La présente invention a pour objet un nouveau dérivé de l'acid diéthyl- ^d it io-carbamique _# ^{' -} le diéthyl-dithio-carbamate de choline, son procédé de préparation, et son utilisation thérapeutique.

Le nouveau composé selon l'invention, le diéthyl-dithio-car _b a _¬ mate ^d e choline, de formule brute c ₁₀ H ₂₄ N ₂ O S ₂ , r _é pond _à la formu- le développée suivante :

et a un poids moléculaire de 252,40.

Ce nouveau sel de choline se présente sous forme de fins cris¬ taux incolores ou légèrement jaunâtres, ayant un point de fusion à 96-97'C, facilement solubles dans l'eau, dans les alcools et les glycols-, et ^b eaucoup moins solubles dans les solvants organiques.. Les cristaux de diêthyl-ditfaio-carbaπate de choline sont très hygroscopiques et doivent donc être conservés dans une enceinte hermétique et froide.

^• L'analyse centésimale du produit donne les résultats suivants _: Calculé Trouvé Moyenne

Carbone. 48,35 % ^' ₄ 8,18 - 48,47 48,33 %

Hydrogène 9,64 % ^{' '} 9,37 - 9,54 ^' 9,45 _%

. Azote 11,12 % ^' _U ,59 - u.51 11,55 ^" %

Soufre _< 25,55 % ^• 24,94 - 24,75 24,85 % ^' Oxygène 6,35 %

Les spectres I . R .. U .V. , R .M. N . et de masse mon _¬ trent bien les bandes caractéristiques de la molécule du nouveau produit de l'invention.

Le diéthyl-dithio-carbamate de choline peut être préparé par synt ^h èse à partir du dièt yl- U io-car _b a- mate de sodium tri-hydraté et du chlorure _d e choline. La réaction est la suivante :

C ₂ ^H 5 CH^

\ I

N-C-S CH ₃ -N-CH ₂ -CH ₂ OH

C ₂ H ₅ S CH ₃ + NaCl

. La synthèse peut être opérée selon le mode opératoire suivant: '

Dans deux erlens ou 2 bechers de capacité, appropriée, on dissout séparément :

- 56 g (0,40 mole) de chlorure de choline dans 100 ml d'éthanol absolu en le faisant tiédir à l'aide d'une plaque électrique ou d'un bain-marie et en remuant la solution pour favoriser la dissolu- .tiσn ^* .

- 90. g (0,40 mole) de dié'thyl-dithio-carbamate de sodium tri-hydraté dans 100 ml d'éthanol absolu.

Quand -les deux solutions sont limpides, on introduit lentement ^* en mince filet la solution alcoolique de choline dans celle du sel sodique, ceci sous forte agitation et en refroidissant extérieu¬ rement par un bain d'eau froide, car la réaction est très exothermique.

Quand le tiers environ ^" est ajouté, il se forme un abondant précipité. On continue l'addition tout en maintenant une très vigou¬ reuse agitation.

L'addition de la solution alcoolique de choline dans colle du sel sodique dure, environ ^' 15 minutes. On continue l'agitation encore pendant 30 minutes. On laisse ensuite refroidir pendant

toute une nuit. Le récipient contenant la masse réactionnelle res¬ tant fermé.

Le lendemain on élimine le chlorure de sodium par essorage et on lave sur filtre deux fois avec 50 ml d'éthanol absolu. On récupère environ 23 g de chlorure de sodium.

On concentre les eaux-mères alcooliques (contenant le diéthyl- dithio-carbamate de choline dissous dans l'éthanol) au bain-marie, sous le vide de la trompe-à-eau pour chasser tout l'excès d'éthanol.

On verse ensuite rapidement le résidu très visqueux dans un bêcher ou un mortier en verre ou en porcelaine. On sèche dans un dessicateur sous bon vide avec le pentoxyde de phosphore comme agent desséchant.

Le produit obtenu se présente en bloc que l'on réduit en fins cristaux ou en fine poudre micro-cristalline qui est incolore- ou très légèrement jaunâtre.

Le rendement quantitatif en diéthyl-dithio-carbamate de choline , obtenu est d'environ 100 g.

Le diéthyl-dithio-carbamate de choline ainsi obtenu doit être conservé dans une enceinte hermétique a cause de son hygroscopie. Selon la présente invention, on a mis en évidence les propriétés thérapeutiques du nouveau sel de choline et on a fait une étude très complète de sa toxicité.

L'étude toxicologique a été effectuée sur la souris blanche SWISS. Chez cet animal on a pu étudier pour le diéthyl-dithio-carbamate de choline, la- toxicité aiguë, la toxicité chronique, l'influence sur la prolificité, la tératogénèse, la fertilité dans le temps et la longévité, l'influence sur l'efficacité de la réponse immuni¬ taire. Pour toutes ces expériences, les animaux ont été randomisés, séparés selon les sexes, répartis par lots de 30, les femelles gravi des étant isolées en cages ^' individuelles. Ces animaux étaient nour ris avec un aliment- complet convenable qu'ils pouvaient consomme ad libitum, pour éviter toute carence au cours de l'expérimentation. Leur boisson était l'eau ordinaire additionnée ou non du produi attesté, à savoir le diéthyl-dithio-carbamate de choline.

L'aliment complet utilisé contenait des céréales, des protéines végétales, des protéines animales, des sels minéraux et des vitamines.

La mesure de la toxicité aiguë du nouveau composé selon l'inven¬ tion, administré par voie intrapé ^' ritonêale et sous-cutanée, montre que cette toxicité aiguë est très faible :

Au-dessous de 1 g/kg il n'y a pas de mortalité. La DL 50 est comprise entre 1,4 et 1,7 g/kg.

Le graphique suivant illustre ces résultats.

TOXICITE AIGUË CHEZ LA SOURIS EN G/KG (voie intrapéritonéale et sous-cutanée)

diéthyl-dithio-carbamate de choline g/kg

Pour mesurer la toxicité chronique du nouveau composé selon l'invention, on a administré par voie buccale dans l'eau de boisson ' une dose de 20 mg/kg par jour du nouveau composé, â 4 lots de 30 souris pendant 100 jours. Aucun effet néfaste sur la santé des animaux n'a pu être relevé.

On a examiné quel était 1-'effet du nouveau composé selon l'in¬ vention sur la prolificité et la tératogénèse des souris blanches SWISS. Les expériences ont été poursuivies sur quatre générations d'animaux et ont montré que les lots recevant le nouveau composé selon l'invention avaient globalement 15 l de plus de desc-endants que les lots témoins, ceci avec un taux de souriceaux mort-nés infé¬ rieur de moitié.

Les .résultats figurent dans le tableau ci-dessous : EXPERIENCES DE PROLIFIC TE ET DE TETRATOGENESE EFFECTUEES SUR QUATRE GENERATIONS DE SOURIS BLANCHES FEMELLES SWISS DE 4 MOIS

(Lots T - témoins; lots G - diéthyl-dithio-carbamate de choline a 1 */•• dans l'eau de boisson)

De même la mesure de la fertifilité des souris femelles en fonction de leur âge a montré que l'administration du nouveau composé selon l'invention allonge substantiellement la période de fertilité des souris ^' femelles comme le montre le tableau ci-dessous :

EXPERIENCES DE FERTILITE DES SOURIS FEMELLES SWISS

SELON LEUR AGE

(Lots T « témoins» lots G - Diéthyl-dithio-carbamate de choline à 1 */,. dans l'eau de boisson

Enfin, en ce qui concerne la croissance et la longévité des animaux, on a pu remarquer que le nouveau composé selon l'invention n'avait pas d'influence' ^' négative sur la croissance malgré une rèduc

tion d'environ 25% de la prise d'eau et d'environ de 5 % de la pri¬ se de nourriture. On a au contraire constaté que l'administration du nouveau composé selon l'invention retardait considérablement le vieillissement. Cette dernière activité est particulièrement spectaculaire chez les souris mâles, et semble due à une modification des caractères et des comportements amenant une diminution de la vulnérabilité qui résulte habituellement d'une très forte agressi¬ vité. Les mâles témoins se battent beaucoup plus, s'épuisent, se blessent et se tuent.

EXPERIENCES DE LONGEVITE COURBES DE MORTALITE ^r DES SOURIS SWISS MALES ET FEMELLES abreuvées avec de l'eau ordinaire pour les témoins et de l'ea ordinaire additionnée de 1 '/.. de diéthyl-dithio-carbamate de choline pour les lots expérimentaux

(chaque courbe est la moyenne de 10 lots de 30 souris).

10 12 14 16 18 âge en moi3

(1). souris mâles témoins

(2) sourie mâles recevant du diéthyl-dithio-carbama άβ choline

(3) souris femelles témoins

(4) souris femelles recevant du diéthyl-dithio-carbama de choline

On a également étudié l'influence du nouveau composé se l'invention sur l'efficacité de la réponse immunitaire chez souris blanches SWISS.

La protection des animaux supérieurs contre les agressions est assurée par le système immunitaire en relation avec les antigènes du complexe majeur d'his- tocompatibilité . L'efficacité de la réaction immunitaire dépend des mécanismes et d'équilibres

conjugués qui déterminent le ^' s principaux paramètres de la compétence (sensibilité, précision, intensité, durée). Ainsi, ^' les multiples et diverses agressions sont habituellement rapidement maîtrisées sans être sciemment perçues par l'hôte agressé. Mais lorsque les réponses inappropriées et erronées sont fréquentes, elles sont à l'origine de nombreuses maladies inflammatoires difficiles à maîtri¬ ser et qui s'amplifient généralement avec le vieillissement. Dans ces cas là, une stratégie hygiénique et des interventions thérapeuti¬ ques s'imposent pour corriger les erreurs immunitaires, maîtriser l'inflammation et pour rétablir la fonctionnalité des tissus et des territoires lésés.

Le tableau ci-après illustre la potentialisation de la compéten¬ ce immunitaire par le diéthyl-dithio-carbamate de choline. Le tableau montre en effet que pour obtenir la même protection immu- nitaire, il faut 100 mcg de va.ccin spécifique chez les témoins et seulement 20 mcg pour les souris traitées avec le composé selon l'invention.

INFLUENCE DU DIETHYL-DITHIO-CARBAMATE DE CHOLINE CHEZ LA SOURIS. SUR L'EFFICACITE DE LA REPONSE IMMUNITAIRE A L'INJECTION SOUS-CUTANEE D'UN ESCHERICHIA COLI PATHOGENE

(T - lots témoins; G - lots abreuvés depuis 21 j avec de l'eau de boisson comportant 1*/.. ^de diéthyl-dithio-carbamate de choline)

Il résulte de toutes les expérimentations relatées ci-dessus que la toxicité du' nouveau composé selon l'invention est pratiquement

.nulle. Il apparaît ^' également que l'administration de ce nouveau sel de choline aux souris blanches SWISS entraîne des effets très

5 favorables sur la proli icité,* "la longévité, les comportements et l'efficacité de la réponse immunitaire.!

Les études pharmàcologiques du nouveau composé selon l'invention ont montré qu'il possédait un effet chélatant des métaux lourds et de transition, un effet immuno-stimulant, un effet anti-dégéné- 10 ratif et un effet sur les transferts neuronaux, et qu'il présentait par conséquent une très intéressante activité thérapeutique dans le domaine des maladies dêgênèratives cérébrales, telles que les démences séniles, la maladie d'Alzheimer et les démences de type Alzheimer.

15 On sait que dans ces maladies, les neurones centraux cholinergi- ques sont les premiers atteints par la dégénérescence, que ce soit au niveau de la synthèse du neuro-médiateur : l'acétyl-choline, ou au niveau de la membrane qui nécessite de la choline pour sa biosynthèse.- Or du point de vue thérapeutique, on ne peut pas admi-

20 nistrer directement de l'acéCyl-choline qui ne traverse pas les membranes, et les résultats obtenus par administration de choline seule sous forme de chlorure sont tout a fait insuffisants.

Le nouveau composé selon l'invention a fait l'objet d'un certain nombre d'expérimentations conduites sur deux modèles animaux de ^• 25 dégénérescence -nerveuse, provoquée soit par une destruction des noyaux cholinergiques de la base, soit par l'administration réitérée d'hydroxyde d'aluminium. On a observé dans les deux cas, que les capacités d'apprentis-sage des animaux, détériorées en liaison avec la dégénérescence, se trouvaient restaurées par l'administratio 30 par voie orale du diéthyl-dithio-carbamate de choline selon l'inven tion. Après un traitement ^• de trois semaines, on observait un effet dose et les mesures de dose- efficace révélaient que la DE50 était comprise entre 0,10 g et 0,30 g/kg de poids d'animal.

L'étude clinique du diéthyl-dithio-carbamate de choline a ét 25 réalisée en procédant à des expérimentations cliniques sur des pa tients atteints d'une maladie dégénérative cérébrale, parfaitemen

définie selon les critères DSM III du MMS, d'un bilan psychomètriquβ approfondi et d'une radiographie SCANER.

L'expérimentation a été menée en double insu, en milieu hospita¬ lier avec les traitements suivants d'une durée de six à douze semai-

- placebo

- chlorure de choline

- diéthyl-dithio-carbamate de choline.

Les doses de substance active utilisées étaient de 125 mg par 0 ^' prise orale trois fois .par jour, soit une dose journalière de 375 mg.

Les résultats montrent que dans 70 % des cas traités par le produit selon l'invention, on observe une suppression ou une réduc¬ tion significative des troubles de comportement et de l'humeur des 5 ^' patients, ces résultats ^' étant objectivés par des tests psychomôtri- • ques.

Dans le cas des patients traités avec le placebo ou le chlorure de choline, on observe dans 30% des cas seulement des améliorations légères _/ peu nettes et moins durables que celles obtenues dans Q- le ^cas d ^es patients traités avec le nouveau composé de l'invention. La présente invention a également pour ob]et des compositions thérapeutiques contenant le diéthyl- _d ithio-car amate de choline à titre de principe actif. Ces compositions peuvent être administrées par voie 5 - orale, rectale, ou injectable, selon l'état physiopa- thologique du tractus digestif des malades considérés. Dans le cas- de l'administra ion orale, les compo¬ sitions pharmaceutiques de l'invention se présentent sous forme de gélules ou comprimés dans lesquels le 0 composé actif est associé à un excipient convenable, comprenant avantageusement du gel de silice pour tenir compte du caractère fortement hygros opique du dié¬ t _h yl- _d ithio-carbamate de choline. Par ailleurs pour éviter l'hydrolyse prématurée de ce dernier au niveau 5 _d e l'estomac, il est nécessaire que l'enveloppe galé- nique de ces préparations pour administration orale soit _d e nature eπtèrique ou gastro résistante, c'est-à-dire ne se délitant u'en milieu intestinal (par exemple micro-encapsu-

Dans le cas de l'adminis ration par voie rectale, on peut préparer à partir du composé selon l'invention des suppositoires de composition classique.

Dans le cas de la voie injectable il est néces¬ saire de prévoir le conditionnement séparé du diéthyl- dithio-carbamate de choline et du soluté ph siologique qui devra lui être additionné au moment de l'adminis¬ tration.

La posologie retenue pour les nouvelles composi¬ tions pharmaceutiques selon l'invention se situe entre une administration journalière de 250 mg à 2,5 g de composé actif, étant entendu que pour l'administration orale les gélules ou comprimés sont de préférence dosés à 125 mg du composé actif et peuvent être admi¬ nistrés à raison de 2 à 20 gélules ou comprimés par jour, et que pour l'administration rectale les suppo¬ sitoires sont dosés à -250 ou 500 mg de composé actif pour 3 g .

Les compositions phamaceutiques décrites ci- dessus sont données à titre d'exemple illustratif et non limitatif de la présente invention.