[01] Область техники

[02] Группа изобретений относится к области медицины и химико-фармацев- тической промышленности, а именно к способу лечения эндометриоза и фармацевтиче- ской композиции для его реализации. Изобретения могут быть использованы для произ- водства лекарственных препаратов, предназначенных для лечения и профилактики эн- дометриоза.

[03] Уровень техники

[04] В настоящее время эндометриоз является одной из наиболее распростра- нённых патологий в области гинекологии. Согласно данным различных исследований эндометриозом страдают от 45 до 80 процентов женщин. Эндометриоз - гинекологиче- ское заболевание, при котором клетки эндометрия (внутреннего слоя стенки матки) раз- растаются за пределами этого слоя, продолжая функционировать подобно слизистой оболочке матки. Эндометриоз является одной из причин образования кист яичников и бесплодия. Заболевание эндометриозом сопровождается тазовой болью, болезненной менструацией, болезненными половыми актами, болью при дефекации и мочеиспуска- нии. Сильные боли не только приносят страдания больным, но и негативно влияют на психологическое состояние, играющего важнейшую роль при лечении этого заболевания (И.В. Агеева Бессознательный язык тела женщины. Психосоматический взгляд на репро- дуктивное здоровье//Материалы конференции XV «Актуальные проблемы психосома- тики в общемедицинской практике». 2015) (Радецкая Л.Е., Супрун Л. Я. Эндометриоид- ная болезнь (патогенез, диагностика и лечение).- Витебск, 2000 - 112с.)

[05] Известен способ лечения генитального эндометриоза, основанный на воз- действии на организм радоновой водой (см. авторское свидетельство СССР SU 897243, 15.01 Л 982). Согласно изобретению, курс лечения состоит из 30 дней. Назначают радо- новые ванны температуры 36° С, длительностью 15 мин, 13-14 процедур на курс (по схеме: два дня ванны, третий день - отдых). Гинекологические орошения назначают в дни приёма ванны температуры 36° С, в течение 15 мин, 13-14 процедур на курс. Мик- роклизмы назначают в дни приёма ванн температуры 36° С в течение 20- 25 мин капель- ным способом, причём расходуют 250 г воды на процедуру, которую проводят после ванны и орошения. Для проведения всех процедур применяют радоновую воду концен- трации 180-200 нКи/л. Одновременно назначают гормональные препараты. [06] Использование радоновой воды безусловно оказывает воздействие на нервную систему и приводит к постепенному уменьшению болей. Недостатком приме- нения радонотерапии является наличие целого ряда противопоказаний, а также суще- ствующая вероятность возникновения онкологических заболеваний. Кроме того, ради- калы гидроксила, образующиеся в процессе радиационно-химических реакций, явля- ются сильным окислительным агентом. Собственно механизм воздействия на организм человека радоновой воды в основном и заключается в активации окислительных процес- сов, что неминуемо приводит к снижению эффективности использования антиоксидан- тов при лечении эндометриоза.

[07] Известно использование ТЧ-ацетил-Ь-цистеина (NAC) в качестве препарата для лечения эндометриоза, снижающего связанную с этим заболеванием боль (патент РФ RU2549433, 27.04.2015). Действие препарата основано на уменьшении местного хро- нического воспаления, и таким образом облегчении боли. Недостатком указанного ис- пользования NAC является длительность процесса постепенного снижения боли. В част- ности, в указанном патенте предлагается применение NAC по следующей схеме: в тече- ние 3-5 последовательных суток с последующими 2-4 сутками перерыва или в течение 1-3 последовательных суток с последующими 1-2 сутками перерыва фармацевтической композиции. Предполагается, что боль будет постепенно снижаться в течение двух недель.

[08] Известен способ применения гормональных препаратов лечения боли при эндометриозе, включающий в себя применение комбинированных оральных контрацеп- тивов и прогестогенов (патент РФ RU2471485, 10.01.2013, патент США US4826831, 02.05.1989, патент США US3836651, 17.09.1974, патент США US3957982, 18.05.1976). Прогестогены понижают экспрессию эстрогенных рецепторов в эндометрии и снижают пролиферативную активность клеток эндометрия, профилактируют развитие гиперпла- зии и кистозно-железистого перерождения эндометрия при воздействии эстрогенов.

[09] Недостатком способа лечения эндометриоза прогестероном является нали- чие побочных эффектов: депрессия, повышенная тревожность, головные боли. Суще- ствует риск развития рака молочной железы. Также следует отметить, что положитель- ный эффект от прогестерона снижается с повышением уровня адреналина в крови боль- ного, вызванного стрессом от болевого синдрома и побочных эффектов приёма препа- рата.

[010] Все указанные выше способы лечения эндометриоза имеют общий недо- статок - длительность процесса купирования боли. [Oil] В клинической практике дополнительно к основным препаратам для борьбы с болью применяются анальгетики (например, аспирин, парацетамол), лёгкие наркотические препараты, такие как кодеин, наркотические препараты, а также нестеро- идные препараты (нурофен, вольтарен, ибупрофен и т.д.) (Л.В. Адамян, Е.В. Сибирская, Н.О. Тарбая Проблема эндометриоза у девочек-подростков (обзор литературы) //Про- блемы репродукции. 2016. N°6. Стр. 71-75). Основным недостатком указанного подхода является кратковременность действия препаратов. В результате больному приходится постоянно применять обезболивающие, которые в свою очередь обладают побочными эффектами, а в отдельных случаях противопоказаны больным с заболеваниями почек, печени, эндокринной системы.

[012] В патенте США US10213439, 26.02.2019, а также в публикации междуна- родной заявки WO2019036243, 21.02.2019 предложена композиция для лечения эндомет- риоза включающая терапевтические агенты в виде прогестерона и прогестина в сочета- нии с каннабидиолами. Препараты выполнены в виде таблеток или пилюль. Способ ос- нован на применении нестероидных противовоспалительных средств, гормональных препаратов и каннабиса, снимающего болевой синдром. Недостатком указанного спо- соба являются присущие гормональной терапии побочные явления: набор веса, выпаде- ние волос, депрессия, бессонница, головные боли, риск развития сердечно-сосудистых заболеваний и рака молочной железы.

[013] Следует отметить, что лекарственные препараты на основе каннабиноидов широко используются в ряде стран. Например, применяют Маринол (дранобинол), Син- дрос (дранобинол), Кесамет (набилон), Сативекс (набиксимолс). Дранобинол и набинол являются синтетическими аналогами тетрагидрокарбинола.

[014] В публикации заявки США US20020147155, 10.10.2002 раскрыт способ ле- чения эндометриоза путем введения композиции, содержащей лиганд, связывающий арильный углеводородный рецептор. В качестве такого лиганда может применяться ди- индолилметан. Вещество вводят в количестве от 1 до 10 г в день. Указанный аналог яв- ляется наиболее близким для заявленной группы изобретений.

[015] Недостатком применения данной композиции 3,3'-дииндолилметана явля- ется сравнительная низкая эффективность ДИМ как самостоятельного терапевтического агента. Кроме того, применение ДИМ не помогает снизить болевой синдром и стабили- зировать психологическое состояние больного

[016] Раскрытие сущности изобретения

[017] Основной технической проблемой, на решение которой направлено заяв- ленное изобретение, является создание метода лечения и композиции, обладающих более высокой эффективностью при лечении эндометриоза без увеличения токсического воздействия.

[018] Техническим результатом группы изобретений является повышение про- тивоопухолевого действия, длительности купирования болевого синдрома и улучшение психологического состояния больного.

[019] Технический результат достигается в способе лечения эндометриоза за счёт того, что он включает прием пациентом комбинации 3,3'-дииндолилметана и кан- набидиола в эффективных количествах.

[020] Согласно частным вариантам реализации способа:

[021] - 3,3'-дииндолилметан принимают в количестве от 400 до 1000 мг в сутки, а каннабидиол - в количестве от 100 до 1000 мг в сутки;

[022] - 3,3'-дииндолилметан и каннабидиол принимают в виде композиции;

[023] - используют композицию, содержащую 3,3'-дииндолилметан и каннаби- диол в массовом соотношении от 1:1 до 4: 1 ;

[024] - композиция дополнительно содержит конопляное масло и солюбилиза- тор «ТВИН 80»;

[025] Технический результат также достигается в фармацевтической компози- ции для лечения эндометриоза за счет того, что она содержит 3,3'-дииндолилметан и кан- набидиол в эффективных количествах.

[026] Согласно частным вариантам реализации композиции:

[027] - композиция содержит 3,3'-дииндолилметан и каннабидиол в массовом соотношении от 1:1 до 4: 1 ,

[028] - композиция дополнительно содержит конопляное масло и солюбилиза- тор «ТВИН 80»;

[029] - композиция содержит компоненты в следующем соотношении, мае. %:

3,3'-дииндолилметан - 8-24, каннабидиол - 4-14, конопляное масло - 4-14, солюбилиза- тор ТВИН 80 - остальное.

[030] В заявленной группе изобретений использована комбинация 3,3'-дииндо- лилметана (ДИМ) и каннабидиола (КБД), которая имеет следующие преимущества:

[031] 1) Вещества являются фитонутриентами - соединениями, полученными из крестоцветных растений (редиса, брокколи, репы и др.). Указанные компоненты обла- дают выраженными противоопухолевыми и другими полезными свойствами, но, в отли- чие от традиционных химиотерапевтических препаратов, абсолютно нетоксичных и без- вредных для организма. [032] 2) Вещества влияют на метаболизм эстрадиола, и смещая биоконверсию последнего в сторону преимущественного синтеза 2-гидроксиэстрона, обладающего це- лым рядом важных физиологических функций и существенно снижающего образование 16-гидроксиэстрона, вызывающего повышенную пролиферативную активность клеток- мишеней. Вызывают избирательный апоптоз трансформированных клеток, что вносит значительный вклад в их противоопухолевую активность.

[033] 3) Вещества ингибируют многие сигнальные каскады, которые активиру- ются в процессе опухолевой трансформации клеток.

[034] 4) ДИМ обладает высокой избирательной ингибирующей активностью по отношению к клеткам с нарушенным метаболизмом и находящимся в состоянии оксида- тивного стресса. Именно для ДИМ показана уникальная способность подавлять жизне- деятельность опухолевых стволовых клеток, которые определяют развитие злокаче- ственных патологий.

[035] 5) Для ДИМ установлена способность влиять на эпигенетические измене- ния в транформированных клетках, модулируя активность гистон деацетилаз и ДНК-ме- тилтранфераз. Через эти механизмы ДИМ способен инициировать генетическое пере- программирование клеток, возвращая их в здоровое, с генетической точки зрения, состо- яние.

[036] 6) Каннабидиол, растворенный в конопляном масле, содержащим допол- нительно более шестидесяти непсихотропных каннабиноидов, снижает болевой син- дром, комплексно оказывает стабилизирующее воздействие на эндоканнабиноидную си- стему человека.

[037] 7) КБД является безопасным, достаточно эффективным анальгетиком, обеспечивающим необходимый терапевтический эффект в лечении хронической боли при онкологических заболеваниях (М.Е. Lynch, M.A.Ware Cannabinoids for the Treatment of Chronic Non-Cancer Pain: An Updated Systematic Review of Randomized Controlled Tri- als// Journal of Neuroimmune Pharmacology. Jun 2015. 10(2). 293-301.)

[038] 8) КБД обладает антипролиферативными, проапоптотическими и анти- фиброзными свойствами. Агонисты каннабиноидов оказывают антипролиферативное действие на стромальные эндометриотические клетки, ингибируя PI3K / АКТ-сигналь- ные пути.

[039] 9) КБД является мощным ингибитором высвобождения экзосом из трех линий раковых клеток: рака простаты (РСЗ), гепатоцеллюлярной карциномы (HEPG2) и аденокарциномы молочной железы (MDA-MB-231). Каннабидиол значительно умень- шает высвобождение экзосом во всех трех линиях раковых клеток, а также значительно, хотя и более вариабельно, ингибирует высвобождение микровезикул (Kosgodage US, Mould R, Henley AB, Nunn AV, Guy GW, Thomas EL, Inal JM, Bell JD and Lange S (2018) Cannabidiol (CBD) Is a Novel Inhibitor for Exosome and Microvesicle (EMV) Release in Can- cer. Lront. Pharmacol. 9:889)

[040] 10) КБД препятствует неоваскуляризации опухоли, миграции раковых кле- ток, адгезии, инвазии и метастазированию (D. Paloralo, P.Massi, M.Solinas, V.Cinquinq Cannabidiol as potential anticancer drug// British Journal of Cninical Pharmacology. 75:2. 303- 312. 2012)

[041] 11) КБД является эффективными адъювантами болей при раке, которые не полностью устраняются опиоидной терапией (S.Tateo State of the evidence: Cannabinoids and cancer pain - A systematic review. Journal of the American Association of Nurse Practi- tioners Nov.2016. pp.l-10)B проведенных исследованиях [Yin H, Chu A, Li W, Wang B, Shelton L, Otero L, et al. Lipid G protein-coupled receptor ligand identification using beta- arrestin PathHunter assay. J Biol Chem. 2009;284:S12328-S 12338.)

[042] 12) ДИМ является частичным агонистом ряда каннабиноидов. При исполь- зовании ДИМ на противовоспалительный эффект в клетке RAW264.7 влияет присут- ствие каннабиноидов. Таким образом, совместное использование ДИМ и КБД позволяет повысить эффективность применения обоих препаратов. Т.е. эффект от применения дан- ной комбинации не является суммарным по отношению к использованию веществ по отдельности. Автором изобретения было обнаружено, что действие ДИМ в присутствии КБД значительно усиливается.

[043] Осуществление изобретения

[044] Заявленный способ лечения эндометриоза предусматривает пероральное применение больным комбинации КБД и ДИМ в эффективных количествах. 3,3'-диин- долилметан, предпочтительно, принимают в количестве от 400 до 1000 мг в сутки, а кан- набидиол - в количестве от 100 до 1000 мг в сутки.

[045] Вещества могут применяться как в отдельности, так и в составе компози- ции. Композиция, предпочтительно, содержит ДИМ и КБД в массовом соотношении от 1:1 до 4:1. Дополнительно в состав композиции может быть введено конопляное масло и солюбилизатор ТВИН 80. Конопляное масло повышает биодоступность композиции при введении в организм, а солюбилизатор обеспечивает стабилизацию раствора.

[046] Предпочтительно, композиция включает компоненты в следующем соот- ношении, мае. %: 3,3'-дииндолилметан - 8-24, каннабидиол - 4-14, конопляное масло - 4-14, солюбилизатор ТВИН 80 - остальное. [047] Пример 1.

[048] Рецептура фармацевтической композиции включает основные компо- ненты: ЗД’-дииндолилметан - 100 мг и каннабидиол - 25 мг, а также вспомогательные компоненты конопляное масло - 25 мг, солюбилизатор ТВИН 80 - 450 мг.

[049] Пример 2.

[050] Рецептура фармацевтической композиции включает основные компо- ненты: ЗД’-дииндолилметан - 100 мг и каннабидиол - 80 мг, а также вспомогательные компоненты конопляное масло - 100 мг, солюбилизатор ТВИН 80 - 450 мг.

[051] Пример З.

[052] Проводили фармакокинетические исследования композиции из Примера 1. В эксперименте использованы самки аутбредных крыс Sprague-Dawley весом 250г. Все исследования на животных проводили в соответствии "Guidelines for Care and Use of Experimental Animal". В данном исследовании эндометриоз моделировали путем аутоло- гичной трансплантации эндометриальной ткани в брюшную полость (см. Amaral V.F., Dal Lago Е.А., Kondo W., Souza L.C., Francisco J.C. Development of an experimental model of endometriosis in rats. // Rev Col Bras Cir. 2009. Vol. 36. P. 250-255., а также Rezende CAL, Silva AL, Junior JLS, Gobbi H, Martins MMF. Experimental model for endometriosis- comparative histological study between the ectopic and eutopic endometrium. Acta Сиг Bras. 1997. Vol. 12. P.226-230). В качестве контрольной группы использовали ложноопериро- ванных животных. Пероральное введение основных веществ 3,3’-дииндолилметана и каннабидиола проводили ежедневно в течение 30 дней для 50% животных и 60 дней для остальных 50% в дозе ДИМ - 5,0 мг и КБД - 0,25 мг в виде суспензии в 1 мл 1% раствора крахмала с добавлением 1,0 мг конопляного масла. В качестве контрольного препарата использовался 1% раствор крахмала.

[053] Болевая чувствительность оценивалась по локомоторной активности жи- вотных, а также по уровню чувствительности к механическому воздействию (Schwartz E.S., Xie A, La J.H., Gebhart G.F. Nociceptive and Inflammatory Mediator Upregulation in a Mouse Model of Chronic Prostatitis // Pain. 2015. Vol. 156. P.1537-1544. Болевую чувстви- тельность оценивали через каждые две недели.

[054] По результатам эксперимента статистически значимое влияние препарата на локомотивную активность животных выявлено не было, что возможно обусловлено привыканием (габитуацией) животных к условиям эксперимента. Результаты, получен- ные при проведении оценки висцеральной болевой чувствительности, показали значи- мый терапевтический эффект от применения комбинации ДИМ+КБД+Конопляное масло. В группе животных с индуцированной патологией, не получавших лечения, на всем протяжении эксперимента наблюдалась более выраженная болевая реакция по сравнению с ложнооперированными животными. При терапии исследуемыми препара- тами через 2 недели лечения у животных, получавших указанные вещества, болевая чув- ствительность статистически значимо отличалась от показателей животных с индуциро- ванной патологией, получавших только основной препарат.

[055] Пример 4.

[056] В исследование было включено 32 пациентки. Завершили его в соответ- ствии с протоколом 19 пациенток. Из них: 12 пациенток были случайным образом вклю- чены в группу NC1 и 7 пациенток - в группу N°2. Группа 1 получала лечение ДИМ (400 мг/сут), а группа 2 - ДИМ (400 мг/сут) + КБД 20 мг/сут). У всех пациенток определялся объем матки с помощью УЗИ и уровень болевых ощущений по визуально-аналоговой шкале (от 0 до 100 баллов).

[057] Данные, полученные исходно по всем включенным пациенткам первой и второй групп, представлены в таблице 1. Оценка статистической значимости отличий в исходных данных пациенток показана в таблице 2.

[058] Таблица 1. Данные пациенток до терапии.

[059] Таблица 2. Значимость отличий между группами (исходные данные) (кри- терий Манна-Уитни). [060] Из таблиц 1 и 2 следует, что исходно статистически значимых отличий между группами нет.

[061] После лечения у завершивших исследование пациенток были определены те же параметры по УЗИ. Данные по результатам приведены в Таблицах 3 и 4. [062] Таблица 3. Данные после терапии

063] Таблица 6. Значимость отличий между группами (после терапии) (крите- рий Манна-Уитни).

[064] Из данных таблиц 3 и 4 видно, что между группами есть статистически значимые отличия. В группе 2 наблюдается более значительное падение объема матки и наиболее крупного узла по сравнению с группой 1. Следовательно, комбинированная терапия имеет преимущества перед назначением одного ДИМ. При этом действие КБД не сводится лишь к уменьшению болевого синдрома, поскольку обеспечивается неожи- данный эффект, заключающийся в значительном усилении действия ДИМ.

[065] Таким образом, заявленная фармацевтическая композиция обладает высо- кой противоопухолевой активностью, устраняет болевой синдром и положительно вли яет на психологическое состояние.