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Patent Searching and Data


Title:
NOVEL BICYCLIC ALKYL DERIVATIVES METHOD FOR PRODUCTION OF AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING THE SAME
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2005/012229
Kind Code:
A1
Abstract:
Compounds of formula (I), where R1 = straight-chain or branched C1-C6 alkyl, R2 is as defined in the description and n = 1 or 2. The invention also relates to medicaments.

Inventors:
LANGLOIS MICHEL (FR)
MATHE-ALLAINMAT MONIQUE (FR)
CHAHED MONCEF AMINE (TN)
BOUTIN JEAN ALBERT (FR)
AUDINOT VALERIE (FR)
BENNEJEAN CAROLINE (FR)
DELAGRANGE PHILIPPE (FR)
RENARD PIERRE (FR)
Application Number:
PCT/FR2004/001675
Publication Date:
February 10, 2005
Filing Date:
June 30, 2004
Export Citation:
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Assignee:
SERVIER LAB (FR)
LANGLOIS MICHEL (FR)
MATHE-ALLAINMAT MONIQUE (FR)
CHAHED MONCEF AMINE (TN)
BOUTIN JEAN ALBERT (FR)
AUDINOT VALERIE (FR)
BENNEJEAN CAROLINE (FR)
DELAGRANGE PHILIPPE (FR)
RENARD PIERRE (FR)
International Classes:
A61P25/00; A61P35/00; C07C233/05; (IPC1-7): C07C233/05; A61K31/16; A61P25/00
Foreign References:
EP0745584A11996-12-04
EP0919541A11999-06-02
Other References:
MAROT C ET AL: "PHARMACOPHORIC SEARCH AND 3D-QSAR COMPARATIVE MOLECULAR FIELD ANALYSIS STUDIES ON AGONISTS OF MELATONIN SHEEP RECEPTORS", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY. WASHINGTON, US, vol. 41, no. 23, 1998, pages 4453 - 4465, XP002172225, ISSN: 0022-2623
Attorney, Agent or Firm:
Les, Laboratoires Servier (Courbevoie Cedex, Courbevoie Cedex, FR)
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Claims:
REVENDICATIONS
1. Composés de formule (I) : dans laquelle : # R¹ représente un groupement alkyle (C1. C6) linéaire ou ramifié, # R² représente un groupement alkyle (C1. C6) linéaire ou ramifié, un groupement alkényle (C2. C6) linéaire ou ramifié, un groupement cycloalkyle (C3. C8), un groupement cycloalkyl (C3. C8) alkyle (Ci. Ce) dont la partie alkyle peut être linéaire ou ramifiée, aryle, arylalkyle (Cl. C6) dont la partie alkyle peut être linéaire ou ramifiée, hétéroaryle, hétéroarylalkyle (CI. C6) dont la partie alkyle peut être linéaire ou ramifiée, ou un groupement alkyle (Ci. Ce) linéaire ou ramifié substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, n vaut 1 ou 2, étant entendu que : . par"aryle", on entend un groupement phényle, naphtyle ou biphényle, . par"hétéroaryle", on entend tout groupement aromatique mono ou bicyclique contenant 1 à 3 hétéroatomes choisis parmi oxygène, soufre et azote, les groupements aryle et hétéroaryle ainsi définis pouvant être substitués par 1 à 3 groupements choisis parmi alkyle (Cl. C6) linéaire ou ramifié, alkoxy (Cl. C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, carboxy, formyle, nitro, cyano, polyhalogénoalkyle (Ci. Ce) linéaire ou ramifié, alkyloxycarbonyle, ou atomes d'halogène, leurs énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
2. Composés de formule (I) selon la revendication 1 pour lesquels Rl représente un groupement méthyle, éthyle, n. propyl ou n. butyle, leurs énantiomères et diastéréoisomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
3. Composés de formule (I) selon la revendication 1 pour lesquels n vaut 1, leurs énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
4. Composés de formule (I) selon la revendication 1 pour lesquels R2 représente un groupement alkyle, leurs énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
5. Composé de formule (I) selon la revendication 1 qui est le N. [ (4. butyl. 2, 3. dihydro. IH. indèn. 1. yl) méthyl] butanamide, ses énantiomères ainsi que ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.
6. Procédé de préparation des composés de formule (I) selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on utilise comme produit de départ le composé de formule (II) : dans laquelle n est tel que défini dans la formule (I), que l'on soumet à l'action d'un agent de déméthylation comme BBr3, pour conduire au composé de formule (III) : dans laquelle n est défini comme précédemment, que l'on soumet à l'action de l'anhydride triflique pour conduire au composé de formule (IV) : dans laquelle n est tel que défini précédemment, sur lequel on condense l'acide boronique de formule R'B (OH) 2 dans laquelle Rl est tel que défini dans la formule (I) pour conduire au composé de formule (V) : dans laquelle n et K'sont tels que définis précédemment, composé de formule (V) sur lequel on condense, en présence de nickel de Raney, l'anhydride de formule (R2CO) 2O dans laquelle R2 est tel que défini dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (I) : dans laquelle n, Rl et R2 sont tels que définis précédemment, qui peut être purifié selon une technique classique de séparation, que l'on transforme, si on le souhaite, en ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable et dont on sépare éventuellement les isomères selon une technique classique de séparation.
7. Compositions pharmaceutiques contenant au moins un composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou un de leurs sels d'addition avec un acide ou une base pharmaceutiquement acceptable en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.
8. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 7 utiles pour la fabrication de médicaments pour traiter les troubles du système mélatoninergique.
9. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 7 utiles pour la fabrication de médicaments pour le traitement des troubles du sommeil, du stress, de l'anxiété, de la dépression majeure ou des dépressions saisonnières, des pathologies cardiovasculaires, des pathologies du système digestif, des insomnies et fatigues dues aux décalages horaires, de la schizophrénie, des attaques de panique, de la mélancolie, des troubles de l'appétit, de l'obésité, de l'insomnie, des troubles psychotiques, de l'épilepsie, du diabète, de la maladie de Parkinson, de la démence sénile, des divers désordres liés au vieillissement normal ou pathologique, de la migraine, des pertes de mémoire, de la maladie d'Alzheimer, des troubles de la circulation cérébrale, ainsi que dans les dysfonctionnements sexuels, en tant qu'inhibiteurs de l'ovulation, d'immunomodulateurs et dans le traitement des cancers.
Description:
NOUVEAUX DERIVES BICYCLIQUES ALKYLE, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LES COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES QUI LES CONTIENNENT La présente invention concerne de nouveaux dérivés bicycliques alkylés, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.

Les composés de la présente invention sont nouveaux et présentent des caractéristiques pharmacologiques très intéressantes concernant les récepteurs mélatoninergiques.

De nombreuses études ont mis en évidence ces dix dernières années le rôle capital de la mélatonine (N-acétyl-5-méthoxytryptamine) dans de nombreux phénomènes physiopathologiques ainsi que dans le contrôle du rythme circadien. Toutefois, elle possède un temps de demi-vie assez faible dû à une rapide métabolisation. Il est donc très intéressant de pouvoir mettre à la disposition du clinicien des analogues de la mélatonine, métaboliquement plus stables et présentant un caractère agoniste ou antagoniste, dont on peut attendre un effet thérapeutique supérieur à celui de l'hormone elle-même.

Outre leur action bénéfique sur les troubles du rythme circadien (J. Neurosurg. 1985, 63, pp. 321-341) et du sommeil (Psychopharmacology, 1990, 100, pp. 222-226), les ligands du système mélatoninergique possèdent d'intéressantes propriétés pharmacologiques sur le système nerveux central, notamment anxiolytiques et antipsychotiques (Neuropharmacology of Pineal Secretions, 1990,8 (3-4), pp. 264-272), analgésiques (Pharmacopsychiat., 1987,20, pp. 222-223), ainsi que pour le traitement des maladies de Parkinson (J. Neurosurg. 1985,63, pp. 321-341) et d'Alzheimer (Brain Research, 1990, 528, pp. 170-174). De même, ces composés ont montré une activité sur certains cancers (Melatonin-Clinical Perspectives, Oxford University Press, 1988, pp. 164-165), sur l'ovulation (Science 1987, 227, pp. 714-720), sur le diabète (Clinical Endocrinology, 1986, 24, pp. 359-364), et dans le traitement de l'obésité (International Journal of Eating Disorders, 1996,20 (4), pp. 443-446).

Ces différents effets s'exercent par l'intermédiaire de récepteurs spécifiques de la

mélatonine. Des études de biologie moléculaire ont montré l'existence de plusieurs sous- types réceptoriels pouvant lier cette hormone (Trends Pharmacol. Sci., 1995,16, p. 50 ; WO 97.04094). Certains de ces récepteurs ont pu être localisés et caractérisés pour différentes espèces, dont les mammifères. Afin de pouvoir mieux comprendre les fonctions physiologiques de ces récepteurs, il est d'un grand intérêt de disposer de ligands sélectifs.

De plus, de tels composés, en interagissant sélectivement avec l'un ou l'autre de ces récepteurs, peuvent être pour le clinicien d'excellents médicaments pour le traitement des pathologies liées au système mélatoninergique, dont certaines ont été mentionnées précédemment.

Les composés de la présente invention outre leur nouveauté, montrent une très forte affinité pour les récepteurs de la mélatonine et/ou une sélectivité pour l'un ou l'autre des sites de liaisons mélatoninergiques.

La présente invention concerne plus particulièrement les composés de formule (I) : dans laquelle : + Rl représente un groupement alkyle (C-C6) linéaire ou ramifié, + R2 représente un groupement alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, un groupement alkényle (C2-C6) linéaire ou ramifié, un groupement cycloalkyle (C3-C8), un groupement cycloalkyl (C3-C8) alkyle (Cl-C6) dont la partie alkyle peut être linéaire ou ramifiée, aryle, arylalkyle (Ci-Ce) dont la partie alkyle peut être linéaire ou ramifiée, hétéroaryle, hétéroarylalkyle (CI-C6) dont la partie alkyle peut être linéaire ou ramifiée, ou un groupement alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, + n vaut 1 ou 2, étant entendu que :

- par"aryle", on entend un groupement phényle, naphtyle ou biphényle, - par"hétéroaryle", on entend tout groupement aromatique mono ou bicyclique contenant 1 à 3 hétéroatomes choisis parmi oxygène, soufre et azote, les groupements aryle et hétéroaryle ainsi définis pouvant être substitués par 1 à 3 groupements choisis parmi alkyle (Ci-Ce) linéaire ou ramifié, alkoxy (Cl-C6) linéaire ou ramifié, hydroxy, carboxy, formyle, nitro, cyano, polyhalogénoalkyle (Cl-C6) linéaire ou ramifié, alkyloxycarbonyle, ou atomes d'halogène, leurs énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable.

Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique, trifluoroacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléïque, citrique, ascorbique, oxalique, méthane sulfonique, camphorique, etc...

Parmi les bases pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, la triéthylamine, la tertbutylamine, etc...

Les composés préférés de l'invention sont les composés de formule (I) pour lesquels R'représente un groupement méthyle, éthyle, n-propyle ou n-butyl et plus particulièrement n-butyle.

La valeur préférée de n est 1.

R2 représente avantageusement un groupement alkyle comme par exemple les groupements méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, ou isobutyle.

Encore plus particulièrement, l'invention concerne le N-[(4-butyl-2, 3-dihydro-lH-indèn-1- yl) méthyl] butanamide.

Les énantiomères, diastéréoisomères ainsi que les sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable des composés préférés de l'invention font partie intégrante de l'invention.

L'invention s'étend également au procédé de préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que l'on utilise comme produit de départ le composé de formule (II) : dans laquelle n est tel que défini dans la formule (I), que l'on soumet à l'action d'un agent de déméthylation comme BBr3, pour conduire au composé de formule (III) :

dans laquelle n est défini comme précédemment, que l'on soumet à l'action de l'anhydride triflique pour conduire au composé de formule (IV) :

dans laquelle n est tel que défini précédemment, sur lequel on condense l'acide boronique de formule RIB (OH) 2 dans laquelle R'est tel que défini dans la formule (I) pour conduire au composé de formule (V) :

composé de formule (V) sur lequel on condense, en présence de nickel de Raney, l'anhydride de formule (R2CO) 20 dans laquelle R2 est tel que défini dans la formule (I), pour conduire au composé de formule (I) :

dans laquelle n, Rl et R2 sont tels que définis précédemment, qui peut être purifié selon une technique classique de séparation, que l'on transforme, si on le souhaite, en ses sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable et dont on sépare éventuellement les isomères selon une technique classique de séparation.

Les composés de formule (II) sont soit commerciaux, soit accessibles à l'homme du métier par des réactions chimiques classiques et décrites dans la littérature.

L'étude pharmacologique des dérivés de l'invention a montré qu'ils étaient atoxiques, doués d'une forte affinité sélective pour les récepteurs de la mélatonine et possédaient d'importantes activités sur le système nerveux central et, en particulier, on a relevé des propriétés thérapeutiques sur les troubles du sommeil, des propriétés antidépressives, anxiolytiques, antipsychotiques, analgésiques ainsi que sur la microcirculation, qui permettent d'établir que les produits de l'invention sont utiles dans le traitement du stress, des troubles du sommeil, de l'anxiété, des dépressions saisonnières ou de la dépression majeure, des pathologies cardiovasculaires, des pathologies du système digestif, des

insomnies et fatigues dues aux décalages horaires, de la schizophrénie, des attaques de panique, de la mélancolie, des troubles de l'appétit, de l'obésité, de l'insomnie, des troubles psychotiques, de l'épilepsie, du diabète, de la maladie de Parkinson, de la démence sénile, des divers désordres liés au vieillissement normal ou pathologique, de la migraine, des pertes de mémoire, de la maladie d'Alzheimer, ainsi que dans les troubles de la circulation cérébrale. Dans un autre domaine d'activité, il apparaît que dans le traitement, les produits de l'invention peuvent être utilisés dans les dysfonctionnements sexuels, qu'ils possèdent des propriétés d'inhibiteurs de l'ovulation, d'immmunomodulateurs et qu'ils sont susceptibles d'être utilisés dans le traitement des cancers.

Les composés seront utilisés de préférence dans les traitements de la dépression majeure, des dépressions saisonnières, des troubles du sommeil, des pathologies cardiovasculaires, des pathologies du système digestif, des insomnies et fatigues dues aux décalages horaires, des troubles de l'appétit et de l'obésité.

Par exemple, les composés seront utilisés dans le traitement des dépressions saisonnières, de la dépression majeure et des troubles du sommeil.

La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques contenant au moins un composé de formule (I) seul ou en combinaison avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables.

Parmi les compositions pharmaceutiques selon l'invention, on pourra citer, plus particulièrement celles qui conviennent pour l'administration orale, parentérale, nasale, per ou transcutanée, rectale, perlinguale, oculaire ou respiratoire et notamment les comprimés simples ou dragéifiés, les comprimés sublinguaux, les sachets, les paquets, les gélules, les glossettes, les tablettes, les suppositoires, les crèmes, les pommades, les gels dermiques, et les ampoules buvables ou injectables.

La posologie varie selon le sexe, l'âge et le poids du patient, la voie d'administration, la nature de l'indication thérapeutique, ou des traitements éventuellement associés et

s'échelonne entre 0,01 mg et 1 g par 24 heures en une ou plusieurs prises.

Les exemples suivants illustrent l'invention et ne la limitent en aucune façon.

Exemple 1 : N-1 (4-Butyl-23-dihydro-lH-indèn-l-yl) méthyll butanamide Stade A : 4-Hydroxy-1-indane carbonitrile Dans un ballon, 1,3 g de 4-méthoxy-1-indane carbonitrile est placé en solution dans l'éthanol. 10 mg de Palladium sur charbon y sont ajoutés. Le milieu est purgé à l'argon puis placé sous atmosphère d'hydrogène. La réaction est laissée 16 heures à température ambiante. En fin de réaction, le milieu est filtré sur célite puis évaporé pour conduire au composé du titre sous la forme d'une poudre beige.

Point de fusion : 164'C Stade B : 1-Cyano-2, 3-dihydro-lH-indèn-4-yl trifluorométhanesulfonate Dans un tricol, le composé obtenu au stade A est placé dans 2 éq. de pyridine. Le milieu réactionnel est amené à 0°C et 2 éq. d'anhydride triflique sont additionnés. L'agitation est maintenue à température ambiante durant 45 minutes puis la pyridine est évaporée sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris dans le dichlorométhane et traité successivement par une solution d'HCl IN, de l'eau puis par une solution de NaOH 2N. La phase organique est récupérée, séchée sur MgS04 puis évaporée sous pression réduite pour conduire au composé du titre sous la forme d'une huile incolore.

Stade C : 4-Butyl-1-indane carbonitrile Dans un tricol, 150 mg du composé obtenu au stade B sont placés dans le toluène. L'acide butylboronique (1,5 éq. ), le chlorure de lithium (2 éq. ) ainsi que le carbonate de potassium (1,5 éq. ) dissous dans l'eau sont alors additionnés. Le milieu réactionnel est purgé plusieurs fois à l'argon avant l'addition de Pd (PPh3) 4 (5%). L'agitation est maintenue à 60°C durant 6 heures. Le résidu est ensuite repris dans l'éther et lavé successivement par une solution de NaOH 2 N et par une solution de NaCI saturée. La phase organique est

récupérée, séchée sur MgS04 puis évaporée sous pression réduite pour conduire après purification par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant : CH2CI2/Ether de pétrole : 6/4) au composé du titre sous la forme d'une huile incolore.

Stade D : N [ (4-Butyl-2, 3-dihydro-lH-indèn-1-yl) méthyl] butanamide Dans un tricol, 80 mg du composé obtenu au stade C sont solubilisés dans du THF anhydre. L'anhydride butanoïque (5 éq. ) ainsi que le nickel de Raney (10 mg) sont ajoutés.

Le milieu réactionnel est ensuite purgé à l'argon puis placé sous atmosphre d'hydrogène.

Après 16 heures de réaction à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré sur célite. Au filtrat est ajoutée une solution d'ammoniaque à 20%. Après extraction, la phase organique est lavée successivement avec une solution d'HCl IN, de l'eau et une solution de NaOH IN. La phase organique est récupérée puis évaporée sous pression réduite. Le brut réactionnel est ensuite purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant : CH2Cl2/Ether de pétrole : 6/4) pour conduire au composé du titre sous la forme d'une huile incolore.

Exemple 2 : N-l (5-Butyl-l*2*34-tétrahydro-l-naphtalényl) méthyllbutanamide Stade A : 5-Hydroxy-1, 2,3, 4-tétrahydro-1-naphtalène carbonitrile On procède comme au stade A de l'Exemple 1 en remplaçant le 4-méthoxy-1-indane carbonitrile par le 5-méthoxy-1, 2,3, 4-tétrahydro-1-naphtalène carbonitrile. Le produit du titre est obtenu après purification par chromatographie sur gel de silice (éluant : CH2Cl2/MeOH : 99/1) sous la forme d'une huile incolore.

Stade B : 5-Cyano-5,6, 7, 8-tétrahydro-1-naphtalényl trifluorométhanesulfonate On procède comme au stade B de l'Exemple 1 à partir du composé obtenu au stade A. Le produit du titre est obtenu après purification par chromatographie sur gel de silice (éluant : CH2CI2/Ether de pétrole : 4/6) sous la forme d'une huile incolore.

Stade C : 5-Butyl-1, 2,3, 4-tétrahydro-1-naphthalène carbonitrile On procède comme au stade C de l'Exemple 1 à partir du composé obtenu au stade B.

Stade D : N [ (5-Butyl-1, 2,3, 4-tétrahydro-1-naphtalényl) méthyl] butanamide On procède comme au stade D de l'Exemple 1 à partir du composé obtenu au stade C.

ETUDE PHARMACOLOGIQUE EXEMPLE A : Etude de la toxicité aiguë La toxicité aiguë a été appréciée après administration orale à des lots de 8 souris (26 2 grammes). Les animaux ont été observés à intervalles réguliers au cours de la première journée et quotidiennement pendant les deux semaines suivant le traitement. La DL 50, entraînant la mort de 50 % des animaux, a été évaluée et a montré la faible toxicité des composés de l'invention.

EXEMPLE B : Test de la nase forcée Les composés de l'invention sont testés dans un modèle comportemental, le test de la nage forcée.

L'appareil est constitué d'un cylindre de plexiglas rempli d'eau. Les animaux sont testés individuellement pendant une session de 6 minutes. Au début de chaque test, l'animal est placé au centre du cylindre. Le temps d'immobilisation est enregistré. Chaque animal est jugé immobile quand il cesse de se débattre, et reste à la surface de l'eau, immobile, ne faisant seulement que les mouvements lui permettant de maintenir la tête hors de l'eau.

Après administration 40 minutes avant le début du test, les composés de l'invention diminuent de façon significative la durée d'immobilisation attestant de leur activité antidépressive.

EXEMPLE C : 1. Etude de liaison aux récepteurs MTI et MT2 de la mélatonine Les expériences de liaison aux récepteurs MTl ou MT2 sont réalisées en utilisant la 2-[125I]-iodomélatonine comme radioligand de référence. La radioactivité retenue est déterminée à l'aide d'un compteur à scintillation liquide.

Des expériences de liaison compétitive sont ensuite réalisées en triple, avec les différents composés à tester. Une gamme de concentrations différentes est testée pour chaque composé. Les résultats permettent de déterminer les affinités de liaison des composés testés (IC50).

2. Etude de liaison au site MT. 7 de la mélatonine Les expériences de liaison sur les sites MT3 sont réalisées sur membranes de cerveau de hamster en utilisant la 2- [125I] iodomélatonine comme radioligand. Les membranes sont incubées pendant 30 minutes avec la 2- [1251] iodomélatonine à la température de 4°C et différentes concentrations des composés à tester. Après l'incubation, les membranes sont rapidement filtrées puis lavées par du tampon froid à l'aide d'un système de filtration. La radioactivité fixée est mesurée par un compteur à scintillation. Les valeurs d'IC50 (concentration inhibant de 50 % la liaison spécifique) sont calculées à partir des courbes de compétition selon un modèle de régression non linéaire.

Ainsi, les valeurs d'IC50 trouvées pour les composés de l'invention attestent d'une liaison pour l'un ou l'autre des sites de liaisons mélatoninergiques, ces valeurs étant #10µM.

A titre d'exemple, le composé de l'exemple 1 a une IC50 (MT) de 4. 10-8M et une IC50 (MT2) de 3. 10-9M.

EXEMPLE D : Action des composés de l'invention sur les rythmes circadiens d'activité locomotrice du rat

L'implication de la mélatonine dans l'entraînement, par l'alternance jour/nuit, de la plupart des rythmes circadiens physiologiques, biochimiques et comportementaux a permis d'établir un modèle pharmacologique pour la recherche de ligands mélatoninergiques.

Les effets des molécules sont testés sur de nombreux paramètres et, en particulier, sur les rythmes circadiens d'activité locomotrice qui représentent un marqueur fiable de l'activité de l'horloge circadienne endogène.

Dans cette étude, on évalue les effets de telles molécules sur un modèle expérimental particulier, à savoir le rat placé en isolement temporel (obscurité permanente).

Protocole expérimental Des rats mâles âgés de un mois sont soumis dès leur arrivée au laboratoire à un cycle lumineux de 12h de lumière par 24h (LD 12 : 12).

Après 2 à 3 semaines d'adaptation, ils sont placés dans des cages équipées d'une roue reliée à un système d'enregistrement afin de détecter les phases d'activité locomotrice et de suivre ainsi les rythmes nycthéméraux (LD) ou circadiens (DD).

Dès que les rythmes enregistrés témoignent d'un entraînement stable par le cycle lumineux LD 12 : 12, les rats sont mis en obscurité permanente (DD).

Deux à trois semaines plus tard, lorsque le libre-cours (rythme reflétant celui de l'horloge endogène) est clairement établi, les rats reçoivent une administration quotidienne de la molécule à tester.

Les observations sont réalisées grâce à la visualisation des rythmes d'activité : - entraînement des rythmes d'activité par le rythme lumineux, - disparition de l'entraînement des rythmes en obscurité permanente, - entraînement par l'administration quotidienne de la molécule ; effet transitoire ou durable.

Un logiciel permet : - de mesurer la durée et l'intensité de l'activité, la période du rythme chez les animaux en libre cours et pendant le traitement, - de mettre éventuellement en évidence par analyse spectrale l'existence de composants circadiens et non circadiens (ultradiens par exemple).

Résultats Il apparaît clairement que les composés de l'invention permettent d'agir de façon puissante sur le rythme circadien via le système mélatoninergique.

EXEMPLE E : Test des cages claires/obscures Les composés de l'invention sont testés dans un modèle comportemental, le test des cages claires/obscures, qui permet de révéler l'activité anxiolytique des molécules.

L'appareil est composé de deux boîtes en polyvinyle couvertes de Plexiglas. L'une de ces boîtes est obscure. Une lampe est placée au-dessus de l'autre boîte donnant une intensité lumineuse au centre de celle-ci d'approximativement 4000 lux. Un tunnel opaque en plastique sépare la boîte claire de la boîte sombre. Les animaux sont testés individuellement pendant une session de 5 min. Le plancher de chaque boîte est nettoyé entre chaque session. Au début de chaque test, la souris est placée dans le tunnel, face à la boîte sombre. Le temps passé par la souris dans la boîte éclairée et le nombre de transitions à travers le tunnel sont enregistrés après la première entrée dans la boîte sombre.

Après administration des composés 30 min avant le début du test, les composés de l'invention augmentent de façon significative le temps passé dans la cage éclairée ainsi que le nombre des transitions, ce qui montre l'activité anxiolytique des dérivés de l'invention.

EXEMPLE F : Activité des composés de l'invention sur l'artère caudale de rat Les composés de l'invention ont été testés in vitro sur l'artère caudale de rat. Les récepteurs mélatoninergiques sont présents sur ces vaisseaux ce qui en fait un modèle pharmacologique significatif pour étudier l'activité de ligands mélatoninergiques. La

stimulation des récepteurs peut induire soit une vasoconstriction soit une vasodilatation en fonction du segment artériel étudié.

Protocole Des rats âgés de 1 mois sont habitués pendant 2 à 3 semaines à un cycle lumière/obscurité 12h/12h.

Après sacrifice, l'artère caudale est isolée et maintenue dans un milieu richement oxygéné.

Les artères sont ensuite canulées aux deux extrémités, suspendues verticalement dans une chambre d'organe dans un milieu approprié et perfusées via leur extrémité proximale. Les changements de pression dans le débit de la perfusion permettent d'évaluer l'effet vasoconstricteur ou vasodilatateur des composés.

L'activité des composés est évaluée sur des segments pré-contractés par la phényléphrine (1 uM). Une courbe concentration-réponse est déterminée de façon non-cumulative par addition d'une concentration du composé étudié sur le segment pré-contracté. Lorsque l'effet observé a atteint l'équilibre, le milieu est changé et la préparation laissée 20 minutes avant l'addition d'une même concentration de phényléphrine et d'une nouvelle concentration du composé étudié.

Résultats Les composés de l'invention modifient de façon significative le diamètre des artères caudales préconstrictées par la phényléphrine.

EXEMPLE G : Composition pharmaceutique : Comprimés 1000 comprimés dosés à 5 mg de N [ (4-butyl-2, 3-dihydro-lH-indèn-1-yl) méthyl] butanamide (Exemple 1).......................................................... ............................................................ 5 g Amidon de blé........................................................ ................................................. 20 g Amidon de maïs....................................................... ................................................ 20 g Lactose..................................................... ............................................................ .... 30 g Stéarate de magnésium.................................................. .......................................... 2 g Silice..................................................... 1g Hydroxypropylcellulose..................................... 2g