La présente invention a pour objet de nouveaux denves d amlides, leur préparation et leur application en theiapeutique humaine

Elle concerne également l'utilisation de ces dérives pour la fabrication de médicaments destines au traitement de l'hypercholesteroieime ou de l'athérosclérose

Le cholestérol alimentaire est absorbe sous forme de cholestérol libi e par les cellules intestinales, puis esteπfie par l'enzyme ACAT (acyl CoA cholestérol O - Acyl transferase), dans le sérum L inhibition de l'ACAT prévient l'absorption intestinale et 1 accumulation de cholestérol dans le tissu artériel En outre, les lipoprotéines de basse densité (LDL) sont, après oxydation, captées par les "Scavenger receptors" et conduisent a la formation de la cellule spumeuse, point de départ de la plaque d'atherome (D STEINBERG et al , England J Med 320, 915-924, 1989)

L'objet de la présente invention vise a obtenir de nouveaux dérives hypocholesterolemiants et anti-oxydants pouvant agir a la fois sur la quantité et la qualité des L D L dans le but de réduire leur potentiel atherogene et leurs effets délétères a long terme sur la paroi vasculaire

Les composes de la présente invention repondent a la formule générale I

dans laquelle

R _[ et R2 identiques ou différents représentent indépendamment l'un de l'autre

- l'hydrogène

- un radical alcov le linéaire ou ramifie en C _| - C5

- un groupement aromatique tel que phényle, naphtyle ou pyridyle éventuellement substitue par un ou plusieurs groupements alcoyle en C _| - C4, alcoxy en C \ - C4 hy droxvle ou halogeno R3 représente une chaîne alcovle linéaire ou ramifiée en Cg C 1 5 ou un groupement phenv le éventuellement substitue par un ou plusieurs groupements alcoyle en C ] - C4 alcoxy en C \ - C4 hydroxyle ou halogeno A représente un atome d'oxygène ou de soufre ou le groupement sultoxy

Les composes de formule générale 1 pouvant posséder des cenfes as) métriques la présente invention couvre les différents stereoisomeres ou énantiomères et leurs mélanges

Les composés de formule générale I peuvent être utilisés pour la préparation de compositions pharmaceutiques ou de médicaments destinés au traitement de maladies telles que l'hypercholestérolémie ou l'athérosclérose.

Enfin, les procédés de synthèse permettant d'accéder aux composés de formule générale I font également partie de la présente invention.

Les composés de formule générale I peuvent être obtenus selon l'une des méthodes suivantes (schéma I) :

Méthode A :

a) Traitement du chlorhydrate de 2,3,6-triméthyl-4-amino phénol par un α halogeno halogénure d'acylc II, dans lequel Haï et Hal' représentent le brome ou le chlore et R | , R2 ont la même signification que précédemment en présence d'une base telle que la triéthylamine, pour accéder au composé III.

b) Traitement du composé III par le dérivé IV, dans lequel R3 et A ont la même signification que précédemment, dans un milieu sodium - méthanol ou tertiobutylate de potassium - tertiobutanol, pour donner le composé I.

Méthode B :

- Traitement du chlorhydrate 2,3,6-tπméthy!-4-amino phénol par un α haiogéno acide V, dans lequel Hal, R _] , R2 ont la même signification que précédemment, en présence d'un activateur tel que le dicyciohexyl carbodiimide ou l'iodure de 2-chIoro- l-méthyl-pyridinium et d'une base telle que la triéthylamine, pour accéder au composé III, traité ensuite de façon identique à celle décrite dans la méthode A-b.

Méthode C :

- Traitement du chlorhydrate 2,3,6-triméthyl-4-amino phénol par le dérivé IV, dans lequel R) ,R2,R3 et A ont la même signification que précédemment, soit en présence d'un activateur tel que le dicyclo hexyl carbodiimide ou l'iodure de 2-chIoro- l -méthyl pyridinium, et de triethyl amine, pour donner le composé I.

SCHEMA I

M ETHO DE A

METHODE B

METHODE C

L'invention pourra être mieux comprise à l'aide des exemples non limitatifs qui suivent et qui constituent des modes de réalisation avantageux selon l'invention.

Exemple 1 :

(méthode A) 2',3',5 ^, -triméthyl-4'-hydroxy-α-dodécyltlιio-propιonanili de

a - 2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy-α-bromo-propionanilide j_a.

A une solution de chlorhydrate de 2,3,6-triméthyi-4-aminophénol ( 1 ,87g ; 0,01 mole) dans le diméthylformamide placée sous azote, on ajoute la triéthylamine (3,48 ml ; 0,25 mole) - on additionne ensuite goutte à goutte le chlorure d'α-bromo propionyle (1 ,32 ml ; 0,0125 mole) et on agite le mélange réactionnel pendant une heure à température ambiante.

Après dilution à l'eau, on extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'acide chlorhydrique N et à l'eau puis séchée (Mg SO4) et concentrée à sec sous vide. Le résidu est repris à l'hexane, filtré et séché pour donner le composé J_a (2,10 g). F = 186°C CCM : gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,61 (AcOEt).

b - 2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy-α-dodécylthio-propionanilid e L

Le n-dodécanéthiol (2, 1 1 ml ; 0,0088 mole) est dissous dans le méthanol (20 ml) puis additionné de méthylate de sodium (0,47 g ; 0,0088 mole). Après 15 minutes de contact, le composé J_a (2,10 g ; 0,0073 mole) est ajouté et la masse réactionnelle portée à 60°C pendant 2 heures. Le méthanol est ensuite évaporé puis le résidu est extrait à l'acétate d'éthyle.

La phase organique, lavée à l'eau et séchée (MgSÛ4) est concentrée à sec sous vide. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie flash (élution acétate d'éthyle - hexane 30-70) pour donner 1 ,24 g de cristaux blancs (JJ. F = 123°C CCM : gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,59 (AcOEt - Hexane 50-50).

Exemple 2

2',3',5'-trιmeth> l-4'-hydroλy-α-dodecylthιo-acetanιlιde 2

Ce compose est prépare selon le procédé décrit a l'exemple 1 en utilisant ie bromure de bromoacetyle

F = 99°C

CCM gel de Silice 60T254 Merck Rf = 0,51 (AcOEt - Hexane 50-50)

Exemple 3

2',3',5'-tπmethyl-4'-hydro\y-α-dodécylthιo-butyranιl ιde 3 _.

Ce compose est prépare selon le procède décrit a l'exemple 1 en utilisant le bromure de 2-bromobutyryle

F = I 27°C

CCM ge! de silice 60F254 Merck Rf = 0,61 (AcOEt - Hexane 50-50)

Exemple 4 :

2',3',5'-tπmethy!-4'-hydroxy-α-dodécylthιo-hexananιl ιde 4

Ce compose est prépare selon le procède décrit a l'exemple I en utilisant le bromure de 2-bromo hexanoyle

F = 80°C

CCM gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,36 (AcOEt - Hexane 30-70)

Exemple 5 :

2',3',5'-trιmethyl-4'-hydroxy-α-dodécylthιo-ιsovaler anιlιde 5

Ce composé est prépare selon le procède décrit a l'exemple 1 en utilisant le chlorure de 2 bromo- isovaleryle

F = 123°C

CCM gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,30 (AcOEt - Hexane 30-70)

Exemple 6

2',3',5'-trιmethyl-4'-hydroxy-α-dodecylthιo-valeranιl ιde 6

Ce compose est prépare selon le procède décrit a l'exemple 1 en utilisant le bromure de 2-bromovaleryle F = I 16°C

CCM gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,39 (AcOEt - Hexane 30-70)

Exemple 7 :

(méthode B) 2',3',5'-tπmethyl-4-lιydro.xy-α-dodécyithιo-α-phényl acetanihde 7

a) -2',3',5'-tπméthyl- 4'-hydroxy-α-chloro-α-phényl acétanilide 7

A une suspension de chlorhydrate de 2.3,6-trιmethyl-4-amιnophénol ( 1 ,27 g , 0,0067 mole) dans le chlorure de méthylène (35 ml) placée sous azote, on ajoute la triéthylamine (0,94 m l , 0,0067 mole)

L'acide α-chlorophényiacetique (1 ,27 g ; 0,0074 mole) et le dicyclohexyl carbodiimide ( 1,54 g , 0,0074 mole) sont ensuite ajoutés et le mélange réactionnel agité énergiquement pendant 2 heures à température ambiante.

Après filtration de la dicyclohexyl urée formée, la phase organique est lavée à l'acide chlorhydrique N/10, à l'eau puis à l'eau salée. Après séchage (MgSÛ4) et évaporation a sec sous vide, le résidu est repris à l'éther éthylique Les cristaux formés sont filtrés et sechés pour donner le composé 7a ( 1 ,22 g) F = ! 99°C CCM ^• gel de silice 60F254 Merck Rf = 0 68 (AcOEt - Hexane 50-50)

b) 2 ^, ,3',5'-trιmethyl-4'-hydroxy-α-dodécylthιo-α-phén yl acétanilide 7

Le composé est préparé selon la technique décrite à l'exemple l b, en partant du composé 7a.

F = 129°C

CCM : gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,64 (AcOEt - Hexane 50-50)

Exemple 8 :

(méthode C) 2',3',5'-tπmethyl-4'-hydroxy-α-dodécylthιo-ιsobutyranι lιde 8

A une suspension d'iodure de 2-chloro- l -méthyl-pyπdmιum (5,75 g ; 0.022 mole) dans le chloroforme (225 ml), on ajoute successivement le chlorhydrate de 2,3,6- tπméthyl-4-dmιno-phénoI (3,52 g , 0,018 mole), l'acide α-dodécylthio-isobutyπque (5,4 1 g ; 0,018 mole) et la triéthylam ine (9,4 m l ; 0,067 mole) puis chauffe 2 heures a reflux - La masse réactionnelle est refroidie, diluée à l'éther éthylique (350 ml) puis filtrée Cette phase organique est ensuite lavée à l'acide chlorhydrique N. a l'eau puis à l'eau salée Après séchage (MgS04) et concentration à sec sous vide, le résidu est icpπs a l'éther isopropylique et filtré pour donner 7,32 g de cristaux blancs du composé 8 F = 71 °C CCM : gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,65 (AcOEt - Hexane 50-50)

Exemple 9 :

2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy-α-p. chlorophényl thio-isobutyranilide 9

Ce composé est préparé selon le procédé décrit à l'exemple 8, en utilisant l'acide α-p.chlorophéπylthio- isobutirique.

F = 134°C

CCM : gel de si lce 60F254 Merck Rf = 0,54 (AcOEt - Hexane 50-50)

Exemple 10 :

2',3',5'-triméthyl-4'-hydrθλy-α- p. chlorophényl sulfinyl isobutyranilide 10

Ce composé est prépare selon le procédé décrit a l'exemple 8 , cn utilisant l'acide α-p chloro phényl sulfiny l isobutyrique.

F ≈ 157 - 158°C

CCM : gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,33 (AcOEt - Hexane 50-50)

Exemple 11 :

2',3',5'-tπmethyi-4'-hydroxy- α-p chloro phénoxy isobutyranihde

A une solution d'acide clofibrique (2, 14 g , 0,01 mole) et de triéthylamine ( 1 ,48 ml , 0,0105 mole) dans le tétrahydrofurane (25 ml) refroidie à 0°C, on ajoute goutte a goutte le chloroformate d'éthyle (0,96 ml , 0,01 mole) Apres 20 minutes d'agitation, 1 anhydride mixte obtenu est additionne lentement a une suspension de chlorhydrate de 2,3,6-tπméthyl-4-ammophenol ( 1 ,87 g , 0,0 1 mole) dans le diméthyl formamide ( 10 ml) et la triéthylamine ( 1 ,48 m l , 0,0105 mole)

Le mélange réactionnel maintenu sous courant d'azote, est agite 1 heure a 5°C puis 12 heures a temperatuie ambiante - puis verse dans l'eau et extrait a l'acétate d'éthyle - La phase organique est lavée a l'eau, a l'eau salée, séchée sur MgS04 puis évaporée a sec sous vide Le résidu est cristallise dans l'éther éthylique puis recπstallisé dans l'acétate d'éthyle pour donner le compose J_j_

F = 175°C

CCM gel de silice 60F254 Merck Rf ≈ 0,30 (AcOEt - Hexane 30-70)

Exemple 12 :

2',3',5'-tπmethyl-4'-lιydroxy-α-dodecyl sulfinyl bobutyranilide 12

Ce compose est prépare selon le procède décrit a l'exemple 8 en utilisant l'acide α-dodecyl sulfinvl isobutyrique T = 73°C CCM gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,43 (AcOEt - Hexane)

Exemple 13 :

^, ,3',5'-tπméthyl-4'-hydroxy-α-dodécylthιo-α-(3,5- dιterbutyl-4-hvdro.\y)-phényl acétanilide Jj

Ce composé est préparé selon la méthode décrite a l'exemple I ! en utilisant l'acide α-dodécylthio-3,5- dιterbutyl-4-hydroxy phényl acétique

F = I 50°C

CCM ^• gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,31 (AcOEt - Hexane 30-70)

Exemple 14 :

2',3',5'-triméthyl-4-hydroxy-α-dodécylthio-α-p. méthoxy phényl acétanilide J_4

Ce composé est préparé selon la méthode décrite à l'exemple 7a en utilisant l'acide α-dodécyl tluo-α-p méthoxy phényl acétique T = 122°C CCM gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,74 (AcOEt - Hexane 30-70)

Exemple 15 :

2',3',5'-tπmethyl-4'-hydroxy-α-dodécylthιo-α-naphtyl acétanilide J_5

Ce compose est préparé selon la méthode décrite à l'exemple 7a en utilisant l'acide α-dodécyltluo-α- naphtyl acétique F = 134°C CCM : gel de silice 60F254 Merck Rf : 0,60 (CH ₂ CI ₂ - AcOEt 95-5)

Exemple 16

(+) 2',3',5'-triméthyl-4 ^, -hydroxy-α-dodécylth[o-α-phényl acétanilide J_6

Ce composé est préparé selon la méthode décrite à l'exemple 7a en utilisant l'acide (+)α-dodécylthιo-α- phényl acétique.

F = 128°C

CCM gel de silice 60F254 Merck Rf = 0,64 (AcOEt - Hexane 50-50) α _D ²⁵ = + 34,7° (C = 0,5 ; Ethanol)

Les composes de l'invention ont ete soumis à des essais pharmacologiques qui ont montre leur intérêt potentiel dans le traitement de l'hypercholesterolemie et dans le traitement de la maladie atheromateuse

Les composes ont ete étudies pour leur effet inhibiteur de l'ACAT et In pocholesterolemiam chez le rat d'une part et pour leur effet antioxydant d autre part

1 ) Inhibition de l'ACAT :

L'activité inhibitrice de l'ACAT (enzyme acyl CoA cholestérol O acyl transferase) d es composes a ete évaluée m vitro en utilisant la technique de H CHAUTAN et al (Analytical Biochemistry, 1 73, 436-439, 1988)

Les activités, exprimées en concentrations mhibitπces 50 % (CI50) obtenues av ec certa ms produits de l'invention sont reportées, a titre d'exemple dans le tableau 1 suivant

Tableau I

2) Activité hvpocholesterolemiante :

Des rats mâles ( 160- 180 g) sont soumis pendant 4 jouis a un régime hypercholesterolenuque Altromm C 1061 et traites parallèlement par voie orale par les composes en susoension dans une solution de Tween 80 a 2 % dans de l'eau distillée

Le 5eme jour, les animaux non a jeun sont anesthesies a l'éther éthylique, exsanguincs pat prélèvement sur EDTA a l'aorte abdom inale Le sang est immédiatement centrifuge et le plasma conserve a 4°C

Le cholestérol plasmatique est alors dose par la méthode CHOD-PΛ.P (Boehnnger Mannheim Ref 237574) La dose efficace 50 (DE50) correspond a la dose qui réduit de moitié la concentration en cholestérol plasmatique par rapport aux animaux témoins

3) Activité antiowdantc

a) Peroxydation chimique

L0

En présence de Fe ^J+ et d'ADP, l'acide dihydroxy fumanque subit une autooxydation qui génère des radicaux libres oxygènes Ces derniers entraînent la peroxydation des lipides microsomiaux hépatiques

5 Cette peroxydation, effectuée sur des microsomes de foie de rat, est mesurée selon la technique a l'acide thiobarbiturique (formation de TBARS) telle que décrite par S Y H TSE et al (Biochemical Pharmacology, Vol 42, n° 3, 459-464, 1991 )

0

5

b) Oxydation des LDL

Les LDL humaines (Sigma L 2139) sont oxydées par CUSO4 10 μM Après une période d'incubation de 6 heures, la peroxydation est évaluée par mesure des TBARS par spectrophotométne à 532 nanomètres

Les composes de l'invention sont des hypocholesterolemiants inhibiteurs d'ACAT et antioxydants qui peuvent être utilisés pour le traitement des maladies telles que l'hypercholesterolémie et l'athérosclérose

Les compositions pharmaceutiques peuvent être présentées sous la foi me appropi iee poui l'administration par voie orale, parenterale ou locale, par exemple sous forme de capsules, comprimes, granules, gélules, solutés liquides, sirops ou suspensions buvables et contenir les excipients appropries

La posologie quotidienne peut aller de 10 à 3000 mg