НОВАЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ ФОРМА 1-[2-(1-МЕТИЛИМИДАЗОЛ-4- ИЛ)ЭТИЛ]ПЕРГИДРО АЗИН-2, 6- ДИОНА И ЕЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ

Область техники

Изобретение относится к области медицины, фармакологии и химикофармацевтической промышленности, а именно к новой кристаллической форме 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона и содержащим ее фармацевтической композиции и лекарственной форме, которые могут использоваться для лечения и/или профилактики вирусных заболеваний дыхательных путей.

Уровень техники

Инфекционные заболевания занимают третье место среди причин смертности людей по всему миру, среди которых большая часть приходится на вирусные заболевания. Многие вирусы поражают дыхательные пути, носовые ходы, горло, бронхи, легкие, и входят в группу острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Причиной ОРВИ могут быть более 200 различных вирусов, представителей 4 семейств РНК-содержащих вирусов (ортомиксовирусы, парамиксовирусы, коронавирусы и пикорнавирусы) и 2 семейств ДНК- сод ержащих вирусов (аденовирусы и герпесвирусы). К ОРВИ относится также и вирус гриппа. К группе высокого риска относятся дети, у которых заболевания респираторного тракта составляют до 90% всей инфекционной патологии и 65% от всех регистрируемых заболеваний (О.В.РУБЛЕВА, К вопросу о терапии и профилактике вирусных инфекций, РУССКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ, 2012, Т.20, 11, с.571-574; Е.П.СЕЛЬКОВА, Профилактика и лечение острых респираторных вирусных инфекций. Применение амиксина», Пособие для врачей, М., 2004).

Для всех ОРВИ характерны симптомы общей интоксикации (головная боль, слабость, мышечные боли, потеря аппетита), повышенная температура, катаральные явления (заложенность носа, насморк, кашель, боль в горле). Локализация очага поражения во многом зависит от вида возбудителя. Так, риновирусные заболевания характеризуются преобладанием ринита, аденовирусные инфекции - ринофарингита, для парагриппа характерен фарингит, а для гриппа - трахеит, респираторно-синцитиальный вирус поражает бронхи. Возможны и другие симптомы, например, аденовирусы могут вызывать конъюнктивиты и кератиты. Обычно симптомы ОРВИ сохраняются в течение 3-7 дней (кашель может наблюдаться более длительное время), возможная длительность гриппа 1-2 недели. Среди осложнений выделяют ларингит, тонзиллит, фарингит и трахеит бактериальной природы, различные формы синуситов (гайморит, этмоидит, фронтит), а также отит, евстахиит, возможно развитие бронхита и пневмонии. Основные причины осложнений - нарушения иммунной защиты, приводящие к длительно протекающим иммунодефицитам, сочетающимся с резким снижением антибактериальной резистентности организма. При правильно выбранной тактике лечения ОРВИ риск развития осложнений заметно снижается (Ю.З.ГЕНДОН, Этиология острых респираторных заболеваний, ВАКЦИНАЦИЯ, 2001, Т.5, 17, с.4-5).

Самым эффективным способом контроля за сезонной заболеваемостью гриппом в настоящее время является вакцинация. Известны вакцины против гриппа, которые в зависимости от технологии изготовления делятся на два класса: живые и инактивированные. Главный недостаток вакцинации состоит в том, что ее действие ограничено только вирусами гриппа, защита против других возбудителей ОРВИ отсутствует. Перспективным направлением профилактики является использование средств для активизации неспецифической резистентности организма (А.А.ЗАЙЦЕВ, Направления фармакотерапии и профилактики острых респираторных вирусных инфекций, РУССКИЙ М F. Д И I (ИН СКИП ЖУРНАЛ, 2009, Т.17, 23, 1525-1529). Профилактическая эффективность противовирусных средств в период вспышки заболевания является высокой и достигает 70- 80%. При этом, профилактику противовирусными средствами можно проводить как для иммунизированных лиц, так и для лиц, не прошедших вакцинацию.

Учитывая, что невозможно предсказать антигенную структуру будущего эпидемического (пандемического) вируса, заблаговременное конструирование эффективных вакцин затруднительно, поэтому важно иметь в арсенале лекарственные средства для профилактики и лечения заболеваний, вызываемых высокопатогенными штаммами вирусов. При этом, как показала ситуация с пандемией COVID-19 во всем мире (Y.WANG et al., Unique epidemiological and clinical features of the emerging 2019 novel coronavirus pneumonia (COVID-19) implicate special control measures, JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY, 2020, V.92, N.6, pp.568-576), для своевременного обеспечения граждан противовирусными лекарственными средствами в условиях пандемии целесообразно создание государственных резервов таких средств. Стратегические государственные резервы на случай пандемий подлежат долгосрочному хранению и обновлению по истечении срока годности зарезервированных лекарственных средств. В такой ситуации крайне важным является увеличение долгосрочной стабильности для продления сроков хранения и снижения государственных затрат на создание и обновление стратегических резервов противовирусных средств.

Таким образом, существует потребность в разработке новых стабильных средств и доступных терапевтических форм для лечения и профилактики гриппа и ОРВИ для создания стратегических государственных резервов на случай эпидемий или пандемий.

Известен 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-дион (RU2562773C2), для которого раскрыто применение для лечения вирусных заболеваний.

Известно также его применение для лечения эозонофильных заболеваний (RU2552929C1).

Последние исследования новой коронавирусной инфекции показывают, что, хотя SARS-CoV-2 поражает в первую очередь дыхательную систему, осложнения в других системах органов (сердечно-сосудистые, неврологические, печеночные и почечные) повышают риск смерти от этого заболевания. Гиперактивация иммунной системы во время COVID-19 приводит к резкому повышению уровней провоспалительных цитокинов и хемокинов — цитокиновому шторму, который характеризуется системным воспалением, гиперферритинемией, острым респираторным дистресс-синдромом, синдромом системного воспалительного ответа, нарушением гемодинамики, тромбозом, диссеминированным внутрисосудистым свертыванием, повреждением легких и других органов, полиорганной недостаточностью с неблагоприятным прогнозом (А.Ю.АНИСЕНКОВА и др., Цитокиновый шторм при COVID-19 (научный обзор), ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА, 2021, 1, с.89-95). Поэтому поиск и разработка эффективных лекарственных средств, для патогенетического лечения и профилактики состояний, связанных с цитокиновым штормом или гиперактивацией имунной системы у пациента с острой респираторной вирусной инфекцией, также является важной задачей для науки и фармацевтики.

Задачами настоящего изобретения являются разработка промышленно доступной, стабильной при хранении лекарственной формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил )этил] пер гидроазин-2, 6-диона для лечения и профилактики заболеваний дыхательных путей, а также расширение арсенала лекарственных средств, обладающих противовирусным действием, и подходящих для создания стратегических государственных резервов на случай эпидемий или пандемий.

Техническая проблема, которая не была решена рассмотренными противовирусными средствами, заключается в недостаточных стабильности, терапевтической эффективности, фармакокинетических параметрах лекарственных форм 1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин-2, 6-диона.

Раскрытие сущности изобретения

Технический результат

Задачей настоящего изобретения является разработка стабильных при хранении, негигроскопичных форм 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона, обладающих оптимальным набором физико-химических и фармакокинетических параметров.

Автором изобретения было неожиданно обнаружено что новая кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона, ранее неизвестная из уровня техники, обладают пониженной гигроскопичностью и повышенной стабильностью при хранении. Кроме того, фармацевтическая композиция, содержащая указанную новую кристаллическую форму, обладает улучшенной прессуемостью с хорошими показателями сыпучести без заметных электростатических явлений, при этом сохраняя свою терапевтическую эффективность. Новая кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона также обладает улучшенной биодоступностью, которая, в частности, выражается в быстром развитии терапевтического эффекта. Указанные свойства справедливы и для содержащих новую кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона фармацевтической композиции и лекарственного средства.

Технические результаты, на достижение которых направлено настоящее изобретение заключаются в:

- повышении стабильности при хранении (в течение 5-6 лет) формы 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы; - уменьшении гигроскопичности с сохранением достаточной растворимости формы 1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин-2, 6-диона;

- улучшении прессуемости с сохранением хороших показателей сыпучести без заметных электростатических явлений, фармацевтической композиции и лекарственной формы, содержащих 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-дион в виде новой кристаллической формы;

- увеличении терапевтической эффективности формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы;

- улучшении биодоступности, увеличенной скоростью развития терапевтического эффекта формы 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона и содержащих ее фармацевтической композиции и лекарственной формы;

- расширении арсенала лекарственных средств для лечения и профилактики вирусных заболеваний дыхательных путей;

- выраженном снижении выработки воспалительных цитокинов и хемокинов у пациента с острой респираторной вирусной инфекцией.

Технические результаты, на достижение которых направлено настоящее изобретение, относятся как к кристаллической форме 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона настоящего изобретения, так и к содержащим ее фармацевтической композиции и лекарственному средству.

Под стабильностью понимается способность формы вещества, фармацевтической композиции и лекарственного средства сохранять химические, физические, микробиологические и биофармацевтические свойства в определенных границах на протяжении выбранного срока.

Под гигроскопичностью понимают свойство вещества поглощать водяные пары (влагу) из воздуха. Степень и интенсивность поглощения водяных паров зависят от химического состава вещества, формы вещества и от содержания водяных паров в воздухе.

Под прессуемостью понимают способность частиц порошка к когезии под давлением с образованием устойчивой твердой лекарственной формы. Сыпучесть лекарственной формы характеризует способность порошка равномерно заполнять заданную форму.

Под терапевтической эффективностью понимается способность лекарственного средства обеспечивать фармакологическое действие. Терапевтическая эффективность любого конкретного лекарственного средства может быть определена путем оценки ответа пациента или животного после введения ему лекарственного средства; при этом лекарственное средство с высокой терапевтической эффективностью будет обеспечивать большее ослабление симптомов и/или их исчезновение, чем лекарственное средство с низкой терапевтической эффективностью.

Разные кристаллические и аморфные формы определенного активного вещества, могут обладать различными свойствами, такими как профиль растворения, температура плавления, стабильность, гигроскопичность, форма частиц, плотность, биодоступность, электризуемость, прессуемость, сыпучесть и т.д. Данные свойства обязательно учитываются при изготовлении лекарственных средств. В частности, сильная электризуемость и низкая прессуемость не позволяют получить такую лекарственную форму, как таблетка. Лекарственные соединения должны обладать способностью хорошо растворяться и храниться в течение длительных периодов времени, не проявляя значительного изменения физико-химических свойств, например, не обводняться, что может приводить как к изменению химического состава лекарственно средства, так и к разрыхлению и рассыпанию лекарственной формы, например, таблетки.

Кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2,6- диона

Настоящая техническая задача решается, а указанные технические результаты достигаются благодаря новой кристаллической форме 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона.

1-[2-(1 -метилимидазол-4-wi )этил ] пергидроазин -2, 6-дион

Альтернативным номенклатурным названием 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона является 1-[2-(1-метил-1Н-имидазол-4- ил)этил] пиперидин-2, 6-дион.

В предпочтительном варианте кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована положениями пиков (максимумов) в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Си(К0)-излучения, 2D, град: 16.4+0.2 и 23.8+0.2. В предпочтительном варианте кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована положениями пиков в порошковой рентгенограмме, полученной с использованием Си(КП)-излучения, 2D, град: 11.5+0.2, 16.4+0.2, 21.0+0.2, 23.8+0.2 и 27.2+0.2. В еще более предпочтительном варианте кристаллическая форма 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована рентгенограммой, представленной на фиг.1.

В другом варианте кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона согласно настоящему изобретению может быть охарактеризована сингонией кристаллической решетки и параметрами элементарной кристаллической ячейки. Кристаллическая ячейка представляет собой параллелепипед, построенный на узлах кристаллической решетки, параллельные переносы (трансляции) которого в трех измерениях позволяют построить всю кристаллическую решетку. Параметрами кристаллической решетки являются величины ребер а, b и с) и величины углов между ними (а, и у). В предпочтительном варианте сингонией кристаллической решетки кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2,6- диона согласно настоящему изобретению является моноклинная сингония. В моноклинной сингонии кристалл построен из параллелепипедов, в которых а и у = 90°, Р Ф 90°. Параметрами кристаллической решетки моноклинной сингонии являются величины ребер и величина непрямого угла. В кристаллической форме 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона согласно настоящему изобретению величины ребер составляют 9.64+0.50 А, 13.82+0.50 А и 9.11+0.50 А; и величина угла составляет (град): 105.85°+5.00°. Следует учитывать, что наблюдаемые параметры кристаллической ячейки могут зависеть от температуры измерений. В предпочтительном варианты величины ребер составляют (А, ангстрем) 9.6419(14) А, 13.823(2) А и 9.1120(11) А, и величина угла составляет (град) 105.850(11)° при комнатной температуре (от 20 до 30°С, предпочтительно 25°С). В другом предпочтительном варианте величины ребер составляют (А, ангстрем): 9.4322(2) А, 13.7418(3) А и 8.9573(2) А, и величиной угла составляет (град) 104.1740(10)° при температуре 100 К.

Дополнительно кристаллическая ячейка и кристаллическая решетка твердой формы могут быть охарактеризованы данными на фиг.2-4. Понятие «кристаллическая форма» в контексте настоящего изобретения относится к веществу в твердой форме, в которой молекулы занимают упорядоченное положение в пространстве и образуют кристаллическую решетку. Упорядоченное положение молекул в кристаллической решетке называется дальним порядком. Структура определенного химического состава в результате какого-либо физико-химического воздействия (механического, термического, давление, влажность, растворение в различных растворителях при различных условиях) может в сильной степени изменять свои свойства. Большей частью это обуславливается изменением кристаллической структуры или искажением этой структуры под действием внешних сил или внутренних напряжений. Некоторые фармацевтически активные вещества могут образовывать кристаллические структуры более, чем одного типа. Разные по кристаллической структуре и свойствам кристаллические формы называют полиморфами. Фармацевтическая субстанция может также существовать в аморфной фазе. Аморфное состояние вещества отличается от кристаллического отсутствием упорядоченности во взаимном расположении атомов или молекул в веществе (дальний порядок взаимного расположения молекул), межмолекулярным расстоянием и более высокой внутренней энергией.

Для исследования кристаллических форм обычно применяют метод порошковой рентгеновской дифракции.

Метод порошковой рентгеновской дифрактометрии позволяет идентифицировать даже небольшие изменения в состоянии атомной решетки кристалла, не детектируемые другими методами. Рентгенография поликристаллических образцов позволяет определять состояния твердого тела (кристаллическое, разные его формы, аморфное, или их комбинации). Значение структурных исследований весьма велико. Определение связи между атомной структурой и свойствами вещества позволяет устанавливать рациональный контроль за технологическими процессами, раскрывать причины изменения этих свойств под действием того или иного фактора, дает возможность более сознательно управлять технологическим процессом создания фармацевтических субстанций и изменять его в нужном направлении.

Метод порошковой рентгеновской дифракции основан на получении и последующем анализе дифракционной картины, возникающей в результате дифракции рентгеновских лучей на порошке или поликристаллическом образце исследуемого материала. В общем случае кристалл можно представить как серию плоскостей, на которую под углом 9 направляется луч рентгеновского излучения. Дифрагированные лучи фиксируются при помощи детектора или фотопленки. Для получения дифрактограммы от кристаллического порошка проводят измерение интенсивностей рассеянного излучения в зависимости от угла 29 между образцом и первичным пучком. По формуле Вульфа-Брегга п/. = 2dsin6 можно рассчитать межплоскостные расстояния в кристалле. Полученные данные для каждого вещества строго индивидуальны, поэтому рентгенограмма однозначно характеризует исследуемое вещество (см. ОФС.1.2.1.1.0011.15 Рентгеновская порошковая дифрактометрия). Рентгенограммы кристаллических веществ дают отдельные, резко выраженные узкие линии (четкие пики), а аморфных — широкий размытый максимум (гало).

Способ получения кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил )этил ] пергидроазин-2, 6-диона

В качестве исходного вещества для получения кристаллической формы может быть использована четвертичная соль 5,6,7,8-тетрагидро-2-метил-5-оксоимид азо[1,5- с]пиримидина. Способ получения кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона включает следующие стадии.

Стадия 1. Взаимодействие четвертичной соли 5,6,7,8-тетрагидро-2-метил-5- оксоимидазо[1,5-с]пиримидина с избытком серной кислотой с образованием метилгистамина:

Реакцию проводят при нагревании до 100-115°С. Для выделения гистамина в виде свободного основания раствор подщелачивают до основной реакции среды, после чего метилгистамин экстрагируют из водной фазы //-пропанолом, изопропанолом или бутанолом.

Стадия 2. Взаимодействие метилгистамина с глутаровым ангидридом с последующей циклизацией продукта в присутствии уксусного ангидрида в растворе уксусной кислоты:

Реакцию конденсации метилгистамина и глутарового ангидрида проводят при комнатной температуре или при охлаждении. Циклизацию проводят в уксусной кислоте в присутствии уксусного ангидрида при нагревании в течение 2-3 часов. После этого растворители отгоняют, остаток растворяют в минимальном количестве изопропанола.

Стадия 3. Кристаллизация полученного продукта путем добавления триэтиламина:

К полученному на стадии 2 раствору добавляют триэтиламин при -10- -15°С до завершения выпадения осадка кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона. Осадок отфильтровывают, сушат.

Стадия 4. Повторная перекристаллизация полученного продукта из этилацетата для дополнительной очистки кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона.

Фармацевтическая композиция

Настоящая техническая проблема решается, а указанные технические результаты достигаются также благодаря фармацевтической композиций, обладающей противовирусной активностью, содержащей кристаллическую форму 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона настоящего изобретения и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. Указанная фармацевтическая композиция может применяться для лечения и/или профилактики вирусных заболеваний дыхательных путей. Под фармацевтической композицией понимается пригодная для использования для людей или животных композиция (смесь, состав и т.д.), включающая активную фармацевтическую субстанцию. Активная фармацевтическая субстанция преимущественно содержит действующее (активное) вещество или представляет собой действующее вещество. Специалисту в данной области будет понятно, что к фармацевтической композиции настоящего изобретения будут относиться также композиции, содержащие одно или несколько других активных фармацевтических субстанций.

Понятия «включает» и «содержит» в контексте настоящего изобретения означают, что указанные фармацевтические композиции (лекарственные средства, группы компонентов и т.д.) включают перечисленные далее компоненты/ингредиенты, но не исключают включение других компонентов/ингредиентов.

В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция представляет собой состав в виде твердой формы. Примерами твердых лекарственных форм являются порошки, гранулы, брикеты, капсулы, таблетки, драже и т.д. Специалисту в данной области будет понятно, что фармацевтическая композиция настоящего изобретения может иметь любую другую форму, обеспечивающую сохранность положительных свойств активной фармацевтической субстанции. В наиболее предпочтительном варианте твердая форма представляет собой порошок, гранулу, капсулу или таблетку. Порошком является твердая недозированная лекарственная форма, состоящая из твердых отдельных сухих частиц различной дисперсности, обладающая свойством сыпучести. Капсулой является твердая дозированная или недозированная лекарственная форма, включающая твердую (как правило, желатиновую) оболочку, внутри которой заключен инкапсулят, содержащий одно или более действующих веществ с добавлением или без вспомогательных веществ. Гранулой является твердая дозированная лекарственная форма в виде крупинок (агрегатов частиц порошка) круглой, цилиндрической или неправильной формы, содержащая одно или несколько действующих веществ с добавлением вспомогательных веществ. Таблеткой является твердая дозированная лекарственная форма, чаще всего получаемая прессованием порошков или гранул, содержащих одно или более действующих веществ с добавлением или без вспомогательных веществ.

Количественное содержание кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона настоящего изобретения или смеси кристаллических форм настоящего изобретения в фармацевтической композиции выбирается из диапазона от 0.01 до 99.99 мас.%, в предпочтительном варианте от 1.00 до 80.00 мас.%, в более предпочтительном от 10.00 до 60.00 мас.%, например, 5.00 мас.%, 10.00 мас.%, 15.00 мас.%, 20.00 мас.%, 25.00 мас.%, 30.00 мас.%, 35.00 мас.%, 40.00 мас.%, 45.00 мас.%, 50.00 мас.%, 55.00 мас.%, 60.00 мас.%, от 10.00 мас.% до 20.00 мас.%; от 10.00 мас.% до 30.00 мас.%; от 10.00 мас.% до 40.00 мас.%; от 10.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 20.00 мас.% до 30.00 мас.%; от 20.00 мас.% до 40.00 мас.%; от 20.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 30.00 мас.% до 40.00 мас.%; от 30.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 40.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 50.00 мас.% до 60.00 мас.%, включая все промежуточные значения с шагом в 1.00 мас.%. Например, значение 33.33 мас.% входит в качестве одного из значений в диапазон от 20.00 мас.% до 40.00 мас.%.

В другом предпочтительном варианте фармацевтическая композиция включает кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона настоящего изобретения в эффективном количестве или терапевтически эффективном количестве.

Понятие «эффективное количество» («терапевтически эффективное количество») в контексте настоящего изобретения относится к количеству фармацевтической композиции или лекарственного средства, которое при введении субъекту является достаточным для воздействия такого лечения на заболевание, нарушение или симптом. «Эффективное количество» может изменяться, например, в зависимости от того, в какой форме находится вещество, от природы заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, от тяжести заболевания, нарушения и/или симптомов заболевания или нарушения, от возраста субъекта, подлежащего лечению, и/или от веса субъекта, подлежащего лечению. Надлежащее количество в каждом конкретном случае будет очевидно специалисту в данной области или может быть определено путем стандартных экспериментов .

Фармацевтическая композиция настоящего изобретения включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, являющийся носителем действующих веществ, обеспечивающий требуемый объем/массу и необходимые характеристики лекарственного средства в определенной лекарственной форме. В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый эксципиент, который выбирают из группы, включающей наполнитель, связывающее вещество, смазывающее вещество, разрыхляющее вещество, скользящее вещество, консервант, корригент и краситель. Термин «наполнитель» или «разбавитель» означает вспомогательные вещества, используемые для придания твердым лекарственным формам заданного объема или массы. В качестве наполнителей могут быть использованы крахмал, глюкоза, сахароза, лактоза (например, безводная или моногидрат), магния карбонат основной, магния окись, натрия хлорид, натрия гидрокарбонат, глина белая (каолин), желатин, целлюлоза микрокристаллическая (МЦК), метилцеллюлоза (МЦ), натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы (Na КМЦ), кальция карбонат, кальция фосфат двузамещенный, глицин (аминоуксусная кислота), декстрин, амилопектин, ультраамилпектин, сорбит, маннит, пектин и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «связывающие» означает вещества, входящие в состав таблетируемой массы для придания ей необходимой вязкости. В качестве связывающих веществ используются вода, спирт этиловый, крахмальный клейстер, сахарный сироп, растворы: карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), оксиэтилцеллюлозы (ОЭЦ), оксипропилметилцеллюлозы (ОПМЦ); поливиниловый спирт (ПВС), поливинилпирролидон (ПВП), альгиновая кислота, натрия альгинат, желатин и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «скользящее вещество» означает вспомогательные вещества, используемые в технологическом процессе производства таблеток на стадии прессования для улучшения текучести гранул или порошка за счет уменьшения трения между частицами. Скользящее вещество может быть представлено одним или несколькими из числа крахмала, талька, полиэтиленоксида-4000, стеариновой кислоты, кальция и магния стеарата и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «смазывающее вещество» или «лубрикант» означает вспомогательные вещества, способствующие уменьшению силы трения между поверхностью таблетки и стенками кюветы пуансона, в которой таблетка формируется, используемые в технологическом процессе производства таблеток на стадии прессования. Смазывающее вещество может быть представлено одним или несколькими из числа стеарата магния, стеарата кальция, стеарил фумарата натрия, полиэтиленгликоля (с молекулярной массой свыше 3350), лаурилсульфата натрия, талька, минерального масла, лейцина и полоксамера и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Термин «разрыхлитель» означает вещества, использующиеся для улучшения распадаемости или растворения, обеспечивая механическое разрушение таблеток в жидкой среде, что необходимо для скорейшего высвобождения действующего вещества. Разрыхлитель может быть представлен одним или несколькими из числа микрокристаллической целлюлозы, кроскармеллозы натрия, кросповидона, натриевой соли гликолята крахмала (карбоксиметилкрахмал натрия), крахмала, пектина, желатина, амилопектина, ультраамилопектина, агар-агар, альгиновой кислоты, калия и натрия альгината, твин-80 и др. Группа не исчерпывается данным списком.

Дополнительные компоненты, корригенты, используются для улучшения вкуса (подсластитель) и запаха (ароматизатор). К ним относятся, например, сахар, какао, ванилин. Красители (пигменты) используются для улучшения внешнего вида фармацевтической композиции и лекарственной формы. Примерами красителей являются диоксид титана, индигокармин.

Количество, состав и форма фармацевтически приемлемого эксципиента могут быть выбраны специалистом в данной области произвольно при условии полного или частичного сохранения кристаллических форм 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2,6- диона.

В одном из вариантов фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит: 20-60 мас.% кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил )этил] пер гидроазин-2, 6-диона, разрыхлитель, лубрикант и наполнитель.

В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит:

Кристаллическая форма 20-40 мас.%;

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин -

2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 0.5-5.0 мас.%

Магния стеарат 0.5-2.0 мас.%

Тальк 0.5-2.0 мас.%

Лактоза безводная или лактоза моногидрат остальное

В еще более предпочтительном варианте фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит:

Кристаллическая форма 33.33 мас.%;

1-[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин -

2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 1.83 мас.%

Магния стеарат 1.00 мас.%

Тальк 0.50 мас.%

Лактоза (лактопресс) остальное В другом предпочтительном варианте фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит:

Кристаллическая форма 33.33 мас.%;

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин -

2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 1.83 мас.%

Магния стеарат 1.00 мас.%

Тальк 0.50 мас.%

Лудипресс ЛЦЕ остальное

В еще одном предпочтительном варианте фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению содержит:

Кристаллическая форма 32.1 мае. %

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроазин-2, 6- диона

Карбоксиметил 1.9 мас.% крахмал натрия

МКЦ XLM 90 30.4 мас.%

Лактоза безводная 30.3 мас.%

Тальк 0.5 мас.%

Магния стеар ат 1.0 мае . %

Пленочная оболочка Опадрай II 3.8 мас.% или

Кристаллическая форма 32.1 мас.%

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроазин-2, 6- диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 1.8 мас.%

Лудипресс ЛЦЕ 60.9 мас.%

Тальк 0.5 мас.%

Магния стеарат 1.0 мас.%

Пленочная оболочка Опадрай II 3.8 мас.%

Пленочная оболочка Опадрай II имеет следующий состав:

Поливиниловый спирт частично гидролизованный - 40.0 %;

Макрогол-3350 - 20.2 %; Титана диоксид Е171 - 25.0 %;

Тальк - 14.8 %.

Пути введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются пероральным, ингаляционным, местным, трансдермальным, сублингвальным и ректальным путями. В предпочтительном варианте фармацевтическую композицию вводят перорально или сублингвально. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно получить с помощью известных общепринятых способов в области фармацевтики.

Лекарственное средство

Настоящая техническая проблема решается, а указанные технические результаты достигаются также благодаря лекарственному средству для лечения и/или профилактики вирусных заболеваний дыхательных путей, содержащему кристаллическую форму 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона настоящего изобретения или фармацевтическую композицию настоящего изобретения.

Под лекарственным средством (лекарственным препаратом) понимаются пригодные для использования у людей или животных фармацевтическая композиция в виде лекарственной формы. Действующим веществом лекарственного средства настоящего изобретения является кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона.

В предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к лекарственному средству в твердой лекарственной форме. Лекарственные формы по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются указанным: таблетки, в частности, буккальные таблетки, шипучие таблетки, таблетки, покрытые оболочкой, таблетки с замедленным высвобождением, обычные таблетки, таблетки с контролируемым высвобождением, диспергируемые в полости рта таблетки, лиофилизированные быстрорастворимые таблетки и т.п.; капсулы, такие как твердые капсулы, мягкие капсулы, желатиновые капсулы и т.п.; порошки для инъекций, такие как лиофилизированные порошки для инъекций, обычные порошки для инъекций и т.п.; растворы, аэрозоли, спреи, трансдермальные лекарственные средства, например, пластыри, гранулы, суппозитории и другие лекарственные формы.

Специалисту в данной области будет понятно, что лекарственное средство настоящего изобретения может иметь любую форму, обеспечивающую сохранность положительных свойств действующего вещества. В наиболее предпочтительном варианте твердая форма представляет собой порошок, гранулу, капсулу или таблетку.

В качестве лекарственного средства настоящего изобретения может выступать и фармацевтическая композиция, включающая кристаллическую форму 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона настоящего изобретения. В предпочтительном варианте лекарственное средство также включает по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент, однако его наличие не является обязательным.

Кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона настоящего изобретения содержится в фармацевтической композиции или лекарственном средстве и может использоваться в определенной дозировке. Дозировка согласно настоящему изобретению, может находиться в диапазоне от 1 мг до 1000 мг в сутки, предпочтительно от 50 мг до 400 мг в сутки, еще более предпочтительно от 100 до 200 мг в сутки. Указанная дозировка может быть введена как одной дозой, так и разделена на несколько приемов в течение суток, например, 2, 3 или 4 раза в сутки, предпочтительно 2 раза в сутки, например, 100 мг 2 раза сутки. Количество дней приема зависит от течения заболевания и составляет от 3 до 28 дней, предпочтительно от 7 до 21 дня, например, для лечения ОРВИ предпочтительно 100 мг 2 раза в сутки в течение 3 или 5 дней. В предпочтительном варианте в твердой форме фармацевтической композиции или лекарственного средства действующее вещество находится в количестве, соответствующем рекомендуемой дозировке. Дозировка может быть скорректирована в зависимости от возраста пациента, например, детям может быть назначена половина или четверть взрослой дозы.

Понятие «дозировка», используемое здесь, характеризует содержание одного или нескольких действующих веществ в количественном выражении на единицу дозы, или единицу объема, или единицу массы в соответствии с лекарственной формой, либо для некоторых видов лекарственных форм количество высвобождаемого из лекарственной формы действующего вещества за единицу времени.

Количественное содержание кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона настоящего изобретения или смеси кристаллических форм настоящего изобретения в лекарственном средстве выбирается из диапазона от 0.01 до 99.99 мас.%, в предпочтительном варианте от 1.00 до 80.00 мас.%, в более предпочтительном от 10.00 до 60.00 мас.%, например, 5.00 мас.%, 10.00 мас.%, 15.00 мас.%, 20.00 мас.%, 25.00 мас.%, 30.00 мас.%, 35.00 мас.%, 40.00 мас.%, 45.00 мас.%, 50.00 мас.%, 55.00 мас.%, 60.00 мас.%, от 10.00 мас.% до 20.00 мас.%; от 10.00 мас.% до 30.00 мас.%; от 10.00 мас.% до 40.00 мас.%; от 10.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 20.00 мас.% до 30.00 мас.%; от 20.00 мас.% до 40.00 мас.%; от 20.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 30.00 мас.% до 40.00 мас.%; от 30.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 40.00 мас.% до 50.00 мас.%; от 50.00 мас.% до 60.00 мас.%, включая все промежуточные значения с шагом в 1.00 мас.%. Например, значение 33.33 мас.% входит в качестве одного из значений в диапазон от 20.00 мас.% до 40.00 мас.%.

В одном из вариантов лекарственное средство согласно настоящему изобретению содержит: 20-60 мас.% кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил )этил] пер гидроазин-2, 6-диона, разрыхлитель, лубрикант и наполнитель.

В предпочтительном варианте лекарственное средство согласно настоящему изобретению содержит:

Кристаллическая форма 20-40 мас.%;

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин -

2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 0.5-5.0 мас.%

Магния стеарат 0.5-2.0 мас.%

Тальк 0.5-2.0 мас.%

Лактоза безводная или лактоза моногидрат остальное

В еще более предпочтительном варианте лекарственное средство согласно настоящему изобретению представляет собой таблетку и содержит:

Кристаллическая форма 33.33 мас.%;

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин -

2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 1.83 мас.%

Магния стеарат 1.00 мас.%

Тальк 0.50 мас.%

Лактоза (лактопресс) остальное В другом предпочтительном варианте лекарственное средство согласно настоящему изобретению представляет собой таблетку и содержит:

Кристаллическая форма 33.33 мас.%;

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин -

2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 1.83 мас.%

Магния стеарат 1.00 мас.%

Тальк 0.50 мас.%

Лудипресс ЛЦЕ остальное

В еще одном предпочтительном варианте лекарственное средство согласно настоящему изобретению содержит: Кристаллическая форма 32.1 мае. %

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроазин-2, 6- диона

Карбоксиметил 1.9 мас.% крахмал натрия

МКЦ XLM 90 30.4 мас.%

Лактоза безводная 30.3 мас.%

Тальк 0.5 мас.%

Магния стеар ат 1.0 мае . %

Пленочная оболочка Опадрай II 3.8 мас.% или

Кристаллическая форма 32.1 мас.%

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроазин-2, 6- диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 1.8 мас.%

Лудипресс ЛЦЕ 60.9 мас.%

Тальк 0.5 мас.%

Магния стеарат 1.0 мас.%

Пленочная оболочка Опадрай II 3.8 мас.%

Лекарственные средства по настоящему изобретению могут вводиться (не ограничиваясь указанным) перорально, парентерально, ингаляционно, подкожно, внутрибрюшинно, местно, ректально. Терапевтическая дозировка лекарственного средства, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента.

Фармацевтическое применение

Кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона, фармацевтическая композиция и лекарственное средство настоящего изобретения обладают противовирусной активностью и могут применяться для лечения вирусных заболеваний или, в предпочтительном варианте, вирусных заболеваний дыхательных путей. В предпочтительном варианте вирусное заболевание дыхательных путей относится к ОРВИ.

Автором настоящего изобретения было неожиданно обнаружено, что кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона, фармацевтическая композиция и лекарственное средство настоящего изобретения могут эффективно препятствовать возникновению острого состояния выработки большого количества медиаторов воспаления - цитокинов и хемокинов (цитокиновый шторм). Указанное состояние характеризуется патологическим системным воспалением тканей организма, которое без своевременного лечения может приводить к самым разным осложнениям и даже к летальному исходу. В предпочтительном варианте снижается выработка провоспалительных и хемокинов IPIO, CXCL9 и CXCL11 в рамках антицитокиновой терапии, что обеспечивает выраженное снижение выработки воспалительных цитокинов у пациента с острой респираторной вирусной инфекцией. Антицитокиновая терапия может быть частью комбинированной терапии.

Заболевание дыхательных путей может характеризоваться разными по природе вирусными инфекциями, патогенезом, длительностью течения, осложнениями, основными и сопутствующими симптомами и проявлениями.

В одном из вариантов настоящего изобретения заболевание дыхательных путей вызвано вирусом, выбранным из группы, состоящей из вируса гриппа А, вируса гриппа В, вируса гриппа С, вируса гриппа D, риновируса, респираторно-синцитиального вируса, вируса парагриппа, метапневмовируса, аденовируса, бокавируса, вирусов группы ECHO, ротавируса, вирусов Коксаки. В одном из вариантов настоящего изобретения заболевание дыхательных путей вызвано коронавирусом. В предпочтительном варианте заболевание дыхательных путей относится к COVID-19, вызванному SARS-CoV-2.

В одном из вариантов настоящего изобретения заболевание дыхательных путей протекает в легкой форме, в среднетяжелой форме, в тяжелой форме или крайне тяжелой (критической) форме. Заболевание дыхательных путей может быть как острым, так и хроническим.

В одном из вариантов настоящего изобретения заболевание дыхательных путей протекает с проявлениями пневмонии и/или острого респираторного дистресс синдрома, включая тяжелый острый респираторный дистресс синдром.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные симптомы затрагивают сердечно-сосудистую, дыхательную, мочевыделительную, покровную, эндокринную, нервную, репродуктивную системы организма, органы желудочно-кишечного тракта и панкреатогепатобилиарной системы и/или систему гемостаза.

В одном из вариантов настоящего изобретения симптомы относятся к респираторным симптомам, включая одышку, кашель, сердечно-сосудистым симптомам, включая стеснение в груди, боль в груди, пальпитацию, генерализованным симптомам, включая усталость, проявления астенического синдрома, жар, боль, неврологическим симптомам, включая когнитивные нарушения, в том числе мозговой туман, потерю концентрации или проблемы с памятью, головную боль, нарушение сна, симптомы периферической нейропатии, в том числе покалывания и онемение, головокружение, делирий, симптомам ЖКТ, включая боль в животе, тошноту, диарею, анорексию и снижение аппетита, скелетно-мышечным симптомам, включая боль в суставах, боль в мышцах, психологическим/психиатрически� � симптомам, включая симптомы тревоги и депрессии, симптомы беспокойства, ЛОР симптомам, включая тиннитус, боль в ушах, боль в горле, головокружение, потерю вкуса и/или запаха, дерматологическим симптомам, включая кожную сыпь, проблемам работы почек, обострению хронических заболеваний, симптомам вирусных инфекций, включая ОРВИ, в том числе гриппа, изменению психологического статуса, психосоматическим расстройствам, гематологическим нарушениям, гормональному дисбалансу, неврологическим расстройствам, резкому снижению устойчивой физической нагрузки, в том числе неспособности тренироваться, быть активным, гипергликемии, мультисистемному воспалительному синдрому, аутоиммунным процессам.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные симптомы вирусных инфекций, включая ОРВИ, в том числе гриппа, представляют собой лихорадку, озноб, слабость, кашель, насморк, чихание, першение в горле и заложенность носа, миалгию.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные изменения психологического статуса представляют собой повышенную возбудимость, депрессию, тревогу, нарушение сна, бессонницу, недосыпание, замкнутость, подавленное настроение, апатию, потерю интереса к окружающему.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные психосоматические расстройства представляют собой дыхательный невроз, термоневроз, панические атаки.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные расстройства дыхательной системы представляют собой одышку, затрудненное дыхание, гипоксию, в том числе гипоксемию.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные гематологические нарушения представляют собой нарушения свертываемости крови.

В одном из вариантов настоящего изобретения указанные хронические заболевания выбраны из группы, включающей заболевания сердца, органов дыхания, пищеварительной системы, почек, печени, эндокринной системы, в том числе сахарный диабет. В одном из вариантов настоящего изобретения указанные неврологические расстройства представляют собой головную боль, головокружение, проблемы с памятью, астенический синдром.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 - Экспериментальная рентгенограмма образца кристаллической формы 1-[2- (1-метилимидазол-4-ил)этил]пергидр оазин-2, 6-диона;

Фиг.2 - Строение 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона в кристаллической форме настоящего изобретения, полученное методом рентгеноструктурного анализа;

Фиг.З - Строение элементарной ячейки кристаллической формы 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона настоящего изобретения;

Фиг.4 - Упаковка молекул в кристаллической решетке кристаллической формы 1-[2- (1-метилимидазол-4-ил)этил]пергидр оазин-2, 6-диона настоящего изобретения;

Фиг.5 - Экспериментальная рентгенограмма образца кристаллической формы 1-[2- (1-метилимидазол-4-ил)этил]пергидр оазин-2, 6-диона после эксперимента методом ускоренного старения образца;

Фиг.б - Влияние кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона на продукцию CXCLIO(IP-IO) у мышей, индуцированную введение IFN-y;

Фиг.7 - Влияние кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона на продукцию CXCL9 у мышей, индуцированную введение IFN-y;

Фиг.8 - Влияние кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона на продукцию CXCL11 у мышей, индуцированную введение IFN-y.

Фиг.9 - Влияние 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона на уровни CXCL10 и клеток в БАЛ у мышей после интраназального введения НС1. Мышам вводили кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2,6- диона в дозах 0.3, 3 и 15 мг/кг и через 30 мин вводили НС1. Через 3 ч после введения НС1 измеряли в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ)

А - уровень CXCL10;

В - количество лейкоцитов; С - нейтрофилов;

D - макрофагов.

Результаты представлены как (Mean+SD), группы животных включали от 10 до 38 особей.

(**) означает статистически значимые различия по сравнению с группой контроля согласно критерию Mann-Whitney, р<0.01; (***) - р<0.001, (****) - р<0.0001;

(####) означает статистически достоверную разницу по сравнению с интактными животными, р<0.001, (###) - р<0.01, (#) - р<0.05.

Фиг.10 - Выживаемость мышей, инфицированных метапневмовирусом.

Если не указано иное, все технические и специальные термины, использованные в данном контексте, имеют общепринятое в данной области техники значение.

Осуществление изобретения

Настоящее изобретение дополнительно поясняется, но не ограничивается следующими примерами, которые иллюстрируют настоящее изобретение.

Пример 1. Получение новой кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил )этил ] пергидроазин-2, 6-диона

Кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона получали согласно следующей методике.

Стадия 1. 10 г четвертичной соли 5,6,7,8-тетрагидро-2-метил-5-оксоимид азо[1,5- с] пиримидина метансульфоновой кислоты (СуНюПзО* CH3SO3’) растворяли в 20 мл концентрированной серной кислоты. Полученную смесь нагревали при температуре 100- П5°С в течение 3 часов. После этого реакционную смесь охлаждали и осторожно выливали в воду (50 мл). Смесь подщелачивали добавлением 50 мас.% раствора гидроксида натрия до значения pH 13.0-13.5. Метилгистамин экстрагировали из полученного раствора бутанолом (3 раза по 50 мл). Органические вытяжки объединяли и сушили над безводным сульфатом натрия. Растворители отгоняли. Получено 4.4 г (92%) метилгистамина, который растворяли в изопропаноле (15 мл) и в виде раствора вводили в следующую стадию.

Стадия 2. К раствору 4.4 г метилгистамина в 15 мл изопропанола добавляли раствор 4.0 г глутарового ангидрида в 15 мл изопропанола. Смесь перемешивали при комнатной температуре до завершения реакции (контроль ТСХ). Выпавший осадок отфильтровывали и растворяли в смеси 15 мл уксусного ангидрида и 20 мл уксусной кислоты. Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 часов. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали, растворители отгоняли, а остаток растворяли в 5 мл изопропанола.

Стадия 3. К полученному на стадии 2 раствору, охлажденному до -10- -15°С добавляли триэтиламин. Кристаллизация осуществляется при помешивании при такой температуре в течение 4 часов. Продукт отфильтровывали и вводили в следующую стадию очистки.

Стадия 4. Полученный продукт растворяли в минимальном количестве этилацетата при температуре 60°С. После этого раствор охлаждали до температуры +5°С. Выпавшие кристаллы отфильтровывали, сушили, взвешивали. Получено: 6.6 г (общий выход - 78%) кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона.

Рентгенограмму полученной кристаллической формы регистрировали на дифрактометре Bruker D8 Advance, оборудованном системой щелей для монохроматизации и фокусировки ([СиКа]=1.5418А), а также позиционно-чувствительным детектором LynxEye, в угловом диапазоне 4-60° с шагом 0.02° по углу 29 с использованием геометрии на отражение.

На фиг.1 представлена рентгенограмма полученной кристаллической формы 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона. В таблице 1 представлены положения углов 9 и относительные интенсивности основных максимумов рентгенограммы.

Таблица 1. Углы (29, град) и их относительные интенсивности (I, %) кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона.

На дифрактограмме кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона наблюдали следующие интенсивные пики (максимумы) при углах дифракции 29 (± 0,2°): 11.5, 16.4, 21.0, 23.8 и 27.2. Характеристичными пиками являлись: 16.4 и 23.8. Кристаллическая форма 1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона была также исследована методом рентгеноструктурного анализа (PC А).

Рентгенодифракционные исследования соединения проводили на дифрактометре Bruker APEX II (МоКа-излучение, графитовый монохроматор, w-сканирование). Структуры расшифрованы прямым методом и уточнены МНК в анизотропном полноматричном приближении по Р ² ш и представлена на фиг.2. Измерения были проведены при комнатной температуре (296.15К) и при температуре 100К.

Кристаллографическая информация (для комнатной температуры): моноклинная, пространственная группа Сс (по. 9), а = 9.6447(5) А, b = 13.8144(7) А, с = 9.1106(6) А, / = 105.844(3)°, V= 1167.74(12) A ³ , Z = 4, Т= 296.15 К, ц(МоКа) = 0.089 мм’ ¹ , Deale =

1.259 г/см ³ , 4696 отражений измерено (5.898° < 20 < 52.134°), из них 1802 независимых (7?mt = 0.0262, Rsigma = 0.0317), которые были использованы в вычислениях. Более подробная информация представлена в таблице 2.

Таблица 2. Кристаллографические данные 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил )этил] пер гидроазин-2, 6-диона

Кристаллографическая информация (для температуры 100К): моноклинная, пространственная группа Сс (по. 9), а = 9.4322(2) А, b = 13.7418(3) А, с = 8.9573(2) A, /> = 104.1740(10)°, V = 1125.66(4) A ³ , Z = 4, Т = 100 К, ц(МоКа) = 0.092 мм' ¹ , Deale = 1.306 г/см ³ , 5867 отражений измерено (5.35° < 20 < 61.008°), из них 2405 уникальных (Rint = 0.0198, Rsigma = 0.0288), которые были использованы в вычислениях. Более подробная информация представлена в таблице 3.

Таблица 3. Кристаллографические данные 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона

Строение элементарной ячейки и кристаллической упаковки представлены на фиг.З Величины ребер ячейки, полученные в исследовании монокристалла в таблицах 2 и

3, отличаются на 1-5%. Это связано с тем, что объем и параметры ячейки могут варьироваться при температурных изменениях.

Пример 2. Исследование стабильности

Стабильность кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона, полученной в примере 1, оценивали методом ускоренного старения согласно ОФС.1.1.0009.15 Сроки годности лекарственных средств, государственной фармакопеи РФ. При повышенных температурах, как правило, ускоряются протекающие в лекарственных средствах физико-химические процессы, приводящие со временем к нежелательным изменениям качества. Таким образом, при повышенной температуре промежуток времени, в течение которого контролируемые показатели качества лекарственного средства сохраняются в допустимых пределах (экспериментальный срок годности), искусственно сокращается.

Предполагаемые условия хранения кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол- 4-ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона были выбраны 6 лет при температуре не выше 25°С.

Срок годности (С) при температуре хранения (/хр) связан с экспериментальным сроком годности (Сэ) при повышенной температуре экспериментального хранения (/ _э ) уравнением Вант-Гоффа: t3 ^{- t} xp

С = К ■ С _э К = где А - температурный коэффициент, который принимается равным 2.5.

Были выбраны условия хранения в эксперименте ускоренного старения: 60 дней при температуре 65°С. Для проведения исследования образец кристаллической формы 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона, полученной в примере 1, оставляли в климатической камере на 60 дней при температуре 65°С. Далее была зарегистрирована рентгенограмма полученного образца. Результаты измерений представлены на фиг.5. На полученной картине отсутствовали дополнительные рефлексы, что свидетельствует о чистоте формы и о сохранении кристаллической структуры. Таким образом, кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона остается стабильной в выбранных условиях хранения. Пример 3. Исследование растворимости

Определение растворимости кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона, полученной в примере 1, проводили, руководствуясь ОФС.1.2.1.0005.15 Растворимость, государственной фармакопеи РФ. В качестве модели слюны человека использовали фосфатный буфер с pH 6.8.

К 1.0 г кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2,6- диона, полученной в примере 1, добавляли 1.0 мл фосфатного буфера и непрерывно встряхивали полученную взвесь в течение 10 минут при 25°С. Вещество растворилось не полностью, раствор был мутным.

Далее к 100 мг кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона, полученной в примере 1, добавляли 1.0 мл фосфатного буфера и повторяли описанную выше процедуру. Кристаллическая форма полностью растворилась. Согласно ОФС.1.2.1.0005.15 форму классифицировать как легко растворимую.

Пример 4. Исследование гигроскопичности

Гигроскопичность кристаллических форм 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона оценивали согласно ОФС.1.2.1.0010.15. Потеря в массе при высушивании, государственной фармакопеи РФ.

Кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона, полученную в примере 1, помещали в климатическую камеру при относительной влажности 80% и температуре 25°С на 24 часа. Далее навеску вещества помещали в доведенный до постоянной массы бюкс. Высушивание проводили в эксикаторе над оксидом фосфора (V) в течение 12 часов. После этого бюкс извлекали из эксикатора, закрывали крышкой и взвешивали.

Потерю массы при высушивании рассчитывали по формуле: mi - масса бюкса с крышкой, m2 - масса вещества вместе с бюксом до высушивания; тз - масса вещества с бюксом после высушивания.

Было найдено, что потеря массы при высушивании составляет 1.12%, что позволяет классифицировать форму как слабогигроскопичную. Пример 5. Получение фармацевтической композиции

Кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона, полученную в примере 1 , использовали для приготовления фармацевтических композиций согласно составам, раскрытым в Таблице 4. Для каждого состава кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона (в таблице указано как «активное вещество») смешивали с эксципиентами, указанными в таблице 4, тщательно перемешивали итоговую смесь.

Таблица 4. Составы фармацевтических композиций по настоящему изобретению, содержащие кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил] пергидроазин-2,6- диона в качестве активного вещества Пример 6. Получение лекарственного средства

Состав 3, полученный в примере 5, таблетировали на таблеточной машине, состоящей из стальной матрицы с отверстиями соответствующего диаметра и двумя расположенными друг над другом хромированными стержнями - верхними и нижними пуансонами. Нижний пуансон фиксирует пространство в матрице, в которое засыпается фармацевтическая композиция. Далее верхний пуансон спрессовывает композицию. Затем верхний и нижний пуансоны последовательно удаляются из матрицы, выталкивая таблетку.

Получено содержащее кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4- ил)этил] пер гидроазин-2, 6-диона лекарственное средство в форме таблетки следующего состава:

Кристаллическая форма 100 мг

1 -[2-( 1 -метилимидазол-4-ил)этил] пер гидроаз ин-2, 6-диона

Карбоксиметилкрахмал натрия 5.5 мг

Магния стеарат 3.0 мг

Тальк 1.5 мг

Лактоза безводная или лактоза моногидрат 190 мг

Всего 300 мг

Пример 7. Исследование влияния на продукцию хемокинов

Осложнения при заражении острыми респираторными вирусными инфекциями обычно запускаются посредством чрезмерной продукцией индуцируемых интерферонами хемокинов, таких как лиганды рецептора CXCR3. В доклинических и клинических исследованиях было четко продемонстрировано, что индуцируемые IFN-y хемокины, такие как CXCL9, CXCL10 (IP-10) или CXCL11, принадлежащие к лигандам рецептора CXCR3, являются подходящими биомаркерами тяжести заболевания, вызываемого различными респираторными вирусами. Избыточная продукция лигандов CXCR3 может вызвать неконтроллируемое воспаление и повреждение легких из-за накопления цитотоксических лейкоцитов. Поэтому цитокины в настоящее время являются не только маркером острых респираторных заболеваний, но и терапевтической мишенью при тяжелых клинических случаях (A. Ichikawa et al., CXCL10-CXCR3 enhances the development of neutrophil-mediated fulminant lung injury of viral and nonviral origin, American journal of respiratory and critical care medicine, 2013, V.187, N.I, pp.65-77).

Исследование проводилось на мышах-самцах линии C57BL6. Животных анестезировали, после чего вводило в одну ноздрю IFN-g (Revombinant Mouse IFN-) в дозе 100 нг/мышь. Одновременно с этим животным вводили кристаллическую форму 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) в дозах 0.3, 3, 15 и 30 мг/кг или стерильный физиологический раствор (контроль) внутрижелудочно с помощью зонда. Препарат сравнения Дексаметазон в дозе 1 мг/кг. Оценку уровня цитокинов ихемокинов IP10, CXCL9 и CXCL11 проводили по данным иммуноферментного анализа бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) животного после эвтаназии через 1, 2 и 4 часа после начала эксперимента с помощью тест системы MOUSE ELISA KIT на соответствующий хемокин/цитокин. На каждую группу и на каждую дозу исследуемого препарата приходилось 10 животных. Результаты измерений представлены на фиг.6, фиг.7 и фиг.8 соответственно.

Для всех данных применена описательная статистика: подсчитаны среднее арифметическое значение и ошибка среднего значения. С помощью критерия Шапиро- Уилка проверена нормальность распределения полученных в ходе эксперимента значений. В случае отличного от нормального распределения для оценки межгрупповых различий использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Данна). В случае нормального распределения для сравнения нескольких групп использовался анализ 1-way ANOVA (с постанализом Тьюки). Статистически анализ проводился с использованием программа GraphPad Prism. Различия считали статистически значимыми при р<0.05.

Из полученных данных следует, что введение кристаллической формы 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона настоящего изобретения в дозах 0.03 и 0.3 мг/кг приводит к снижению продукции IP- 10; в дозах 0.03, 0.3, 3 и 15 мг/кг приводит к снижению продукции CXCL9; в дозах 0.03, 0.3 и 3 мг/кг приводит к снижению продукции CXCL11.

Пример 8. Исследование противовоспалительной активности в модели аспирации соляной кислоты

В работе A. ICHIKAWA et al., CXCL10-CXCR3 enhances the development of neutrophil- mediated fulminant lung injury of viral and nonviral origin, AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY AND CRITICAL CARE MEDICINE, 2013, V.187, N.I, pp.65-77 показано, что при интратрахеальной инстилляции НС1 (соляной кислоты) в легких животных уже через 3 ч наблюдается инфильтрация воспалительных клеток и повышенная активация генов, кодирующих хемокин CXCL10. У мышей, дефицитных по CXCL10 или по CXCR3, отмечалось снижение инфильтрации нейтрофилов и улучшение функции легких, что подтвердило роль оси CXCL10-CXCR3 в развитии патологии легких в этой модели. Эту модель использовали для проверки эффекта кристаллической формы 1-[2-(1- метилимидазол-4-ил)этил]пергидро� �зин-2, 6-диона (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) на экспрессию в легких CXCL10 и приток воспалительных клеток. Для этого мышам вводили АФС перорально однократно в дозах 0.3, 3 или 15 мг/кг или препарат сравнения дексаметазон (1 мг/кг), с последующим введением в лёгкие через 30 мин раствора НС1. Через 3 ч после введения НС1 оценивали в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ) уровень CXCL10 и измеряли количество лейкоцитов, нейтрофилов и макрофагов. Результаты измерений представлены на фиг.9.

Введение НС1 в легкие мышей вызывало статистически значимое увеличение уровня CXCL10 в БАЛ, уровень которого в контрольной группе составил 52.20+3.54 пг/мл (см. фиг.9А). Однократное введение АФС во всех использованных дозах приводило к статистически значимому снижению CXCL10 в 1.7-2.8 раза, причем введение АФС в дозе 15 мг/кг снизило уровень CXCL10 до уровня интактных животных (19 пг/мл). Препарат сравнения дексаметазон при аналогичном режиме введения статистически значимо снизил уровень CXCL10 в 1.6 раза.

Введение НС1 в легкие мышей вызвало значительный приток клеток воспаления в БАЛ. Так уровень лейкоцитов в БАЛ в контрольной группе достоверно повысился до 6.29+0.13х10 ⁵ /легкое по сравнению с группой интактных животных (3.94+0.13х10 ⁵ /легкое) (фиг.9В). Уровень нейтрофилов в контрольной группе вырос до 1.00+0.05х10 ⁵ /легкое по сравнению с интактными животными (0.06+0, 01х10 ⁵ /легкое) (фиг.9С). Уровень макрофагов в контрольной группе 5.29+0.12х10 ⁵ /легкое был достоверно выше по сравнению с таковым у интактных животных 3.87+0.12х10 ⁵ /легкое (фиг.9П).

Однократное внутрижелудочное введение АФС во всех исследованных дозах (0.3- 15 мг/кг) за 0.5 ч до введения НС1 в лёгкие привело к статистически значимому снижению лейкоцитов в (1.5-1.8 раза), нейтрофилов (в 1.6-2.6 раза) и макрофагов (в 1.5-1.7 раза) по сравнению с контрольной группой. Эффект АФС носил прямой дозозависимый характер. Обнаруженный эффект АФС был сравним с препаратом сравнения дексаметазоном при аналогичном режиме введения, который статистически значимо снизил уровень лейкоцитов в 1.7 раза, нейтрофилов в 2 раза и макрофагов в 1.6 раза. Необходимо отметить, что уровни лимфоцитов и эозинофилов в этой модели у животных после введения НС1 не повышались.

Пример 9. Исследование противовирусной активности Для проведения исследований был использован штамм метапневмовируса человека HMPV, депонированный в государственной коллекции вирусов (per № 2476). Вирус HMPV культивировали на пермиссивной для HMPV эпителиальной клеточной линии человека Chang Conjunctiva, полученной из Государственной коллекции культур клеток лаборатории культур тканей ФГБУ "ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи" Минздрава России. В работе использовали 3-х дневный монослой перевиваемой клеточной линии Chang Conjunctiva, выращенный на среде 199 и Игла МЕМ (1:1) производства Предприятия Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН с добавлением 10% ЭТС, L-глутамина и антибиотиков- 150 ед/мл пенициллина и 150 ед/ мл стрептомицина.

Для изучения влияния динамики гибели мышей было сформировано 5 групп мышей balb/c, по 10 особей в каждой группе. Мышей в исследуемых группах заражали метапневмовирусом в дозе 10 ЛД50 интраназально под легким эфирным наркозом в объеме 0.05 мл/мышь. Через 24 часа животным вводили внутрижелудочно с помощью зонда кристаллическую форму 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона (далее - АФС, активная фармацевтическая субстанция) в дозах 15 и 30 мг/кг. Препаратом сравнения служил рибавирин, который вводили в дозе 40 мг/кг в аналогичном режиме. Контрольная группа получала растворитель.

Результаты изучения динамики гибели мышей в опытных и контрольной группах представлены на фиг.10.

В группе контроля выживаемость животных составила 35%. Кристаллическая форма 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин-2, 6-диона в дозе 30 мг/кг проявила статистически значимое (р<0.05) противовирусное действие в отношении экспериментальной метапневмовирусной инфекции, повышая выживаемость животных до 75%.

Пример 10. Исследование острой токсичности

Аутбредным лабораторным мышам (10 самцов, вес 200-220 г) вводили внутрижелудочно с помощью зонда максимально возможную для внутрижелудочного введения дозу кристаллической формы 1-[2-(1-метилимидазол-4-ил)этил]перг� �дроазин- 2, 6-диона - 5000 мг/кг. После указанной манипуляции гибель животных не наступила. На следующий день и в последующие дни отклонений в поведении животных не наблюдалось.