DE NOUVEAUX GLYCALS, ANTHRACYCLINES OBTENUES A L'AIDE DE CES GLYCALS ET UTILISATION DESDITES ANTHRACYCLINES EN TANT

QUE MEDICAMENTS.

La présente invention est relative à de nou¬ veaux analogues du L-Fucose, à leur procédé de préparation, à l'application de ces analogues a la préparation de nou¬ veaux glycals, aux anthracyclines obtenues a l'aide de ces glycals et à l'utilisation desdites anthracyclines en tant que médicaments.

Les anthracyclines constituent une famille importante d'agents anticancéreux. Leur inconvénient majeur est leur cardiotoxicité ; l'atteinte cardiaque est fonction de la dose totale administrée ; toutefois, celle-ci peut varier selon 1'anthracycline.

Le L-Fucose présente un grand intérêt biolo¬ gique puisqu'il est un des constituants de plusieurs anti¬ gènes de groupes sanguins et que plusieurs glycosides, dérivés du désoxy-2-L-Fucose, aisément obtenu à partir du L-Fucose, présentent des activités antibiotiques et antitu¬ morales en série anthracycline.

En particulier, le glycoside de Formule 3a (D.

HORTON et al., Carbohydr. Res. , 1977, 57, C36)

présente une activit laire à celle de la daunorubicine de formule 4a iD. HORTON

et al . , J . Med . Chem . _r 1976 , 22 , 406 j .

Le désoxy-2-L-Fucose est aussi le constituant central de nombreux risaccharides en série anthracycline , comm

qui antitumoraie remar¬ quable.

De nombreux efforts sont poursuivis dans ce do¬ maine, dans le but d'améliorer l'index thérapeutique des anthracyclines, mais aussi pour trouver des composés actifs sur des souches de cellules cancéreuses résistantes aux anthracyclines utilisées actuellement en clinique. Une des modifications les plus prometteuses paraît être celle de la partie glycosidique qui est impliquée dans toutes les étapes du mode d'action de ces composés (transport, accumu¬ lations intracellulaires, complexation avec l'ADN ...).

C'est pourquoi, la Demanderesse, poursuivant l'étude entreprise concernant la synthèse de nouveaux glycosides de grande valeur thérapeutique (cf notamment Brevets français n ^: 84 03634 et n ¹ 85 10063), a mis au

point un nouveau et tant économiquement qu'industriellement très intéressant procédé de synth se du L-Fucose et d'analogues de celui-ci, indispensables à la préparation de nouvelles anthracyclines.

Malheureusement, le L-Fucose (ou désoxγ-6-L- galactose) de Formule 1

est un sucre obtenu diff cilement par extraction d'espèces de Fucus variées et est donc d'un prix de revient élevé. Plusieurs synthèses totales ont déjà été proposées, mais elles se caractérisent par un nombre d'étapes élevé ou par la nécessité d'une étape de séparation peu adaptée à la préparation de quantités importantes (DEFAYE et al.. Carbo- hydr. Res., 126, 165, 1984).

La présente invention s'est en conséquence donnée pour but de fournir de nouvelles anthracyclines qui répondent mieux aux nécessités de la pratique que les anthracyclines de l'Art antérieur, leur procédé de prépara¬ tion ainsi que les sucres et les glycals servant à leur préparation.

La présente invention a pour ob e des ana¬ logues du L-Fucose, correspondant à la formule générale l'

dans laquelle :

R représente un groupe alkyle éventuellement substitue, li¬ néaire ou ramifie ou un groupe aryle éventuellement substi¬ tué, à l'exception d'un groupe methyle, d'un groupe CH2OH ou d'un groupe CHzOR3 , R3 ayant la même signification que

R ;

Ri et R2 sont toujours différents et représentent un atome

d'hydrogène ou un groupe hydroxyle, étant donné que lorsqu

Ri est un atome d'hydrogène et R2 est un groupe OH, on ob tient un stéréoisomère β et lorsque Ri est un groupe hy droxyle et R2 est un atome d'hydrogène, on obtient un sté T réoiso ère α.

La présente invention a également pour objet u procédé de préparation du L-Fucose de Formule 1 et/ou d ses analogues de Formule 1' , à partir de D-mannose, carac térisé : 0 a. en ce qu'on transforme le D-mannose de For mule 6 en diacétone mannose de Formule 7, b. en ce qu'on condense un dérivé orga nométallique de formule R-Y, dans laquelle :

R est un groupe alkyle linéaire ou ramifié insaturé ou non 5 éventuellement substitué ou un groupe aryle substitué o non, y compris un groupe methyle et

Y du magnésium ou du lithium avec le diacétone mannose de Formule 7, ladit condensation fournissant : 0 - le diol de Formule 8, dans le cas où R représente u groupe methyle, et c. en ce qu'on protège les fonctions alcool du dit diol de Formule 8 par un traitement par un composé d formule R'-X, dans laquelle : S R' est un groupe benzyle éventuellement substitué et X un halogène pour obtenir le composé de Formule 9, d. en ce qu'on hydrolyse, au cours d'une qua trième étape, le composé de Formule 9 pour donner le pro 0 duit de Formule 10, e. en ce qu'on scinde le produit de Formule 10 au niveau du glycol en bout de chaîne, au cours d'une cin quième étape pour obtenir un mélange de deux anomères a e β de Formule 11, 5 f. en ce que l'on transforme le mélange obten au cours de l'étape e. en produit recherché (1), au cour

d'une sixième étape, par hydrogènolyse selon le schéma I suivant :

6 D-Mannose

10 _α R ₁₌ OH, R ₂ = H

- un mélange de deux diols 12 et 13, dans le cas où représente un groupe alkyle éventuellement substitué, li néaire ou ramifié ou un groupe aryle éventuellement substi tué, à l'exception d'un groupe methyle, d'un groupe CH2O ^c - ou d'un groupe CH2OR3, R3 ayant la même signification q R, et c. en ce qu'on protège les fonctions alcool d dit mélange de diols 12 et 13 par un traitement par un co posé de formule R'-X, dans laquelle : G R ¹ est un groupe benzyle éventuellement substitué et X un halogène pour obtenir les composés de Formules 14 et 15 d. en ce qu'on hydrolyse, au cours d'une qu trième étape, le composé 14 pour donner le produit 5 Formule 16, e. en ce qu'on scinde le produit de Formule 1 au niveau du glycol en bout de chaîne, au cours d'une ci quième étape pour obtenir un mélange de deux anomères a β de Formule 17, 0 f. en ce que l'on transforme le mélange obte au cours de 1'étape e. en produit recherché (1' ) , au cou d'une sixième étape, par hydrolyse,

selon le schéma II suivant

RMgBr

17

SCHEMA II

La présente invention a également pour ob des glycals obtenus à partir du L-Fucose et/ou de ses a logues selon l'invention, de Formule 2 :

dans laquelle :

R représente un groupe alkyle éventuellement substitu linéaire ou ramifié ou un groupe aryle éventuelleme substitué, à l'exception d'un groupe CH2OH, d'un grou CH2OR3, Ra ayant la même signification que R.

Les glycals de Formule 2 sont obtenus de m nière connue selon la méthode de B. Iselin et T. Reichste (Helv. Chim. Acta, 1944, 27, 1200) qui comprend les étap suivantes :

Première étape : peracétylation d'un mélan d' anomères et S de Formule l' pour obtenir un dérivé so forme d'isomères α et β de Formule 18 :

dans laquelle R a la même signification que précédemment Ri est un hydrogène et R2 un groupe acétoxy ; l'isomère 18 β peut être séparé par précipit tion sélective.

Deuxième étape : traitement du mélange 18 α β par de l'acide bromhydrique, pour obtenir un dérivé bro intermédiaire qui, soumis à l'action du zinc fournit

glycal de Foraule 2, selon le mchémΛ III suivant :

r SCHEMA III 18

La présente invention a, en outre, pour obje un procédé de préparation de nouvelles anthracyclines partir d'un glycal selon l'invention, caractérisé en c que : a. ledit glycal de Formule 2 est transformé e dérivé halogène par addition d'un composé de Formule H anhydre, dans laquelle X est un halogène, pour obtenir u composé de Formule 19, selon le schéma IV. x

SCHEMA IV

19

b. puis ledit composé de Formule 19 est coupl à une anthracyclinone appropriée, par une réaction de typ Koenigs-Knorr.

Selon un mode de mise en oeuvre dudit procédé ledit composé 19 est couplé avec La daunomycinone et four nit un produit de Formule 20* :

dans laquelle :

R est tel que défini ci-dessus ;

Ri représente un groupe acétyle ou un atome d'hydrogène.

Selon un autre mode de mise en oeuvre dudi procédé, ledit composé 19 est couplé avec la B rhodomyci none et fournit un produit de Formule 21*.

dans lequel,

R est tel que défini ci-dessus ;

Ri représente un groupe acétyle ou un atome d'hydrogène ; R* représente un atome d'hydrogène ou le radical de For

(19'

dans lequel R et Ri ont les mêmes significations que précé demment.

Les glycoβides obtenus sont purifiés pa chromatographie. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui res sortiront de la description qui va suivre.

L'invention vise plus particulièrement les nou veaux analogues du L-Fucose et de nouveaux glycals obtenu à partir deεdits analogues ainsi que de nouvelles anthracy clines, et leurs procédés de préparation, ainsi que des compositions, en particulier des compositions thérapeu¬ tiques, dans lesquelles entrent lesdits dérivés, pour leu utilisation en chimiothérapie anti-cancéreuse. Ces nouvelles anthracyclines ont des propriétés cytotoxiques et antitumorales remarquables, comme précisé dans les tests pharmacologiques ci-après.

Parmi les différentes anthracyclines conformes à la présente invention, présentant des résultats pharmaco- logiques très intéressants, il y a lieu de citer notam¬ ment :

. la Di-0-{di-O-acétyl-3' ,4' didésoxy-2' ,6'-σ-L-thréo-hexo- pyrannosyl) - 7,10 0-Rhodomγcinone de Formule 22a ; . la 0-(di-0-acétyl-3' ,4' didésoxγ-2' ,6'-α-L-thréo-hexopy- rannosyl)-7 s-Rhodomycinone de Formule 21a ; la Di-0-(di-O-acétyl-3' ,4'tridésoxy-2' ,6' ,7'- -L-thréo heptopyrannosyl)-7,10 β-Rhodomγcinone de Formule 22b ; . la 0-(di-0-acétyl-3' ,4' tridésoxγ-2' ,6' ,7'-α-L-thréo-hep- topγrannosyl)-7 β-Rhodomycinone de Formule 21b ; . la di-0-(di-0-acétγl-3* ,4' hexadésoxγ-2 ^• ,6* ,7 ' ,8' ,9' , 10'-α-L-thréo décapyrannosγl)-7,10 β-Rhodomycinone de For¬ mule 22 c ;

. la 0-(di-0-acétyl-3' ,4'hexadésoxy-2' ,6' ,7' ,8' ,9' ,10'-α-L- thréo décapyrannosyl)-7 β-Rhodomycinone de Formule 21c ; . l'acétoxγ-3' O-acétyl-4* désamino-3' méthγl-6' daunorubi- cine de Formule 20b ;

. l'acétoxy-3* O-acόtγl-4' désamino-3' propγl-6' daunorub cine de Formule 20c.

L'invention sera mieux comprise à l'aide complément de description qui va suivre, qui se réfère des exemples de mise en oeuvre de procédé, objet de la pr sente invention ainsi qu'à des exemples mettant en éviden les propriétés thérapeutiques desdits glycosides.

En I.R., les bandes sont données en cm ^-1 . En RMN, les déplacements chimiques sont donn en ppm par rapport au tétraméthylsilane (TMS) utilisé com référence. EXEMPLE 1 : SYNTHESE DU L-FUCOSE :

Cette synthèse nécessite seulement six étape à partir d'un sucre très accessible, le D-mannose de Fo mule 6.

. Première étape :

Le D-mannose 6 est transformé quantitativeme en diacétone mannose 7 selon la méthode décrite par J. Lee et T.T. NOLAN (Tetrahedron, 1967, 23, 2789). . Deuxième étape :

On additionne lentement une solution 1,6 M CH3Li dans l'hexane (45 ml, 0,072 mole) à une solution diacétone mannose 7 (3g, 0,0115 mole) dans le tétrahydrof ranne (THF) anhydre (45 ml), maintenue à. -40'C. Après 1 h. à cette température, le mélan réactionnel est agité une nuit à 0 ⁼ C, puis jeté sur mélange eau-glace-NHiCl. Après extraction usuelle dichlorométhane, on obtient l'alcool 8 (diol) (2,95g, re dement = 95 %), suffisamment pur pour être utilisé da l'étape suivante.

L'utilisation du THF, dans la mise en oeu décrite n'est pas limitative, d'autres solvants anhyd peuvent être utilisés, tels que alcanes, όthers, et ce une température appropriée. . Di-O-iβopropylidène-1,2,4 5 hexahydroxγ-1, 2R, 3R, 4R, 5R, 6S heptane de Formule 8 : Huile

(α)o = -9,7 ^* (c = 1,84, CHClî)

I.R (CH2CI2) : 3690, 3420, 2995, 2945, 1450, 1380, 1242, 1212, 1150, 1070, 1010, 960, 930, 880, 848

RMN (CDCls) : 1,29 (d., J = 7 Hz, 3H) ; 1,37 (s, 3H) ;

1,41 (s, 6H) ; 1,55 (s, 3H) ; 3,60 (d, J = 6Hz, 1H) ; 4,0-4,2 (m, complexe, 5H) ; 4,4 (d. , J ≈ 6Hz, 1H). Troisième étape :

L'alcool précédent 8 (2g, 0,0072 mole) est di sout dans du tόtrahydrofuranne (THF) anhydre (20 ml) cont nant de l'hydrure de sodium à 50 % dans l'huile (lg, 0,02 mole). On additionne alors le bromure de benzyle (1,95 m 2,8 g) puis du HMPT (1 ml). Le mélange réactionnel e porté une nuit à reflux puis est hydrolyse dans l'eau gl cée. Après acidification avec de l'acide chlorhydriq 0,1N, une extraction usuelle fournit une huile qui est fi trée sur une petite colonne de silice (éluant, éther pétrole) pour éliminer l'huile contenant initialeme l'hydrure et le bromure de benzyle n'ayant pas réagi. U élution à l'éther fournit alors le dérivé 9 recherc (2,47g - rendement - 75 %).

. Di-O-benzγl-3,6 di-O-isopropylidène-1,2,4-5 hexahydroxy 1,2R,3R,4R,6S heptane de Formule 9 : Huile :

(α)o = -3 ^* (c - 1, CHCI3).

I.R. (CH2CI2) : 2990, 2940, 1490, 1445, 1370, 1230, 1210,

1135, 1060.

RMN (CDCI3) : 1,18 (d. , J ≈ 7 Hz, 3 H) ; 1,32 (s, 3H) ;

1,38 (S, 6H) ; 1,56 (s, 3H) ; 3,75 - 4,25 complexe, 7H) ; 4,54 (d, J ≈ 12 Hz, 1H) ; 4,63 (2d., J = 12 Hz, 2H) ; 4,78 (d. , J = Hz, 1H), 7,1-7,4 (m, 10H).

. Quatrième étape :

Une solution du diacétonide 9 (4,17g, 0, mole) dans l'acide acétique (184 ml) et l'eau (45 ml) agitée à 60'C pendant une heure. Après évaporation s vide du solvant, du toluène (50 ml) est additionné p évaporé de nouveau. Le résidu cristallisé est mis en s pension dans l'éther de pétrole, puis filtré. On obti ainsi le tétrol recherché 10 (3,19 g, rendement - 92 %).

L'utilisation d'un mélange acide acétique - pour effectuer l'hydrolyse, dans la mise en oeuvre décri n'est pas limitative, d'autres mélanges peuvent être uti sés tels que HCl-HaO, CF3COOH-H2O.

. Di-O-benzγl-3,6 hexahγdroxy-l,2R,3R,4R,5R,6S heptane Formule 10 : F : 108'C

(α)ι> ≈ + 22,2 ^* (c = 0,63, CHCI3) ;

I.R. : 3950, 3760, 3700, 3560, 2990, 2690, 2300, 1410,

1250, 1060, 885, 700. RMN : 1,31 (d, .J = 7 Hz, 3H) ; 1,67 (s, 2H, OH) ; 2,59 ( 1H, 0H) ; 3,40 (s, 1H, OH) ; 3,50-4,0 (m, complexe

7H) ; 4,48 (d. , J = 14 Hz, 1H) ; 4,66 (d. , J = 14 1H) ; 4,69 (s, 2H) ; 7,30 (s, 10H). . Cinquième étape :

Une solution de tétrol 10 (200 mg, 0,53 mm dans un mélange méthanol-eau 60/40 v/v (70 ml) contenan l'acide acétique (0,6 ml) est agitée à tempéra ambiante. On additionne alors goutte à goutte une solu de NaI04 (116 mg, 0,54 mmole) dans l'eau (1,2 ml). A trois heures à température ambiante, les sels formés filtrés puis lavés au méthanol. Le filtrat est concent 1'évaporateur rotatif puis le résidu est extrait de man

connue, à l'éther. On obtient ainsi un mélange des anomère α et β 11, avec un rendement quantitatif (185 mg). . Di-0-benzyl-2,5-α (et fl)-L-fucofurannose de Formule 11 : Huile (α)o = 10,5 ^* (c = 0,76, CHCls)

I.R. (CH2CI2) : 3600, 3430, 2990, 2950, 2890, 1710, 1495,

1450, 1375, 1335, 1205, 1060, 1025. RMN (CDCI3) : 1,20 (d. , J - 6 Hz, 3H) ; 3,5-4,7 {m. com plexe dont 4,56, s, 2H) ; 5,26 (d., J = 3 hz, 1H anomèr 0), 5,41 (β, 1H, anomère α), 7,29 (s, 10H).

Le rapport anomère /anomère 8 est voisin d 1,5 (comparaison de l'intensité des signaux à δ = 5,41 et = 5,26).

. Sixième étape : On additionne du Pd/C à 5 % (150 mg). à un solution de dérivé benzyle 11 (742 mg, 2,15 mmoles) dans l méthanol anhydre (20 ml). La suspension est agitée sous un atmosphère d'H2 pendant 6 heures, puis le palladium es filtré, lavé avec du méthanol. Le filtrat fournit, aprè évaporation, un mélange de a et S-L-Fucose la (320 mg, ren dement = 91 %) . L-Fucose de Formule la

F : 152-153 ^* C (recristallisé de l'éthanol) (α)o = -80 ^* (c = 0,35, H2O) RMN 13C : 96,30 (0,C-1) ; 92,35 (α, C-l) ; 73,16

(0, C-3) ; 71,94 (α, C-4 et 0, C-2) ; 71,60 (0, C-4) ; 70,87 (0, C-5) ; 69,49 {α, C-2) ; 68,30 (α, C-3) ; 66,32 (α, C-5) ; 15,60 (α et 0, C-6) . Le rapport α/0 est voisin de 2/1.

RMN !3C : (Référence : D.E. DORMAN, J.D. ROBERTS, J. Amer. Chem. Soc, 92, 1355 (1970).

0 : 96,30 ; 73,00 ; 71,80 ; 71,40 ; 70,50 ; 15,60. α 92,20 ; 71,80 ; 69,40 ; 68,20 ; 66,00 ;

15,60.

EXEMPLE 2 : SYNTHESE DES ANALOGUES DU L-FUCOSE , AVE

R = CaHs :

Les analogues du L-Fucose sont préparés d manière similaire au L-Fucose. . Première et deuxième étape :

Le D-mannose 6 est mis sous forme de diacéton mannose 7 ; un organomagnésien en solution est condens avec le diacétone mannose 7 et fournit un mélange de 12 e

13, dans un rapport variable suivant la nature du radi cal R.

Dans la présente réalisation, l'organomagnésie est représenté par C∑Hs-MgBr et le rapport 12/13 est voisi de 4/1.

. Troisième étape : Le mélange (3,7 g, 0,0128 mole) des de alcools R 12b et S 13b obtenus en faisant réagi 1'organomagnésien EtMgBr avec le diacétone mannose 7 dan le THF anhydre, est dissout dans la pyridine (39,5 ml). O additionne alors, sous azote, du chlorure de benzoyle (5, ml), puis la solution est agitée pendant 12 heures à tempé rature ambiante. Après avoir jeté le milieu réactionnel su de l'eau glacée, une extraction à 1*éther fournit u mélange des dibenzoates 14b et 15b. Ce dernier, tritur avec de 1*éther de pétrole, fournit le dibenzoate cristal lise 15b (0,96g, 20 %). Les eaux-mères donnent, après éva poration, une huile homogène correspondant au dibenzoat 14b (2,60 g, 52 %).

. Di-O-benzoyl-3,6 di-0-isopropγlidène-l,2,4,5 hexahydroxy 1,2R,3R,4R,5R,6R octane de Formule 15b : F : 170' ^* C

(α)o = + 2 ^* (c = 0,5, CHCls)

I.R. (CH2CI2) : 2990, 1720, 1600, 1450, 1420, 1380, 1370,

1310, 1245, 1215, 1175, 1110, 1070, 1020, 890, 865.

RMN (CDCls) : 0,86 (t, J ≈ 7Hz, 3H) ; 1,13 (β, 3H) ; 1,27

(β, 3H) ; 1,41 (s, 3H) ; 1,60 (s, 3H) ; 4, (d, J = 7Hz, 2H) ; 4,34 (q, J ; 7Hz, 1H) ; 4,47 (t, J = 7Hz, 1H) ; 4,58 (d, J = 5Hz, 1H) ; 5,07 (β large, 1H) ; 5,52 (d, J = 7Hz

1H) ; 7,0 - 8,0 (m, 10H). . Di-O-benzoyl-3,6 di-O-isopropylidène-1,2,4,5 hexahydrox

1,2R,3R,4R,5R,6S octane de Formule 14b : (α)o = -14,5 ^* (c ≈ 0,5, CHCls) I.R. (CH2CI2) : 2980, 2940, 1715, 1600, 1450, 1360, 1310,

1270, 1250, 1170, 1110, 1060, 1020, 860. RMN (CDCI3) : 0,99 (t, J ≈ 7Hz, 3H) ; 1,36 (s, 6H) ; 1,38

(s, 3H) ; 1,56 (s, 3H) ; 1,77 (pentuplet, J 7 Hz, 2H) ; 4,05 (m, 2H) ; 4,3-4,6 (m, 3H) 5,36 (q. , J = 7 Hz, 1H) ; 5,49 (d.d. , Ji =

Hz, J2 = 7 Hz, 1H) ; 7,3 - 7,7 (m, 6H) ; 7, (d., J ≈ 8 Hz, 1H) ; 8,06 (d. , J = 8 Hz, 1H) ; 8,16 (d. , J = 8 Hz, 2H). . Quatrième étape : La réaction est effectuée dans les mêmes cond tions que pour la synthèse du L-Fucose. On isole ainsi composé :

. Di-O-benzoyl-3,6 hexahγdroxγ-1,2R,3 ,4R,5R,6S octane Formule 16b (rendement : 75 %) : F = 135 ^* C

( )o = - 3' (c = 0,85, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 3400, 1700, 1445, 1270, 1110, 1060, 1020,

700. RMN (CDCI3) : 1,00 (t, J = 7Hz, 3H) , autres signaux non caractéristiques.

. Cinquième étape :

Elle est réalisée selon le protocole utili pour le L-Fucose. On obtient les composés suivants : . Di-O-benzoyl-2,5 méthyl-6 α (et β)-L-Fuco-furannose Formule 17b (Rdt quantitatif) : Huile

(α)o = + 36 ^* (C a 0,8 CHC13)

I.R. : 3585, 2980, 2940, 2890, 1715, 1600, 1570, 1450,

1315, 1260, 1177, 1115, 1070. 1025. RMN (CDCI3) : 2,90 (s, large) ; 3,20 (s, large) ; 3,50 (β) ; 4,04 (t, J ≈ 5 Hz) ; 4,18 (s large)

4,40 (t, J = 5 Hz) ; 5,12 (s) ; 5,43 (m) ; 5,65 (s) ; 7,3-7,6 (m, 6H) ; 7,9-8,2 (m, 4 Les ^' deux isomères peuvent être- caractéri sous forme d'acétates obtenus par traitement du mélange un excès d'anhydride acétique dans la pyridine. Une sépa tion chromatographique permet d'isoler les dérivés : . Di-O-acétyl-1,3 di-O-benzoyl-2,5 βéthyl-6 β-L-Fucofur nose : Huile (α) _D = -40 ^* C (c = 0,5, CHCI3)

RMN (CDCI3) : 1,00 (t., J = 7 Hz, 3H) , ° 1,80 (pentuplet J ≈ 7 Hz, 2H) ; 2,06 (s, 6H) ; 4,28 (t., J 6 Hz, 1H) ; 5,32 (q. , J = 6 Hz, 1H) ; 5,49 (d.d., Ji = 6 Hz, J2 = 7,5 Hz, 1H) ; 5,82 (t., J = 7,5 Hz, 1H) ; 6,52 (d., J = 6 Hz,

1H) ; 7,3-7,6 (m, 6H) ; 8,00 (d. , J = 8 Hz 2H) ; 8,10 (d. , J = 8 Hz, 2H). . Di-O-acétγl-1,3 di O-benzyl-2,5 βéthyl-6 α-L-fucofur nose : F : 78'C

(α)D = +29,4 ^* C (c = 0,65, CHCI3)

RMN (CDCI3) : 1,00 (t., J = 7 Hz, 3H) ; 1,91 (pentuplet,

J = 6 Hz, 2H) ; 2,08 (s, 3H) ; 2,17 (s, 3H 4,49 (d.d., Ji = 5 Hz, J2 = 4 HZ, 1H) ; 5, (d. , J = 5 Hz, 1H) 5,40 (s, 1H) ; 5,45 (

1H) ; 6,39 (s, 1H) 7,2 - 7,4 (m, 4H) ; 7 (t. , J = 8 Hz, 2H) 7,85 (d. , J = 8 Hz, 2H) ; 8,04 (d. , J = 8 Hz, 2H) . . Sixième étape : A une solution des dérivés benzoylés 17b (α

0) (10,9 g) dans le méthanol anhydre (185 ml), on ajo

une solution de mόthylate de sodium préparée à partir de N (2,8 g, 0,12 mole) dans le méthanol anhydre. Après 1 heures, à température ambiante, on ajoute une solution d'acide acétique dans le méthanol (126 ml, 0,126 mole) pui on évapore le mélange réactionnel sous vide. Le résidu es repris avec du CH2CI plusieurs fois puis après évaporatio du CH2CI2 le résidu cristallisé est trituré avec d 1'όther-όther de pétrole 50/50 v/v, pour éliminer l benzoate de methyle. On obtient ainsi le sucre recherché. - Méthyl -6 α et θ- -Fucose de Formule lb :

F : 130 ^* C (dόc.) - -----

(α)o : -33 ^* (c = 1,18, H2O)

EXEMPLE 3 : SYNTHESE DES ANALOGUES DU L-FUCOSE, AVEC R = C4Ht : Les étapes 1, 2 et 3 sont identiques à celle de l'Exemple 2. On isole les composés : . Di-O-benzoyl-3,6 di-O-isopropylidène-1,2,4,5 hexahydroxy

1,2R,3R,4R,5R,6S décane de Formule 15c (rendement : 6 t) F = 164 ^* C (α) _D = -43'C (c = 1, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) 2990, 2965, 2940, 2880, 1715, 1595, 1580, 1445, 1375, 1365, 1250, 1210, 1170, 1100, 1065, 1020, 965, 860. RMN (CDCI3) : 0,73 (t, J = 7 Hz, 3H) ; 1,18 (s, 3H) ; .1,30 (s, 3H) ; 1,43 (s, 3H) ; 1,62 (s, 3H) ; 4,04

(d., J = 6 Hz, 2H) ; 4,35 (q., J = 6 Hz, 1H) _? 4,47 (d., J = 6 Hz, 1H) ; 4,60 (d., J 6 HZ, 1H) ; 5,10 (q. , J = 6 Hz, 1H) ; 5,56 (d., J = 6 Hz, 1H) ; 7,3-7,7 (m, 6H) ; 8-8,3 (m, 4H).

. Di-O-benzoγl-3,6 di-O-isopropylidene-1,2,4,5 hexahydroxy-

1,2R,3R,4R,5R, 6S décane de Formule 14c (91 %) : Huile (α)o : -5' (c ≈ 1,32, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 2990, 2965, 2940, 2880, 1715, 1595, 1580,

1445, 1375, 1365, 1250, 1210, 1170, 1100, 1065, 1020, 965. RMN (CDCI3) : 0,90 (t, J ≈ 7Hz, 3H) ; 1,38 (s, 9H) ; 1,58 5 (s, 3H) ; 1,74 (m, 2H) ; 4,06 (m, 2H) ; 4,32

(t., J ≈ 6 Hz, 2H) ; 4,35 - 4,55 (m, comple¬ xe) ; 5,50 (m, 2H). . Quatrième étape :

Le protocole est identique à celui de l'exempl 0 2 ; on isole le composé suivant :

. Di-O-benzoyl-3,6 hexahydroxy-1, 2R, 3R, 4R, 5R, 6S décan de Formule 16c (rendement : 56 %) F : 138 ^* C.

(α)o : - 27 ^* C (c a l,CHCl3) 5 I.R. (CHCI3) : 3450, 3020, 2970, 2940, 1695, 1600, 1450,

1280, 1180, 1115, 1070, 1025, 705. RMN (CDCI3) : Signaux non caractéristiques sauf 0,87 (t 3H).

. Cinquième étape : 0 Elle est réalisée selon le protocole utilis pour le L-fucose. On obtient ainsi le composé suivant : . Di-O-benzoyl-2,5-propyl-6 α et 8-L-Fucofurannose 17c (Rd quantitatif) : Huile 5 ( ) ^~ : + 3,1 ^* (c ~ 1, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 35β5, 2960, 2940, 2880, 1705, 1595, 1577,

1445, 1310, 1260, 1170, 1110, 1065, 1020. RMN (CDCI3) : 0,83 (t. 3H) ; 1,33 (s large, 4H) ; 1,82 (s large, 2H) ; 2,00 (s, 1H) ; 3,6-3,85 (m) ; θ 4,10 (t, J = 6 Hz) ; 4,28 (d. _r J = 4 Hz) ;

4,54 (t., J = 4 Hz) ; 4,64 (t., J ≈ 6 Hz) ; 5,0-5,75 (massif complexe dont 5,26 (s) et 5,64 (s) ; 7,2-7,6 (m, 6H) ; 7,8-8,2 (m, 4H) Les intensités des signaux ne sont pas donnée 5 (mélange des anomères α et 8).

. sixième étape :

. Propyl-6 α et 0-L-Fucose de formule le

F : 140'C (dec. )

(α)o : -30 ^* C (c = 1, H2O) EXEMPLE 4 : SYNTHESE DES GLYCALS, AVEC R = C2H5 :

. Première étape :

Le méthyl-6 Fucose (5g, 0,028 mole) est mis e suspension dans la pyridine (50 ml) et l'anhydride acétiqu

(25 ml). Le mélange réactionnel est agité pendant 48 heure à température ambiante. La solution obtenue est jetée su de l'eau glacée puis extraite de la manière habituelle ave

CH2CI2. On obtient 4,95 g (Rdt : 51 %) d'un mélange d tétraacétates 18b α et 18b θ.

Huile (α)o = -32,4 ^* (c = 1,11, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 2990, 1750, 1370, 1220, 1090, 1060, 900.

RMN (CDCI3) : 0,92 (t, J ≈ 7Hz, 1H) ; 1,5 - 1,8 (m, 2H)

1,99 (S, 3H) ; 2,04 (s, 3H) ; 2,12 (s, 3H) ; 2,18 (s, 3H)

3,65 (t, J = 6,5Hz, 1H) ; 5,06 (d.d., Ji = 3,5Hz, J2 10Hz, 1H) ; 5,2 - 5,4 (m, 2H) ; 5,66 (d, J = 8Hz, 1H) .

. Deuxième étape :

Une solution de diacétates 18b α et 8 (5g) dan l'acide acétique (1,25 ml) et l'anhydride acétiqu

(1,25 ml) est maintenue sous agitation à 0 ^* C. On ajout alors goutte à goutte une solution de HBr à 30 % dan l'acide acétique (9 ml) puis on agite jusqu'à ce que l température soit revenue à 20 ^' C.

Cette solution est alors additionnée lentemen à une solution refroidie à -10 ^' C d'acétate de sodiu (12,5g) dans l'acide acétique-eau 50/50 v/v (30 ml) laquelle on a préalablement ajouté (à cette température) une solution de CuS0<, 5H2O (0,9 g) dans 2,75 ml d'eau e du zinc pulvérisé (9g). Après la fin de l'addition, l'agitation est maintenue pendant deux heures à -10"C. On filtre alors sur célite, on lave deux fois avec une solution de CH3COOH-H2O, puis on extrait avec

CH2CI2. Après lavage avec une solution saturée de bicar nate, puis de l'eau et enfin séchage sur S0*, on obti une huile qui est purifiée par filtration rapide sur gel silice (éluant éther-όther de pétrole 70/30). On obtient ainsi le glycal de Formule 2b (2, g, Rdt : 73 %) F : 47-48'C

(α)o ≈ + 3,7 ^* (c = 1,06, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 3000, 2900, 1745, 1655, 1375, 1240, 1155, 1100, 1080, 1035, 910.

RMN (CDCI3) : 0,97 (t., J = 7 Hz, 3H) ; 2,01 (s, 3H) ; 3,

(t., J = 7 Hz, 1H) ; 4,65 (d.t. , Ji = 6 Hz, J2 = 2 Hz, 1H) ; 5,37 (d. , J = 4 Hz, 1H) ; 5,56 (s large, 1H) ; 6,46 (d.d., Ji = 6 Hz, J2 = 2 Hz, 1H).

EXEMPLE 5 : SYNTHESE DES GLYCALS EN SERIE BUTYLE, Λ R = C4H5 :

. Première étape :

La réaction d'acétylation est réalisée dans mêmes conditions que dans l'exemple 4. On isole ainsi mélange des tétraacétates 18c α et 18c 0, sous fo d'huile.

De ce mélange peut être recristallisé en par dans l'éther le tétraacétate 0 de Formule 18c. F : 111 ^* C

I.R. : 3070, 2980, 2890, 1750, 1370, 1220, 1095, 1065,

1050. RMN (CDCI3) : 0,86 (t., J = 7 Hz, 3H) ; 1,29 (m, 4H) ; 1, (s, 3H) ; 2,04 (s, 3H) ; 2,11 (s, 3H) ; 2,

(s, 3H) ; 3,74 (d.d., Ji = 8 Hz, J2 = 3,5 1H) ; 5,05 (d.d., Ji = 3,5 Hz, J2 = 10 Hz, 1H) ; 5,29 (d. , J = 9Hz, 1H) ; 5,34 (d. , J Hz, 1H) ; 5,47 (d. , J = 9 Hz, 1H).

. Deuxième étape :

La réaction est effectuée comme dans l'exemp 4. On obtient le glycal de Formule 2c (Rdt : 60 t). Huile (α)o = -24 ^* (c * 1,68, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 2970, 2950, 2845, 1740, 1375, 1230, 1150,

1120, 1050. RMN (CDCls) : 0,98 (t. , J = 7 Hz, 3H) ; 1,34 (m) ; 2,01 (

3H) ; 3,99 (d.d., Ji ≈ 8 Hz, J2 = 4 Hz, 1H) 4,63 (d.t., Ji = 6 Hz, J2 = 2 Hz, 1H) ; 5,3

(d., J = 4 Hz, 1H) ; 5,56 (s large, 1H) ; 6,47 (d.d., Ji = 8 Hz, J2 = 2 Hz, 1H). EXEMPLE 6 : GLYCOSIDATION DE LA BETA-RHODOMYCINONE AVEC RADICAL DE FORMULE 19'DANS LEQUEL R EST UN GROUPE CH3 : A une solution de θ-Rhodomycinone (300 mg, 0,7 mmole) dans le chlorure de méthylène anhydre (150 ml) additionne successivement HgO (1,014 g), HgBr2 (297 mg puis des tamis moléculaires 3 λ (3g) .

Cette suspension est agitée sous azote température ambiante pendant l'addition d'une solution d chloro-1 di-0-acétyl-3,4-tridésoxγ-l,2,6-L-Galactose (19 a (488 mg) dans CH2CI2 (15 ml).

Après 12 heures à température ambiante l mélange réactionnel est filtré (la fraction insoluble es lavée avec CH2CI2) puis extrait.

La phase organique est lavée successivemen avec une solution de bicarbonate puis de l'eau. Aprè séchage, on obtient une huile qui est chromatographiée su gel de silice (éluant : CH2Cl ₂ -MeOH-AcOH : 99-1-0,2 v/v). On isole ainsi successivement le bisglycosid en positions 7 et 10 (10-15 %) puis le glycoside en posi tion 7 (40-50 %).

Di-0-(di-O-acétyl-3' ,4 ^f didésoxy- 2 ' ,6'-α-L-thréo-hexo pyrannosyl) - 7,10 8-Rhodomycinone de Formule 22a. F : 157-158 ^* C

(α)D = + 399 ^* (CHCI3)

I.R. (CHCI3) : 3680, 3340, 2980, 2940, 1735, 1600, 1570,

1435, 1395, 1360, 1275, 1245, 1230, 1195,

1160, 1110, 1075, 1010, 955.

RMN (CDCI3) : 1,11 (t, J = 7 Hz, 3H) ; 1,92 (s, 6H) ; 2,15 (S, 3H) ; 2,18 (s, 3H) ; 3,32 (s, 1H, OH) ;

4,16 (8., J = 6,5 Hz, 1H) ; 4,29 (q. , J = 6,

Hz, 1H) ; 5,01 (s, 1H) ; 5,0-5,3 (m complexe

4H) ; 5,53 (d. , J = 2,5 Hz, 2H) ; 7,32 (d. ,

J - 8 Hz, 1H) ; 7,72 (t., J ≈ 8 Hz, 1H) ; 7,89 (d., J = 8 Hz, 1H) ; 12,12 (s, 1H, OH)

12,87 (s, 1H, OH) ; 13,72 (s, 1H, OH).

O-(di-O-acétyl-3* , 4 ^» didésoxy-2' ,6 ^• -α-L-thréo-hexopy rannosγl)-7 8-Rhodomγcinone de Formule 21a :

F : 136 - 140 ^* C (α) _D = + 174 ^* (CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 3700, 3600, 2990, 2940, 1735, 1600, 1575,

1415, 1360, 1230, 1200, 1160, 1075, 1035,

1015, 980, 960.

RMN (CDCI3) : 1,13 (t. , J = 7 Hz, 3H) ; 1,23 (d. , J = 6 Hz 1H) ; 1,92 (s, 3H) ; 2,18 (s, 3H) ; 3,67 (s,

1H) ; 4,35 (q. , J= 6 Hz, 1H) 4,89 (s, 1H) ;

5,10 (s large, 1H) ; 5,21 (s, 1H) ; 5,54 (s,

1H) ; 7,30 (d., J = 8 Hz, 1H) ; 7,69 (t, J =

8 Hz, 1H) ; 7,86 (d. , J - 8hz, 1H) ; 12,09 (s, 1H) ; 12,89 (s, 1H) ; 13,55 (s, 1H).

EXEMPLE 7 : GLYCOSIDATION DE LA β-RHODOMYCINONE, AVEC U

RADICAL DE FORMULE 19', DANS LEQUEL R EST UN GROUPE ETHYLE

La réaction est effectuée comme dans l'exempl

6, en utilisant le chloro-1 di-0-acétyl-3,4-méthyl-6 tridé soxy-l,2,6-L-Galactose 19b.

On obtient ainsi : le Di-O-(di-O-acétγl-3 ^• ,4 ^• tridésoxy-2 ^• ,6 - ,7 ^» -α-L-thré heptopyrannoεyl)-7,10 Ê-Rhodomycinone de Formule 22b.

F : 196 - 199 ^* (dec.) (α)D = + 464 ^* (CHCIs, c = 1,66)

I.R. (CHCI2) 3700, 3540, 2990, 2940, 1735, 1600, 1575, 1415, 1365, 1270, 1240, 1200, 1160, 1115, 1060, 1015, 985, 970.

RMN (CDCI3) 1,93 (β, 6H) ; 2,14 (β, 3H) ; 2,18 (s, 3H) ; 3,31 (s, 1H, OH) ; 3,89 (t., J = 7 Hz, 1H) ; 4,01 (t., J= 7 Hz, 1H) ; 4,99 (s, 1H) ; 5- 5,25 (m complexe, 4H) ; 5,29 (s, 1H) ; 5,50 (d., J = 2,5 Hz, 1H) ; 5,58 (d., J = 2,5 Hz, 1H) ; 7,32 (d. , J≈ 8Hz, 1H) ; 7,72 (t., J = 8HZ, 1H) ; 7,89 (d. , J = 8 Hz, 1H) ; 12,09 (S, 1H, OH) ; 12,88 (s, 1H, OH) ; 13,69 (s, 1H, OH). . le O-(di-O-acόtγl-3 ^, ,4' tridésoxy-2' ,6' ,7 ^, -α-L-thréo-hep topyrannoβyl)-? β-Rhodomycinone de Formule 21b : F : 133-135'C (dec.) (α)o ≈ + 208 ^* Ç (c = 1,96, CHCI3)

I.R. (CH2CI2) : 3700, 3540, 3000, 2950, 1715, 1610, 1580,

1420, 1360, 1250, 1220, 1170, 1025.

RMN (CDCI3) : 1,03 (t., J = 7 Hz, 3H) ; 1,13 (t., J = 7 Hz 3H) ; 1,93 (s, 3H) ; 2,18 (s, 3H) ; 3,15 (s, large, 1H, OH) ; 3,76 (s, 1H, OH) ; 4,10 (t. J = 7 Hz, 1H) ; 4,85 (s, 1H) ; 5,07 (d., J = 2 Hz, 1H) ; 5,32 (s, 1H) ; 7,63 (t., J = 8 Hz, 1H) ; 5,58 (d. , J.≈ 2 Hz, 1H) ; 7,20 (d., J ≈ 8 Hz, 1H) ; 7,73 (d., J = 8 Hz, 1H) ; 11,94 (s, 1H, OH) ; 12,75 (s, 1H, OH) 13,40 (s, 1H, OH).

EXEMPLE 8 GLYCOSIDATION DE LA 8-RHODOMYCINONE, AVEC U RADICAL DE FORMULE 19', DANS LEQUEL R EST UN GROUP BUTYLE :

La réaction est effectuée comme dans l'exempl 6, en utilisant le chloro-1 di-O-acétyl-3,4 propyl-6 tridé soxy-l,2,6-L-Galactose 19c.

On obtient ainsi :

le di-O-(di-O-acόtyl-3 ^• ,4* hexadéβoxy-2',6' ,7' , 8 ^~ ,9'

10'-α-L-thréo décapyrannoβγl)-7,10 β-Rhodoaycinone de For mule 22 c :

F : 190 - 192 ^* C (changement d'état : 163-167 ^* C) (α)o ≈ + 320 ^*

I.R. (CH2CI2) : 3710, 3580, 2980, 2960, 2890, 1740, 1605,

1585, 1465, 1410, 1375, 1245, 1205, 1170, 1130, 1070, 1025, 1000, 980. RMN (CDCI3) : 1,94 (s, 6H) ; 2,17 (s, 6H) ; 3,31 (s, 1H) ; _ 3,9-4,2 (m, 2H) ; 5,01 (s, 1H) ; 5,0-5,45 (m,

5H) ; 5,50 (s large, 1H) ; 5,60 (s large, 1H) ; 7,32 (d, J ≈ 8 Hz, 1H) ; 7,72 (t., J = 8 Hz, 1H) ; 7,92 (d. , J = 8 Hz, 1H) ; 12,13 (s, 1H) ; 12,91 (s, 1H) ; 13,70 (s, 1H). . le O-(di-O-acétγl-3 ^, ,4 ^, hexadésoxy-2 ^, _f 6' _f 7 ^, ,8 ^, ,9',10 ^, -α-L thréo décapyrannosyl)-? β-Rhodomycinone de Formule 21c : F : 110-112'C

I.R. (CH2CI2) : 3580, 3530, 2960, 2920, 2860, 1735, 1600, 1575, 1455, 1410, 1360, 1240, 1190, 1160,

1130, 1115, 1065, 1020, 990, 965. RMN (CDCI3) : 0,94 (t., J ≈ 6 Hz, 3H) ; 1,13 (t., J = 7 Hz,

3H) ; 1,94 (s, 3H) ; 2,17 (s, 3H) ; 3,73 (s, 1H, OH) ; 4 _* 14 (s large, 1H) ; 4,90 (s, 1H) ; 5,13 (s large, 1H) ; 5,29 (s, 1H) ; 5,59 (d. ,

J = 2 Hz, 1H) ; 7,32 (d. , J = 8 Hz, 1H) ; 7,69 (t., J = 8 Hz, 1H) ; 7,84 (d. , J = 8 Hz, 1H) ; 12,09 (s, 1H, OH) ; 12,84 (s, 1H, OH) ; 13,55 (S, 1H, OH). EXEMPLE 9 : GLYCOSIDATION DE LA DAUNOMYCINONE :

Elle est effectuée selon le même mode opéra¬ toire que celui utilisé pour la 8-Rhodomycinone (exemple 5 à 8).

- série éthyle : On obtient l'acétoxy-3' 0-acétyl-4' désamino-3' méthγl-6'daunorubicine de Formule 20b.

F : 126-131 ^* C

(α)o = 216 ^* (c ≈ 0,27, CHCls)

I.R. (CH2CI2) : 3500, 1730, 1710, 1620, 1580, 1425, 1380. RMN (CDCI3) : 0,99 (t., 3H) ; 1,95 (s, 3H) ; 2,16 (S, 3H) 2,43 (s, 3H) ; 2,92 (d. , J ≈ 19 Hz, 1H) ;

3,25 (d, J = 19 Hz, 1H) ; 3,98 (t., 1H) ; 4,10 (s, 3H) ; 4,40 (s, 1H) ; 5,05 (d.m. , 1H) ; 5,30 (s large, 2H) ; 5,63 (d., J « 3 Hz, 1H) ; 7,40 (d. , 1H) ; 7,79 (t., 1H) ; 8,05 (d., 1H) ; 12,53 (s., 1H) ; 13,27 (s,

1H). - série Butyle :

On obtient l'acétoxy-3* 0-acétyl-4' désamino-3 propyl-6' daunorubicine de Formule 20c. F : non mesurable (pas de point de fusion défini). (α) _D ≈ 226 ^* (c = 0,2, CHCI3) I.R. (CH2CI2) : 3500, 2960, 2940, 1720, 1705, 1605, 1425,

1375. RMN (CDCls) : 0,91 (t., 3H) ; 1,94 (s. 3H) ; 2,17 (s, 3H) 2,43 (s, 3H) ; 2,84, (d., J = 19 Hz) ; 3,19

(d., J = 19 Hz) ; 4,09 (OCH3, 3H) ; 4,39 (s large) ; 5,06 (d.m., 1H) ; 5,29 (s large, 2H) ; 5,64 (d. large, J ≈ 3,2 Hz, 1H) ; 7,40 . (d., 1H) ; 7,78 (t., 1H) ; 8,01 (d. , 1H) ; 11,60 (s, 1H) ; 12,36 (s, 1H).

COMPTE RENDU PHARMACOLOGIQUE CONCERNANT DES GLYCOSIDES

SELON L'INVENTION. I - TEST DE PROLIFERATION : A - Protocole opératoire (réduction MTT) : Des cellules tumorales L1210, A549 et HT29, une concentration de 5.10 ³ /ml dans un milieu RPMI, sont in cubées dans des plaques de microtitration contenant 9 puits, pendant 72 heures (37 ^* C, 5 % CO2, 95 % d'humidit relative) avec différentes concentrations de chacun de glycosides (anthracyclines) conformes à l'invention.

Les témoins consistent en cellules tumorales exposées à un milieu de culture. Quatre puits sont préparés pour chaque concentration en glycoβide et pour le témoin. Après 65 heures, 50 μl de MTT (2,5 g/ml dans du PBS) sont ajoutés.

Le. TT sera réduit, en présence de cellules vi¬ vantes en un colorant formazan rouge insoluble. Après 7 à 24 heures d'incubation supplémentaire, le surnageant est enlevé. Le colorant formazan est solubilisé par l'addition de 100 μl de DMSO dans chaque puits, suivie d'une agitation douce.

L'extinction est mesurée pour chaque puits, à 492 nm (photomètre Multiscan 340 CC Fa. Flo ). B - Résultats : Les résultats sont exprimés comme le rapport de l'extinction après incubation avec les glycosides sur 1'extinction obtenue avec les témoins. Le coefficient de variation est inférieur à 15 %.

Les résultats sont représentés dans le tableau I ci-après.

Les produits testés sont les suivants : TABLEAU I

- CIso (μg/ml)

TEST AU MTT

L1210 HT 29 A 549

21 b 0,51 > 1 0,46

22 b ..> 1 > 1 > 1

21 c > 1 > 1 > 1

22 c > 1 > 1 > 1

20 b >1/>10 0,35/>10 >1/>10

20 c > 1 > 1 > 1

21 a 0,03 0,038 0,086

II - EFFET SUR LES CELLULES LEUCEMIQUES L1210 :

A - Protocole opératoire :

L'essai est réalisé selon la procédure Hamburger et Sal on, avec les quelques modifications pré βées ci-après.

Le milieu utilisé est remplacé par un milieu McCoy 5A. Le nombre de cellules mises dans les boîtes réduite à 5.10 ² cellules/boîte du fait de la croissa rapide des cellules leucémiques L 1210. Les cellules sont incubées pendant 1 heure

37'C en présence de différentes concentrations de la s stance testée. Puis les cellules sont lavées deux fois l'aide de McCoy 5A et mises sur plaque d'agarose selon méthode de Hamburger et Salmon. Par ailleurs, le test est réalisé parallèleme avec incubation continue avec différentes concentrations la substance étudiée en introduisant ladite substance da la couche d'agarose avant la mise en culture des cellules Les boîtes sont mises à l'étuve à 37 ^* C sous u atmosphère de 5 % CO2, 20 % O2 et une humidité relative 95 %, pendant 5 à 7 jours. Après cette période, les col nies de diamètre supérieur à 60 μm sont comptées à l'ai d'un microscope inversé. B - Résultats : Les résultats résumés dans le Tableau II, c après sont exprimés en pourcentage de colonies formées partir des cellules L 1210 traitées par rapport aux témoi non traités. Le coefficient de variation, lors de la rép tition des expériences, est inférieur à 15 %.

TABLEAU II

III - ETUDE DE L'EFFET DU COMPOSE 21a, IN VIVO : A - Protocole opératoire :

- Préparation des cellules L1210 :

Un liquide d'ascite est prélevé dans des condi¬ tions aseptiques chez des souris DBA2 (femelle, 18 - 20 g) le septième jours après 1'implantation.

L'ascite est lavée trois fois avec du PBS, comptée et finalement diluée dans du PBS, de manière à obtenir 10* cellules/0,2 ml.

- Transfert des cellules pour l'entretien de la lignée cellulaire :

10« cellules dans 0,2 ml de PBS sont injectées dans le péritoine de souris DBA2 pour la propagation de la lignée cellulaire.

Le transfert est effectué une fois par semaine.

- Transfert des lignées cellulaires pour le test :

10 ⁶ cellules dans 0,2 ml de PBS sont injectés intrapéritonéalement à des souris BDF1 (femelle 18 - 20 g), 6 animau /groupe sont utilisés pour chaque concentration de substance et pour le contrôle. B - Evaluation de l' ffet : a) les animaux sont pesés le premier jour et le cinquième jour après l'administration du médicament. Une perte de poids supérieure à 20 % le cinquième jour est uti¬ lisée comme indicateur d'effet toxique du produit.

b) à la fin de l'expérience, (mort de tous animaux ou soixantième jour de l'essai), le temps moyen survie des animaux, dans tous les groupes ayant plus

65 % de survivants au cinquième jour, est évalué selon procédures standard.

Les animaux survivants au soixantième jour s considérés comme des survivants de longue durée (LTS : L Time S rvivors) et sont répertoriés séparément.

A partir du temps de survie moyen des grou traités (MSTT) et des groupes contrôle (MSTc), l'effet titumoral (T/C) est évalué en fonction de la formule s vante :

MSTT

T/C % = x 100 MSTc

Les valeurs T/C de plus de 125 % sont consi rées comme des indicateurs d'un effet antitumoral signi catif.

L'effet antitumoral est précisé dans Tableau III, ci-après :

TABLEAU III

L1210 nom programme dose T/C LTS* Morts d'adminis¬ optimale % toxiq tration ( g/kg/Inj. ) ;

21a 3 x l.p./ l.p. 10.00 134 -

Q3D 13.30 152 -

17.70 146 1/6

* LTS : Survivant à long terme.

IV - ETUDE DE LA TOXICITE AIGUS DU COMPOSE 21a :

La substance à tester est injectée à des souri NMRI selon le protocole tel que précisé dans le Tableau IV ci-après. Après deux semaines, le nombre total d'animau décédés dans chaque groupe est calculé et les DLso son évaluées en utilisant la méthode de Litchfield ilcoxon.

Les résultats sont présentés dans le Tablea IV, ci-après TABLEAU IV

Les médicaments contenant les anthracycline conformes à ïa présente invention sont généralement admi nistrés à des doses comprises entre 0,001 et 25 mg/kg/jour Ils sont particulièrement adaptés au traitemen des leucémies aiguës et chroniques, à la maladie d Hodgkin, aux lymphomes non-hodgkiniens.

Ainsi que cela ressort de ce qui précède 1'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes d réalisation, de mise en oeuvre et d'application qui vien nent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en em brasse au contraire toutes les variantes qui peuvent veni à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écar-ter d cadre, ni de la portée de la présente invention.