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Title:
NATURAL BIOSTIMULANT COMPOSITION FOR IMPROVING AGRICULTURAL PRODUCTION AND METHOD FOR APPLYING AND USING SAME TO INCREASE THE NUMBER OF ROOTS IN PLANTS
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2018/119526
Kind Code:
A1
Abstract:
The invention relates to a natural biostimulant composition for improving agricultural production, specifically to a biostimulant composition for plants which contains lipoic acid and which is unknown in the prior art, and to a method for applying and using same to improve agricultural production, which allows the number of roots of the plant to be increased, thereby allowing better use of the nutritional value of soils. In this way, agricultural production in respect of the plant is maintained or even improved, without the need for excessive application of fertilisers and/or with more efficient use of water.

Inventors:
HANDFORD MICHAEL, Geoffrey (Larraín 7239, La ReinaSantiago, 00, 78500, CL)
ARAYA FLORES, Jorge Andrés (Roberto Del Río 1171, ProvidenciaSantiago, 9, 75035, CL)
Application Number:
CL2017/000041
Publication Date:
July 05, 2018
Filing Date:
December 22, 2017
Export Citation:
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Assignee:
UNIVERSIDAD DE CHILE (Diagonal Paraguay 265, piso 14, Santiago 15, 83300, CL)
International Classes:
A01N43/26; C07D339/04
Foreign References:
US20040133938A12004-07-08
CN102250943A2011-11-23
US20040259732A12004-12-23
US6749875B22004-06-15
Other References:
DAN, Y. ET AL.: "Lipoic acid- a unique plant transformation enhancer", IN VITRO CELLULAR AND DEVELOPMENTAL BIOLOGY-PLANT, vol. 45, no. 6, 2009, pages 630 - 638, XP055443653
Attorney, Agent or Firm:
COOPER CORTÉS, Rodrigo (Alcántara 200, oficina 402Las Condes, Santiago 50, 75501, CL)
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Claims:
REIVINDICACIONES

1. Composición bioestimulante para plantas CARACTERIZADA porque comprende ácido lipoico.

2. La composición bioestimulante de la reivindicación 1 CARACTERIZADA porque comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 10 nM.

3. La composición bioestimulante de la reivindicación 2 CARACTERIZADA porque comprende comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 50 nM.

4. La composición bioestimulante de la reivindicación 3 CARACTERIZADA porque comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 00 nM.

5. La composición bioestimulante de la reivindicación 4 CARACTERIZADA porque comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 1 μΜ.

6. La composición bioestimulante de la reivindicación 5 CARACTERIZADA porque comprende de al menos 5 μΜ.

7. La composición bioestimulante de la reivindicación 6 CARACTERIZADA porque comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 10 μΜ.

8. Uso de la composición bioestimulante de la reivindicación 1 CARACTERIZADO porque es útil para incrementar el número de raíces en las plantas.

9. Uso de la composición bioestimulante de la reivindicación 1 CARACTERIZADO porque es útil para evitar el daño de la planta.

10. Uso de la composición bioestimulante de la reivindicación 1 CARACTERIZADO porque es útil para aumentar la productividad de la planta.

11. Uso de la composición bioestimulante de la reivindicación 1 CARACTERIZADO porque es útil para aumentar el número de frutos de la planta.

12. Uso ,de la composición bioestimulante de la reivindicación 1 CARACTERIZADO porque es útil para aumentar el peso del fruto de la planta.

13. El uso de la composición bioestimulante de la reivindicación 8 CARACTERIZADO porque es útil para incrementar el número de raíces en una planta de tomate.

14. Método para aumentar el número de raíces en plantas en cultivo CARACTERIZADO porque comprende embeber las semillas de plantas en un medio de cultivo suplementado con la composición bioestimulante para plantas de la reivindicación 1.

15. Método para aumentar el número de raíces en plantas en cultivo CARACTERIZADO porque comprende asperjar plantines ya germinados con la composición bioestimulante para plantas de la reivindicación 1.

16. El método de la reivindicación 1 1 CARACTERIZADO porque además el medio de cultivo donde crecen los plantines está suplementado con la composición bioestimulante para plantas de la reivindicación 1.

17. Método para propagar in vitro cultivos de plantas CARACTERIZADO porque comprende cultivar las plantas con un medo de cultivo suplementado con la composición bioestimulante de la reivindicación 1.

18. Método para hacer crecer plantas en condiciones de baja disponibilidad de nutrientes o menor irrigación CARACTERIZADO porque comprende cultivar las plantas con un medo de cultivo suplementado con la composición bioestimulante de la reivindicación 1.

Description:
u c PRODUCCIÓN AGRÍCOLA, MÉTODO DE APLICACIÓN Y DE SU USO PARA INCREMENTAR EL NÚMERO DE RAÍCES EN LAS PLANTAS

Campo de la Invención

La presente invención se relaciona con el área de la agricultura. En particular, se refiere a una composición bioestimulante natural para el mejoramiento de la producción agrícola. Aún más específicamente la composición bioestimulante para plantas comprende ácido Iipoico, método de aplicación y uso para mejorar la producción agrícola ya que permite aumentar el número de raíces de la planta.

Estado del Arte

Actualmente, uno de los problemas de la agricultura es el uso excesivo de fertilizantes para mejorar la calidad de los suelos. Junto con esto y debido al cambio climático que se está experimentando, cada vez existe un menor acceso a agua para regadío.

Existen diferentes tipos de bioestimulantes en el mercado, entre los que encuentran combinaciones de hormonas vegetales, micro y macro nutrientes, y extractos de microorganismos.

Entre los documentos de patentes se puede señalar US2004133938 que se refiere a un medio de cultivo para tejidos de planta diseñado para obtener más eficientemente células de plantas transgénicas y plantas regeneradas a partir de éstas. El medio contiene ácido Iipoico o un análogo del mismo. La invención requiere introducir ácido nucleico en el genoma de la célula vegetal para ello se introduce ácido Iipoico o un análogo del mismo en el medio de transformación. Es decir, se contacta la célula vegetal, tejido o explante con el medio de transformación, mejorando la eficiencia de la transformación y/o regeneración y/o sobrevivencia de la célula vegetal, tejido o explante. El medio de transformación puede ser líquido, sólido o semi-sólido. El ácido Iipoico puede ser incluido en el medio de transformación en cualquier etapa del proceso de transformación, esto es, como medio de inoculación, co-cultivo, selección, inducción de brotes, elongación, regeneración o enraizamiento. La inclusión de ácido Iipoico demostró ser útil como un medio de adición para plantas mono o dicotiledóneas.

GB761545 se refiere a una composición que mejora las respuestas de las plantas por ejemplo, estimula el crecimiento de raíces, y que comprende al menos una sal de un ácido mineral fuerte con amonio, una alquil amina, un alcanol amina o una mezcla

HOJA DE REEMPLAZO (Regla 26) alquil-alcanol amina, y al menos un compuesto soluble en agua donde la parte aniónica tiene una configuración exo-cis de formula

La sal mineral puede ser una sal de ácido sulfúrico, clorhídrico, nítrico o fosfórico y las sales pueden ser de fosfato di- o monohidrogeno amonio; amonio, sulfatos mono-, di- o trialquilamonio y sulfatos, cloruros, nitratos, fosfatos de estructuras específicas. La proporción sal mineral a compuesto soluble en agua puede variar de 1 : 10 a 20: 1. La composición puede ser mezclada con portadores líquidos y sólidos. La mezcla puede ser disuelta, dispersada, suspendida o emulsificada en el(los) portador(es) liquido(s) y usada como spray. También se puede agregar agentes humectantes, fungicidas, insecticidas, bactericidas, entre otros.

GB760687 se refiere a composiciones para el crecimiento de plantas y que sirven como agentes de respuesta en la planta induciendo una desviación de la fisiología normal de la misma, es decir, aceleran, desaceleran o alteran los procesos de crecimiento de la planta, la absorción de agua y/o nutrientes, brotes, maduración, o lo similar. Como planta se entiende todas las porciones de una planta normal, tales como raíces, hojas, flores, semillas, frutas, entre otras. La composición como componente activo al menos un compuesto que en presencia de agua produce aniones de configuración exo-cis de formula:

y como adyuvante, un vehículo sólido finamente dividido o portador visco-liquido o pastoso o un agente dispersante, emulsificante o humectante. Los compuestos son monoesteres del ácido 3,6-endoxohexahidroftálico, lo que son inusualmente versátiles, tanto respecto a los tipos de respuesta que son capaces de inducir en la planta como en los tipos de plata sobre las que pueden ejercer efectos útiles y también sobre las formas en que pueden ser usados. La composición también permite el control de follaje y mejora la calidad de los cultivos en todos sus aspectos. UA67307 se refiere a un estimulante para el crecimiento de plantas que incluye potasio soluble en agua, humatos y fulvatos, micronutrientes, medios de cultivo para producir microorganismos de compuestos biológicamente activos. Es suplementado con macronutrientes nitrógeno, fósforo, potasio y azufre, ácido salicílico. Los micronutrientes son quelados y los compuestos que producen microorganismos pueden ser fitohormonas.

US2010248314 se refiere a un proceso para producir compuestos de formula (1)

Ar (CH 2 )„N¾ *- Ar (C¾)„— HCO(C¾) 2 COOH

(2) (1)

El compuesto específicamente es amida de ácido succínico o una sal del mismo, y se produce al cultivar un microorganismo del género Pseudomonas que es capaz de sintetizarlo en un medio de cultivo que contiene el compuesto de formula (2).

Ar-(C¾)„N¾

GB760112 se refiere a un método para la formación de plantas a partir de tipos de células crecidas en cultivos que pueden ser transformadas y continuar creciendo por periodos largos de tiempo, incluso indefinidamente. La producción de células se relaciona con 70 tipos a gran escala bajo condiciones controladas. El método comprende cultivar tejido vegetal sumergido o aireado en cultivo líquido. En este proceso de producciones de masas finamente divididas de células vegetales se inocula un medio acuoso nutriente con células vegetales creciendo vigorosos e indiferenciadas y se mantiene a las mismas sumergidas, agitadas con aireación en presencia de estimulantes de crecimiento de células tipo embriónica. El inoculo puede ser tejido de planta infectado. Opcionalmente, se puede agregar una hormona de crecimiento. El medio nutriente puede contener un carbohidrato, vitaminas, elementos trazas junto con iones potasio, magnesio, calcio, nitrato, fosfato y sulfato. El método permite la producción de cumarina.

Así el arte previo no revela una composición bioestimulante natural para el mejoramiento de la producción agrícola que comprenda ácido lipoico. ln Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant December 2009, 45:630 Lipoic acid - an unique plant transformation enhancer, Yinghui Dan, Charles L. Armstrong, Jimmy Dong, Xiaorong Feng, Joyce E. Fry, Greg E. Keithly, Brian J. Martinell, Gail A. Roberts, Lori A. Smith, Lalaine J. Tan, David R. Duncan, Biotechnology First Online: 24 June 2009 DOI: 10.1007/s11627-009-9227-5, se refiere a un medio de cultivo con ácido lipoico (LA) en el proceso de transformación de Agrobacterium para 4 especies (soya, tomate, trigo, algodón) de cultivo donde ha mejorado significativamente la transformación.

Antioxidant and anti-stress compounds improve regrowth of cryopreserved Rubus shoot tips Esther E. Uchendu, Magfrat Muminova, Sandhya Gupta, Barbara . De primera lectura Online, 09 de Junio de 2010, DOI: 10.1007/811627-010-9292-9, se refiere al re-crecimiento de plantas después de criopreservación. Menciona que el estrés oxidativo es una causa potencial de daño en los tejidos vegetales. Enseña que compuestos antioxidantes y anti-estrés pueden mejorar el recrecimiento al prevenir o reparar el daño. Ácido lipoico (LA), glutation (GSH), betainglicina (GB), y polivinilpirrolidona (PVP) fueron probadas usando un protocolo de soluciones de vitrificación vegetal (PVS2). Para ello, dos cultivares de arándano crecidos in vitro fueron aclimatados en frió y preservados en nitrógeno liquido (LN). Se agregaron los compuestos antioxidante y antiestrés en 4 etapas: pretratamiento, carga, surgimiento y recrecimiento. 3 de los 4 compuestos mejoraron significativamente el crecimiento. El recrecimiento dobló al recrecimiento contra control. LA (4-8 mM) produjo el mayor recrecimiento en pretratamiento, carga y surgimiento, y surgimiento para la variedad 'Chehalem' y en todas las etapas para la variedad 'Hull Thornless'. También hubo recuperación mejorada en todas las etapas con GSH (0.16 mM) y GB (10 mM). PVP no tuvo impacto o tuvo impacto negativo. El estudio muestra que agregar compuestos antioxidantes y anti-estrés mejora el recrecimiento de los cultivos después de la criopreservación, lo que hace recomendable incluirlos como parte de los protocolos de criopreservación estándar.

Oxford Journals Journal of Experimental Botany View Current Issue (Volumen 67 No. 20 October 2016) y Oxford Journals Science & Mathematics Journal of Experimental Botany, Volumen 63, No. 5, páginas 1791 -1798. Advances and remaining challenges ¡n the transformation of barley and wheat Wendy A. Harwood, se refiere a una transformación costo eficiente para trigo y cebada, que permite la sobreexpresión, o el silenciamiento mediado por RNAi de genes objetivo. La cebada es más fácil de transformar comparada con trigo. En parte de sus textos indica "Ácido lipoico, un antioxidante ha mostrado también ser efectivo en incrementar el número de respuesta de callos embriogénicos en experimentos de transformación de trigo (Dan et al., 2009). Sin embargo, modificaciones simples en los componentes del medio de cultivo han tenido también un efecto muy significativo en mejorar la regeneración", ver 2.3.10

Varios cultivos de interés comercial se venden .a los agricultores como plantines (lechuga, tomate, ají, repollo, pimentón, sandía, melón, entre otros).

Los viveros que cultivan los plantines propagan las especies in vitro, donde el vigor de la planta desarrollada en esas condiciones incide positivamente en el vigor y productividad de la planta una vez trasplantada en terreno. Para aumentar el vigor de los plantines, la presente invención propone la aplicación de una composición bioestimulante natural en los medios de germinación ¡n vitro, lo que provoca que la planta desarrolle un mayor número de raíces, y con ello, aprovechará de mejor manera los nutrientes y agua presentes en los suelos de cultivo, una vez trasplantada.

Así, la presente invención permite que cultivos de plantas - en particular, plantas de interés comercial, sean capaces de aprovechar de mejor forma el valor nutricional de los suelos. De esta manera, la planta mantiene o incluso mejora la producción sin la necesidad de la aplicación excesiva de fertilizantes y/o con una mayor eficiencia en el uso del agua.

La ventaja de la presente composición bioestimulante para plantas es generar un aumento en el número de raíces en la planta joven, y con ello, ésta será capaz de absorber de mejor forma ios nutrientes presentes en el suelo, lo que se traducirá en una disminución en el uso de fertilizantes junto con una mayor eficacia en el uso del agua.

La presente composición bioestimulantes para plantas podría también actuar en forma sinérgica o aditiva con otros bioestimulantes de acción en la raíz.

La presente invención también se refiere al método de aplicación de la composición y su uso. Breve Descripción de la Invención

La presente composición bioestimulante para plantas comprende ácido lipoico, y es útil para incrementar el número de raíces en las mismas, y con ello, permitir superar los problemas actuales de la agricultura que enfrenta suelos de calidad desmejorada que se intentan reponer mediante el uso excesivo de fertilizantes y un menor acceso a agua para regadío producto del cambio climático. Con un mayor número de raíces, en las plantas, los cultivos serán capaces de aprovechar de mejor forma el valor nutricional de los suelos, manteniendo o incluso mejorando la producción sin la necésidad de la aplicación excesiva de fertilizantes y/o con una mayor eficiencia en el uso del agua.

La presente invención también se refiere al método de aplicación de la composición y su uso para mejorar la producción agrícola al aumentar el número de raíces de la planta.

La presente composición bioestimulante para plantas comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 10 nM. Preferentemente, la presente composición bioestimulante comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 50 nM. Aún más preferentemente, la presente composición comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 100 nM. Todavía aún más preferentemente, la presente composición comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 1 μΜ. Incluso aún más preferentemente, la presente composición comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 5 μΜ. Y aún más preferentemente, la presente composición comprende ácido lipoico en una concentración de al menos 10 μΜ.

La presente composición se testeó en laboratorio en el organismo vegetal modelo Arabidopsis thaliana, determinándose concentraciones mínimas necesarias para generar un aumento en el número de raíces. También se realizaron ensayos en tomates germinados en tierra y en medio hidroponico

La forma de uso o método de aplicación puede ser embeber las semillas o asperjar los plantines ya germinados, con la presente composición bioestimulante. Además, la presente composición bioestimulante puede estar contenida en el medio de cultivo donde crecen los plantines.

La ventaja de la tecnología propuesta es que, al generar un aumento en el número de raíces en la planta joven, ésta será capaz de absorber de mejor forma los nutrientes presentes en el suelo lo cual se traducirá en una disminución en el uso de fertilizantes junto con una mayor eficiencia en el uso del agua.

Breve Descripción de las Figuras

Figura 1 muestra el efecto del bioestimulante en el número de raíces en Arabidopsis thaliana.

Figuras 2A-2C muestran los fenotipos obtenidos luego de 2 meses en déficit nutricional. En La Figura 2A se muestra el fenotipo de una planta que no ha sido sometida a déficit nutricional en la cual no se observa daño en sus hojas. En la Figura 2B se muestra una imagen representativa del fenotipo denominado "Indicio de daño" el cual comienza a presentar hojas cloróticas. En la Figura 2C se muestra una imagen representativa del fenotipo denominado "Daño" en el cual se observa senescencia de las hojas básales

Descripción Detallada de la Invención

La presente invención se refiere a una composición bioestimulante para plantas comprende ácido lipoico, método de aplicación y uso para mejorar la producción agrícola ya que permite aumentar el número de raíces de la planta.

La presente composición bioestimulante para plantas esencialmente puede ser usada en propagación in vitro de cultivos.

Las semillas de cultivo de interés son germinadas en un medio de cultivo in vitro, el cual se suplementa con la presente composición bioestimulante, lo que genera un aumento en el número de raíces.

En particular, mediante pruebas de laboratorio empleando el organismo vegetal modelo Arabidopsis thaliana se determinaron las concentraciones mínimas necesarias para generar un aumento en el número de raíces, ver Figura 1.

También se realizaron ensayos en tomate para evaluar la eficacia de la presente composición en una variedad comercial, y se usaron otros métodos para aplicación de la misma, tales como embeber semillas o asperjados de plantines ya germinados, y el efecto de hacer crecer las plantas tratadas con la composición en condiciones de menor disponibilidad de nutrientes o menor irrigación. En la Figura 1 se muestra en color negro el número promedio de raíces (raíz principal más raíces adventicias) en plántulas de A. thaliana de 13 días germinadas in vitro sin la presente composición bioestimulante (n = 15). En gris se muestra el número promedio de raíces en plántulas germinadas in vitro en presencia de la presente composición bioestimulante (n = 20). Análisis estadístico t-student p < 0,001.

Al momento de ser pasada a tierra, la planta con mayor número de raíces, será capaz de aprovechar en forma más eficiente tanto los nutrientes como el agua presente en el suelo.

Aunque la presente composición se ha probado en cultivos in vitro, es importante notar que varios cultivos de interés comercial se venden a los agricultores como plantines (lechuga, tomate, ají, repollo, pimentón, sandía, melón entre otros). Los viveros que cultivan los plantines propagan las especies in vitro, donde el vigor de la planta desarrollada en esas condiciones incide positivamente en el vigor y productividad de la planta una vez trasplantada en terreno. La presente composición se aplica en medios de germinación in vitro, generando el desarrollo de un mayor número de raíces, en la planta. Planta que al ser trasplantada aprovechará de mejor manera los nutrientes y agua presentes en los suelos de cultivo.

Ejemplos

Ejemplo 1 : Preparación de la composición

El compuesto ácido lipóico (AL) comercial (T5625-5G Sigma) 5g fue disuelto en etanol 100% a una concentración final de 1 molar. A partir de esta solución realizaron las diluciones necesarias en etanol para alcanzar las concentraciones de trabajo, donde las diluciones y concentraciones son conforme se detallan en los ejemplos a continuación.

Ejemplo 2: Ensayos en A. thaliana.

Semillas de A. thaliana fueron esterilizadas en etanol 70%. Se prepararon placas plásticas estériles de 12 x 12 cm con 50 mL de medio MS solido (0,8% fitoagar) suplementado con 1% sacarosa y con composiciones que tienen diferentes concentraciones de AL. La composición se incorporó antes de que el medio se solidificara agregando 10 L de soluciones a concentraciones necesarias para obtener una concentración final en el medio de 0, 50 nM, 100 n , 1 μ , 5 μΜ y 10 μΜ. Una vez gelificado se sembraron entre 6 y 12 semillas por placa. Los resultados se resumen en la tabla I y II. Efecto sobre el largo de la raíz principal v las raíces laterales:

Para medir el efecto sobre el largo de la raíz principal y las raíces laterales se sembraron semillas in vitro en un medio semitransparente. Para cuantificar el largo de la raíz principal y el número de raíces laterales las placas fueron escaneadas a una resolución de 1200 dpi, luego utilizando el programa ImageJ - programa de procesamiento de imagen digital de dominio público que puede mostrar, editar, analizar, procesar, guardar e imprimir imágenes en varios formatos y también puede calcular el área y las estadísticas de valor de píxel de selecciones definidas por el usuario, se midió el largo de la raíz utilizando una razón de pixel/cm. De la misma forma se contó el número de raíces laterales. Finalmente, el índice de raíces laterales se obtiene a partir de la razón entre el número de raíces laterales y el largo de la raíz principal.

Tabla l: Cuantificación del largo de la raíz principal y el índice de raíces laterales en plantas de A. thaliana germinadas en presencia de la composición bioestimulante. Los valores indican el promedio ± la desviación estándar.

1ndice de raíces laterales: Razón entre el número de raíces laterales y el largo de la raíz principal.

2 n.s: valor estadísticamente no significativo, todos los resultados fueron analizados estadísticamente mediante ANOVA una vía, post test Dunnet P< 0,05

Efecto sobre la formación de raíces Adventicias:

Para medir el efecto sobre la formación de raíces adventicias se sembraron semillas in vitro en un medio semitransparente. Luego las placas fueron escaneadas a una resolución de 1200 dpi. Finalmente se contó el número de raíces adventicias utilizando un aumento digital en la imagen. Tabla II: Cuantificación del número de raíces (principal + adventicia) en plantas de A. thaliana germinadas en presencia de la presente composición. Los valores indican el promedio ± la desviación estándar.

Numero de raíces: Sumatoria entre la raíz principal y las raíces adventicias.

2Todos los resultados fueron analizados estadísticamente mediante ANOVA de una vía, post test dunnet P< 0,05

Los resultados muestran que la aplicación del bioestimulante en cultivos in vitro genera un aumento tanto en el índice de raíces laterales como en la formación de raíces adventicias lo cual otorgaría una ventaja a la planta en cuanto a la captación de agua y nutrientes.

Ejemplo 3: Ensayo en Tomate, variedad micro tom

Ensayo en medio hidropónico siembra grupal

Semillas de tomate variedad micro Tom fueron sembradas en recipientes de 5 cm de altura, 20 cm de largo y 14 cm de profundidad, utilizando una mezcla de vermiculita y perlita 1 :1 como sustrato, la cual fue embebida en medio hidropónico 1X preparado a partir de un stock 100X (KN0 3 125 mM, Ca(N0 3 ) 2 150 m , MgS0 4 75 mM, KH 2 P0 4 50 mM, KCI 5 mM, H 3 B0 3 5 mM, MnS0 4 1 mM, ZnS0 4 200 μΜ, CuS0 4 150 μΜ, Na 2 Si0 3 10 mM y Sprint 330 7,7 mM [Fe quelado en DTPA (Ácido di-etilen-tri-amino-penta acético)], ajustado a pH 5) suplementado con composiciones con concentraciones finales de 0 (reemplazando el volumen de AL con EtOH) o 50 nM de AL. Los resultados se resumen en las tablas III y IV.

Luego de 3 meses se observaron las plantas y se contaron de forma manual las flores formadas individualmente por cada planta, incluyendo todos los estadios del desarrollo, desde la inflorescencia más pequeña hasta las flores ya formadas por completo.

Tabla III Cuantificación de Flores a los 3 meses. Luego de 3 meses en medio hidropónico utilizando perlita y vermiculita como sustrato se cuantifico el número de flores por planta, en la tabla se indica el promedio ± la desviación estándar y entre paréntesis el porcentaje de aumento respecto al control.

Luego de 7 meses se cosecharon y pesaron todos los frutos de cada planta (biomasa) tanto para el grupo tratado con el bioestimulante como para el control que no fue tratado. Se calculó el promedio de la biomasa producida por cada grupo.

Tabla IV Generación de Biomasa a los 7 meses. Luego de 7 meses en medio hidropónico utilizando perlita y vermiculita como sustrato se cuantificó la biomasa generada por las plantas. En la tabla se muestra el promedio de la sumatoria del peso de los frutos por cada planta ± la desviación estándar y entre paréntesis el porcentaje de aumento respecto al control.

Los resultados muestran que la aplicación de la composición bioestimulante en cultivos hidropónicos es capaz de aumentar el rendimiento de la biomasa de frutos en un 81% cuando son sembradas grupalmente.

Ensayo en medio Hidropónico, siembra individual.

Semillas de tomate variedad micro Tom fueron sembradas en recipientes cilindricos individuales de 12,8 cm de altura, base superior de radio 4,4 cm y base inferior de radio 2,8 cm, utilizando una mezcla de vermiculita y perlita 1:1 como sustrato, la cual fue embebida en medio hidropónico 1X preparado a partir de un stock 100X (KN0 3 125 mM, Ca(N0 3 ) 2 150 mM, MgS0 4 75 mM, KH 2 P0 4 50 mM, KCI 5 mM, H 3 B0 3 5 mM, MnS0 4 1 mM, ZnS0 200 μΜ, CuS0 4 150 μΜ, Na 2 S¡0 3 10 mM y Sprint 330 7,7 mM [Fe quelado en DTPA (Ácido di-etilen-tri-amino-pentaacético)], ajustado a pH 5) suplementado con composiciones con concentraciones finales de 0, 50 nM o 100 nM de AL. Se mantuvo un régimen de riego semanal con 200 mL del medio hidropónico 1X. Luego de 2 meses se contó el número de frutos totales obtenidos por las 6 plantas de cada grupo. Los resultados se resumen en la tabla V. Tabla V: Número de frutos por tratamiento luego de 2 meses. Luego de 2 meses en medio hidropónico se contó el número de frutos generados por cada planta. En la tabla se indica el porcentaje de plantas con fruto, el total de frutos obtenidos por cada grupo y el rendimiento respecto al control.

Los resultados muestran que la composición bioestimulante es capaz de aumentar entre un 175% y un 200% el número de frutos en plantas de tomate crecidas en medio hidropónico.

Ensayo en medio Hidropónico, simulación déficit nutricional.

Semillas de tomate variedad micro Tom fueron sembradas en recipientes cilindricos individuales de 12,8 cm de altura, base superior de radio 4,4 cm y base inferior de radio 2,8 cm, utilizando una mezcla de vermiculita y perlita 1:1 como sustrato, la cual fue embebida en medio hidropónico 0,5X preparado a partir de un stock 100X (KN0 3 125 mM, Ca(N0 3 ) 2 50 mM, MgS0 75 mM, KH 2 P0 4 50 mM, KCI 5 mM, H 3 B0 3 5 mM, MnSC-4 1 mM, ZnS0 4 200 μΜ, CuS0 4 150 μΜ, Na 2 Si0 3 10 mM y Sprint 330 7,7 mM [Fe quelado en DTPA (Ácido di-etilen-tri-amino-penta acético)], ajustado a pH 5) suplementado con composiciones con concentraciones finales de 0, 50 nM o 100 nM de AL. Se mantuvo un riego semanal alternando entre 200 mL de agua y 200 mL de medio hidropónico 0,5X. Luego de 2 meses se compararon los fenotipos obtenidos (Figuras 2A-2C). Los resultados obtenidos se resumen en la tabla VI

Efectos en el fenotipo:

Se encontraron 3 fenotipos, fenotipo normal (figura 2A), fenotipo con indicios de daño (figura 2B) y fenotipo con daño (figura 2C)

Tabla VI: Fenotipo de plantas sometidas a déficit nutricional. En la tabla se muestra el efecto en el fenotipo de plantas sometidas a déficit nutricional en plantas que fueron o no tratadas con la composición bioestimulante, indicando el porcentaje de plantas de cada grupo para los diferentes niveles de daño y el porcentaje de plantas con frutos formados a las 8 semanas. Además, se indica el número de ramas vegetativas a las 10 semanas. Porcentaje de Plantas según

cada Fenotipo (8 semanas)

Sin Indicio Plantas con fruto Ramas Vegetativas 2

Grupo (n=6) Daño 1

daño Daño 1 (8 semanas) (10 semanas)

Control Sin Déficit

100% 0% 0% 67% 9,7 ± 0,5 nutricional

Control Déficit

0% 17% 83% 50% 5,8 ± 1 ,6 nutricional

Tratamiento 50 nM

0% 83% 17% 33% 7,0 ± 1 ,1 AL Déficit nutricional

Tratamiento 100 nM

83% 17% 0,00% 100% 9,5 ± 1 AL Déficit Nutricional

daño observado comprende para el caso de "indicio de daño" la clorosis de las ramas básales de la planta (figura 2B), mientras que para el "daño" comprende el proceso de senescencia en las ramas básales (figura 2C)

2 Numero de ramas vegetativas comprende a las ramas que no generan frutos y que permanecen unidas al tallo de la planta luego de 10 semanas de tratamiento con déficit nutricional.

Los resultados muestran que la aplicación de la composición bioestimulante otorga una evidente protección contra el déficit nutricional. Mientras que el grupo control presenta un 83% de las plantas con daño, los grupos tratados con la composición bioestimulante presentan solo un 17% (tratado con 50 nM) o no presentan daño (tratado con 100 nM). Además de esto el tratamiento con 100 nM genera un aumento en la capacidad de formación de frutos en las plantas tratadas puesto que mediante una inspección visual se determinó que el 100% de las plantas han formado frutos mientras que sólo el 50% de las plantas control han formado algún fruto. Además, luego de 10 semanas la protección ante el daño debido a déficit nutricional se hace aún más evidente, puesto que las plantas no tratadas con el bioestimulante (grupo control déficit nutricional) comienzan a perder sus ramas vegetativas (quedando un promedio de 5,8 ramas en la planta) lo cual es menos severo en el tratamiento con 50 nm (quedando un promedio de 7 ramas en la planta) y no se observa en el tratamiento con 100 nm (quedando un promedio 9,5 ramas en la planta) al compararlo con el grupo control sin déficit nutricional (quedando un promedio 9,7 ramas en la planta) Ensayo en tierra, aplicación post trasplante,

Semillas de tomate fueron sembradas en macetas de turba hidratada en agua. Luego de un mes, durante el cual se regaron semanalmente solo con agua, fueron trasplantados a recipientes cilindricos individuales de 12,8 cm de altura, base superior de radio 4,4 cm y base inferior de radio 2,8 cm realizando el primer riego con agua suplementada con composiciones con concentraciones de 0, 50 nM o 100 nM de AL, para luego mantener un régimen de riego semanal solo con agua. Los resultados respecto al rendimiento total de frutos por grupo se muestran en la tabla VII.

Tabla VII: Rendimiento en la generación de frutos. En la tabla se muestra el peso total de los frutos obtenidos por cada grupo y entre paréntesis el porcentaje de aumento respecto al control.

Los resultados muestran que el tratamiento con bioestimulante aplicado en tierra después de la germinación tiene efectos positivos en el rendimiento, aumentando hasta en un 25% la producción de biomasa en frutos.

Los resultados obtenidos muestran que la presente composición bioestimulante es útil en cualquier especie, sea o no comercial.