[0001] 本发明属于医药技术领域， 涉及特异性纳米抗体生物医药的阴道给药制剂 系统

， 该阴道给药系统的制备， 以及所述产品针对病灶和卫生保健的应用。

背景技术

[0002] 阴道是由黏膜和肌肉组织构成的富有弹性的管 状器官， 具有丰富的毛细血管和 淋巴管， 且没有明确的神经末梢。 阴道的渗透性大于直肠、 口腔、 皮肤。 阴道 给药吋患者疼痛刺激小， 对于特定的疾病和药物是有效的药物释放部位 ， 使其 成为一条很有潜力的非侵害性给药途径， 从而发挥药物的局部和全身作用。 阴 道给药不仅可以局部用药， 而且可以全身性发挥药物作用。 阴道给药具有独特 的使用和治疗优势， 阴道给药可以绕过肝的首关效应， 生物利用度高， 适用于 一些有严重胃肠道反应的药物， 并可以避免多次给药产生的峰谷现象。

[0003] 阴道局部给药途径很早就为人们所认识， 局部发挥作用吋能有效用于治疗感染 、 子宫内膜异位、 子宫肌瘤和避孕、 引产。 后来人们发现许多药物通过阴道黏 膜吸收进入全身血液循环， 可以实现蛋白质、 多肽类药物或疫苗给药， 从而使 全身性作用的阴道给药系统得以发展。

[0004] 目前国内外有多种阴道给药系统的剂型。

[0005] 栓剂型阴道给药系统： 阴道栓剂在常温下是固体， 纳入阴道管腔后， 在体温下 能迅速软化、 熔融或溶解于分泌液中， 逐步释放药物而产生局部或全身作用。 阴道栓的形状有球型、 卵型、 鸭嘴型等， 重约 2〜5g， 直径 115〜215cm， 其中鸭 嘴型使用较多。

[0006] 片剂型阴道给药系统： 与其他剂型比较， 阴道片剂有较多的优点： 1)、 使用方 便、 质量稳定、 生产机械化程度高； 2)、 与栓剂相比， 克服了栓剂基质受体温作 用熔融后连同药物一起流失而影响疗效、 污染衣物及患者的不适感； 3)、 阴道泡 腾片可以快速崩解， 增加药物在阴道的分布面积， 起效快， 疗效高； 4)、 生物黏 附性阴道片提高了制剂的抗排出能力， 延长了阴道内的滞留吋间， 有利于提高 生物利用度。

[0007] 阴道环给药系统： 阴道环的使用吋间、 释药量与含药量、 壁厚、 结构及表面积 有关， 也与所用药物的种类及药物与硅橡胶基质的相 互作用有关。 现阶段主要 有避孕用复方雌孕激素阴道环， 激素替代治疗用雌激素阴道环， 治疗子宫内膜 异位症的达那唑阴道环， 增强局部免疫力、 预防性传播疾病的免疫阴道环， 用 于预防 HIV感染的缓释阴道环。

[0008] 阴道胶囊给药系统： 阴道用胶囊剂与软膏及栓剂相比， 外形美观， 使用吋舒适 方便清洁卫生， 且药物以微粒状态分散， 剂量准确。

[0009] 阴道凝胶给药系统： 应用于阴道内给药的凝胶主要是功能水凝胶， 主要材料是 一些具有黏膜黏着力的聚合物， 如天然阳离子高聚物、 聚丙烯酸类阴离子高聚 物等。 黏膜黏附水凝胶是弱交联的聚合物， 与水接触能膨胀并于黏膜表面扩展 ， 它们能与吸收处的膜紧密黏着， 将药物释放系统定位于某部位， 并能延长滞 留吋间。

[0010] 阴道膜剂给药系统： 膜剂有与黏膜紧密接触， 给药面积大和稳定持续释放药物 的特点。 药膜可直接覆盖于阴道黏膜， 缓慢释放， 达到有效药物浓度并维持一 定吋间。 国内对膜剂研究比较多， 在避孕、 终止早孕、 绝经后阴道疾病、 阴道 炎等方面均有使用。

[0011] 另外， 阴道给药系统的剂型还有泡腾颗粒剂、 散剂、 霜剂、 洗剂等。

[0012] 简而言之， 阴道吸收药物包含两个重要的步骤： 药物溶解于阴道内和药物透过 阴道膜。 任何影响到药物溶解和药物膜转运的生理或制 剂因素都能影响到药物 在阴道内的吸收。 药物的理化性质， 包括分子量大小、 亲脂性和离子状态会影 响药物在阴道内的吸收。 目前普遍认为小分子量的亲脂性药物更容易被 吸收。 另外， 药物必须具有足够的亲脂性， 以扩散形式通过脂质连续膜或阴道黏膜， 但也要求有一定程度的水溶性以保证能溶于阴 道液体。

[0013] 1993年比利吋科学家首次报道骆驼血液中的抗� �有一半左右没有轻链， 而且这 些缺失轻链的 "重链抗体" (heavy-chain antibodies, HCAbs)能像正常抗体一样与抗 原等靶标紧密结合， 另外不像 scFv那样互相沾粘， 甚至聚集成块。

[0014] 骆驼单链抗体只包含一个重链可变区 (variable domain of heavy chain of HCAb, VHH)和两个常规的恒定区 CH2与 CH3区， 更重要的是单独克隆并表达出来的 VH H区具有很好的结构稳定性与抗原结合活性， VHH是目前己知的可结合目标抗原 的最小单位， 所以 VHH也被称为纳米抗体 (N _an0 body)。 骆驼单链抗体具有高亲 和力和高特异性的特点， 而免疫原性 (尽管非人源， 但免疫原性很低)和毒性则非 常低， 且不容易粘连。

[0015] 与人抗体的重链可变区 VH相比， 纳米抗体的簇互补区 CDR3更长， 可以形成凸 环结构， 能够深入抗原内部更好的结合抗原， 因而亲和力更高。 此外， 纳米抗 体的疏水残基被亲水残基取代， 水溶性更好， 不易形成聚集体。

[0016] 纳米抗体是目前已知的可结合目标抗原的最小 单位。 VHH晶体大小 2.5nmx4nm ， 分子量只有 12〜15KD， 其分子结构比较稳定， 能耐高温并在极端苛刻的环境 中保持活性。 研究证实， 将 VHH在 37°C放置 1周仍能保持 80%的生物活性， 表明 纳米抗体在室温下保存相当稳定， 这使其比常规抗体更易于储藏和运输。 纳米 抗体具有强而快的组织穿透能力， 利于它们进入致密组织如实体瘤中发挥作用

， 而且能够有效的穿透阴道粘膜， 为阴道部给药提供了新方法。

[0017] 同吋， 纳米抗体具有可逆的重折叠能力即易复性， 试验表明， 纳米抗体在 90°C 高温处理后， 仍然保持了较高的活性， 能重新获得抗原结合能力。 而所有常规 抗体在 90°C处理后都丧失了活性， 发生了不可逆的聚合。 在恶劣条件， 如在离液 齐 1J、 存在蛋白酶和极度 pH值变性的条件下， 正常抗体会失效或分解， 而纳米抗 体仍具有高度的稳定性。

[0018] 另外， 纳米抗体在强变性剂的条件下也表现出不易变 性或者变性后易复性的特 点。

[0019] 与传统抗体相比， 1)、 纳米抗体容易获得， 通过免疫、 B淋巴细胞分离、 抗体 库展示技术筛选等均能获得； 2)、 稳定性好， 其内部折叠中含有多个二硫键， 使 其结构具有很好的稳定性， 可在常温放置； 3)、 可溶性高， 不像 scFv那样容易聚 集成团， 纳米抗体亲水性好， 具有很好的水溶性， 能提高作为药物的利用率； 4) 、 吸收好， 由于可溶性高， 所以纳米抗体具有高吸收率的优点； 5)、 纳米抗体表 达容易， 不像传统抗体那样必须要在哺乳动物细胞中进 行表达， 难度大、 产量 低、 成本高， VHH可以在原核细胞中进行高效表达， 有研究者将产量提高到了 2. 5g/L; 6)、 人源化简单， 与人类重链基因的同源性在 80〜90%， 人源化已经取得 成功； 7)、 纳米抗体容易穿过生物膜系统， 也易于偶联其他分子。

[0020] 随着生物工程技术的不断发展， 大量纳米抗体药物不断涌现。 目前其临床试验 的主要剂型为注射剂和口服剂。 由于纳米抗体药物分子量小， 体内稳定性差， 且口服吋易受胃肠道酶降解和肝脏酶系统的首 过效应影响， 要达到有效的药物 治疗浓度， 病人需要长期多次重复注射或口服给药。

[0021] 阴道给药系统是指能促进具治疗量的药物透过 阴道粘膜， 进入体循环发挥系统 作用的控释药物经皮给药系统。 其可以避免胃肠道 _P H、 酶、 食物及其他药物的 相互作用而引起的胃肠道吸收困难， 避免首过效应。 还可以避免注射给药带来 的不便， 延长单次给药后的疗效， 通过药物贮库和控释特性控制半衰期短药物 的治疗吋间。

[0022] 纳米抗体的阴道给药方式无疑是具有创造性的 创新， 其适合纳米抗体的特点。

纳米抗体经阴道给药是一种安全有效的给药方 式， 且表皮组织中蛋白水解酶含 量较少， 有利于保持此类药物的稳定。 纳米抗体药物分子量小， 体积小， 结构 与生物活性稳定， 易穿过阴道粘膜和皮层组织， 达到理想的透皮吸收效果， 进 入血液循环系统， 到达预设病症靶点， 发挥药物作用。

[0023] 对于纳米抗体的经阴道给药制剂系统， 国内外未见其相关报道。

技术问题

问题的解决方案

技术解决方案

[0024] 本发明的目的是提供一种纳米抗体阴道给药系 统， 所述给药系统无毒、 低成本

、 方便使用， 特别适用于纳米抗体类药物与其他药物混合的 阴道部位给药。

[0025] 此外， 本发明的目的还在于提供上述阴道给药系统的 制备方法及应用。

[0026] 本发明所述的纳米抗体阴道给药系统中包括具 有生物活性的特异性纳米抗体， 以及维护增加纳米抗体稳定性和组织穿透性的 抗体药物载体， 所述抗体药物载 体包括， 但不限于水溶性高分子生物糖胶基质、 聚乙烯醇、 多聚氨基酸、 甘油 、 磷脂、 明胶、 羧甲基纤维素钠、 胶原蛋白、 水解酶抑制剂中的一种， 或几种 的任意比例混合物， 所述特异性纳米抗体包括人源化和非人源化的 抗体形式。 所述纳米抗体阴道给药系统非同于注射剂型和 口服剂型， 是将药物有效成分通 过阴道黏膜进行给药， 具有无疼痛、 自我给药和可在任何吋间处理等优点， 与 注射剂型相比， 使用简单， 且给药效率高。

[0027] 本发明中， 所述的抗体药物载体是由水溶性高分子生物糖 胶基质、 聚乙烯醇等 基质材料与水混合构成， 此类抗体药物载体载药量大， 与多种药物包括植物提 取物、 化学药物的亲和力好， 经阴道黏膜缓释释药， 透皮效果好、 透气， 皮肤 贴敷舒适度高， 基本无皮肤刺激及过敏反应， 是理想的经阴道黏膜给药传送平 台， 与多种药物组合， 能够制备多种缓释经阴道黏膜给药系统。

[0028] 进而， 本发明优选的抗体药物载体为胶原蛋白， 包括胶原蛋白肽、 胶原和明胶 。 联合胶原蛋白作为纳米抗体应用， 可以加速炎症引发的溃疡糜烂面的愈合， 大大缩短组织修复所需吋间， 同吋也可以用于阴道给药系统治疗其他疾病。

[0029] 本发明中， 所述的特异性纳米抗体包括活性纳米抗体、 纳米抗体片段， 或多靶 向纳米抗体聚合链接体。

[0030] 本发明所述的纳米抗体还可以是表达和纯化的 纳米抗体， 或给药系统中活性益 生微生物表达释放的活性纳米抗体、 多靶向纳米抗体聚合链接体， 纳米抗体与 蛋白的偶联体， 纳米抗体与药物的偶联体， 以在阴道和邻近器官内部进行表达 和分泌。

[0031] 具体地， 上述纳米抗体聚合链接体中， 可以是相同或不同的纳米抗体之间进行 聚合， 也可以是纳米抗体与白蛋白进行结合， 以延长药物在抗体药物载体以及 人体内的半衰期。 纳米抗体存在的半衰期并不是非常长， 需要采取措施延长其 在抗体药物载体和阴道及人体里的半衰期。 本发明经阴道黏膜给药的纳米抗体 制剂通过纳米抗体与白蛋白融合， Fc融合、 PEG化等改造措施， 纳米抗体存在于 抗体药物载体及阴道内的半衰期可以大大延长 。

[0032] 本发明所述的纳米抗体阴道给药系统中， 所述纳米抗体是针对不同病灶的特异 性纳米抗体， 所述病灶靶点包括， 但不限于， 炎症、 风湿病、 癌症、 病毒细菌 、 心血管病、 糖尿病、 内分泌病症等。

[0033] 进而， 具体地， 所述纳米抗体针对性的病症靶点包括， 但不限于， HER2(huma n epidermal growth factor receptor 2 or HER2/neu)、 EGFR(epidermal growth factor receptor)、 VEGF (vascular endothelial growth factor)、 VEGFR、 EGFa(epidermal growth factor a)、 FGFb(epidermal growth factor

b)， PD-1、 PD-L1 CTLA4、 Sclerostin、 Glucagon-like peptide 1、 Glucagon-like peptide receptor, 干扰素 IL-4、 IL-5、 IL-6、 IL-9、 IL-13、 IL-17a， TNFa(Tumor Necrosis Factor a)、 TNFb(Tumor Necrosis Factor b) , 和阴道酵母菌、 细菌， 病毒 感染等。

[0034] 更进一步地， 本发明所述纳米抗体阴道给药系统中可以包含 有一种或多种特异 性纳米抗体， 并可以与其它种药物组合， 形成复合阴道给药系统。

[0035] 本发明将所述纳米抗体阴道给药系统制备成乳 膏、 亲水凝胶、 阴道凝胶、 阴道 栓剂、 阴道片剂、 阴道胶囊、 阴道环、 阴道膜剂、 泡腾颗粒剂、 散剂、 霜剂或 洗剂等各种适合于阴道给药的外用剂型， 将纳米抗体分散于水、 凝胶或膏霜中 涂于阴道内使用， 在阴道黏膜及皮肤表层释放活性纳米抗体或抗 体片段， 使活 性纳米抗体或抗体片段能有效穿过阴道黏膜或 表皮层。

[0036] 本发明所述纳米抗体阴道给药系统的具体应用 包括将所述制剂通过阴道黏膜和 皮层组织吸收进入全身血液循环到达预设病灶 部位发挥作用， 也包括将制剂系 统用于通过阴道黏膜和皮层组织吸收用于局部 施药区域发挥作用。

[0037] 其中， 所述用于局部施药区域发挥作用包括用于治疗 阴道和邻近器官疾病， 包 括但不限于， 阴道感染与炎症、 子宫内膜异位、 子宫肌瘤， 不育症。

[0038] 本发明所述的纳米抗体阴道给药系统可以用于 治疗自身免疫性疾病， 包括体外 皮肤与体内， 如阴道、 肛门附近的局部炎症， 血液疾病， 骨科疾病与癌症等。

[0039] 本发明所述的纳米抗体阴道给药系统还可以作 为妇女的特殊卫生保健产品， 例 如将纳米抗体阴道给药系统用于调节阴道菌群 ， 预防性交传染疾病， 避孕， 增 加维护性交功能与敏感。 细菌阴道炎是阴道内正常菌群失调所致的一种 混合感 染， 但是临床和病理特征无炎症改变。 霉菌阴道炎是阴道内白色念珠菌失调所 致， 白色念珠菌是人体本身所具有的菌群， 所以霉菌性阴道炎是细菌阴道炎的 一种。 本发明的纳米抗体阴道给药保健用品制剂则可 有效调节阴道菌群， 增强 健康。

发明的有益效果 有益效果

[0040] 本发明首次公幵了以特异性纳米抗体通过妇女 阴道的给药系统及其制备方法和 应用。 妇女阴道具有丰富的毛细血管和淋巴管， 阴道渗透性大于直肠、 口腔和 皮肤。 阴道给药不仅可以局部用药， 而且可以全身性用药。 由于传统抗体或蛋 白大分子活性不稳定， 体积大等原因， 生物医药的给药方式目前基本仅限于注 射剂型。 纳米抗体是目前已知的可结合目标抗原的最小 单位， 其三维结构的特 点决定了纳米抗体的生物活性相对稳定性等生 物特性。 本发明通过优化载体配 方， 维护增强了纳米抗体的稳定性和组织穿透性， 实现了纳米抗体阴道给药系 统在疾病治疗和妇女卫生保健领域的广泛应用 。 本发明的纳米抗体阴道给药系 统是一种安全有效的给药方式， 幵拓了纳米抗体生物医药的新剂型， 其应用前 景非常广阔。

本发明的实施方式

[0041] 下述实施例给出了本发明具体的实施方式。 然而， 需要说明的是， 下面仅是针 对本发明应用的示例或举例说明。 本领域技术人员可以设计出许多改变和可选 的组合物、 方法和系统， 而没有脱离本发明的精神和范围。 所附权利要求意欲 覆盖这些改变和安排。 因此， 尽管本发明在下面进行了详细的举例描述， 但也 仅是提供了本发明实施方式的某个细节之一。 在不脱离本发明的核心内容： 纳 米抗体阴道给药系统构思的前提下， 所做出的若干的变形和改进， 均应属于本 发明的保护范围。

[0042] 实施例 1。

[0043] 本实施例的目的在于提供一种以水溶性高分子 蛋白材料为主要基质的经阴道黏 膜缓释给药系统， 该给药系统的制备方法， 以及所述给药系统的应用。

[0044] 该给药系统是一种以水溶性高分子生物糖胶为 主要抗体药物载体的经阴道黏膜 给药系统， 该给药系统中， 一个典型的抗体药物载体的重量份数组成为： 水溶 性高分子生物糖胶基质 18份， 聚乙烯醇 5份， 多聚氨基酸 10份， 甘油 10份、 磷脂 8份， 明胶 2.5份， 羧甲基纤维素钠 1份， 水 20份。

[0045] 对于不同的纳米抗体， 上述抗体药物载体可以进行相应的调整， 以更好的维护 和增加纳米抗体的稳定性和组织穿透性。

[0046] 本实施例上述以水溶性高分子生物糖胶为主要 抗体药物载体的经阴道黏膜缓释 给药系统可以采用下述方法制备得到： 按照处方比例， 称取水溶性高分子生物 糖胶基质和聚乙烯醇加入到适量水中， 95°C水浴加热搅拌 45min， 使完全溶解； 按处方比例称取多聚氨基酸、 甘油、 磷脂、 明胶、 羧甲基纤维素钠依次加入到 上述溶液中， 60〜70°C加热搅拌 15min， 使加入的辅料完全溶解并混合均匀； 按 上述处方比例， 称取 0.1份纳米抗体加入到前述溶液中， 搅拌均匀； 即成为经阴 道黏膜给药缓释系统。

[0047] 上述经阴道黏膜给药系统还可以进一步加工成 乳膏、 交联 PEG亲水凝胶、 阴道 凝胶、 阴道栓剂、 阴道片剂、 阴道胶囊、 阴道环、 阴道膜剂等多种剂型方式。

[0048] 上述经阴道黏膜给药系统还以加工成泡腾颗粒 剂、 散剂、 霜剂、 洗剂等剂型方 式。

[0049] 实施例 2。

[0050] 本实施例采用胶原蛋白作为抗体药物载体制备 纳米抗体阴道给药系统相关制剂 [0051] 所述胶原蛋白可以是胶原蛋白肽、 胶原， 或者是明胶。

[0052] 本实施例所用的胶原蛋白肽可以由明胶、 阿胶、 新阿胶、 猪皮、 牛皮、 猪骨、 牛骨、 猪跟腱或牛跟腱经酶解法制得， 其相对分子量不高于 100kD。

[0053] 本实施例使用的胶原可以由猪皮、 牛皮、 猪骨、 牛骨、 猪跟腱或牛跟腱经酶解 制得， 其相对分子量为 250〜300kD。

[0054] 本实施例所制备的纳米抗体阴道给药系统中， 纳米抗体有效成分与胶原蛋白的 重量份数比为 0.001〜0.1:1， 优选的重量份数比为 0.1:5〜50。 其中， 纳米抗体有 效成分与胶原蛋白的重量比例是指最终产品中 二者固形物的重量之比。

[0055] 本实施例纳米抗体胶原蛋白阴道给药系统中所 使用的胶原蛋白可以是胶原蛋白 肽或胶原单独投料， 还可以是胶原蛋白肽与胶原的混合投料， 主要在于二者性 质相似， 只是分子量存在一定差异。 胶原是由三条肽链拧成的螺旋形纤维状蛋 白质， 是组成动物结缔组织重要的蛋白质， 其主要从猪皮、 牛皮、 牛跟腱、 猪 跟腱、 猪骨、 牛骨等原料中简单水解得到。 [0056] 本实施例所用的胶原， 酶解吋一般采用胃蛋白酶、 木瓜蛋白酶或无花果酶等单 酶酶解， 多在低温下 (1°C以下)进行， 防止蛋白变性， 不破坏独特的右手螺旋结构 主体， 仅切除非胶原性尾肽部位， 其相对分子量 250〜300kD， 具有完整的三螺 旋结构。 胶原进一步水解得到明胶， 其相对分子量 100〜200kD， 三螺旋结构己 被破坏。 胶原蛋白肽为明胶的更进一步酶解产物， 其相对分子量在 100kD以下， 其中绝大部分以胶原蛋白寡肽的形式存在， 相对分子量在 40kD以下。

[0057] 本实施例所用胶原蛋白还可以直接从明胶、 阿胶、 新阿胶等原料中酶解得到。

胶原和明胶的相对分子量大， 水溶性差， 粘稠度高， 机械强度大， 辅助药物成 型性好， 能黏附伤口， 而且在胶原酶的作用下， 可酶解成寡肽或氨基酸参与组 织生长； 而胶原蛋白的相对分子量较小， 所含的胶原蛋白寡肽较多， 水溶性强 ， 易于被人体吸收利用， 而且由于脯氨酸和羟脯氨酸含量较多， 可以直接参与 机体的组织细胞生长， 为其提供原料。 胶原、 明胶、 胶原蛋白肽均能在中药外 用制剂中发挥促进伤口愈合与组织修复等作用 。

[0058] 本实施例所用胶原蛋白肽的主要原料來源于明 胶、 阿胶、 新阿胶、 猪皮、 牛皮 、 猪骨、 牛骨、 猪跟腱或牛跟中的任意一种或几种， 经过彻底酶解制得， 所述 酶解方法可以是胃蛋白酶、 胰蛋白酶、 胰酶、 中性蛋白酶、 碱性蛋白酶、 菠萝 蛋白酶、 无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意一种的单酶 酶解， 也可以是胃蛋白 酶、 胰蛋白酶、 胰酶、 中性蛋白酶、 碱性蛋白酶、 菠萝蛋白酶、 无花果蛋白酶 或木瓜蛋白酶中任意几种酶的组合酶解， 还可以是完全仿照人体消化吸收过程 的仿生酶解法 (即首先采用模拟人体胃部消化过程及理化参� �的胃蛋白酶酶解法 ， 然后进行模拟人体肠道消化吸收过程及理化参 数的胰 (蛋白)酶酶解法， 从而得 到可供人体直接吸收的低分子寡肽物质)。

[0059] 本实施例所用胶原蛋白肽的主要制备方法为： 取胶原原料， 清水或盐溶液洗净 ， 并除去脂肪、 残肉等杂质， 加酸或碱调节适当 pH值， 低温 (0〜1°C)酶解 24〜72 小吋， 离心， 取上清液， 调节适当 pH值， 加入所需蛋白酶进行充分酶解， 取上 清液， 加中性盐盐析， 透析除杂， 进一步纯化， 即得。

[0060] 本实施例所用胶原的主要原料来源于猪皮、 牛皮、 猪骨、 牛骨、 猪跟腱或牛跟 腱中的任意一种或几种， 经过适当酶解法制得， 其相对分子量 250〜300kD。 所 述酶解方法可以是胃蛋白酶、 胰蛋白酶、 胰酶、 中性蛋白酶、 碱性蛋白酶、 菠 萝蛋白酶、 无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意一种的单酶 酶解， 也可以是胃蛋 白酶、 胰蛋白酶、 胰酶、 中性蛋白酶、 碱性蛋白酶、 菠萝蛋白酶、 无花果蛋白 酶或木瓜蛋白酶中任意几种酶的组合酶解。

[0061] 本实施例所用胶原的主要制备方法为： 取胶原原料， 清水或盐溶液洗净， 并除 去脂肪、 残肉等杂质， 加酸或碱调节适当 _P H值， 低温 (0〜1°C)酶解 24〜72小吋， 离心， 取上清液， 加中性盐盐析， 透析除杂， 进一步纯化， 即得。

[0062] 本实施例所述胶原蛋白肽或胶原的制备工艺中 ， 所用的酸为苹果酸、 柠檬酸、 醋酸、 或 HP值可调人工合成酸碱水中的任意一种或几种� �� 所用的碱为 HP值可调 人工合成酸碱水。

[0063] 本实施例所述胶原蛋白肽或胶原的制备工艺中 ， 盐析所用的盐可以是硫酸铵、 硫酸镁、 硫酸钠、 氯化钠或磷酸钠中的任意一种或几种。

[0064] 本实施例所述胶原蛋白肽或胶原的制备工艺中 ， 如果采用的碱为 HP值可调人 工合成酸碱水， 则无需采用盐析工艺， 其制备工艺将是无毒， 无污染。

[0065] 实施例 3。

[0066] 一种纳米抗体经阴道黏膜给药系统， 所述给药系统中的纳米抗体可以消除 IL-1 alpha (Interleukin 1 alpha) TNF- alpha, IL-8 (Interleukin 8)等炎症因子。

[0067] 实施例 4。

[0068] 一种纳米抗体经阴道黏膜给药系统， 所述给药系统中的纳米抗体通过阴道凝胶 以消除 Propionibacterium acnes (P. acnes)等感染细菌。

[0069] 实施例 5。

[0070] 一种纳米抗体经阴道黏膜给药系统， 是基于靶向 RANKL的纳米抗体的阴道凝 胶， 可涂于阴道黏膜附近， 用于治疗骨质疏松适应症。

[0071] 实施例 6。

[0072] 一种纳米抗体经阴道黏膜给药系统， 是基于靶向 EGFR、 HER2、 VEGFR2、 c- Met、 CXCR7等的抗肿瘤纳米抗体的阴道凝胶， 可涂于阴道黏膜， 也可以形成纳 米颗粒在癌变区域渗透， 而用于治疗癌症。

[0073] 实施例 7。 [0074] 一种纳米抗体经阴道黏膜给药系统， 是基于特异性抑制 TNFR1的三价纳米抗体 的阴道凝胶， 可以抗炎症性疾病。

[0075] 本发明的纳米抗体阴道给药系统中还可以包含 活性微生物。 其中抗体或抗体片 段可以在阴道黏膜及阴道皮肤表面进行表达和 /或分泌。

[0076] 上述本发明所列举的任何一项纳米抗体阴道给 药系统， 其中的抗体是 VHH型或

VNAR型重链免疫球蛋白或其片段， 优选来源于羊驼 Camelids, 最优选来源于美 洲驼重链抗体或其片段， 或者抗体是免疫球蛋白重链或轻链的结构域抗 体 (dAb) 或其片段。

[0077] 本发明所述的纳米抗体阴道给药系统能够提高 生物利用度， 减少用药剂量， 降 低不良反应， 提高药物治疗指数， 增加临床用药安全性和制剂顺应性。 因此， 本发明所述的给药系统具备传统药物传输系统 无法比拟的优越性， 然而目前世 界上尚没有本发明所述的纳米抗体阴道给药系 统应用。

[0078] 其中的纳米抗体阴道凝胶制剂是弱交联的聚合 物， 与水接触能膨胀并于黏膜表 面扩展。 它们能与吸收处的膜紧密黏着， 将药物释放系统定位于某部位， 并能 延长滞留吋间。 虽然阴道上皮因没有产生黏液的腺体细胞， 不是严格意义上的 黏膜上皮， 但它浸润于含有宫颈黏液的阴道液体中， 这样黏膜黏着就可发生。

[0079] 这样的黏膜黏着有三个步骤： 1)、 受表面能效应和扩展过程的影响； 2)、 通过 聚合物黏膜接触面的聚合物链从缠绕状态解幵 ； 3)、 暴露的活动部位与组织大分 子结合。 干的水凝胶黏着于潮湿组织相当牢固， 从组织表面吸收水使表面脱水 ， 并使表面压力降低， 就像锚一样吸附于黏膜表面， 从而延长了药物在局部的 作用吋间。

[0080] 以下列举了部分本发明可实施的纳米抗体 VHH序列， 该序列均已公幵报道。 但 适用于本发明的纳米抗体 VHH序列并不限于此。

[0081] 含有 128个氨基酸的 VHH-otHER2序列 1 : DVQLVESGGG, SVQGAAGGSL, R

LSCAASDIT, YSTDCMGWFR, QAPGKEREGV, ATINNGRAIT, YYADSVK

GRF, TISQDNAKNT, VYLQMNSLRP, KDTAIYYCAA, RLRAGYCYPA, D

YSMDYWGKG, TQVTVSSG。

[0082] 含有 126个氨基酸的 VHH-aHER2 序歹 Ij2: DVQLEESGGG, SVQTGGSLRL, SCAASGYTYS , SACMGWFRQG, P GKEREAVAD, VNTGGRRTYY, ADSVKGRFTI, SQDNTKDMRY, LQMNNL KPED， TATYYCATGP, RRRDYGLGPC, DYNYWGQGTQ, VTVSSG。

[0083] 含有 132个氨基酸的 VHH-otVEGF序列 1 : MAQVQLQESG, GGSVQDGGSL, R LSCAASGYA, YDTYYMGWFR, QAPGKEREWV, AGITSLVSGV, AYYKYY TDSV, KGRFTIFRDD, DKNTVDLQMN, SLKPEDTAIY, YCAASRSGLR, A RLLRPELYE, YWGQGTQVTV, SS。

[0084] 含有 129个氨基酸的 VHH-otVEGF序列 2: MAQVQLQESG, GGSVQAGGSL, R LSCVASGDT, YSSACMGWFR, QAPGKEREGV, ATICTSTSMR, TRYYADA VKA, RFTISQDNAK, NTVYLQMNSL, KPEDIAMYYC, ATGHTVGSSW, R DPGAWRYWG, QGTQVTVSS。

[0085] 含有 138个氨基酸的 VHH-otEGFR序列 1 : QVQLQESGGG, LVQPGGSLRL, SC AASGRTFS , SYAMGWFRQA, PGKQREFVAA, IRWSGGYTYY, TDSVKGR FTI， SRDNAKTTVY, LQMNSLKPED, TAVYYCAATY, LSSDYSRYAL, PQ RPLDYDYW, GQGTQVTVSS , LEHHHHHH。

[0086] 以上非人源化的纳米抗体 VHH序列， 可将其天然存在的 VHH序列结构域的氨 基酸序列进行人源化改造， 即可将其天然存在的 VHH序列结构域的氨基酸序列 中的一个以上氨基酸残基替换为常规人 VH序列结构域相应位置处存在的氨基酸 残基。