La présente invention concerne une formulation du cisplatine pour administration orale.

Le cisplatine est un agent anticancéreux connu pour son efficacité mais aussi pour ses effets secondaires notables, observés lorsqu'il est administré par voie intraveineuse, notamment : néphrotoxicité, toxicité gastrointestinale (nausées, vomissements), neurotoxicit et mylosuppression modérée.

La nphrotoxicité induite par le cisplatine peut tre atténuée par hydratation saline intraveineuse et par diurèse.

Depuis ces vingt-cinq dernières années, des recherches ont été menées sur des analogues du cisplatine. Seulement douze de ces analogues ont été évalués au cours d'essais cliniques : certains se sont avérés encore plus toxiques que le cisplatine et aucun n'a montré une activité anticancéreuse supérieure au cisplatine.

Les chercheurs se sont donc tournés vers l'étude de la réduction de toxicité du cisplatine plutôt que vers celle de nouveaux analogues.

Un premier axe de recherche concerne l'administration orale du cisplatine chez les animaux.

Les études réalisées par Siddik Z. H. et al. et présentées au 74eme congrès de l'Association Américaine de Recherche contre le Cancer en mars 1984 ont permis d'évaluer l'activité anticancreuse du cisplatine administré par voie orale chez des souris atteintes de plasmacytome ADJ/PLA. La concentration plasmatique en platine a atteint un pic de 4, 3 yg/ml au bout de 30-60 minutes pour une dose de 50 mg/kg. La biodisponibilit

chez la souris était de 31-36 % et l'incidence de la nphrotoxicit était seulement de 20 %.

Hasegawa Y. et al. confirment sur des muridés, dans Chem. Pharm. Bull. 33 (12), 5511-5514, 1985, que le cisplatine passe dans le sang après administration orale et qu'il est efficace dans ces conditions contre les tumeurs solides.

Binks S. P. et al. démontrent dans Biochemical Society Transactions, 616th Meeting, London, 14, 694 (1986), que l'absorption du cisplatine apres administration orale est tellement rapide que la concentration plasmatique en platine atteint son maximum en moins de deux heures. Les taux les plus élevés de platine sont observés dans les reins.

L'analyse au microscope électronique des tissus excisés 48 heures après l'administration orale du cisplatine ne révèle que peu de changements dans les reins, tandis que pour une administration intraveineuse, les symptômes de nphrotoxicit sont observables.

Borch R. F. et al. ont montré dans Proc. Natl.

Acad. Sci., USA, 76, 6611-6614, que les concentrations d'urée dans le sang ont été multipliées par 14 chez des rats recevant la dose maximale tolérée de cisplatine par voie intraveineuse puis ce résultat a été confirmé par une autre étude de Morgan S. E. et al. (Pharmacology Communication, 1993, vol. 3, n° 1, 9-18) et montre que l'administration par voie orale peut diminuer largement la nphrotoxicit du cisplatine. Aucun changement histopathologique au niveau des reins n'a été observé chez la souris traitée oralement par une dose toxique de cisplatine de 70 mg/kg.

Howell S. B. dans Plenum Press. New York, p. 93 (1991) et Harrap K. R. et al. dans Adv. Enzyme Regul. 31 (31), 1991, révèlent que le degré d'activité du cisplatine administré par voie orale est moindre que celui obtenu par voie parentrale et que des doses plus

élevées sont nécessaires pour une administration orale en raison de la biodisponibilit relativement faible du cisplatine dans ce cas. En conséquence, aucun essai clinique n'a été conduit sur l'homme parce que la biodisponibilité du cisplatine administré par voie orale était trop faible comparé aux formulations intraveineuses classiques.

Un deuxième axe de recherche concerne l'association de faibles doses de cisplatine avec d'autres modes de thérapie.

T. Shirasaka a proposé dans Cancer Chemother.

Pharmacol., 32, 167-172 (1993), et dans Jpn. J. Cancer Chemother. 2/ (7) 1025-1028 (1994), une thérapie qui consiste à combiner l'administration de 5-fluoro-uracil et du cisplatine à faible dose. Il suggère une thérapie de quatre semaines, qui consiste à administrer une perfusion de 5-fluoro-uracil associée à une dose intraveineuse de 5-6 mg/jour de cisplatine.

L'efficacité anticancreuse de cette thérapie sur les tumeurs solides des rongeurs étudiés est supérieure à celle du 5-fluoro-uracil seul ou du cisplatine seul et sa toxicité est moindre.

De nombreuses études effectuées au Japon ont montré qu'avec un régime à faible dose, le cisplatine associé à du 5-fluoro-uracil est efficace dans le traitement de divers cancers, de surcroit sa toxicité est amoindrie. Il n'est alors plus nécessaire d'avoir recours à une hydratation par voie intraveineuse pour prévenir la nëphrotoxicité.

Il a, par ailleurs, été démontré dans Chemotherapy, 1996, Vol/Iss/Pg 42/6 (452-458) que le cisplatine à faible dose peut aussi tre associée à du Sl, médicament antitumoral de forme orale qui est un mélange tegafur/5-chloro-2, 4-dihydroxypyridine/acide oxonique dans une proportion molaire 1/0, 4/1, découvert par T. Shirasaka.

D'autres associations du cisplatine à faible dose sont aussi possibles avec d'autres anticancreux tels que, mais non limites, à l'association de la vinblastine avec la blëomycine, l'association de l'toposide avec la blëomycine, ou encore du paclitaxel.

En outre, Ducreux M. et al. dans Annals of Oncology, 5 (Suppl. 8), 81 (1994), ont montre que l'association de la radiothérapie et d'une administration de 4-6 mg/m2/jour de cisplatine par voie intraveineuse pendant 4-6 semaines améliorait l'activité anticancreuse et réduisait les effets secondaires.

Il n'existe actuellement aucune formulation orale du cisplatine et l'objet de la présente invention est de fournir des microgranules à libération contrôlée, pour administration orale, contenant du cisplatine, dont la granulométrie moyenne est comprise entre 0, 4 et 1, 5 mm, notamment entre 1 et 1, 25 mm.

On entend par libération contrôlée, une libération instantanée, prolongée dans le temps ou encore avec ciblage du site d'absorption, notamment au niveau de l'iléon où le pH est de l'ordre de 7.

Cette formulation fournit avantageusement une biodisponibilité superieure à celle du cisplatine de forme injectable administrée oralement et une toxicité gastro-intestinale acceptable.

Après une administration intraveineuse, la concentration plasmatique en platine augmente puis diminue rapidement, ce qui engendre des fluctuations de concentration importantes et crée des périodes de sous- et de surconcentration thérapeutique, responsables de la nphrotoxicit et des nausées-vomissements.

La formulation microgranules à libération contrôlée selon l'invention permet avantageusement de libérer le principe actif plus régulièrement et d'éviter des pics plasmatiques en maintenant un taux sanguin suffisamment élevé pour obtenir l'effet thérapeutique

voulu, sans toutefois atteindre des niveaux toxiques pouvant entraîner des effets secondaires pour le patient, en raison de la large répartition des granules le long du tube digestif.

La formulation selon l'invention permet également de maintenir la concentration plasmatique constante sur une période de temps plus longue, de diminuer les variations inter-et intra-individuelles grâce à une surface d'échange élevée et évite la libération d'une quantité importante de principe actif localisée en un point de la muqueuse digestive.

Un avantage de la forme orale selon l'invention est d'tre utilisable par le patient lui-mme à son domicile ; ainsi le patient n'a plus à recourir à des administrations intraveineuses fréquentes à l'hôpital qui nécessitent une assistance professionnelle. De plus, pour les patients hospitalisés, la forme orale selon l'invention améliore la qualité de vie en réduisant le temps passé à l'hôpital et en les affranchissant de traitements pénibles, en particulier dans le cas de perfusions à raison de 100 heures/semaine.

Chaque microgranule selon l'invention comprend avantageusement un microgranule immédiat sur lequel est monté un revtement contenant un agent d'enrobage permettant la libération contrôlée du cisplatine et/ou d'autres principes actifs, ledit microgranule immédiat étant constitué soit d'un mélange d'excipients, de cisplatine et éventuellement d'autres principes actifs, soit d'un grain support neutre enrobé d'un mélange d'excipients, de cisplatine et éventuellement d'autres principes actifs.

On entend par microgranule immédiat, un microgranule dont les excipients de formulation n'agissent pas de manière significative sur la vitesse de libération ou de diffusion du principe actif.

L'agent d'enrobage permettant la libération

contrôlée du cisplatine ou éventuellement d'autres principes actifs est, de préférence, constitué d'un ou plusieurs polymères d'enrobage pharmaceutiquement acceptables, choisis en particulier parmi les polymères cellulosiques ou parmi les copolymères d'acide méthacrylique, et préférentiellement, les poly (thylacrylate, mëthylmthacrylate) commercialises sous la marque Eudragit NE 30D@.

Le revtement contenant l'agent d'enrobage décrit précédemment est avantageusement constitué d'un seul polymère, ou éventuellement d'un mélange de polymères et/ou d'une succession de couches de polymères.

Eventuellement, il peut tre associe au polymère de la couche d'enrobage assurant la libération contrôlée, différents additifs usuels en particulier : un agent lubrifiant et/ou un agent plastifiant et/ou un agent tensioactif.

L'agent lubrifiant peut tre constitué d'un lubrifiant usuel pharmaceutiquement acceptable, en particulier le talc.

L'agent plastifiant est, de préférence, constitué d'un agent plastifiant pharmaceutiquement acceptable choisi parmi les esters aliphatiques tels que les esters d'acides citrique, phtalique, oxalique, et prëfrentiellement, le trithylcitrate.

Le tensioactif peut tre de type anionique, cationique, amphotere ou préfrentiellement de type non ionique, en particulier le polysorbate 80 commercialise sous la marque Montanox 80 Avantageusement, il peut tre appliqué entre le microgranule immédiat et le revtement contenant l'agent d'enrobage, une couche dite d'enrobage protecteur ou de remontage ; cette couche intercalaire ayant pour rôle d'isoler le principe actif du polymère utilise dans le revtement d'enrobage décrit ci-dessus.

L'addition de chlorure de sodium au mélange d'excipients permet de renforcer la stabilité du principe actif cisplatine. Le mélange d'excipients comprend donc avantageusement du chlorure de sodium.

Les microgranules selon l'invention contiennent avantageusement une teneur en cisplatine comprise entre 25 et 350 mg/g, et préférentiellement entre 50 et 60 mg/g.

La présente invention concerne également le procédé de préparation des microgranules à libération contrôlée contenant du cisplatine selon l'invention.

Ledit procédé consiste en un montage du cisplatine sur des grains supports neutres par pulvérisation d'une suspension de montage contenant du cisplatine en milieu hydro-alcoolique, en milieu alcoolique, ou en milieu aqueux.

La suspension de montage est prëfrentiellement aqueuse et contient un agent stabilisant comme le chlorure de sodium, un ou plusieurs agents liants comme l'hydroxypropylmethylcellulose ou le polyethyleneglycol.

Eventuellement, il peut tre ajouté à la suspension de montage, un agent tensioactif tel que décrit précédemment.

Les microgranules immédiats une fois enrobés par l'agent d'enrobage permettant la libération contrôlée du cisplatine peuvent tre lubrifiés avec du talc.

Les solvants utilisés dans les étapes de préparation des microgranules de la présente invention peuvent tre de nature aqueuse, alcoolique ou hydro- alcoolique. Prëfrentiellement, l'eau sera utilisée comme unique solvant lors du procédé de fabrication.

Les microgranules selon l'invention peuvent tre obtenus par extrusion-spheronisation en mélangeant en une seule étape le cisplatine, des agents liants et des agents stabilisants en milieu aqueux.

Les microgranules décrits dans la présente

invention sont obtenus par utilisation de tout équipement adéquat pour la préparation et 1'enrobage de microgranules, bien connu de l'homme du métier et en particulier les équipements de type turbine conventionnelle, turbine perforée, lit d'air fluidis, extruseur et sphronisateur.

La présente invention a également pour objet une préparation pharmaceutique contenant les microgranules de cisplatine à libération contrôlée selon l'invention, éventuellement obtenus selon le procédé décrit ci- dessus, en une quantité permettant d'obtenir une dose unitaire comprise entre 10 et 50 mg de cisplatine.

Ladite préparation pharmaceutique contient de préférence un mélange de microgranules de cisplatine à libération contrôlée et d'un agent anticancreux-par exemple le fluoro-uracil, le S1, l'association de la vinblastine avec la blomycine, l'association de l'etoposide avec la blomycine, ou le paclitaxel-comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps en thérapie anticancëreuse.

La présente invention concerne enfin l'utilisation des microgranules selon l'invention pour fabriquer un médicament, à administrer par voie orale, destiné à tre utilisé à faibles doses, notamment inférieures ou égales à environ 20 mg/m2/jour.

Ledit médicament peut tre avantageusement utilisé en polychimiothrapie et/ou en association avec une radiothérapie, pour obtenir une concentration sanguine moyenne en cisplatine comprise entre 0, 5 et 1, 0 ig/ml.

Les exemples suivants illustrent l'invention sans en limiter la portée. Les pourcentages sont exprimés en masse sauf indication contraire.

Exemple 1 : Protocole de preparation de microgranules immédiats par montage du cisplatine sur grains neutres.

Preparation de la suspension de montage.

Pour une quantité de cisplatine de 100 g peser les excipients de montage dans les proportions adéquates, Placer le solvant ou le mélange de solvant dans un récipient sous agitation, Ajouter lentement le liant ou le mélange de liants, agiter jusqu'à obtenir une solution homogène, Ajouter le principe actif au moment du montage, agiter jusqu'à obtenir une suspension homogène.

Montage du principe actif sur les grains supports neutres Placer la quantité nécessaire de Neutres 20 (commercialisees par la société Np-pharm dont la granulométrie moyenne est comprise entre 0, 7 et 0, 9 mm, composées de 75 % de saccharose et de 25 % d'amidon de mais) dans l'appareil retenu pour le montage du principe actif.

Effectuer le montage du principe actif, sur les Neutres 20@, par pulvérisation continue de la suspension décrite ci-dessus, -Tamiser la masse de microgranules obtenue, -Sécher les microgranules en turbine à température ambiante.

Exemple 2 : Préparation des microgranules immédiats A Pour une quantité de cisplatine de 100g peser les excipients de montage suivants dans les proportions indiquées PEG 4000 18g 75% de l'extrait sec PHARMACOAT 603@ 9g 25% de l'extrait sec EAU PURIFIEE 10g 5% du solvant I ALCOOL ETHYLIQUE 95% 190g 95% du solvant Formule finale : CISPLATINE22, 3% NEUTRES 2072, 4% PEG 4000 4, 0% PHARMACOAT 603@1, 3% TENEUR THEORIQUE 223 mg/g Exemple 3 : Préparation des microgranules immédiats B Pour une quantité de cisplatine de 100 g peser les excipients de montage suivants dans les proportions indiquées PEG 4000 18, 2 g 30, 5 % de l'extrait sec PHARMACOAT 603@ 6, 0 g 10, 1 % de l'extrait sec CHLORURE DE SODIUM 30, 2 g 50, 7 % de l'extrait sec MONTANOX 800 5, 2 g 8, 7 % de l'extrait sec EAU PURIFIEE 303, 0 g 100% du solvant

Formule finale : CISPLATINE 5,5% NEUTRES 20@ 91, 3% PEG 4000 1, 0% PHARMACOAT 6030 0, 3% MONTANOX 809 0, 3% CHLORURE DE SODIUM 1, 6% TENEUR THEORIQUE 55 mg/g Exemple 4 : Préparation des microgranules immédiats C Pour une quantité de cisplatine de 100 g peser les excipients de montage suivants dans les proportions indiquées PEG 4000 18,0 g 28,0% de l'extrait sec PHARMACOAT 603# 6, 0 g 9, 4% de l'extrait sec CHLORURE DE SODIUM 30, 0 g 46, 7% de l'extrait sec MONTANOX 80# 10,2 g 15,9% de l'extrait sec EAU PURIFIÉE 302,2 g 100% du solvant Formule finale : CISPLATINE 5,4% NEUTRES 20 91, 0% PEG 4000 1, 0% PHARMACOAT 6030 0, 3% MONTANOX 800 0, 7% CHLORURE DE SODIUM 1, 6% TENEUR THEORIQUE 54 mg/g

Exemple 5 : Préparation des microgranules immédiats D Pour une quantité de cisplatine de 100 g peser les excipients de montage suivants dans les proportions indiquées PEG 4000 18, 0 g 28, 0% de l'extrait sec PHARMACOAT 603@ 6, 0 g 9, 4% de l'extrait sec CHLORURE DE SODIUM 30, 0 g 46, 7% de l'extrait sec MONTANOX 80# 10,2 g 15,9% de l'extrait sec EAU PURIFIEE 299, 6 g 100% du solvant Formule finale : CISPLATINE 5,4% NEUTRES 20° 91, 0% PEG 4000 1, 0% PHARMACOAT 603@0, 3% MONTANOX 80@0, 6% CHLORURE DE SODIUM 1, 7% TENEUR THÉORIQUE 54 mg/g Exemple 6 : Préparation des microgranules immédiats E Pour une quantité de cisplatine de 100 g peser les excipients de montage suivants dans les proportions indiquées PEG 4000 18 g 72% de l'extrait sec PHARMACOAT 603@ 6 g 24% de l'extrait sec CHLORURE DE SODIUM 1 g 4% de l'extrait sec EAU PURIFIÉE 240 g 100% du solvant Formule finale : CISPLATINE 5, 5% NEUTRES 20 93, 1% PEG 4000 1, 0% PHARMACOAT 603@ 0, 3% CHLORURE DE SODIUM 0, 1% TENEUR THEORIQUE 55 mg/g

Exemple 7 : Protocole de préparation de microgranules à libération prolongée Preparation de la suspension d'enrobage -Peser les excipients d'enrobage dans les proportions adéquates, Placer le solvant ou le mélange de solvants dans un récipient sous agitation, Ajouter lentement l'agent d'enrobage ou le mélange d'agent d'enrobage, agiter jusqu'a obtenir une solution homogène.

Ajouter lentement les différents additifs, agiter jusqu'à obtenir une suspension homogene, Maintenir l'agitation durant toute la phase d'enrobage.

# Enrobage des microgranules Placer une fraction des microgranules immédiats obtenus selon le protocole de l'exemple 1 dans le matériel retenu pour l'enrobage, Effectuer l'enrobage des microgranules par pulvérisation continue de la suspension décrite ci- dessus, Tamiser la masse de microgranules obtenue,

-Sécher les microgranules à température ambiante, -Répéter cette suite d'opérations le nombre de fois nécessaire à l'obtention de la cinétique désirée.

Exemple 8 : Préparation des microgranules à libération prolongée A1 Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT L 30 D@ 10, 0g Extrait sec d'Eudragit0= 30% de la masse d'EudragitE pesée TRIETHYL CITRATE 0, 3g Extrait sec de TRIETHYL CITRATE = 10% d'extrait sec d'EudragitE EAU PURIFIEE 5, 0g Solvant de dilution = 50% de la masse d'EudragitE pesée Enrober les microgranules immédiats A de l'exemple 2 Formule finale : CISPLATINE 18, 2% NEUTRES 209 59, 1% PEG 4000 3, 3% PHARMACOAT 6030 1, 1% EUDRAGIT L 100-55@ 0, 8% EUDRAGII L 30 D# 10,2% EUDRAGIT NE 30 D# 1,0% TRIETHYL CITRATE 1, 0% TALC 5, 3% TENEUR THEORIQUE 182 mg/g

Exemple 9 : Préparation des microgranules à libération prolongée A2 Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT S 1000 12, 0 g Solution 6, 1 g Extrait sec d'ammoniaque d'ammoniac = 0. 85% concentrée à 17 g/l de l'extrait sec d'Eudragit@ TRIETHYL CITRATE 6, 0 g Extrait sec de TRIETHYL CITRATE = 50% de l'extrait sec d'EudragitE TALC 4, 0 g Extrait sec de TALC = 1/3 de l'extrait sec d'EudragitE EAU PURIFIÉE 35, 9 g Solvant de dilution = 50% de la masse d'Eudragit# pesée Enrober les microgranules immédiats A de l'exemple 2 Formule finale : CISPLATINE 20, 7% NEUTRES 2067, 2% PEG 4000 3,8% PHARMACOAT 603@1, 2% EUDRAGIT S 100# 3,77% AMMONIAC 0, 03% TRIETHYL CITRATE 1, 4% TALC 1, 9% TENEUR THEORIQUE 207 mg/g

Enrober les microgranules immédiats E de l'exemple 6 Formule finale : CISPLATINE 4,5% NEUTRES 20# 75,35% PEG 4000 0, 8% PHARMACOAT 6030 0, 3% CHLORURE DE SODIUM 0, 05% EUDRAGIT L 30 @ 9, 0% TRIETHYL CITRATE 0, 9% TALC 9,1% TENEUR THÉORIQUE 45 mg/g Exemple 10 : Préparation des microgranules à libération prolongée E1 Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT L 30 DO 10, 0 g Extrait sec d'EudragitE = 30% de la masse d'EudragitO pesée TRIETHYL CITRATE 0, 3 g Extrait sec de TRIETHYL CITRATE = 10% de l'extrait sec d'Eudragit EAU PURIFIÉE 5, 0 g Solvant de dilution = 50% de la masse d'EudragitX pesee

Exemple 11 : Préparation des microgranules à libération prolongée E2 Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT NE 30 DO 10, 0 g Extrait sec d'Eudragit# = 30% de la masse d'EudragitE pesée EAU PURIFIÉE 5, 0 g Solvant de dilution = 50% de la masse d'EudragitX pesee

Enrober les microgranules immédiats E de 1'exemple 6 Formule finale : CISPLATINE 5,4% NEUTRES 20# 91,3% PEG 40000, 95% PHARMACOAT 6030 0, 3% CHLORURE DE SODIUM 0 05% EUDRAGIT NE 30 D# 1,0% |TALC 1 0% TENEUR THEORIQUE 54

Exemple 12 : Préparation des microgranules à libération prolongée E3 Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT NE 30 DO 10, 0 g Extrait sec d'Eudragit@ = 30% de la masse d'EudragitE pesée EAU PURIFIÉE 5, 0 g Solvant de dilution = 50% de la masse d'Eudragit@ pesée

Enrober les microgranules immédiats E de l'exemple 6 Formule finale : CISPLATINE 5,3% NEUTRES 20# 89,6% PEG 4000 0, 95% PHARMACOAT @0, 3% CHLORURE DE SODIUM 0,05% EUDRAGIT NE 30 DE 1, 9% TALC 1,9% TENEUR THEORIQUE 53 mg/g

Exemple 13 : Préparation des microgranules à libération prolongée E4 Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT NE 30 DO 10, 0 g Extrait sec d'EudragitE = 30% de la masse d'Eudragit@ pesée TALC 3, 0 g Extrait sec de TALC = 100% de l'extrait sec d'EudragitE EAU PURIFIEE 5, 0 g Solvant de dilution = 50% de la masse d'EudragitX pesee

Peser les excipients d'enrobage suivants dans les proportions indiquées EUDRAGIT L 30 DO 10, 0 g Extrait sec d'Eudragit# = 30% de la masse d'Eudragit@ pesée TALC 3, 0 g Extrait sec de TALC = 100% de l'extrait sec d'Eudragit@ TRIETHYL CITRATE 0, 3 g Extrait sec de TRIETHYL CITRATE = 10% de l'extrait sec d'EudragitX EAU PURIFIEE 5, 0 g Solvant de dilution = 50% de la masse d'Eudragit# pesée Enrober les microgranules immédiats E de 1'exemple 6 Formule finale : CISPLATINE 4, 4 % NEUTRES 20@ 74, 8 % PEG 4000 0, 8% PHARMACOAT 603# 0,3% CHLORURE DE SODIUM 0, 04% EUDRAGIT NE 30 DO 0, 8% EUDRAGIT L 30 DO 8, 56% TRIETHYL CITRATE 0, 9% TALC 9, 4% ) TENEUR THÉORIQUE44 mg/g

Etudes preclinicrues et cliniques Biodisponibilite chez l'animal La biodisponibilit du cisplatine microgranules est comparée soit a celle du cisplatine administre classiquement par voie I. V. (biodisponibilite absolue) soit à celle de la formulation injectable administrée par voie orale (biodisponibilite relative) chez le chien, le rat et le singe après administration unique ou répétée (1 administration quotidienne pendant 7 jours).

Des prises de sang sont effectuées 15 min, 30 min, 1, 2, 4, 8 et 24 heures après l'administration orale ou I. V. du cisplatine. La concentration plasmatique en platine total est déterminée par absorption atomique spectrophotomtrique.

Les tableaux 1 et 2 ci-dessous regroupent la moyenne des résultats obtenus en ce qui concerne la biodisponibilit absolue et la biodisponibilit relative.

Tableau 1 : BIODISPONIBILITE ABSOLUE

A A1 CDDP IV E2 E3 administré per-os Chien-n=3 63, 4% 46, 0% 47, 3% 66, 1% 49, 0% lmg/kg (20 mg/m2) Singe-n=3 17, 3% 11, 4% 8, 0 % 13, 7% 7, 7% lmg/kg Rat-n=3 47, 7% 41, 9% 44, 2% lmg/kg (6 mg/m2)

Tableau 2 : BIODISPONIBILITE RELATIVE PAR RAPPORT A LA FORMULATION INJECTABLE ADMINISTREE PER OS CHEZ LE RAT E El E2 E3 E4 Administration unique 2mg/kg 117% 118% 138% 69% 163% (12 mg/m2) n=4 Administration répétée 0, 5mg/kg/jour 173% 249% 206% 164% 128% (3 mg/m2/jour) pendant 7 jours n=5

Par ailleurs, les concentrations plasmatiques résiduelles en cisplatine sont mesurées chez le rat après administration des formulations décrites dans la présente invention comparativement à la formulation injectable administrée per os à raison de 2 mg/kg/jour (12 mg/m2/jour) pendant 7 jours consécutifs en une prise unique journalière. Les résultats sont illustrés par les courbes présentées en annexe figures 1 et 2.

La figure 1 représente la concentration plasmatique en cisplatine en fonction du temps de cinq groupes de cinq rats auxquels on a respectivement administré 2 mg/kg/jour (12 mg/m/jour) de microgranules E, E2, E3, E4 par voie orale et du cisplatine injectable administré per os, pendant 7 jours consécutifs à raison d'une prise unique par jour. La concentration plasmatique en cisplatine est mesurée 24 heures après chaque administration.

La figure 2 représente la concentration plasmatique en cisplatine en fonction du temps de trois groupes de cinq rats auxquels on a respectivement administré des microgranules B et C par voie orale et du cisplatine injectable administré per os dans les mmes conditions que celles de la figure 1.

L'ensemble de ces résultats montre que : -l'absorption digestive des formulations orales cisplatine microgranules selon l'invention est supérieure à celle de la formulation injectable administrée per os chez l'ensemble des espèces testées, que ce soit après administration unique ou répétée,

-les concentrations plasmatiques en platine mesurées après administration du cisplatine microgranules selon l'invention sont plus prolongées que celles obtenues après administration orale d'une dose équivalente d'une formulation injectable.

Toxicologie aiguë et histopathologie chez le chien de race Beagle traité par des microgranules E2 L'objet de cette étude est de déterminer la dose maximale tolérée (DMT) de cisplatine microgranules E2 chez le chien après l'administration d'une dose unique.

Un total de 6 chiens mâles et 6 chiens femelles est utilise. Des doses de 0, 2, 0, 5, 1, 0 et 2, 0 mg/kg (4, 10, 20 et 40 mg/m2) de cisplatine microgranules par voie orale et une dose de 1 mg/kg (20 mg/m2) de cisplatine de marque Cisplatyl0 par voie intraveineuse sont administrées aux animaux.

La concentration plasmatique en platine est mesurée 30 min, 1, 4 et 24 heures après l'administration.

L'examen histopathologique est réalisé à la fin du 14ème jour.

Les animaux auxquels on a administré 1 ou 2 mg/kg (20 ou 40 mg/m2) de cisplatine microgranules et 1 mg/kg de cisplatine I. V. ont souffert de vomissements.

On a noté des cas de diarrhées chez les animaux traités avec 1 mg/kg de cisplatine I. V. et 2 mg/kg de cisplatine microgranules. La dose orale de cisplatine microgranules 2 mg/kg a également provoqué une perte de poids, une diminution de la prise de nourriture, une diminution de poids de la rate et du thymus, un ulcère duodénal chez un chien et de légères lésions rénales.

L'examen histopathologique montre que presque tous les animaux traités par 1, 0 mg/kg et 2, 0 mg/kg de

cisplatine microgranules souffrent d'hypoplasie de la moelle osseuse modérée fonction de la dose de cisplatine administrée.

La dose orale de cisplatine microgranules 1 mg/kg induit des effets toxiques moindres que la dose de cisplatine I. V. 1 mg/kg. Par ailleurs, ces effets toxiques ne sont pas irreversibles.

Les doses plus faibles de cisplatine microgranules administrées par voie orale sont particulièrement bien tolérées et on ne remarque que des changements de peu d'importance dans l'intestin.

La dose maximale tolérée (DMT) de cisplatine microgranules E2 chez le chien après l'administration d'une dose unique se situe donc entre 1, 0 mg/kg et 2, 0 mg/kg.

La biodisponibilit absolue de platine se situe entre 41 et 77% (moyenne 64%). De plus, la variabilité inter animaux est très faible en ce qui concerne les concentrations plasmatiques maximales.

Toxicologie subaiguë chez le chien de race Beagle après administration de doses répétées de cisplatine microgranules E2 Des doses de zéro (gélules vides), 0, 25 et 1, 0 mg/kg/jour de cisplatine microgranules sont administrées à des chiens mâles (3 par groupe) sur une période de 4 semaines.

Le poids des chiens est contrôlé deux fois par semaine, la prise de nourriture et d'eau est vérifiée une fois par semaine. Des examens biochimiques et hmatologiques du sang ainsi que des urines sont pratiqués avant et après l'expérimentation. Les concentrations sanguines en platine sont mesurées une fois par semaine par absorption atomique spectrométrique.

L'examen histopathologique et macroscopique est réalisé à la fin de l'expérimentation.

Dans le groupe de 1, 0 mg/kg (20 mg/m2) : L'autopsie montre des lésions hémorragiques du pylore, du duodénum et de la région ilo-caecale du colon.

L'examen histopathologique montre que presque tous les animaux traités par 1, 0 mg/kg de cisplatine microgranules souffrent d'hypoplasie de la moelle osseuse prononcée, d'érosion dans la région gastro- intestinale, de dgnration granulaire des tubules rénaux et de lésions ncrotiques des testicules.

Dans le groupe de 0, 25 mg/kg (5 mg/m2) : La tolérance générale est satisfaisante pendant toute la durée du traitement, avec une légère réduction de prise de nourriture. L'examen histopathologique révèle une légère hypoplasie de la moelle osseuse.

Biodisponibilit absolue chez l'homme des microgranules E2 Huit malades ayant un cancer d'une nature sensible au cisplatine reçoivent en fonction de la randomisation une dose unique de 10 mg/m2 de cisplatine soit oralement sous forme de microgranules E2 (gélules à 2, 5 et 5 mg) soit en perfusion intraveineuse de 30 minutes (CISPLATYL BELON).

Les taux plasmatiques de platine total sont mesurés avant l'administration des médicaments, puis 15 min, 30 min, 45 min, lh, lh30, 2h, 4h, 8h, 12h et 24h après l'administration des médicaments.

Huit malades ont reçu les microgranules E2 et huit autres malades ont reçu le CISPLATYL BELLON par voie intraveineuse. La valeur moyenne de la

biodisponibilit absolue de cisplatine microgranules E2 est de 39 %. La variabilité interindividuelle après administration de microgranules E2 est modérée et similaire à celle observée après administration de CISPLATYL I. V. (CV % = 27, 4 % p. o. et 23, 7 % I. V. respectivement.