NOUVEAUX DERIVES ANALOGUES DE L'HERBIMYCINE A. COMPOSITIONS LES CONTENANT ET UTILISATION

La présente invention concerne de nouveaux composés chimiques de la famille des ansamycines benzoquinoïdes, les compositions qui les contiennent, et leur utilisation comme médicaments.

Plus particulièrement, l'invention concerne, selon un premier aspect, de nouveaux composés chimiques de la famille des ansamycines benzoquinoïdes et notamment nouveaux analogues de l'herbimycine A présentant une activité anticancéreuse, et en particulier une activité inhibitrice de la protéine chaperone Hsp90, et plus particulièrement via l'inhibition de l'activité catalytique de type ATPasique de la protéine chaperone Hsp90.

Protéines Chaperones : Les chaperones moléculaires de la famille « Heat Shock Proteins » (HSPs), classées en fonction de leur masse moléculaire (Hsp27, Hsp40, Hsp70, Hsp90...), sont des éléments clés de l'équilibre entre la synthèse et la dégradation des protéines cellulaires, responsables du repliement correct des protéines. Elles jouent un rôle vital en réponse au stress cellulaire. Les HSPs, et en particulier Hsp90, sont également impliquées dans la régulation de diverses fonctions majeures de la cellule, via leur association avec diverses protéines clients impliquées dans la prolifération cellulaire ou l'apoptose (JoIIy C. et Morimoto R.I., J. N. Cancer lnst..(2000), 92, 1564 ; Smith D.F. et al., Pharmacological Rev. (1998), 50, 493 ; Smith D. F., Molecular Chaperones in the CeII, 165-178, Oxford University Press 2001).

Chaperone Hsp90 et inhibiteurs d'Hsp90 dans le traitement des cancers : La chaperone Hsp90, qui représente 1 à 2% du contenu protéique de la cellule, est une ATPase apparentée à la famille des phosphotransférases GHKL, caractérisées par un repliement commun appelé « Bergerat fold » autour du site de fixation de l'ATP. Cette famille GHKL contient également

des DNA-gyrases, ou topoisomérases de type II, des histidine-kinases bactériennes, des sérine-kinases mitochondriales, les pyruvate- déhydrogénase-kinases humaines et des protéines de réparation comme MutL (cf pour revue Chêne P., Nature Reviews Drug Discovery (2002), 1 , 665).

Afin d'assurer la maturation de ses clients, de même que les autres protéines chaperones, Hsp 90 œuvre de concert avec un certain nombre de co- chaperones et/ou d'adaptateurs, activateurs ou répresseurs, comme Hsp70 ou Hsp40, des immunophilines, Hop, Aha1 , p23, cdc37... (cf pour revue Nature Struct. Mol. Biol. (2006), 13, 479).

Hsp90 a été récemment mise en évidence comme une cible particulièrement prometteuse en thérapie anticancéreuse (cf pour revue : Moloney A. et Workman P., Expert Opin. Biol. Ther. (2002), 2(1), 3 ; Chiosis et al, Drug Discovery Today (2004), 9, 881 ; Powers M. et Workman P., endocrine-Related Cancer (2006), 13, S125). Cet intérêt tient en particulier aux interactions cytoplasmiques d'Hsp90 avec les principales protéines clientes d'Hsp90, protéines qui sont impliquées dans les six mécanismes de progression des tumeurs, tels que définis par Hanahan D. et Weinberg R.A. (CeII (2002), 100, 57-70 ), à savoir : - une capacité à proliférer en l'absence de facteurs de croissance : EGFR- R/HER2, Src, Akt, Raf, MEK, Bcr-Abl, Flt-3 ...

- une capacité à échapper à l'apoptose : forme mutée de p53, mdm2, Akt, survivine ...

- une insensibilité aux signaux d'arrêt de prolifération : Cdk4, PIkI, Wee1 ... - une capacité à activer l'angiogénèse : VEGF-R, FAK, HIF-1 , Akt ...

- une capacité à proliférer sans limite réplicative : hTert ...

- une capacité à envahir de nouveaux tissus et à métastaser : c-Met, FAK ... Parmi les autres protéines clients de Hsp90, des facteurs de transcription, tels que Stat3 ou des récepteurs aux hormones stéroïdiennes comme le récepteur à l'estrogène ou le récepteur à l'androgène, présentent également un intérêt important dans le cadre des thérapies anticancéreuses.

II a été montré récemment que la forme alpha d'Hsp90 avait également un rôle extracellulaire via son interaction avec la métalloprotéase MMP-2, elle- même impliquée dans l'invasion tumorale (Eustace B.K. et al, Nature CeII Biology (2004), 6, 507). Hsp90 est constituée de deux domaines N- et C-terminaux séparés par une région fortement chargée. L'interaction dynamique entre ces deux domaines, coordonnée par la fixation de nucléotides et de co-chaperones, détermine la conformation de la chaperone et son état d'activation. L'association des protéines clients dépend principalement de la nature des co-chaperones Hsp70/Hsp40, Hop60 etc ... et de la nature du nucléotide ADP ou ATP liée au domaine N-terminal de Hsp90. Ainsi l'hydrolyse de l'ATP en ADP et le facteur d'échange ADP/ATP contrôlent l'ensemble de la « machinerie » chaperone, et il a été montré qu'il suffit de prévenir l'hydrolyse de l'ATP en ADP - activité ATPasique d'Hsp90 - pour libérer dans le cytoplasme des protéines-clientes qui seront alors dégradées par le protéasome (Neckers L et Neckers K, Expert Opin. Emerging Drugs (2002), 7, 277; Neckers L, Current Médicinal Chemistry, (2003), 10, 733; Piper P.W., Current Opin. Invest. New Drugs (2001), 2, 1606) .

Rôle d'HspθO et de ses inhibiteurs dans des pathologies autres que le cancer :

Diverses pathologies humaines sont la conséquence d'un repliement incorrect de protéines clés, conduisant notamment à des maladies neurodégénératives suite à l'agrégation de certaines protéines comme dans les maladies d'Alzheimer et de Huntington ou les maladies liées aux prions (Tytell M. et Hooper P.L., Emerging Ther. Targets (2001), 5, 3788). Dans ces pathologies, des approches visant à inhiber Hsp90 dans le but d'activer les voies de stress (Hsp70 par exemple) pourraient être bénéfiques (Nature Reviews Neuroscience (2005), 6, 11). Quelques exemples sont cités ci- dessous :

i) La maladie de Huntinqton : Cette maladie neurodégénérative est due à une extension de triplets CAG dans l'exon 1 du gène codant pour la protéine huntingtine. Il a été montré que la geldanamycine inhibe l'agrégation de cette protéine du fait de la surexpression des chaperones Hsp70 et Hsp40 (Human Molecular Genetics (2001),

10, 1307). ii) La maladie de Parkinson : Cette maladie est due à la perte progressive des neurones dopaminergiques et caractérisée par l'aggrégation de la protéine alpha-synuclein. Il a été montré que la geldanamycine est capable de protéger la drosophile contre la toxicité de l'alpha-synuclein sur les neurones dopaminergiques. iii) L'ischémie cérébrale focale : II a été montré dans un modèle animal de rat que la geldanamycine protège le cerveau contre l'ischémie cérébrale, et ce du fait de l'effet de stimulation de la transcription des gènes codant pour les « heat-shock proteins » par un inhibiteur d'HspθO. iv) Les maladies d'Alzheimer et la sclérose en plaques : Ces maladies sont dues en partie à l'expression de cytokines pro-inflammatoires et de la forme inductible de la NOS (Nitric oxide synthase) dans le cerveau, et cette expression délétaire est supprimée par la réponse au stress. En particulier, les inhibiteurs d'Hsp90 sont capables d'engranger cette réponse au stress, et il a été montré in vitro que la geldanamycine et le 17-AAG présentent une activité antiinflammatoire dans des cellules gliales de cerveau (J. Neuroscience Res. (2002), 67, 461). v) La sclérose latérale amvotrophique : Cette maladie neurodégénérative est due à la perte progressive des neurones moteurs. Il a été montré que l'arimoclomol, un inducteur « heat- shock proteins », retarde l'évolution de la maladie dans un modèle animal (Nature Medicine (2004), 10, 402). Etant donné qu'un inhibiteur d'Hsp90 est également un inducteur des protéines heat-

shock (MoI. CeII Biol. (1999), 19, 8033 ; Mol. CeII Biol. (1998), 18, 4949), il est probable qu'un effet bénéfique pourrait être obtenu également dans cette pathologie pour ce type d'inhibiteurs.

D'autre part, un inhibiteur de la protéine Hsp90 pourrait être potentiellement utile dans diverses maladies, autres que le cancer cité précédemment, telles que des infections parasitaires, virales, fongiques, ou des maladies neurodégénératives et ce par une action directe sur Hsp90 et des protéines clientes particulières. Quelques exemples sont présentés ci- dessous : vi) la malaria : la protéine Hsp90 de Plasmodium falciparum présente

59% d'identité et 69% de similarité avec la protéine Hsp90 humaine, et il a été montré que la geldanamycine inhibe la croissance du parasite in vitro (Malaria Journal (2003), 2, 30 ; J. Biol. Chem. (2003), 278, 18336 ; J. Biol. Chem. (2004), 279,

46692). vii) Les filarioses de Bruqia et de Bancroft : ces parasites filaires lymphatiques possèdent une protéine Hsp90 pouvant potentiellement être inhibée par des inhibiteurs de la protéine humaine. En effet, il a été montré pour un autre parasite proche, le

Brugia pahangi, que ce dernier est sensible à l'inhibition par la geldanamycine. Les séquences de B. pahangi et humaines sont identiques à 80% et similaires à 87%. (Int. J. for Parasitology (2005), 35, 627) viii) La toxoplasmose : Toxoplasma gondii, le parasite responsable de la toxoplasmose, possède une protéine chaperone Hsp90, pour laquelle il a été montré l'induction au cours de la conversion tachyzoite-bradyzoite, correspondant au passage de l'infection chronique vers la toxoplasmose active. De plus, la geldanamycine bloque in vitro cette conversion tachyzoite-bradyzoite (J. Mol. Biol.

(2005), 350, 723).

ix) Les mycoses résistantes aux traitements : II est possible que la protéine Hsp90 potentialise l'évolution de la résistance aux drogues, en permettant à de nouvelles mutations de se développer. Par conséquent, un inhibiteur de Hsp90, seul ou en combinaison avec un autre traitement antifongique, pourrait se révéler utile dans le traitement de certaines souches résistantes (Science (2005), 309, 2185). De plus, l'anticorps anti-Hsp90 développé par Neu Tec Pharma démontre une activité contre C. albicans, sensible et résistant au fluconazole, C. krusei, C. tropicalis, C. glabrata, C. lusitaniae et C. parapsilosis in vivo (Current Molecular Medicine

(2005), 5, 403). x) L'hépatite B : Hsp90 est l'une des protéines de l'hôte qui interagit avec la transcriptase inverse du virus de l'hépatite B au cours du cycle de réplication du virus. Il a été montré que la geldanamycine inhibe la réplication de I ¹ ADN viral et l'encapsulation de l'ARN viral

(Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996), 93, 1060). xi) L'hépatite C : La protéine Hsp90 humaine participe à l'étape de clivage entre les protéines NS2 et NS3 par la protéase virale. La geldanamycine et le radicicol sont capables d'inhiber ce clivage NS2/3 in vitro (Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2001), 98, 13931). xii) Le virus de l'Herpès : La geldanamycine a démontré des activités d'inhibition de la réplication du virus HSV-1 in vitro, et ce avec un bon index thérapeutique (Antimicrobial Agents and Chemotherapy (2004), 48, 867). Les auteurs ont également trouvé une activité de la geldanamycine sur les autres virus HSV-2, VSV, Cox B3, HIV-1 et le coronavirus SARS (données non montrées), xiii) La denque (ou grippe tropicale) : II a été montré que la protéine humaine Hsp90 participe à l'étape d'entrée du virus, en formant un complexe contenant également Hsp70 qui sert de récepteur au virus ; Un anticorps anti-Hsp90 diminue le pouvoir infectieux du virus in vitro (J. of Virology (2005), 79, 4557)

xiv) L'atrophie musculaire spinale et bulbaire : (SBMA : Spinal and bulbar muscular atrophy), une maladie neurodégénérative héréditaire caractérisée par une extension de triplets CAG dans le gène du récepteur aux androgènes. Il a été montré que le 17-AAG, un dérivé de la Geldanamycine, présente une activité in vivo sur des animaux transgéniques servant de modèles expérimentaux de cette maladie (Nature Medicine (2005), 11 , 1088).

Inhibiteurs d'Hsp90 : Les premiers inhibiteurs connus d'Hsp90 sont des composés de la famille des ansamycines benzoquinoïdes, en particulier la Geldanamycine (1) et l'Herbimycine A.

Les ansamycines benzoquinoïdes sont des macrocycles qui possèdent une chaîne aliphatique substituée liant deux positions non adjacentes d'un noyau benzoquinone. La Geldanamycine a été la première molécule de cette famille isolée ( De Boer, C. et al, J. Antibiot. (1970), 23, 442 ; Sasaki, K. et al

J. Amer. Chem. Soc. (1970), 92, 7591). D'autres molécules naturelles ont été identifiées ultérieurement telles que les Herbimycines A-C et la Macbécine I.

Des études de rayon X ont montré que la Geldanamycine se lie au site ATP du domaine N-terminal d'Hsp90 où elle inhibe l'activité ATPasique de la chaperone (Prodromou C. et al, CeII (1997), 90, 65)

Actuellement le NIH et Kosan BioSciences assurent le développement clinique du 17-AAG, inhibiteur d'Hsp90 dérivé de la geldanamycine qui bloque l'activité ATPasique d'Hsp90 en se liant au site de reconnaissance N- terminal de l'ATP. Les résultats des essais cliniques de phase I du 17-AAG conduisent aujourd'hui à initier des essais de phase II, mais orientent aussi les recherches vers des dérivés plus solubles tels que l'analogue 17-DMAG (Kosan BioSciences), porteur d'une chaîne diméthylaminée à la place du résidu méthoxy, et vers des formulations optimisées du 17AAG (CNF1010 de

Conforma Therapeutics) ou vers l'analogue réduit du 17AAG, IPI 504, de la société lnfinity Pharmaceuticals (WO 2005063714 / US 2006019941).

De nouveaux dérivés de geldanamycine ont été décrits récemment (WO2006016773 / US6855705 / US2005026894/ WO2006050477 / US 2006205705 /WO2006228405 / WO 2007001049).

Des nouveaux dérivés d'ansamycine, et notamment de Macbécine I ₁ ont été récemment décrits par la société Biotica technology Ltd. Ces dérivés sont des monoesters carboxyliques ou carbamoïques en position 18 de 18,21-dihydromacbecine (WO200702627).

Des dimères d'ansamycines, et notamment des dimères de

Geldanamycine, ont été récemment préparés et montrent soit une activité inhibitrice prolongée (Zhang H. et al, Int. J. Cancer (2007), 120, 918) soit une capacité à prévenir la dimérisation d'Hsp90 (Chiosis G. et al, Bioorg. & Med.

Chem. Lett. (2006), 16, 3529).

Le Radicicol est également un inhibiteur d'Hsp90 d'origine naturelle (Roe S.M. et al, J. Med Chem. (1999), 42, 260-66). Toutefois, si celui-ci est de loin le meilleur inhibiteur in vitro d'Hsp90, son instabilité métabolique vis à vis des nucléophiles soufrés le rend difficilement utilisable in vivo. Des dérivés oximes bien plus stables tels que le KF 55823 ou le KF 25706 ont été développés par la société Kyowa Hakko Kogyo (Soga et al, Cancer Research (1999), 59, 2931-2938)

Radicicol 55823 Des structures d'origine naturelle apparentées au radicicol ont également été récemment décrites, comme la zéaralénone par la société Conforma Therapeutics (WO 03041643) ou l'acétate de zéaralanol.

Zéaralénone Zéaralanol acétate

La demande de brevet US2006089495 décrit des composés mixtes comprenant un noyau quinone, comme les dérivés d'ansamycine, et un noyau résorcinol comme les analogues de radicicol, comme inhibiteurs d'Hsp90.

Un autre type d'inhibiteur d'Hsp90 d'origine naturelle, la novobiocine se lie à un site ATP différent situé dans le domaine C-terminal de la protéine (Itoh H. et al, Biochem J. (1999), 343, 697-703. Récemment des analogues simplifiés de la Novobiocine ont été identifiés comme plus puissants

inhibiteurs d'Hsp90 que la Novobiocine elle-même (J. Amer. Chem. Soc. (2005), 127, 12778).

La demande de brevet WO 2006/050501 revendique des analogues de Novobiocine comme inhibiteurs d'Hsp90.

Un depsipeptide, nommé Pipalamycin ou ICH 01 a également été décrit comme inhibiteur non compétitif du site ATP d'Hsp90 (J. Pharmacol. Exp. Ther. (2004), 310, 1288).

La Sherperdine, nonapeptide KHSSGCAFL, mime une partie de la séquence K79-K90 (KHSSGCAFLSVK) de la Survivine et bloque l'interaction des protéines de la famille IAP avec Hsp90 in vitro (WO 2006014744).

Des petits peptides, comprenant une séquence de type Otoferline (YSLPGYMVKKLLGA), ont été récemment décrits comme inhibiteurs de Hsp90 (WO 2005072766 ). Des purines, comme les composés PU3 (Chiosis et al, Chem. Biol.

(2001), 8, 289) et PU24FCI (Chiosis et al, Curr. Cane. Drug Targets (2003), 3, 371 ; WO 2002/036075 ) ont également été décrites comme inhibiteurs d'Hsp90. Un dérivé de purine CNF2024 a été récemment introduit en clinique par la société Conforma Therapeutics, en collaboration avec le Sloan Kettering Mémorial Institute for Cancer Research (WO 2006/084030).

La demande de brevet FR2880540 (Aventis) revendique une autre famille de purines inhibitrices d'Hsp90.

La demande de brevet WO2004/072080 (Cellular Genomics) revendique une famille de 8-hétéroaryl-6-phényl-imidazo[1 ,2-a]pyrazines comme modulateurs de l'activité d'hsp90.

La demande de brevet WO2005/028434 (Conforma Therapeutics) revendique des aminopurines, des aminopyrrolopyrimidines, des aminopyrazolopyrimidines et des aminotriazolopyrimidines comme inhibiteurs d'Hsp90. La demande de brevet WO2004/050087 (Ribotarget/Vernalis) revendique une famille de pyrazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.

La demande de brevet WO2004/056782 (Vernalis) revendique une nouvelle famille de pyrazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.

La demande de brevet WO2004/07051 (Vernalis) revendique des dérivés d'arylisoxazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.

La demande de brevet WO2004/096212 (Vernalis) revendique une troisième famille de pyrazoles utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.

La demande de brevet WO2005/00300 (Vernalis) revendique de manière plus générale des hétérocycles à 5 chaînons, substitués par des radicaux aryles, utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock Proteins » tels que la chaperone Hsp90.

La demande de brevet JP2005/225787 (Nippon Kayaku) revendique une autre famille de pyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande WO2006/018082 (Merck) revendique une autre famille de pyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2005/00778 (Kyowa Hakko Kogyo) revendique une famille de dérivés de benzophénone comme inhibiteurs d'Hsp90, utiles pour le traitement des tumeurs.

La demande de brevet WO2005/06322 (Kyowa Hakko Kogyo) revendique une famille de dérivés de résorcinol comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2005/051808 (Kyowa Hakko Kogyo) revendique une famille de dérivés d'acides résorcinyl-benzoïques comme inhibiteurs d'Hsp90.

Les demandes de brevet WO2005/021552, WO2005/0034950, WO2006/08503 WO2006/079789 et WO2006/090094 (Vernalis) revendiquent des familles de pyrimidothiophènes ou de pyridothiophènes , utiles pour traiter des pathologies liées à l'inhibition des « Heat Shock

Proteins » tels que la chaperone Hsp90.

La demande WO2006/010595 (Novartis) revendique une famille d'indazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande WO2006/010594 (Novartis) revendique une famille de dihydrobenzimidazolones comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006/055760 (Synta Pharma) revendique une famille de diaryl-triazole comme inhibiteurs d'Hsp90. La demande de brevet WO2006/087077 (Merck) revendique une famille de (s-triazol-3-yl)phenols comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet FR2882361 (Aventis) revendique une famille de 3-aryl-1 ,2-benzisoxazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006/091963 (Serenex) revendique des familles de tetrahydroindolones et de tetrahydroindazolone comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet DE10200509440 (Merck Gmbh) revendique une famille de thiénopyridines comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet W02006/095783 (Nippon Kayaku) revendique une famille de triazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006101052 (Nippon Kayaku) revendique une famille de dérivés acétylèniques comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006105372 (Conforma Therapeutics) revendique une famille d'alkynyl pyrrolo[2,3-d]pyrimidines comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet FR2884252 (Aventis) revendique une famille d'isoindoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006109075 (Astex) revendique une famille de benzamides comme inhibiteurs d'HspθO. La demande de brevet WO2006109085 (Astex) revendique une famille d'hydroxybenzamides comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet JP200606755 (Nippon Kayaku) revendique une famille de pyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006117669 (Pfizer) revendique une famille d'hydroxyarylcarboxamides comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2006123061 (Aventis) revendique des familles d'azabenzimidazolylfluorènes et de benzimidazolylfluorènes comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2007017069 (Merck Gmbh) revendique des dérivés d'adénine comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2007021877 (Synta Pharma) revendique une famille d'arylimidazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La demande de brevet WO2007021966 (Synta Pharma) revendique une famille d'arylpyrazoles comme inhibiteurs d'Hsp90.

La présente invention concerne des produits de formule (I)

dans lesquels A représente l'un des trois cycles suivants :

cycle a

W représente l'atome d'hydrogène ou l'un des radicaux suivants : -(C1- C4)alkyle, -(C1-C4)alkényle, -CO-(C1-C3)alkyle, -CO-(CI -C3)alkényle, -CO- NH-(CI -C2)alkyle, -CO-NH-(CI -C2)alkényle ou -CO-NH2 ; le carbone C15 desdits produits de formule (I) ayant la configuration stéréochimique R ou S, et la double liaison entre les carbones C4 et C5 desdits produits de formule générale (I) ayant une géométrie E ou Z.

étant entendu que lorsque A représente le cycle b ci-dessus, et que le carbone C15 a la configuration stéréochimique R alors W ne représente pas hydrogène ou méthyle.

lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi

que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I). La présente invention concerne notamment les produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dans lesquels W a la signification indiquée ci-dessus et :

A représente le cycle a, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie E, A représente le cycle b, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R ou S et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie Z, ou bien A représente le cycle c, le carbone C15 a la configuration stéréochimique R ou S et la double liaison entre les carbones C4 et C5 est de géométrie Z, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).

Dans les produits de formule (I) et dans ce qui suit, les termes indiqués ont les significations qui suivent :

- le terme radical alkyle désigne un radical linéaire ou ramifié renfermant 1 , 2, 3 ou 4 atomes de carbone choisi parmi les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, sec-butyle ou tert-butyle,

- le terme radical alkényle désigne un radical linéaire ou ramifié renfermant 2, 3 ou 4 atomes de carbone choisi parmi les radicaux vinyle, allyle, propényle, butényle ou isobutényle,

Les radicaux alkylamino ou alkénylamino NH-(C1-C2)alkyle et -NH-(CI- C2)alkényle tels que définis ci-dessus, sont tels que les radicaux alkyl et alkényle sont choisis parmi les radicaux cités ci-dessus . On peut citer par exemple les radicaux méthylamino, éthylamino ou vinylamino.

La présente invention concerne notamment les produits de formule (I) tels que définis ci-dessus répondant aux formules suivantes : produit A A003677380 de type aRE produit B1 A003677378 de type bSZ

produit B2 A003677376 de type bRZ

lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes tautomères et isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréoisomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques desdits produits de formule (I).

Le terme patient désigne les êtres humains mais aussi les autres mammifères.

Le terme "Prodrug" désigne un produit qui peut être transformé in vivo par des mécanismes métaboliques (tel que l'hydrolyse) en un produit de formule (I). Par exemple, un ester d'un produit de formule (I) contenant un groupe hydroxyle peut être converti par hydrolyse in vivo en sa molécule mère. Ou encore un ester d'un produit de formule (I) contenant un groupe carboxy peut être converti par hydrolyse in vivo en sa molécule mère.

On peut citer à titre d'exemples des esters de produits de formule (I) contenant un groupe hydroxyle tels que les acétates, citrates, lactates, tartrates, malonates, oxalates, salicylates, propionates, succinates, fumarates, maléates, méthylene-bis-b-hydroxynaphthoates, gentisates, iséthionates, di-p-toluoyltartrates, méthanesulfonates, éthanesulfonates, camphorsulfonates, benzenesulfonates, p-toluènesulfonates, cyclohexyl- sulfamates et quinates.

Des esters de produits de formule (I) particulièrement utiles contenant un groupe hydroxyle peuvent être préparés à partir de restes acides tels que ceux décrits par Bundgaard et. al., J. Med. Chem., 1989, 32, page 2503- 2507: ces esters incluent notamment des (aminométhyl)-benzoates substitués, dialkylamino-méthylbenzoates dans lesquels les deux groupements alkyle peuvent être liés ensemble ou peuvent être interrompus par un atome d'oxygène ou par un atome d'azote éventuellement substitué soit un atome d'azote alkylé ou encore des morpholino-méthyl)benzoates, e.g. 3- ou 4-(morpholinométhyl)-benzoates, et (4-alkylpiperazin-1- yl)benzoates, e.g. 3- ou 4-(4-alkylpiperazin-1-yl)benzoates.

Le ou les radicaux carboxy des produits de formule (I) peuvent être salifiés ou estérifiés par les groupements divers connus de l'homme du métier parmi lesquels on peut citer, à titre d'exemples non limitatifs, les composés suivants.

- parmi les composés de salification, des bases minérales telles que, par exemple, un équivalent de sodium, de potassium, de lithium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium ou des bases organiques telles que, par exemple, la méthylamine, la propylamine, la triméthylamine, la diéthylamine, la triéthylamine, la N,N-diméthyléthanolamine, le tris (hydroxyméthyl) amino méthane, l'éthanolamine, la pyridine, la picoline, la dicyclohexylamine, la morpholine, la benzylamine, la procaïne, la lysine, l'arginine, l'histidine, la N- méthylglucamine,

- parmi les composés d'estérification, les radicaux alkyle pour former des groupes alcoxy carbonyle tel que, par exemple, méthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle, tert-butoxy-carbonyle ou benzyloxycarbonyle, ces radicaux alkyles pouvant être substitués par des radicaux choisis par exemple parmi les atomes d'halogène, les radicaux hydroxyle, alcoxy, acyle, acyloxy, alkylthio, amino ou aryle comme, par exemple, dans les groupements chlorométhyle, hydroxypropyle, méthoxy-méthyle, propionyloxyméthyle, méthylthiométhyle, diméthyl-aminoéthyle, benzyle ou phénéthyle.

Par carboxy estérifié on entend par exemple les radicaux tels que les radicaux alkyloxycarbonyle par exemple méthoxycarbonyle, éthoxycarbonyle,

propoxycarbonyle, butyl ou tert-butyloxycarbonyle, cyclobutyloxycarbonyle, cyclopentyloxycarbonyle ou cyclohexyloxycarbonyle.

On peut également citer des radicaux formés avec les restes esters facilement clivables tels que les radicaux méthoxyméthyle, éthoxyméthyle ; les radicaux acyloxyalkyle tels que pivaloyloxyméthyle, pivaloyloxyéthyle, acétoxyméthyle ou acétoxyéthyle ; les radicaux alkyloxycarbonyloxy alkyle tels que les radicaux méthoxycarbonyloxy méthyle ou éthyle, les radicaux isopropyloxycarbonyloxy méthyle ou éthyle.

Une liste de tels radicaux esters peut-être trouvée par exemple dans le brevet européen EP 0 034 536.

Par carboxy amidifié, on entend les radicaux du type -CONH2 dont les atomes d'hydrogène sont éventuellement substitués par un ou deux radicaux alkyle pour former des radicaux alkylamino ou dialkylamino eux-mêmes éventuellement substitués comme indiqué ci-dessus ou ci-dessous, ces radicaux pouvant également former avec l'atome d'azote auquel ils sont liés une aminé cyclique tel que définie ci-dessus.

Par carboxy salifié on entend les sels formés par exemple avec un équivalent de sodium, de potassium, de lithium, de calcium, de magnésium ou d'ammonium. On peut également citer les sels formés avec les bases organiques telles que la méthylamine, la propylamine, la triméthylamine, la diéthylamine, la triéthylamine. On préfère le sel de sodium.

On peut rappeler que la stéréoisomérie peut être définie dans son sens large comme l'isomérie de composés ayant mêmes formules développées, mais dont les différents groupes sont disposés différemment dans l'espace, tels que notamment dans des cyclohexanes monosubstitués dont le substituant peut être en position axiale ou équatoriale, et les différentes conformations rotationnelles possibles des dérivés de l'éthane. Cependant, il existe un autre type de stéréoisomérie, dû aux arrangements spatiaux différents de substituants fixés, soit sur des doubles liaisons, soit sur des cycles, que l'on appelle souvent isomérie géométrique ou isomérie cis-trans. Le terme

stéréoisomère est utilisé dans la présente demande dans son sens le plus large et concerne donc l'ensemble des composés indiqués ci-dessus.

La présente invention concerne tout particulièrement les produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dont les noms suivent :

Carbamate de (4E,6E,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20-hydroxy- 8,13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (22)-4,6, 10, 18,20-hexaèn-9-yle Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S,12S,13R14S,16S,17S)-8,13,14,17- tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (21)-4,6,10,18-pentaèn-2-yle , ou « 15-ép/-Herbimycine A Carbamate de (4E.6Z, 10E)-(8S,9S, 12S, 13R, 14S, 16S, 17R)-9-carbamoyloxy- 8,13,14-triméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 - docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15-déméthoxy-15- carbamoyloxy-herbimycine A »

Les produits de formule (I) répondant à la formule (I) selon la présente invention peuvent être préparés selon les méthodes connues de l'homme du métier et particulièrement selon les méthodes décrites ci-après: la présente invention a ainsi également pour objet les méthodes de synthèse des produits de formule (I) selon la présente invention et notamment les méthodes générales de synthèses décrites dans les schémas ci-après. La présente invention concerne notamment un procédé de synthèse des produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dans lesquels la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z. Ce procédé est caractérisé par une fermeture du cycle par une réaction de macrolactamisation le entre le carbonyle en position 1 et l'atome d'azote d'une aniline portée par le carbone 20.

La présente invention concerne notamment un procédé de synthèse des produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dans lesquels la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie E. Ce procédé est

caractérisé par une fermeture du cycle par une réaction de métathèse entre les carbones 4 et 5.

De tels procédés peuvent être réalisés comme indiqué ci-après. Méthodes générales de synthèses des produits de formule générale (I) : Une méthode nouvelle et originale de synthèse totale de l'Herbimycine A a été développée dans le cadre de la présente invention et fait partie de la présente invention (Canova S. et al, Org. Lett. 2007, 9, 145). Cette synthèse met en œuvre l'analyse rétrosynthétique décrite dans le schéma ci-dessous :

Herbimycinβ A

MétathèSθ cyclisantβ

Allyltitanation

«* K he

Méthode générale 1 : Synthèse des composés de type I bRZ, I cRZ, I bSZ et I cSZ

Dans le cadre de l'invention, nous avons développé une stratégie voisine de celle décrite dans Org. Lett. 2007, 9, 145 pour préparer les composés de formule générale I ₁ dans lesquels W étant étant tel que décrit précédemment :

- A représente un cycle b ou un cycle c,

- le carbone en position 15 est soit de configuration R soit de configuration S,

- et la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z.

La réaction du lithien dérivé de la N.N-diallylaniline bromée 2b, c avec l'aldéhyde 1 correspondant au fragment C5-C15 des composés de formule générale I conduit au mélange 1,6 / 1 des composés intermédiaires 3b,cR et 3b,cS. aisément séparables, selon le schéma ci-dessous :

Le fragment intermédiaire C5-C15 1 et la N.N-diallylaniline bromée 2b,c peuvent être obtenus en opérant selon Org. Lett. (2007), 9, 145.

A partir du composé 3b,cR, il est possible d'accéder aux composés de formule générale I bRZ et I cRZ et dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue R, selon le schéma général ci-dessous:

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-diferfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et te/tbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales

connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cRZ et I cSZ à partir des composés de formule générale I bRZ et I bSZ par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d'hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.

A partir du composé 3b,cS. il est possible d'accéder aux composés de formule générale I bSZ et I cSZ, dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue S, selon le schéma général ci-dessous:

en 7 en 7

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-dife/τfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl « », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. En particulier, dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux lors de la synthèse du composé B1 (exemple 2), épimère de l'Herbimycine A de remplacer le groupement en position 15 par un groupement OMe dès la préparation de l'intermédiaire 4b,cS. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cRZ et I cSZ à partir des composés de formule générale I bRZ et I bSZ par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d' hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.

Méthode générale 1 : Synthèse des composés de type I aRZ et I aSZ

La même stratégie peut être utilisée pour préparer les composés de formule générale I ₁ dans lesquels W étant étant tel que décrit précédemment :

- A représente un cycle a,

- le carbone en position 15 est soit de configuration R soit de configuration S,

et la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie Z.

La réaction du lithien dérivé de la N,N-diallylaniline bromée 2a avec l'aldéhyde 1 correspondant au fragment C5-C15 des composés de formule générale I conduit au mélange 1 ,6 / 1 des composés intermédiaires 3aR et 3aS. aisément séparables, selon le schéma général ci-dessous:

Le fragment intermédiaire C5-C15 1 peut être obtenu en opérant selon Org. Lett. (2007), 9, 145.

la N,N-diallylaniline bromée 2a peut être préparée selon le schéma ci- dessous:

2a

A partir du composé 3aR, il est possible d'accéder aux composés de formule générale I aRZ, dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue R, selon le schéma ci-dessous :

7 et 18

3 étapes : protection en 15 7 modification de groupe N-protecteur

2 étapes : réduction puis Wittig

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience).

Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all) ₂ » et N,N-diferfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et tertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS » utilises dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions

mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.

A partir du composé 3aS. il est possible d'accéder aux composés de formule générale I aSZ, dans lesquels le carbone en position 15 est de configuration absolue R ₁ selon le schéma ci-dessous :

7 et 18 7

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N- diallyle « N(all) ₂ » et N,N-difertbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.

Méthode générale 2 : Synthèse des composés de type I aRE. I bRE, I cRE. I aSE, I bSE et I cSZ

Dans le cadre de l'invention, à partir de l'aminé non protégée 8aR, intermédiaire n-1 de l'aminé protégée 4aR décrite précédemment, nous avons développé, selon le schéma général ci-dessous, une stratégie afin de préparer les composés de formule générale I ₁ dans lesquels W étant étant tel que décrit précédemment :

- A r e p r é s e n t e u n c y c l e a ,

- le carbone en position 15 est de configuration

- et la double liaison entre les carbones 4 et 5 est de géométrie E.

15 (W=H) en 15 18

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N ₁ N- diallyle « N(all) ₂ » et N.N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et tertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.

Selon un schéma similaire, le composé 8aS , intermédiaire n-1 du composé 4aS décrit précédemment, peut conduire aux composés de type I aSE :

15 (W=H) en 15 18

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N ₁ N- diallyle « N(all) ₂ » et N,N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry.

Selon un schéma similaire, le composé 8b,cS , intermédiaire n-1 du composé 4b,cS décrit précédemment, peut conduire aux composés de type I bSE et I cSE :

15 (W=H) en 15 18 et 21 »

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all) ₂ » et N,N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene

(John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cSE et I cSE à partir des composés de formule générale I bSE et I bSE par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d'hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.

Selon un schéma similaire, le composé 8b,cR , intermédiaire n-1 du composé 4b,cR décrit précédemment, peut conduire aux composés de type I bRE et I cRE :

15 (W=H) en 15 18 et 21

Les réactions décrites ci-dessus peuvent être réalisées selon les conditions décrites dans la préparation des exemples ci-après et également selon les

méthodes générales connues de l'homme de l'art, en particulier celles décrites dans : Comprehensive Organic Chemistry, par D. Barton et al. (Pergamon Press) ; Advanced Organic Chemistry, par J. Marsh (Wiley Interscience). Les groupements protecteurs des fonctions aminés N,N-diallyle « N(all)2 » et N,N-diterfbutylcarbonyloxy « N(Boc)2 », ou des fonctions hydroxy p.méthoxybenzyl «OBMP », méthyle « OMe » et fertbutyldiméthylsilyle «OTBDMS », utilisés dans le schéma gênerai 1b, peuvent être modifiées en fonction des conditions expérimentales précises utilisées dans les réactions mises en jeu, selon les méthodes générales connues de l'homme de l'art et en particulier celles décrites par T. Greene (John Wiley & sons) ; Protective Groups in Organic Chemistry. Dans le cadre de l'invention, il est particulièrement avantageux de préparer les composés de formule générale I cRE et I cSE à partir des composés de formule générale I bRE et I bSE par réduction en milieu organo-aqueux à l'aide d'hydrosulfite de sodium, dans les conditions décrites par Ge J. et al, J. Med. Chem. (2006), 49, 4606 pour la transformation du 17AAG en IPI504.

Les produits objet de la présente invention sont doués de propriétés pharmacologiques intéressantes: on a constaté qu'ils possédaient notamment des propriétés inhibitrices des activités des protéines chaperones et notamment de leurs activités ATPasiques.

Parmi ces protéines chaperones, on cite notamment la chaperone humaine HSP90.

Les produits répondant à la formule générale (I) tels que définis ci-dessus présentent ainsi une activité inhibitrice de la chaperone Hsp90 importante .

Des tests donnés dans la partie expérimentale ci-après illustrent l'activité inhibitrice de produits de la présente invention vis-à-vis de telles protéines chaperones.

Ces propriétés rendent donc les produits de formule générale (I) de la présente invention utilisables comme médicaments pour le traitement de tumeurs malignes.

Les produits de formule (I) peuvent également être utilisés dans le domaine vétérinaire.

L'invention a donc pour objet l'application, à titre de médicaments, des produits de formule générale (I) pharmaceutiquement acceptables.

L'invention a particulièrement pour objet l'application à titre de médicaments, des produits de formule (I) tels que définis ci-dessus dont les noms suivent : - Carbamate de (4E,6E,10£)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20-hydroxy- 8,13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1 (22)-4,6, 10, 18,20-hexaèn-9-yle

- Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17S)-8,13,14,17- tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ] docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-2-yle , ou « 15-ép/-Herbimycine A

- Carbamate de (4E,6Z,10£)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-9-carbamoyloxy- 8,13,14-triméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 - docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15-déméthoxy-15- carbamoyloxy-herbimycine A »

ainsi que leurs prodrugs, lesdits produits de formule (I) étant sous toutes les formes isomères possibles racémiques, énantiomères et diastéréo-isomères, ainsi que les sels d'addition avec les acides minéraux et organiques ou avec les bases minérales et organiques pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I).

Les produits peuvent être administrés par voie parentérale, buccale, perlinguale, rectale ou topique.

L'invention a aussi pour objet les compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, un au moins des médicaments de formule générale (I).

Ces compositions peuvent être présentées sous forme de solutions ou de suspensions injectables, de comprimés, de comprimés enrobés, de capsules, de sirops, de suppositoires, de crèmes, de pommades et de lotions. Ces formes pharmaceutiques sont préparées selon les méthodes usuelles. Le principe actif peut être incorporé à des excipients habituellement employés dans ces compositions, tels que les véhicules aqueux ou non, le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.

La dose usuelle, variable selon le sujet traité et l'affection en cause, peut être, par exemple, de 10 mg à 500 mg par jour chez l'homme, par voie orale.

La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (I) tels que définis ci -dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation de médicaments destinés à inhiber l'activité de protéines chaperones et notamment d'Hsp90.

La présente invention concerne ainsi particulièrement l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) dans laquelle la protéine chaperone est HSP90.

La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie caractérisée par le dérèglement de l'activité d'une protéine chaperone de type Hsp90 et notamment une telle maladie chez un mammifère.

La présente invention concerne l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou traiter une maladie appartenant au groupe suivant: les maladies neurodégénératives telles que la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, l'ischémie cérébrale focale, la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaques et la sclérose latérale amyotrophique, la malaria, les filarioses de Brugia et de Bancroft, la toxoplasmose, les mycoses résistantes aux traitements, l'hépatite B, l'hépatite C, le virus de l'Herpès, la dengue (ou grippe tropicale), l'atrophie musculaire spinale et bulbaire, désordres de la prolifération de cellules mésangiales, thromboses, rétinopathies, psoriasis, dégénération musculaire, maladies en oncologie, cancers.

La présente invention concerne ainsi l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des maladies en oncologie.

La présente invention concerne particulièrement l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des cancers.

Parmi ces cancers, la présente invention s'intéresse tout particulièrement au traitement des tumeurs solides ou liquides et au traitement de cancers résistants aux agents cytotoxiques

La présente invention concerne ainsi notamment l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à traiter des cancers parmi lesquels les cancers du poumon, du sein et de l'ovaire, les cancers gastriques, les glioblastomes, les leucémies myéloîdes chroniques, les leucémies lymphoblastiques aigûes, les cancers de la prostate, du pancréas et du colon, les mélanomes métastatiques, les tumeurs de la thyroïde et les carcinomes rénaux .

Aussi parmi les principales indications potentielles d'inhibiteurs d'Hsp90, peut-on citer, à titre non limitatif:

- les cancers du poumon « non à petites cellules », les cancers du sein, les cancers de l'ovaire et les glioblastomes qui surexpriment EGF-R wt et/ou muté ou HER2 ;

- les leucémies myéloîdes chroniques qui surexpriment Bcr-Abl ;

- les leucémies lymphoblastiques aigûes qui surexpriment Flt-3 ;

- les cancers du sein, de la prostate, du poumon, du pancréas, du colon ou de l'ovaire qui surexpriment Akt ;

- les mélanomes metastatiques et les tumeurs de la thyroïde qui surexpriment la forme mutée de la protéine B-Raf ;

- les cancers de la prostate androgène-dépendants et androgène- indépendants ;

- les cancers du sein oestrogène-dépendants et oestrogène-indépendants ;

- les carcinomes rénaux qui surexpriment HIF-Ia ou la protéine c-met mutée.

La présente invention s'intéresse encore plus particulièrement au traitement du cancer du sein, du colon et des poumons.

La présente invention concerne aussi l'utilisation de produits de formule (I) telle que définie ci-dessus ou de sels pharmaceutiquement acceptables desdits produits de formule (I) pour la préparation d'un médicament destiné à la chimiothérapie de cancers.

A titre de médicaments selon la présente invention destinés à la chimiothérapie de cancers, les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent être utilisés seuls ou en association avec chimiothérapie ou

radiothérapie ou alternativement en association avec d'autres agents thérapeutiques.

La présente invention concerne ainsi notamment les compositions pharmaceutiques telles que définies ci-dessus contenant en plus, des principes actifs d'autres médicaments de chimiothérapie contre le cancer.

De tels agents thérapeutiques peuvent être des agents anti-tumoraux utilisés communément.

Comme exemples d'inhibiteurs connus de protéines kinases, on peut citer notamment la butyrolactone, le flavopiridol, la 2-(2-hydroxyéthylamino)-6- benzylamino-9-méthylpurine, l'olomucine, le Glivec ainsi que l'Iressa.

Les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent ainsi également être avantageusement utilisés en combinaison avec des agents anti-prolifératifs : à titre d'exemples de tels agents anti-prolifératifs mais sans toutefois se limiter à cette liste, on peut citer les inhibiteurs d'aromatase, les antiestrogènes, les inhibiteurs de topoisomérase I, les inhibiteurs de topoisomérase II, les agents actifs sur les microtubules, les agents d'alkylation, les inhibiteurs d'histone désacétylase, les inhibiteurs de farnésyl transférase, les inhibiteurs de COX-2, les inhibiteurs de MMP, les inhibiteurs de mTOR , les antimétabolites antinéoplastique, les composés du platine, les inhibiteurs de protéasome, comme le Bortezomib, les inhibiteurs d'Histone Déactylase (HDACs), comme le SAHA, et notamment les inhibiteurs d'HDACβ, les composés faisant décroître l'activité des protéines kinases et notamment les inhibiteurs de récepteur tyrosine-kinase, et en particulier EGF- R et Her2 (petites molécules et anticorps) et également les composés anti- angiogéniques, les agonistes de la gonadoréline, les anti-androgènes, les bengamides, les biphosphonates et le trastuzumab.

On peut citer ainsi à titre d'exemples, des agents anti-microtubules, comme les taxoides, les epothilones, les vinka-alkaloides, des agents d'alkylation tels que cyclophosphamide, des agents DNA-intercalant comme le cis-platinum, et l'oxaliplatine, des agents interactifs sur topoisomérase comme la

camptothécine et dérivés, les anthracyclines comme l'adriamycine, des antimétabolites comme le 5-fluorouracile et dérivés et analogues.

Les produits de formule (I) selon la présente invention peuvent être préparés par l'application ou l'adaptation de méthodes connues et notamment des méthodes décrites dans la littérature comme par exemple celles décrites par R.C.Larock dans: Comprehensive Organic Transformations, VCH publishers, 1989.

Dans les réactions décrites ci-après, il peut être nécessaire de protéger des groupes fonctionnels réactifs tels que par exemple des groupements hydroxy, amino, imino, thio ou carboxy, quand ceux-ci sont désirés dans le produit final mais quand leur participation n'est pas souhaitée dans les réactions de synthèse des produits de formule (I). On peut utiliser des groupes protecteurs conventionnels en accord avec les pratiques usuelles standard comme ceux décrits par exemple par T.W. Greene and P.G.M.Wuts dans "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley and Sons, 1991.

La partie expérimentale ci-après donne des exemples non limitatifs de produits de départ: d'autres produits de départ peuvent être trouvés dans le commerce ou préparés selon les méthodes usuelles connues de l'homme du métier.

Exemples illustrant l'invention : Les exemples dont la préparation suit illustrent la présente invention sans toutefois la limiter.

Tous les exemples décrits ont été caractérisés par spectroscopie RMN du proton, la majorité de ces exemples ont également été caractérisés en spectroscopie Infra Rouge en RMN du carbone et par mesure de leur pouvoir rotatoire.

Exemple 1 : Carbamate de (4E,6E,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-20- hydroxy-8,13,14,17-tétraméthoxy-4,10,12,16-tétraméthyl-3 -oxo-2- azabicyclo[16.3.1]docosa-1(22),4,6,10,18,20-hexaén-9-yle (composé de type I aRE) Etape 1

A une solution de 1 ,3-dibromo-5-ferf-butyldiméthylsilyloxybenzène, qui peut être obtenu selon Baldwin J. E. et al, Tetrahedron (1991), 47, 5603-14, (7,43 g, 20,32 mmol, 1 équiv.) et de diallylamine (30 ml_, 243 mmol, 12 équiv.) dans le THF (10 ml_) refroidie à -10 ⁰ C, est ajouté goutte à goutte du n-butyllithium (20 ml de solution 2,5M dans l'hexane, 50 mmol, 2,5 équiv.). La température du milieu réactionnel est lentement remontée à l'ambiante, et après 2 heures on ajoute, avec précaution, 2 mL de méthanol puis 30 mL d'eau. La phase aqueuse est extraite à l'oxyde de diéthyle (3 x 100 mL). Les phases organiques jointes sont séchées sur sulfate de magnésium et concnetrées sous vide. Après purification par flash-chromatographie sur gel de silice, en éluant à l'éther de pétrole, on obtient la λ/,λ/-diallyl-(3-bromo-5-ferf-

butyldiméthylsilyloxyphényl)-amine (4,34g, 11,36 mmol, 56%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0,39 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole)

RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) : δ : 6,44 (t , 1H, J = 1 ,9 Hz, H ₁ ), 6,34 (t, 1H, J = 1,8 Hz, H ₅ ), 6,08 (t, 1 H, J = 2,2 Hz, H ₃ ), 5,87-5,77 (2H, H ₂ ), 5,20-5,12 (4H, H ₃ ), 3,86 (4H, Hr) ₁ 0,97(s, 9H, f-Bu), 0,19 (s, 6H, Me).

Etape 2 :

A une solution du bromure aromatique obtenu à l'étape précédente (4,58 g, 11,9 mmol, 6 équiv.) dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (40 mL) refroidie à - 78 ⁰ C, est ajouté du n-butyllithium (4,78 mL de solution 2,5M dans l'hexane, 11 ,9 mmol, 6 équiv.). Après 30 minutes à température ambiant, le milieu est de nouveau refroidi à -78°C, et une solution de (7£)-(2S,4R,5f?,6S,9S,10S)-9- teAf-butyldiméthylsilyloxy-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-trimét hyldodéca-7,11-diénal (880 mg, 1,99 mmol, 1 équiv.), qui peut être obtenu selon Nakata M. et a/, Tetrahedron Lett. (1991), 32, 6015-18, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (25mL) est ajoutée via une canule. Après 1 ,5 heure à -78°C, on ajoute une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (20 mL), et la phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 60 mL). Les phases organiques jointes sont séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide. Après purification par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane / oxyde de diéthyle de 9/1 à 7/3), on obtient 675,7 mg (0,906 mmol, 46%) de (7ê)-(2S ₎ 4R,5R6S _I 9S,10S)-9-fert- butyldiméthylsilyloxy-1-(3-tert-butyldiméthylsilyloxy-5-di allylaminophényl)-

4,5,10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7 _I 11-dién-1/?-ol, dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0,39 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole) [α] _D ²⁰ + = 18,1 (c = 1 ,05, chloroforme) IR (film) : v : 3450, 2928, 2856, 1598, 1462, 1389, 1360, 1251, 1192, 1079, 989, 920, 834, 776, 670 cm- ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.32 (s, 1H, H ₁ ), 6.15 (s, 1 H, H ₅ ), 6.07 (m, 1 H, H ₃ ), 5.89-5.77 (2H, H ₂ ), 5.53 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.26- 5.05 (7H, H15 et H ₂₁ et H ₃ ), 4.55 (m, 1 H, J = 4.7 Hz, H ₇ ), 3.95-3.80 (5H, H ₁₈ et H ₁ ), 3.49 (m, 1H, H ₁₉ ), 3.48 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.27 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.12 (dd, 1 H, J = 9.4 et J = 1.2 Hz, H ₁₂ ), 2.78 (s élargi, 1 H, OH), 2.39 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.90 (m, 1H, H ₈ ), 1.73 (ddd syst AB, 1H, ² J = 14.9, J = 10.3 et J = 6.5 Hz, H ₁₀ ), 1.54 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H ₁₇ ), 1.35 (m, 1 H ₁ H ₁₀ ), 1.01 (d, 3H, J = 6.5 Hz, H ₁₄ ), 0.96 (s, 9H, f-Bu), 0.88 (s, 9H ₁ f-Bu), 0.73 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H ₉ ), 0.16 (s , 6H, SiMe ₂ ), 0.07 (s, 3H, SiMe), 0.02 (s, 3H, SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 156.2 (s, C ₄ ), 149.7 (s, C ₂ ), 145.2 (s, C ₆ ), 135.0 (d, C ₂₀ ), 135.0 (s, C ₁₆ ), 134.2 (2d, C ₂ ), 131.2 (d, C ₁₅ ), 117.6 (t, C ₂₁ ), 116.0 (2t, C ₃ ), 106.5 (d, C ₅ ), 104.0 (d, C ₁ ), 103.2 (d, C ₃ ), 86.2 (d, C ₁₉ ), 84.3 (d, C ₁₂ ), 82.5 (d, C ₁₁ ), 81.7 (d, C ₁₈ ), 76.5 (d, C ₇ ), 60.8 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.6 (q, OMe), 52.9 (2t, C ₁ ), 37.7 (d, C ₈ ), 34.8 (d, C ₁₃ ), 32.9 (t, C ₁₀ ), 25.8 (6q, 2t- Bu), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.2 (q, C ₁₄ ), 14.5 (q, C ₉ ), 12.2 (q, C ₁₇ ), -4.4 (2q, SiMe ₂ ), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).

et 402,4 mg (0,539 mmol, 27%) de (7E)-(2S,4fi,5R,6S,9S,10S)-9-ferf- butyldiméthylsilyloxy-1-(3-tert-butyldiméthylsilyloxy-5-di allylaminophényl)- 4,5,10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-dién-1R-ol

dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.27 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole / Oxyde de diéthyle 6/4). [α] _D ²⁰ + 3.58 (c 0.64, CHCI ₃ ). IR (film) : v : 3420, 2928, 2856, 1598, 1462, 1389, 1361, 1251 , 1192, 1080, 990, 920, 834, 777, 670 CnT ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.29 (s, 1H, H ₁ ), 6.16 (s, 1 H ₁ H ₅ ), 6.09 (m, 1 H, H ₃ ), 5.88-5.77 (2H, H ₂ ), 5.50 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.30- 5.06 (7H, H ₁₅ et H ₂₁ et H ₃ ), 4.10 (m, 1 H, J = 8.3 Hz, H ₇ ), 3.94-3.80 (5H, H ₁₈ et H ₁ ), 3.50 (s, 3H, OMe), 3.47 (m, 1 H, H ₁₉ ), 3.38 (s, 3H, OMe) ₁ 3.29 (s, 3H ₁ OMe), 3.27 (m, 1 H ₁ H ₁₁ ), 3.13 (dd, 1 H ₁ J = 9.3 et J = 1.4 Hz, H ₁₂ ), 2.39 (m, 1H ₁ H ₁₃ ), 1.99 (ddd syst AB ₁ 1 H ₁ ² J = 14.9, J = 10.5 et J = 4.7 Hz ₁ H ₁₀ ), 1.81 (m, 1 H ₁ H ₈ ), 1.52 (d, 3H ₁ J = 0.8 Hz ₁ H ₁₇ ), 1.25 (m, 1H ₁ H ₁₀ ), 1.01 (d, 3H ₁ J = 6.5 Hz ₁ H ₁₄ ), 0.96 (s, 9H ₁ f-Bu), 0.87 (s, 9H ₁ f-Bu), 0.67 (d, 3H ₁ J = 6.9 Hz, H ₉ ), 0.16 (s , 6H ₁ SiMe ₂ ), 0.06 (s, 3H ₁ SiMe), 0.01 (s, 3H, SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 156.3 (s, C ₄ ), 149.8 (s, C ₂ ), 145.8 (s, C ₆ ), 135.0 (d, C ₂₀ ), 135.0 (s, C ₁₆ ), 134.2 (2d, C ₂ ), 131.1 (d, C ₁₅ ), 117.7 (t, C ₂₁ ), 116.0 (2t, C ₃ ), 107.2 (d, C ₅ ), 104.8 (d, C ₁ ), 103.7 (d, C ₃ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.2 (d, C ₁₂ ), 82.7 (d, C ₁₁ ), 81.7 (d, C ₁₈ ), 80.5 (d, C ₇ ), 60.8 (q, OMe) ₁ 57.1 (q, OMe) ₁ 56.8 (q, OMe) ₁ 52.9 (2t, C ₁ ), 38.4 (d, C ₈ ), 34.8 (d, C ₁₃ ), 33.7 (t, C ₁₀ ), 25.8 (6q, 2t- Bu) ₁ 18.2 (2s, 2f-Bu), 18.2 (q, C ₉ ), 17.2 (q, C ₁₄ ), 12.2 (q. C ₁₇ ), -4.3 (2q, SiMe ₂ ), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).

Etape 3 :

A une solution de (yEJ^S^R.δR.βS.gS.IOSJ-θ-feAf-butyldiméthylsilyloxy-i- (S-tert-butyldiméthylsilyloxy-S-diallylaminophényO^.δ.iO- triméthoxy^.δ.δ- triméthyldodéca-7,11-dién-1R-ol, obtenu à l'étape précédente (678 mg, 0.91 mmol, 1 équiv.) dans le DMF (10 ml_) à 0 ⁰ C, sont ajoutés successivement de l'hydrure de sodium (182 mg, 60% dans l'huile, 4.55 mmol, 5 équiv.) et de l'iodométhane (0.6 ml_, 9.10 mmol, 10 équiv.). Après 4 h d'agitation en laissant le milieu réactionnel revenir à température ambiante, du méthanol (3 ml_) et de l'eau (12 ml_) sont ajoutés. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 50 ml_). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane / oxyde de diéthyle 9/1) pour conduire à la λ/, λ/-d ia I Iy I -3-fe/f- butyldiméthylsilyloxy-5-[(7E)-(1 R,2S,4S,5R,6S,9S, 10S)-9-ferf-butyldiméthyl- silyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diényl] aniline

(669.4 mg, 0.881 mmol, 97%), sous la forme d'une huile incolore, dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.41 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/oxyde de diéthyle 8/2). [α] _D ²⁰ + 34.1 (c 1.35, CHCI ₃ ). IR (film) : v : 2929, 1599, 1462, 1389, 1360, 1289, 1251, 1192, 1080, 920, 834,777,669 cm ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.22 (s élargi, 1H, H ₁ ), 6.12 (s élargi, 1H, H ₅ ), 6.09 (s élargi, 1 H, H ₃ ), 5.90-5.78 (2H, H ₂ ), 5.51 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.21-5.07 (7H, Hi ₅ et H21 et H ₃ ), 3.90 (m, 1H, J = 4.4 Hz, H ₇ ), 3.89- 3.84 (5H, H ₁₈ et H _r ), 3.46 (m, 1H, Hi ₉ ), 3.45 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe),

3.28 (s, 3H ₁ OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.15 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.07 (dd, 1 H, J = 8.8 et J = 2.0 Hz, H ₁₂ ), 2.41 (m, 1 H ₁ H ₁₃ ), 1.91 (m, 1 H, H ₈ ), 1.70 (m, 1H ₁ H ₁₀ ), 1.54 (d, 3H ₁ J = 0.9 Hz, H ₁₇ ), 1.29 (m, 1 H, H ₁₀ ), 0.99 (d, 3H ₁ J = 6.7 Hz ₁ H ₁₄ ), 0.96 (s, 9H ₁ f-Bu), 0.87 (s, 9H, t-Bu), 0.77 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H ₉ ), 0.17 (s , 6H, SiMe ₂ ), 0.06 (s, 3H ₁ SiMe), 0.00 (s, 3H, SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 156.2 (s, C ₄ ), 149.7 (s, C ₂ ), 143.1 (s, C ₆ ), 134.9 (d, C ₂₀ ), 134.8 (s, C ₁₆ ), 134.2 (2d, C ₂ ), 131.5 (d, C ₁₅ ), 117.5 (t, C ₂₁ ), 116.0 (2t, C ₃ ), 107.4 (d, C ₅ ), 104.9 (d, C ₁ ), 103.4 (d, C ₃ ), 88.7 (d, C ₇ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 85.0 (d, C ₁₂ ), 81.8 (d, C ₁₈ ), 81.1 (d, C ₁₁ ), 60.8 (q, OMe), 57.4 (q, OMe) ₁ 57.1 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 52.9 (2t, C ₁ ), 36.2 (d, C ₈ ), 34.5 (d, C ₁₃ ), 33.5 (t, C ₁₀ ), 25.8 (6q, 2t-Bu), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.0 (q, C ₁₄ ), 13.8 (q, C ₉ ), 12.3 (q, C ₁₇ ), -4.4 (2q, SiMe ₂ ), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).

Etape 4 :

A une solution du composé obtenu à l'étape 3 (642 mg, 0.846 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (50 ml_) sont ajoutés de l'acide N,N- diméthylbarbiturique (NDMBA ₁ 793 mg, 5.08 mmol, 6 équiv) et du palladium tétrakistriphénylphosphine (94 mg, 0.08 mmol, 0.1 équiv.). Après 2 heures de chauffage au reflux du dichlorométhane, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le solide rouge résultant est dissout dans l'acétate d'éthyle (200 ml_) et lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (15 ml_). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde diéthyle de 7/3 à 1/1) pour conduire à la 3-fe/f-butyldiméthylsilyloxy-5-[(7£)-

(IR^S^S.δR.βS^S.IOSJ-g-te/f-butyldiméthylsilyloxy-I ^.S.IO-tétraméthoxy- 2,6 ₎ 8-triméthyldodéca-7,11-diényl]aniline (388.3 mg, 0.571 mmol, 68%) sous la forme d'une huile jaune, dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf = 0.18 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α] _D ²⁰ + 33.4 (c 0.77, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3460, 3370, 2928, 2856, 1584, 1461, 1359, 1250, 1175, 1080, 836,777,669 cm- ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.24 (s élargi, 1H, Hi ou H ₅ ), 6.20 (s élargi, 1 H, Hi ou H ₅ ), 6.11 (s élargi, 1H, H ₃ ), 5.51 (ddd, 1H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.5 Hz, H ₂₀ ), 5.21-5.07 (3H, H ₁₅ et H ₂ i), 3.89 (m, 1 H ₁ J = 4.5 Hz, H ₇ ), 3.87 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H ₁₈ ), 3.46 (m, 1H, H ₁₉ ), 3.45 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.15 (m, 1 H, H ₁₁ ), 3.09 (dd, 1H, J = 9.0 et J = 1.9 Hz, H ₁₂ ), 2.40 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.90 (m, 1 H, H ₈ ), 1.70 (ddd syst AB, 1 H, ² J = 14.3, J = 10.8 et J = 2.8 Hz, H ₁₀ ), 1.54 (d, 3H, J = 0.9 Hz, H ₁₇ ), 1.28 (m, 1 H, H ₁₀ ), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.97 (s, 9H, f-Bu), 0.87 (s, 9H ₁ t-Bu), 0.76 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H ₉ ), 0.18 (s, 3H ₁ SiMe), 0.17 (s, 3H, SiMe) ₁ 0.06 (s, 3H, SiMe) ₁ 0.00 (s, 3H, SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 156.4 (s, C ₄ ), 144.0 (s, C ₂ ), 134.9 (d, C ₂₀ ), 134.9 (s, C ₆ ou C ₁₆ ), 134.8 (s, C ₆ ou C ₁₆ ), 131.4 (d, C ₁₅ ), 117.6 (t, C ₂₁ ), 109.7 (d, C ₁ ou C ₅ ), 107.6 (d, C ₁ ou C ₅ ), 106.8 (d, C ₃ ), 88.3 (d, C ₇ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.8 (d, C ₁₂ ), 81.7 (d, C ₁₈ ), 81.1 (d, C ₁₁ ), 60.8 (q, OMe), 57.4 (q, OMe) ₁ 57.1 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 36.1 (d, C ₈ ), 34.6 (d, C ₁₃ ), 33.3 (t, C ₁₀ ), 25.8 (3q, f-Bu), 25.7 (3q, t-Bu), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.1 (q, C ₁₄ ), 13.6 (q, C ₉ ), 12.3 (q, C ₁₇ ), -4.4 (2q, SiMe ₂ ), -4.7 (q, SiMe) ₁ -4.8 (q, SiMe).

Etape 5 :

A une solution d'acide (2E,4E)-2-méthylhexa-2,4-diénoïque, qui peut être obtenu selon Coutrot P. et al, Synthesis (1986), 790-2, (146 mg, 1.26 mmol, 4.3 équiv.) dans le dichlorométhane (10 ml_) refroidie à 0 ⁰ C, sont ajoutés de la pyridine (250 ml_, 3.15 mmol, 11 équiv.) et du chlorure d'oxalyle (96 μl_, 1.10 mmol, 3.8 équiv.). Après 30 minutes à 0 ⁰ C et 2 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est de nouveau refroidi à 0 ⁰ C et une solution de l'aniline obtenue à l'étape 4 (198 mg, 0.292 mmol, 1 équiv.) est ajoutée via une canule. Après un retour lent à température ambiante, le milieu réactionnel est dilué avec de l'oxyde de diéthyle (15 mL) et une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (1O mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite successivement avec de l'oxyde de diéthyle (40 mL) et de l'acétate d'éthyle (40 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient d'éther de pétrole et d'acétate d'éthyle de 9/1 à 8/2) pour conduire au (2E,4E)-λ/-{3-teAf-Butyldiméthylsilyloxy-5-[(7£)-

(1R,2S,4S,5f?,6S,9S,10S)-9-tert-Butyldiméthylsilyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy- 2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diényl]phényl}-2-méthylhexa- 2,4-diénamide (182 mg, 0.231 mmol, 79%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.58 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 8/2). [α] _D ²⁰ + 32.9 (c 1.03, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 2928, 2856, 1648, 1599, 1541 , 1458, 1426, 1251 , 1102, 1080, 967, 836, 777, 670 ctτT ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 7.40 (s, 1 H, NH), 7.34 (s, 1H, H ₁ ou H ₃ ou H ₅ ), 6.93 (d, 1H, J = 10.9 Hz, H ₂₅ ), 6.78 (s, 1H, H ₁ ou H ₃ ou H ₅ ), 6.51 (s, 1H, H ₁ ou H ₃ ou H ₅ ), 6.36 (m, 1H, H ₂₆ ), 6.06 (m, 1H, H ₂₇ ), 5.49 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.20-5.05 (3H, H ₂₁ et H ₁₅ ), 3.95 (d, 1 H, J = 4.2 Hz, H ₇ ), 3.85 (d, 1H, J = 7.1 Hz, H ₁₈ ), 3.45 (m, 1 H, H ₁₉ ), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.15 (d élargi, 1H, J = 10.6 Hz, H ₁₁ ), 3.09 (dd, 1H, J = 9.2 Hz, H ₁₂ ), 2.38 (m, 1 H, H ₁₃ ), 2.02 (s, 3H, H ₂₄ ), 1.92 (m, 1 H, H ₈ ), 1.87 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H ₂₈ ), 1.68 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.52 (s, 3H ₁ H ₁₇ ), 1.27 (m, 1H, H ₁₀ ), 0.98 (m, 3H, H ₁₄ ), 0.96 (s, 9H ₁ f-Bu), 0.86 (s, 9H, t- Bu), 0.74 (d, 3H ₁ J = 6.7 Hz ₁ H ₉ ), 0.20 (s, 6H, SiMe ₂ ), 0.04 (s, 3H, SiMe), 0.01 (s, 3H ₁ SiMe). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 167.3 (s, C ₂₂ ), 156.1 (s, C ₄ ), 143.4 (s, C ₆ ), 138.9 (s, C ₂ ), 136.8 (d, C ₂₇ ), 134.9 (d, C ₂₀ ), 134.9 (s, C ₁₆ ), 134.4 (d, C ₂₅ ), 131.3 (d, C ₁₅ ), 128.2 (s, C ₂₃ ), 127.1 (d, C ₂₆ ), 117.6 (t, C ₂₁ ), 114.6 (d, C ₁ ou C ₃ ou C ₅ ), 111.3 (d, C ₁ ou C ₃ ou C ₅ ), 110.8 (d, C ₁ ou C ₃ ou C ₅ ), 88.1 (d, C ₇ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.7 (d, C ₁₂ ), 81.7 (d, C ₁₈ ), 81.0 (d, C ₁₁ ), 60.9 (q, OMe) ₁ 57.5 (q, OMe) ₁ 57.1 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 36.1 (d, C ₈ ), 34.6 (d, C ₁₃ ), 33.1 (t, Ci ₀ ), 25.8 (3q, t-Bu), 25.7 (3q, f-Bu), 18.9 (q, C ₂₈ ), 18.2 (2s, 2f-Bu), 17.1 (q, C ₁₄ ), 13.5 (q, C ₉ ), 13.0 (q, C ₂₄ ), 12.3 (q, C ₁₇ ), -4.4 (2q, SiMe ₂ ). -4.7 (q, SiMe) ₁ -4.8 (q, SiMe).

Etape 6

A une solution du composé obtenu à l'étape 5 (113 mg, 0.143 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (150 ml_) est ajouté du catalyseur de Hoveyda- Grubbs H (18 mg, 0.028 mmol, 0.2 équiv.). Après 4,5 heures de chauffage au reflux du toluène, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le brut réactionnel est purifié par CCM préparative (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/acétate d'éthyle 8/2) pour conduire à la (4E,6E,10E)- (8S.9S, 12S, 13R, 14S, 16S, 17R)-9,20-bis(ferf-butyldiméthylsilyloxy)- 8,13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-2-azabicyclo[16.3.1 ]docosa- 1(22),4,6,10,18,20-hexaén-3-one (56.2 mg, 0.075 mmol, 53%), dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf = 0.19 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 8/2). RMN ¹ H (400 MHz, acétone d ⁶ ) : <5 : 8.64 (s élargi, 1H, NH), 6.68-6.35 (5H, H ₃ , H ₄ , H ₁₉ , H ₂ i et H ₁₇ ), 5.59 (ddd, 1H, J = 14.4, J = 8.2 et J = 1.5 Hz, H ₅ ), 5.23 (d élargi, 1 H, J = 9.4 Hz, H ₉ ), 4.40 (s élargi, 1 H, H ₁₅ ), 3.99 (d élargi, 1 H, J = 8.0, H ₇ ), 3.62 (t apparent, 1 H, J = 8.1 Hz ₁ H ₆ ), 3.41 (s, 3H, OMe), 3.38 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H, OMe), 3.22 (m, 1 H, H ₁₂ ), 3.09 (m, 1H, H ₁₁ ), 2.46 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.89 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.73 (m, 1H, H ₁₄ ), 1.64 (s élargi, 3H, 2-Me), 1.53 (s élargi, 3H, 8-Me), 1.12 (m, 1 H, H ₁₃ ), 1.00 (s, 9H, t- Bu), 0.99 (m, 3H, 10-Me), 0.88 (s, 9H, f-Bu), 0.74 (d élargi, 3H ₁ J = 7.0 Hz, 14-Me), 0.23 (s, 6H, SiMe ₂ ), 0.08 (s, 3H, SiMe), 0.05 (s, 3H, SiMe).

Etape 7 :

A une solution du macrolactame obtenu à l'étape 6 (21.8 mg, 0.028 mmol, 1 équiv.) dans le THF (5 ml_), est ajoutée une solution de fluorure de tétra-n-butylammonium (0.35 ml_, 1 M dans le THF, 0.35 mmol, 13 équiv.). Après 8 heures à température ambiante, du fluorure de tétra-n- butylammonium (0.35 ml_, 13 équiv.) est rajouté et le mélange réactionnel est agité pendant une nuit supplémentaire. Le milieu réactionnel est ensuite dilué avec de l'oxyde diéthyle (10 ml_) et une solution aqueuse saturéede chlorure d'ammonium (4 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, Ie brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 1/1 puis acétate d'éthyle) pour conduire à la (4E,6E,10E)-(8S,9S,12S,13R,14S,16S,17R)-9,20-dihydroxy-8,13, 14,17- tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-2-azabicyclo[16.3.1 ]docosa- 1(22),4,6,10,18,20-hexaén-3-one (7.3 mg, 0.014 mmol, 50%), dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.46 (gel de silice ; éluant ether de pétrole/acétate d'éthyle 1/1).

RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) : δ : 7.48 (s élargi, 1H, NH), 6.77 (s élargi, 1H,

H ₂ O, 6.69 (d, 1 H, J =11.2 Hz, H ₃ ), 6.51 (s élargi, 1H, H ₁₉ ), 6.36 (s élargi, 1H, H ₁₇ ), 6.31 (dd, 1 H, J = 15.2 et J = 11.2 Hz, H ₄ ), 5.53 (dd, 1 H, J = 15.2 et J = 9.3 Hz, H ₅ ), 5.33 (d, 1 H, J = 9.8 Hz, H ₉ ), 4.46 (s, 1 H, H ₁₅ ), 3.90 (d, 1 H, J = 9.1 Hz, H ₇ ), 3.54 (t, 1H, J = 9.2 Hz, H ₆ ), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H, OMe), 3.32 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H ₁ OMe), 3.11 (m, 1 H, H ₁₂ ), 2.99 (dd, 1 H ₁ J = 7.7 et J = 2.8 Hz, H ₁₁ ), 2.51 (m, 1H, H ₁₀ ), 1.91 (ddd syst AB, 1H, ² J = 14.9, J = 8.8 et J = 6.9 Hz, H ₁₃ ), 1.57 (s, 3H, 8-Me), 1.51 (s, 3H, 2-Me), 1.46 (m, 1 H, H ₁₄ ), 1.25 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.02 (d, 3H, J = 6.5 Hz, 10-Me), 0.69 (d, 3H, J = 7.1 Hz, 14-Me).

Etape 8 :

A une solution du macrolactame obtenu à l'étape 7 (7.5 mg, 0.014 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (3 ml_) est ajouté du trichloroacétylisocyanate (10 μl_, 0.084 mmol, 6 équiv.). Après 35 minutes à température ambiante le mélange réactionnel est évaporé sous vide et dissout dans du méthanol (2 mL). Du carbonate de potassium (25 mg) est ensuite ajouté et le mélange réactionnel est agité pendant 2 h à température ambiante. Après évaporation sous vide, le mélange réactionnel est dissout dans de l'éther (10 mL) et la phase organique est lavée avec de l'eau (1 mL) et de la saumure (1 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (5 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative (éluant : éther de pétrole/acétate d'éthyle 1/1) pour conduire au carbamate de (4£,6E,10E)-(8S _I 9S,12S,13R14S,16S _l 17R)- 20-hydroxy-8, 13,14,17-tétraméthoxy-4, 10,12,16-tétraméthyl-3-oxo-2- azabicyclo[16.3.1]docosa-1(22),4,6,10,18,20-hexaén-9-yle (2.3 mg, 0.0041 mmol, 30%), dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.24 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole / acétate d'éthyle 1/1).

RMN ¹ H (400 MHz, CDCI ₃ ) : δ : 7.27 (s él, 1H, NH), 6.73 (s él, 1 H, H ₂ i), 6.51 (d, 1 H, J = 11.2 Hz, H ₃ ), 6.49 (s él, 1 H, H ₁₉ ), 6.38 (s él, 1 H, Hi ₇ ), 6.31 (dd, 1 H, J = 15.1 et J = 11.2 Hz ₁ H ₄ ), 5.69 (s él, 1 H ₁ OH), 5.51 (dd, 1H ₁ J = 15.1 et J =

8.7 Hz, H ₅ ), 5.43 (d, 1H, J = 9.7 Hz, H ₉ ), 5.14 (d, 1H, J = 8.9 Hz, H ₇ ), 4.80- 4.55 (2H, NH ₂ ), 4.33 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H ₁₅ ), 3.70 (t apparent, 1 H, J = 8.8 Hz, H ₆ ), 3.44 (s 3H ₁ OMe), 3.33 (s 3H, OMe), 3.32 (s 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.11 (dt, 1 H, J = 9.2 et J = 2.7 Hz, H ₁₂ ), 3.04 (dd, 1 H ₁ J = 7.8 et J = 2.7 Hz, H ₁₁ ), 2.45 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.92 (ddd syst AB, 1H, ² J = 14.5, J = 9.2 et J = 5.9 Hz, H ₁₃ ), 1.69 (m, 1H, H ₁₄ ), 1.64 (s, 3H, 2-Me), 1.49 (s él, 3H, 8-Me), 1.12 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.00 (d, 3H ₁ J = 6.5 Hz, 10-Me), 0.69 (d, 3H, J = 7.0 Hz, 14-Me).

Exemple 2 : « 15-éjo/ ^' -Herbim veine A » ou carbamate de (4£,6Z,10£)- (8S,9SJ2SJ3R,14SJ6SJ7S)-8J3J4J7-tétraméthoxy-4 _> 10 _> 12 _> 16- tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1]docasa-1(21 )-4,6,10,18- pentaèn-2-yle (composé de type I bSZ) Etape 1 :

A une solution de λ/,λ/-diallyl-3-bromo-2,5-diméthoxyaniline (475 mg, 1 ,52 mmol, 5 équiv.), qui peut être obtenue selon Canova S. et a/, Org. Lett (2007), 9, 145-8, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (8 ml_) refroidie à -78 ⁰ C, est ajouté du n-butyllithium (0,6 ml_, 2,5 M dans l'hexane, 1,5 mmol, 5 équiv.). Après 30 minutes à température ambiante, le milieu réactionnel est de nouveau refroidi à -78 °C et une solution de (7E)-(2S,4S,5R,6S,9S,10S)-9- te/f-butyldiméthylsilyloxy-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-trimét hyldodéca-7,11-diénal (0.30 mmol, 1 équiv.), qui peut être obtenu selon Canova S. et al, Org. Lett (2007), 9, 145-8, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (4 mL) est ajoutée via une canule. Après 1,5 heure à -78 ⁰ C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (1O mL) est ajoutée et la phase aqueuse

résultante est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 30 ml_). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 8/2 à 6/4) pour conduire aux deux épimères en C15 :

le (T^IS^S^S.δRβS.θS.IOS^g-tert-butyldiméthylsilyloxy-i-CS- diallyl- amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5, 10-triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7, 11 - dién-1-ol (66 mg, 0.098 mmol, 33%), sous la forme d'une huile jaune, dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.13 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole / oxyde de diéthyle 6/4). [α] _D ^2σ 3.05 (c 1.05, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3430, 2927, 2855, 1595, 1464, 1361, 1249, 1215, 1194, 1173, 1079, 1005, 919, 836, 776, 670 cm ^"1 . RMN ¹ H (400 MHz) : δ: 6.48 (d, 1H, J= 3.0 Hz, H ₃ ), 6.38 (d, 1H, J= 3.0 Hz, H ₅ ), 5.82-5.70 (2H, H ₂ ), 5.51 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.6 Hz, H ₂₀ ), 5.21-5.05 (7H ₁ H ₁₅ et H ₂₁ et H ₃ ), 4.58 (d, 1 H, J = 8.9 Hz, H ₇ ), 3.88 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H ₁₈ ), 3.81-3.66 (4H, H ₁ ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.49 (s, 3H, OMe), 3.45 (m, 1H, H ₁₉ ), 3.38 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.27 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.14 (dd, 1 H ₁ J = 9.1 et J = 1.5 Hz, H ₁₂ ), 2.41 (m, 1H ₁ H ₁₃ ), 2.08 (ddd syst AB, 1 H, ² J = 15.0, J = 10.5 et J = 4.6 Hz ₁ H ₁₀ ), 1.85 (m, 1 H, H ₈ ), 1.53 (d, 3H, J = 1.3 Hz, H ₁₇ ), 1.31 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.01 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.86 (s, 9H ₁ f-Bu), 0.68 (d, 3H ₁ J = 6.8 Hz, H ₉ ), 0.05 (s, 3H ₁ SiMe) ₁ 0.00 (s, 3H ₁ SiMe). RMN ¹³ C (100 MHz) : <5 : 155.6 (s, C ₄ ), 144.9 (s, C ₁ ou C ₂ ), 144.0 (s, C ₁ ou C ₂ ), 138.0 (s, C ₆ ), 135.1 (2d, C ₂ ), 135.1 (d, C ₂₀ ), 135.0 (s, C ₁₆ ), 131.2 (d, C ₁₅ ), 117.6 (t, C ₂ i), 117.2 (2t, C ₃ ), 106.9 (d, C ₅ ), 104.1 (d, C ₃ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.3 (d, C ₁₂ ), 82.8 (d, C ₁₁ ), 81.7 (d, C ₁₈ ), 74.6 (d, C ₇ ), 60.8 (q, OMe), 59.7 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 53.9 (2t, C ₁ ), 38.5 (d, C ₈ ), 34.8 (d, C ₁₃ ), 33.9 (t, C ₁₀ ), 25.8 (3q, f-Bu), 18.3 (s, f-Bu), 18.2 (q, C ₉ ), 17.2 (d, C ₁₄ ), 12.2 (q, C ₁₇ ), -4.7 (q, SiMe) ₁ -4.8 (q, SiMe).

et le (7£)-(1/? ₎ 2S,4S,5R6S,9S _I 10S)-9-feAf-butyldiméthylsilyloxy-1-(3-diallyl- amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-trimé thyldodéca-7,11- dién-1-ol (109 mg, 0.161 mmol, 54%), dont les caractéristiques sont décrites à l'étape 1 de l'exemple 3.

Etape 2 :

A une solution de (7£)-(1S,2S,4S,5R6S,9S,10S)-9-teAf- butyldiméthylsilyloxy-1-(3-diallyl-amino-2,5-diméthoxyphé nyl)-4,5,10- triméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7,11-dién-1-ol (171 mg, 0,25 mmol, 1 équiv.), obtenu à l'étape 1 dans le dichlorométhane (10 ml_) sont ajoutés de l'acide λ/,λ/-diméthylbarbiturique (155 mg, 0,99 mmol, 4 équiv.) et du palladium tétrakistriphénylphosphine (29 mg, 0,025 mmol, 0,1 équiv.). Après 8 heures de chauffage au reflux du dichlorométhane, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le solide rouge résultant est dissout dans l'acétate d'éthyle (30 ml_) et lavé avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (4 x 10 ml_). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/oxyde de diéthyle 1/1) pour conduire à .la 3-[(7E)- (1 S,2S,4S,5R,6S,9S, 10S)-9-ferf-Butyldiméthylsilyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy- 2,6,8-triméthyldodéca-7,11-diényl]-2,5-diméthoxyaniline (86.7 mg, 0.142 mmol, 57%), sous la forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.33 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [<x] _D ²⁰ - 12.3 (c 1.09, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3450, 3360, 2928, 1615, 1493, 1463, 1351, 1246, 1196, 1080, 1003, 836, 775 cm ^"1 .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.31 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, H ₃ ), 6.22 (d, 1 H, J = 2.9 Hz, H ₅ ), 5.49 (ddd, 1H ₁ J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.5 Hz, H ₂₀ ), 5.20-5.06 (3H ₁ H ₁₅ et H ₂₁ ), 4.12 (d, 1H, J = 8.4 Hz, H ₇ ), 3.86 (d, 1 H, J = 7.2 Hz, H ₁₈ ), 3.72 (s, 3H, OMe) ₁ 3.70 (s, 3H, OMe) ₁ 3.49 (s, 3H, OMe), 3.44 (m, 1 H, H ₁₉ ), 3.31 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H, OMe), 3.19 (s, 3H ₁ OMe), 3.18 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.12 (dd, 1H, J = 8.8 et J = 2.0 Hz, H ₁₂ ), 2.41 (m, 1H ₁ H ₁₃ ), 2.25 (m, 1H, H ₁₀ ), 1.97 (m, 1H, H ₈ ), 1.52 (d, 3H, J = 1.0 Hz, H ₁₇ ), 1.04 (m, 1H, H ₁₀ ), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.86 (s, 9H, t-Bu), 0.64 (d, 3H, J = 6.8 Hz ₁ H ₉ ), 0.05 (s, 3H, SiMe), 0.00 (s, 3H, SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 156.7 (s. C ₄ ), 140.7 (s, C ₁ ou C ₂ ), 140.2 (s, C ₁ ou C ₂ ), 135.1 (s, C ₆ ), 134.9 (d, C ₂₀ ), 134.7 (s, C ₁₆ ), 131.6 (d. C ₁₅ ), 117.6 (t, C ₂₁ ), 101.2 (d, C ₅ ), 101.0 (d, C ₃ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.8 (d. C ₁₂ ), 82.2 (d, C ₇ ), 81.7 (d, C ₁₈ ), 80.6 (d, C ₁₁ ), 60.8 (q, OMe), 59.9 (q, OMe), 57.3 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 35.7 (d, C ₈ ), 34.5 (d, C ₁₃ ), 32.7 (t, C ₁₀ ), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 17.0 (q, C ₁₄ ), 15.8 (d, C ₉ ), 12.2 (q, C ₁₇ ), -4.8 (2q, SiMe ₂ ).

Etape 3 :

A une solution de l'aniline obtenue à l'étape 2 (85 mg, 0,14 mmol, 1 équiv.) dans le THF anhydre (10 ml_), sont ajoutés de la triéthylamine (0,12 mL, 0,84 mmol, 6 équiv.), une quantité catalytique de λ/.λ/-4- diméthylaminopyridine (5 mg) et de l'anhydride de terf-butyloxycarbonyle (91 mg, 0,42 mmol, 3 équiv.). Après 8 heures de chauffage au reflux du THF, le

milieu réactionnel est concentré sous vide puis purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 7/3 à 6/4) pour conduire au λ/-{3-[(7E)-(1S,2S,4S,5R,6S,9S,10S)- 9-tert-butyldiméthylsilyloxy-1 ,4,5,10-tétraméthoxy-2,6,8-triméthyldodéca-7, 11 - diényl]-2,5-diméthoxyphényl}biscarbamate de te/t-butyle (92,1 mg, 0,114 mmol, 82%), sous la forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.54 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α] _D ²⁰ - 27.2 (c 0.92, CHCI ₃ ). IR (film) : v : 2929, 1789, 1753, 1725, 1610, 1481, 1368, 1276, 1250, 1153, 1095, 837, 776 cm ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : <5: 6.85 (d, 1H, J= 3.1 Hz, H ₃ ), 6.55 (d, 1H, J= 3.1 Hz, H ₅ ), 5.48 (ddd, 1H, J= 17.3, J= 10.2 et J = 7.6 Hz, H ₂₀ ), 5.19-5.04 (3H, H ₂ i et H ₁₅ ), 4.11 (d, 1H, J = 8.8 Hz, H ₇ ), 3.86 (d, 1H, J = 7.0 Hz, H ₁₈ ), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.67 (s, 3H, OMe), 3.47 (s, 3H, OMe), 3.43 (m, 1H, Hi ₉ ), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.23 (s, 3H, OMe), 3.18 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.12 (s, 3H, OMe), 3.12 (m, 1H, H ₁₂ ), 2.38 (m, 1H, H ₁₃ ), 2.26 (m, 1H, H ₁₀ ), 1.92 (m, 1H, H ₈ ), 1.52 (d, 3H ₁ J = 1.2 Hz, Hi ₇ ), 1.37 (s, 18H, 2Boc), 1.03 (m, 1H, H ₁₀ ), 0.97 (d, 3H, J = 6.5 Hz, H ₁₄ ), 0.84 (s, 9H, f-Bu), 0.58 (d, 3H, J= 6.8 Hz ₁ H ₉ ), 0.03 (s, 3H, SiMe), -0.02 (s, 3H ₁ SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 155.7 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 148.3 (s, C ₁ ), 136.0 (s, C ₆ ), 134.9 (d, C ₂₀ ), 134.7 (s, C ₁₆ ), 133.2 (s, C ₂ ), 131.5 (d, C ₁₅ ), 1 17.5 (t, C ₂₁ ), 114.1 (d, C ₅ ), 111.3 (d, C ₃ ), 86.4 (d, C ₁₉ ), 84.6 (d, C ₁₂ ), 82.4 (2s, 2Boc),

82.0 (d, C ₇ ), 81.6 (d, Ci ₈ ), 80.6 (d, Cn), 60.8 (2q, OMe), 57.0 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 36.0 (d, C ₈ ), 34.6 (d, Ci ₃ ), 32.7 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 17.1 (q, C ₁₄ ), 16.0 (q, C ₉ ), 12.3 (q, C ₁₇ ), -4.8 (2q, SiMe ₂ ).

Etape 4 :

A une solution de l'alcool protégé obtenu à l'étape 3 (92 mg, 0,114 mmol, 1 équiv.) dans le THF (5 ml_) est ajouté du fluorure de tétrabutylammonium (0,6 ml_, 1 M dans le THF, 0,6 mmol, 5 équiv.). Après 24 h d'agitation à température ambiante, uen solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (5 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 15 ml_). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire à l'alcool déprotégé correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.

A une solution de cet alcool déprotégé (0,114 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (6 mL) refroidie à -78 ⁰ C, sont ajoutés de la diisopropyléthylamine (60 μL, 0,68 mmol, 6 équiv.) et du chlorure d'acryloyle (28 μL, 0,34 mmol, 3 équiv.). Après 16 heures d'agitation à -78 ⁰ C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (5 mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 15 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 8/2) pour conduire à l'acrylate de (5E)-(3S,4S,7S,8R,9S, 11 S, 12S)-12-[3-bis(ferf-

butoxycarbonyOamino^.δ-diméthoxyphénylJ-S.δ.θ.^-tétram éthoxy-δ.Z.H- triméthyldodéca-1 ,5-dién-4-yle (45,5 mg, 0,061 mmol, 53%) sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.44 (gel de silice ; éluant :ether de pétrole/acétate d'éthyle 7/3). [α] _D ²⁰ - 27.8 (c 1.14, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 2926, 1787, 1752, 1726, 1610, 1481 , 1368, 1274, 1252, 1187, 1152, 1095, 1049, 855, 808, 778, 731 cm ^"1 .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.86 (d, 1H ₁ J = 3.1 Hz, H ₃ ), 6.56 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H ₅ ), 6.48 (dd, 1 H ₁ J = 17.3 et ² J = 1.4 Hz ₁ H ₂₄ ), 6.13 (dd, 1H ₁ J = 17.3 et J = 10.4 Hz ₁ H ₂₃ ), 5.79 (dd, 1H , J = 10.4 et ² J = 1.4 Hz, H ₂₄ ), 5.58 (ddd, 1H ₁ J = 17.5, J = 10.3 et J = 7.5 Hz, H ₂₀ ), 5.33 (d, 1 H, J = 6.8 Hz, H ₁₅ ), 5.30-5.18 (2H, H _2i ), 5.15 (d, 1H ₁ J = 6.8 Hz ₁ H ₁₈ ), 4.12 (d, 1H ₁ J = 8.6 Hz ₁ H ₇ ), 3.75 (s, 3H, OMe) ₁ 3.71 (m, 1H ₁ Hi ₉ ), 3.68 (s, 3H ₁ OMe) ₁ 3.46 (s, 3H ₁ OMe) ₁ 3.26 (s, 6H ₁ 2OMe), 3.16-3.07 (2H ₁ H ₁₁ et H ₁₂ ), 3.13 (s, 3H ₁ OMe) ₁ 2.42 (m, 1 H ₁ H ₁₃ ), 2.23 (m, 1H ₁ H ₁₀ ), 1.92 (m, 1H ₁ H ₈ ), 1.62 (d, 3H ₁ J = 0.7 Hz ₁ H ₁₇ ), 1.38 (s, 18H ₁ 2Boc), 1.02 (m, 1H ₁ H ₁₀ ), 1.00 (d, 3H ₁ J = 6.5 Hz ₁ Hu) ₁ 0.60 (d, 3H ₁ J = 6.8 Hz ₁ H ₉ ).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 165.1 (s, C ₂₂ ), 155.7 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 148.3 (s, C ₁ ), 135.9 (s, C ₆ ), 134.0 (d, C ₂₀ ), 133.2 (d, C ₁₅ ), 133.2 (s, C ₂ ), 130.7 (t, C ₂₄ ), 130.3 (s, C ₁₆ ), 128.6 (d, C ₂₃ ), 119.2 (t, C ₂₁ ), 114.1 (d, C ₅ ), 111.3 (d, C ₃ ). 84.7 (d, C ₁₂ ), 83.3 (d, Ci ₉ ), 82.5 (2s, 2Boc), 82.0 (d, C ₇ ), 80.6 (d, C ₁₁ ), 79.9 (d, C ₁₈ ), 60.8 (2q, OMe), 57.0 (q, OMe) ₁ 56.8 (2q, OMe), 55.7 (q, OMe), 36.0 (d, C ₈ ), 34.7 (d, C ₁₃ ), 32.7 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 17.0 (q, C ₁₄ ), 15.9 (q, C ₉ ), 14.0 (q, C ₁₇ ).

Etape 5

A une solution de l'ester acrylique obtenu à l'étape 4 (45 mg, 0,06 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre dégazé (12 ml_) est ajouté du catalyseur de Grubbs de seconde génération G2 (8 mg, 15 mol%). Après 2 heures de chauffage au reflux du toluène, du catalyseur G2 est rajouté (6 mg, 10 mol%) et le mélange réactionnel est chauffé pendant 4 heures supplémentaires. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 1/1) pour conduire au λ/-(2,5-diméthoxy-3-{(7E)-(1S,2S _l 4S,5R,6S)-1 ,4,5- triméthoxy-8-[(2S,3S)-3-méthoxy-6-oxo-3,6-dihydro-2H-pyran -2-yl]-2,6- diméthylnon-7-ényl}phényl)biscarbamate de fe/f-butyle 119 (24,3 mg, 0,034 mmol, 56%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.30 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/acétate d'éthyle 1/1).

IR (film) : v : 2924, 2853, 1782, 1725, 1610, 1457, 1368, 1276, 1250, 1152, 1096, 853, 824, 778, 731 cm ^"1 .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 6.97 (dd, 1 H, J = 9.8 et J = 5.3 Hz, H ₂₀ ), 6.86 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H ₃ ), 6.57 (d, 1H, J = 3.1 Hz, H ₅ ), 6.20 (d, 1H, J = 9.8 Hz, H ₂ i), 5.52 (d, 1H, J = 10.2 Hz, H ₁₅ ), 4.68 (d, 1 H, J = 2.6 Hz, H ₁₈ ), 4.15 (d, 1H, J = 8.5 Hz ₁ H ₇ ), 3.91 (dd, 1 H, J = 5.3 et J = 3.2 Hz ₁ H ₁₉ ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.69 (s, 3H ₁ OMe), 3.51 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H, OMe), ), 3.31 (s, 3H, OMe), 3.36 (m, 1 H, Hn), 3.20 (dd, 1H ₁ J = 8.6 et J = 2.2 Hz, H ₁₂ ), 3.15 (s, 3H, OMe), 2.58 (m, 1 H ₁ H ₁₃ ), 2.24 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.96 (m, 1H, H ₈ ), 1.75 (s, 3H H ₁₇ ), 1.39 (s, 18H ₁ 2Boc), 1.08 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.07 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.63 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H ₉ ). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 163.1 (s, C ₂₂ ), 155.7 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 148.3 (s, C ₁ ), 142.1 (d, C ₂₀ ), 135.9 (s, C ₆ ), 133.2 (s, C ₂ ), 131.5 (d, C ₁₅ ), 128.7 (s. C ₁₆ ), 124.2 (d, C ₂₁ ), 114.1 (d, C ₅ ), 111.4 (d, C ₃ ), 84.9 (d, C ₁₂ ), 83.2 (d, C ₁₈ ), 82.5 (2s, 2Boc), 82.0 (d, C ₇ ), 80.6 (d, C ₁₁ ), 70.0 (d, C ₁₉ ), 60.8 (2q, 2OMe), 57.3 (q, OMe) ₁ 56.9 (q, OMe), 56.8(q, OMe), 55.7 (q, OMe) ₁ 36.0 (d, C ₈ ), 34.8 (d, C ₁₃ ), 32.9 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 17.1 (q, C ₁₄ ), 15.8 (q, C ₁₇ ). 13.9 (q, C ₉ ).

Etape 6 :

A une solution de la lactone obtenue à l'étape 5 (24 mg, 0,033 mmol, 1 équiv.) dans l'oxyde ded iéthyle anhydre (2 ml_) refroidie à -78 ⁰ C est ajouté une solution d'hydrure de di/sobutylaluminium (0,1 mL, 1 M dans l'hexane, 0,1 mmol, 3 équiv.). Après 2 heures à -78 ⁰ C, le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse saturée de tartrate mixte de sodium et de potassium (2 mL). Après 2 heures d'agitation vigoureuse, la phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 10 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, et concentrées sous vide pour conduire au lactol correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.

A une solution de ce lactol (0,033 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (6 mL) est ajouté du (carbéthoxyéthylidène)-triphénylphosphorane (36 mg, 0,1 mmol, 3 équiv.). Après 3,5 heures de chauffage au reflux du toluène, le mélange réactionnel est concentré sous vide et purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'acétate d'éthyle de 6/4 à 1/1) pour conduire au (2E,4Z,8E)- (6S.7S, 10S, 11 R, 12S, 14S, 15S)-15-[3-bis(terf-butoxycarbonyl)amino-2,5- diméthoxyphényl]-7-hydroxy-6, 11 ,12,15-tétraméthoxy-2,8, 10, 14-tétraméthyl- pentadéca-2,4,8-triénoate d'éthyle (22 mg, 0,027 mmol, 83%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.54 (EP/AE : 1/1). [α] _D ²⁰ + 5.36 (c 1.10, CHCI ₃ ). IR (film) : v : 3500, 2930, 1784, 1751, 1708, 1609, 1458, 1367, 1247, 1152, 1094, 854, 747 cm- ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 7.46 (m, 1H, H ₂₂ ), 6.84 (d, 1H, J = 3.1 Hz, H ₃ ), 6.57 (d, 1H, J = 3.1 Hz, H ₅ ), 6.53 (t apparent, 1 H, J = 11.5 Hz, H ₂₁ ), 5.52 (t apparent, 1 H, J = 10.4 Hz, H ₂₀ ), 5.38 (d, 1 H, J = 9.9 Hz, H ₁₅ ), 4.27-4.06 (4H, H ₇ et OEt et H ₁₉ ), 3.89 (d, 1H, J = 7.6 Hz, H ₁₈ ), 3.76 (s, 3H, OMe) ₁ 3.68 (s, 3H ₁ OMe), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 6H ₁ 2OMe), 3.20 (m, 1 H ₁ H ₁₁ ), 3.14 (s, 3H ₁ OMe) ₁ 3.06 (dd, 1H, J = 7.3 et J = 2.9 Hz, H ₁₂ ), 2.83 (s élargi, 1H, OH), 2.48 (m, 1 H ₁ H ₁₃ ), 2.16 (m, 1H ₁ H ₁₀ ), 1.93 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H ₂₄ ), 1.93 (m, 1H, H ₈ ), 1.59 (d, 3H ₁ J = 0.6 Hz ₁ H ₁₇ ), 1.39 (18H, 2Boc), 1.29 (t, 3H, J = 7.1 Hz, OEt), 1.10 (m, 1 H, H ₁₀ ), 0.98 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H ₁₄ ), 0.63 (d, 3H, J = 6.8 Hz ₁ H ₉ ).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 168.0 (s, C ₂₅ ), 155.7 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 148.2 (s, C ₁ ), 135.8 (s, C ₆ ), 133.8 (d, C ₂₀ ), 133.4 (d, C ₁₅ ), 133.2 (s, C ₂ ), 132.2 (s, C ₁₆ ), 131.4 (d, C ₂₂ ). 130.2 (s. C ₂₃ ), 128.6 (d, C ₂₁ ), 114.0 (d, C ₅ ), 111.5 (d, C ₃ ), 85.3 (d, C ₁₁ ), 82.5 (2s. 2Boc), 82.0 (d, C ₇ ou C ₁₉ ), 80.2 (d, C ₁₂ ), 79.6 (d, C ₁₈ ), 79.2 (d, C ₇ ou C ₁₉ ), 60.8 (q, OMe), 60.8 (t, OEt), 60.6 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 56.8 (q, OMe) ₁ 56.6 (q, OMe) ₁ 55.7 (q, OMe), 36.0 (d, C ₈ ), 34.4 (d, C ₁₃ ), 33.1 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 16.4 (q, C ₁₄ ), 16.0 (q, C ₉ ), 14.3 (q, OEt), 13.1 (q, C ₁₇ ), 12.5 (q, C ₂₄ ).

Etape 7 :

L'étape 7 correspond au schéma ci-dessous dans lesquelles les réactions successives sont enchaînées sans purification particulières des divers intermédiaires.

produit de l'étape 6

15-épi-Herbimycine A

A une solution du biscarbamate obtenu à l'étape 6 (21 mg, 0,026 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (2 ml_) refroidie à 0 ⁰ C est ajouté de l'acide trifluoroacétique (150 μl_, 2,08 mmol, 80 équiv.). Après 10 minutes à 0 ⁰ C puis 1 heure à température ambiante, du toluène (2 ml_) est ajouté et le mélange réactionnel est concentré sous vide puis dissout dans de l'acétate d'éthyle (20 ml_). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée de carbonate de potassium (4 m L) et avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (4 mL). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée sous vide pour conduire à l'aniline déprotégée qui est utilisée sans purification supplémentaire.

A une solution de cette aniline déprotégée (0,026 mmol, 1 équiv.) dans un mélange de méthanol de THF et d'eau (2/2/1 , 5 mL) est ajoutée de l'hydroxyde de lithium (12,5 mg, 0,52 mmol, 20 équiv.). Après 60 heures à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide et une solution aqueuse à 10% de dihydrogénophosphate de sodium (3 mL) est ajoutée. La phase aqueuse résultante est saturée en chlorure de sodium et extraite avec du dichlorométhane (3 x 10 mL). Les phases organiques sont

rassemblées, séchées sur MgSO ₄ et concentrées sous vide pour conduire à l'aminoacide correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.

A une solution de cet aminoacide (0,026 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (33 mL) sont ajoutés de la di/sopropyléthylamine (136 μl_, 0.78 mmol, 30 équiv.) et du chlorure de bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphinyle (BOPCI, 20 mg, 0.078 mmol, 3 équiv.). Après 3 jours à 85 ⁰ C et un ajout supplémentaire de BOPCI (5 mg), le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse tamponnée de dihydrogénophosphate de sodium (pH = 4.5, 40 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative sur gel de silice (éluant : dichlorométhane/méthanol 9/1) pour conduire au macrolactame correspondnat (6 mg, 0,01 mmol, 41%), contaminé par une impureté non identifiée, mais utilisé sans purification supplémentaire.

A une solution de ce macrolactame (6 mg, 0,01 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (2 mL) est ajouté de l'isocyanate de trichloroacétyle (8 μL, 0,067 mmol, 6 équiv.). Après 1 heure à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis du méthanol (1 mL) et du carboante de potassium (11 mg) sont ajoutés. Après 1,5 heure à température ambiante, le méthanol est évaporé sous vide et le mélange réactionnel est dissout dans l'oxyde de diéthyle (10 mL). La phase organique obtenue est lavée avec de l'eau (1 mL) et une solution saturée de chlorure de sodium (1 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 5 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire au carbamate attendu qui est utilisé sans purification supplémentaire.

Ce carbamate (0,01 mmol, 1 équiv.) est dissout dans un mélange d'acétonitrile et d'eau (10/1 , 2,2 mL) et une solution aqueuse 1 M de nitrate de cérium et d'ammonium (CAN, 20 μL, 20 équiv.) est ajoutée à -10 ⁰ C. Après 0,5 heure à -10 ⁰ C ₁ de l'eau (2 mL) est ajoutée et la phase aqueuse

est extraite avec du dichlorométhane (5 x 5mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative sur gel de silice (éluant : dichlorométhane/méthanol 9/1) puis sur une petite colonne de silice (éluant : acétate d'éthylel) pour conduire au carbamate de (4E.6Z.10E)- (8S.9S, 12S.13R.14S,16S,17S)-8, 13, 14,17-tétraméthoxy-4,10,12,16- tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1]docosa-1(21 ),4,6,10 ₎ 18- pentaén-9-yl15, ou 15-ép/-herbimycine A, (1 mg, 0,0017 mmol, 17%), sous la forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.66 (AE).

[α] _D ²⁰ + 18.0 (c 0.05, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3428, 3300, 3170, 2923, 2823, 1734, 1698, 1645, 1608, 1503,

1379, 1318, 1269, 1194, 1094, 1051 , 908 cnrï ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 8.47 (s élargi, 1 H ₁ NH), 7.48 (d, 1 H ₁ J = 2.5 Hz, H ₁₉ ), 6.72 (s élargi, 1H, H ₁₇ ), 6.55 (t apparent, 1 H, J = 11.3 Hz, H ₄ ), 5.87 (m, 1H, H ₃ ), 5.70-5.45 (2H, H ₅ et H ₉ ), 5.04 (m, 1H, H ₇ ), 4.65 (m, 2H, NH ₂ ), 4.30-4.11 (2H, H15 et H ₆ ), 3.58-3.25 (12H, 4OMe), 3.20-3.08 (2H, Hn et H ₁₂ ), 2.35 (m, 1H, H ₁₀ ), 2.02 (s, 3H, 2-Me), 1.76 (s él, 3H ₁ 8-Me), 1.65 (m, 1 H, H ₁₃ ou H ₁₄ ), 1.60 (m, 1 H ₁ H ₁₃ ou H ₁₄ ), 1.31 (m, 1 H, H ₁₃ ), 1.13-0.78 (6H, 10-Me et 14-Me).

Exemple 3 : Carbamate de (4E,6Z,10E)-(8S,9S,12S,13K,14S,16S,17R)-9- carbamoyloxy-8,13,14-triméthoxy-4,10,12,16-tétraméthyl-3, 20,22-trioxo- 2-azabicyclo[16.3.1]docasa-1(21)-4,6,10,18-pentaèn-17-yle ou « 15- déméthoxy-15-carbamoyloxy-Herbimycine A » (composé de type I bRZ) Etape 1 :

A une solution de λ/,λ/-diallyl-3-bromo-2,5-diméthoxyaniline (475 mg, 1 ,52 mmol, 5 équiv.), qui peut être obtenue selon Canova S. et al, Org. Lett (2007), 9, 145-8, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (8 ml_) refroidie à -78 ⁰ C, est ajouté du n-butyllithium (0,6 ml_, 2,5 M dans l'hexane, 1,5 mmol, 5 équiv.). Après 30 minutes à température ambiante, le milieu réactionnel est de nouveau refroidi à -78 ⁰ C et une solution de (7£)-(2S,4S,5R,6S,9S,10S)-9- te/f-Butyldiméthylsilyloxy-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-trimét hyldodéca-7,11-diénal (0.30 mmol, 1 équiv.), qui peut être obtenu selon Canova S. et al, Org. Lett (2007), 9, 145-8, dans de l'oxyde de diéthyle anhydre (4 ml_) est ajoutée via une canule. Après 1,5 heure à -78 ⁰ C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (10 ml_) est ajoutée et la phase aqueuse résultante est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 30 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 8/2 à 6/4) pour conduire aux deux épimères en C15 :

le (7£)-(1 R2S,4S,5R,6S,9S, 10S)-9-ferf-butyldiméthylsilyloxy-1 -(3-diallyl- amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5,10-triméthoxy-2,6,8-trimé thyldodéca-7,11- dién-1-ol (109 mg, 0.161 mmol, 54%), sous forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.20 (gel de silice ; éluant : éther de pétrole/oxyde de diéthyle 6/4). [α] _D ²⁰ + 22.5 (c 4.19, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3450, 2928, 2856, 1594, 1470, 1361 , 1249, 1215, 1194, 1172, 1078, 1005, 919, 836, 775, 670 cm ^'1 . RMN ¹ H (400 MHz) : <5 : 6.58 (d, 1 H, J = 3.0 Hz, H ₃ ), 6.36 (d, 1 H, J = 3.0 Hz ₁ H ₅ ), 5.76 (2H, H ₂ ), 5.52 (ddd, 1 H ₁ J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.5 Hz, H ₂₀ ), 5.23- 5.05 (7H, H ₁₅ et H ₂₁ et H ₃ ), 4.87 (d, 1 H, J = 4.7 Hz, H ₇ ), 3.87 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H ₁₈ ), 3.80-3.66 (4H, H ₁ ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.74 (s, 3H, OMe), 3.46 (m, 1H, H ₁₉ ), 3.44 (s, 3H, OMe), 3.35 (s, 3H ₁ OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.27 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.09 (dd, 1 H, J = 9.0 et J = 1.5 Hz, H ₁₂ ), 3.06 (s élargi, 1H, OH),

2.39 (m, 1 H ₁ H ₁₃ ), 2.01 (m, 1H ₁ H ₈ ), 1.71 (ddd syst AB, 1 H, ² J = 14.9, J = 10.3 et J = 6.4 Hz, H ₁₀ ), 1.53 (d, 3H ₁ J = 0.9 Hz, H ₁₇ ), 1.27 (m, 1 H ₁ H ₁₀ ), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz ₁ H ₁₄ ), 0.86 (s, 9H ₁ t-Bu), 0.78 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H ₉ ), 0.05 (s, 3H ₁ SiMe) ₁ 0.00 (s, 3H, SiMe). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 155.3 (s, C ₄ ), 143.9 (s, C ₁ ou C ₂ ), 143.7 (s, C ₁ ou C ₂ ), 137.2 (s, C ₆ ), 135.0 (2d, C ₂ ), 135.0 (d, C ₂₀ ), 135.0 (s, C ₁₆ ), 131.2 (d, C ₁₅ ), 117.7 (t, C ₂₁ ), 117.2 (2t, C ₃ ), 106.8 (d, C ₅ ), 104.4 (d, C ₃ ), 86.4 (d, C ₁₉ ), 84.6 (d, C ₁₂ ), 82.5 (d, C ₁₁ ), 81.8 (d, C ₁₈ ). 72.5 (d, C ₇ ), 60.7 (q, OMe), 59.1 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.7 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 53.8 (2t, C ₁ ), 36.5 (d, C ₈ ), 34.7 (d. C ₁₃ ), 32.9 (t, C ₁₀ ), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 17.2 (q, C ₁₄ ), 15.1 (q, C ₉ ), 12.1 (q, C ₁₇ ), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).

et le (7£)-(18,25,48,5^,68,9S ₁ 10S)-9-ferf-butyldiméthylsilyloxy-1 -(3-diallyl- amino^.S-diméthoxyphénylH.δ.iO-triméthoxy^.δ.δ-trimét hyldodéca^.i i- dién-1-ol (66 mg, 0.098 mmol, 33%), dont les caractéristiques sont décrites à l'étape 1 de l'exemple 2.

Etape 2 :

A une solution de (7£)-(1R _l 2S,4S,5R _l 6S,9S,10S)-9-fert-butyl- diméthylsilyloxy-1 -(3-diallyl-amino-2,5-diméthoxyphényl)-4,5, 10-triméthoxy-

2,6,8-triméthyldodéca-7,11-dién-1-ol (133 mg, 0,197 mmol, 1 équiv.) dans le cyclohexane (1O mL) et le dichlorométhane (7 ml_) sont ajoutés du trichloroacétimidate de para-méthoxybenzyle (111 mg, 0,393 mmol, 2 équiv.) en solution dans le dichlorométhane (3 ml_) et de l'acide camphresulfonique (5 mg, 0,02 mmol, 0.1 équiv.). Après 24 heures d'agitation à température

ambiante, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (10 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 25 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 8/2 à 6/4) pour conduire à la λ/,λ/-diallyl-3- [(y^-CIR^S^S.δR.δS.gS.IOSJ-g-fe/t-butyl-diméthylsilyloxy^ .δ.iO- triméthoxy-1 -para-méthoxybenzyloxy-2,6,8-triméthyl-dodéca-7, 11 -diényl]-2,5- diméthoxyaniline (47.4 mg, 0.060 mmol, 30%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.26 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 8/2). [α] _D ²⁰ + 22.8 (c 0.98, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 2927, 2855, 1589, 1513, 1464, 1247, 1172, 1061 , 1058, 920, 836, 776, 670 cm- ¹ . RMN ¹ H (400 MHz) : 5 : 7.26 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H ₆ ), 6.85 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H ₇ ), 6.59 (d, m, J = 2.9 Hz, H ₃ ), 6.40 (d, 1 H ₁ J = 3.0 Hz, H ₅ ), 5.86-5.73 (2H, H ₂ ), 5.51 (ddd, 1H, J = 17.2, J = 10.4 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.23-5.06 (7H, H ₁₅ et H ₂₁ et H ₃ ), 4.61 (d, 1 H, J = 5.3 Hz, H ₇ ), 4.40 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.1 Hz, H ₄ ), 4.23 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.1 Hz, H ₄ ), 3.86 (d, 1 H, J = 7.2 Hz, H ₁₈ ), 3.84-3.68 (4H, H ₁ ), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 6H, 2OMe), 3.45 (m, 1H, H ₁₉ ), 3.40 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.19 (d élargi, 1 H, J = 8.2 Hz, H ₁₁ ), 3.03 (dd, 1H, J = 8.2 et J = 2.5 Hz, H ₁₂ ), 2.42 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.98 (m, 1 H, H ₈ ), 1.65 (ddd syst AB, 1 H, ² J = 14.3, J = 10.5 et J = 3.5 Hz, H ₁₀ ), 1.53 (s, 3H, H ₁₇ ), 1.34 (m, 1H, H ₁₀ ), 0.98 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.91- 0.85 (12H, f-Bu et H ₉ ), 0.06 (s, 3H, SiMe), 0.01 (s, 3H, SiMe).

RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 158.9 (s, C ₈ ), 155.4 (s, C ₄ ), 145.2 (s, C ₁ ), 143.9 (s, C ₂ ), 135.7 (s, C ₆ ), 135.2 (2d, C ₂ ), 135.0 (d, C ₂₀ ), 134.5 (s, C ₁₆ ), 131.6 (d, C ₁₅ ), 131.3 (s, C ₅ ), 129.2 (2d, C ₆ ), 117.5 (t, C ₂₁ ), 117.2 (2t, C ₃ ), 113.6 (2d, C ₇ ), 106.8 (d, C ₅ ), 104.6 (d, C ₃ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 85.0 (d, C ₁₂ ), 81.9 (d, C ₁₈ ), 81.0 (d, C ₁₁ ), 80.2 (d, C ₇ ), 70.7 (t, C ₄ ), 60.6 (q, OMe), 59.1 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 55.3 (q, OMe), 53.8 (2t, C ₁ ), 35.8 (d, C ₈ ), 34.5

(d, C ₁₃ ), 32.9 (t, C10), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 16.8 (q, C ₁₄ ), 14.6 (d, C ₉ ), 12.1 (q, Ci ₇ ), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).

Etape 3 :

A une solution de la λ/,λ/-diallylamine obtenue à l'étape 2 (160 mg,

0,201 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (10 ml_) sont ajoutés de l'acide λ/,λ/-diméthylbarbiturique (126 mg, 1 ,1 mnnol, 4 équiv) et du palladium tétrakistriphénylphosphine (46 mg, 0,04 mmol, 0,2 équiv.). Après 10 heures de chauffage au reflux du dichlorométhane, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le solide rouge résultant est dissout dans de l'acétate d'éthyle (70 ml_) et lavé avec une solution aqueuse saturée de carbonate de sodium (6 x 10 ml_). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'oxyde de diéthyle de 1/1 à 3/7) pour conduire à la 3-[(7E)- (1 R,2S,4S,5R6S,9S, 10S)-9-ferf-Butyldiméthylsilyloxy-4,5, 10-triméthoxy-1 - para-méthoxybenzyloxy-2 ,6 , 8-triméthyldodéca-7 , 11 -diényl]-2 , 5-d iméthoxyan i- line (103 mg, 0,144 mmol, 72%), sous la forme d'une huile jaune dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.20 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α] _D ²⁰ + 22.7 (c 1.03, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3450, 3350, 2928, 1612, 1513, 1492, 1463, 1350, 1245, 1170, 1098, 1077, 1043, 1003, 835, 776, 733 cnrf ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : <5 : 7.26 (d, 2H ₁ J = 8.6 Hz, H ₃ ), 6.85 (d, 2H ₁ J = 8.6 Hz, H ₄ ), 6.40 (s élargi, 1H ₁ H ₃ ), 6.24 (s élargi, 1H, H ₅ ), 5.51 (ddd, 1H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.21-5.08 (3H, Hi ₅ et H ₂ i), 4.57 (d, 1H, J = 4.8 Hz, H ₇ ), 4.43 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.2 Hz, H ₁ ), 4.24 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.2 Hz, Hv), 3.87 (d, 1H, J = 7.2 Hz, H ₁₈ ), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.72 (s, 3H, OMe), 3.68 (s, 3H, OMe), 3.46 (m, 1H, H ₁₉ ), 3.43 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 3H, OMe), 3.16 (d élargi, 1 H, J = 10.4 Hz, H ₁₁ ), 3.07 (dd, 1 H, J = 8.4 et J = 2.4 Hz, H ₁₂ ), 2.43 (m, 1H, H ₁₃ ), 2.04 (m, 1H, H ₈ ), 1.70 (ddd syst AB, 1 H, ² J = 14.3, J = 10.4 et J = 3.4 Hz, H ₁₀ ), 1.54 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H ₁₇ ), 1.37 (ddd syst AB, 1H, ² J = 14.3, J = 10.6 et J = 3.4 Hz, H ₁₀ ), 0.99 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.91-0.84 (12H, f-Bu et H ₉ ), 0.07 (s, 3H, SiMe) ₁ 0.02 (s, 3H, SiMe). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 158.9 (s, C ₅ ), 156.3 (s, C ₄ ), 140.4 (s, C ₁ ou C ₂ ), 140.0 (s, C ₂ ou C ₁ ), 135.4 (s, C ₆ ), 135.0 (d, C ₂₀ ), 134.6 (s, C ₁₆ ), 131.5 (d, C ₁₅ ), 131.2 (s, C ₂ ), 129.1 (2d, C ₃ ), 117.5 (t, C ₂₁ ), 113.6 (2d, C ₄ ), 101.8 (d, C ₅ ), 101.0 (d, C ₃ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.9 (d, C ₁₂ ), 81.9 (d, C ₁₈ ), 81.0 (d, Cn), 79.9 (d, C ₇ ), 70.6 (t, Cv), 60.6 (q, OMe), 59.9 (q, OMe), 57.1 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 55.4 (q, OMe), 55.3 (q, OMe), 35.6 (d, C ₈ ), 34.5 (d, C ₁₃ ), 33.3 (t, C ₁₀ ), 25.8 (3q, f-Bu), 18.2 (s, f-Bu), 16.9 (q, C ₁₄ ), 14.2 (d, C ₉ ), 12.1 (q, C ₁₇ ), -4.7 (q, SiMe), -4.8 (q, SiMe).

Etape 4 :

A une solution de l'aniline obtenue à l'étape 3 (103 mg, 0,144 mmol, 1 équiv.) dans le THF anhydre (8 mL), sont ajoutés de la triéthylamine (0,12 mL, 0,86 mmol, 6 équiv.), une quantité catalytique de λ/.λ/-4- diméthylaminopyridine (5 mg) et de l'anhydride de ferf-butyloxycarbonyle (94

mg, 0,43 mnnol, 3 équiv.). Après 10 heures de chauffage au reflux du THF, le milieu réactionnel est concentré sous vide puis purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/oxyde de diéthyle 6/4) pour conduire au λ/-{3-[(7£)-(1f?,2S _I 4S,5R,6S,9S,10S)-9-feAf-butyl- diméthylsilyloxy^.δ.iO-triméthoxy-i-para-nnéthoxybenzylo xy^.δ.δ-triméthyl- dodéca-7,11-diényl]-2,5-diméthoxyphényl}biscarbamate de ferf-butyle (131 mg, 0,144 mmol, 100%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.32 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/oxyde de diéthyle 1/1). [α] _D ²⁰ + 18.5 (c 1.51 , CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 2930, 1788, 1738, 1612, 1514, 1464, 1368, 1278, 1248, 1145, 1098, 1005, 838, 776, 732 cm ^'1 .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ: 7.23 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H ₃ ), 6.94 (d, 1H, J = 3.0 Hz, H ₃ ), 6.84 (d, 2H, J = 8.6 HZ, H ₄ ), 6.58 (d, 1H, J = 3.0 Hz, H ₅ ), 5.49 (ddd, 1H, J = 17.3, J = 10.3 et J = 7.4 Hz, H ₂₀ ), 5.21-5.00 (3H, H ₂ i et H ₁₅ ), 4.60 (d, 1H, J = 4.2 Hz, H ₇ ), 4.39 (d syst AB, 1H ₁ ² J = 11.2 Hz, H ₁ •), 4.23 (d syst AB, 1H ₁ ² J = 11.2 Hz, H ₁ ), 3.86 (d, 1 H ₁ J = 7.2 Hz ₁ H ₁₈ ), 3.78 (s, 3H, OMe), 3.75 (s, 3H ₁ OMe) ₁ 3.66 (s, 3H ₁ OMe), 3.45 (m, 1 H, H ₁₉ ), 3.42 (s, 3H, OMe), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.26 (s, 3H, OMe), 3.16 (m, 1H ₁ H ₁₁ ), 3.06 (dd, 1H, J = 8.4 et J = 2.3 Hz, H ₁₂ ), 2.41 (m, 1H, H ₁₃ ), 2.03 (m, 1H, H ₈ ), 1.70 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.54 (d, 3H, J = 0.8 Hz, H ₁₇ ), 1.41 (s, 19H, 2Boc et H ₁₀ ), 0.98 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.87 (s, 9H ₁ NBu) ₁ 0.77 (d, 3H ₁ J = 6.8 Hz ₁ H ₉ ), 0.05 (s, 3H ₁ SiMe), 0.00 (s, 3H, SiMe). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 159.0 (s, C ₅ ), 155.2 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 147.54 (s, C ₁ ), 135.8 (s, C ₆ ), 134.9 (d, C ₂₀ ), 134.6 (s, C ₁₆ ), 133.4 (s, C ₂ ), 131.5 (d, C ₁₅ ), 130.9 (s, C ₂ ), 129.2 (2d, C ₃ ), 117.4 (t, C ₂₁ ), 113.6 (2d, C ₄ ), 113.4 (d, C ₅ ), 112.1 (d, C ₃ ), 86.3 (d, C ₁₉ ), 84.8 (d, C ₁₂ ), 82.4 (2s, 2Boc), 81.7 (d, C ₁₈ ), 81.0 (d, C ₁₁ ), 79.8 (d, C ₇ ), 70.7 (t, C ₁ ), 60.8 (q, OMe) ₁ 60.7 (q, OMe), 57.0 (q, OMe), 56.8 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 55.2 (q, OMe), 35.0 (d, C ₈ ), 34.5 (d, C ₁₃ ), 33.6 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 25.8 (3q, NBu), 18.2 (s, f-Bu), 16.9 (q, C ₁₄ ), 13.5 (q, C ₉ ), 12.2 (q, C ₁₇ ), -4.8 (2q, SiMe ₂ ).

Etape 5 :

A une solution de l'alcool protégé obtenu à l'étape 4 (131 mg, 0,144 mmol, 1 équiv.) dans le THF (5 ml_) est ajouté du fluorure de tétrabutylammonium (0,72 ml_, 1 M dans le THF, 0,72 mmol, 5 équiv.). Après 24 heures d'agitation à température ambiante, une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (5 ml_) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (2 x 15 ml_). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire à l'alcool déprotégé correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.

A une solution de cet alcool (0,144 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (5 mL) refroidie à -78 ⁰ C, sont ajoutés de la di/sopropyléthylamine (200 μL, 1 ,15 mmol, 8 équiv.) et du chlorure d'acryloyle (47 μL, 0,58 mmol, 4 équiv.). Après 6 heures d'agitation à -78 ⁰ C, une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (5 mL) est ajoutée. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (3 x 20 mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash-chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 7/3) pour conduire à l'acrylate de (5E)-(3S,4S,7S,8R,9S,11S,12S)-12-[3-bis(ferf- butoxycarbonyl)amino-2,5-diméthoxyphényl]-3,8,9-triméthox y-12-para- méthoxybenzyloxy-5,7,11-triméthyldodéca-1 ,5-dién-4-yle (96 mg,

0,112 mmol, 78% pour deux étapes), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes :

Rf= 0.40 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 7/3). [α] _D ²⁰ + 28.3 (c 2.37, CHCI ₃ ). IR (film) : v : 2932, 1783, 1752, 1724, 1612, 1514, 1480, 1368, 1274, 1248, 1152, 1097, 1049, 1004, 853, 808, 752, 666 cnrf ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 7.21 (d, 2H, J = 11.3 Hz, H ₃ ), 6.91 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H ₃ ), 6.82 (d, 2H, J = 11.3 Hz ₁ H ₄ ), 6.56 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H ₅ ), 6.36 (dd, 1H ₁ J = 17.2 et ² J = 1.5 Hz ₁ H ₂₄ ), 6.12 (dd, 1 H, J = 17.2 et J = 10.3 Hz ₁ H ₂₃ ), 5.78 (dd, 1H , J = 10.3 et ² J = 1.5 Hz, H ₂₄ ), 5.56 (ddd, 1 H, J = 17.3, J = 10.2 et J = 7.4 Hz ₁ H ₂₀ ), 5.31 (d, 1H, J = 10.0 Hz, Hi ₅ ), 5.28-5.17 (2H, H ₂₁ ), 5.14 (d, 1H, J = 6.8 Hz, H ₁₈ ), 4.57 (d, 1 H, J = 4.3 Hz, H ₇ ), 4.37 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.2 Hz ₁ Hr), 4.20 (d syst AB, 1 H ₁ ² J = 11.2 Hz ₁ H ₁ ), 3.77 (s, 3H, OMe) ₁ 3.73 (s, 3H ₁ OMe), 3.70 (m, 1H ₁ H ₁₉ ), 3.64 (s, 3H, OMe), 3.39 (s, 3H, OMe), 3.25 (s, 3H, OMe), 3.21 (s, 3H, OMe), 3.09 (d élargi, 1 H, J = 10.5 Hz, H ₁₁ ), 3.03 (dd, 1H ₁ J = 8.2 et J = 2.7 Hz ₁ H ₁₂ ), 2.42 (m, 1 H, H ₁₃ ), 2.00 (m, 1H, H ₈ ), 1.64 (m, 1 H, H ₁₀ ), 1.60 (d, 3H ₁ J = 0.9 Hz, H ₁₇ ), 1.39 (19H ₁ 2Boc et H ₁₀ ), 0.97 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.75 (d, 3H ₁ J = 6.8 Hz, H ₉ ). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 165.0 (s, C ₂₂ ), 159.0 (s, C ₅ ), 155.2 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 147.4 (s, C ₁ ), 135.8 (s, C ₆ ), 133.9 (d, C ₂₀ ), 133.4 (s, C ₂ ), 133.3 (d, C ₁₅ ), 130.9 (s, C ₁₆ ), 130.6 (t, C ₂₄ ), 130.2 (s, C ₂ ), 129.2 (2d, C ₃ ), 128.7 (d, C ₂₃ ), 119.2 (t, C ₂₁ ), 113.7 (2d, C ₄ ), 113.4 (d, C ₅ ), 112.1 (d, C ₃ ), 84.9 (d, C ₁₂ ), 83.3 (d, C ₁₉ ), 82.4 (2s, 2Boc), 81.0 (d, C ₁₁ ), 79.9 (d, C ₇ ), 79.8 (d, C ₁₈ ), 70.7 (t, C ₁ ), 60.8 (q, OMe), 60.7 (q, OMe), 57.0 (2q, 2OMe) ₁ 55.6 (q, OMe) ₁ 55.2 (q, OMe), 35.0 (d, C ₈ ), 34.6 (d, C ₁₃ ), 33.7 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 16.8 (q, C ₁₄ ), 13.9 (q, C ₉ ), 13.4 (q, C ₁₇ ).

Etape 6 :

A une solution de l'acrylate obtenu à l'étape 5 (94 mg, 0,110 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (22 ml_) est ajouté du catalyseur de Grubbs de seconde génération G2 (18,6 mg, 20 mol%). Après 3 heures de chauffage au reflux du toluène, du catalyseur G2 est rajouté (11 mg, 12 mol%) et le mélange réactionnel est chauffé pendant 3 heures supplémentaires. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : pentane/acétate d'éthyle 1/1) pour conduire au λ/-(2,5-diméthoxy-3-{(7£)-(1R,2S,4S,5R,6S)-4,5-triméthox y-8- [(2S ₁ 3S)-3-méthoxy-6-oxo-3 , 6-d ihyd ro-2H-pyran-2-yl]- 1 -para-méthoxybenzy I- oxy-2,6-diméthylnon-7-enyl}phenyl)biscarbamate de fe/f-butyle (51.7 mg, 0.062 mmol, 57%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.27 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 1/1). [α] _D ²⁰ + 69.5 (c 0.43, CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 2929, 1733, 1610, 1517, 1458, 1368, 1249, 1153, 1103, 839, 778, 740 cm- ¹ . RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 7.22 (d , 2H, J = 8.6 Hz, H ₃ ), 6.96 (dd, 1 H, J = 9.8 etJ = 5.4 Hz, H ₂₀ ), 6.92 (d, 1 H, J = 3.1 Hz, H ₃ ), 6.83 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H ₄ ), 6.57 (d, 1H ₁ J = 3.1 Hz, H ₅ ), 6.19 (d, 1H, J = 9.8 Hz, H ₂₁ ), 5.52 (d, 1H, J = 10.3 Hz, H ₁₅ ), 4.65 (d, 1 H, J = 2.2 Hz, H ₁₈ ), 4.59 (d, 1 H, J = 4.0 Hz, H ₇ ), 4.38 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.1 Hz ₁ H ₁ ), 4.22 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.1 Hz, H ₁ ), 3.88 (dd, 1H, J = 5.4 et J = 3.2 Hz, H ₁₉ ), 3.78 (s, 3H, OMe), 3.74 (s, 3H, OMe) ₁ 3.65 (s, 3H ₁ OMe), 3.46 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe) ₁ 3.26 (s, 3H, OMe) ₁

3.21 (d élargi, 1H, J = 8.1 Hz, H ₁₁ ), 3.15 (dd, 1 H, J = 8.1 et J = 2.8 Hz, H ₁₂ ), 2.58 (m, 1 H, H ₁₃ ), 2.03 (m, 1H, H ₈ ), 1.71 (s, 3H, H ₁₇ ), 1.70 (m, 1 H, Hi ₀ ), 1.40 (19H ₁ 2Boc et H ₁₀ ), 1.05 (d, 3H, J = 6.6 Hz, H ₁₄ ), 0.74 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H ₉ ). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 163.1 (s, C ₂₂ ), 159.1 (s, C ₅ ), 155.2 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 147.4 (s, C ₁ ), 142.1 (d, C ₂₀ ), 135.7 (s, C ₆ ), 133.5 (s, C ₂ ), 131.2 (d, C ₁₅ ), 130.2 (s, C ₂ ), 129.2 (2d, C ₃ ), 128.5 (s, C ₁₆ ), 124.2 (d, C ₂₁ ), 113.6 (2d, C ₄ ), 113.4 (d, C ₅ ), 112.2 (d, C ₃ ), 85.0 (d, C ₁₂ ), 83.0 (d, C ₁₈ ), 82.5 (2s, 2Boc), 81.0 (d, C ₁₁ ), 79.8 (d, C ₇ ), 70.8 (t, C ₁ ), 69.8 (d, C ₁₉ ), 60.9 (2q, OMe), 57.2 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 55.3 (q, OMe) ₁ 35.1 (d, C ₈ ), 34.9 (d, C ₁₃ ), 33.8 (t, C ₁₀ ), 27.8 (6q, 2Boc), 17.1 (q, C ₁₄ ), 13.8 (q, C ₁₇ ), 13.1 (q, C ₉ ).

Etape 7 :

A une solution de la lactone biscarbamate obtenue à l'étape 6 (51 ,7 mg, 0,062 mmol, 1 équiv.) dans l'oxyde de diéthyle anhydre (4 rtiL) refroidie à

-78 ⁰ C est ajoutée une solution d'hydrure de di/sobutylaluminium (0,19 ml_, 1

M dans l'hexane, 0,19 mmol, 3 équiv.). Après 2 heures à -78 ⁰ C, le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse saturée en tartrate mixte de sodium et de potassium (5 ml_). Après 2 heures d'agitation vigoureuse, la phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (2 x 10 ml_). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium, et concentrées sous vide pour conduire au lactol correspondant qui est utilisé sans purification supplémentaire.

A une solution du ce lactol (0,062 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (5 mL) est ajouté du (carbéthoxyéthylidène)-triphénylphosphorane

(68 mg, 0,19 mmol, 3 équiv.). Après 3,5 heures de chauffage au reflux du toluène, le mélange réactionnel est concentré sous vide et purifié par flash- chromatographie sur gel de silice (éluant : gradient de pentane et d'acétate d'éthyle de 7/3 à 6/4) pour conduire au (2£,4Z,8£)-(6S,7S,10S,11R 12S,14S,15R)-15-[3-bis(teAt-butoxycarbonyl)amino-2,5-diméth oxyphényl]-7- hydroxy-6, 11 ,12-triméthoxy-15-para-méthoxybenzyloxy-2,8, 10,14-tétra- méthylpentadéca-2,4,8-triénoate d'éthyle (38,1 mg, 0,042 mmol, 67%), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.47 (gel de silice ; éluant : ether de pétrole/acétate d'éthyle 1/1). [α] _D ²⁰ + 50.7 (c 1.91 , CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3500, 2930, 1784, 1751, 1707, 1611, 1514, 1462, 1367, 1246, 1152, 1095, 1050, 853, 745, 732 cm ^"1 .

RMN ¹ H (400 MHz) : δ: 7.46 (d, 1H, J = 12.0 Hz, H ₂₂ ), 7.21 (d, 2H, J = 8.6 Hz, H ₃ ), 6.91 (d, 1H, J= 3.1 Hz, H ₃ ), 6.83 (d, 2H, J= 8.6 Hz, H ₄ ), 6.57 (d, 1H,J = 3.1 Hz, H ₅ ), 6.51 (t apparent, 1H, J = 11.7 Hz, H ₂ i), 5.48 (t, 1H, J = 10.4 Hz, H ₂₀ ), 5.36 (d, 1H, J = 9.6 Hz, H ₁₅ ), 4.57 (d, 1H, J = 4.2 Hz, H ₇ ), 4.38 (d syst AB, 1 H, ² J = 11.2 Hz, H ₁ ), 4.26-4.09 (4H, OEt et H ₁₉ et H ₁ ), 3.88 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H ₁₈ ), 3.79 (s, 3H, OMe), 3.75 (s, 3H, OMe), 3.65 (s, 3H, OMe), 3.39 (s, 3H, OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.24 (s, 3H, OMe), 3.15 (m, 1H, H ₁₁ ), 3.00 (dd, 1 H, J = 7.0 et J = 3.4 Hz, H ₁₂ ), 2.85 (s élargi, 1 H, OH), 2.48 (m, 1 H, H ₁₃ ), 2.00 (m, 1H, H ₈ ), 1.89 (s, 3H, H ₂₄ ), 1.73 (m, 1H, H ₁₀ ), 1.59 (s, 3H, H ₁₇ ), 1.41 (19H, 2Boc et H ₁₀ ), 1.29 (t, 3H, J = 7.2 Hz, OEt), 0.97 (d, 3H, J = 6.7 Hz, H ₁₄ ), 0.75 (d, 3H, J = 6.8 Hz, H ₉ ). RMN ¹³ C (100 MHz) : δ : 168.0 (s, C ₂₅ ), 159.0 (s, C ₅ ), 155.3 (s, C ₄ ), 151.6 (2s, 2Boc), 147.5 (s, C ₁ ), 135.7 (s, C ₆ ), 133.6 (d, C ₂₀ ), 133.5 (d, C ₁₅ ), 133.4 (s, C ₂ ), 132.1 (s, C ₁₆ ), 131.4 (d, C ₂₂ ), 130.9 (s, C ₂ . ou C ₂₃ ), 130.3 (s, C ₂₃ ou C ₂ ), 129.1 (2d, C ₃ ), 128.7 (d, C ₂₁ ), 113.6 (2d, C ₄ ), 113.5 (d, C ₅ ), 112.0 (d, C ₃ ), 85.2 (d, C ₁₂ ), 82.5 (2s, 2Boc), 80.6 (d, C ₁₁ ), 79.7 (2d, C ₇ et C ₁₈ ), 79.0 (d, Ci ₉ ), 70.7 (t, Cr), 60.9 (q, OMe) ₁ 60.8 (t, OEt), 60.6 (q, OMe), 56.9 (q, OMe), 56.6 (q, OMe), 55.6 (q, OMe), 55.3 (q, OMe), 35.1 (d, C ₈ ), 34.4 (d, C ₁₃ ), 34.1 (t,

Cio), 27.8 (6q, 2Boc), 16.4 (q, C ₁₄ ), 14.3 (q, OEt), 13.4 (q, C ₉ ), 12.9 (q, C ₁₇ ), 12.5 (q, C ₂₄ ). Etape 8 :

A une solution du biscarbamate obtenu à l'étape 7 (38 mg, 0,042 mmol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (3 mL) refroidie à 0 ⁰ C est ajouté de l'acide trifluoroacétique (250 μl_, 3,33 mmol, 80 équiv.). Après 10 minutes à 0 ⁰ C et 7 h à température ambiante, du toluène (1 mL) est ajouté et le mélange réactionnel est concentré sous vide puis dissout dans de l'acétate d'éthyle (10 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée de carbonate de sodium (2 mL) et avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (2 mL). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, filtrée et concentrée sous vide. Le brut réactionnel obtenu est directement engagé sans purification supplémentaire. A une solution du brut réactionnel précédent (0,042 mmol, 1 équiv.) dans un mélange de méthanol, de THF et d'eau (2/2/1 , 5 mL) est ajoutée de l'hydroxyde de lithium (20 mg, 0,83 mmol, 20 équiv.). Après 60 heures à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide et une solution aqueuse à 10% de dihydrogénophosphate de sodium (5 mL) est ajoutée. La phase aqueuse résultante est saturée en chlorure de sodium et extraite avec du dichlorométhane (5 x 15 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide. Le brut réactionnel obtenu est directement engagé sans purification supplémentaire. A une solution du brut réactionnel précédent (0,042 mmol, 1 équiv.) dans le toluène anhydre (42 mL) sont ajoutés de la di/sopropyléthylamine

(360 μl_, 2,08 mmol, 50 équiv.) et du chlorure de bis(2-oxo-3- oxazolidinyl)phosphinyle (BOPCI, 53 mg, 0,208 mmol, 5 équiv.). Après 5 jours à 85 ⁰ C et deux ajouts supplémentaires de BOPCI (2 x 38 mg), le mélange réactionnel est versé sur une solution aqueuse tamponnée de dihydrogénophosphate de sodium (pH = 4,5, 50 ml_). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (4 x 50 ml_). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM preparative sur gel de silice (éluant : dichlorométhane/méthanol 9/1) pour conduire au (4E,6Z,10E)- (8S,9S,12S,13R _I 14S _I 16S,17R)-9,17-dihydroxy-8,13,14 ₎ 20,22-pentaméthoxy- 4,10,12,16-tétraméthyl-2-azabicyclo[16.3.1 ]docosa-1 (21 ),4,6, 10, 18(22), 19- hexaén-3-one (4, mg, 0,0075 mmol, 18% pour 3 étapes), sous la forme d'une huile incolore dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.40 (gel de silice ; éluant : dichlorométhane/méthanol 9/1). [α] _D ²⁰ + 43.4 (c 0.21 , CHCI ₃ ).

IR (film) : v : 3410, 2924, 1650, 1592, 1459, 1366, 1322, 1220, 1156, 1094, 1061 , 1045, 1003, 953, 867, 752, 665 cnrï ¹ .

RMN ¹ H (400 MHz, acétone d ⁶ ) : δ : 8.30 (s, 1H, NH), 6.84 (d, 1H ₁ J = 3.1 Hz, H ₃ ), 6.73 (m, 1 H, Hi ₇ ), 6.36 (t apparent, 1 H, J = 11.3 Hz, H ₄ ), 6.25 (s élargi, 1H, H ₁₉ ), 5.09 (s élargi, 1 H, H ₅ ), 5.07 (s élargi, 1H, H ₉ ), 4.93 (m, 1H, H ₆ ), 3.80 (m, 1 H, Hi ₅ ou H ₇ ), 3.76 (s, 3H, OMe), 3.67 (m, 1H, H ₇ ou H ₁₅ ), 3.52 (s, 3H, OMe), 3.46 (s, 3H OMe), 3.30 (s, 3H, OMe), 3.16 (m, 1H, H ₁₂ ), 3.12 (s, 3H, OMe), 3.04 (m, 1H, H ₁₁ ), 2.80 (s, 1 H, H ₁₀ ), 2.25 (m, 1 H, H ₁₄ ), 2.16 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.96 (d, 3H, J = 1.4 Hz, 2-Me), 1.65 (ddd syst AB, 1 H, ² J = 14.1 , J = 8.9 et J = 4.4 Hz, H ₁₃ ), 1.18 (s, 3H, 8-Me), 0.96 (d, 3H, J = 6.6 Hz, 10-Me), 0.78 (d, 3H ₁ J = 6.7 Hz, 14-Me).

Etape 9 :

A une solution du macrolactame obtenu à l'étape 8 (4 mg, 0,007 nrirnol, 1 équiv.) dans le dichlorométhane (1 ,5 ml_) est ajouté du trichloroacétylisocyanate (10 μl_, O ₁ .08 mmol, 10 équiv.). Après 40 minutes à température ambiante, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis du méthanol (1 ,5 ml_) et du carbonate de potassium (15 mg) sont ajoutés. Après 1 ,5 heure à température ambiante, le méthanol est évaporé sous vide et le mélange réactionnel est dissout dans l'oxyde de diéthyle (10 mL). La phase organique obtenue est lavée avec de l'eau (1 mL) et une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium (1 mL). La phase aqueuse est extraite avec de l'oxyde de diéthyle (3 x 5 mL). Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour conduire au dicarbamate attendu qui est utilisé sans purification supplémentaire.

Ce dicarbamate (0,007 mmol, 1 équiv.) est dissout dans un mélange d'acétonitrile et d'eau (9/1 , 5 mL) et une solution aqueuse 1 M de nitrate de cérium et d'ammonium (20 μL, 2,9 équiv.) est ajoutée à -10 ⁰ C. Après 1 heure à -10 °C, de l'eau (2 mL) est ajoutée et la phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (5 x 5mL). Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium. Après concentration sous vide, le brut réactionnel est purifié par CCM préparative sur gel de silice (éluant : acétate d'éthyle) pour conduire au carbamate de (4E,6Z,10E)- (δS.θS.^SJSRMS.ieS.^RJ-g-carbamoyloxy-δ.ia.^-triméthoxy^ .i O,^, 16-tétraméthyl-3,20,22-trioxo-2-azabicyclo[16.3.1 ]docosa-1 (21 ),4,6, 10,18- pentaén-17-yle ou « 15-déméthoxy-15-carbamoyloxy-Herbimycine A » (~1

mg, -0,001 mmol, ~25% en 2 étapes), sous la forme d'un solide jaune dont les caractéristiques sont les suivantes : Rf= 0.44 (gel de silice ; éluant : acétate d'éthyle).

RMN ¹ H (400 MHz) : δ : 8.80 (s él, 1H, NH) ₁ 7.35 (d, 1H, J = 2.5 Hz, Hi ₉ ), 7.00 (m, 1H, H ₃ ), 6.56-6.47 (2H ₁ H ₁₇ et H ₄ ), 5.90-5.80 (2H ₁ H ₅ et H ₇ ou H ₁₅ ), 5.66-

5.54 (2H ₁ H ₉ et H ₇ ou H ₁₅ ), 4.70 (s él, 4H, 2NH ₂ ), 4.47 (d él, 1H, J = 6.9 Hz,

H ₆ ), 3.55-3.30 (2H ₁ H ₁₁ et H ₁₂ ), 3.52 (s 3H ₁ OMe), 3.33 (s, 6H, 2OMe), 2.71

(m, 1H, H ₁₀ ), 2.02 (s, 3H, 2-Me), 1.79 (m, 1H, H ₁₃ ou H ₁₄ ), 1.67 (m, 1H, H ₁₃ ou

H ₁₄ ), 1.69 (s él, 3H, 8-Me) ₁ 1.30 (m, 1H, H ₁₃ ), 1.09 (d, 3H, J = 6.8 Hz ₁ 10-Me), 0.91 (d, 3H ₁ J = 6.9 Hz ₁ 14-Me).

Exemple 4 : composition pharmaceutique:

On a préparé des comprimés répondant à la formule suivante :

Produit de l'exemple 1 0,2 g Excipient pour un comprimé terminé à 1 g

(détail de l'excipient : lactose, talc, amidon, stéarate de magnésium).

La présente invention comprend également toutes les compositions pharmaceutiques préparées avec tout produit de formule (I) selon la présente invention

Tests biologiques permettant de caractériser biologiquement les produits de l'invention :

Le phosphate inorganique libéré au cours de l'hydrolyse de l'ATP par l'activité ATPasique de Hsp82 est quantifié par la méthode du green Malachite. En présence de ce réactif, il y a formation du complexe phosphate inorganique- molybdate-vert de malachite qui absorbe à une longueur d'onde de 620 nm.

Les produits à évaluer sont incubés dans un volume réactionnel de 30 μl, en présence de 1μM Hsp82 et de 250 μM de substrat (ATP) dans un tampon composé de 50 mM Hepes-NaOH (pH 7.5), 1 mM DTT, 5 mM MgCI2 et 50 mM KCI à 37 ⁰ C pendant 60 min. Parallèlement, une gamme de phosphate

inorganique comprise entre 1 et 40 μM est constituée dans le même tampon. L'activité ATPasique est ensuite révélée par l'addition de 60 μl du réactif biomol green (Tebu). Après 20 min d'incubation à température ambiante, l'absorbance des différents puits est mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaque à 620 nm. La concentration en phosphate inorganique de chaque échantillon est alors calculée à partir de la courbe d'étalonnage. L'activité ATPasique d ¹ Hsp82 est exprimée en concentration de phosphate inorganique produit en 60 min. L'effet des divers produits testés est exprimé en pourcentage d'inhibition de l 'activité ATPasique. La formation d'ADP due à l'activité ATPasique de Hsp82 a été utilisée pour mettre au point une autre méthode d'évaluation de l'activité enzymatique de cette enzyme par application d'un système de couplage enzymatique faisant intervenir la pyruvate kinase (PK) et la lactate deshydrogensase (LDH). Dans cette méthode spectrophotométrique de type cinétique, la PK catalyse la formation d'ATP et de pyruvate à partir de phosphoenol-pyruvate (PEP) et de l'ADP produit par HSP82. Le pyruvate formé, substrat de la LDH, est ensuite transformé en lactate en présence de NADH. Dans ce cas, la diminution de la concentration en NADH, mesurée par la diminution de l'absorbance à la longueur d'onde de 340 nm est proportionnelle à la concentration en ADP produit par HSP82.

Les produits testés sont incubés dans un volume réactionnel de 100 μl de tampon composé de 100 mM Hepes-NaOH ( pH 7.5), 5 mM MgCI2, 1mM DTT, 150 mM KCI, 0.3 mM NADH, 2.5 mM PEP et 250 μM ATP. Ce mélange est preincubé à 37°C pendant 30 min avant addition de 3.77 unités de LDH et 3.77 unités de PK. La réaction est initiée par addition du produit à évaluer, en concentrations variables, et de Hsp82, à la concentration de 1μM. La mesure de l'activité enzymatique de Hsp82 est alors réalisée, en continu, dans un lecteur de microplaque, à 37 ⁰ C, à la longueur d'onde de 340nm. La vitesse initiale de la réaction est obtenue par la mesure de la pente de la tangente à l'origine de la courbe enregistrée. L'activité enzymatique est exprimée en μM d'ADP formé par minute. L'effet des divers produits testés

est exprimé en pourcentage d'inhibition de l'activité ATPasique selon la codification ci-dessous :

Tableau de résultats