛋白胨、 lOg/1牛肉膏、 5g/l酵母抽提物、 20g/l葡萄糖、 lg/1吐温 -80、 2g/lK ₂ HP04、 lg/1吐温 -80、 5g/lNaAC、 2g/l 柠檬酸三铵、 0.2g/lMgS0 ₄ 、 0.05g/lMnS0 ₄ ， 121°C灭菌 20min) 中， 37°C、 100转摇床培养 16h _;

②各挑取一环，分别划线接种在 MRS固体培养基（10g/l蛋白胨、 lOg/1 说 明 书 牛肉膏、 5g/l酵母抽提物、 20g/l葡萄糖、 lg/1吐温 -80、 2g/lK ₂ HP04、 lg/1 吐温 -80、 5g/lNaAC、 2 _g /l柠檬酸三铵、 0. 2 _g /lMgS0 ₄ 、 0. 05g/lMnS0 ₄ 、 1. 5% 琼脂， 121 °C灭菌 20min ) 上， 37°C培养箱培养 16h;

③分别挑取长势最旺的一个菌落， 各自接在 50ml MRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h;

④各自接在 500ml MRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h， 加入甘油至 20%， 摇匀， 以 lml分装入冻存管， 分别作为益生菌嗜酸乳杆 菌、 长双歧杆菌、 短双歧杆菌、 嗜热链球菌主种子， -40°C以下温度保藏；

3、 工作种子的制备

益生菌工作种子制备 （工作种子传代不超过 5代， 本制备传 4代）

①用无菌接种环分别取嗜乳酸杆菌

acidophilus) CGMCC 1. 1854、 长双歧杆菌 Bifidobactreiim longum ) CGMCC 1. 2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobaci llus

delbruecki isubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480、 [¾¾¾| ^0 {Streptococcus thermophilus) CGMCC 1. 2471主种子， 分别划线接种在 MRS固体培养基上， 37 °C培养箱培养 16h;

②分别挑取长势最旺的一个菌落，各自接在 50ml ) MRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h;

③各自接在 500mlMRS液体培养基中， 37 V、 100转摇床培养 16h _;

④各自再转接至 5000mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转搅拌， 培养 16h _; 即得嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854菌液、 长双歧杆菌 (^ifidobactreium long ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌 保加利亚种 （Lactobacil lus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 菌液、 嗜热链球菌（ "irep ococ«/s CGMCC 1. 2471菌液。 以 上菌液均为发酵容器中所有发酵产物。

4、 果蔬发酵转化

1 ) 取上述表 1中的材料称重， 每种 15 kg;

2 ) 洗净去杂， 控干水分， 称重 '

3 ) 粉碎成 40-50目， 投入发酵罐；

对于 3吨的发酵罐 （有效使用溶剂 =3吨 χθ. 8=2. 4吨） 实际投料控制 在 2400kg; 按果蔬与水 1 : 1的比例， 果蔬投料 1200公斤， 水加入量为 说 明 书

1200kg。

4)再向发酵罐中加入嗜乳酸杆菌 ^Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854菌液、 长双歧杆菌 iBifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌 液、 德氏乳杆菌保力口利亚种 ( Lactobacillus delbruecki isubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 菌液、 嗜热链球菌（^ireptococct/s thermophilus) CGMCC 1. 2471菌液各 5000ml， 控制发酵罐温度 23°C， 搅拌 15d;

5 ) 200目滤布过滤， 弃果蔬渣， 取滤液；

6 )滤液经 10万分子量分超滤（进液压力 1. 3 kg, 出液压力 0. 5 kg)、 得到 1200-1500 kg澄清液体， 密封、 转入 4 Ό贮藏， 即得到果蔬发酵转 化液， 即为果蔬酵素。

三、 检测

果蔬发酵转化液主要产物是乳酸、 乙酸， 因此将酸度作为其特征成分 进行鉴定， 具体如下：

果蔬发酵转化液酸度： 指滴定 100ml果蔬发酵转化液， 消耗的 0. 1N NaOH溶液的毫升数， 检验吋一般采用 10ml样品。

测定歩骤： 取 10ml果蔬发酵转化液 +20ml水 +0. 5%酚酞指示剂 0. 5ml ， 用 0. IN NaOH标液滴定到微红色 30秒不褪色。 计算： 酸度 =消耗 的 0. IN NaOH标液体积 X 10

结果:该产品酸度为 42。

方法二、

一、 选用的果蔬材料： 与方法一相同。

二、 果蔬发酵转化： 提取方法与方法一基本相同， 不同的是加入嗜乳 酸杆菌（Lgc o ^ci i/s acidophilus) CGMCC 1. 1854 菌液、 长双歧杆菌

{Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌保加利亚 禾中 (Lactobaci l lus delbruecki i subsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热链球菌（S re^ ococci/s thermophilus) MX 1. 2471菌液各 2000ml， 果蔬投料 1000公斤， 水加入量为 1000kg。

果蔬发酵转化液的发酵的温度为 18°C， 发酵吋间为 10天。

所述嗜乳酸杆菌 acidophilusH 所述长双歧杆 菌 Bifidobactreiimi longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种 { Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌（^ rep ococras thermophilus) 菌液的制备中的发酵温度均为 20°C， 发酵时间均为 15 h。

三、 检测： 方法与方法一相同， 结果与方法一无显著差异。

方法三 >

一、 选用的果蔬材料： 与方法一相同。

二、 果蔬发酵转化： 提取方法与方法一基本相同， 不同的是加入嗜乳 说

acidophi lus、OMCC 1. 1854 菌液、 长双歧杆菌

{Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌保加利亚 禾中 (Lactobaci llus delbruecki i subsp.书 bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热链球菌（^ rep ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471菌液各 8000ml， 果蔬投料 1500公斤， 水加入量为 1500kg。

果蔬发酵转化液的发酵的温度为 37°C， 发酵时间为 180天。

所述嗜乳酸杆菌 <ac o½c i/s acidophilus) 痕、 所述长双歧杆 菌 i Bifidobactreiuni longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种

{ Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 ^Streptococcus thermophilus) 菌液的制备中的发酵温度均为 41 °C， 发酵时间均为 36 h。

三、 检测： 方法与方法一相同， 结果与方法一无显著差异。