本発明においては、B細胞におけるCD22機能� ��抑制(又は、阻害)することによって、免疫� �答の促進作用が見られる。ここで、「B細胞� ��とは、通常、IgM及びIgD陽性のナイーブB細胞 (成熟B細胞)を意味するが、必ずしもこのタイ プに限定されず、一般的に、T細胞依存性抗� �に反応して活性化され抗体産生細胞に分化� �るような能力を潜在的に有するB細胞を含む� ��のである。更に、本発明方法において、B細 胞等の各種細胞及びCD22(遺伝子)は、マウス及 びヒト等の哺乳類を含む当業者に公知の任意 の動物細胞由来のものが含まれる。

 本発明方法における免疫応答の促進作用に� ��、当業者に公知の任意の反応、例えば、免� ��応答初期におけるB細胞の増殖及び生存の亢 進、特に、抗原刺激によるB細胞の増殖、分� �及び/又は生存の亢進、例えば、免疫応答初� ��における、IgG1 ⁺ B細胞、IgM ⁺ B細胞及び胚中心B細胞数のCD22 ^+/+ B細胞に比べて約2~3倍の増加、例えば、IgG1 ⁺ 陽性細胞へのB細胞のクラススイッチ及び/又� ��、例えば、抗体産生細胞及び胚中心B細胞へ の分化の早期化、脾臓などの免疫器官におけ るIgG及び/又はIgM等の抗体産生細胞の増大数� �及び、例えば、産生抗体量の血清中での増� �(CD22 ^+/+ B細胞に比べて約3~5倍)、及び/又はそれらの早 期化、並びに、B細胞受容体シグナル伝達の� �害等の当業者に公知の多様な態様が含まれ� �。

 ここで、「免疫応答初期」とは、免疫原� ��なった抗原の種類、免疫応答の促進作用に� ��ける態様の相違等によって1~2日程度は変動� ��るが、通常、免疫(抗原による感作・刺激)� �の数日間、例えば、免疫後3~5日を意味する� �

 本発明の方法において、B細胞におけるCD2 2機能の抑制は、当業者に公知の様々な遺伝� �工学(ゲノム工学)的方法・手段で実施するこ とが出来る。免疫応答が有意に促進される限 り、CD22機能が完全に抑制又は阻害されてい� �必要はない。

 B細胞におけるCD22機能の抑制は、例えば� �CD22遺伝子の欠損又は変異による機能障害等� ��CD22遺伝子自体に対する作用の結果によるも のであり得る。このような遺伝子自体に対す る作用は、例えば、当業者に公知の遺伝子タ ーゲッティング技術によって、CD22遺伝子を� �ックアウトさせたり、各種の遺伝子変異導� �法によって該遺伝子に突然変異等を導入さ� �ることにより、所定の機能を有していないCD 22変異体が発現されるようにすることによっ� ��達成することが可能である。

或いは、CD22遺伝子の発現を抑制すること� �よってCD22機能の抑制をすることが可能であ� ��。このような発現の抑制は、転写及び翻訳� ��の任意の各段階で実施することが可能であ� ��。

 例えば、転写レベルでの抑制にはCD22遺伝 子(DNA又はmRNA)を標的とするsiRNA等のRNA干渉(RNA i)を誘導する核酸配列(該遺伝子の部分塩基配 列に特異的な配列を有する一本鎖RNA又は二本 鎖RNA)による遺伝子ノックダウン、アンチセ� �スRNA、又は各種のリボザイム等を用いる方� �を挙げることが出来る。

RNA干渉を誘導する核酸は、当業者であれば 、公知の各種のデータベースに登録されてい るCD22遺伝子の塩基配列、例えば、マウスCD22� ��伝子に関してはGenBank/EMBL/DDBJ のaccession numb er(ACCESSION No.L16928)に基き、適宜設計して調製 することが出来る。例えば、CD22遺伝子の塩� �配列又はその一部の連続する塩基配列を含� �15~30個、特に、21~23個の塩基から成るオリゴ� ��クレオチド及びその相補的オリゴヌクレオ� ��ドから成る二本鎖RNAである。尚、かかるsiRN Aには、細胞内で上記核酸配列がDicer により� ��化されて生成されるものも含まれる。

又、転写レベルで抑制するには、CD22遺伝� �の発現調節領域を操作することによって転� �反応が正常に行われないようにすることも� �能である。

 更に、当業者に公知の各種形質転換方法� ��用いて、CD22の機能を任意の段階で阻害する 物質を発現させることで、CD22機能を抑制す� �ことも可能である。

 B細胞におけるCD22機能の抑制は、インビ� �ロ又はインビボで生起させることが可能で� �る。インビボの場合には、例えば、CD22遺伝� ��がノックアウトされたマウス等のノックア� ��ト動物を作製することにより達成される。

 従って、本発明は又、CD22機能が抑制された B細胞(集団)にも係る。このような細胞は、例 えば、上記のCD22遺伝子がノックアウトされ� �マウス等の哺乳動物であるノックアウト動� �、或いは、遺伝的にこのようなノックアウ� �動物に由来するマウス等の哺乳動物(例えば� ��本明細書の実施例に記載されているQMマウ� �のような、特定の抗原(ハプテン)に反応する マウス等の他の動物との掛け合わせで作製さ れたもの)の脾細胞からCD23+濾胞B細胞を当業� �に公知のソーティング技術を用いて単離す� �ことによって調製することが可能である。� �の一例として、実施例1で調製されたCD22 ^-/- QMマウスの脾細胞(IgH ^a ,Ly5.2)を挙げることが出来る。或いは、上記� �各種遺伝子工学的技術を適用することによ� �て、CD22機能が抑制されたB細胞(集団)を容易� ��作製することも可能である。更に、ES細胞� �の各種の幹細胞においてCD22遺伝子をノック� ��ウトし、これをB細胞に分化させることによ って、本発明のCD22機能が抑制されたB細胞を� ��ることも可能である。

 このようなCD22機能が抑制されたB細胞は� �本発明方法に使用される他に、免疫応答反� �を解析する手段、又は、免疫応答反応に関� �する物質等のスクリーニング方法等で有効� �使用することができる。

本発明は更に、上記のいずれかの方法、又 はCD22機能が抑制されているB細胞を利用する� ��体の製造方法にも係る。このような抗体は� ��当業者に公知の任意の方法・手段を用いる� ��とによって任意の抗原に対して作製するこ� ��が可能であり、一例として、T細胞依存性抗 原を挙げることが出来る。

 既に記載したように、B細胞におけるCD22� �能を抑制することによって、免疫応答が促� �されることが判明したので、この作用を利� �することによって、B細胞におけるCD22機能の 変化に基づき、免疫応答を促進させる物質を スクリーニングすることが可能となる。よっ て、本発明はこのようなスクリーニング方法 及び該方法に使用するスクリーニングキット にも係る。

本発明のスクリーニング方法の一例として、 例えば、以下の工程:
 (a) 被検物質とB細胞を接触させる工程、
 (b)該細胞におけるCD22機能を検出する工程、 及び
 (c)該機能を抑制させる物質を選択する工程� ��を含む方法を挙げることが出来る。

 該スクリーニング方法において、CD22機能 の変化(抑制)は、当業者に公知の任意の方法� ��、転写及び翻訳等の任意の各段階におけるC D22遺伝子発現の抑制の程度を測定することに よって、直接に検出することが可能である。

 例えば、本発明のスクリーニング方法に� ��いて、本発明の蛋白質の発現量は、それを� ��ードするmRNAの量により測定することも可能 である。このようなmRNAの測定は、本明細書� �の実施例に記載された該蛋白質をコードす� �遺伝子(DNA)の塩基配列に基づき適宜設計した プライマーを使用したRT-PCR法等の各種定量的 PCR法、並びにマイクロアレイ(DNAチップ)法等� ��当業者に公知の方法で行うことが出来る。� ��に、既に記載したような、B細胞におけるCD2 2機能の抑制によって得られる免疫応答の促� �作用に含まれる様々な態様を検出すること� �よって、間接的にCD22機能の変化・抑制を検� ��することが可能である。

本発明のスクリーニングにおいて使用する 、B細胞等の各種細胞及びCD22(遺伝子)は、マ� �ス及びヒト等の哺乳類を含む当業者に公知� �任意の動物細胞由来のものが含まれる。又� �該スクリーニングはインビトロ又はインビ� �で行うことができる。例えば、インビトロ� �おいては、被検物質の存在下にB細胞を培養� ��ることによって、被検物質とB細胞を接触さ せることができる。インビボでは、例えば、 被検物質を適当な方法で実験動物に投与する ことで被検物質とB細胞を体内で接触させる� �とができる。

 本発明のスクリーニング方法に使用され� ��キットは、B細胞におけるCD22機能の具体的� �検出・測定原理等に応じて、適当な構成を� �ることが出来る。該キットは、例えば、本� �明の蛋白質を特異的に認識する抗体から成� �試薬、又は、上記のmRNAの測定の為の、上記� ��伝子の増幅用プライマー及びハイブリダイ� ��ーション用のプローブを含むことが出来る� ��これらは、その用途に応じて、適当な長さ� ��例えば、10~100個の連続した塩基配列から成� ��。

 以上のキットに構成要素として含まれる� ��各種のプライマー、プローブ、又は、抗体� ��、当業者に公知の任意の放射性物質、蛍光� ��質、色素等の適当な標識物質によって標識� ��れていても良い。更に、上記キットには、� ��の構成・使用目的などに応じて、当業者に� ��知の他の要素又は成分、例えば、各種試薬� ��酵素、緩衝液、反応プレート(容器)等が含� �れる。 

 尚、既に記載したように、本明細書にお� ��て、B細胞等の各種細胞及びCD22(遺伝子)は、 マウス及びヒト等の哺乳類を含む当業者に公 知の任意の動物細胞由来のものが含まれる。 これら遺伝子に関する情報(塩基配列情報等)� ��当業者に公知であり、各種の公的データベ� ��スから容易に入手することが可能である。� ��えば、ヒトのCD22遺伝子については、公的デ ータベース(DDBJ/EMBL/GenBank; ACCESSION No.X59350参� ��)に配列情報が記載されている。

 更に、本発明における「CD22」をコードす るDNA(ゲノムDNA及びcDNA)には、上記の具体的な 塩基配列からなるDNAの他に、上記DNA(又は、� �れらに対応するcDNA)と相補的な塩基配列から なるDNAとストリンジェントな条件下でハイブ リダイズするDNA、及び上記DNAと約80%以上、好 ましくは約95%以上である配列相同性を示す塩 基配列からなるDNAであって、実質的にCD22の� �なくとも一つの作用を有する蛋白質をコー� �するDNAが含まれる。

 ここで、ハイブリダイゼーションは、例� ��ば、Molecular cloninng third.ed.(Cold Spring Harbor� �Lab.Press,2001)、又は、カレント・プロトコー� �ズ・イン・モレキュラー・バイオロジー(Curr ent protocols in molecular biology(edited by Frederick  M. Ausubel et al.,1987)に記載の方法等、当業� �で公知の方法あるいはそれに準じる方法に� �って行うことができる。また、市販のライ� �ラリーを使用する場合、添付の使用説明書� �記載の方法に従って行うことができる。

 本明細書において、「ストリンジェント� ��条件下」とは、例えば、温度60℃~68℃にお� �て、ナトリウム濃度15~900mM、好ましくは15~600 mM、さらに好ましくは15~150mM、pH6~8であるよう な条件を挙げることができる。

 従って、上記の配列番号で表される塩基� ��列を含むDNAと相補的な塩基配列からなるDNA� ��ストリンジェントな条件下でハイブリダイ� ��できるDNAとしては、例えば、該DNAの全塩基� ��列との相同性の程度が、全体の平均で、約8 0%以上、好ましくは約95%以上、更に好ましく� ��99%以上である塩基配列を含有するDNA等を挙� ��ることができる。

 このようなDNAは、例えば、非特許文献1及 び本明細書に開示の塩基配列情報等に基づき 調製した適当なプライマーを用いてPCR等によ り取得することが可能である。また、本発明 のDNAは当業者に公知の任意の方法によって化 学合成することも可能である。

 又、本発明の「CD22」は、上記の配列番号 で表されるアミノ酸配列からなる蛋白質に加 えて、このようなアミノ酸配列において、1� �若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、若� �くは付加されたアミノ酸配列(上記アミノ酸� ��列と配列相同性を有するアミノ酸配列)から なり、実質的にCD22の少なくとも一つの作用� �有する蛋白質も含まれる。

 2つの塩基配列又はアミノ酸配列における 配列相同性を決定するために、配列は比較に 最適な状態に前処理される。例えば、一方の 配列にギャップを入れることにより、他方の 配列とのアラインメントの最適化を行う。そ の後、各部位におけるアミノ酸残基又は塩基 が比較される。第一の配列におけるある部位 に、第二の配列の相当する部位と同じアミノ 酸残基又は塩基が存在する場合、それらの配 列は、その部位において同一である。2つの� �列における配列相同性は、配列間での同一� �ある部位数の全部位(全アミノ酸又は全塩基) 数に対する百分率で示される。

 上記の原理に従い、2つの塩基配列又はア ミノ酸配列における配列相同性は、例えば、 Karlin及びAltschulのアルゴリズム(Proc.Natl.Acad.Sci .USA 87:2264-2268、1990及びProc.Natl.Acad.Sci.USA 90:58 73-5877、1993)により決定される。このようなア ルゴリズムを用いたBLASTプログラムやFASTAプ� �グラムは、主に与えられた配列に対し、高� �配列相同性を示す配列をデータベース中か� �検索するために用いられる。これらは、例� �ば、米国National Center for Biotechnology Informati onのインターネット上のウェブサイトにおい� ��利用可能である。

 上記のような塩基配列の配列相同性又は� ��ードするアミノ酸配列の配列相同性を示す� ��うなDNAは、上記のようにハイブリダイゼー� ��ョンを指標に得ることもでき、ゲノム塩基� ��列解析等によって得られた機能未知のDNA群� ��は公共データベースの中から、当業者が通� ��用いている方法により、例えば、前述のBLAS Tソフトウェアを用いた検索により発見する� �とも可能である。

 以下、本発明を実施例によって詳細に説� ��するが、本発明の技術的範囲は以下の実施� ��の記載によって何ら限定して解釈されるも� ��ではない。又、特に記載のない場合には、� ��下の実施例は、例えば、Sambrook and Maniatis,� �in Molecular Cloning-A Laboratory Manual, Cold Spring  Harbor Laboratory Press, New York, 1989; Ausubel, F . M. et al., Current Protocols in Molecular Biology,  John Wiley & Sons, New York, N.Y, 1995等に記 載されている、当業者に公知の標準的な遺伝 子工学及び分子生物学的技術に従い、実施す ることが出来る。又、本明細書中に引用され た文献の記載内容は本明細書の開示、及び、 内容の一部を構成するものである。