无 技术领域

本发明涉及新的抗炎化合物及其合成方法。 具体的， 本发明涉及关于 15(R/S)-甲基 -月旨氧素 A4新的制备方法。 特别是， 本发明涉及到 15(R/S)-甲基-脂氧素 A4 以及其中 间体

背景技术

炎症具有防御和损伤双重效应： 炎症过弱不足以清除病原， 而过度的炎症反应又可造 成自身组织细胞的杀伤。 因而， 合理的炎症过程应维持防御与损伤间的平衡。

以脂氧素为代表的炎症自限体系正是发挥着限 制炎症强度、促进炎症消退的独特功效。 越来越多的临床和试验资料表明， 脂氧素等炎症自限因子代谢及效应的异常、 炎症消退的 障碍是多种炎症相关性疾病失控性发展的关键 机制。

脂氧素是一种具生物活性、 来自白细胞的花生四烯酸代谢物。 由脂肪加氧酶作用于多 不饱和脂肪酸而生成。 脂氧素的结构特征是分子中包含三个羟基和四 个共轭双键， 根据分 子中羟基位置和构象的不同分为四种： LXA4、 LXB4、 15-epi-LXA4和 15-epi-LXB4。

脂氧素是 Serhan, Hamberg和 Samuelsson等人在 1984年首次发现的二十烷类家族中一 类花生四烯酸的产物， 主要在炎症等病理过程中通过跨细胞途径来合 成， 在炎症反应中发 挥广泛的调节作用。

同某些多肽一样， 脂氧素对脂氧素 A4受体具有很高的亲和能力， 脂氧素 A4受体被首 次证明是甲酰基肽受体序列同源性受体， 如受体 (FPRL 1 )—样。

脂氧素与脂氧素 A4受体结合后， 可通过调节促分裂原活化蛋白激酶、 蛋白激酶 C等 信号通路及核因子 -κΒ和激活蛋白 -1 等转录因子的活性而发挥炎症调节效应。 此外， 脂氧 素也可以通过结合半胱氨酸白三烯受体 1及芳烃受体发挥生物学效应。

脂氧素主要通过细胞途径来合成，具体有 3条途径。 第一条途径 12-脂加氧酶和 5-脂加 氧酶合成。 在血管腔内， 花生四烯酸在白细胞内通过 5-脂加氧酶途径合成白三烯 A4后， 被传入血小板内， 由 12-脂加氧酶催化生成 LXA4或 LXB4。 第二条途径由 15-脂加氧酶、 5-脂加氧酶合成。 在上皮细胞、 单核细胞及嗜酸性粒细胞内花生四烯酸也可被 15-脂加氧酶 催化生成中间产物后， 再由中性粒细胞中的 5-脂加氧酶催化生成 LXA4或 LXB4。 第三条 途径是阿司匹林诱发的环加氧酶 -2、 5-脂加氧酶合成途径。 当上皮细胞中的环加氧酶 -2被 阿司匹林乙酰化后， 其无法催化花生四烯酸生成前列腺素， 却有 15R-脂加氧酶的功能。 经 这条途径合成的脂氧素的 15C上的羟基为 R构象， 即 15-epi-LXA4和 15-epi-LXB4。 发明内容

本发明提供了一种令人振奋的方法合成化合物 15(R/S)-甲基-脂氧素， 可以显著提 高该化合物及其中间体的产率和纯度。 表 1 为本方法的合成路线， 从化合物 1 为起始 到最终产物 15(R/S)-甲基-脂氧素。 如下所示， 我们可以通过表 2 中三个化合物片段 A,B,C连接起来合成整个化合物分子.通过 Witting反应利用片段 D,E合成目标分子。片 段 D亦可以由所示路线中的片段 F,G合成.片段 E通过片段 Η,Ι锆氢化钯催化交叉偶联 得到 .本合成路线有很多意想不到的优点。

表 1

C0 ₂ Et 扉 ^C ' Et0 ₂ C Br

CH ₃ CN \=/

2

Toluene, reflux HO

14 15

O

O

DCC/CI ₂ CHCOOH Ph ₃ P=CHCHO

COOEt COOEt DCM

16 17

20

Witting ^a

Hydrozirconation-Palladium- Catalyzed Cross-Coupling

G H 本发明所涉及的目标产物全合成工艺路线中所 釆用的条件温和、 对环境污染小并 且其工艺可控性强， 整个合成工艺已经很成熟。 与现有合成工艺相比较， 本发明对终 产品和关键中间体收率和纯度都有很大的提高 。

本发明的第一方面， 本发明提出了一种制备式 20所示化合物的方法， 其特征在于 包括： 丙炔酸乙酯和溴化锂接触， 以便获得式 2所示化合物； 式 3所示化合物、 叔丁 基二甲硅基三氟甲磺酸酯和吡啶接触， 以便获得式 4所示化合物； 所述式 4所示化合 物与 HZrCp2Cl接触以便获得式 5所示化合物；式 2所示化合物和式 5所示化合物接触， 以便获得式 6所示化合物； 所述式 6所示化合物和 DIBAL-D接触， 以便获得式 7所示 化合物； 所示式 7所示化合物与三溴化磷接触， 以便获得式 8所示化合物； 所述式 8 所示化合物与亚磷酸三甲酯接触， 以便获得式 9所示化合物； 式 10所示化合物与乙酰 氯接触， 以便获得式 1 1所示化合物； 所述式 11所示化合物与 CDI接触， 以便获得式 12所示化合物； 所述式 12所示化合物与盐酸接触， 以便获得式 13所示化合物； 所述 式 13所示化合物与芳香酸和乙氧甲酰基三苯基膦� ��触， 以便获得式 14所示化合物； 所述式 14所示化合物与氢气接触， 以便获得式 15所示化合物； 所述式 15所示化合物 与二环已基碳二亚胺接触， 以便获得式 16 所示化合物； 所述式 16 所示化合物与 Ph3P=CHCH0接触， 以便获得式 17所示化合物； 所述式 17所示化合物与二异丙基氨 基锂、 六曱基磷酰三胺和所述式 9所示化合物接触， 以便获得式 18所示化合物； 所述 式 18所示化合物与乙酸接触， 以便获得式 19所示化合物； 所述式 19所示化合物与氢 氧化钠接触， 以便获得式 20所示化合物

O

。Λ

本发明的第二方面， 本发明提出了一种制备式 2所示化合物的方法， 其特征在于 包括： 使丙炔酸乙酯和溴化锂接触， 以便生成式 2所示化合物

Et0 ₂ C Br

\=/

2 根据本发明的实施例， 其特征在于， 所述接触是在乙酸和乙腈组成的混合溶液中 进行的。

才艮据本发明的实施例， 乙酸和乙腈的体积比为 1 :2~2: 1。

根据本发明的实施例， 反应体系的温度范围为 40°C至回流温度。

本发明的第三方面， 本发明提出了一种制备式 6所示化合物的方法， 其特征在于 包括： 使式 2所示化合物、 双三苯基磷二氯化钯和二异丁基氢化铝接触， 以便生成式 6 所示

2 6 根据本发明的实施例， 其特征在于， 所述接触是在四氢呋喃中进行的。

根据本发明的实施例， 所述接触是在氯化锌中进行的。

根据本发明的实施例， 双三苯基磷二氯化钯的用量为所述式 2 所示化合物摩尔量 的 2%~10% 。

根据本发明的实施例， 反应体系的温度范围为室温至溶液回流温度。

本发明的第四方面， 本发明提出了一种制备式 7 所示化合物的方法， 其特征在于 包括： 使式 6所示化合物和 DIBAL-D接触， 以便生成式 7所示化合物

根据本发明的实施例， DIB AL-D的用量为所述式 7所示化合物的摩尔量 1.2倍〜 2.0 倍'

本发明的第五方面， 本发明提出了一种制备式 14所示化合物的方法， 其特征在于 包括： 使式 13所示化合物、 乙氧甲酰基亚甲基三苯基膦和芳香酸接触， 以便生成式 14 所示化合物

根据本发明的实施例， 其特征在于， 所述接触是在甲苯中进行的。

根据本发明的实施例， 反应体系的温度范围为室温至溶液回流温度。

本发明的第六方面， 本发明提出了一种制备式 18所示化合物的方法， 其特征在于 包括： 使式 9所示化合物和式 17所示化合物接触， 以

根据本发明的实施例 其特征在于， 所述接触在四氢呋喃中进行。

根据本发明的实施例 反应体系中加入碱和 HPMA。

根据本发明的实施例 所述碱为 LDA, n-BuLi , NaH。

根据本发明的实施例 反应体系的温度范围为 -78 °C至室温。

根据本发明的实施例 所述碱的用量与反应底物摩尔量的 1.1倍〜 1.5倍 发明详细描述

下面详细描述本发明的实施例， 所述实施例的示例在附图中示出， 其中自始至终 相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具 有相同或类似功能的元件。 下面通过参 考附图描述的实施例是示例性的， 仅用于解释本发明， 而不能理解为对本发明的限制。 实例

下面的示例是本专利中所涉及到缩写词的披 露

CDI Ν,Ν'-羰基二咪唑

DCM 二氯甲烷

DCC 二环己基碳二亚胺

DIBAL 二异丁基氢化铝

GC 气象色谱

LDA 二异丙基氨基锂

PBr3 三溴化磷

THF 四氢吱喃

TBSOTf 叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯

15(R/S)-甲基-脂氧素 A4 的合成

步骤 1 : 制备化合物 2

Et0 ₂ C Br

\=/

2

将丙炔酸乙酯（5.0g, 51mmol) 溶于乙酸（ 10mL ) 和乙腈 （ 10mL ) 的混合溶液中， 加入溴化锂 (4.3g, 51mmol),反应液在 60度下搅拌 2小时。 当反应完成后，冷却至室温， 加入 50mL 水至体系中， 并用乙酸乙酯提取。 有机相用饱和食盐水洗涤， 并用无水硫 酸钠千燥后， 过滤， 浓缩得到 8.2g化合物 2 , 收率 91%。 GC/MS: 177;

lH-NMR(DMSO-d6): δ=6.80 (d, J=10.8Hz, 1H), 6.62 (d, J=10.8Hz, 1H), 1.40 (q, 2H), 0.85 (t, 3H). 步骤 2: 制备化合物 4

将化合物 2(5.6g, 40mmol)和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯（11.6g, 44mmol)溶于二氯甲 烷（60mL ) 中室温下加入 lOmL吡啶。 反应体系在 60度下搅拌 4小时， 待反应完成后， 在减压条件下浓缩掉溶剂， 加入 80mL乙酸乙酯溶解， 并用水、 饱和食盐水洗涤， 用无水 硫酸钠千燥， 过滤浓缩后得到 8.3g化合物 3 , 收率 81%。

lH- MR(DMSO-d6): δ=3.40 (s, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.65 (2H, m), 1.35(m, 2H), 1.30 (m， 4H,), 1.01 (s, 9H), 0.88 (t, 3H), 0.25 (s, 6H). 步骤 3: 制备化合物 5

将化合物 4(2.54g， lOmmol)和 HZrCp2Cl (3.08g, 12mmol)溶于四氢呋喃 (50mL)中，该反应 体系在室温下搅拌 12小时。 待反应完成后加入 lOOmL水， 并用乙酸乙酯提取 3次， 合并 有机相， 并用饱和食盐水洗涤， 无水硫酸钠千燥后过滤浓缩得到化合物 5 , 直接用于下一 步反应， 没有进一步纯化。 步骤 4: 制备化合物 6

将化合物 5 (4.86g, 9.5mmol) 和化合物 2(1.68g, 9.5mmol)溶于四氢呋喃 (50mL)中， 将双 三苯基碑二氯化钯（5%, 330mg)和二异丁基氢化铝 （10%)以及微量的氯化锌加入到上述体 系中。 反应体系在氮气保护下回流 12小时， 反应过程中用 TLC监控， 至反应完成后， 冷 却至室温加入 lOOmL的水， 并用乙酸乙酯提取 3次， 合并有机相， 用饱和食盐水洗涤， 无 7J硫酸钠千燥， 过滤浓縮后得到粗产品。 出产品用快速制备色谱纯化后得到 2.0g化合物 6, 收率 56%。 （两步）。 步骤 5: 制备化合物 7 将化合物 6 ( 3.54 g, lOmmol )溶于 50mL二氯甲烷中， 体系用千水-丙酮浴冷却。 冷却下 滴加 DIBAL-D的二氯甲烷溶液（ 1.5M, 50mL ), 滴加时间不少于 30分钟， 滴加完毕后体系 稳定升至零度搅拌 2消失。 反应完毕后用 2M氯化铵溶液淬灭。 分出有机层， 有机层分别用 水、 5%碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸镁千燥， 过滤浓缩后得到粗产品， 并用柱层析纯化后得到 2.52g化合物 7, 收率 81%。

lH- MR(DMSO-d6): δ=6.28 (m, 1H), 6.25(m, 1H), 5.78(m, 2H), 5.68 (m, 1H), 5.60 (m, 1H),1.55 (s, 3H), 1.50 (2H, m), 1.3 l(m, 2H), 1.27 (m, 4H,), 1.00 (s, 9H), 0.85 (t, 3H), 0.21 (s, 6H). 步骤 6: 制备化合物 8

将三溴化磷（ 1.23 g, 4.52 mmol )置于 50mL的圆底烧瓶中， 并用千水-丙酮浴冷却。 随 后滴加化合物 7 ( 3.37 g, 10.8 mmol ) 的乙醚溶液 15mL。 滴加完毕后， 緩慢升温至 -25度搅 拌 30分钟后移除冷却浴。 室温下再搅拌 3.5小时， 反应完成后， 将反应液倒入含有;水的饱 和碳酸氢钠溶液中。 分层取有机相， 水相用乙醚提取， 合并有机相， 有机相用饱和食盐水洗 涤后用无水硫酸钠千燥。 提取液浓缩后得到粗产品化合物 8, 直接用于下一步反应。

LC/MS:[M+H]=375

步骤 7: 制备化合物 9

将化合物 8 ( 2.5g, 6.6mmol )溶于 10mL乙腈中， 加入亚磷酸三甲酯（ 900mg, 7.26mmol )。 反应液在氮气保护下室温中搅拌过夜。 反应完成后， 加入 60mL水， 水相用乙醚提取， 乙醚 层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸钠千燥， 提取液浓缩后得到 粗产品， 并用快速制备色谱纯化后得到 2.36g化合物 9, 收率 87%。 步骤 8: 制备化合物 11

将化合物 10( 2.68g, 20mmol )溶于 30mL甲醇中并用水浴冷却，将乙酰氯（ 1.63g, 21mmol ) 緩慢的滴加到溶液中。 滴加完毕后反应体系在室温下搅拌 3小时。 反应完成后， 将反应液倒 入 lOOmL水中， 水相用乙酸乙酯提取。 有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤， 饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸钠千燥， 提取液浓缩后得到粗产品， 并用快速制备色谱纯化后得到 2.2g化合 物 11 , 收率 74%。

lH- MR(DMSO-d6): δ=4.86 (m, 1H), 3.86(s, 2H), 3.34(s, 3H), 3.25 (m, 2H), 2.68 (s, 2H), 1.86 (m, 2H). 步骤 9: 制备化合物 12

12

将化合物 11 ( 2.2g, 14.8mmol )溶于 20mL乙腈中并加入 CDI ( 2.4g, 14.8mmol )。 反应液 在回流温度下搅拌 6小时。 反应完成后， 将反应液倒入水中， 并用乙酸乙酯提取， 有机相用 1N的盐酸洗涤， 饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸钠千燥， 提取液浓缩后得到粗产品 2.23g 化合物 12, 直接并用于下一步。 步骤 10: 制备化合物 13

13 将化合物 12 ( 2.23g, 12.8mmol )溶于 20mL二氧六环和水的混合溶液中 （二氧六环： 水 =3 : 1 , V/V ), 加入 4N 的盐酸溶液。 反应液在回流的温度下搅拌 5小时。 反应完成后浓缩溶 剂得到 2.0g化合物 13 , 直接用于下一步反应。 步骤 11 : 制备化合物 14

0

〇Λ

14

将化合物 13 ( 3.2g, 20mmol )溶于 30mL甲苯中， 加入芳香酸（ 20mmol )和乙氧甲酰基 亚甲基三苯基膦（7.3g, 21mmol )。 反应液回流过夜。 反应完成后， 浓缩溶剂后得到油状物， 用 50mL二氯甲烷溶解后分别用水、 5%碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸镁 千燥， 过滤浓缩后得到粗产品， 并用柱层析纯化后得到 2.86g化合物 14, 收率 62%。

lH- MR(DMSO-d6): δ=6.86 (m, 1H), 5.85(d, 1H), 4.23-4.26(m, 2H), 4.04 (t, 2H), 3.98 (m, 2H), 2.52 (m, 2H), 1.66 (t, 3H). 步骤 12: 制备化合物 15

15

将化合物 14 ( 2.0g, 8.7mmol )溶于 15mL乙醇中， 加入钯碳 ( 10%, 200 mg )。 反应液在 2 个大气压氢气中室温搅拌过夜。 反应完成后， 过滤， 浓缩溶剂后得到 1.86g化合物 15 , 直接 用于下一步。 步骤 13 : 制备化合物 16

16 将化合物 15 ( 3.0g, 12.9mmol )溶于 25mL二氯乙酸， 加入二环己基碳二亚胺（ 2.92g, 14.1mmol )。 反应液在室温下搅拌 8小时。 反应完成后将溶剂浓缩， 并用 60mL二氯甲烷溶解 后分别用水、 5%碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸镁千燥， 过滤浓缩后得到 粗产品 2.8g化合物 16, 直接用于下一步反应。 步骤 14: 制备化合物 17

0

〇Λ

17

将化合物 16 ( 2.5g, 10.8mmol )溶于 30mL二氯甲烷中， 加入 Ph3P=CHCHO ( 3.28g, 10.8mmol )。 反应液在室温下搅拌 12小时。 反应完成后， 溶液分别用水、 5%碳酸氢钠溶液 和饱和食盐水洗涤， 并用无水硫酸镁千燥， 过滤浓缩后得到粗产品， 并用柱层析纯化后得 到 2.0g化合物 14, 收率 72%。 步骤 15: 制备化合物 18

18

将化合物 17 ( 3.3g, 12.9mmol )溶于 25mL四氢呋喃中， 并用千水-丙酮浴冷却至 -78度， 緩慢滴加二异丙基氨基锂（ 1.65g, 15.4mmol )。 滴加完毕后， 搅拌 30分钟， 再緩慢升至室温。 再加入六甲基磷酰三胺（2.77g, 15.4mmol )和化合物 9。 该反应体系在室温下搅拌过夜。 反 应完成后用水浴冷却， 加入 2M的盐酸溶液 150mL。 溶液用饱和食盐水洗涤， 并用无水^ 酸 镁千燥， 过滤浓缩后得到粗产品， 并用快速制备色谱纯化后得到 3.8g化合物 18 , 收率 55% 步骤 16: 制备化合物 19

19

将化合物 18(1.8g, 3.4mmol)溶于甲醇和乙酸的混合溶液（ 30 mL 1 : 1 )中。 该溶液在室温 下搅拌 18小时。 当反应完成后， 减压条件下浓缩溶剂得到粗产品， 用乙酸乙酯溶解后， 有 机相用分别用水、 5%碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤， 并用硫酸镁千燥后经过滤浓缩得到 l.Og化合物 19, 收率 70%。 步骤 17: 制备化合物 20

20

将化合物 19 ( l.Og, 2.4mmol )溶于 20mL甲醇中， 加入 2M的氢氧化钠溶液。 反应液在室 温下搅拌 15小时。 反应完成后， 调节 PH至 5 , 得到目标产物 600mg化合物 20, 收率 68%。 在本说明书的描述中， 参考术语"一个实施例"、 "一些实施例"、 "示例"、 "具体示例"、 或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示� ��描述的具体特征、 结构、 材料或者特点包 含于本发明的至少一个实施例或示例中。 在本说明书中， 对上述术语的示意性表述不必须 针对的是相同的实施例或示例。 而且， 描述的具体特征、 结构、 材料或者特点可以在任一 个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。 此外， 在不相互矛盾的情况下， 本领域的技 术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或 示例以及不同实施例或示例的特征进行结合 和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例， 可以理解的是， 上述实施例是示例性的， 不能理解为对本发明的限制， 本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以 对上述实施例 进行变化、 修改、 替换和变型。