本申请要求于 2012 年 12 月 27 日提交中国专利局、 申请号为 201210579007.4、 发明名称为 "一种罗米地辛的制备方法" 的中国专利申 请的优先权， 其全部内容通过引用结合在本申请中。 技术领域

本发明涉及医药合成领域， 具体涉及一种罗米地辛的制备方法。 背景技术

罗米地辛，英文名为 Romidepsin,其化学名称为（ 1 S, 4S, 7Z, 10S, 16E,

21R ) -7-乙叉基 -4,21-二异丙基 -2-氧杂 -12, 13-二硫 -5, 8, 20, 23-四氮杂双 环 [ 8, 7, 6 ]二十三碳 -16-烯 -3, 6, 9, 19, 22-五酮, 分子式为 C ₂₄ H ₃₆ N ₄ 0 ₆ S ₂ , 是一种双环四肽， 具有稳定的疏水结构， 其结构中特有的二硫键是发挥 活性的关使基团。 2009年， 罗米地辛获得美国食品药品管理局 （FDA ) 批准， 用于治疗皮肤 T细 学结构如下：

罗米地辛

罗米地辛为组蛋白去乙酰化酶 ( HDACs )抑制剂， 透过肿瘤细胞膜 进入细胞质，在细胞内二硫键被谷胱甘肽还原 成巯基，与锌依赖的 HDACs 中的锌相结合而发挥抑制 HDACs的作用，从而进一步诱导肿瘤细胞分化 和凋亡。

目前， 主要有两种方法来制备罗米地辛， 一是生物发酵法， 二是通 过化学合成来制备。 关于化学合成有多个文章报道， 如 1996年 Knhn等 人用全液相合成罗米地辛 （ J.AM.Chem.Soc, 118:7237-7238 ), 该文献中 的方法采用缬氨酸曱酯为原料， 偶联相应的氨基酸， 然后氢氧化锂脱除 曱酯， 再在 DEAD和 PPh ₃ 条件下成酯， 最后采用碘氧化合成二硫键， 共 经过 14步反应合成罗米地辛醋酸盐 （在临床应用中， 罗米地辛本身不太 稳定， 需要制成罗米地辛醋酸盐）。 但是， 这种方法步骤繁瑣， 不够简便, 更为重要的是其液相总收率仅在 18%左右， 这些问题一直是影响罗米地 辛生产效率的主要因素。 发明内容

有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种罗米地辛的制备方 法， 使得 本发明所述方法能够提高其总收率， 同时减少制备步骤。

为实现上述目的， 本发明提供如下技术方案：

一种罗米地辛的制备方法， 包括以下步骤：

步骤 1、 在活化剂的作用下， 树脂与 3-羟基 -7- ( R )巯基 -4-庚烯酸上 的羧基偶联得到式 1化合物；

步骤 2、 Fmoc-L-Val-OH与式 1化合物上的羟基偶联， 脱 Fmoc保护 基后，依次逐个将 Fmoc-L-Thr-OH、 Fmoc-D-Cys( R )-OH、 Fmoc-D-Val-OH 进行多肽链延伸偶联， 得到式 2化合物；

步骤 3、 式 2化合物脱除 Fmoc保护基以及 L-Thr残基侧链上的羟基 得到式 3化合物；

步骤 4、 式 3化合物通过破氧化法环化形成二硫键得到式 4化合物； 步骤 5、 式 4化合物裂解脱除树脂得到式 5化合物；

步骤 6、式 5化合物上的羧基和 D-Val残基的 N端环化形成酰胺键得 到罗米地辛；

式 1化合物

式 2化合物

式 4化合物 式 5化合物

本发明所述各保护基是在涉及氨基酸合成领域 常用的保护氨基酸主 链以及侧链上氨基、 羧基、 巯基等干扰合成的基团的保护基团， 防止氨 基、 羧基、 巯基等在制备目标产物过程中发生反应， 生成杂质， 对于本 发明中需要保护侧链的氨基酸来说， 本领域技术人员公知其侧链结构以 及知晓采用常用保护基来保护氨基酸侧链上的 氨基、 羧基、 巯基等基团， 其中，所述 R为巯基保护基，所述 Fmoc为氨基酸 N端保护基，所述 Resin 为树脂。 Fmoc-L-Val-OH 是指在 N 端偶联有 Fmoc 保护基 L-Val , Fmoc-L-Thr-OH是指在 N端偶联有 Fmoc保护基的 L-Thr, Fmoc-D-Cys ( R ) -OH是指在 N端偶联有 Fmoc保护基、在侧链巯基处偶联有 R保护 基的 D-Cys, Fmoc-D-Val-OH指在 N端偶联有 Fmoc保护基的 D-Val, 上 述简式表示为本领域常用形式。

作为优选， 所述巯基保护基为三苯曱基或乙酰胺基曱基， 更优选为 三苯基； 作为优选， 所述树脂为 CTC Resin ( CTC树脂）或 Wang Resin (王树脂）， 更优选为 CTC Resin, 最优选为替代度为 0.5mmol/g的 CTC Resin„

本发明针对现有罗米地辛制备方法较为繁瑣、 收率较低的问题， 基 于固相合成的方法， 首先让固相载体（即树脂） 与 3-羟基 -7-巯基 -4-庚烯 酸上的羧基偶联， 而后将罗米地辛上 4 个氨基酸按顺序依次偶联， 随后 脱除羟基、 环化成二硫键、 酰胺键， 形成罗米地辛， 明显的减少了合成 步骤， 而且收率提高至 30%左右。

在本发明制备方法的步骤 1 中， 作为优选， 所述树脂、 活化剂和 3- 羟基 -7- ( R )巯基 -4-庚烯酸的摩尔比为 1 :6:3。

最为优选方案， 步骤 1为：

3-羟基 -7- ( R )巯基 -4-庚烯酸溶解后加入 DIPEA活化， 然后和经洗 涤、 溶胀后的树脂进行偶联得到式 1 化合物。 其中， 本步骤用于溶解、 洗涤和溶胀树脂的溶剂优选为 DMF。

在本发明制备方法的步骤 2 中， 所述多肽链延伸偶联是指在 Fmoc-L-Val-OH与式 1化合物偶联后，剩余氨基酸按照其在罗米地� �结构 中的连接顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生 缩合反应 （主链氨基和羧 基的缩合反应）进行偶联。 在多肽链延伸偶联中， 由于每个氨基酸 N端 都有保护基， 因此需要先脱除 N端保护基再偶联， 这对本领域技术人员 来说是公知常识， 本发明优选用 DBLK脱除 N端保护基。

作为优选方案， 步骤 2为： Fmoc-L-Val-OH溶解后加入偶联剂和 DMAP, 然后和式 1化合物偶 联， 用 DBLK脱除 Fmoc保护基， 接着重复上述加入偶联剂和 DMAP、 加入氨基酸以及脱除 Fmoc保护基的步骤 ,依次逐个完成 Fmoc-L-Thr-OH、 Fmoc-D-Cys ( R ) -OH、 Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联， 得到式 2 化合物。

其中， 所述偶联剂优选为 HOBT/DIC 双体系偶联剂、 PyBOP/HOBt 双体系偶联剂或 TBTU/HOBt双体系偶联剂 ,最优选为 PyBOP/HOBt双体 系偶联剂。 对于这些多体系的偶联剂， 其各组分的配比在本领域中是一 定的且是公知的， 在此不再贅述。 步骤 2 中所述用于溶解的溶剂优选为 DMF、 DCM、 NMP、 DMSO中的一种和两种， 更优选为采用体积比 DMF: NMP为 1:1的混合溶剂。 作为优选， 所述偶联剂的用量以步骤 1 中树脂 用量为参照， 两者的摩尔比偶联剂： 树脂为 3:1 , 所述 DMAP的用量以步 骤 1中树脂用量为参照， 两者的摩尔比 DMAP: 树脂为 0.2:1。

在本发明制备方法的步骤 3中， 作为优选方案， 步骤 3为：

向式 2化合物中加入三乙胺和溶解后的 DMAP活化， 然后滴加曱基 磺酰氯反应 1-5小时，接着再加入溶解后的 DABCO反应 1-5小时脱除整 个羟基， 最后用 DBLK脱除 Fmoc保护基得到式 3化合物。

在步骤 3优选方案中， 所述反应时间均优选为 2小时； 所述反应的 温度优选为 -5°C至 5°C ,更优选为 0°C ;所述用于溶解的溶剂优选为 DMF、 DCM或 THF; 所述三乙胺的用量以步骤 1中树脂用量为参照， 两者的摩 尔比三乙胺： 树脂优选为 2:1 , 所述曱基横酰氯的用量以步骤 1中树脂用 量为参照， 两者的摩尔比曱基横酰氯： 树脂优选为 1.5:1 , 所述 DMAP的 用量以步骤 1中树脂用量为参照，两者的摩尔比 DMAP:树脂优选为 0.2: 1 , 所述 DABCO的用量以步骤 1中树脂用量为参照，两者的摩尔比 DABCO: 树脂优选为 2:1。

在本发明制备方法的步骤 4中， 作为优选方案， 步骤 4为：

碘溶解后加入式 3化合物反应 1-4小时， 然后经洗涤、 收缩树脂、 干 燥后得到式 4化合物。

在步骤 4优选方案中， 所述反应时间优选为 2小时； 所述用于溶解 的溶剂优选为 DMF或 MeOH;所述破的用量以步骤 1中树脂用量为参照， 两者的摩尔比优选为 4-10:1 , 更优选为 6:1。

在本发明制备方法的步骤 5中， 作为优选方案， 步骤 5为：

向式 4化合物中加入裂解试剂反应 2小时， 过滤， 滤液用乙醚沉淀， 收集沉淀即为式 5化合物， 所述裂解试剂为体积比 TFA:H ₂ 0为 95:5的混 合裂解液、 体积比 TFA:EDT:PHOH:H ₂ 0为 95:5:3:2的混合裂解液或体积 比 TFA: EDT:TIS:PHOH:H ₂ 0为 80:5:5:5:5的混合裂解液。

在本发明制备方法的步骤 6中， 作为优选方案， 步骤 6为：

式 5化合物溶解后加入偶联剂和 DIPEA反应 2-5小时得到罗米地辛。 其中， 所述偶联剂优选为 HOBT/DIC 双体系偶联剂、 PyBOP/HOBt 双体系偶联剂或 TBTU/HOBt双体系偶联剂 ,最优选为 PyBOP/HOBt双体 系偶联剂。 对于这些多体系的偶联剂， 其各组分的配比在本领域中是一 定的且是公知的， 在此不再贅述。 步骤 6 中所述用于溶解的溶剂优选为 DMF; 所述反应时间优选为 4小时。 作为优选， 所述偶联剂的用量以步 骤 1中树脂用量为参照， 两者的摩尔比偶联剂： 树脂为 3:1 , 所述 DIPEA 的用量以步骤 1中树脂用量为参照， 两者的摩尔比 DIPEA: 树脂为 6:1。

此外， 根据罗米地辛的实际临床应用， 其为了稳定需要制备成醋酸 盐， 故本发明在步骤 6之后还包括纯化罗米地辛并制成罗米地辛醋� �盐 工序， 具体为：

将步骤 6得到的罗米地辛加水稀译， 然后通过 RP-HPLC系统纯化获 得罗米地辛纯品，接着以乙腈 -醋酸溶液为流动相继续用 RP-HPLC系统转 盐， 收集目的峰馏分进行浓缩、 冻干即为罗米地辛醋酸盐。

其中， 所述醋酸溶液的质量百分含量优选为 0.2%。

按照本发明所述制备方法制备的罗米地辛醋酸 盐和现有技术相比 (即背景技术中提到的制备工艺， 其同样是制成罗米地辛醋酸盐）， 收率 由 18%提高至 30%左右， 而且大大减少了制备工序。

由以上技术方案可知， 提供了一种基于固相合成原理的罗米地辛制 备方法， 本发明所述方法最终制备的的产品纯度大于 99%, 总收率大于 30%, 并且该方法操作简单， 合成周期短， 成本低， 利于作为罗米地辛的 大规模生产。 具体实施方式

本发明公开了一种罗米地辛的制备方法， 本领域技术人员可以借鉴 本文内容， 适当改进工艺参数实现。 特别需要指出的是， 所有类似的替 换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的 ， 它们都被视为包括在本 发明。 本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述 ， 相关人员明显能 在不脱离本发明内容、 精神和范围内对本文所述的的化合物和制备方 法 进行改动或适当变更与组合， 来实现和应用本发明技术。

在本发明具体实施方式中， 所有偶联由保护基的氨基酸均可通过市 售获得， 本发明中的保护氨基酸购自于吉尔生化有限公 司， 所用 CTC Resin ( CTC树脂 )和 Wang Resin (王树脂）脂购自于天津南开和成有限 公司， 申请文件中所用英文缩写对应的中文含义见表 1。

表 1 英文缩写释义

Fmoc 9-芴曱氧羰基

Trt 三苯曱基

NMP N-曱基吡咯烷酮

DMSO 二曱基亚砜

DMF Ν,Ν-二曱基曱酰胺

DCM 二氯曱烷

DIC Ν,Ν-二异丙基碳二亚胺

DIPEA Ν,Ν-二异丙基乙胺

DMAP 4-二曱胺基吡啶

PYBOP 六氟磷酸苯并三唑 -1-基-氧基三吡咯烷基

TBTU 0-苯并三氮唑 -Ν,Ν,Ν',Ν'-四曱基脲四氟硼酸 HOBT 1-羟基苯并三唑

(3H-1 ,2,3-三唑并 [4,5-b]吡啶 -3-氧基)三 - 1-吡咯烷基辚

PYAOP

六氟碑酸盐

2-(7-偶氮苯并三氮唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四曱基脲六氟磷酸

HATU

酯

HOAt -羟基 -7—偶氮苯并三氮唑

ACM 乙酰胺基曱基

TFA 三氟乙酸

EDT 1,2-乙二疏醇

PHOH 苯酚

TIS 三异丙基硅烷

MeOH 曱醇

MsCl 曱基磺酰氯

DABCO 1,4-二氮杂二环 [2.2.2]辛烷

DBLK 20%六氢吡啶 /DMF溶液 下面结合实施例， 进一步阐述本发明。 实施例 1: 式 1化合物的制备

称取替代度为 0.5mmol/g的 CTC Resin 2g (合成规模 lmmol ) , 加入 到固相反应柱中， 用 DMF洗涤 2次， 用 DMF溶胀树脂 30分钟后， 称取 1.26g 3-羟基 -7- (三苯曱基）巯基 -4-庚烯酸用 DMF溶解， 冰水浴下加入 0.6mL DIPEA活化后， 加入上述装有树脂的反应柱中， 反应 2小时反应 结束， 用 DMF洗涤 6次获得式 1化合物。 实施例 2: 式 2化合物的制备

将 1.01g Fmoc-Val-OH、 0.38g HOBt、 0.03g DMAP溶于体积比为 1 : 1 的 DMF和 NMP混合溶液， 冰水浴下加入 0.3mL DIC活化后， 加入到实 施例 1中固相反应柱和式 1化合物反应， 室温反应 2 h (反应终点以茚三 酮法检测为准， 如果树脂无色透明， 则反应完全， 树脂显色， 表示反应 不完全， 需再偶联反应 lh )。 然后用 DBLK脱除 Fmoc保护基并用 DMF 洗涤 6次。

接着重复上述加入偶联剂和 DMAP、加入氨基酸以及脱除 Fmoc保护 基的步骤， 依次逐个完成 Fmoc-L-Thr-OH、 Fmoc-D-Cys ( Trt ) -OH、 Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联 , 得到式 2化合物。 实施例 3: 式 3化合物的制备

称取 0.03g DMAP用无水二氯曱烷溶解后， 加入 0.6ml三乙胺， 将混 合液温度降到 0。C后, 加入到实施例 2反应柱中， 并且滴力。 0.3ml曱基磺 酰氯， 反应 2小时， 反应温度保持在 0°C , 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再加入 2.2g DABCO和 50mml DCM, 反应 2小时后反应结束后用 DMF 洗涤 6次， 得到式 3化合物。 实施例 4: 式 3化合物的制备

称取 0.03 g DMAP用无水二氯曱烷溶解后， 加入 0.6ml三乙胺， 将混 合液温度降到 5 °C后， 加入实施例 2反应柱中， 并且滴力。 0.3ml曱基磺酰 氯， 反应 1小时， 反应温度保持在 5 °C , 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再加入 2.2g DABCO和 50mml DCM, 反应 2小时后反应结束后用 DMF 洗涤 6次， 得到式 3化合物。 实施例 5: 式 3化合物的制备

称取 0.03g DMAP用无水二氯曱烷溶解后， 加入 0.6ml三乙胺， 将混 合液温度降到 -5 °C后， 加入实施例 2反应柱中， 并且滴加 0.3ml曱基横酰 氯， 反应 5小时， 反应温度保持在 5 °C , 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再加入 2.2g DABCO和 50mml DCM, 反应 2小时后反应结束后用 DMF 洗涤 6次， 得到式 3化合物。 实施例 6: 式 4化合物的制备

称取 1.5g碘用 DMF溶解后，加入到实施例 3反应柱中和式 3化合物 反应 2小时， 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再用曱醇收缩 3次， 真空干 燥得到 2.4g式 4化合物。 实施例 7: 式 4化合物的制备

称取 1.5g碘用 DMF溶解后，加入到实施例 4反应柱中和式 3化合物 反应 2小时， 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再用曱醇收缩 3次， 真空干 燥得到 2.4g式 4化合物。 实施例 8: 式 4化合物的制备

称取 1.5g碘用 DMF溶解后，加入到实施例 5反应柱中和式 3化合物 反应 2小时， 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再用曱醇收缩 3次， 真空干 燥得到 2.4g式 4化合物。 实施例 9: 式 5化合物的制备

将实施例 6中的 2.4g式 4化合物加入到 50ml烧瓶中，配置裂解试剂

(体积比， TFA:H ₂ 0=95:5 ) , 将裂解试剂倒入烧瓶中， 室温反应 2小时。 反应结束， 过滤收集滤液。 滴加至 240ml 乙醚试剂中， 离心， 无水乙醚 洗涤沉淀， 并且真空干燥沉淀， 得到 0.52g式 5化合物， 纯度 72.52%。 实施例 10: 式 5化合物的制备

将实施例 7中的 2.4g式 4化合物脂加入到 50ml烧瓶中，配置裂解试 剂 （体积比， TFA:EDT:PHOH:H ₂ 0=95:5:3:2 ) , 将裂解试剂倒入烧瓶中， 室温反应 2小时。 反应结束， 过滤收集滤液。 滴加至 240ml乙醚试剂中， 离心， 无水乙醚洗涤沉淀， 并且真空干燥沉淀， 得到 0.50g式 5化合物， 纯度 65.42%。 实施例 11: 式 5化合物的制备

将实施例 8中的 2.4g式 4化合物加入到 50ml烧瓶中，配置裂解试剂

(体积比， TFA: EDT:TIS:PHOH:H ₂ O=80:5:5:5:5 ) , 将裂解试剂倒入烧瓶 中， 室温反应 2小时。 反应结束， 过滤收集滤液。 滴加至 240ml 乙醚试 剂中， 离心， 无水乙醚洗涤沉淀， 并且真空干燥沉淀， 得到 0.48g式 5化 合物， 纯度 61.48%。 实施例 12: 罗米地辛粗品的制备

将实施例 9中的 0.52g式 5化合物用 DMF溶剂后加入 0.38 g HOBt 和 1.56g PyBOP, 往反应瓶中滴加 0.3ml DIPEA, 反应 4小时， 得到粗品 罗米地辛， 纯度 68.13%。 实施例 13: 纯化粗品罗米地辛制备罗米地辛醋酸盐

将实施例 12中的粗品罗米地辛加水稀释 10倍，采用 RP-HPLC系统， 波长 230nm, 色谱柱为 50x250 mm反相 C18柱， 规 0.2%TFA/乙腈流动 相纯化， 收集目的峰馏分， 得到纯度大于 98.5%的精品罗米地辛。 将精品 罗米地辛溶液采用 RP-HPLC系统， 色谱柱为 50x250 mm反相 C18柱， 0.2%醋酸溶液 /乙腈流动相转盐， 收集目的峰馏分， 旋转蒸发浓缩， 冻干 得到罗米地辛醋酸盐 0.17g, HPLC纯度 98.5%, 总收率 31.5%。 实施例 14: 式 1化合物的制备

称取替代度为 0.5mmol/g的 CTC Resin 2g (合成规模 lmmol ) , 加入 到固相反应柱中， 用 DMF洗涤 2次， 用 DMF溶胀树脂 30分钟后， 称取 1.15g 3-羟基 -7- (乙酰胺基曱基）巯基 -4-庚烯酸用 DMF溶解， 冰水浴下 加入 0.6mL DIPEA活化后， 加入上述装有树脂的反应柱中， 反应 2小时 反应结束， 用 DMF洗涤 6次获得式 1化合物。 实施例 15: 式 2化合物的制备

将 l.Olg Fmoc-Val-OH, 0.38 g HOBt, 0.03gDMAP、 溶于体积比为 1 :1的 DMF和 NMP混合溶液， 冰水浴下加入 0.3mL DIC活化后,加入实 施例 14中固相反应柱和式 1化合物反应， 室温反应 2 h (反应终点以茚 三酮法检测为准， 如果树脂无色透明， 则反应完全， 树脂显色， 表示反 应不完全，需再偶联反应 lh )。然后用 DBLK脱除 Fmoc保护基并用 DMF 洗涤 6次。

接着重复上述加入偶联剂和 DMAP、加入氨基酸以及脱除 Fmoc保护 基的步骤， 依次逐个完成 Fmoc-L-Thr-OH、 Fmoc-D-Cys ( Acm ) -OH、 Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联， 得到式 2化合物。 实施例 16: 式 3化合物的制备

称取 0.03g DMAP用无水二氯曱烷溶解后， 加入 0.6ml三乙胺， 将混 合液温度降到 0°C后， 加入实施例 15反应柱中， 并且滴加 0.3ml曱基横 酰氯， 反应 2小时， 反应温度保持在 0°C , 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再加入 2.2g DABCO和 50mml DCM, 反应 2小时后反应结束后用 DMF 洗涤 6次， 得到式 3化合物。 实施例 17: 式 4化合物的制备

称取 1.5g碘用 DMF溶解后， 加入到实施例 16反应柱中和式 3化合 物反应 2小时， 反应结束后用 DMF洗涤 6次， 再用曱醇收缩 3次， 真空 干燥得到 2.3g式 4化合物。 实施例 18: 式 5化合物的制备

将实施例 17中的 2.3g式 4化合物加入到 50ml烧瓶中， 配置裂解试 剂 （体积比， TFA:H20=95:5 ) , 将裂解试剂倒入烧瓶中， 室温反应 2小 时。 反应结束， 过滤树脂， 收集滤液。 滴加至 240ml乙醚试剂中， 离心， 无水乙醚洗涤沉淀， 并且真空干燥沉淀， 得到 0.50g式 5化合物， 纯度 70.45%。 实施例 19: 罗米地辛粗品的制备

将实施例 18中的 0.50g式 5化合物用 DMF溶剂后加入 0.38 g HOBt 和 1.56g PyBOP, 往反应瓶中滴加 0.3ml DIPEA, 反应 4小时， 得到粗品 罗米地辛， 纯度 65.83%。 实施例 20: 纯化粗品罗米地辛制备罗米地辛醋酸盐

将实施例 19中的粗品罗米地辛加水稀释 10倍，采用 RP-HPLC系统， 波长 230nm, 色谱柱为 50x250 mm反相 C18柱， 规 0.2%TFA/乙腈流动 相纯化， 收集目的峰馏分， 得到纯度大于 98.5%的精品罗米地辛。 将精品 罗米地辛溶液采用 RP-HPLC系统， 色谱柱为 50x250 mm反相 C18柱， 0.2%醋酸溶液 /乙腈流动相转盐， 收集目的峰馏分， 旋转蒸发浓缩， 冻干 得到罗米地辛醋酸盐精肽 0.16g, HPLC纯度 98.5%, 总收率 30.0%。 实施例 21: 罗米地辛粗品的制备

将实施例 18中的 0.50g式 5化合物用 DMF溶剂后加入 0.38 g HOBt 和 1.56g PyBOP往反应瓶中滴加 0.3ml DIPEA,反应 4小时， 得到粗品罗 米地辛， 纯度 67.53%。 实施例 22: 纯化粗品罗米地辛制备罗米地辛醋酸盐

将实施例 21中的粗品罗米地辛加水稀释 10倍，采用 RP-HPLC系统， 波长 230nm, 色谱柱为 50x250 mm反相 C18柱， 规 0.2%TFA/乙腈流动 相纯化， 收集目的峰馏分， 得到纯度大于 98.5%的精品罗米地辛。 将精品 罗米地辛溶液采 RP-HPLC系统，色语柱为 50x250 mm反相 C18柱， 0.2% 醋酸溶 ^乙腈流动相转盐， 收集目的峰馏分， 旋转蒸发浓缩， 冻干得到 罗米地辛醋酸盐精肽 0.18g, HPLC纯度 98.5%, 总收率 33.7%。 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域 的普通技术人员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干 改进和润饰， 这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。