本発明により、無保護糖鎖を出発原料とし� ��オキサゾリン誘導体を合成する方法及びそ� ��によって得られた新規化合物、さらに該オ� ��サゾリン誘導体を糖供与体として得られる� ��糖体の合成法が提供される。
 該オキサゾリン誘導体としては、糖から誘� ��されたもの、糖供与体として機能する活性� ��有するものであれば特に限定されないが、� ��ましくは、無保護糖や無保護糖鎖などであ� ��ヘミアセタール性のヒドロキシ基とアミド� ��をもつ糖から合成されたもので、例えば、� ��記一般式(3)で示されるオキサゾリン誘導体� ��挙げられる。
 一般式(3)で示されるオキサゾリン誘導体は� ��次の反応式で示されるようにして、一般式( 1)のヘミアセタール性のヒドロキシ基とアミ� ��基をもつ糖を脱水縮合剤である一般式(2)の� ��ロホルムアミジニウム誘導体で処理して製� ��できる。

(上式中、R ¹ はアルキル基、R ² 、R ³ 及びR ⁴ は、それぞれ同一でも異なっていてもよく、 互いに独立に、水素原子、ヒドロキシ基、ヒ ドロキシメチル基、アセトアミド基、カルボ キシ基、硫酸基、リン酸基または糖残基およ びそれらの修飾物残基からなる群から選択さ れたもので、R ⁵ 、R ⁶ 、R ⁷ 及びR ⁸ は、それぞれ同一でも異なっていてもよく、 互いに独立に、置換されていてもよいアルキ ル基、置換されていてもよいアルケニル基及 び置換されていてもよいアリール基からなる 群から選択されたもので、R ⁵ とR ⁷ あるいはR ⁶ とR ⁸ で環を形成していてよいし、あるいはR ⁵ とR ⁶ あるいはR ⁷ とR ⁸ で環を形成していてよく、Xはハロゲン原子� �あり、そしてY ^- は陰イオンである)

 本明細書中、「アルキル基」としては、直� ��又は分岐鎖のいずれであってもよく、例え� ��C _1-22 アルキル(例えば、メチル、エチル、プロピ� �、イソプロピル、ブチル、イソブチル、sec-� ��チル、tert-ブチル、ペンチル、イソペンチ� �、tert-ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オク チル、ノニル、デカニル、ヘキサデカニル、 エイコサニル等)等が挙げられ、好ましくは� �C _1-6 アルキル(例えば、メチル、エチル、プロピ� �、イソプロピル、ブチル、tert-ブチル、ペン チル等)が挙げられ、さらに好ましくは、C _1-4 アルキル(例えば、メチル、エチル、プロピ� �、イソプロピル、ブチル、tert-ブチル等)が� �げられる。

 本明細書中、糖残基とは糖から誘導され� ��ものを指してよい。本明細書で「糖」とは� ��糖類、糖質、複合糖質などを含む意味と理� ��してよく、「糖類」とは、単糖類、単糖類� ��複数個縮合した小糖類(二糖類、オリゴ糖を 含む)、多糖類を指すものである。糖類は、� �素原子とほぼ同数の酸素原子をもつポリヒ� �ロキシアルデヒド、ポリヒドロキシケトン� �及びこれらの誘導体(例えば、アミノ基をも� ��アミノ糖、アルデヒド基又は第一級ヒドロ� ��シ基の部分がカルボキシル基となっている� ��ルボン酸、アルデヒド基やケトン基がヒド� ��キシ基となっている多価アルコールなど)な ど、並びに、それらの縮重合体を指すもので あってよい。「糖質」とは、糖類を主要な成 分としてもつ物質を指すと理解してよく、糖 のみから成るものを単純糖質、その他の物質 (タンパク質、脂質、合成高分子などを含む)� ��含むものを複合糖質と考えてよい。

 本発明の糖は、当該物質の起源、由来に� ��って特に限定されることなく、天然から得� ��れるもの、遺伝子工学的に動物細胞、植物� ��胞、微生物などにより合成したもの、酵素� ��に製造されたもの、醗酵により製造された� ��の、あるいは人工的に化学合成されたもの� ��どが包含されてよい。糖には、単糖、二糖� ��オリゴ糖、多糖が包含されてよく、単糖で� ��グルコース、ガラクトース、マンノース、� ��ルコサミン、N-アセチルグルコサミン、ガ� �クトサミン、N-アセチルガラクトサミン、マ ンノサミン、N-アセチルマンノサミン、フル� ��トース、グルクロン酸、イズロン酸などが� ��げられ、二糖ではマルトース、イソマルト� ��ス、ラクトース、ラクトサミン、N-アセチ� �ラクトサミン、セロビオース、メリビオー� �、N,N'-ジアセチルキトビオース、ヒアルロン 酸二糖、グリコサミノグリカン二糖などが挙 げられる。オリゴ糖としては、2個以上の単� �から構成される通常の意味でのオリゴ糖が� �含され、通常2~30個の単糖から構成されるも� ��、代表的には、2~20個の単糖から構成される ものが挙げられ、グルコース、ガラクトース 、マンノース、グルコサミン、N-アセチルグ� ��コサミン、フルクトースなどから構成され� ��ホモオリゴマー、あるいは、グルコース、� ��ラクトース、マンノース、グルコサミン、N -アセチルグルコサミン、フルクトース、シ� �ル酸などの2成分以上より構成されるヘテロ� ��リゴマーが挙げられ、例えば、マルトオリ� ��糖、イソマルトオリゴ糖、ラクトオリゴ糖� ��ラクトサミンオリゴ糖、N-アセチルラクト� �ミンオリゴ糖、セロオリゴ糖、メリビオオ� �ゴ糖、N-アセチルキトトリオース、N-アセチ� ��キトテトラオース、N-アセチルキトペンタ� �ースなどが挙げられる。またグリコサミノ� �リカンオリゴ糖、例えば、ヒアルロン酸オ� �ゴ糖(例えば、前記したヒアルロン酸二糖や� ��ヒアルロン酸四糖など)、コンドロイチン硫 酸オリゴ糖(例えば、コンドロイチン硫酸Aオ� ��ゴ糖、コンドロイチン硫酸Cオリゴ糖など)� �ケラタン硫酸オリゴ糖、ヘパリンオリゴ糖� �ヘパラン硫酸オリゴ糖なども挙げられる。� �糖としては、動物、植物(海藻を含む)、昆虫 、微生物など広範囲な生物で見いだされてい るものが挙げられ、例えば、シアロ複合型糖 鎖、N結合型糖鎖、O結合型糖鎖、グリコサミ� ��グリカン、澱粉、アミロース、アミロペク� ��ン、セルロース、キチン、グリコーゲン、� ��ガロース、アルギン酸、ヒアルロン酸、イ� ��リン、グルコマンナンなどが挙げられる。

 糖残基及びそれらの修飾物残基は、通常、� ��糖の1位又はオリゴ糖の還元末端の1位で残� �となっているものが挙げられる。本発明で� �の修飾物とは、天然に存在するものから単� �・精製する過程で修飾されたもの、酵素的� �修飾されたもの、化学的に修飾されたもの� �微生物を含めて生物学的な手法で修飾され� �ものであってよく、糖科学の分野で知られ� �修飾が含まれ、例えば、加水分解、酸化還� �、エステル化、アシル化、アミノ化、エー� �ル化、ニトロ化、脱水反応、配糖化などに� �る修飾が包含されていてよい。
 本発明を実施するに当たり、出発物質とし� ��使用されるヘミアセタール性のヒドロキシ� ��とアミド基をもつ糖としては、通常、還元� ��端の2位にアミド基を持つ糖が適応可能であ るが、好ましくは還元末端の2位にアセトア� �ド基を持つ糖、例えば、単糖ではN-アセチル グルコサミン、N-アセチルガラクトサミン、N -アセチルマンノサミンなどが挙げられ、二� �、オリゴ糖、多糖などでは、還元末端がN-ア セチルグルコサミン、N-アセチルガラクトサ� ��ンなどである糖で行うことが望ましい。出� ��物質である糖の好適なものの例としては、� ��えば、N-アセチルグルコサミン、N-アセチル ガラクトサミン、N-アセチルマンノサミンな� ��、さらに、N-アセチルラクトサミン、N,N'-ジ アセチルキトビオース、ヒアルロン酸二糖、 グリコサミノグリカン二糖など、そして、N� �合型糖タンパク質糖鎖、O結合型糖タンパク� ��糖鎖、キトオリゴ糖などが包含される。

 本明細書中、「置換されていてもよいアル� ��ル基」中の「アルキル基」としては、上記� ��同様なものが挙げられる。「置換されてい� ��もよいアルケニル基」中の「アルケニル基� ��としては、直鎖又は分岐鎖のいずれであっ� ��もよく、例えばC _2-24 アルケニル(例えば、ビニル、アリル、イソ� �ロペニル、1-ブテニル、2-ブテニル、3-ブテ� �ル、2-メチル-2-プロペニル、1-メチル-2-プロ� ��ニル、2-メチル-1-プロペニル等)が挙げられ� ��。「置換されていてもよいアリール基」中� ��「アリール基」としては、例えばC _6-14 アリール(例えば、フェニル、1-ナフチル、2-� ��フチル、2-ビフェニリル、3-ビフェニリル、 4-ビフェニリル、2-アンスリル、3-インデニル 、5-フルオレニル等)等が挙げられ、好ましく は、フェニル基である。

 また、「置換されていてもよいアルキル基� ��、「置換されていてもよいアルケニル基」� ��び「置換されていてもよいアリール基」に� ��ける「アルキル基」、「アルケニル基」及� ��「アリール基」は、任意に、1個又はそれ以 上の置換基で置換されていてもよく、その置 換されている場合の「置換基」としては、当 該分野で知られた置換基であってよく、例え ばオキソ、チオキソ、置換基を有していても よいイミノ、ハロゲン原子(例、フッ素、塩� �、臭素、ヨウ素等)、C _1-3 アルキレンジオキシ(例、メチレンジオキシ� �エチレンジオキシ等)、ニトロ、シアノ、C _1-6 アルキル、C _2-6 アルケニル、カルボキシC _2-6 アルケニル(例、2-カルボキシエテニル、2-カ� ��ボキシ-2-メチルエテニル等)、C _2-6 アルキニル、C _3-6 シクロアルキル、C _6-14 アリール(例、フェニル、1-ナフチル、4-ビフ� ��ニリル、2-アンスリル等)、C _1-8 アルコキシ、C _1-6 アルコキシ-カルボニル-C _1-6 アルコキシ(例、エトキシカルボニルメチル� �キシ等)、ヒドロキシ、C _6-14 アリールオキシ(例、フェニルオキシ等)、C _7-16 アラルキルオキシ(例えば、ベンジルオキシ� �)、メルカプト、C _1-6 アルキルチオ、C _6-14 アリールチオ(例、フェニルチオ等)、C _7-16 アラルキルチオ(例えば、ベンジルチオ等)、� ��ミノ、モノ-C _1-6 アルキルアミノ(例、メチルアミノ、エチル� �ミノ等)、モノ-C _6-14 アリールアミノ(例、フェニルアミノ等)、ジ- C _1-6 アルキルアミノ(例、ジメチルアミノ、ジエ� �ルアミノ等)、ジ-C _6-14 アリールアミノ(例、ジフェニルアミノ等)、� ��ルミル、カルボキシ、C _1-6 アルキル-カルボニル(例、アセチル、プロピ� ��ニル等)、C _3-6 シクロアルキル-カルボニル(例、シクロプロ� ��ルカルボニル等)、C _1-6 アルコキシ-カルボニル(例、メトキシカルボ� ��ル、エトキシカルボニル、プロポキシカル� ��ニル、tert-ブトキシカルボニル等)、C _6-14 アリール-カルボニル(例、ベンゾイル等)、C _7-16 アラルキル-カルボニル(例、フェニルアセチ� ��等)、C _6-14 アリールオキシ-カルボニル(例、フェノキシ� ��ルボニル等)、C _7-16 アラルキルオキシ-カルボニル(例、ベンジル� ��キシカルボニル等)、5又は6員複素環カルボ� ��ル(例、ニコチノイル、テノイル、フロイル 、モルホリノカルボニル、チオモルホリノカ ルボニル、ピペラジン-1-イルカルボニル、ピ ロリジン-1-イルカルボニル等)、カルバモイ� �、チオカルバモイル、モノ-C _1-6 アルキル-カルバモイル(例、メチルカルバモ� ��ル等)、ジ-C _1-6 アルキル-カルバモイル(例、ジメチルカルバ� ��イル等)、C _6-14 アリール-カルバモイル(例、フェニルカルバ� ��イル等)、5又は6員複素環カルバモイル(例、 3-ピリジルカルバモイル、2-チエニルカルバ� �イル等)、C _1-6 アルキルスルホニル(例、メチルスルホニル� �)、C _6-14 アリールスルホニル(例、フェニルスルホニ� �等)、C _1-6 アルキルスルフィニル(例、メチルスルフィ� �ル等)、C _6-14 アリールスルフィニル(例、フェニルスルフ� �ニル等)、ホルミルアミノ、C _1-6 アルキル-カルボニルアミノ(例、アセチルア� ��ノ等)、C _6-14 アリール-カルボニルアミノ(例、ベンゾイル� ��ミノ等)、C _1-6 アルコキシ-カルボニルアミノ(例、メトキシ� ��ルボニルアミノ等)、C _1-6 アルキルスルホニルアミノ(例、メチルスル� �ニルアミノ等)、C _6-14 アリールスルホニルアミノ(例、フェニルス� �ホニルアミノ等)、C _1-6 アルキル-カルボニルオキシ(例、アセトキシ� ��)、C _6-14 アリール-カルボニルオキシ(例、ベンゾイル� ��キシ等)、C _1-6 アルコキシ-カルボニルオキシ(例、メトキシ� ��ルボニルオキシ等)、モノ-C _1-6 アルキル-カルバモイルオキシ(例、メチルカ� ��バモイルオキシ等)、ジ-C _1-6 アルキル-カルバモイルオキシ(例、ジメチル� ��ルバモイルオキシ等)、C _6-14 アリール-カルバモイルオキシ(例、フェニル� ��ルバモイルオキシ等)、ニコチノイルオキシ 、置換基を有していてもよい5ないし7員飽和� ��状アミノ、5ないし10員芳香族複素環基(例、 2-チエニル、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリ� ��ル、2-キノリル、4-キノリル、8-キノリル、4 -イソキノリル、1-インドリル、3-インドリル� ��2-ベンゾチアゾリル、2-ベンゾ[b]チエニル、 2-ベンゾ[b]フラニル、3-ベンゾ[b]フラニル等)� ��スルホ、スルファモイル、スルフィナモイ� ��、スルフェナモイル等が挙げられる。ここ� ��挙げられた置換基において「アルキル部」( アルコキシ中のアルキル部を含む)、「アル� �レン部」、「アルケニル部」、「アルキニ� �部」、「アリール部」、及び「複素環部」� �、任意に、1個又はそれ以上の置換基で置換� ��れていてもよく、その場合の置換基として� ��上記で説明したような基であってよい。上� ��「置換基」の説明で「置換基を有していて� ��よい」場合の置換基は、同様に、上記で説� ��したような基である。

 「R ⁵ とR ⁷ あるいはR ⁶ とR ⁸ で環を形成」の場合の「環」としては、R ⁵ やR ⁷ が結合している窒素原子、あるいは、R ⁶ やR ⁸ が結合している窒素原子、と一緒になり、さ らに酸素原子、窒素原子及び/又は硫黄原子� �任意に1個又はそれ以上含んでいてよい炭素� ��により形成される5~7員環であってよく、例� ��ば、イミダゾリン環、ベンゾイミダゾリン� ��、ヒドロピリミジン環などであってよい。� ��R ⁵ とR ⁶ あるいはR ⁷ とR ⁸ で環を形成」の場合の「環」としては、R ⁵ やR ⁶ が結合している窒素原子、あるいは、R ⁷ やR ⁸ が結合している窒素原子、と一緒になり、さ らに酸素原子、窒素原子及び/又は硫黄原子� �任意に1個又はそれ以上含んでいてよい炭素� ��により形成される5~7員環であってよく、例� ��ば、ピロリジン環、ピペリジン環、ピペラ� ��ン環、モルホリン環、チオモルホリン環な� ��であってよい。Xはハロゲン原子で、例えば 、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などであ る。
 Y ^- は、陰イオンであれば特に限定されるもので はないが、適当なYとしては、例えば、塩素� �子、臭素原子、ヨウ素原子などのハロゲン� �子、OH、BF ₄ 、PF ₆ などが挙げられる。

 該ハロホルムアミジニウム誘導体(2)は、� ��応する尿素誘導体を適当なハロゲン化剤、� ��えば、クロル化剤などで処理することによ� ��得られる。該ハロゲン化剤としては、例え� ��、ホスゲン、塩化オキザリル、五塩化リン� ��三塩化リン、オキシ塩化リン、それらに相� ��する臭化物などが挙げられる。化合物(2)の� ��体例としては、2-クロロ-1,3-ジメチルイミダ ゾリニウムクロライド(2-chloro-1,3-dimethylimidazol inium chloride; DMC)

、2-クロロ-1,3-ジメチルイミダゾリニウムヘ� �サフルオロフォスフェート、N,N,N',N'-テトラ� ��チルクロロフォルムアミジニウムクロライ� ��(N,N,N',N'-tetramethylchloroformamidinium chloride)、ク ロロ-N,N,N',N'-ビス(テトラメチレン)フォルム� �ミジニウムヘキサフルオロフォスフェート(c hloro- N,N,N',N'-bis(tetramethylene)formamidinium hexafluo rophosphate)、2-クロロ-1,3-ジメチル-3,4,5,6-テト� �ヒドロ-2(1H)-ピリミジニウムクロリドなどが� ��げられる。

 化合物(2)を使用しての化合物(3)の合成反� ��は、当該反応に悪影響を与えない限り、当� ��分野で知られた溶媒などの媒体中で行うこ� ��ができる。当該反応は、無溶媒(反応原料が 溶媒を兼ねる場合を含んでよい)中又は反応� �不活性な溶媒存在下にて行うのが有利であ� �。該溶媒は、反応が進行する限り特に限定� �れないが、好適には水性溶媒を使用でき、� �えば、水、メタノール、エタノール、n-プロ パノール、イソプロパノール、シクロヘキサ ノール、フルフリルアルコール、エチレング リコール、ベンジルアルコールなどのアルコ ール類、例えば、テトラヒドロフラン(THF)、� ��オキサン、テトラヒドロフルフリルアルコ� ��ル、ジエチレングリコール、シクロヘキシ� ��メチルエーテル、メチルセロソルブ、セロ� ��ルブ、ブチルセロソルブ、メチルtert-ブタ� �ール等のエーテル類、例えば、メチルエチ� �ケトン、フルフラール、メチルイソブチル� �トン、メシチルオキシド、ジアセトンアル� �ール、シクロヘキサノン等のケトン類、例� �ば、アセトニトリル、ベンゾニトリル等の� �トリル類、例えば、ジメチルスルホキシド(D MSO)、スルホラン等のスルホキシド類、例え� �、ホルムアミド、N,N-ジメチルホルムアミド( DMF)、N,N-ジメチルアセトアミド等のアミド類� ��例えば、ギ酸メチル、ギ酸エチル、酢酸エ� ��ル、酢酸ブチル、酢酸メトキシブチル、酢� ��セロソルブ、炭酸ジエチル、炭酸グリコー� ��等のエステル類、例えば、ギ酸、酢酸、プ� ��ピオン酸、無水酢酸等の有機酸類、ヘキサ� ��チルホスホロトリアミド、ピリジン、キノ� ��ン等の複素環化合物、アニリン、N-メチル� �ニリン等の芳香族アミン類、ニトロ化合物� �が挙げられる。これらの溶媒は単独で用い� �こともできるし、また必要に応じて二種又� �それ以上の多種類を適当な割合、例えば、1: 1~1:1000の割合で混合して用いてもよい。

 当該反応の反応媒体は水ならびに通常使用� ��れる有機溶媒が利用可能であるが、水また� ��水を含む有機溶媒が好ましく、アミンを有� ��る塩溶液がより好ましい。また、緩衝能を� ��する塩水溶液を使用することもできる。緩� ��剤としては、当該反応に悪影響を与えない� ��り、当該分野で知られたものの中から選択� ��ることができる。
 典型的な場合、当該アミン溶液が示す水素� ��オン濃度pHは1.0~13であって、より好ましく� �7.5~11の範囲である。また、反応温度は、好� �しくは-80℃~80℃であって、より好ましくは0� ��~40℃の範囲で実施することが望まれる。反� ��時間は、特に限定されず、所望の生成物が� ��られる限り、適宜適切な時間とすることが� ��きるが、例えば、1分間~24時間であってよく 、通常は、15分間~5時間であってよく、代表� �な場合には、15分間~2時間が挙げられる。脱� ��縮合剤の量は特に制限は無いが、用いる糖� ��対して1当量~5当量で行うことが望ましい。� ��ミンの濃度は用いる脱水縮合剤に対して0.1� ��量~100当量までであって、より好ましくは1� �量~4当量で実施することが望ましい。添加す る糖の濃度は好ましくは0.1mM~5Mであって、よ� ��好ましくは10mM~1Mで実施することが望まれる 。
 該アミンとしては、第一級アミン、第二級� ��ミン、第三級アミン、第四級アミンのいず� ��であってもよいが、例えば、脂肪族炭化水� ��残基、芳香族炭化水素残基、複素環残基な� ��を有するものが挙げられ、該脂肪族炭化水� ��残基としては、直鎖であっても分岐鎖のも� ��であってよく、飽和又は不飽和のものであ� ��てよく、例えば、アルキル基、アルケニル� ��、シクロアルキル基、アラルキル基、シク� ��アルキルアルキル基などが挙げられ、芳香� ��炭化水素残基としては、単環式のものある� ��は二環又はそれ以上が縮合したものであっ� ��もよく、例えば、フェニル基、ナフチル基� ��どが挙げられ、複素環残基としては、硫黄� ��子、酸素原子、窒素原子からなる群から選� ��されたものを1個以上有するものであってよ く、ピリジル基、イミダゾリル基、チアゾリ ル基、キノリニル基などが包含されてよく、 当該アミンとしては、ピペリジン、モルホリ ン、チオモルホリン、ピペラジン、ピロリジ ンなども包含されてよい。該アミンの代表的 なものとしては、例えば、トリメチルアミン 、トリエチルアミン、ジエチルメチルアミン 、ジメチルエチルアミン、n-ブチルジメチル� ��ミン、ジイソプロピルエチルアミン、テト� ��メチルエチレンジアミンなどの脂肪族炭化� ��素残基を有する第三級アミン類又はジアミ� ��類が挙げられる。

 生成物は反応液のまま、あるいは粗製物と� ��て次の反応に用いることもできるが、常法� ��従って反応混合物から単離することもでき� ��濃縮、減圧濃縮、蒸留、分留、溶媒抽出、� ��性変換、転溶、例えば、高速液体クロマト� ��ラフィー(HPLC)、薄層クロマトグラフィー(TLC )、カラムクロマトグラフィーなどのクロマ� �グラフィー、結晶化、再結晶等により、単� �精製することができる。
 本発明で得られたオキサゾリン誘導体(3)の� ��でも、一般式(4)で表されるオキサゾリン誘� ��体(式中、R ⁹ はアルキル基で、R ¹⁰ ~R ¹⁹ は、それぞれ同一でも異なっていてもよく、 互いに独立に、水素原子、ヒドロキシ基、ア セトアミド基、カルボキシ基、硫酸基、リン 酸基または糖残基及びそれらの修飾物残基か らなる群から選択されたものである、但し、 R ¹⁰ ~R ¹⁹ のうちの少なくとも一つは、糖残基である)� �、新規であり、糖供与体として有用である� �ここで、置換基R ⁹ ~R ¹⁹ は、R ¹ ~R ⁴ 並びに関連して上記で説明したと同様の基で ある。本オキサゾリン誘導体(4)は、糖鎖を付 加した化合物やオリゴ糖鎖を合成する場合の 糖供与体として有用であり、例えば、生理活 性オリゴ糖、ドラックデリバリーシステムの キャリア、界面活性剤、糖鎖医薬、糖ペプチ ド、糖タンパク質、糖鎖高分子などの合成用 など、様々な用途に用いられて有用である。 代表的な一般式(4)のオキサゾリン誘導体とし ては、式中、R ⁹ はアルキル基で、R ¹⁰ ~R ¹⁹ は、それぞれ同一でも異なっていてもよく、 互いに独立に、ヒドロキシ基、アセトアミド 基または糖残基及びそれらの修飾物残基から なる群から選択されたもの、但し、R ¹⁰ ~R ¹⁹ のうちの少なくとも一つは、糖残基であるも のが挙げられる。

 本発明で得られたオキサゾリン誘導体(3)� ��、それを糖供与体(ドナー)として使用し、� �受容体(アクセプター)存在下に糖転移反応を 行い、糖鎖の導入された有機化合物、すなわ ち、配糖体を合成することができる。当該糖 転移反応は、酵素を使用した手法を好適に使 用できる。当該酵素としては、所要の反応を 行うことができる限り特には限定されないが 、例えば、糖転移反応触媒酵素として知られ たもののうちから選択してそれを使用できる 。当該酵素は、単独で用いることもできるし 、また必要に応じて二種又はそれ以上の多種 類を適当な割合で混合して用いてもよい。糖 転移反応に用いる糖転移反応触媒酵素として は特に制限はないが、代表的な糖転移反応触 媒酵素としては、糖転移酵素、糖加水分解酵 素(又は糖質加水分解酵素)を使用できる。該� ��キサゾリン誘導体(3)は、糖加水分解酵素を� ��用して好適に配糖体を与える。

 糖加水分解酵素としては、ヒトを含めた� ��物、植物、微生物から得られたもの、遺伝� ��工学的手法で産生されたリコンビナント酵� ��、変異型酵素、固定化酵素などが包含され� ��。代表的な糖加水分解酵素としては、キチ� ��ーゼ、変異型キチナーゼ、エンド-β-N-アセ� ��ルグルコサミニダーゼなどのエンドグリコ� ��ダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチ� ��ーゼなどが挙げられる。キチナーゼ及び変� ��型キチナーゼとしては、Bacillus属菌由来の� �チナーゼ(chitinases)が包含され、S. Shoda et al ., Helvetica Chemic Acta, Vol. 85, pp.3919-3936 (2002 )に開示されているものが挙げられ、例えば� �Bacillus circulans WL-12由来のキチナーゼA1及び� ��の変異型キチナーゼ、すなわち、E204Q, D202N , D200N, Y279F, D280N, W433Fなどであってよい。� ��ンドグリコシダーゼ(endoglycosidases)としては� ��代表的には、エンド-β-N-アセチルグルコサ� ��ニダーゼ(endo-β-N-acetylglucosaminidases)が挙げら れ、例えば、Mucor hiemalis由来のエンド-β-N-ア セチルグルコサミニダーゼM(endo-β-N-acetylglucos aminidase M; Endo M) (Yamamoto, K. et al., Biochem.� �Biophys. Res. Commun., 203, pp.244-252 (1994))、Arthr obacter protophormiae由来のエンド-β-N-アセチル� �ルコサミニダーゼA(endo-β-N-acetylglucosaminidase  A; Endo A) (Takegawa, K. et al., Biochem. Int., 24,  pp.849-855 (1991))などが包含される。ヒアルロ ニダーゼとしては、哺乳動物由来のもの、例 えば、高等動物の睾丸、精液、皮膚、脾臓か ら得られたもの、ヒル、ハチ毒液、蛇毒から 得られたもの、肺炎球菌、連鎖球菌、ブドウ 球菌、ガス壊疽菌などの微生物から得られた ものであってもよく、代表的には、牛精巣ヒ アルロニダーゼ、羊精巣ヒアルロニダーゼな どが挙げられる。コンドロイチナーゼとして は、例えば、Flavobacterium heparinum由来のもの� �Proteus vulgaris由来のもの、Arthrobacter aurescens� ��来のものなどが挙げられ、Chondroitinase ABC ( Proteus vulgaris), Chondroitinase AC II Arthro (Arthro bacter aurescens), Chondroitinase B (Flavobacterium hep arinum)(生化学工業)などを市場から入手できる 。

 該酵素は、そのままか、或いは固定化し� ��形で使用することができる。固定化は、当� ��者に周知の方法(例えば、架橋法、物理的吸 着法、包括法等)で行い得る。固定化担体と� �ては、一般に用いられているものであれば� �れでもよく、例えば、セルロース、アガロ� �ス、デキストラン、κ-カラギナン、アルギ� �酸、ゼラチン、酢酸セルロース等の多糖類;� ��えばグルテン等の天然高分子;例えば活性炭 、ガラス、白土、カオリナイト、アルミナ、 シリカゲル、ベントナイト、ヒドロキシアパ タイト、リン酸カルシウム等の無機物;ポリ� �クリルアミド、ポリビニルアルコール、ポ� �プロピレングリコール、ウレタン等の合成� �分子などが挙げられる。該担体は、交差結� �型のもの、ジエチルアミノエチル基、カル� �キシメチル基などのイオン交換型の基を結� �せしめてあるもの、BrCN処理、エポキシ化、N -ヒドロキシコハク酸イミド化などの手法で� �め活性化されているものなども包含されて� �く、さらに、酵素の固定化及びリガンドの� �定化用に市販されているものの中から選択� �て使用することもできる。また、酵素を産� �する微生物を使用してもよいが、その場合� �体は、マイクロカプセルに封入した形で使� �することもでき、固定化菌体も使用でき、� �該分野で知られた方法から適宜選択して使� �できる。

 本発明に係る配糖化反応の方法としては� ��前記糖供与体のオキサゾリン誘導体(3)を糖� ��容体存在下、糖加水分解酵素などの糖転移� ��応を触媒する酵素を作用させて、配糖体を� ��成する方法であれば特に限定されず、原料� ��合物の水溶液に、酵素を含有する緩衝液ま� ��は水溶液を混合することで反応を開始する� ��反応は、通常、水中、或いは水と水混和性� ��有機溶媒との混合系、さらには、水に実質� ��に不溶性ないし難溶解性の有機溶媒と水と� ��液体二相系で行うことができるが、一般的� ��は水性系で行うことが好ましい。また、出� ��原料は、必要に応じて、適当な有機溶媒、� ��えばエタノール、メタノール、ジオキサン� ��ジメチルスルホキシド等に溶解した後に、� ��溶解液を水性溶液にして用いることもでき� ��。また、反応条件は、配糖化生成物の生成� ��損なわない範囲で選択できる。基質である� ��供与体並びに糖受容体の濃度は、好ましく� ��0.001~20%、より好ましくは0.01~10%である。さ� �に、反応液のpHは、好ましくは5~13、より好� �しくは6~10であり、反応温度は好ましくは10~5 0℃、より好ましくは20~40℃である。pHを安定� ��せるために緩衝液(例えば、リン酸塩緩衝液 、クエン酸塩緩衝液、Tris緩衝液など)を使用� ��ることもできる。さらに、pHを調節するた� �に、酸、塩基を使用して調節することもで� �る。また、反応時間は、1分間~200時間、好ま しくは20分間~150時間であるが、それぞれの酵 素濃度や使用糖供与体並びに糖受容体により 適宜決められるべきである。

 酵素産生生物(例えば、形質転換体など)� �使用する場合、反応をより効率的に進行さ� �るために、グルコースなどの糖類、酢酸な� �の有機酸、エタノール、グリセロールなど� �エネルギー物質を添加することができる。� �れらは、各々単独で用いてもよく、それら� �混合物の形態で用いてもよい。添加量は、� �質に対して好ましくは100分の1~10倍量である� ��さらに、グルコースなどの糖類、酢酸など� ��有機酸、グリセロールなどのエネルギー物� ��、補酵素、補酵素再生酵素および補酵素再� ��酵素の基質をそれぞれ組み合わせて用いて� ��よい。これらは、本来、菌体中に蓄積され� ��いるが、必要に応じてこれら物質を添加す� ��ことにより、反応速度、収率等を上昇させ� ��ことができる場合があり、適宜選択され得� ��。必要に応じて反応系内には、基質、当該� ��素、酵素産生微生物の菌体、その培養物、� ��れらの処理物並びに抽出物から成る群から� ��ばれたもの、さらにはその他のものを、逐� ��添加したり、連続的に添加することも可能� ��ある。生成物を連続的に取り出しながら反� ��を行うことにより、反応速度を高めること� ��どもできる。

 反応はバッチ式又は連続方式で行いうる� ��、膜リアクターなども使用できる。反応に� ��って生成した配糖体は、慣用の分離精製手� ��によって単離精製できる。例えば、反応液� ��ら直接または、菌体を使用した場合には菌� ��を分離した後、膜分離、有機溶媒(例えば、 トルエン、クロロホルムなど)による抽出、� �縮、減圧濃縮、蒸溜、分留、晶析、再結晶� �高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、薄層ク� �マトグラフィー(TLC)、カラムクロマトグラフ ィーなどの通常の精製方法に供することがで きる。例えば、反応終了後、酢酸ブチル、酢 酸エチル、トルエン、クロロホルム等の有機 溶媒で反応液から生成物を抽出し、溶媒を留 去することにより粗生成物を得ることができ る。該粗生成物は、それをそのまま使用して もよいが、必要によりシリカゲルカラムクロ マトグラフィー等の手段により精製した後、 さらにセルロース誘導体等の担体(光学活性� �体を含む)を使用した高速液体クロマトグラ� ��ィー等の手段により精製してもよい。酵素� ��反応溶液と接触させることにより、目的と� ��る酵素反応を行わせることができるが、酵� ��と反応溶液の接触形態はこれらの具体例に� ��定されるものではない。反応溶液は、基質� ��酵素反応に必要なものを、酵素活性の発現� ��望ましい環境を与える適当な溶媒に溶解し� ��ものである。

 本配糖化反応で、酵素と、糖供与体及び糖� ��容体を含有する基質溶液とは、回分法、あ� ��いは連続法で接触せしめてその配糖化反応� ��せることができ、工業的に実施するに適し� ��方法を適宜選択して行うことができる。該� ��受容体と該糖供与体とを併せた基質濃度は� ��約 1~50 w/v% が適している。より好適な態� �では、オキサゾリン誘導体(3)の濃度が、約  5~20 w/v% 、そして糖受容体の濃度が、約 0.00 1~0.4 mol/L である。基質溶液に、酵素を安定� ��するのに有用な金属塩などを添加しておく� ��ともできる。
 上記配糖化反応条件としては、酵素が安定� ��、しかも充分に作用し得る条件、例えば pH  約 3~10、より好ましくは pH 約 5~10、温度� �� 20 ~80℃、より好ましくは約 30 ~70℃の範� ��で選ばれる。キチナーゼA1及びその変異型� �チナーゼ、Endo A 、Endo Mなどでは、その酵� ��が安定であるpHを採用でき、例えば pH 約4~ 7、望ましくはpH 5.5~6であり、温度は、例え� �50℃以下の温度、好ましくは37℃付近で配糖� ��を行えば良い。

 本発明の好ましい実施態様に従うと、バ� ��オリアクターは、酵素担持された担体が反� ��させるべき流体と接触できるようにする装� ��を有しているものである。有利には、該装� ��は、撹拌型リアクター、バスケット型リア� ��ター、流動床式リアクター、バックベッド� ��リアクター、フィルター式リアクターなど� ��ら選ばれたものである。ごく一般的な固定� ��酵素の使用形式としては、充填カラムによ� ��連続式のものでも、あるいは固定化酵素の� ��収が容易なバッチ式でもよい。バイオリア� ��ターは、同様にして、1本のカラムあるいは 有利には複数のカラムを有する装置で構成さ れていてよい。処理されるべき基質は、好ま しくは、カラムの中を重力の働く方向に流れ るものである。バイオリアクターの別の有利 な実施態様としては、該装置に加えて、処理 すべき基質の入った槽、バイオリアクターか らの流出物を後処理するための後処理槽、及 び生成物の貯蔵用槽を含むものである。

 本発明の実施態様では、得られた配糖化さ� ��た配糖体生成物を液体クロマトグラフィー� ��より所望のグルコシド含有配糖体に分離及� ��/又は精製することを特徴とする方法も構築 できる。また、液体クロマトグラフィーでは 、ODS 逆相カラムを使用して、効率良く且つ� ��業的に有利に所望製品を取得することがで� ��る。
 糖受容体としては、当該分野で知られたも� ��が使用でき、適宜、適切なものを選択して� ��用できる。該糖受容体としては、当該物質� ��起源、由来によって特に限定されることな� ��、天然から得られるもの、遺伝子工学的に� ��物細胞、植物細胞、微生物などにより合成� ��たもの、酵素的に製造されたもの、醗酵に� ��り製造されたもの、あるいは人工的に化学� ��成されたものなどが包含されてよい。それ� ��は、タンパク質、ペプチド、脂質、糖又は� ��質、有機化合物、天然又は合成高分子化合� ��など、さらには、糖タンパク質、糖ペプチ� ��、糖脂質などを含めたものが挙げられる。� ��受容体は、単独の物質であっても、混合物� ��あってもよい。
 得られた配糖体、すなわち、糖鎖を付加し� ��化合物やオリゴ糖は、例えば、生理活性オ� ��ゴ糖、ドラックデリバリーシステムのキャ� ��ア、界面活性剤、糖鎖医薬、糖ペプチド、� ��タンパク質、糖鎖高分子など、様々な用途� ��用いられて有用である。生成物配糖体は、� ��胞認識、免疫、細胞分化、細胞移動、受精� ��成熟、組織形態形成、炎症、創傷治癒、ガ� ��転移、腫瘍化などの研究に有用である。
 本発明の技術を使用して、高度にregioselectiv e and/or stereoselective配糖化を行うことができ� ��また、長い糖鎖にも適用できることから、� ��糖化のバライエティを高めることが可能で� ��り、新たなオリゴ糖鎖及び/又はポリ糖鎖(ol igosaccharides and/or polysaccharides)をペプチド、� �ンパク質、脂質、糖質などに導入すること� �可能にする。本発明技術で、構造の明らか� �されているオリゴ糖鎖などを使用して糖供� �体である糖オキサゾリン誘導体及び配糖体� �合成できるので、医薬、農薬、化粧品など� �様々な分野での応用に利点がある。本発明� �、糖鎖マイクロアレイ(糖鎖チップ)の作製技 術が提供できる。
 以下に実施例を掲げ、本発明を具体的に説� ��するが、この実施例は単に本発明の説明の� ��め、その具体的な態様の参考のために提供� ��れているものである。これらの例示は本発� ��の特定の具体的な態様を説明するためのも� ��であるが、本願で開示する発明の範囲を限� ��したり、あるいは制限することを表すもの� ��はない。本発明では、本明細書の思想に基� ��く様々な実施形態が可能であることは理解� ��れるべきである。
 全ての実施例は、他に詳細に記載するもの� ��外は、標準的な技術を用いて実施したもの� ��又は実施することのできるものであり、こ� ��は当業者にとり周知で慣用的なものである� ��