РАСТИТЕЛЬНОГО И ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Изобретение относится к исследованию или анализу материалов, а именно к получению образцов для исследования, в частности микрочастиц и микроследов с объекта-носителя растительного и животного происхождения, и может использоваться в палинологии, биологии, экологии, медицина для спорово- пыльцевого анализа, криминалистической, товароведческой и экологической экспертиз.

Из патента US 7250138 известен способ для обнаружения присутствия субмикронных частиц в образце, взятом из окружающей среды. Способ включает в себя отбор пробы из окружающей среды, очистка и концентрирование субмикронных частиц в образце на основании размера частиц. Очищенные и концентрированные частицы детектируют с помощью устройства, которое включает в себя узел электрораспыления, имеющий капилляр, анализатор дифференциальной подвижности, который принимает выходной сигнал из капилляра, и устройство конденсации частиц для подсчета числа частиц, которые проходят через анализатор дифференциальной подвижности.

Однако данный способ предназначен для улавливания частиц размером менее 1 мкм из воздуха, что много меньше размера органических пылевых частиц, в том числе и пыльцевых зерен, диапазон размеров которых равен 10- 100 мкм. В способе применено устройство - узел электрораспыления. Пыльца высших растений характеризуется наличием электрического заряда, но в одном цветке содержится разное количество пыльцевых зёрен, заряженных как положительно, так и отрицательно. Величина заряда пыльцы крайне мала и находится в пределах 10 ^"16 - 0 ^"17 Кл. Данный способ также не применим для сбора микрочастиц из глубоких пор, трещин поверхности макрообъекта.

Известен также способ измельчения, экстракции и обнаружения аналитов в твёрдых биологических образцах из международной заявки WO 2005063962. Данное изобретение относится к способам, реагентам, наборам, приборам и автоматизированным системам для измельчения, извлечения и обнаружения аналитов наркотиков, пестицидов, гербицидов и стероидов в твёрдых биологических образцах, происходящих, например, от человека, домашних животных, растений, амфибий, насекомых и рептилий.

Однако данный способ отличается высокими экономическими затратами на электричество, воду и утилизацию токсичных отходов, где, например, в качестве растворителя использована соляная кислота. При экстракции и обнаружении аналитов используют автоматизированные хроматографические системы, дорогостоящие иностранные наборы КИТ (KitLab) и аналитические стандарты высокой чистоты. Кроме того, применение измельчения на этапе подготовки препаратов приводит к полному разрушению микрообъектов, в том числе, пыльцевых зерен и спор без возможности их регистрации и идентификации по морфометрическим признакам.

Известно также техническое решение из патента RU 2273853 «Способ бактериоскопической экспрессной идентификации микрофлоры содержимого толстой и прямой кишки». Данное изобретение относится к области медицины - колопроктологии, гастроэнтерологии, клинической микробиологии. Способ включает отбор пробы, которую разводят дистиллированной водой, усредненные суспензии субстрата отстаивают, добавляют 95,5° этиловый спирт, центрифугируют в два этапа, из осадка делают монослойный мазок, который высушивают при комнатной температуре, фиксируют 95,5° этиловым спиртом, затем окрашивают мазок по Граму и определяют морфологию микроорганизмов. Изобретение обеспечивает быструю идентификацию большого числа видов микробных популяций при одновременном определении соотношений грам положительных и грамотрицательных форм.

Однако средний размер бактерий составляет 0,5-5 мкм, что много меньше размера пыльцевых зерен. Поэтому данный метод не применим для макрообъектов растительного и животного происхождения, т.к. не позволяет отделить крупный «мусор» - пыльцевые зерна и споры - от бактериальных клеток в полном объеме. Кроме того, в норме пыльцевых зерен и спор в экскрементах не должно быть, т.к. это свидетельствует о нарушении перистальтики и слишком быстрой эвакуации пищевых масс из кишечника.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому способу является способ изъятия микрочастиц и микроследов с объектов-носителей вакуумным методом (например, пылесос, специальные насадки-фильтры); изъятие микрочастиц с помощью ультразвука в инертных средах; изъятие микрочастиц с помощью ультразвуковой кавитации в среде фреона-1 13. Способы применяются в медицине, криминалистике, товароведение, палиноморфологических и других исследованиях (Гладкова А.Н., Гричук В. П., Заклинская Е.Д. и др. Пыльцевой анализ, 1950; ГОСТ 31769-2012 Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен; Каревская И.А. Споровово-пыльцевой анализ при палеогеографических и геоморфологических исследованиях, 1999; Додонкин Ю.В., Жебелева И.А., Криштафович В. И. Таможенная экспертиза товаров, 2004; ГОСТ 28887-90. Пыльца цветочная (обножка). Технические условия; ГОСТ Р 51074-2003. Продукты пищевые; и др.).

Способ отбора пробы микрочастиц, т.е. пыльцевых зёрен и спор из жидких субстанций, например, мёда (ГОСТ 28887-90, ГОСТ 31769-2012) основан на добавление к пробе дистиллированной воды и центрифугирование в два этапа. Осадок окрашивают 0,1 %-ным спиртовым раствором фуксина. Затем препарат фиксируют в глицерин-желатине и по морфологии пыльцевых зерен проводят определение. Данный способ оперативен и обеспечивает идентификацию большого числа видов пыльцевых зёрен и спор из жидких сред, но не применим для снятия микрообъектов с поверхности и неровностей объекта-носителя. Вакуумный метод и ультразвуковая кавитация как способы изъятия микрообъектов, наряду с широким применением и проверкой временем, также имеют ряд существенных ограничений. Во-первых, проблематично по медицинским аспектам (имеются ограничения) - шумовое загрязнение и дополнительное запыление, соблюдение жестких требований по санитарным нормативам, в том числе по фреону. Во-вторых, экономические затраты на ресурсы (электричество) и время проведения рутинных работ, а также утилизацию токсичных отходов, оказывающих значительное влияние на экологию рабочего места. В-третьих, данный способ не обеспечивает достаточный набор (или диапазон) микрочастиц, т.к. многие из них разрушаются или теряются при извлечении, измельчение и прочих процедурах. В-четвертых, при реализации данного способа трудно, а иногда невозможно изъять микрочастицы с объекта- носителя растительного и животного происхождения для последующей регистрации/идентификации.

Техническая проблема, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в недостаточном качестве проб, содержащих макро- и микрообъекты, т.е. чистота проб, в которых много примесей иных микрочастиц, кроме пыльцевых зёрен и спор, разрушение микрообъектов до неидентифицируемых остатков в процессе изъятия, разделения и подготовке (щелочной гидролиз) к регистрации.

Техническим результатом заявляемого изобретения является улучшение 5 качества проб на подготовительных этапах и получение максимально полного набора микрочастиц и микроследов за счёт выбора растворителей и режимов смыва, что позволяет ускорить рутинные работы при изъятии микрочастиц и микроследов растительного и животного происхождения с объекта-носителя, повысить эффективность результатов идентификационного анализа в целом.

ю Указанный технический результат достигается за счёт того, что в способе снятия микрочастиц и микроследов с объекта растительного и животного происхождения с поверхности объекта-носителя осуществляют смыв материала физико-механическим способом при температуре 20-25 °С в растворе одноосновной карбоновой кислоты с добавлением поверхностно-активного

15 вещества с последующей седиментацией, после чего проводят щелочной гидролиз осадка с использованием смеси нашатырного спирта и щёлочи с последующим отмыванием, осушением и окрашиванием микрочастиц и микроследов.

В способе могут проводить дополнительный смыв материала с глубоких 20 слоев поверхности объекта-носителя при ультразвуковом воздействии при температуре 35-45 °С в растворе одноосновной карбоновой кислоты с добавлением поверхностно-активного вещества с дальнейшей седиментацией, после чего проводят щелочной гидролиз осадка с использованием смеси нашатырного спирта и щёлочи с последующим отмыванием, осушением и 25 окрашиванием микрочастиц и микроследов.

Достижение указанного технического результата обеспечивается благодаря использованию неразрушающего принципа снятия с объекта-носителя микрочастиц и микроследов растительного и животного происхождения. В способе осуществляют смыв материала при комнатной температуре (20-25 °С) в растворе зо одноосновной карбоновой кислоты с добавлением поверхностно-активного вещества и последующей седиментацией. После чего проводят мягкий щелочной гидролиз (смесь нашатырного спирта и щёлочи) при кипячении с последующим отмыванием, осушением и окрашиванием микрочастиц и микроследов. Предлагаемый способ является доступным, эргономичным и экологически безопасным.

Реализация изобретения проиллюстрирована с помощью блок-схем на фиг. 1-2, на которых показаны:

5 Фиг. 1 - алгоритм реализации способа основным смывом;

Фиг. 2 - алгоритм реализации способа с дополнительным смывом. Способ реализуют следующим образом.

Первый этап (смыв А или основной) предусматривает снятие микрочастиц и микроследов с поверхности объекта-носителя физико-механическим способом на ю орбитальной качалке (шейкере) при температуре 20-25 °С раствором одноосновной карбоновой (уксусной) кислотой с добавлением поверхностно- активного вещества, например, Полисорбата 20 (жидкое мыло, TWEEN_20). Седиментацию водных растворов проводят с добавлением хлорида натрия при температуре 20-25 °С на лабораторной центрифуге.

15 Второй этап (смыв Б или дополнительный) предусматривает снятие микрочастиц и микроследов с поверхности объекта-носителя физико- механическим способом в ультразвуковой ванне при температуре 35-45 °С раствором одноосновной карбоновой (уксусной) кислотой с добавлением Полисорбата 20 (жидкое мыло, TWEEN_20). Далее проводят седиментацию

20 водных растворов на лабораторной центрифуге при комнатной температуре.

Щелочной гидролиз получаемых осадков, содержащих неразрушенные микрообъекты, проводят в инертной посуде на кипящей водяной бане с добавлением в равных объемах нашатырного спирта (NhUOH) и щелочи (NaOH), и с последующим отмыванием и осушением осадка путем центрифугирования.

25 Далее полученные осадки с микрообъектами окрашивают спиртовым раствором фуксина и фиксируют препарат в глицерин-содержащую среду для процедуры микроскопирования с использованием световой микроскопии.

В зависимости от типа поверхности макрообъекта возможен дополнительный (самостоятельный) смыв микрообъектов с глубоких слоев зо поверхности объекта-носителя. Принято условное деление: тип 1 - неровная, шероховатая, опушенная, жесткая, грубая, шершавая, восковое /парафиновое покрытие; тип 2 - ровная, гладкая, шелковистая (таблица 1 ). В таблице 1 использованы следующие сокращения: Ш - шейкер, УЗВ - ультразвуковая ванна, БВ - водяная баня, ЦФ1 - центрифуга, ЦФ2 - микроцентрифуга-вортекс, ОН - объект-носитель.

Понимается, что осадок - это компонент раствора, содержащий микрочастицы и микроследы с объекта-носителя биологического происхождения.

Таблица 1. Схема изъятия микрочастиц и микроследов с объекта-носителя биологического происхождения

N2 Наимено При- Вре- Част Темпера Тип 1 Тип 2

Ns вание бор мя, ота, -турный (поверхность (поверхность этапа ин. об/м режим, неровная, ровная, ин °С шероховатая, гладкая) опушенная,

восковое

/парафиновое

покрытие)

1. Смыв А Ш 30 1000 20-25 ОН + 20 % ОН + 20 % уксус уксус + ПАВ + ПАВ + хлорид натрия

2. ЦФ1 15 3000 20-25 раствор+ раствор хлорид натрия

3. Смыв Б ш 10 1000 20-25 ОН + 10% уксус

+ ПАВ

4. УЗВ 10 мах 35-45 + хлорид

5. ЦФ1 15 3000 20-25 натрия

об.

6. Щелочно ЦФ1 10 5000 20-25 раствор —

7. й БВ 10 95-99 Осадок + Осадок + гидролиз нашатырный нашатырный спирт спирт

8. ЦФ1 10 5000 20-25 + щелочь + щелочь

9. Отмыван ЦФ1 10 3000 20-25 Осадок + вода Осадок + вода 10. ие ЦФ1 10 3000 20-25 Осадок + вода Осадок + осадка вода

1 1 . Окрашив ЦФ2 1 1000 20-25 Осадок + Осадок + ание глицерин + глицерин + краситель краситель

Примечание:

Для снятия микрочастиц Объект-носитель помещается в контейнер с плотной крышкой из инертного материала. Вся посуда используется также из инертного материала.

На этапе «Смыв А» на один объем объекта-носителя равный 1 см ³ добавляют 1 см ³ 20%-ого раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислотой, т.е. на объект-носитель со средним объемом 50 см ³ , например, корнеплод, ягода и др. добавляют 50 мл раствора.

На этапе «Смыв Б» на один объём объекта-носителя равный 1 см ³ добавляют 2 см ³ 10%-ого раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислотой.

Примеры использования данного способа.

Пример 1. Картонная коробка из аптеки - Ольха шишки (плоды), 50г.

Подготовка к испытанию.

Смыв А. Из упаковки брали навеску плодов ольхи массой 50 г и помещали в контейнер с плотной крышкой. Затем добавляли 0,5 мл Полисорбата 20 (TWEEN_20, жидкое мыло), заливали 50 мл 20%-ым раствором одноосновной карбоновой (уксусной) кислотой и помещали на орбитальную качалку (шейкер) при температуре 20-25 °С на 30 мин. с частотой 1000 об/мин. На один объём объекта-носителя добавляли один объём раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислоты, т.е. на 50 г добавляли 50 мл раствора. Раствор отстаивали 10 мин и надосадочную жидкость сливали в центрифужные пробирки (далее - пробирки) без плодов ольхи. К раствору в пробирки добавляли 5 г хлорида натрия и центрифугировали, т.е. осуществляли седиментацию, в течение 15 мин при частоте вращения ротора 3000 об. /мин. на лабораторной центрифуге. После центрифугирования пробирки осторожно извлекали и сливали надосадочную жидкость.

К осадку в пробирке добавляли 10 мл смеси: в равных объёмах 10%-ого нашатырного спирта (NH4OH) и 10%-й щёлочи (NaOH) и в течение 10 мин на водяной бане при 95-99 °С проводили щелочной гидролиз получаемых осадков, содержащих неразрушенные микрообъекты. Далее пробирки центрифугировали, т.е. осуществляли седиментацию, в течение 10 мин при частоте вращения ротора 5000 об./мин на лабораторной центрифуге, сливали надосадочную жидкость (щёлочь) и отмывали водой, добавляя в пробирку по 10 мл дистиллированной воды, перемешивая стеклянной палочкой, и проводили центрифугирование в течение 10 мин при частоте вращения ротора 5000 об./мин. Повторяли процедуру отмывки осадка водой. Затем сливали надосадочную жидкость (супернатант) и к осадку добавляли 1 мл дистиллированной воды, перемешивали на микроцентрифуге-вортекс 10 с и переносили в пробирку эппендорф объемом 2 мл. Суспензию центрифугировали на микроцентрифуге-вортекс в течение 0 мин при ускорении 1000 д. Из-под надосадочной жидкости брали аккуратно автоматизированным дозатором 0,03 мл осадочной суспензии, переносили в пробирку эппендорф объемом 0,5 мл, добавляли 2-3 капли 0,1 %-ного спиртового раствора фуксина, т.е. 10 мг основного фуксина на 60 мл 96% спирта, для окрашивания и встряхивали на вортексе.

Обезжиренное предметное стекло помещали на нагревательный столик и наносили круг из воска. В центр помещали одну каплю суспензии с микрообъектами и накрывали покровным стеклом. Готовый препарат микроскопировали с использованием профессионального биологического светового микроскопа.

Смыв Б. После получения смыва А к навескам NsN°1-3 - в контейнеры с шишками ольхи, доливали 100 мл 10%-ого раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислоты и добавляли 0,5 мл Полисорбата 20 (TWEEN_20, жидкое мыло). На один объём объекта-носителя добавляли два объема раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислоты, т.е. на 50 г добавляли 100 мл раствора. Контейнеры плотно закрывали и помещали на ультразвуковую ванну на 10 мин с максимальной мощностью, затем отстаивали 10 мин и надосадочную жидкость сливали в центрифужные пробирки (далее - пробирки) без плодов ольхи. К раствору в пробирки добавляли 5 г хлорида натрия и центрифугировали, осуществляя седиментацию, в течение 15 мин при частоте вращения ротора 3000 об./мин на лабораторной центрифуге. После центрифугирования пробирки осторожно извлекали и сливали надосадочную жидкость. К осадку в пробирке добавляли 10 мл смеси - в равных объемах 10%-ого нашатырного спирта (NH4OH) и 10%-й щелочи (NaOH) и в течение 10 мин на водяной бане при 95-99 °С проводили щелочной гидролиз получаемых осадков, содержащих неразрушенные микрообъекты. Далее пробирки центрифугировали,

5 осуществляя седиментация, в течение 10 мин при частоте вращения ротора 5000 об./мин на лабораторной центрифуге. Сливали надосадочную жидкость (щелочь) и отмывали водой, добавляя в пробирку по 10 мл дистиллированной воды, перемешивая стеклянной палочкой, и проводили центрифугирование в течение 10 мин при частоте вращения ротора 5000 об./мин. Повторяли процедуру ю отмывки осадка водой. Затем сливали надосадочную жидкость (супернатант) и к осадку добавляли 1 мл дистиллированной воды, перемешивали на микроцентрифуге-вортекс 10 с и переносили в пробирку эппендорф объемом 2 мл. Суспензию центрифугировали на микроцентрифуге-вортекс в течение 10 мин при ускорении 1000 д. Из-под надосадочной жидкости брали автоматизированным

15 дозатором 0,03 мл осадочной суспензии, переносили в пробирку эппендорф объёмом 0,5 мл, добавляли 2-3 капли 0,1 %-ного спиртового раствора фуксина: 10 мг основного фуксина на 60 мл 96% спирта для окрашивания и встряхивали на микроцентрифуге-вортекс.

Обезжиренное предметное стекло помещали на нагревательный столик и

20 наносили круг из воска. В центр помещали одну каплю суспензии с микрообъектами и накрывали покровным стеклом. Готовый препарат микроскопировали с использованием профессионального биологического светового микроскопа.

Проведение испытания.

25 Регистрацию и анализ микрообъектов - общее число пыльцевых зерен и число пыльцевых зерен отдельных родов/видов, микромицетов - проводили с использованием световой микроскопии при увеличении 40-1000-крат. Палиноиндикацию пыльцевых зерен и спор высших растений (возможна индикация микромицетов, фитолитов и др.) проводили по качественным зо признакам в соответствии с описаниями в атласах, научной литературы, специализированных интерактивных баз данных с описанием и иллюстрациями микрообъектов. Учитывали три повторности (навеска NsNsl -З) по два стекла с каждой навески и не менее 150 пыльцевых зерен (общее число).

Обработка результатов испытаний Число пыльцевых зёрен определяемого рода/вида растения X, %, рассчитывали по формуле: Х=а/Ь * 100%, где а - число учтённых пыльцевых зерен определяемого рода/вида в препарате, шт.; b - общее число учтённых пыльцевых зерен в препарате, шт.; 100 - коэффициент пересчета на массовую долю (%) пыльцевых зёрен определяемого рода/вида. За окончательный результат испытания принимали среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (навеска N->N°1 -3).

В итоге между тремя результатами испытаний (навеска NsN2l-3) одной и той же пробы (Ольха шишки (плоды), 50г, картонная коробка из аптеки), полученными по одной методике, в одной и той же лаборатории, одним и тем же лаборантом, с использованием одного и того же средства измерений и оборудования, получили предельно допустимое относительное расхождение менее 20 % среднеарифметического значения (таблица 2). Таблица 2. Результаты испытаний пробы - Ольха шишки (плоды) в картонной коробке (каждая навеска весом 50 г).

Название ПЗ, навеска навеска навеска сред

NsNs % род/вид NS1 N22 N&3 нее

Смыв А

1 Alnus sp. (ольха) 1 1 1 98 99 103 32,4

Chenopodiaceae

2 (маревые) 21 39 43 34 10,8

Larix sp.

3 (лиственница) 3 0 14 6 1 ,8

Helianthus sp.

4 (подсолненчик) 60 93 42 65 20,5

Artemisia sp.

5 (полынь) 36 2 14 17 5,5

Смыв Б 0,0

1 Alnus sp. (ольха) 33 77 86 65 20,6 трудно

Смыв А+ (не)идентифицируе

Смыв Б мые 28 31 22 27 8,5 Общее число

учтенных 100, пыльцевых зерен 292 340 320 317 0

КоэфКорр

(навеска N°N°1 -3) 0,76 0,84 0,70

древесной 54,7 кустарниковой 0,0 травяной 36,8

Пример 2. Слива сезонная, обыкновенная (вес образца 1 кг).

Подготовка к испытанию.

Смыв А. Брали три навески в каждой по три плода сливы и помещали в

5 контейнер с плотной крышкой. Вес сливы зависит от сорта и размера урожая, но в среднем вес равен 30 г, т.е. каждая навеска 90-100 г. В каждую навеску добавляли 0,5 мл Полисорбата 20 (TWEEN_20, жидкое мыло) и 100 мл 20%-ого раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислоты. Для лучшего снятия микрообъектов механическим трением и отделения от объекта-носителя добавляли 5 г хлорида ю натрия. На один объём объекта-носителя добавляли один объём раствора одноосновной карбоновой (уксусной) кислоты, т.е. на 100 г добавляли 100 мл раствора. Контейнер с плотно закрытой крышкой помещали на орбитальную качалку (шейкер) при температуре 20-25 °С на 30 мин с частотой 1000 об/мин. Раствор отстаивали 10 мин и надосадочную жидкость сливали в центрифужные

L5 пробирки (далее - пробирки) без плодов сливы.

Пробирки с солевым раствором центрифугировали, т.е. осуществляли седиментацию, в течение 25 мин при частоте вращения ротора 3000 об./мин на лабораторной центрифуге. После центрифугирования пробирки осторожно извлекали и сливали надосадочную жидкость.

!0 К осадку в пробирке добавляли 10 мл смеси - в равных объемах 10%-ого нашатырного спирта (NhUOH) и 10%-й щелочи (NaOH) - и в течение 10 мин на водяной бане при 95-99 °С проводили щелочной гидролиз получаемых осадков, содержащих неразрушенные микрообъекты. Далее пробирки центрифугировали, осуществляя седиментацию, в течение 10 мин при частоте вращения ротора

!5 5000 об./мин на лабораторной центрифуге, сливали надосадочную жидкость (щелочь) и отмывали водой, добавляя в пробирку по 10 мл дистиллированной воды, перемешивая стеклянной палочкой, и проводили центрифугирование в течение 10 мин при частоте вращения ротора 5000 об. /мин. Повторяли процедуру отмывки осадка водой. Затем сливали надосадочную жидкость (супернатант) и к осадку добавляли 1 мл дистиллированной воды, перемешивали на микроцентрифуге-вортекс 10 с и переносили в пробирку эппендорф объемом 2 мл. Суспензию центрифугировали на микроцентрифуге-вортекс в течение 10 мин при ускорении 1000 д. Из-под надосадочной жидкости брали аккуратно автоматизированным дозатором 0,03 мл осадочной суспензии, переносили в пробирку эппендорф объемом 0,5 мл, добавляли 2-3 капли 0,1 %-ного спиртового раствора фуксина, т.е. 10 мг основного фуксина на 60 мл 96% спирта для окрашивания, и встряхивали на микроцентрифуге-вортекс.

Обезжиренное предметное стекло помещали на нагревательный столик и наносили круг из воска. В центр помещали одну каплю суспензии с микрообъектами, накрывали покровным стеклом. Готовый препарат микроскопировали с использованием профессионального биологического светового микроскопа.

Проведение испытания.

Регистрацию и анализ микрообъектов - общее число пыльцевых зерен и число пыльцевых зерен отдельных родов/видов - проводили с использованием световой микроскопии при увеличении 40-1000-крат. Палиноиндикацию пыльцевых зерен и спор высших растений (возможна индикация микромицетов, фитолитов и др.) проводили по качественным признакам в соответствии с описаниями в атласах, научной литературы, специализированных интерактивных баз данных с описанием и иллюстрациями микрообъектов. Учитывают три повторности (навеска N°Ne1 -3), по два стекла с каждой навески, не менее 150 пыльцевых зерен (общее число).

Обработка результатов испытаний.

Число пыльцевых зерен, определяемого рода/вида растения X, %, рассчитывали по формуле: Х=а/Ь * 100%, где а - число учтенных пыльцевых зерен определяемого рода/вида в препарате, шт.; b - общее число учтенных пыльцевых зерен в препарате, шт.; 100 - коэффициент пересчета на массовую долю (%) пыльцевых зерен определяемого рода/вида. За окончательный результат испытания принимали среднеарифметическое значение результатов параллельных определений (навеска N°N°1 -3). В итоге между тремя результатами испытаний (навеска N°N°1 -3) одной и той же пробы (Слива сезонная, обыкновенная) полученными по одной методике, в одной и той же лаборатории, одним и тем же лаборантом, с использованием одного и того же средства измерений и оборудования, получили предельно допустимое относительное расхождение менее 15 % среднеарифметического значения (таблица 3).

Таблица 3. Результаты испытаний пробы - Слива сезонная, обыкновенная (каждая навеска весом 100 г)

Название ПЗ, навеска навеска навеска

NSN2 среднее %

род/вид N21 Ns2 Ns3

Смыв А

Quercus sp.

1 (дуб) 35 43 55 44 28,7

Betula sp.

2 (береза) 18 41 48 36 23, 1

Fraxinus sp.

3 (ясень) 16 19 0 12 7,5

Pinus sp.

4 (сосна) 27 30 1 1 23 14,7

Apiaceae

5 (зонтичные) 5 1 10 5 3,4

Poaceae

6 (мятликовые) 33 17 22 24 15,5

Solanaceae

7 (пасленовые) 0 9 17 9 5,6 трудно

(не)идентифиц

8 ируемые 2 3 2 2 1 ,5

Общее число

учтенных

пыльцевых

зерен 136 163 165 155 100,0 КоэфКорр

(навеска

N2N21-3) 0,74 0,79 0,54

древесной 73,9 кустарниковой - 0,0 травяной 24,6

Специалисту в данной области техники очевидно, что заявляемые диапазоны значений температур и времени не являются альтернативами, а представляют собой конкретный режим, который может изменяться в указанных пределах в зависимости от исходного объекта, используемого оборудования и других внешних факторов.

Приведённые примеры являются частными случаями и не исчерпывают всех возможных реализаций заявляемого изобретения.

Предлагаемое изобретение является доступным, эргономичным и экологически безопасным способом изъятия микрочастиц для получения «чистых» качественных проб с набором микрочастиц. Способ позволяет получить максимально полный набор микрочастиц и микроследов растительного и животного происхождения, в том числе пыльцевых зерен и спор высших растений, палиноморфов, мицелия, бактерий, простейших, фитолитов, обломков растительного и животного происхождения для характеристики свойств объекта- носителя. Способ также позволяет получить дифференцированный набор микрочастиц и микроследов растительного и животного происхождения с учетом времени роста объекта-носителя, т.к. дополнительным или горячим смывом снимают глубоко зафиксированные микрочастицы, осевшие в месте произрастания объекта-носителя; основным или холодным смывом - более поздние микроследы, связанные с упаковкой и перемещением объекта-носителя. Использование заявляемого способа ускоряет рутинные работы - время проведения работ в среднем 2,5 ч на 1 пробу, а также увеличивает эффективность результатов идентификационного анализа - количество трудно или неидентифицируемых микрообъектов колеблется в пределах 1-8%.