DOMAINE DE L'INVENTION

La présente invention concerne les inhibiteurs de la népriîysine.

ARRIERE PLAN DE L'INVENTION

Les métailoprotéases représentent un groupe important d'hydrolases impliquées dans de nombreux processus de régulation physiologiques en étant responsables soit de la maturation (formation d'une molécule active à partir d'un précurseur inactif) soit de l'inactivation (formation de métabolites inactifs à partir d'une molécule active) de peptides ou protéines. Parmi ces enzymes de régulation, la népriîysine ou neutral endopeptidase (NEP) joue un rôle important. En effet, chez les mammifères, elle est largement distribuée dans tout l'organisme (Roques et al. (1993) Pharmacol. Rev., 45, 87-146); elle est particulièrement abondante dans la bordure en brosse du rein et de l'intestin. On la trouve également dans le système nerveux central, dans les os, le derme, les muscles et les organes. Cette large distribution tissulaire laisse envisager l'existence possible de plusieurs substrats. Ainsi, par exemple, la népriîysine en dégradant les enképhalines est impliquée dans le contrôle de leurs fonctions physiologiques en particulier la douleur et l'humeur (Roques et al. (2012) Nature Rev. Drug Discov. 11, 292-311). En effet la protection des enképhalines (opioïdes endogènes possédant la même affinité que la morphine pour les récepteurs opioïdes) de l'action de la NEP augmente leur concentration extracellulaire et conduit à des effets analgésiques, antidépresseurs et anxiolytiques (Roques et al. (2012) Nature Rev. Drug Discov. 11, 292-311; Noble et al. (2008) Psychopharmacology 196, 327-335; Komg et al. (1996) Nature 383, 535- 538). En dégradant le peptide atrial natriurétique plasmatique et l'endothéline, elle est susceptible de corriger certaines formes de troubles cardiovasculaires et de réguler les équilibres hydriques dans l'organisme. Au niveau intestinal, la protection des enképhalines de l'action de la NEP a des effets anti-sécrétoires et anti-diarrhéiques illustrés par l'inhibiteur de NEP, thiorphan (Roques et al. (1980) Nature 288, 286-288) utilisé en clinique humaine depuis 1992. Par ailleurs la NEP a récemment été identifiée dans le derme (Morisaki et al. (2010) J. Biol. Chem. 285, 39819-39827) où elle joue un rôle négatif dans le renouvellement cellulaire (cicatrisation) et la formation des rides (Tsukahara et al. (2001) J. Investi. Dermatol. 117, 671-677). Les inhibiteurs de NEP sont donc susceptibles d'être utilisés en dermatologie et en cosmétologie. Enfin, l'inhibition de la NEP est susceptible d'éliminer les épanchements hydriques divers (articulations, plèvre, glaucome, ascite) par protection de peptides tels que les peptides natriurétiques. Cette enzyme représente donc une cible thérapeutique particulièrement intéressante pour améliorer diverses pathologies.

La néprilysine (NEP, E.C.3.4.24.11) est une zinc-métalloprotéase de la famille M13 des Glu- zincines (clan MA(E)). Elle a été clonée et séquencée (Devault et al. (1987) EMBO J. 6, 1317- 322) et sa structure tridimensionnelle a été obtenue par cristallographie aux rayons X (Oefner et al. (2000) J.Mol.Biol. 296, 341-349). Elle contient les deux séquences consensus, caractéristiques de cette famille. Elles correspondent aux enchaînements ⁵⁸³ HEITH ⁵⁸⁷ et ⁶⁴⁶ ENIAD ⁶⁵⁰ , ⁵⁸³ H, ⁵⁸⁷ H et ⁶⁴⁶ E étant ligands du zinc et ⁵⁸⁴ E le glutamate catalytique.

La stratégie classique de développement d'inhibiteurs efficaces de ce type d'enzymes consiste à concevoir une molécule reconnaissant les différents sous-sites de liaison de la protéase et possédant un groupement ayant une forte affinité pour le zinc.

Les meilleurs ligands du zinc, utilisés dans la conception des principaux inhibiteurs décrits dans la littérature, sont : les thiols -SH ou -S ^" , qui sont des ligands monovalents, les carboxylates -COOH ou -COO ^" qui peuvent agir comme monodentates ou bidentates, les groupements phosphonates ou phosphinates : -P(0)(OH) ₂ ou -P(0)OH, qui peuvent également être des mono- ou des bidentates, les hydroxamates -CO-NHOH ou les N-formyl- hydroxylamines -NH(OH)C(0)H qui se comportent comme des bidentates (pour revue voir Thorsett E.D. and Wyvratt M.J. in « Neuropeptides and their peptidases » A.J. Turner Ed., Ellis Horwood séries in Biomedecine,1987, pp 229-292).

De nombreux inhibiteurs de NEP, possédant un des ligands du zinc décrits ci-dessus, porté par un squelette peptidomimétique ont été synthétisés (Roques et al. (1980) Nature 288, 286- 288; Fournié-Zaluski et al. (1983) J.Med.Chem. 26, 60-65; Fournié-Zaluski et al. (1984) Eiir.J.Pharmacol. 102, 525-528; Chipkin (1986) Drugs Future 11, 593-606; Hernandez et al. (1988) J.Med.Chem. 31, 1825-1831; Seymour et al. (1989) Hypertension 14, 87-97; Northridge et al. (1989) Lancet 2, 591-593; Chen et al. (1998) PNAS 95, 12028-12033; Maw et al. (2006) Chem. Biol. DrugDes. 67, 74-77; Glossop et al. (2011) Bioorg. Med. Chem. Lett. 21, 3404-3406). Certains ont été co-cristallisés avec la Néprilysine (Oefner et al (2004) Acta Crystallogr., Sect. D, 60, 392-396).

Pratiquement tous les inhibiteurs décrits précédemment possèdent un motif peptidique et donc une ou plusieurs liaison(s) amide(s). Par exemple, des dérivés peptidomimétiques comprenant au moins une liaison amide et comprenant en outre un motif disulfide ont été décrits dans les articles Noble et al 1992 (Journal of Pharmacology and Expérimental Therapeutics 261 (1992), 1 , 181 -190), Noble et al 1997 (Pain 73 (97), 383-391), et dans les documents brevet WO 2009/138436 et FR 2892413. De plus ils possèdent généralement un poids moléculaire (PM) supérieur à 500 Da. Ces caractéristiques sont peu favorables pour le franchissement des barrières physiologiques, hématoméningée, dermale et intestinale par exemple et de ce fait ces inhibiteurs ont une biodisponibilité orale assez faible.

L'objectif de la présente invention est donc de fournir des inhibiteurs de la néprilysine palliant les inconvénients décrits ci-dessus. BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION

L'invention porte sur des composés possédant la formule générale (I) suivante:

RS-C(RiR ₂ )-CO-CH ₂ -CH(R ₃ )-CO-R4 (I)

avec R, Rj, R ₂ , R ₃ et R ₄ tels que définis dans la revendication 1.

L'invention porte également sur des compositions pharmaceutiques ou cosmétiques comprenant au moins un composé de la présente invention.

L'invention portent également sur les composés de la présente invention ou compositions pharmaceutiques les renfermant pour leur utilisation en tant qu'antidiarrhéique, antisecrétoire, anxiolytique, antidépresseur, cicatrisant, réducteur des épanchements hydriques ou dans le traitement de la surcharge hydrique cardiaque, des oedèmes et glaucomes.

DEFINITION

Les groupements alkyles désignent les chaînes hydrocarbonées linéaires ou ramifiées en Cl, C2, C3, C4, C5 ou C6, en particulier les radicaux méthyle, éthyle, w-propyle, z ^' -propyle, n- butyle, i-butyle ou /-butyle.

Des exemples d'hétérocycles à 5 ou 6 atomes, aromatiques ou saturés, comprenant au moins un atome de soufre, d'oxygène ou d'azote incluent les radicaux suivants : thiényle, pyrrolyle, imidazoyle, pyrazolyle, isothiazolyle, pyridyle, pyrazinyle, pyrimidinyle, pyridazinyle, pyrrolidinyle, imidazolidinyle, pyrazolidinyle, pyrazolinyle, piperidyle, piperazinyle, thiadiazolyle, furyle, pyranyle, isoxazolyle, morpholinyle, furazanyle, oxazolyle, oxazolidinyle et oxazolinyle.

Le terme « halogène » tel que désigné ici désigne un chlore, un brome, un iode ou un fluor. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

Les composés de la présente invention se caractérisent par : i) un motif thio-cétonique original capable d'interagir avec le zinc de la NEP de manière mono ou bidentée, ii) une absence de motif peptidique (donc dépourvu de liaison ami de), iii) un squelette comportant un minimum de groupes capables d'interagir avec les sous-sites de l'enzyme permettant ainsi d'atteindre une affinité nanomolaire pour la NEP, iv) une faible masse moléculaire.

De plus, dans le but d'améliorer encore la biodisponibilité, la solubilité, et les paramètres pharmaco cinétiques de ces composés, des protections labiles sur les groupements fonctionnels des inhibiteurs décrits, de type « prodrogues » introduites sur une ou les deux parties terminales, sont également décrites. C'est également le cas de l'homo-dimérisation par formation d'un pont disulfure, connu pour améliorer le passage des membranes endothéliales (Fournié-Zaluski et al (1992) J. Med. Chem., 35, 2474-2481) et donc renforcer encore la biodisponibilité orale et le franchissement des barrières physiologiques.

Les composés de la présente invention pourront être administrés par voie parentérale, topique, nasale ou orale.

Les composés de la présente invention possèdent la formule générale (I) suivante:

RS-C(RiR ₂ )-CO-CH2-CH(R ₃ )-CO-R4 (I)

dans laquelle:

a) R représente :

- un hydrogène ;

- un groupement alkanoyle R'CO-, avec R' représentant un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone, substitué ou non par un ou plusieurs atomes d'halogènes ;

- un groupement alkylthio R'S- ou alkanoylthio R'COS-, avec R' ayant la même définition que ci-dessus ;

- un alkoxyalkyloxycarbonyl R"C(0)0-CH(R"')OC(0)- avec

représentant indépendamment l'un de l'autre un groupement alkyf

ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone ;

- un groupement S-cysteinyl (H ₂ N)(C0 ₂ H)CH-CH ₂ -S-; ou

- un groupement ~S-C(RiR ₂ )-CO-CH ₂ -CH(R ₃ )-CO-R4, avec R,, R ₂ , R ₃ et R ₄ tels que ci-dessous formant un composé de formule (I) symétrique ; i représente

un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone, substitué, ou non, par :

^H un groupement -OR ₅ , -SR ₅ ou -S-O-R5, avec R ₅ représentant un hydrogène, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 4 carbones, un groupement phényle ou benzyle ;

^■ un groupement -C0 ₂ R6, avec R ₆ représentant un hydrogène, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 2 à 4 atomes de carbone ou un groupement benzyle ;

^B un groupement -NR7R8, avec R ₇ et R _$ représentant indépendamment l'un de l'autre un hydrogène, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle ou benzyle ou avec -NR ₇ Rg pris ensemble représentant un hétérocycle saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi l'oxygène et l'azote, de préférence représentant une morpholine ou piperidine;

^■ un groupement carboxamide -CONR ₇ R8, avec -NR7R8 ayant la même définition que ci-dessus ;

^■ un groupement phényle, substitué, ou non, par un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome, ou par un groupement - OR5, avec R5 ayant la même définition que ci-dessus ;

^■ un hétérocycle aromatique à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisi(s) parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

⁸ un composé cyclique saturé à 5 ou 6 chaînons ou hétérocyclique saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

un composé cyclique saturé à 5 ou 6 chaînons ou hétérocyclique saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisis panni l'oxygène, l'azote et le soufre ;

un groupement phényle, substitué, ou non, par un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome, ou par un groupement-ORs, avec R5 ayant la même définition que ci-dessus ;

et R2 est un hydrogène ; ou Ri et R ₂ sont identiques et représentent un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone ; ou

-C(RiR ₂ )- pris ensemble représente :

^B un composé cyclique saturé à 5 chaînons, accolé ou non à un cycle aromatique,de préférence conduisant à un cycle indanyle;

⁸ un composé cyclique saturé à 6 chaînons ;

^B un composé hétérocyclique saturé à 6 chaînons comprenant 1 hétéroatome, en position 4, choisi parmi l'oxygène, l'azote et le soufre, dans lequel lorsque l'hétéroatome est l'azote, l'azote est substitué, ou non, par un groupement alkyl de 1 à 6 atomes de carbone, un groupement alkanoyle, un groupement phényle ou un groupement benzyle ;

3 représente :

- un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone, substitué, ou non, par:

^B un groupement -OR ₅ ou -SR ₅ ou -S(0)Rs, avec R5 représentant un hydrogène, un groupement alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 4 carbones, un groupement phényle ou benzyle ;

^B un groupement -CO2R6, avec R6 représentant un hydrogène, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, comprenant de 2 à 4 atomes de carbone ou un groupement benzyle ;

^H un groupement - R7R ₈ , avec R ₇ et R§ représentant indépendamment l'un de l'autre un hydrogène, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle ou benzyle ou avec -NR ₇ Rg pris ensemble représentant un hétérocycle saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi l'oxygène et l'azote , de préférence représentant une morpholine ou piperidine;

^H un groupement carboxamide -CONRvRg _, avec -NR ₇ Rs tel que défini ci-dessus ;

^B un groupement phényle substitué, ou non, par :

- un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome ;

- un groupement-OR ₅ , avec R ₅ ayant la même définition que ci-dessus ; un groupement phényle ou thiényle ;

■ un hétérocycle aromatique à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisi(s) parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ; ou

^B un composé cyclique saturé à 5 ou 6 chaînons ou hétérocyclique saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

- un groupement phényle substitué, ou non, par :

^B un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome ; ou

^■ un groupement -OR.5, avec R5 ayant la même définition que ci- dessus ;

^B un phényle ;

^B un hétérocycle aromatique à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

d) R4 représente :

- un groupement hydroxyle ;

- un groupement -NR ₇ R ₈ , avec R ₇ et R étant indépendamment l'un de l'autre un hydrogène, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phényle ou benzyle, ou avec -NR ₇ Rg pris ensemble représentant un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons, comportant un ou plusieurs hétéroatomes, choisis parmi N ou O ;

- un groupement alkoxy -OR9, avec R9 représentant:

^B un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, comportant de 2 à 6 atomes de carbone ;

B un groupement benzyle ;

» un groupement -CHR ₁₀ -COORn, -CHR _]0 -O-C(=O)R _u , -CHR _JO ou -C(=0)-ORn dans lesquels Rio et Ru représentent, indépendamment l'un de l'autre, un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone.

Les composés de la présente invention peuvent être sous forme de sels d'addition pharmacologiquement acceptables, tels que les sels d'addition des composés de formule (I) avec des bases organiques ou minérales pharmacologiquement acceptables. Avantageusement, les composés possèdent la formule générale (I) dans laquelle R représente un hydrogène ou un groupement -S-C(Ri ₂ )-CO-CH ₂ -CH(R ₃ )-CO-R4, Rj, R ₂ , R ₃ et étant tels que le composé de formule (I) est symétrique, avec R _ls R ₂ , R ₃ et R4 pouvant être tels que définis ci-dessus ou ci-dessous. De préférence, R représente un hydrogène.

Dans des réalisations particulières de l'invention, les composés possèdent la formule générale (I) dans laquelle Ri représente un groupement alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupement alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 6 atomes de carbone substitué par:

B un groupement phényle ;

^■ un groupement phényle substitué par un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome ;

^B un hétérocycle aromatique à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisi(s) parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

^H un composé cyclique saturé à 5 ou 6 chaînons ou hétérocyclique saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

et R ₂ représente un hydrogène, ou

Ri et R ₂ sont identiques et représentent un groupement alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 6 atomes de carbone, ou

-C(R _! R ₂ )- pris ensemble représente :

^B un composé cyclique saturé à 5 chaînons ;

^■ un composé cyclique saturé à 5 chaînons accolé à un cycle aromatique ;

^H un composé cyclique saturé à 6 chaînons ; ou

^B un composé hétérocyclique saturé à 6 chaînons comprenant 1 hétéroatome, en position 4, choisi parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

et R, R ₃ et R4 sont tels que décrits ci-dessus.

Plus particulièrement, R] peut représenter un groupement isobutyl ou un groupement methyle substitué par:

^■ un groupement phényle;

^■ un groupement phényle substitué en position 4 par un halogène pris parmi le fluor ou le brome; un groupement phényle substitué en position 4 par un groupement phényle;

et R.2 représente un hydrogène, ou

Ri et R ₂ sont identiques et représentent un groupement méthyle ou éthyle, ou

-C(RjR ₂ )- pris ensemble représente:

^■ un groupement cyclique saturé à 5 ou 6 chaînons; ou

a un groupement cyclique saturé à 5 chaînons accolé à un cycle aromatique.

Dans des réalisations particulières de l'invention, R, R], R ₂ et R4 sont tels que décrits ci- dessus ou ci-dessous et R ₃ représente un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbone. Ce groupement alkyle peut être non substitué ou substitué par un groupement phényle. Ce groupement phényle peut lui-même être non substitué ou substitué par :

un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome ;

un groupement-OR5, avec R ₅ ayant la même définition que ci-dessus ;

un groupement phényle ou thiényle

Avantageusement, R ₃ représente un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, de 1 à 6 atomes de carbones substitué par:

^H un groupement phényle; ou

un groupement phényle substitué par:

un ou plusieurs halogènes pris parmis le fluor ou le brome; un groupement phényle ou thiényle,

et R, Rj, R ₂ et R ₄ sont tels que décrits ci-dessus.

Plus particulièrement, R peut représenter un groupement alkyle à un carbone substitué par:

un groupement phényle;

un groupement phényle substitué en position 4 par un halogène pris parmi le fluor ou le brome;

un groupement phényle substitué en position 4 par un groupement phényle.

Dans des réalisations particulières de l'invention, R, Ri, R ₂ et R.? sont tels que décrits ci- dessus ou ci-dessous et R ₄ représente :

- un groupement hydroxyle ; - un groupement alkoxy -OR9, avec R9 représentant:

^■ un groupement alkyle, linéaire ou ramifié, comportant de 2 à 6 atomes de carbone ;

B un groupement benzyle ;

et R, Ri, R ₂ et R3 sont tels que décrits ci-dessus.

Dans des réalisations particulières de l'invention, les composés possèdent la formule générale (I) dans laquelle R représente un hydroxyle et R, Ri, R2 et R3 sont tels que décrits ci-dessus.

Des composés préférés possèdent la formule générale (I) dans laquelle

a) R représente un hydrogène ;

b) R] représente un groupement alkyle, linéaire ou ramifiée, de 1 à 6 atomes de carbone ou un groupement alkyle, linéaire ou ramifiée, de 1 à 6 atomes de carbone substitué par:

^H un groupement phényle ;

a un groupement phényle substitué par un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome ;

^■ un hétérocycle aromatique à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisi(s) parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

^H un composé cyclique saturé à 5 ou 6 chaînons ou hétérocyclique saturé à 5 ou 6 chaînons comprenant 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

et R2 représente un hydrogène, ou

Ri et R ₂ sont identiques et représentent un groupement alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 6 atomes de carbone ; ou

-C(R]R2)- pris ensemble représente :

^■ un composé cyclique saturé à 5 chaînons ;

a un composé cyclique saturé à 5 chaînons accolé à un cycle aromatique ;

H un composé cyclique saturé à 6 chaînons ; ou

H un composé hétérocyclique saturé à 6 chaînons comprenant 1 hétéroatome, en position 4, choisi parmi l'oxygène, l'azote et le soufre ;

c) R3 représente un groupement alkyle linéaire ou ramifié de 1 à 6 atomes de carbone substitué par: ^■ un groupement phényle ; ou

^■ un groupement phényle substitué par :

- un ou plusieurs halogènes pris parmi le fluor ou le brome ;

un groupement phényle ou thiényle ;

d) R représente un groupement hydroxyle.

Des composés tout particulièrement préférés possèdent la formule générale (I) dans laquelle :

- Rj = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; ou

- Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; ou

- Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- R _î = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; ou

- R _! = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- R _! = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = CH ₃ ; R ₂ = CH ₃ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = C ₂ H ₅ ; R ₂ = C ₂ H ₅ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ = Cyclopentyle; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RjR ₂ )- = Cyclohexyle; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Phényl cyclopentyle (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Cyclohexyle; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Cyclopentyle; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- C(R,R ₂ )- = Phénylcyclopentyle (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph).

Des composés préférés possèdent la formule (I) dans laquelle :

- Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- Rj = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(R,R ₂ )- = Cyclohexyle; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(R,R ₂ )- = Cyclohexyle; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph).

Les composés de la présente invention peuvent posséder la formule générale (I) dans laquelle R est un hydrogène et R4 un groupement hydroxyle. Dans des modes de réalisation préférés, les composés de la présente invention possèdent la formule générale (I) dans laquelle R est un hydrogène, R ₄ est un groupement hydroxyle et

- R, = CI liPh; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; ou

- Rj = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; ou

- Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = C¾(4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; ou

- Ri = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- Ri = CH ₃ ; R ₂ = CH ₃ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- R, = C ₂ H ₅ ; R ₂ = C ₂ H ₅ ; R, = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Cyclopentyle; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Cyclohexyle; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Phénylcyclopentyle (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Cyclohexyle; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Cyclopentyle; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); ou

- C(RiR ₂ )- = Phénylcyclopentyle (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph).

Les composés de la présente invention peuvent être utilisés en tant que médicament. Plus particulièrement, les composés peuvent être employés pour préparer des compositions pharmaceutiques comprenant à titre de principe actif au moins un des composés décrits ci-dessus en combinaison avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité parmi les excipients habituels qui sont connus de l'homme du métier.

Les composés de la présente invention inhibant les activités enzymatiques de la néprilysine, ces composés et les compositions les renfermant peuvent donc être à ce titre utilisés dans le traitement de pathologies dans lesquelles les substrats de la néprilysine sont impliqués. La présente invention concerne également l'utilisation d'un composé de formule (I) ou d'une composition selon l'invention pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter une pathologie dans laquelle les substrats de la néprilysine sont impliqués.

Par exemple, en inhibant la dégradation des enképhalines, les composés de la présente invention s'avèrent à ce titre être des antidépresseurs et/ou anxiolytiques efficaces. De manière avantageuse, les composés de la présente invention s'avèrent également posséder des propriétés anti-diarrhéiques en protégeant les enképhalines de l'action de la néprilysine. De par leur mode d'action, ils peuvent également être des agents anti-sécrétoires efficaces.

Les composés de la présente invention peuvent également s'avérer être des agents cicatrisants efficaces.

Ils peuvent être utiles pour réguler les équilibres hydriques dans l'organisme, tel que pour diminuer la surcharge hydrique cardiaque, traiter les oedèmes, éliminer les épanchements hydriques divers (articulations, plèvre, ascite), réduire la pression intra-oculaire et ainsi traiter les glaucomes.

Ainsi, les composés de la présente invention peuvent être utiles pour au moins une utilisation choisie parmi les utilisations suivantes: antisecrétoire, anxiolytique, antidépresseur, cicatrisant, régulation des équilibres hydriques dans l'organisme, diminution de la surcharge hydrique cardiaque, traitement des oedèmes ou traitement des glaucomes.

Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être administrées par voie parentérale, telle que par voie intraveineuse, intrathécale ou intradermique, ou par voie orale, topique ou nasale.

Les formes administrables par voie parentérale incluent les suspensions aqueuses, les solutions salines isotoniques ou les solutions stériles et injectables qui peuvent contenir des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles. Les formes administrables par voie orale incluent les comprimés, les gélules molles ou dures, les dragées, les poudres, les granules, les solutions buvables (sirop, suspensions orales). Les formes administrables par voie nasale incluent les aérosols, les gouttes. Les formes administrables par voie topique incluent les patchs, les gels, les crèmes, les pommades, les lotions, les sprays, les collyres.

La dose efficace d'un composé de l'invention varie en fonction de nombreux paramètres tels que, par exemple, la voie d'administration choisie, le poids, l'âge, le sexe, l'état d'avancement de la pathologie à traiter et la sensibilité de l'individu à traiter. La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l'administration, à un patient en ayant besoin, d'une dose efficace d'un composé selon l'invention, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptable ou d'une composition selon l'invention, de préférence par voie parentérale, voie orale, topique ou nasale. Les composés de la présente invention peuvent également être utilisés en cosmétologie. Plus particulièrement, les composés de la présente invention peuvent être employés pour préparer des compositions cosmétiques comprenant au moins au moins un des composés décrits ci-dessus en combinaison avec au moins un excipient acceptable. Ces compositions cosmétiques peuvent être utilisées pour réduire les rides et prévenir le vieillissement cutané.

Ainsi, dans un autre aspect, la présente invention se rapporte à une méthode de réduction des rides et de prévention du vieillissement cutané comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comprenant au moins au moins un des composés décrits ci-dessus en combinaison avec au moins un excipient acceptable.

Les composés de la présente invention peuvent être obtenus par différents procédés.

Ainsi des composés de formule I pour lesquels R = R ₂ = H et R ₄ = OH sont obtenus en 5 étapes à partir d'un acide aminé II de configuration absolue définie, de préférence (R).

Etape 1:

L'acide aminé II est transformé en dérivé bromé III par réaction de déamination-halogénation, qui, généralement, se fait avec rétention de configuration (Claeson G. et al. (1968) Acta Chem. Scand. 22, 3155-3159; Dutta A. et al. (1987) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 111-120).

Le dérivé bromé III est transformé en thioéther IV par substitution nucléophile avec inversion de configuration par action du 4-methoxy-a-toluenethiol (PMBSH) en milieu basique.

Etape 2: Préparation de l'halogénométhyl cctone VI à partir de IV

Procédé 1 : le composé IV est transformé en cétène V soit à partir de l'anhydride mixte de IV (préparé par action de l'isobutylchlorofonTiiate et de N-méthylmorpholine), soit à partir du chlorure d'acide (préparé par action du chlorure de thionyle sur IV).

IV v Le cétène V est ensuite transformé en halogénométhylcétone VI par bullage d'HCl gaz ou d'HBr gaz dans -Dioxanne, le diéthyléther ou l'acétate d'éthyle.

Procédé 2: alternativement la chloromethylcétone VI (X=C1) peut être obtenue par action du chloroiodométhane sur l'ester méthylique de IV (préparé en présence de DMAP et d'EDCI ou bien encore par action du chlorure d'acétyle dans le méthanol) en présence de LDA fraîchement préparé (Chen et al. (1997) Tet. Lett. 38, 18, 3175-3178).

Etape 3

Procédé 1 : rhalogénométhylcétone VI, traitée par Nal, subit un échange d'halogène et réagit ensuite sur le sel de sodium du dialkylmalonate pour donner le composé VII. Rj ₂ peut être un groupement Méthyle, Ethyle ou tert-Butyle.

VI

VII

Le substituant R ₃ est introduit par action d'un dérivé bromé R Br sur l'anion du malonate précédent VII, déprotoné in situ par NaH. On obtient le composé VIII.

VII VIII

Procédé 2: le substituant R ₃ peut également être introdtiit directement sur rhalogénométhylcétone VI, dans le cas où X=Br. Ce dernier traité par Nal, subit un échange d'halogène et réagit ensuite sur le sel de sodium du dialkylmalonate substitué pour donner le composé VIII.

Cette réaction permet de conserver la configuration du carbone portant le thiol.

Etape 4

Après hydrolyse des esters de VIII, par action du TFA (cas où Rj ₂ est un groupement tert- Butyle) ou par saponification (cas où Ri ₂ est un groupement Méthyle ou Ethyle), une décarboxylation à reflux dans le toluène, par exemple, conduit au composé IX.

Etape 5

La déprotection du thiol présent sur le composé IX s'effectue en 2 temps par action de DTNP (2,2'-dithiobis(5-nitropyridine)) dans l'acide trifluoroacétique suivi d'une réaction avec le TCEP (tris(2-carboxyethyl)phosphine) (Harris K.M. et al. (2007) J. Pept. Sci. (2), 81-93) ou bien directement par chauffage dans l'acide trifluoroacétique à 50°C en présence d'anisole pour donner l'acide mercaptoalcanoïque I.

PMBS

Alternativement, pour les composés I dans lesquels R] = R ₂ = alkyl, R = H et R = OH, les chloromethylcétones VI peuvent être préparées à partir d'une réaction entre l'acide bromoacétique et le 4-methoxy benzyl mercaptan suivi par la double alkylation et la transformation en chloromethylcétone VI comme décrit précédemment.

Dans le cas où Ri et R forme un cycle.

Procédé 1 : la chlorométhylcétone VI est préparée directement à partir de l'ester correspondant (méthylique par exemple) par alkylation à l'aide du disulfure du 4-methoxy benzyl mercaptan (ou à partir d'une autre activation de ce thiol) et transformation en chlorométhylcétone VI.

Procédé 2: alternativement, la chlorométhylcétone géminée cyclique VI peut être préparée directement à partir de l'ester correspondant (méthylique par exemple) par alkylation à l'aide de 4-methoxy benzylmercaptan activée et transformation en bromométhylcétone VI à l'aide d'une solution de TMSN ₂ .

La suite de la synthèse s'effectue comme décrit précédemment.

Dans le cas où R ₃ est un 4-Bromobenzyl, le composé IX peut subir une réaction de Suzuki pour introduire

Les composés IX, lorsque R ₂ = H, présentent 2 centres d'asymétrie et sont constitués de 4 stéréoisomères. Lorsque R\ = R ₂ = alkyl ou cycle, les composés IX présentent un seul centre d'asymétrie et sont donc un mélange de 2 stéréoisomères.

Les composés de la présente invention englobent tous les stéréoisomères de I, obtenus après déprotection de IX.

Dans le cas où les composés IX sont chiraux, ils peuvent être séparés par précipitation sélective avec des aminés chirales comme Γ -méthylbenzyl aminé ou la noréphédrine ou par HPLC sur colonne chirale.

EXEMPLES

L'invention sera encore illustrée sans aucunement n'être limitée par les exemples ci-après. Etape 1 : synthèse des acides (R)-2-Bromo carboxyliques

L'acide aminé de configuration (R)- (39.3 mmol) est solubilisé dans 50 mL d'eau. A 0°C, sont respectivement ajoutés KBr (3.5 eq, 31 .8g) puis H2SO4 (7.73mL) goutte à goutte, en contrôlant que la température reste inférieure à 5°C. Le mélange est refroidi à -10°C et NaN0 ₂ (1.3 eq, 3.59g) solubilisé dans 17 mL d' eau est ajouté goutte à goutte. Le mélange est agité 2h à -5°C.

Après retour à température ambiante, le mélange est extrait par CH ₂ C1 ₂ (2*50mL). La phase organique est lavée par H ₂ 0, NaCl sat., séchée sur Na ₂ S0 ₄ pour donner le produit attendu de configuration (R).

III a Ri = CH ₂ Ph: huile jaune claire; (Rdt: 50%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH): 0.62

RMN (CDCI ₃ , 200 MHz): 3.15-3.40 (2H, dd); 4.69 (1H, m); 7.20-7.40 (5H, m)

III b R, = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ : huile; (Rdt: 82.5%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH): 0.49

RMN (CDCI ₃ , 200 MHz): 0.90-1 .0 (6H, m); .55 (2H, m); 2.40 (1 H, m); 4.29 (1H, d) III c Ri = CH ₂ (4-Br-Ph): huile jaune claire; (Rdt: 50%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH): 0.62

RMN (CDCI ₃ , 200 MHz): 3.15-3.40 (2H, dd); 4.70 (1H, m); 7.20-7.40 (4H, m)

III d R] = CH ₂ (4-Ph-Ph): huile jaune claire; (Rdt: 60%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH): 0.7

RMN (CDCI ₃ , 200 MHz): 3.15-3.40 (2H, dd); 4.70 (1H, m); 7.20-7.60 (9H, m)

Synthèse des aci -(4-methoxybenzylthio)carboxyliques

Sous atmosphère inerte, le 4-méthoxybenzyl mercaptan (4.2 mL; 30.06 mmol, 1 eq) est solubilisé dans 70 mL de THF anhydre et 1 .1 éq de NaH 60% (1 .33 g; 33.07 mmol) sont ajoutés. Le mélange est agité 15 min à température ambiante puis le dérivé bromé 3 (1 eq, 30.06 mmol) solubilisé dans 30 mL de THF est ajouté goutte à goutte à l'aide d'une ampoule à brome. Le mélange est agité durant la nuit à température ambiante. Le mélange est évaporé à sec puis est repris par AcOEt. La phase organique est lavée par H ₂ 0, NaCl sat., séchée par Na ₂ S0 ₄ , évaporée sous pression réduite pour donner le produit brut. Celui-ci est purifié par chromato graphie sur silice avec CHex/AcOEt 5/5 comme système d'élution pour donner le composé IV de configuration (S) sous forme d'huile.

IV a Ri = CH ₂ Ph: huile; (Rdt: 40%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH/ 9/1): 0.5

RMN (CDC1 ₃ , 200 MHz): 2.80-3.10 (2H, m); 3.68 (2H, s); 3.76 (3H, s); 4.53 (1H, t); 6.84 (2H, d); 7.09-7.49 (7H, m)

IV b Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ : huile; (Rdt: 26%); Rf (CHex/AcOEt): 0.65

RMN (CDCI ₃ , 200 MHz): 0.90-1.0 (6H, m); 1.55 (2H, m); 2.25 (1H, m); 3.40 (1H, d); 3.70 (2H, s); 3.90 (3H, s); 6.8-6.9 (4H, m)

IV c Ri = CH ₂ (4-Br-Ph): huile ; (Rdt: 40%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH/ 9/1): 0.5

RMN (CDCI3, 200 MHz): 3.0-3.30 (2H, m); 3.60 (1H, q); 3.70 (2H, s); 3.90 (3H, s); 6.80- 7.20 (8H, m)

IV d Ri = CH ₂ (4-Ph-Ph): huile; (Rdt: 50%); Rf (CH ₂ Cl ₂ /MeOH/ 9/1): 0.6

RMN (CDCI ₃ , 200 MHz): 3.0-3.30 (2H, m); 3.60 (1H, q); 3.70 (2H, s); 3.90 (3H, s); 6.80-7.2 (13H, m)

Etape 2:

Procédé 1 :

Méthode 1 : synthèse de la diazocétone à partir de l'anhydride mixte

A une solution d'acide IV (18.5 mmol) dans 20 mL de THF sec, sous atmosphère inerte, sont ajoutés successivement à -20°C, la N-Méthyl morpholine (2.15 mL; 1.05 eq) et iBuOCOCl (2.52 mL; 1.05 eq). Le mélange est agité pendant 5-10 min à -20°C puis le précipité est filtré sur célite et lavé par 20 mL THF.

La solution de CH ₂ N ₂ dans l'éther (2.5 eq) (préalablement préparée à partir de Diazald ^® et de KOH dans le carbitol), est transférée à la solution d'ester activé à 0°C. La solution devient jaune. Le mélange est agité 2h à température ambiante.

Méthode 2: synthèse de la diazocétone à partir du chlorure d'acide

IV V L'acide IV (14.5 mmol) est solubilisé dans 23 mL de CH ₂ C1 ₂ anhydre. SOCl ₂ (1.5 eq; 21.75 mmol) est ajouté à température ambiante et le mélange est porté 2h au reflux, sous atmosphère inerte. Le mélange est ensuite évaporé à sec pour donner une huile brunâtre. Le produit est solubilisé dans le THF anhydre à raison de 5 mmol/mL.

La solution de CH ₂ N ₂ (2.5 eq) dans l'éther, préalablement préparée est transférée à la solution de chlorure d'acide à 0°C. La solution devient jaune. Le mélange est agité 2h à température ambiante, sous atmosphère inerte.

Synthèse de la chloroméfhylcétone

La solution du composé V est placée, sous atmosphère inerte, dans un tricol maintenu à 0°C. Le mélange est saturé en HCl, par bullage à 0°C.

Au bout de 30 min, le solvant et l'excès de HCl sont évaporés sous pression réduite. Le produit est repris dans AcOEt (150 mL) puis est lavé par NaHCC>3 10%, H ₂ 0 et séché sur Na ₂ S0 ₄ pour donner le produit à l'état brut. Ce dernier est utilisé tel quel sans purification pour l'étape suivante.

Procédé 2: synthèse à artir de l'ester méthylique

IV VI

Le chlorure d'acétyle (3eq; 2mL) est ajouté goutte à goutte à 0°C, sous gaz inerte, à une solution d'acide IV (9.1 mmol) dans 50 mL de MeOH anhydre. Le mélange est agité pendant la nuit à température ambiante. Le mélange est concentré sous pression réduite, repris dans MTBE (méfhyl-tert-butyl éther) (200mL). La phase organique est lavée par NaHCC>3 10% (1 OOmL), H ₂ 0 (1 OOmL) et NaCl sat. (1 OOmL). La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ puis est concentrée sous pression réduite pour donner l'ester méthylique à l'état brut. Ce dernier est chromatographié par système flash sur gel de silice.

Une solution de LDA (5 éq) dans le THF (55 mL), fraîchement préparée à partir de BuLi 1 ,6M in hexane (15 mL) et de diisopropylamine (3,4 mL), est additionnée goutte- à- goutte en 30 min à l'ester méthylique (4,42 mmol) et au chloroiodométhane (1 ,3 mL; 4 éq) en solution dans 25 mL de THF. La température interne de la réaction est maintenue en dessous de -70°C pendant l'addition et à -75°C pendant 10 min. Une solution d'acide acétique (6mL dans 44 mL de THF) est ajoutée en gardant la température inférieure à -65°C, pour neutraliser le milieu. Le mélange est alors extrait par AcOEt. La phase organique est lavée par NaHC0 ₃ 10%, acide citrique 10%, NaCl sat, séchée sur Na ₂ S0 ₄ , puis concentrée sous pression réduite pour donner le produit brut qui est utilisé tel quel pour l'étape suivante.

VI a R, = CH ₂ Ph; R ₂ = H: huile orangée; (Rdt: 93.0%); Rf (CHex/AcOEt 6/4): 0.73 HPLC: romasil C18 CH ₃ CN(0.1 % TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) 60/40 Rt: 19.18 min

RMN (CDC1 ₃ , 200MHz): 2.85 (1H, dd); 3.2 (1H, dd); 3.55 (1H, d); 3.6 (2H, d); 3.7 (3H, s); 4.1 (2H, d); 6.7 (2H, d); 7.2-7.4 (7H, m)

VI b Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H: huile orange; (Rdt: 94.0%); Rf (CHex/AcOEt 5/5): 0.68 RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 0.90-1.0 (6H, m); 1.55 (2H, m); 2.25 (1H, m); 3.40 (1H, d); 3.70 (2H, s); 3.90 (3H, s); 4.25 (2H, d); 6.80 (2H, d); 7.15 (2H, d)

VI c Ri = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H: huile orangée; (Rdt: 85.0%); Rf (CHex/AcOEt 6/4): 0.80 RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 2.85 (1H, dd); 3.2 (1H, dd); 3.55 (1H, d); 3.6 (2H, d); 3.7 (3H, s); 4.1 (2H, s); 6.7 (2H, d); 7.2-7.4 (6H, m)

VI d Ri = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₂ = H: huile orangée; (Rdt: 90.0%); Rf (CHex/AcOEt 6/4): 0.73 RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 2.85 (1 H, dd); 3.2 (1H, dd); 3.55 (1H, d); 3.6 (2H, d); 3.7 (3H, s); 4.1 (2H, s); 6.7 (2H, d); 7.2-7.5 (11H, m)

Synthèse des chlorométhylcétones géminées

L'acide bromoacétique (10g, 72mmol) est mis en solution, sous atmosphère inerte, dans 50 mL de MeOFI. 11 mL (1.1 éq) de 4-methoxybenzyl mercaptan sont ajoutés à 4°C et une solution de soude alcoolique (6.4g de NaOH (2.2 eq) en solution dans 100 mL de MeOH) sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange est agité 40 min à température ambiante. Le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est repris dans Et ₂ 0 (200 mL) et 350 mL de NaHC0 ₃ 10%. La phase aqueuse est acidifiée jusqu'à pH=l puis est extraite par 350 mL de Et ₂ 0. La phase organique est lavée par H ₂ 0 (lOOmL), NaCl sat (lOOmL) et est séchée sur Na ₂ S0 ₄ pour donner 15g d'un solide blanc brut (Rdt : 98%) qui est utilisé tel quel pour l'étape suivante.

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 10-90% 15 min, Rt = 10.64 min

RMN (CDC1 ₃ , 200MHz): 3.0 (2H, s); 3.75 (3H, s); 3.75 (2H, s); 6.80 (2H, d); 7.20 (2H, d) Le chlorure d'acétyle (1.5eq; 7.6mL; 106 mmol) est ajouté goutte à goutte à 4°C, sous atmosphère inerte, à une solution de l'acide précédent (70.8 mmol) dans 150 mL de MeOH anhydre. Le mélange est agité durant la nuit à température ambiante. Le mélange est concentré sous pression réduite, repris dans MTBE (méthyl-tert-butyl éther) (350mL). La phase organique est lavée par HCl 0.5N (2*100mL), NaHC0 ₃ 10% (2*100mL), H ₂ 0 (lOOmL) et NaCl sat. (lOOmL). La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ puis est concentrée sous pression réduite pour donner l'ester méthylique.

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 5.24min

RMN (CDCI3, 200MHz): 3.1 (2H, s); 3.75 (3H, s); 3.83 (2H, s); 3.85 (3H, s); 6.85 (2H, d); 7.30 (2H, d).

Une solution de LiHMDS 1M THF (4.4mL; leq) est ajoutée goutte à goutte, sous atmosphère inerte, à -78°C, à une solution de l'ester précédent (lg; 4.4 mmol; leq) solubilisé dans 5mL de THF anhydre. Le mélange est agité lh à -78°C puis la solution du dérivé RX (1 eq) est ajoutée sous atmosphère inerte à -78°C. Le mélange ramené à température ambiante est agité pendant 3h. Le mélange est à nouveau refroidit à -78°C et leq de LiHMDS est ajouté suivi par 1. eq de RX. Le mélange ramené à température ambiante est agité pendant 4h. Le mélange est alors partitionné entre 200mL HCl IN et 300mL AcOEt. La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ puis est concentrée sous pression réduite pour donner le produit brut qui purifié par chromatographie sur gel de silice.

Ri = CH ₃ , R ₂ = CH ₃ : huile (Rdt: 44%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 7.39 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.60 (6H, s); 3.70 (3H, s); 3.80 (2H, s); 3.80 (3H, s); 6.85 (2H, d); 7.25 (2H, d)

Ri = C ₂ ¾, R ₂ = C ₂ H ₅ : huile (Rdt: 55%) HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 9.72 min

RMN (CDCI3, 200MHz): 0.90 (6H, t); 1.85 (4H, m); 3.68 (2H, s); 3.70 (3H, s); 3.80 (3H, s); 6.82 (2H, d); 7.22 (2H, d)

La chlorométhylcétone est synthétisée comme décrit en 4b

Vi e R ₁ = CH ₃ , R ₂ = CH ₃ : huile ambrée

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 7.91 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.60 (6H, s); 3.55 (1H, d); 3.60 (2H, s); 3.80 (3H, s); 4.45 (2H, s); 6.7 (2H, d); 7.2 (2H, d)

VI f R, = C ₂ H ₅ , R ₂ = C ₂ H ₃ : huile ambrée

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 10.04 min

RMN (CDCI3, 200MHz): 0.85 (6H, t); 1.80 (4H, q); 3.55 (1H, d); 3.60 (2H, s); 3.80 (3H, s); 4.45 (2H, s); 6.7 (2H, d); 7.2 (2H, d)

Synthèse des chlorométhylcétones cycliques

Procédé 1 :

A une solution dans le THF (9mL), sous atmosphère inerte, de DIPA (diisopropylethylamine) (3 mmol; 1.3 eq; 420μL) est introduit à -10°C, la solution 2.5M de BuLi dans l'hexane (2.77 mmol; l . lmL; 1.2eq). Le mélange est agité lh à 0°C. Cette solution de LDA, fraichement préparée, est ajoutée goutte à goutte à une solution d'ester méthylique d'acide cyclopentanoïque dans 5mL de THF à -55°C. Le mélange est agité lh à -55°C sous atmosphère inerte. Le HMPA (hexylmethylphophoramide) (3.46 mmol; 1.5eq; 610μί) est ajouté et le mélange est agité pendant 10 min à la même température. Une solution de disulfure de 4-methoxybenzyl mercaptan (3 mmol; 1.3 eq; 920 mg) dans 12mL de THF est alors ajoutée goutte à goutte à -55°C. Après retour à température ambiante, le mélange est agité durant la nuit. Le mélange est partitionné entre 10mL NH ₄ CI sat. et 20mL AcOEt. La phase organique est lavée par NH ₄ C1 sat. (2*10 mL), NaCl sat (2*15 mL), séchée sur Na ₂ SC>4 puis est concentrée sous pression réduite pour donner le produit brut qui est purifié par chromatographie sur gel de silice.

C(R]R ₂ ) = Cyclopentyl: huile (Rdt: 40%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 30-90% 10 min, Rt = 9.68 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.60-2.40 (8H, m); 3.67 (3H, s); 3.77 (2H, s); 3.80 (3H, s); 6.83 (2H, d); 7.24 (2H, d)

La chlorométhylcétone est synthétisée comme décrit en 4b

VI g C(Ri R ₂ ) = Cyclopentyl: huile ambrée

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 60-90% 10 min, Rt = 6.47 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.60-1.80 (8H, m); 3.54 (2H, s); 3.80 (3H, s); 4.47 (2H, s); 6.78 (2H, d); 7.22 (2H, d)

VI h C(RiR ₂ ) = Cyclohexyl: huile ambrée

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 8.11 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.40-2.20 (10H, m); 3.45 (2H, s); 3.80 (3H, s); 4.40 (2H, s); 6.80 (2H, d); 7.20 (2H, d)

Procédé 2:

A une solution dans le THF (lOmL), sous atmosphère inerte, de DIPA (diisopropylethylamine) (16.7 mmol; 1.2 eq; 2.34mL) est introduit à -10°C, la solution 2.5M de BuLi dans l'hexane (16 mmol; 6.4mL; 1.15eq). Le mélange est agité lh à 0°C. Cette solution de LDA, fraîchement préparée, est ajoutée goutte à goutte à une solution d'ester méthylique d'acide phenylcyclopentanoïque dans 5mL de THF et HMPA (hexylmethylphophoramide) (l .Oeq; 2.5mL) à -78°C. Le mélange est agité lh à -78°C sous atmosphère inerte. Le thiol de 4-methoxybenzyl mercaptan activé (18 mmol; 1.3 eq; 6.37 mg) est ajouté à l'état solide à -78°C. Le mélange est agité lh30 à -78°C. Le mélange est partitionné entre 200mL HCl IN et 200mL AcOEt. La phase organique est diluée avec 200 mL AcOEt, lavée par NaCl sat (200 mL), séchée sur Na ₂ SC"4 puis est concentrée sous pression réduite pour donner le produit brut qui est purifié par chromatographie sur gel de silice.

C(R,R ₂ ) = PhénylCyclopentyl: solide blanc (Rdt: 25%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 9.59 min

RMN (CDC1 ₃ , 200MHz): 2.90-3.70 (6H, m); 3.55 (3H, s); 3.65 (3H, s); 6.60-7.10 (8H, m) Le produit de l'étape précédente (1.13g; 3.44 mmol) est solubilisé dans 14mL d'un mélange THF/MeOH. 14mL de NaOH 2N sont ajoutés et le mélange est agité 3h à température ambiante. Le mélange est dilué par 40mL H ₂ 0. Le mélange est concentré sous pression réduite. La phase aqueuse est acidifiée par HCl IN puis est extraite par MTBE (3 x lOOmL), lavée par NaCl sat (100 mL), séchée sur Na ₂ S0 ₄ puis est concentrée sous pression réduite pour donner un solide blanc (Rdt : 98%).

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H _z O (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min, Rt = 6.50 min

Le chlorure d'oxalyle (2 mmol; 1.5eq; 177μΚ) est ajouté goutte à goutte, sous atmosphère inerte, à 0°C, à une solution de l'acide précédent (1.38 mmol; 434mg) dans lOmL CH ₂ C1 ₂ , en présence de 20μΕ DMF (0.2 eq). Le mélange est laissé revenir à température ambiante puis est agité 30 min à température ambiante.

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 6.70 min.

Après évaporation sous pression réduite, le chlorure d'acide est repris, sous atmosphère inerte, dans CH ₃ CN anhydre (5mL) et TMSCHN ₂ (1M dans Et ₂ 0) (1.5eq; lmL) est additionné goutte à goutte à 0°C. Le mélange est laissé revenir à température ambiante puis est agité lh30. Le mélange est ensuite piège par 300μί (1.65 mmol; 1.2 eq) HBr 33% dans l'acide acétique. Le mélange est agité 15 min à température ambiante. Le mélange est concentré sous pression réduite puis est repris par MTBE (200mL). La phase organique est lavée par NaHC(¾ 10% (lOOmL), NaCl sat (50 mL), séchée sur Na S04 puis est concentrée sous pression réduite pour donner le composé 6h sous forme d'une huile marron (Rdt: 83%). VI h C(RiR ₂ ) = Phénylcyclopentyl (Indanyl): solide blanc

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 5.30 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 2.90-3.70 (6H, m); 3.65 (3H, s); 4.15 (2H, s); 6.60-7.10 (8H, m)

Etape 3

Procédé 1

Sous atmosphère inerte, 980 mg de NaH à 60% (1 eq) sont ajoutés au dialkylmalonate (1 eq) dans 25mL (lmL/mmol) de DME (1,2-dimethoxyethane). Le mélange est agité lh à température ambiante.

Un mélange de chloromethylcétone VI (24.42 mmol) et de Nal (24.42 mmol, 3.66g, 1 eq) dans 50mL de DME est agité à température ambiante pendant 15 min et est ensuite ajouté à une solution fraîchement préparée de sel de sodium de dialkylmalonate. Le mélange est agité 4h à température ambiante.

A la fin de la réaction, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est repris dans le dichlorométhane. La phase organique est lavée à l'eau et séchée sur Na ₂ SC>4. Le produit est chromatographié sur colonne de silice avec CHex/AcOEt 9/1 comme système d'élution. VII al Ri = CH ₂ Ph, R ₂ = H , R ₁₂ = CH ₂ CH ₃ : huile orangée; (Rdt: 60 %); Rf

(CHex/AcOEt 9/1): 0.16

HPLC: Kromasil Cl 8 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 80/20 Rt: 6.57 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.30 (6H, t); 2.70-3.40 (4H, m); 3.45 (1H, t); 3.50 (2H, d); 3.60 (1H, t); 3.65 (3H, s); 4.15 (4H, q); 6.75 (2H, d); 7.2-7.4 (7H, m)

VII a2 Ri = CH ₂ Ph, R ₂ = H , R _n = tBu: huile orangée; (Rdt: 62 %); Rf (CHex/AcOEt

9/1): 0.36

HPLC: Kromasil C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) 85/15 Rt: 15.51 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.40 (18H, s); 2.70-3.40 (4H, m); 3.45 (1H, t); 3.50 (2H, d); 3.60 (1H, t); 3.65 (3H, s); 6.75 (2H, d); 7.2-7.4 (7H, m) VII b Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ , R ₂ = H, R ₁₂ = tBu: huile orangée; (Rdt: 30 %); Rf (CHex/AcOEt 9/1): 0.49

HPLC: Kromasil C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 90/10 Rt: 6.49 min

RMN (CDCI3, 200MHz): 0.90-1.0 (6H, m), 1.40 (18H, s); 1.55 (2H, m); 2.15 (1H, m); 3.19 (2H, m); 3.40 (2H, m); 3.50 (2H, d); 3.80 (3H, s); 6.75 (2H, d); 7.2 (2H, d)

VII c Ri = CH ₂ (4-Br-Ph), R ₂ = H, K _n = tBu: huile orangée; (Rdt: 62 %); Rf (CHex/AcOEt 9/1): 0.36

HPLC: Kromasil C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 85/15 Rt: 15.51 min

RMN (CDCI3, 200MHz): 1.40 (18H, s); 2.70-3.40 (4H, m); 3.45 (1H, t); 3.50 (2H, d); 3.60 (1H, t); 3.65 (3H, s); 6.75 (2H, d); 7.2-7.4 (6H, m)

VII d R] = CH ₂ (4-Ph-Ph), R ₂ = H, R ₁₂ = tBu: huile orangée; (Rdt : 60 %); Rf (CHex/AcOEt 9/1): 0.36

HPLC: Kromasil C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 85/15 Rt: 16.71 min

RMN (CDCU, 200MHz): 1.40 (18H, s); 2.70-3.40 (4H, m); 3.45 (1H, t); 3.50 (2H, d); 3.60 (1H, t); 3.65 (3H, s); 6.75 (2H, d); 7.2-7.5 (11H, m)

VII e Rj = CH ₃ , R ₂ = CH ₃ , R, ₂ = Et (Rdt: 40%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 4.87 min

RMN (CDCI3, 200MHz): 1.30 (6H, t); 1.55 (6H, s); 3.40 (2H, d); 3.55 (2H, s); 3.75 (1H, t); 3.82 (3H, s); 4.25 (4H, q); 6.85 (2H, d); 7.25 (2H, d)

VII f R, = C ₂ H ₅ , R ₂ = C ₂ H ₅ , R12 = Et (Rdt: 30%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1 % TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 50-90% 10 min puis 90- 50%, Rt = 1 1.56 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 0.80 (6H, t); 1.20 (6H, t); 1.75 (4H, m); 3.30 (2H, s); 3.38 (2H, d); 3.65 (1H, t); 3.72 (3H, s); 4.15 (4H, q); 6.72 (2H, d); 7.15 (2H, d)

VII g C(R,R ₂ ) = Cyclopentyl, R, ₂ : Et (Rdt: 24%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 60-90% 10 min, Rt = 8.04 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.29 (6H, t); 1.60-2.30 (8H, m); 3.39 (2H, d); 3.52 (2H, s); 3.74 (1H, t); 3.79 (3H, s); 4.22 (4H, q); 6.83 (2H, d); 7.20 (2H, d)

VII h C(RiR ₂ ) = Cyclohexyl, R, ₂ : Et (Rdt: 33%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1 % TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 7.76 min RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.29 (6H, t); 1.60-2.30 (10H, m); 3.45 (2H, d); 3.50 (2H, s); 3.75 (1H, t); 3.80 (3H, s); 4.25 (4H, q); 6.85 (2H, d); 7.20 (2H, d)

VII i C(R, R ₂ ) = Phénylcyclopentyl (Inda, !½: Et (Rdt: 80%)

HPLC: Atlantis T3, CH ₃ CN(0.1% TFA)/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 6. min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.20 (6H, t); 2.90-3.60 (9H, m); 3.65 (3H, s); 4.15 (4H, q); 6.60- 7.10 (8H, m)

Alkylation du malonate

A une solution du produit VII dans 15 mL de DME (dimethoxyethane), sont ajoutés 1.5 eq de NaH 60%.

Le mélange est agité lh à température ambiante puis le dérivé bromé R ₃ Br (3 eq) est ajouté. Le mélange est agité durant la nuit à température ambiante.

Le solvant est évaporé sous pression réduite puis le mélange est repris par H ₂ 0 et AcOEt. La phase organique est lavée par H ₂ 0, séchée sur Na ₂ S0 ₄ puis concentrée sous pression réduite. Le produit est chromato graphie sur silice avec CHex/AcOEt 9/1 comme système d'élution pour donner le produit désiré VIII.

VIII a R, = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₁₂ = Et: huile orangée

VIII b R, = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = = CH ₂ Ph; Rj ₂ = tBu: huile orangée

VI I I c R, = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = = H; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₁₂ = Et: huile orangée

VIII d Ri = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = = H; R ₃ = CH ₂ Ph; R ₁₂ = Et: huile orangée

VIII e R| = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₁₂ = Et: huile oran, gée

VIII f R, = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; R ₁₂ = tBu: huile orangée

VIII g Rj = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); Ri ₂ = tBu: huile orang ;ée

VIII h R, = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₂ - ^: H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); R, ₂ = tBu: huile orang jée

VI I I i R, = CH ₃ ; R ₂ = CH ₃ ; R ₃ = = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₁₂ = Et: huile orangée

VIII j R, = C ₂ H ₅ ; R ₂ = C ₂ H ₅ ; R 3 = CH ₂ (4-Br-Ph); Ri ₂ = Et: huile orangée

VI I I k C(R,R ₂ ) - Cyclopentyl; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); R _]2 = Et: huile orangée

VIII 1 C(RiR ₂ ) = Cyclohexyl; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); R, ₂ = Et: huile orangée

VHI m C(R]R ₂ ) = Phénylcyclopentyl (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); R, ₂ = Et: huile orangée Etape 4

VIII IX

Lorsque R ₁₂ est un groupement Méthyle ou Ethyle, le composé VIII (0.585 mmol) est dissous dans 10 mL de EtOH et NaOH 2N (6eq) est ajouté. Le mélange est agité durant la nuit à température ambiante. L'éthanol est évaporé sous pression réduite. Le produit est repris dans l'eau et est extrait par Et ₂ 0. La phase aqueuse est acidifiée par HC1 3N et est extraite par Et ₂ 0. La phase organique est séchée sur Na ₂ SC>4 puis est évaporée sous pression réduite pour donner une huile jaunâtre.

Lorsque R ₁₂ est un groupement tert-Butyle, le produit VIII est dissous dans 10 mL de CH ₂ C1 ₂ et 10 mL de TFA sont ajoutés. Le mélange est agité 2h à température ambiante. Les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le produit est repris dans l'eau et est extrait par Et ₂ 0. La phase organique est séchée sur Na ₂ S0 ₄ puis est évaporée sous pression réduite pour donner une huile jaunâtre.

Le produit formé est ensuite solubilisé dans 6 mL de toluène et est chauffé à 150°C pendant 12h.

Le solvant est évaporé sous pression réduite pour donner le composé IX.

IX a Rj = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX b Ri = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; huile orangée

IX c R ₍ = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); huile orangée

IX d Rj = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; huile orangée

IX e Rj = CH ₂ CH(CH ₃ ) ₂ ; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX f Ri = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph; huile orangée

IX g Ri = C¾(4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX h Ri = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX i Ri = CH ₃ ; R ₂ = CH ₃ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX j i = C ₂ H ₅ ; R ₂ = C ₂ H ₅ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX k C(RiR ₂ ) = Cyclopentyl; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX 1 C(RjR ₂ ) = Cyclohexyl; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée

IX m C(RjR ₂ ) = Phényl cyclopentyl (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph); huile orangée éaction de Suzuki

Le composé IX 1 (180mg; 0.356mmol) est mis en solution dans 2mL de toluène, sous atmosphère inerte. Pd(PPh ₃ ) ₄ (l lmg; 3% mol) est ajouté et le mélange est agité 5 min à température ambiante. L'acide phénylboronique (46mg; 0.374 mmol; 1.05 eq) est ajouté dans 1 mL MeOH suivi par 500μL· de Na ₂ C0 ₃ 2M. Le mélange est porté au reflux lh30 puis le mélange est concentré sous pression réduite. Le mélange réactionnel est repris par 3 OmL Et ₂ 0 et 30 mL HC1 IN. La phase organique est lavée par 20mL HC1 IN, 10 mL NaCl sat., séchée sur Na ₂ S0 ₄ et concentrée sous pression réduite. Le produit est chromatographié sur silice avec Hept/AcOEt 65/35 comme système d'élution pour donner le produit désiré IX f.

IX ii C(R]R ₂ ) = Cyclohexyl; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); 75 mg huile orangée (Rdt: 47%)

ESI(+): [M+Na] ⁺ = 525

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN(0.1 % TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 8.60 min

IX o C(RiR ₂ ) = Cyclopentyl; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); huile orangée (Rdt: 25%)

ESI(-): [M-H] ^" = 487

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN(0.1 % TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 6.60 min

IX p C(RiR ₂ ) = Phénylcyclopentyl (Indanyl); R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph); huile orangée (Rdt: 55%) ESI(-): [M-H] ^" = 535

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN(0.1 % TFA)/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 70-90% 10 min, Rt = 7.45 min

Etape 5

O COOH O COOH PMBS. 1 BTFA (1 M), TFA

HS.

_R R ₂ ^R ou TFA, Anisole, 50°C R^R ₂ ^ ^

ou 1) DTNP, TFA ¹

i ^X 2) TCEP, CH ₃ CN I

Méthode 1 : Le composé IX (0.53 mmol) de l'étape 7, est solubilisé dans 2.1mL de BTFA (boron tristrifluoroacetate) (1M) (préparé au préalable à partir de BBr ₃ et de TFA) et est agité lh à température ambiante. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le mélange est purifié par HPLC semi-préparative.

l a R, = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph

ESI(+): [M+H] ⁺ = 329

HPLC: ACE Cl 8 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 60/90 en 30 min; Rt: 7.50 min

I b Ri = iBu; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 372-374

HPLC: ACE Cl 8 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 60/90 en 30 min; Rt: 8.60 min

l e Ri = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 384

HPLC: ACE C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 60/90 en 30 min; Rt: 10.52 min

I d Rj = CH ₂ (4-Br-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ Ph

ESI(+): [M+H] ⁺ = 406-408

HPLC: ACE C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) Gradient 60/90 en 30 min; Rt: 9.01 min

l e R _Î = CH ₂ Ph; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 406-408

HPLC: romasil Cl 8 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 80/20; Rt: 6.23 min

I f Ri = CH ₂ (4-Ph-Ph); R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 482-484

HPLC: ACE Cl 8 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 60/90 en 30 min; Rt: 11.4 min

Méthode 2: Le produit IX c (2.03 mmol) est solubilisé dans l OmL de TFA en présence de 5 eq d'anisole (1.1 mL). Le mélange est chauffé 2.5h à 50°C. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le mélange est purifié par HPLC semi-préparative pour donner le composé I .

I b Rj = iBu; R ₂ = H; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 372-374

HPLC: ACE Cl 8 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) Gradient 60/90 en 30 min; Rt: 8.60 min Méthode 3: A une solution, sous atmosphère inerte, du composé IX c (0.447 mmol; 120mg) dans 4.5mL de TFA est ajouté le thioanisole (2.8eq; 0.936 mmol; 1 10μΕ) suivi par l'addition de 2,2'-dithiobis(5-nitropyridine) (3eq; 1.0 mmol; 417mg): la solution devient orangée. Le mélange est agité à température ambiante pendant lh. Le mélange est concentré sous pression réduite à 30°C. Le disulfure formé est purifié par HPLC semipréparative pour donner 146 mg de produit (Rdt: 62%).

Le disulfure précédent est solubilisé dans Οί^Ν(720μΕ)/Η ₂ 0(180μί). Le chlorydrate de la tris(2-carboxyethyl)phosphine (1.2eq; 96 mg) est alors ajouté et le mélange est agité 10 min à température ambiante. Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le composé est purifié par HPLC semipréparative pour donner I b

Ce schéma de synthèse permet de préserver la chiralité de la molécule si elle existe

I b Ri = iBu; R ₂ = H; R ₃ = C¾(4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 372-374

HPLC: ACE C18 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 60/90 en 30 min; Rt: 8.60 min

RMN (CDC1 ₃ , 200MHz): 0.87 (3H, d); 0.89 (3H, d); 1.50-1.80 (3H, m); 2.7-3.5 (6H, m); 7.08 (2H, d); 7.43 (2H, d)

Ig Ri = CH ₃ ; R ₂ = CH ₃ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+Na] ⁺ = 366-368

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) 50/90 en 10 min; Rt: 6.51 min

RMN (DMSO d6, 200MHz): 1.45 (3H, s); 1.47 (3H, s); 2.7-3.2 (5H, m); 7.18 (2H, d); 7.50 (2H, d)

I h R, = C ₂ H ₅ ; R ₂ = C ₂ H ₅ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+Na] ⁺ = 394-396

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) 70/90 en 10 min; Rt: 3.9 min

RMN (DMSO d6, 200MHz): 1.30 (6H, t); 1.75 (4H, q); 2.6-3.1 (5H, m); 7.0 (2H, d); 7.40 (2H, d)

I i C(R]R ₂ ) = C ₄ H ₈ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 60/90 en 10 min; Rt: 5.0 min

RMN (CDC1 ₃ , 200MHz): 1.60-2.25 (8H, m); 2.75-3.20 (5H, m); 7.10 (2H, d); 7.44 (2H, d) I j C(R,R ₂ ) = C ₅ Hi ₀ ; R3 = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+Na] ⁺ = 382-384

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) 70/90 en 10 min; Rt: 8.97 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.60-2.40 (10H, m); 2.75-3.20 (5H, m); 7.10 (2H, d); 7.44 (2H, d) 1 k C(RiR ₂ ) = C ₈ H ₈ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1 % TFA) 70/90 en 10 min; Rt: 3.84 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 2.70-3.50 (5H, m); 3.60 (2H, d); 3.70 (2H, d); 7.10-7.6 (8H, m) I i C(RiR ₂ ) = C ₅ H ₁₀ ; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 383

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 70/90 en 10 min; Rt: 5.35 min

RMN (CDC1 ₃ , 200MHz): 1.60-2.40 (10H, m); 2.75-3.20 (5H, m); 7.20-7.60 (9H, m)

I m C(RiR ₂ ) = C ₄ H ₈ ; R ₃ = CH ₂ (4-Br-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 369

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 60/40; Rt: 9.79 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 1.60-2.25 (8H, m); 2.75-3.20 (5H, m); 7.05-7.55(9H, m)

I n C(R!R ₂ ) = C ₈ H ₈ ; R ₃ = CH ₂ (4-Ph-Ph)

ESI(+): [M+H] ⁺ = 415

HPLC: Atlantis T3 CH ₃ CN/H ₂ 0 (0.1% TFA) 70/90 en 10 min; Rt: 4.73 min

RMN (CDCI ₃ , 200MHz): 2.70-3.50 (5H, m); 3.60 (2H, d); 3.70 (2H, d); 7.10-7.8 (13H, m)

Mesure des pouvoirs inhibiteurs

Les inhibiteurs I revendiqués ont été testés sur la néprilysine de type 1 (E.C.3.4.24.1 1 , NEP-1). Les dosages sont effectués en plaque 96 puits en présence d'un substrat fluorigénique spécifique. De manière générale, les inhibiteurs sont pré-incubés, en concentrations croissantes, avec l'enzyme pendant 10 min, à 37°C. Le substrat est alors ajouté et le mélange est incubé pendant 30 à 60 min à 37°C. La réaction est arrêtée à 4°C et la lecture de la fluorescence émise est faite dans un lecteur de plaque Berthold Twinkle LS970B. On réalise ensuite une courbe d'inhibition en fonction de la concentration en inhibiteur à l'aide du logiciel GraphPad, puis on détermine le Ki à partir de la formule de Cheng Prusoff : Ki=IC ₅ o/(l+(S/Km)). Les résultats sont présentés dans les tableaux suivants. Dosage de la néprilysine (NEP)

La néprilysine, purifiée à partir de rein de lapin (Aubry M. et al. 1987, Biochem. Cell. Biol. 65, 398-404), est utilisée à 200ng/mL final dans le tampon Tris 50mM pH 7.4. Le substrat, Dansyl- Gly-(N0 ₂ )Phe-B-Ala (Goudreau N.et al. (1994) Anal. Biochem., 219, 87-95) (Km=37 μΜ), est dissous dans l'éthanol et est utilisé à 20μΜ final. Des concentrations croissantes (de 10 ^{" 10} à 10 ^"3 M) d'inhibiteurs sont pré-incubées pendant 15 min à 37°C avec la NEP-1 dans le tampon Tris 50mM, pH 7.4. Le substrat est ensuite ajouté et l'incubation est poursuivie pendant 60 min. La réaction est arrêtée en mettant la plaque dans la glace pendant 10 min. La lecture de la fluorescence émise est mesurée dans un fluorimètre à 355nm, λαη— 535nm.