APLICACIONES.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a las moléculas tridimensionales denominadas dendrímeros, concretamente a los de tipo carbosilano con grupos amonio-fenóxido terminales y a los procedimientos para su preparación. El campo en el que se engloba la invención es el campo de la biomedicina y farmacia. ANTECEDENTES

Un dendrímero típico está formado por una molécula central de la que salen varias «ramas», que a su vez se ramifican, originando así una estructura tridimensional globular de capas concéntricas. Cada paso de la síntesis química está perfectamente controlado, dando lugar a una estructura organizada, de tamaño concreto presentando en la superficie un número definido de grupos funcionales. La presencia de esos grupos funcionales (amino, carboxilo, hidroxilo, etc.) en la superficie de los dendrímeros confieren a estos agentes gran parte de su utilidad en terapéutica. Los dendrímeros han recibido gran atención en los últimos años debido a sus buenas propiedades para su uso en aplicaciones biológicas: responden de forma predecible en solución, pueden ser modificados ampliamente para portar múltiples ligandos con actividad biológica, pueden atravesar barreras biológicas y son fabricados con pocos defectos estructurales. Además, se han utilizado en aplicaciones tan variadas como catálisis a nanoescala, sensores químicos, micelas unimoleculares, imitación de la función de las enzimas, encapsulación de moléculas, reconocimiento molecular, agentes de diagnóstico y también como vehículos para el transporte de genes y fármacos. Revisiones que incluyen todas estas aplicaciones se encuentran publicadas en la bibliografía.! ¹ ' ⁸ - ¹⁰ ].

Una de las áreas en los que los dendrímeros han sido más estudiados es la Terapia Génica (introducción de material genético en una célula con finalidad terapéutica). La utilización de vectores virales en terapia génica se ha asociado a la aparición de algunos problemas como efectos inmunológicos adversos, síndromes linfoproliferativos relacionados con la desregulación de oncogenes en el genoma humano^, etc. Para intentar resolver estos problemas se han desarrollado otros tipos de vehículos no virales como liposomas catiónicos, polímeros y también dendrímeros. La mayor ventaja de los dendrímeros sobre el resto de vehículos no virales, reside en una estructura uniforme y en la posibilidad de modificar de una manera versátil el esqueleto y superficie de los mismos, lo que permite una caracterización precisa del complejo (ácido nucléico/vector) y una investigación sistemática del proceso de transfección.

La multivalencia de los grupos funcionales de superficie de los dendrímeros hace que la gran variedad de moléculas que pueden transportar abarque incluso dendrímeros con distintas funcionalidades: son los tectodendrímeros, que están siendo estudiados por su gran potencialidad en posibles aplicaciones biomédicas.

La patente ES2265291 reivindica nuevos dendrímeros, concretamente del tipo carbosilano, y proporciona su uso, entre otros, como vehículos transportadores, en la sangre y/o en otros fluidos corporales, transportadores de oligodesoxinucleótidos (ODN) y otras moléculas aniónicas de interés. Esto supone un campo nuevo , pues hasta ese momento, no se había publicado ningún estudio concerniente al uso de dendrímeros con estructura carbosilano solubles en agua como agentes de transporte, aunque sí se había publicado un informe sobre la biocompatibilidad in vitro de dendrímeros carbosilano constituidos sobre poli(óxido de etileno)[ ³ L Además, únicamente tres estudios sintéticos de dendrímeros carbosilano catiónicos habían sido publicados hasta la fecha! ⁴ - ⁶ !. Los dendrímeros descritos en la patente ES2265291 , presentan en los extremos de sus ramificaciones restos que contienen grupos amino, que pueden tener también utilidad en vacunación, bien porque se les acoplen antígenos de bajo peso molecular aprovechando aminas presentes en restos de los extremos de sus ramificaciones, o bien porque dichos restos que contienen al menos un grupo amino constituyan ellos mismos antígenos de bajo peso molecular como pueden ser los de naturaleza peptídica.

Existe una necesidad de encontrar métodos alternativos para luchar contra distintos patógenos, interfiriendo en su ciclo vital, campo en el cual los dendrímeros están demostrando ser una interesante alternativa. Algunos dendrímeros previamente descritos han demostrado ser capaces de inhibir la infección causada por distintos virus, interfiriendo tanto con la entrada del virus en las células como en pasos posteriores de replicación viral. La empresa australiana Starpharma comercializa dendrímeros para aplicaciones farmacéuticas: un gel microbicida para prevención del VIH y otras enfermedades de transmisión sexual en la mujer, agentes quimioterapeúticos, tratamiento de enfermedades respiratorias y enfermedades tropicales.

En otros casos, los dendrímeros han sido utilizados como anti bacterianos o para desestructurar las membranas celulares de algunos hongos. Cuando se diseñan para esta finalidad, se tiene preferencia por los dendrímeros con grupos catiónicos en su superficie, tales como aminas o grupos tetraalquilamonio, que facilitan la adherencia de los dendrímeros a la membrana bacteriana, causando la lisis de la bacteria. Tal es el caso de los dendrímeros de poli(propilenimina) (PPI) con grupos alquilamonio terciarios en su superficie, que han demostrado una amplia actividad bactericida tanto contra bacterias Gram positivas como contra bacterias Gram negativas! ¹⁷ - ¹⁸ ]. Estos dendrímeros presentan una mayor capacidad bactericida que otros polímeros hiperramificados. Otros dendrímeros que han demostrado capacidad anti bactericida tanto frente a bacterias Gram negativas como frente a bacterias Gram positivas, han sido los dendrímeros carbosilanos funcionalizados con grupos dimetilamino fenóxido en la superficie. Estos dendrímeros se pueden transformar en compuestos catiónicos con grupos amonio terminales mediante la reacción de salificación con MePi

En la presente i nvención , se desarrollan nuevos dendrímeros carbosilanos, caracterizados por contener grupos amonio-fenóxido terminales, que surgen de la funcionalización de dendrímeros con enlaces terminales SÍ-CH2-CI junto con un derivado fenol amina, por ejemplo el derivado 3-(etilamino)-p-cresol, que posteriormente pueden ser salificados en presencia de ácidos fisiológicamente aceptables y dar lugar a dendrímeros catiónicos, que presentan cargas positivas debidas a los grupos ionizados presenten en los extremos de sus ramificaciones. Gracias a estas cargas positivas, los dendrímeros de la invención pueden utilizarse como agentes anti bacterianos, suponiendo una interesante alternativa a los tratamientos anti bacterianos existentes en dicha área de la Biomedicina.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La invención describe la síntesis y caracterización química de dendrímeros carbosilanos con grupos amonio-fenóxido terminales. Para la obtención de tales dendrímeros se han utilizado dendrímeros carbosilanos con enlaces terminales SÍ-CH2-CI junto con derivados amonio-fenóxidos, preferentemente seleccionados entre los derivados amino- fenóxidos: 3-etilamino-4metilfenol, 5-etilamino-3-metilfenol, 3-etilamino-2-metilfenol y 5- etilamino-2-metilfenol . La presente invención describe dendrímeros carbosilanos con grupos amonio-fenóxido terminales, neutros, de primera, segunda y tercera generación, así como dendrímeros carbosilanos con grupos amonio-fenóxido terminales, catiónicos, de primera y segunda generación y sus métodos de síntesis.

Tal como se utiliza en la invención, el término dendrímero se refiere a una macromolécula tridimensional de construcción arborescente.

El término "generación" se refiere al número de etapas iterativas que son necesarias para la preparación del dendrímero.

El término "dendrímero carbosilano" se refiere a una molécula dendrítica con un esqueleto carbosilano.

DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Estructura de varios dendrímeros neutros con grupos amonio-fenóxido terminales sin salificar. La figura muestra dendrímeros neutros de primera generación (a), segunda generación (b) y tercera generación (c).

Figura 2. Estructura de varios dendrímeros catiónicos con grupos amonio-fenóxido terminales salificados. La figura muestra dendrímero catiónicos de primera generación (a), segunda generación (b) y de tercera generación (c). DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La invención describe nuevos dendrímeros carbosilano ramificados con grupos amonio-fenóxido en los extremos de las ramificaciones que responden a una cualquiera de las fórmulas:

(R ¹ ): 3-P

Si-(Alq ¹ -Si-CH ₂ -X ) ₄ , en el caso de ser de primera generación;

en el caso de ser de segunda generación;

(R ¹ ) ₃ _ _m (R¾_ _n (R ³ k _P

Si-(Alq ¹ -Si-(Alq ² -Si-(Alq ³ -Si-CH ₂ -X _p ) _n ) _m ) ₄ , en el caso de ser de tercera generación;

o a las fórmulas análogas correspondientes en el caso de generaciones superiores, en las que la fórmula correspondiente a cada generación i resultaría de sustituir X _p en la fórmula correspondiente a la generación anterior por un nuevo bloque del tipo:

pasando el grupo unido al mismo átomo de silicio que este bloque sustitutorio de estar representado por (R ^M )3- _P , a estar representado por (R ^M )3- _Z ;

fórmulas en las que:

Alq ¹ , Alq ² , Alq ³ , , Alq ^¡ representan restos polimetileno de 2 a 4 carbonos que se eligen independientemente unos de otros según la longitud de las ramificaciones en cada generación;

R ¹ , R ² , R ³ , R , R ^¡ representan restos que se eligen independientemente unos de otros entre metilo y fenilo;

X representa un resto que contiene al menos un grupo amonio-fenóxido; a excepción del amino-fenóxido, dimetilaminofenol.

p es un número entero que varía entre 1 y 3 e indica el número de grupos funcionales en cada rama del dendrímero;

m, n,...., z son números enteros que varían independientemente entre 1 y 3 e indican el número de grupos funcionales en el dendrímero. En una realización preferida los dendrímeros carbolisanos de la invención se caracterizan porque los restos Alq ¹ , Alq ² , Alq ³ ,..., Alq ^¡ se seleccionan independientemente entre etileno y propileno, siendo todos iguales y correspondiéndose preferentemente a restos propileno.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque los números enteros m, n, z son iguales entre sí y tienen el valor 2.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque los restos R ¹ , R ² , R ³ , R ^M , R ^¡ son todos iguales y corresponden a restos metilo.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque los restos Alq ¹ , Alq ² , Alq ³ ,..., Alq' son iguales entre sí y corresponden preferentemente a restos propileno; los números enteros m, n, j son iguales entre sí y tienen el valor 2 y los restos R ¹ , R ² , R ³ , R ^M , R ^¡ son todos iguales y corresponden a preferentemente a restos metilo.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque el resto terminal de las ramificaciones que contiene al menos un grupo amonio-fenóxido se encuentra unido al dendrímero mediante un grupo -O- que se ha formado a partir del grupo -OH del amonio-fenóxido que contiene.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque el resto amonio-fenóxido terminal de las ramificaciones es preferentemente el derivado amonio-fenóxido 3-etilamino-cresol.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque el índice "p" toma el valor 1 y cada ramificación termina con un único resto En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque son de primera, segunda o tercera generación.

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque parte o la totalidad de los grupos amonio-fenóxido presentes en los restos terminales de las ramificaciones están salificados, preferentemente con ácidos fisiológicamente aceptables, preferentemente el ácido clorhídrico. En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque el resto terminal de las ramificaciones que contiene al menos un grupo amonio-fenóxido salificado se elige preferentemente entre el resto CgHi ₄ NO ⁺ CI-

En otra realización preferida los dendrímeros carbosilanos de la invención se caracterizan porque el índice "p" toma el valor 1 y cada ramificación termina con un único resto C ₉ Hi ₄ NO ⁺ CI-.

La invención se refiere también a un procedimiento para la preparación de los dendrímeros de la invención. Estos dendrímeros organosilano de generaciones diferentes se pueden preparar con rendimientos elevados usando reacciones bien conocidas, a través de procedimientos divergentes ΐ ⁷ · ^12"16 · ¹⁹ L Estos dendrímeros presentan una alta versatilidad que les confiere varias ventajas sobre otros derivados: i) es posible modificar la longitud de las ramas utilizando en el paso de metátesis derivados de Grignard vinílicos o alílicos; ii) es posible variar el número de ramificaciones de cada generación; iii) es posible incorporar una gran variedad de grupos funcionales a la periferia del dendrímero, en la presente invención se han elegido grupos amonio-fenóxido.

En una realización preferida de la invención las ramas de las distintas generaciones de los dendrímeros, son todas iguales y son el resultado de la utilización del derivado alílico BrMg- CH2-CH=CH2, mientras que las ramificaciones obtenidas en cada generación son también las mismas en todos los casos por utilización de HSÍCH3CI2.

Otro objeto de la presente invención se refiere al uso de los dendrímeros descritos en la invención como medicamentos, preferentemente como biocidas.

Una vez obtenido el esqueleto correspondiente al dendrímero precursor de la generación deseada, se procedería a obtener derivados con enlaces terminales SÍ-CH2-CI a partir de los cuales obtener los dendrímeros carbosilano con restos terminales que contienen grupos amonio-fenóxido de la invención.

Obtención de dendrímeros carbosilano con grupos amonio-fenóxido terminales

El primer paso en la síntesis de estos derivados es la preparación de dendrímeros precursores que contienen enlaces terminales SÍ-CH2-CI. La síntesis de estos dendrímeros ha sido ya publicada! ⁷ · ¹² - ¹⁶ · ¹⁹ i y se lleva a cabo con elevados rendimientos. En los ejemplos que se exponen más adelante en la presente memoria, se han crecido los dendrímeros hasta una tercera generación, pero la metodología para obtener dendrímeros de generaciones superiores es análoga, por lo que dichos dendrímeros de generaciones superiores y su procedimiento de preparación se incluyen igualmente en el alcance de la invención.

Una realización preferida de la invención, consiste en que las ramificaciones de cada generación son de igual tamaño y corresponden a cadenas de 3 carbonos y en la que se forman dos nuevas ramas en cada generación, dejando un grupo metilo unido a cada átomo de Si de las nuevas ramas formadas en cada generación.

El segundo paso consiste en la unión de diferentes grupos amonio-fenóxido a la superficie de estos dendrímeros usando la reactividad conocida de los enlaces SÍ-CH2-CI.

Para la obtención de dendrímeros carbosilanos con grupos amonio-fenóxido terminales, la presente invención ha empleado diferentes grupos de amonio-fenóxidos en presencia del disolvente dimetilformamida (DMF). El término "amonio-fenóxido" se refiere a diferentes aminas que contienen una funcionalidad fenólica, similares a los ejemplos que se describen mediante la siguiente fórmula: exceptuando el grupo dimetilaminofenóxido.

En la presente invención, se prefiere la utilización de estos amonio-fenóxidos, pero el procedimiento de la invención permite funcionalizar la periferia de un dendrímero con cualquier otro grupo amonio-fenóxido que tenga una funcionalidad fenólica susceptible de llevar a cabo el proceso de reacción con el hidroxilo fenólico que aquí se describe. La funcionalización con cualquiera de esas fenol aminas y los dendrímeros carbosilano con funciones amonio obtenidos se incluyen también en el alcance de la invención.

El tratamiento de los dendrímeros carbosilano que contienen enlaces terminales S1-CH2- Cl con una cantidad estequiométrica de 3-(etilamino)-p-cresol en presencia del disolvente DMF y de cantidades catalíticas de compuestos iónicos, preferentemente Nal, que facilita la sustitución del enlace C-CI por el grupo fenol, conduce a la formación de los dendrímeros carbosilano con grupos fenol amonio terminales descritos en la presente invención. De manera general, esta etapa se reproduce en el Esquema 1 : Esquema 1. Funcionalización de dendrímeros carbosilanos con enlaces terminales SÍ-CH2CI

n=1 m=4 n=1 m=4 (dendrímero neutro de 1 ^a generación) n=2 m=8 n=2 m=8 (dendrímero neutro de 2 ^a generación) n=3 m=16 n=3 m=16 (dendrímero neutro de 3 ^a generación)

Gn representa el esqueleto carbosilano del dendrímero que, según la generación (n=1 , n=2, n=3, etc). m corresponde al número de grupos funcionales del dendrímero.

Los dendrímeros obtenidos según el procedimiento descrito en la presente invención han sido:

• Gi-Si[(CH20)C6H3(Me){NHEt}] ₄ : Dendrímero neutro de primera generación (Figura 1a);

• G2-Si[(CH20)C6H3(Me){NHEt}]8: Dendrímero neutro de segunda generación (Figura 1 b);

• G3-Si[(CH20)C6H3(Me){NHEt}]i6: Dendrímero neutro de tercera generación (Figura 1c); cuyo proceso de síntesis se explica con mayor detalle en los ejemplos 1 a 3 que aparecen descritos posteriormente. Salificación con HCI

La salificación de los dendrímeros neutros de primera, segunda y tercera generación, con grupos terminales amonio-fenóxido, descritos anteriormente, se realizó mediante la adición preferentemente de ácidos fisiológicamente aceptables, preferentemente, ácido clorhídrico (disolución 1 M en di-etil-éter EtO) en presencia del disolvente tetrahidrofurano (THF) (Esquema 2). Esquema 2. Salificación de dendrímeros carbosilanos con ramificaciones amonio-fenóxido terminales.

n=1 m=4 (dendrímero neutro de 1 ^a generación) n=1 m=4 (dendrímero catiónico de 1 ^a generación) n=2 m=8 (dendrímero neutro de 2 ^a generación) n=2 m=8 (dendrímero catiónico de 2 ^a generación) n=3 m=16 (dendrímero neutro de 3 ^a generación) n=3 m=16(dendrímero catiónico de 3 ^a generación)

Gn representa el número de generaciones del esqueleto carbosilano del dendrímero (n=1 , n=2, n=3, etc). m corresponde al número de grupos funcionales del dendrímero.

La utilización de este esquema de reacción dio lugar a los compuestos:

• Gi-Si[(CH20)C6H3(Me){N ⁺ H2Et}] ₄ 4Ck Dendrímero catiónico de primera generación (Figura 2a);

• G2-Si[(CH20)C6H3(Me){N ⁺ H2Et}]8 8Ch : Dendrímero catiónico de segunda generación (Figura 2b);

• G3-Si[(CH20)C6H3(Me){N ⁺ H2Et}]i6 16 Ch :Dendrímero catiónico de tercera generación (Figura 2c);

El proceso de síntesis de estos dendrímeros se describe con mayor detalle en los ejemplos 4 a 5.

En este sentido, el segundo objeto de la presente invención se refiere a un procedimiento de preparación de dendrímeros carbosilanos con grupos amonio-fenóxido en los extremos, caracterizado por hacer reaccionar un dendrímero según la fórmula general:

en la que Gn representa la generación correspondiente al esqueleto carbosilano del dendrímero; con al menos un grupo amonio-fenóxido, a excepción del grupo dimetilaminofenol. Las generaciones Gn de los esqueletos de dendrímeros de la invención son preferentemente de primera, segunda y tercera generación, y m representa el número de grupos funcionales del dendrímero.

En otra realización preferida el procedimiento de la invención se caracteriza porque en la reacción del dendrímero con el gru po amonio-fenóxido se utilizan cantidades preferentemente estequiométricas del amonio-fenóxido elegido y se realiza en presencia de un disolvente, preferentemente DMF, y en presencia de cantidades catalíticas de compuestos iónicos, preferentemente el compuesto Nal. Estos compuestos iónicos facilitan la sustitución del enlace C-CI por el grupo fenólico, de manera que cada uno de los enlaces SÍ-CH2-CI pase a ser un enlace S1-CH2-O por el que queda unido el resto correspondiente al amonio-fenóxido utilizado.

En otra realización preferida el procedimiento de la invención se caracteriza porque los grupos amonio-fenóxido utilizados para obtener los dendrímeros carbosilano de la invención a partir de los correspondientes derivados con enlaces terminales SÍ-CH2-CI son preferentemente grupos 3-(etilamino)-cresol.

En otra realización preferida el procedimiento de la invención se caracteriza porque los grupos amonio-fenóxidos se encuentran unidos al dendrímero mediante un grupo -O- que se ha formado a partir del grupo -OH del amonio-fenóxido.

En otra realización preferida el procedimiento de la invención se caracteriza porque los dendrímeros obtenidos pueden ser de primera, segunda o tercera generación.

En otra realización preferida el procedimiento de la invención se caracteriza porque adicionalmente, los dendrímeros carbosilanos obtenidos se salifican con ácidos fisiológicamente aceptables en la totalidad de los grupos amonio-fenóxidos presentes en los restos terminales de las ramificaciones, siendo la sal preferida el hidrocloruro, obtenido en disolventes polares, preferentemente THF.

Otro objeto de la presente invención se refiere al uso de los dendrímeros descritos en la misma, como medicamentos y antisépticos, preferentemente como biocidas. Ejemplos de síntesis de dendrímeros carbosilano con grupos amonio-fenóxido terminales

Debe entenderse que los ejemplos que se dan a continuación son sólo una ilustración del objetivo de esta invención y no suponen en modo alguno una limitación.

En los Ejemplos 1 a 3 que aparecen a continuación se describe la síntesis de dendrímeros carbosilano con grupos amonio-fenóxido terminales partiendo de dendrímeros precursores Gi-(SiCH2-CI) ₄ , G2-(SiCH2-CI)s y G3-(SiCH2-CI)i6 sintetizados previamente siguiendo los procedimientos ya conocidos [7,12-16,19] como se ha comentado, dichos dendrímeros precursores sirven como "esqueletos" o núcleos a partir de los cuales se forman los dendrímeros carbosilanos de la invención, con grupos amonio-fenóxido terminales, haciéndolos reaccionar con compuestos que dan lugar a los ligandos que se convierten en los extremos de las ramificaciones de los dendrímeros. El compuesto utilizado para la síntesis de los dendrímeros que se describen en los Ejemplos 1 a 3 fue el 3-(etilamino)-p-cresol (Sigma Aldrich) Los detalles de las reacciones en las que se ha utilizado este compuesto para dar lugar a dendrímeros carbosilano de la invención, así como la salificación de los mismos para dar lugar a dendrímeros de la invención adicionales, se describen a continuación en los Ejemplos 1 a 5.

Ejemplol : Síntesis de dendrímeros neutros de primera generación con grupos amonio- fenóxidos terminales: Gi-Si[(CH ₂ 0)C6H ₃ (Me){NHEt}]4 (Figura 1a).

A una disolución del dendrímero Gi-(SiCH ₂ CI) ₄ (0.92 g, 1.47 mmol) en DMF (100 mi) se adiciona el reactivo comercial 3-etilamino-p-cresol [(OH)C6H3(Me){NHEt}] (0.89 g, 5.87 mmol). La mezcla de reacción se lleva a cabo en presencia de una pequeña cantidad de Nal y K2CÜ3 (0.91 g, 6.60 mmol). La mezcla así preparada se agita durante 24h a 80°C. Transcurrido este tiempo se evapora el disolvente mediante vacío, calentando con un baño de agua a 50°C. El residuo obtenido se disuelve en CH2CI2 y se lava con H2O. De este modo se obtiene el dendrímero neutro de primera generación con grupos amonio-fenóxido terminales: G1- Si[(CH20)C6H3(Me){NHEt}] ₄ (Figrua 1a), como un aceite marrón-rojizo que se purifica mediante cromatografía en columna de Bio-Beads S-X1 con tolueno como eluyente (0.64 g, 40%). El dendrímero neutro de primera generación obtenido, se ha caracterizado mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear de ¹ H, ¹³ C y ²⁹ Si, y espectrometría de masas (MALDI-TOF) y análisis elemental de C, H y N. Los datos obtenidos han sido:

RMN- ¹ H (CDC ): δ 6.88 (d, 4H, C ₆ H ₃ ), 6.22 (m, 8H, C ₆ H ₃ ), 3.51 (s, 8H, -S1CH2O-), 3.32 (s ancho, 4H, -NHCH2CH3), 3.15 (m, 8H, -NHCH2CH3), 2.03 (s, 12H, -PhCH ₃ ), 1.35 (m, 8H, SÍCH2CH2CH2SÍ-), 1.27 (t, 12H, -NHCH2CH3), 0.67 (m, 8H, SÍCH2CH2CH2SÍ-), 0.55 (m, 8H, SÍCH2CH2CH2SÍ-), 0.07 (s, 24H, -SiMe ₂ ).

RMN- ¹³ C { ¹ H} (CDCI3): δ 161.1 (C¡ _pS o unido a -OCH2S1-), 146.8 (C¡ _pS o unido a -NHCH2CH3), 129.6 (C ₆ H ₃ ), 113.3 (C¡ _pS o unido a -CH ₃ ), 100.5, 96.8 (C ₆ H ₃ ), 59.68 (-S1CH2O-), 38.0 (- NHCH2CH3), 18.2, 18.0, 16.9 (Si(CH ₂ ) ₃ Si-), 16.2 (-NHCH2CH3), 14.5 (-PhCH ₃ ), -5.0 (-SiMe ₂ ). RMN- ²⁹ Si { ¹ H} (CDCI3): δ (Go-Si) no se observa, 0.8 (G1-S1).

MS (MALDI/TOF en Ditranol disuelto en THF): miz Cale. 1084.69 [M]; Exp. 1085.69 [M+H ⁺ ] ⁺ . Análisis elemental C ₆ oHi ₀ 4N ₄ 0 ₄ Si ₅ : Cale. %: C, 66.36; H, 9.65; N, 5.16; Exp. %: C 65.20; H, 9.32; N, 4.86.

Ejemplo 2: Síntesis de dendrímeros neutros de segunda generación con grupos amonio- fenóxidos terminales: G2-Si[(CH ₂ 0)C6H ₃ (Me){NHEt}]8 (Figura 1 b).

El dendrímero neutro de segunda generación con grupos amonio-fenóxido terminales (Figrua 1 b) se prepara siguiendo un procedimiento similar al descrito para el dendrímero neutro de primera generación (ver ejemplo 1), partiendo del dendrímero G2-(SiCH2CI)s (1.88 g, 1.21 mmol) y en presencia del reactivo comercial 3-etilamino-p-cresol [(OH)C6H3(Me){NHEt}] (1.46 g, 9.64 mmol). La reacción se lleva a cabo en presencia de una pequeña cantidad de Nal y K2CO3 (1.42 g, 1.02 mmol). De este modo, se obtiene el dendrímero neutro de segunda generación con grupos amonio-fenóxidos terminales: G2-Si[(CH20)C6H3(Me){NHEt}]8 (Figura 1 b), como un aceite de color marrón (1.10 g, 27%) que se caracteriza por técnicas de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) ( ¹ H, ¹³ C, ²⁹ Si-RMN) y análisis elemental de C, H y N. Los datos obtenidos han sido:

RMN- ¹ H (CDCI3): δ 6.88 (d, 8H, C ₆ H ₃ ), 6.21 (m, 16H, C ₆ H ₃ ), 3.52 (s, 16H, -S1CH2O-), 3.31 (s ancho, 8H, -NHCH2CH3), 3.15 (m, 16H, -NHCH2CH3), 2.03 (s, 24H, -PhCH ₃ ), 1.28 (m, 48H, SÍCH2CH2CH2SÍ y -NHCH2CH3), 0.69 (m, 8H, -SÍCH2CH2CH2SÍCH2O-), 0.55 (m, 32H, SÍCH2CH2CH2SÍ), 0.08 (s, 48H, -SiMe ₂ ), -0.08 (s, 12H, -SiMe). RMN- ¹³ C { ¹ H} (CDC ): δ 161.5 (C _ipS o unido a -OCH2S1-), 147.2 (C _ipS o unido a -NHCH2CH3), 130.1 (C ₆ H ₃ ), 113.7 (C _ipS o unido a -CH ₃ ), 100.9, 97.2 (C ₆ H ₃ ), 60.1 -S1CH2O-), 38.4 (- NHCH2CH3), 19.0, 18.7, 18.6, 18.4, 18.3, 18.2 (-Si(CH ₂ ) ₃ Si-), 16.6 (-NHCH2CH3), 15.0 (- PhCH ₃ ), -4.5 (-SiMe ₂ ), -4.9 (-SiMe).

RMN- ²⁹ Si { ¹ H} (CDCI3): δ (Go-Si) no se observa, 3.0 (G1-S1) y -0.2 (G2-S1).

Análisis elemental CiseF NsosSiis: Cale. %: C, 65.74; H, 9.90; N, 4.51 ; Exp. %: C 60.60; H, 9.31 ; N, 3.08.

Ejemplo 3: Síntesis de dendrímeros neutros de segunda generación con grupos amonio- fenóxidos terminales: G3-Si[(CH ₂ 0)C6H ₃ (Me){NHEt}]i6 (Figura 1 c).

El dendrímero neutro de tercera generación con grupos amonio-fenóxido terminales (Figura 1c) se prepara siguiendo un procedimiento similar al descrito para el dendrímero neutro de primera generación con grupos amonio-fenóxido terminales (ver Ejemplo 1), partiendo del dendrímero G3-(SiCH2CI)i6 (1.20 g, 0.34 mmol) y en presencia del reactivo comercial 3- etilamino-p-cresol [(OH)C6H3(Me){NHEt}] (0.84 g, 5.55 mmol). La reacción se lleva a cabo en presencia de una pequeña cantidad de Nal y K2CO3 (0.79 g, 5.73 mmol). De este modo, se obtiene el dendrímero neutro de tercera generación con grupos amonio-fenóxido terminales: G3-Si[(CH20)C6H3(Me){NHEt}]i6 (Figura 1c), como un aceite de color marrón que se identifica por técnicas de RMN ( ¹ H, ¹³ C, ²⁹ Si-RMN) y análisis elemental de C, H y N. Los datos obtenidos han sido:

RMN- ¹ H (CDCI3): δ 6.87 (d, 16H, C ₆ H ₃ ), 6.23 (m, 32H, C ₆ H ₃ ), 3.51 (s, 32H, -S1CH2O-), 3.32 (s ancho, 16H, -NHCH2CH3), 3.13 (m, 16H, -NHCH2CH3), 2.03 (s, 48H, -PhCH ₃ ), 1.26 (m, 104H, SÍCH2CH2CH2SÍ y -NHCH2CH3), 0.68 (m, 32H, -CH2SÍCH2O-), 0.55 (m, 80H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si), 0.07 (s, 96H, -SiMe ₂ ), -0.10 (s, 36H, -SiMe).

RMN- ¹³ C { ¹ H} (CDCI3): δ 161.9 (C¡ _pS o unido a -OCH2S1-), 148.1 (C _ipso unido a -NHCH2CH3), 130.5 (C ₆ H ₃ ), 113.6 (C _ipso unido a -CH ₃ ), 101.4, 97.7 (C ₆ H ₃ ), 60.5 (-S1CH2O-), 38.9 (- NH CH2CH3), 19.4-18.8 (-Si(CH ₂ ) ₃ Si-), 17.1 (-NHCH2CH3), 15.3 (-PhCH ₃ ), -4.1 (-SiMe ₂ ), -4.5 (- SiMe).

RMN- ²⁹ Si { ¹ H} (CDCI3): δ (Go-Si) y (G1-S1) no se observan, 3.2 (G2-S1) y -0.3 (G ₃ -Si).

Análisis elemental C288H524N16O16SÍ29: Cale. %: C, 65.49; H, 10.00; N, 4.24; Exp. %: C 63.07; H, 9.89; N, 3.71. Estos dendrímeros, se obtienen como productos aceitosos de color marrón en altos rendimientos. Todos ellos son solubles en disolventes orgánicos comunes como diclorometano, éter dietílico o tolueno, e insolubles en agua. Ejemplo 4.- Síntesis de dendrímeros catiónicos de primera generación con grupos amonio-fenóxidos terminales: Gi-Si[(CH ₂ 0)C6H3(Me){NH ₂ ⁺ Et}]4 4CI- (Figrua 2a).

Sobre una disolución del dendrímero neutro de primera generación con grupos amonio- fenóxido terminales (Figura 1a) (0.76 g, 0.72 mmol) en THF (20 mi), se añadieron 6 mi de una disolución 1 M de HCI en éter dietílico (5.79 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo con agitación constante durante 48 h a temperatura ambiente para después eliminar el exceso de HCI. El residuo resultante se lava con éter dietílico (2x5 mi) en frío y se seca a vacío obteniendo así un sólido marrón que se identifica como dendrímero catiónico de primera generación con grupos amonio-fenóxidos terminales: Gi-Si[(CH20)C6H3(Me){NH2 ⁺ Et}] ₄ 4CL (0.79 g, 89%) (Figura 2a). Los dendrímeros catiónicos de primera generación obtenidos, se han caracterizado mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear de ¹ H, ¹³ C y ²⁹ Si, espectrometría de masas (MALDI-TOF) y análisis elemental de C, H y N. Los datos obtenidos han sido:

RMN- ¹ H (DMSO): δ 7.12 (d, 4H, C ₆ H ₃ ), 6.96 (s, 4H, C ₆ H ₃ ), 6.79 (d, 4H, C ₆ H ₃ ), 3.55 (s, 8H, - S1CH2O-), 3.21 (m, 8H, -N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 2.26 (s ancho, 12H, -PhCH ₃ ), 1.35 (m, 8H, SÍCH2CH2CH2SÍ-), 1.24 (t, 12H, -N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 0.64 (m, 8H, SÍCH2CH2CH2SÍ-), 0.53 (m, 8H, SÍCH2CH2CH2SÍ-), 0.03 (s, 24H, -SiMe ₂ ).

RMN- ¹³ C { ¹ H} (DMSO): δ 159.3 (C¡ _pS o unido a -OCH2S1 solapado con C ₆ H ₃ ), 132.2 (C¡ _pS o unido a -N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ solapado con C ₆ H ₃ ), 121.3 (C¡ _pS o unido a -CH ₃ ), 112.2 (C ₆ H ₃ ), 59.9 (-S1CH2O- ), 43.7 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 24.6 (-PhCH ₃ ), 17.5, 16.8, 16.2 (-Si(CH ₂ ) ₃ Si-), 10.9 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), - 5.1 (SiMe ₂ ).

RMN- ²⁹ Si { ¹ H} (DMSO): δ (Go-Si) no se observa, 1.0 (G1-S1).

RMN- ¹⁵ N { ¹ H} (DMSO): δ -314.5 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ Me).

MS (MALDI/TOF en Ditranol disuelto en THF): miz Cale. 1228.60 [M]; Exp. 1085.73 [M-4CI†. Análisis elemental C ₆ oHio8CI ₄ N ₄ 0 ₄ Si ₅ : Cale. %: C, 58.50; H, 8.84; N, 4,55; Exp. %: C 56.80; H, 8.29; N, 4.24. Ejemplo 5.- Síntesis de dendrímeros catiónicos de segunda generación con grupos amonio-fenóxidos terminales: G2-Si[(CH ₂ 0)C6H ₃ (Me){NH2 ⁺ Et}]88CI- (Figura 2b).

El dendrímero catiónico de segunda generación con grupos amonio-fenóxido terminales (Figura 2b) se prepara siguiendo un procedimiento similar al descrito para el dendrímero catiónico de primera generación con grupos amonio-fenóxido terminales (ver ejemplo 4), partiendo del dendrímero neutro de segunda generación con grupos amonio- fenóxido terminales (Figura 1a) (0.65 g, 0.21 mmol) y 3.4 mi de una disolución 1 M de HCI en éter dietílico (3.40 mmol). De esta forma se obtienen dendrímeros catiónicos de segunda generación con grupos amonio-fenóxido terminales: G2-[(CH20)C6H3(Me){NH2 ⁺ Et}]8 8CI- (Figura 2b) como un sólido de color marrón (0.63 g, 97%), que se identifica por técnicas de RMN ( ¹ H, ¹³ C, ²⁹ Si-RMN) y análisis elemental de C, H y N. Los datos obtenidos han sido: RMN- ¹ H (DMSO): δ 7.03 y 6.85 (m, 48H, C ₆ H ₃ ), 3.52 (s ancho, 32H, -SiCH ₂ 0-), 3.15 (m, 16H, - N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 2.20 (s ancho, 24H, -PhCH ₃ ), 1.29 (m, 24H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si), 1.21 (t, 24H, N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 0.61-0.50 (m, 48H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si), -0.01 (s, 48H, -SiMe ₂ ), -0.14 (s, 12H, - SiMe).

RMN- ¹³ C { ¹ H} (DMSO): δ 159.5 (C¡ _pS o unido a -OCH ₂ Si solapado con C ₆ H ₃ ), 132.4 (C¡ _pS o unido a -N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ solapado con C ₆ H ₃ ), 121.3 (C¡ _pS o unido a -CH ₃ ), 112.2 (C ₆ H ₃ ), 59.5 (-SiCH ₂ 0-), 39.8 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ solapada con la señal de DMSO), 29.5 (-CH ₃ ), 17.4-15.8 (-Si(CH ₂ ) ₃ Si-), 11.4 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), -5.1 (-SiMe ₂ y -SiMe).

RMN- ¹⁵ N { ¹ H} (DMSO): δ -315.5 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ Me)

RMN- ²⁹ Si { ¹ H} (DMSO): δ (Go-Si) no se observa, 1.2 (Gi-Si), 0.0 (G ₂ -Si).

ANálisis elemental CisgF oCIsNsOsSb: Cale. %: C, 59.19; H, 9.29; N, 3.97; Exp. %: C 55.72;

H, 9.48; N, 3.50.

Ejemplo 6.- Síntesis de dendrímeros catiónicos de tercera generación con grupos amonio-fenóxidos terminales: G3-Si[(CH ₂ 0)C6H3(Me){N ⁺ H ₂ Et}]i6 16 Cl- (Figura 2c).

El dendrímero catiónico de tercera generación con grupos amonio-fenóxido terminales (Figura 2c) se prepara siguiendo un procedimiento similar al descrito para el dendrímero catiónico de primera generación con grupos amonio-fenóxido terminales (ver ejemplo 4), partiendo del dendrímero neutro de tercera generación con grupos amonio-fenóxido terminales (Figura 1a) (0.19 g, 0.04 mmol) y 1.2 mi de una disolución 1 M de HCI en éter dietílico (1.2 mmol). De esta forma se obtienen dendrímeros catiónicos de tercera generación con grupos amonio-fenóxido terminales: G3-Si[(CH20)C6H ₃ (Me){N ⁺ H ₂ Et}]i6 16 Cl- (Figura 2c). Estos dendrímeros se han caracterizado mediante técnicas de RMN ( ¹ H, ¹³ C, ²⁹ Si-RMN) y análisis elemental de C, H y N. Los datos obtenidos han sido:

RMN- ¹ H (DMSO): δ 7.04-6.89 (m, 96H, C ₆ H ₃ ), 3.52 (s ancho, 32H, -SiCH ₂ 0-), 3.18 (s, 32H, - N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 2.22 (s ancho, 48H, -PhCH ₃ ), 1.22 (m, 104H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si y -N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), 0.63-0.50 (m, 112H, SiCH ₂ CH ₂ CH ₂ Si), 0.02 (s, 96H, -SiMe ₂ ), -0.14 (s, 12H, -SiMe).

RMN- ¹³ C { ¹ H} (DMSO): δ 159.5 (C¡ _pS o unido a -OCH ₂ Si solapado con C ₆ H ₃ ), 131.2 (C¡ _pS o unido a -N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ solapado con CeH ₃ ), C¡ _pS o unido a -CH ₃ y CeH ₃ no se observan, 59.5 (-SiCH ₂ 0- ), 39.8 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ solapada con la señal de DMSO), (-CH ₃ ) no se observa, 17.3-15.8 (Si(CH ₂ ) ₃ Si), 11.5 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ CH ₃ ), -5.2 (-SiMe ₂ y -SiMe).

RMN- ¹⁵ N { ¹ H} (DMSO): δ -315.6 (-N ⁺ H ₂ CH ₂ Me).

RMN- ²⁹ Si { ¹ H} (DMSO): δ (Go-Si) y (Gi-Si) no se observan, 1.5 (G ₂ -Si) y 0.0 (G ₃ -Si).

Los dendrímeros catiónicos de primera, segunda y tercera generación, con grupos amonio- fenóxido terminales, según se describen en la presente invención, son solubles en dimetilsulfóxido, pero se pueden solubilizar en agua tras la adición de pequeñas cantidades (menos del 5%) de DMSO, además son estables al aire durante largos periodos de tiempo.

Ejemplo 7. Acción bactericida de los dendrímeros de la presente invención.

Se ha analizado la capacidad anti bacteriana de los dendrímeros catiónicos de primera y segunda generación descritos en la presente invención, frente a las bacterias Staphilococcus aureus (bacterias gram +) y Escherichia coli (bacterias gram -). Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla 1. Tabla 1. Actividad antibacteriana de los dendrímeros catiónicos funcionalizados con 3- etilamino-p-cresol y posteriormente salificados con HCI.

E.coli

GO = 3-etilamino-p-cresol salificado con HCI.

G 1 = dendrímero catiónico de primera generación descrito en la presente invención, Gi- Si[(CH ₂ 0)C6H ₃ (Me){NH2 ⁺ Et}] ₄ 4CK

G2 = dendrímero catiónico de segunda generación descrito en la presente invención, G2- [(CH ₂ 0)C6H ₃ (Me){NH2 ⁺ Et}]8 8CI-.

El término MIC indica la concentración mínima de un compuesto que inhibe el crecimiento de un microorganismo (efecto bacteriostático). El término MBC indica la concentración mínima de un compuesto que puede matar un microorganismo (efecto bactericida). Para un mismo compuesto y microorganismo, el valor de MIC < MBC.

Las concentraciones de dendrímero aparecen reflejadas en miligramos/litro (mg/l)

Según los datos mostrados en la Tabla 1 , los dendrímeros catiónicos de primera y segunda generación descritos en la presente invención presentan actividad anti bacteriana frente a las bacterias estudiadas, £ co// y S. aureus. BIBLIOGRAFÍA

I . M. Fischer, F. Vógtle, Angew. Chem. 1999, 111, 934-955; Angew. Chem. Int. Ed. 1999, 38, 884-905 y referencias incluidas en ella.

2. Hacein-Bey-Abina S. et al. N Engl J Med. 2003 Jan 16;348(3):255

3. N. Malik, R. Wiwattanapatapee, K. Klopsch, K. Lorenz, H. Frey, J. W. Weener, E. W.

Meijer, W. Paulus, R. Duncan, J. Control., Reí. 2000, 65, 133-148.

4. S. W. Krska, D. Seyferth, J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 3604-3612.

5. B. Luhmann, H. Lang, K. Bruning, Phosph. Sulf. Silic. Relat. Element. 2001 , 168, 481- 484.

6. A. W. Kleij, R. van de Coevering, R. J. M. Klein Gebbink, A. M. Noordman, A. L. Spek, G. van Koten, Chem. Eur. J. 2001 , 7, 181-192.

7. A. W. van der Made, P. W. N.M. van Leeuwen, J. Chem. Soc, Chem. Commun. 1992, 1400-1401.

8. Dendrimers and other dendritic polymers. Eds. J. M. Fréchet, D. A. Tomalia. Wiley

Series in Polymer Science 2001. J. Wiley & Sons, Ltd.

9. Dendrimers and Dendrons: Concepts, Syntheses, Applications. Ed. G.R. Newkome, C.N. Moorefield, F. Vógtle, Wiley-VCH, 2001.

10. G. E. Ossterom, J. N. H. Reek, P. C. J. Kamer, P. W. N. M. van Leeuwen, Angew.

Chem. Int. Ed. 2001 , 40, 1828-1849.

I I . D. Astruc, F. Chardac, Chem. Rev. 2001 , 101, 2991-3023.

12. S. M. Grayson, J. M. J. Fréchet, Chem. Rev. 2001 , 101, 3819-3867.

13. S. E. Stiriba, H. Frey, R. Haag, Angew. Chem. Int. Ed. 2002, 41, 1329-1334.

14. F. Aulenta, W. Hayes, S. Rannard, Eur. Polym. J. 2003, 39, 1741-1771.

15. U. Boas, P. M. H. Heegaard, Chem. Soc. Rev., 2003, 33, 43-63.

16. A. W. van der Made, P. W. N. M. van Leeuwen. J. C. de Wilde, R. A. C. Brandes, Adv.

Mater. 1993, 5, 466-468.

17. J. Roovers, P.M. Toporowski, L.L. Zhou, Polym. Prep. (J Am. Chem Soc, Div. Polym.

Chem.), 1992, 33, 182.

18. L. L. Zhou, J. Roovers, Macromolecules 1993, 26, 963-968.

19. D. Seyferth, D. Y. Son, A. L. Rheingold, R. L. Ostrander, Organometallics 1994, 13, 2682-2690. 20. I. Cuadrado, M. Morán, J. Losada, C. M. Casado, C. Pascual, B. Alonso, F. Lobete, en Advances in Dendritic Macromolecules; Eds.; G.R. Newkomone, JAI Press Inc: Greenwich CT, 1999, Vol. 3, pp 151-191.

21. C.Z. Chen, y S.L. Cooper, Biomaterials, 2002, 23, 3359-3368.

22. C.Z. Chen, N.C. Beck-Tan, P. Dhurjati, T.K. van Dyk, R.A. LaRossa, S.L.

23. ES2265291. " Novel carbosilane dendrimers, preparation method thereof and use of same".

24. P. Ortega, JL Copa-Patiño. MA Muñoz-Fernández, J Soliveri, R Gómez, FJ de la Mata.

Org. Biomol. Chem., 2006, 6, 3264-69