以下、詳細に本発明の内容を説明する。
(HCV阻害剤)
 本発明は、宿主細胞において、HCVの産生を� ��制しうるHCV阻害剤であり、以下の1.~5.で示� �れる化合物から選択されるいずれかの化合� �で示すことができる。本発明において、宿� �細胞とは、HCVが感染しうる細胞をいい、例� �ば肝細胞が挙げられる。この宿主細胞は、in  vitro又はin vivoの系は、いずれであっても良 い。HCVの産生を抑制しうるとは、例えば後述 するスクリーニング方法により、細胞におけ るHCVの産生、具体的にはコアタンパク質の産 生を抑制しうる系でアッセイすることにより 、選別することができる。
 本発明で化合物としては、具体的に構造式� ��示す化合物の他、L体、D体又はラセミ体が� �げられ、好ましくはL体が挙げられる。また� ��発明の化合物をさらに化学修飾して、別の� ��合物に誘導化することも可能である。

1.以下に示す一般式(I)で示される化合物、そ� ��薬学上許容される塩及び溶媒和物から選択� ��れるいずれかの化合物である。
式(I):

(式中、R ¹ 及びR ² は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン 原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和若しくは 不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有してい てもよいシクロアルキル基、アリール基、ア ラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニル オキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオ キシ基及びアラルキルオキシ基から選択され る任意の基を表す。)

2.以下に示す一般式(II)で示される化合物、そ の薬学上許容される塩及び溶媒和物から選択 されるいずれかの化合物である。
式(II):
(式中、R ³ は、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しく は分岐状の飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水 素基、置換基を有していてもよいシクロアル キル基、アリール基、アラルキル基、アルキ ルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニ ルオキシ基、アリールオキシ基及びアラルキ ルオキシ基から選択される任意の基を表す。 )

4.以下に示す一般式(III)で示される化合物、� �の薬学上許容される塩及び溶媒和物から選� �されるいずれかの化合物である。
式(III):
(式中、R ⁴ は、式(IV)の(a)又は(b)から選択される。式中� �R ⁵ 及びR ⁶ は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン 原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和若しくは 不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有してい てもよいシクロアルキル基、アリール基、ア ラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニル オキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオ キシ基及びアラルキルオキシ基から選択され る任意の基を表す。)

式(IV):

5.HCV阻害剤が、以下に示す一般式(V)で示され� ��化合物、その薬学上許容される塩及び溶媒� ��物から選択されるいずれかの化合物である� ��
式(V):
(式中、R ⁷ は、式(VI)の(a)又は(b)から選択される。式中� �R ⁸ 及びR ⁹ は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン 原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和若しくは 不飽和脂肪族炭化水素基、置換基を有してい てもよいシクロアルキル基、アリール基、ア ラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニル オキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオ キシ基及びアラルキルオキシ基から選択され る任意の基を表す。)

式(VI):
(式中、R ¹⁰ は、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しく は分岐状の飽和若しくは不飽和脂肪族炭化水 素基、置換基を有していてもよいシクロアル キル基、アリール基、アラルキル基、アルキ ルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニ ルオキシ基、アリールオキシ基及びアラルキ ルオキシ基から選択される任意の基を表す。 )

 上記において、「置換基を有していても� ��いシクロアルキル基、アリール基、アラル� ��ル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキ� ��基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ� ��及びアラルキルオキシ基」における置換基� ��しては、低級アルキル基、低級アルコキシ� ��、水酸基、ハロゲン原子、ハロアルキル基� ��アミノ基、置換 アミノ基、シアノ基、ニ� �ロ基、カルボキシ基、カルバモイル基等が� �げられる。

 「低級アルキル」とは、炭素数1~8個の直� ��状又は分岐状のアルキル基を意味し、具体� ��にはメチル、エチル、n-プロピル、イソプ� �ピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、te rt-ブチル、n-ぺンチル、イソぺンチル、ネオ� ��ンチル、tert-ぺンチル、ヘキシル、ヘプチ� �、オクチル等が挙げられる。

 「低級アルコキシ」とは、炭素数1~6個の� ��鎖状又は分岐状のアルコキシ基を意味し、� ��体的にはメトキシ、エトキシ、n-プロポキ� �、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソブトキ シ、s-ブトキシ、t-ブトキシ、n-ペンチルオキ シ、イソペンチルオキシ、n-ヘキシルオキシ� ��イソヘキシルオキシが挙げられる。

 「アリール」としては、フェニル、ナフ� ��ル又は多環芳香族炭化水素基(フェナンスリ ル等)が挙げられる。

 「ヘテロアリール」としては、N、O、S、� ��らなる群から選択されるヘテロ原子を1~4個� ��む5~6員の芳香環基(例えば、フラン、チオフ ェン、ピロール、オキサゾール、チアゾール 、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール 、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラ ジン、トリアジン)であるが、好ましくはN原� ��を含む環基(ピリジン、ピラジン等)を挙げ� �ことができる。

 「アラルキル」とは、上記の低級アルキ� ��基に上記アリールが置換 して形成される� �であり、ベンジル、メチルベンジル、ナフ� �ルメチルが例示される。

 「アラルキルオキシカルボニル」とは、� ��ルボニル基に上記のアラルキルがO原子を介 して結合して形成される基であり、ベンジル オキシカルボニル等が例示される。

 「ハロゲン」としては、フッ素、塩素、� ��素、ヨウ素が挙げられる。

 「低級アルキルカルボニル」、「アリー� ��カルボニル」又は「ヘテロアリールカルボ� ��ル」とは、それぞれ、カルボニル基に上記� ��低級アルキル、アリール又はヘテロアリー� ��が置換 して形成される基である。アセチ� �、ベンゾイル、ナフチルカルボニル等が例� �される

 「低級アルキルスルホニル」、「アリー� ��スルホニル」又は「ヘテロアリールスルホ� ��ル」とは、それぞれ、スルホニル基に上記� ��低級アルキル、アリール又はヘテロアリー� ��が置換 して形成される基である。

 「脂肪族ヘテロ環」とは、N、O及びSから� ��る群から選択されるヘテロ原子を1~4個含む5 ~6員の脂肪族環であり、ピロリジニル、チア� ��リジニル、オキサゾリジニル、イミダゾリ� ��ニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モル� ��リニル、チオモルホリニル、ピロリル、チ� ��ゾリル等が例示される。

 本発明のHCV阻害剤としては、具体的には� ��以下の化合物1A~4B(式VII~XIII)で示される化合� ��が特に好適である。

 本発明において、薬学上許容される塩とは� ��以下が挙げられる。
 塩基性付加塩としては、例えばナトリウム� ��、カリウム塩等のアルカリ金属塩;例えばカ ルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土 類金属塩;例えばアンモニウム塩;例えばトリ� ��チルアミン塩、トリエチルアミン塩;ジシク ロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、 ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミ ン塩、ブロカイン塩等の脂肪族アミン塩;た� �えばN,N-ジベンジルエチレンジアミン等のア� ��ルキルアミン塩;例えばピリジン塩、ピコリ ン塩、キノリン塩、イソキノリン塩等の複素 環芳香族アミン塩;例えばテトラメチルアン� �ニウム塩、テトラエチルアモニウム塩、ベ� �ジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジル� �リエチルアンモニウム塩、ベンジルトリブ� �ルアンモニウム塩、メチルトリオクチルア� �モニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩� �の第4級アンモニウム塩;アルギニン塩;リジ� �塩等の塩基性アミノ酸塩等が挙げられる。

 酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸� ��、硝酸塩、りん酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩� ��過塩素酸塩等の無機酸塩;例えば酢酸塩、プ ロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマ ール酸塩、酒石酸塩、りんご酸塩、くえん酸 塩、アスコルビン酸塩等の有機酸塩;例えば� �タンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベン� �ンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩等 のスルホン酸塩;例えばアスパラギン酸塩、� �ルタミン酸塩等の酸性アミノ酸等を挙げる� �とができる。

(HCV阻害剤を含む医薬組成物)
 本発明は、上記に示すいずれかの化合物で� ��されるHCV阻害剤を有効量含み、さらに、薬� ��的に許容し得る担体を含んでなる医薬組成� ��も含まれる。かかる医薬組成物は、経口的� ��は非経口的に投与することができる。経口� ��与による場合、本発明化合物は通常の製剤� ��例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤� ��の固形剤;水剤;油性懸濁剤;又はシロップ剤� ��しくはエリキシル剤等の液剤のいずれかの� ��形としても用いることができる。非経口投� ��による場合、本発明化合物は、水性又は油� ��懸濁注射剤、点鼻液として用いることがで� ��る。その調製に際しては、慣用の賦形剤、� ��合剤、滑沢剤、水性溶剤、油性溶剤、乳化� ��、懸濁化剤、保存剤、安定剤等を任意に用� ��ることができる。

(本発明のHCV阻害剤のスクリーニング方法)
 本発明に係るHCV阻害剤をスクリーニングは� ��ヒト肝癌由来Huh7細胞、試験検体及び感染性 HCVを接触させたのち、HCVを測定することによ り行うことができる。

 感染性HCVは、PNAS Vol.102, no.26 p.9294-9299 ( 2005)に記載の方法に従い、RNA PolIプロモータ� ��/ターミネーター系を利用したJFH1株(genotype  2a)のcDNA発現プラスミド導入細胞株(Huh7.5.1/JFH1  zeo R細胞)を用いて、図1に示す感染性HCVレ� �リコンゲノムから作製することができる。HC Vストック液は、分注した後、-80℃で保存す� �。

 より具体的には、以下のようにして行うこ� ��ができる。
1)ヒト肝癌由来Huh7.5.1細胞を、播種する工程;
2)試験検体を上記播種した細胞を含む培養液� ��加える工程;
3)さらに感染性HCVを播種する工程;
4)37±1℃で加温する工程;
5)培養上清を採取し、HCVを測定する工程。

 上記スクリーニング方法について、さらに� ��しく説明する。
1)上記ヒト肝癌由来Huh7.5.1細胞を、該細胞培� �用培地に懸濁し、例えば96穴のマイクロプレ ートなどのスクリーニング用容器に播種する 。
2)スクリーニング候補化合物を、細胞を含む� ��クリーニング用容器に加える。
3)さらに上記感染性HCVを播種し、スクリーニ� ��グ候補化合物と感染性HCVを含む複製細胞を� ��養し、得られる培養物中の感染性HCVを検出� ��る。
4)感染性HCVを細胞中で培養するために、3~10日 間、37±1℃で加温することができる。
5)上記培養後、培養上清を採取し、HCVを測定� ��ることにより本発明のアッセイを行うこと� ��できる。HCVの測定は、HCVの複製の促進又は� ��制を確認しうる方法であれば良く、特に限� ��されるものではないが、例えば市販のキッ� ��を用いてHCVコアタンパクの産生量をELISA法� �どにより確認することができる。

 本発明のHCV阻害剤は、上記のスクリーニ� ��グ方法に加えて、候補化合物のHCVの複製の� ��進又は抑制に及ぼす影響をより確実に確認� ��るために、非特異作用を排除するために並� ��して細胞毒性試験を行い、毒性の低いもの� ��選定して得た。HCVの増殖を抑制する物質と� ��ては、例えば、直接的若しくは間接的にHCV� ��増殖に影響を及ぼす有機化合物、あるいはH CVゲノム若しくはその相補鎖の標的配列にハ� ��ブリダイズすることによりHCVの増殖若しく� ��HCVタンパク質の翻訳に直接的又は間接的に� ��響を及ぼすアンチセンスオリゴヌクレオチ� ��等が挙げられる。