新型苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其 应用 技术领域

本发明涉及一类新型苯甲酰胺类组蛋白去乙酰 化酶抑制剂以及该 类小分子化合物在制备治疗恶性肿瘤及与分化 和增殖相关疾病药物方 面的应用。 背景技术

染色质的组蛋白乙酰化和去乙酰化是调节基因 表达的关键环节之 一， 而异常的基因表达是肿瘤及一些遗传和代谢疾 病发生的分子生物 学基础。 组蛋白的乙酰化程度， 有组蛋白乙酰化酶 (HAT)和组蛋白去乙 酰化酶 (HDAC)协调控制。 当 HDAC过度表达并被转录因子募集， 就会 导致特定基因的不正常抑制， 从而导致肿瘤和其它疾病 (Gmnstein, M., 1997, Nature, 389:349-352)。据报道 HDAC的活性与癌症、免疫性疾病、 某些精神类、 心血管类疾病的发生有关 (Ruijter, A-J-M., 2003, Biochem. J., 370:737-749; Grignani, F.， 1998, Nature, 391 :815-818; Lin, R-J, 1998, 391 :81 1-814; Marks, P-A" 2001, Nature Reviews Cancer, 1 : 194)。 实验证明， HDAC抑制剂会使染色质组蛋白乙酰化水平提高� � 因 此导致特定基因激活表达， 相应的导致细胞的末端分化或癌细胞的调 亡。 初步的临床研究表明， 人类可以安全地通过抑制 HDAC的活性来 获得组蛋白高乙酰化水平。 因此， HDAC 已成为目前肿瘤化疗药物研 发领域最新、 最热门的靶标。

HDAC是一个大的酶家族，其成员目前已知有� �大类 18个不同的 亚型， 其中 I类包括 HDAC1、 2、 3、 8四个亚型， II类包括 HDAC4、 5、 6、 7、 9、 10六个亚型 (其中 4、 5、 7、 9属于 IIa， 6、 10属于 lib); IV类仅 HDAC 11 —个亚型， 其与前两类分别具有一定的同源性； III 类包括 Sirtl-7共七个亚型， 与前 III类没有结构同源性。 目前对 I类和 II类各亚型 HDAC研究得相对较为深入， 而对 III和 IV类 HDAC了解 得不多。 I类 HDAC主要定位在细胞核内， 在多种组织细胞中表达， 而 II类 HDAC主要定位在细胞质 (或穿梭于细胞核与细胞质之间)，只在部 分组织细胞中表达。 应用小分子 RNA干扰技术和动物基因敲除技术所 得到的研究结果综合显示， I类和 Ila类中的一些 HDAC亚型， 可能是 抗肿瘤作用相关的靶标， 其中对 HDAC1、 2、 3的抑制会产生细胞增殖 的抑制作用，对 HDAC4的抑制会影响 DNA损伤修复的过程，对 HDAC7 的抑制会诱导胸腺细胞凋亡。 近年来的研究结果已充分显示， HDAC 过度表达或活性异常在白 血病和实体肿瘤的发生及发展中起着重要的作 用， 而抑制 HDAC功能 活性则显示出显著的体内外抗肿瘤效果。 临床在研的 HDAC抑制剂按 化学结构可被分为四类， 即：

(1)羟肟酸类， 如曲古抑菌素 (TSA)， Suberolanilide hydroxamic acid (SAHA) ;

(2)环四肽类， 如 Apicidin;

(3)短链或芳香脂肪酸类， 如丁酸钠；

(4)苯酰胺类， 如 MS-275 ;

前两类化合物抑制 I类和 II类所有 HDAC亚型，属于 HDAC非选 择性抑制剂， 短链或芳香脂肪酸类总体讲抑制活性较弱， 需与其它药 物组合试验才能产生较强作用。 而苯酰胺类化合物则显示出靶标作用 的选择性， 它们主要抑制 I类 HDAC (包括 HDAC亚型 1、 2、 3 , 但不 抑制 HDAC8)和部分 Ila类 HDAC ,对 lib类 HDAC无抑制作用。 目前， 以 HDAC为靶标的抗肿瘤药物研发正在全球范围内� �分展开， 其中默 克公司开发的 SAHA (商品名 Zolinza),已于 2006年底被美国 FDA批准 以皮肤 T淋巴细胞瘤 (CTCL)为适应症而上市应用。 这标志着 HDAC作 为新颖药物靶标的概念验证性研究阶段的结束 ， 亦预示着 HDAC抑制 剂作为新型抗肿瘤药物的广阔开发前景， 同时， HDAC 抑制剂的抗肿 瘤作用机制研究也逐步深入到包括诱导肿瘤细 胞凋亡、 抑制肿瘤细胞 周期、 诱导肿瘤细胞分化、 抑制血管生成、 抑制肿瘤转移、 调节免疫 系统功能等调控肿瘤发生和发展的多方面。 由于组蛋白去乙酰化酶亚型结构的相似性， 现有的大多数组蛋白 去乙酰化酶抑制剂不具有亚型选择性， 通常同时抑制多个亚型， 造成 一定的毒副反应， 从而影响了成药性。 因此， 设计合成高选择性的组 蛋白去乙酰化酶抑制剂， 尤其是苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂， 以得到疗效好， 毒副作用低， 安全性高的新型抗恶性肿瘤剂是目前该 领域的研究热点及技术难点。 研究表明， 大多数 HDACs抑制剂的结构可分为酶表面识别区、链 接区以及锌离子螯合区。 对 N-苯甲酰苯胺类化合物的锌离子螯合区研 究显示， 2'-氨基是抑制活性的关键基团， 除去 2'-氨基， 在芳基 3'或 4' 取代氨基或乙酰化氨基， 化合物失去活性， 表明邻位氨基是这类化合 物抑制活性所必须。 链接区和酶表面识别区的基团长度、 疏水性和位 阻也同样影响对酶的抑制活性。 对链接区和酶表面识别区的研究发现： 连接单元的平面或 SP2构型是有效抑制 HDAC的关键， 因此需保留链 接区刚性平面结构芳香环 (苯环)； 酶表面识别区与靶酶的结合方式主要 是取代基与氨基酸残基进行氢键结合， 增加此区域的疏水性亦可提高 活性。 对芳环或芳杂环上的取代基进行多样性的改造 可以获得一系列 新的构建单元。 发明内容

本发明需要解决的技术问题之一是公开一类新 型苯甲酰胺类组蛋 白去乙酰化酶抑制剂， 以满足临床应用的需要。 本发明所说的苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑 制剂， 为具有如下 化学结构通式的化合物或其盐：

其中:

X为苯环或含 1-2个杂原子的 5-6元杂环；

或 代表氢、 卤素、 氨基、 羟基、 硝基、 氰基、 1至 4个 碳原子的垸基、1至 4个碳原子的垸氧基、 1至 4个碳原子的氨基烷基、 1至 4个碳原子的烷基氨基、 2至 4个碳原子的酰基、 2至 4个碳原子 的酰氨基、 1至 4 个碳原子的硫代垸基、 三氟甲基、 1至 4个碳原子的 羧基、 1至 4个碳原子的烷氧基羰基、 苯基或杂环；

Y和 M为 N或 C ;

Xi为氢、 卤素、 苯基或杂环或；

当 X为含 1个 N， 0或 S杂原子的五元杂环， 、 和 为氢， Y为 C， ！为氢时， M不为 N;

当 X为含 1个 N， 0或 S杂原子的五元杂环， Y为 C， X ₁ 为氢， 为氢时， 或 不为 -NH _{2 ;}

当 X为苯环， R 和 为氢， Y为 C， ！为氢时， M不为 N; 所述的 "杂环"， 是指含一个或多个杂原子 (氮、 氧、 硫)的饱和或不 饱和杂环；

所述的卤素优选氟、 氯、 溴或碘；

所述的 1至 4个碳原子的垸基， 优选甲基、 乙基、 正丙基、 异丙 基、 正丁基、 异丁基或特丁基等；

所述的 1至 4个碳原子的烷氧基优选甲氧基、 乙氧基、 正丙氧基、 异丙氧基、 正丁氧基或异丁氧基等；

所述的 1至 4个碳原子的氨基烷基优选氨基乙基、 1-氨基丙基或 2-氨基丙基等；

所述的 1 至 4个碳原子的烷基氨基优选 N-甲氨基、 N-乙氨基或 N-异丙氨基；

所述的 2至 4个碳原子的酰基优选乙酰基、丙酰基或异丁� �基等; 所述的 2至 4个碳原子的酰氨基优选乙酰氨基、 丙酰氨基、 丁酰 氨基或异丁酰氨基等；

所述的 1至 4个碳原子的硫代垸基优选甲硫基、 乙硫基或丙硫基 等.

所述的盐为盐酸盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 乙酸盐、 乳酸盐、 酒石 酸盐、 鞣酸盐、 枸橼酸盐、 三氟醋酸盐、 苹果酸盐、 马来酸盐、 琥珀 酸盐、 对甲苯磺酸或甲磺酸盐；

所述的盐不含结晶水， 或含一个或一个以上分子的结晶水， 优选

0.5〜3.0分子的结晶水。 优选的化合物包括:

V- -1 N. -(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -2-萘甲酰胺、

V- -2 N- -(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -2-萘甲酰胺、

V- -2， N- -(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -2-萘甲酰胺盐酸盐、

V- -3 N- -(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -6-甲氧基 -2-萘甲酰胺、

V- -4 N- -(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -6-甲氧基 -2-萘甲酰胺、

V- -5 N. -(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) - 1H-吲哚 -2-甲酰胺、

V- -5， N- -(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺氢溴酸盐、

V- -6 N- -(4-(3-氨基吡啶 -4-氨基甲酰)苯基) - 1H-吲哚 -2-甲酰胺、

V- -6， N- -(4-(3-氨基吡啶 -4-氨基甲酰)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺硫酸

V- -7 N. -(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺、

V- -8 N- -(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺、

V- -8， N- -(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺甲磺酸盐、

V- -9 N- -(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺、

V-10 N-(4-(2-氨基 -5-噻吩苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺、 V-l l N-(4-(2-氨基 -5-苯基苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺、 V-12 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1H-苯并咪唑 -2-甲酰胺、 V-13 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -1H-苯并咪唑 -2-甲酰胺、 V-13 ' N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -1H-苯并咪唑 -2-甲酰胺 三氟醋酸盐、

V-14 N-(4-(2-氨基 -5-呋喃苯氨羰基）苯基) - 1H-苯并咪唑 -2-甲酰 胺、

V-15 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1-萘甲酰胺、

V-16 N-(4-(3-氨基吡啶 -4-氨基甲酰)苯基) -1-萘甲酰胺、

V-17 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -1-萘甲酰胺、

V-18 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-氟 -1H-吲哚 -2-甲酰胺、 V-18' N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-氟 -1H-吲哚 -2-甲酰胺苹果酸

±卜、

V-19 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-甲基 -1Η-吲哚 -2-甲酰胺、 V-20 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-三氟甲基 -1H-吲哚 -2-甲酰 胺、

V-20' N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-三氟甲基 -1H-吲哚 -2-甲酰胺 马来酸盐、

V-21 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -3-甲氧基苯并呋喃 -2-甲酰胺、 V-22 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-甲氨基 -1H-吲哚 -2-甲酰胺、 V-23 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-氨基 -1H-吲哚 -2-甲酰胺、 V-24 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基)苯并噻吩 -2-甲酰胺、

V-25 5-乙酰氨基 -N-(4-(2-氨基苯氨羰基）苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰 胺、

V-26 5-乙酰基 -N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺、 V-27 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基)苯并噻吩 -2-甲酰胺、 V-28 N-(4-(3-氨基吡啶 -4-氨基甲酰)苯基)苯并噻吩 -2-甲酰胺。

上述化合物 V-2' -20 ⁷ 的结构如下: 本发明的化合物可米用如下的方法进行合成:

将取代酸 I (50 mmol), 0-(IH-苯并三唑 -1-基) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基异 脲六氟化磷 (简称 HBTU)(18.95g， 50 mmol)加入乙腈中， 在冰浴下缓慢 滴加三乙胺（lO.lg, lOOmmol),常温下搅拌 lh， 得均一反应液。将对氨甲 基苯甲酸 II (50mmol)溶于 10ml lmol/L的氢氧化钠水溶液中，反应温度 下滴加上述均一反应液， 待滴加完毕， 保温搅拌 6h。 反应液用浓盐酸 调节 pH值， 析出大量固体， 过滤， 干燥即得中间体 III。 将中间体 ΙΠ(1 mmol). 化合物 IV(lmmol)、 HBTU(0.379g, lmmol) 依次加入 10ml Ν,Ν-二甲基甲酰胺中， 保持冰浴冷却滴加三乙胺 (2mmol), 再于室温继续搅拌 4小时。 将反应液倒入冰水中， 盐酸调节 pH到 7-9左右， 二氯甲垸萃取， 无水硫酸镁干燥。 过滤， 浓缩有机相， 剩余物经柱层析或重结晶纯化得目标化合物 。 化合物 V与无机酸或有机酸在无水乙醇或乙酸乙酯中� �拌反应， 冷却过滤， 即得相应化合物 V的盐。 上述反应通法中的 Ri、 R ₂ 、 、 X、 Y、 Xi、 M同上所述； 化合物 I、 II、 IV和 HBTU等可以通过商业渠道购买。 药理试验表明， 本发明所述的化合物或其盐， 对组蛋白去乙酰化 酶肿瘤相关亚型 HDAC1具有很强的抑制作用 (实施例 29)， 在 10μΜ、 ΙμΜ浓度下其抑酶活性优于国外同类临床研究 药物 MS-275或相当。 对组蛋白去乙酰化酶 (HDACs)的体外抑制 IC ₅ 。显示， V-5、 V-8、 V-15、 V-16、 V-17、 V-19、 V-20 和 V-24 等化合物抑酶活性优于 MS-275, 如 V-8对 HDACs的 IC ₅ 。 =1.83μΜ， 而 MS-275对 HDACs抑 制的 IC ₅₍₎ =3.52 M _; 对组蛋白去乙酰化酶肿瘤相关亚型 HDAC1抑制作 用 IC ₅ 。作用显示，化合物 V-5、 V6、 V-9、 V-14、 V-15、 V-16、 V-19、

V-25、 V-26 V-27对 HDAC1抑酶活性均优于 MS-275,如化合物 V-5 对 HDAC1 抑酶活性为 IC _5Q =210 nM, 显著优于 MS-275 的抑制活性 (IC ₅₀ =668 nM), 显示更好的组蛋白去乙酰化酶亚型靶向性。 药理试验表明， 本发明所述的化合物或其盐， 对多株肿瘤细胞具 有较强的诱导分化和抗增殖活性， 尤其对 Hut78 T淋巴细胞白血病细 胞、 Jurkat E6-1 人 T细胞淋巴瘤、 A549 人肺癌细胞、 K562 人慢性髓 原白血病细胞、 Hep3B2.1-7 人肝癌细胞、 MDA-MB-435s 人乳腺癌细 胞、 Colo320 人直肠癌细胞系、 PC-3 人前列腺癌抗增殖作用明显 (实施 例 30)。 对肿瘤细胞株的体外增殖抑制作用 IC _5Q 显示， 测试化合物均显 示较好的抗细胞增殖作用， V-5、 V-6、 V-14、 V-19、 V-25、 V-27 等化合物对多株肿瘤细胞抑制率优于 MS-275。 如化合物 V-5对肿瘤细 胞如 Hut78、K562、Jurkat E6-1抑制作用明显优于 MS-275,尤其对 Hut78 抑制活性显著， 其 Κ: ₅₀ =0.0194μΜ， 显著优于 MS-275(IC ₅₀ =0.5281 M)。 药理试验表明， 本发明的化合物或其盐， 毒性较小。 化合物 V-5, V-6, V-9, V-14, V-16, V-19, V-25, V-26, V-27对小鼠灌胃给 药最大耐受量均大于 2000mg/kg (实施例 31)。 药理试验表明， 本发明的化合物或其盐， 与组蛋白去乙酰化酶抑 制剂 SAHA相比， 心脏毒性较小， 如化合物 V -5和 V-9对 hERG钾电 流作用的半数抑制浓度均大于 ΙΟμΜ, 显示较高的心脏安全性 (实施例 32)。 药理试验表明， 本发明的化合物或其盐， 初歩药代数据结果较好， 静脉注射半衰期较长 (1〜2 ， 口服生物利用度较高，具有较好成药性 (实 施例 33)。 综上所述， 本发明的化合物或其盐， 不仅对组蛋白去乙酰化酶及 其肿瘤相关亚型 HDAC1抑制作用明显，而且对多株肿瘤细胞具有� ��强 的诱导分化和抗增殖活性。 与国外同类临床研究药物 MS-275相比， 抑 酶活性或抑瘤活性优势明显， 且毒性较小， 心脏安全性较高， 初歩药 代结果较好， 具有更好的成药性。 本发明所述的化合物或其盐作为治 疗癌症及与分化和增殖相关的疾病的药物开发 ， 具备创新性、 创造性 和实用性及深入研究的价值。 本发明还涉及一种组合物， 包括治疗有效量的所述的化合物或其 盐和医药学上可接受的载体， 所述的载体如香料、 甜味剂、 液体或固 体填料或稀释剂等常用载体物质， 并采用本领域公知的方法， 制成常 见的药用制剂， 如片剂、 胶囊、 粉剂、 糖浆、 液剂、 悬浮剂或针剂， 制剂通常含有重量百分比为 1-70%的有效成分， 较佳重量含量为

5-50%；

本发明所述的化合物在临床上可以通过口服或 注射方式对哺乳动 物（包括人）进行给药， 其中尤以口服方式最佳。 用药剂量为每日 0.000 l〜200mg/kg体重。 最佳剂量视个体而定， 通常开始时剂量较小， 然后逐渐增加用量。 本发明的特点是将苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化 酶抑制剂的酶表面 识别区用一系列稠杂环取代， 以增加化合物与酶表面识别区的空间匹 配，尤其是增加与酶亚型的结合力，在进行 HDAC1酶亚型抑制筛选后， 发现该类化合物对 HDAC 1酶抑制活性明显增强， 提示 HDAC1酶的表 面识别区具有较大空间容忍度， 且存在关键氨基酸结合残基可以与稠 杂环中基团如 -NH-，-0-等进行特异性识别结合，预示酶表面� �别区用不 同杂环或杂环上有不同取代基的结构代替， 可得到酶亚型抑制活性更 强的苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂。 从而， 为发现疗效好， 毒 副作用低， 安全性高的新型抗肿瘤药物提供理论指导并具 有成药的可 行性。 相当于现有技术， 本发明具有新颖性、 创造性和科学的进步。 本发明优点在于， 所述化合物及其药用制剂对于治疗基因表达异 常而引起的疾病， 如： 肿瘤、 内分泌紊乱、 免疫系统疾病、 遗传病和 神经系统疾病有很好的疗效。 具体实施方式

结合实例进一步阐明本发明的内容， 但本发明的保护范围并不局 限于这些实例。 本发明所述的百分比除特别注明外， 均为重量百分比。 实施例 1

V-l N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -2-萘甲酰胺

将 2-萘甲酸（1.72g， lOmmol), 对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol), 按通法中间体 ΠΙ的方法制备， 得白色固体 （中间体 M-l) 2.47g。 M-l(0.305g, 1 mmol)、邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 N，N-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g， 2 mmol)， 按通法产 品 V的方法制备得白色固体 0.231g。

MS (ESI): [M+H]+=396

1H-NM (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.61(d,2H,J=6.0Hz), 4.84(s,2H), 6.60(t,lH, J=7.2Hz), 6.78(d,lH, J=8.0Hz), 6.97(t，lH， J=7.2Hz) 7.18(d,lH, J=7.6Hz), 7.49(d,2H, J=8.0Hz), 7.62(m,2H), 8.02(m,6H), 8.52(s,lH), 9.22(t,lH, J=6.0Hz), 9.56(s,lH) 实施例 2

V-2 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -2-萘甲酰胺

M-l(0.305g, 1 mmol)、 对氟邻苯二胺（0.126g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol)， 按通法产品 V的方法制备得白色固体 V -2共 0.19g。 将上述白色固体 V -2与 3mol/L盐酸 /乙醇（10ml)中加热溶解，冷却 析出为 V-2的盐酸盐化合物 V-2共 0.11g。

MS (ESI): [M+H]+=414

1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.56(d,2H,J=6.0Hz), 5.10(s,2H), 6.31(dt,

1H, J=2.8Hz, 8.4 Hz), 6.49(dd,lH, J=2.8Hz, 10.8Hz), 7.08(t, lH,J=7.2Hz), 7.43

(d, lH, J=8.4Hz), 7.56(m,2H), 7.96(m,6H), 8.46(s,lH), 9.17(t,lH, J=8.0Hz), 9.45

(s，lH) 实施例 3 L O

(mvz=s: 'Hi'p)ee-A '(ΖΗ8·8 'mvz=i 'ΗΙ'ΡΡ)8ΓΔ '(ΖΗ9·Δ 'ΖΗΟ Ζ;

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USLLO/ZlOZ lD/lDd S6C000/CT0Z OAV 9.45(s,lH) 实施例 5

V -5 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) - 1H-吲哚 -2-甲酰胺

将 2-吲哚甲酸（1.61g， lOmmol),对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol), 按通法中间体 ΠΙ的方法制备， 得白色固体 （中间体 M-3) 2.11g。

M-3(0.294g, 1 mmol)、邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol)， 按通法产 品 V的方法制备得白色固体 V -5 0.29gc 将上述白色固体 V -5 0.21g溶于热的乙醇中， 滴加 4mol/L的氢溴 酸乙酸乙酯 (2ml)， 冷却析出 V -5的氢溴酸盐 V -5 ' ， 白色固体 0.14g。 MS (ESI): [M+H]+=385

1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 6ppm: 4.53(d,2H,J=6.4Hz), 4.77(s,2H), 6.55

(dt,lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.73(dd, lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.99(dt,lH, J=0.8Hz, 8.0Hz), 7.13(m,3H), 7.41(m,3H) ， 7.46(d,lH, J=8.0Hz), 7.89(d,2H, J=8.0Hz), 8.98(t,lH, J=6.0Hz), 9.51(s,lH), 11.47(s,lH) 实施例 6

V-6 N-(4-(3-氨基吡啶 -4-氨基甲酰)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺 M-3(0.294g, 1 mmol)、 3,4-二氨基吡啶（0.109g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol). Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.27g。 将上述白色固体 V -6 0.20g溶于热的乙醇中， 缓慢滴加 98%硫酸 (lml), 冷却析出 V -6的硫酸盐 V-6 ' ， 白色固体 0.11g。 MS (ESI): [M+H]+=386

1H-NM (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.53(d,2H,J=6.4Hz), 5.05(s,2H), 6.98(t,lH, J=7.2Hz), 7.13(t,2H, J=8.0Hz), 7.40(m,4H), 7.56(d,lH, J=8.0Hz), 7.74(d,lH, J=5.2Hz), 7.88(d,lH, J=8.0Hz), 8.04(s,lH), 8.99(t,lH, J=6.0Hz), 9.60(s,lH),l 1.47(s, lH) 实施例 7

V-7 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -IH-吲哚 -2-甲酰胺

M-3(0.294g, 1 mmol)、 对氟邻苯二胺（0.126g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.22g。

MS (ESI): [M+H]+=403

1H-NM (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.53(d,2H,J=6.0Hz), 5.09(s,2H), 6.30(dt,

IH, J=2.8Hz, 8.8Hz), 6.49(dd,lH, J=2.8Hz, 1 1.2Hz), 6.98(dt,lH, J=0.8Hz, 8.0Hz), 7.06(dt,lH, J=2.4Hz, 8.8Hz), 7.13(m,2H), 7.40(m,3H), 7.57(d,lH, J=8.0Hz), 7.89(d,2H, J=8.0Hz), 8.98(t, lH, J=6.0Hz), 9.45(s,lH),11.47(s,lH) 实施例 8

V-8 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺

将苯并呋喃 2-甲酸（1.62g， lOmmol) , 对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol) , 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体 Μ-4) 2.07g o

M-4(0.295g, 1 mmol),邻苯二胺 (0.108g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 N，N-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g， 2 mmol), 按通法产 品 V的方法制备得白色固体 0.27g。 将上述白色固体 V -8 0.24g 溶于热的乙醇中， 滴加甲磺酸乙醇溶 液，保持回流 30min，冷却析出 V -8的甲磺酸盐 V -8 '，黄色固体 0.17g。

MS (ESI): [M+H]+=386

1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.53(d,2H,J=6.4Hz),

4.77(s,2H), 6.55(dt,

1H, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.70(dd, lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.99(dt,lH, J=1.2Hz, 8.0Hz), 7.13(m,3H), 7.41(m,3H), 7.46(d,lH, J=8.0Hz), 7.89(d,2H, J=8.0Hz), 8.98(t, lH, J=6.0Hz)， 9.51(s, lH) 实施例 9

V-9 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺

M-4(0.295g, 1 mmol)、 对氟邻苯二胺（0.126g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol). Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g， 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.25g。

MS (ESI): [M+H]+=386

1H-NM (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.50(d,2H,J=6.0Hz) 4.77(s,2H), 6.55(dt,

1H, J=1.6Hz, 7.2Hz), 6.99(dt,lH, J=1.2Hz, 8.0Hz), 7.13(m,3H) 7.41(m,3H), 7.46(d,lH, J=8.0Hz), 7.79(d,2H, J=8.0Hz), 8.92(t,lH J=6.0Hz), 9.61(s,lH) 实施例 10

V -10 N-(4-(2-氨基 -5-噻吩苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺 M-4(0.295g, 1 mmol), 4-(2-噻吩) -1,2 苯二胺 (0.190g, 1 mmol),

HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.33g。

MS (ESI): [M+H]+=467 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 6ppm: 4.49(d,2H,J=6.0Hz), 4.87(s,2H), 6.51(dt,

1H, J=1.2Hz, 7.6Hz)， 6.99(dt,lH, J=1.2Hz, 8.0Hz), 7.13(m,3H), 7.41(m,3H), 7.46(m,3H), 7.81(d,2H, J=8.0Hz), 8.98(t, lH, J=6.0Hz), 10.11(s,lH) 实施例 11

V-l l N-(4-(2-氨基 -5-苯基苯氨羰基)苯基)苯并呋喃 -2-甲酰胺 M-4(0.295g, 1 mmol) , 4-苯基 -1,2 苯二胺（0.184g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.37g。

MS (ESI): [M+H]+=462

1H-NM (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.53(d,2H,J=6.4Hz), 4.77(s,2H), 6.55(dt,

1H, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.99(dt,lH, J=1.2Hz, 8.0Hz), 7.13(m,3H), 7.41(m,3H) , 7.54(m,4H), 7.41(d, lH, J=8.0Hz), 7.79(d,2H, J=8.0Hz), 8.98(t, lH, J=6.0Hz), 9.71(s, lH) 实施例 12

V-12 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -IH-苯并咪唑 -2-甲酰胺 将苯并咪唑 -2-甲酸（1.62g， lOmmol) , 对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol) , 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体 Μ-5)

2.17g o

M-5(0.295g, 1 mmol),邻苯二胺 (0.108g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产 品 V的方法制备得白色固体 0.30g。

MS (ESI): [M+H]+=386 6ΐ

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IZSLLO/ZlOZ lD/lDd S6C000/CT0Z OAV 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 6ppm: 4.59(d,2H,J=6.0Hz) 5.09(s,2H), 6.30(dt,

1H, J=2.8Hz, 8.8Hz), 6.49(dd,lH, J=2.8Hz, 1 1.2Hz), 7.06(dt,lH J=2.4Hz, 8.8Hz), 7.10(m,2H), 7.40(m,3H), 7.73(m,3H), 7.57(d,lH J=8.0Hz), 7.79(d,2H, J=8.0Hz), 8.98(t, lH, J=6.0Hz), 9.49(s,lH)

1 1.44(s,lH) 实施例 15

V-15 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1-萘甲酰胺

将 1-萘甲酸（1.72g， lOmmol), 对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol), 按通法中间体 ΠΙ的方法制备， 得白色固体 （中间体 M-6) 2.39g。

M-6(0.305g, 1 mmol)、邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol)， 按通法产 品 V的方法制备得白色固体 0.29 lg。

MS (ESI): [M+H]+=396

1H-NM (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 4.60(d,2H,J=6.0Hz), 5.1 1(s,2H), 6.35(dt,

lH,J=2.8Hz, 8.4Hz), 6.55(dd,lH, J=2.8Hz, 9.6Hz), 6.79(m, 1H),

7.14(t, lH, J=6.8Hz), 7.57(m,5H), 7.68(dd,lH, J=0.8Hz, 7.2Hz),8.01(m,4H), 8.22(t,lH, J=5.6Hz), 9.10(s, lH), 9.51(s,lH) 实施例 16

V-16 N-(4-(3-氨基吡啶 -4-氨基甲酰)苯基) -1-萘甲酰胺

M-6(0.305g, 1 mmol)、 3,4-二氨基吡啶（0.109g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.332g。

MS (ESI): [M+H]+=397 1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 6ppm: 4.42(d,2H,J=6.0Hz), 5.1 1(s,2H), 6.35(dt,

lH,J=2.8Hz, 8.4Hz), 6.50(dd，lH， J=2.8Hz, 9.6Hz), 7.14(t,lH, J=6.8Hz), 7.57(m，5H)， 7.68(dd, lH, J=0.8Hz, 7.2Hz), 8.01(m,4H), 8.62(t, lH, J=5.6Hz), 9.10(s,lH), 9.58(s,lH) 实施例 17

V-17 N-(4-(2-氨基 -5-氟苯氨羰基)苯基) -1-萘甲酰胺

M-6(0.305g, 1 mmol)、 对氟邻苯二胺（0.126g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产品 V的方法制备得白色固体 0.302g。

MS (ESI): [M+H]+=414

1H-NM (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.62(d,2H,J=6.0Hz), 5.17(s,2H), 6.35(dt,

1H, J=2.8Hz, 8.4Hz), 6.55(dd, lH, J=2.8Hz, 11.2Hz), 7.14(t,lH, J=6.8Hz), 7.57(m,5H), 7.68(dd, lH, J=0.8Hz, 7.2Hz), 8.01(m,4H), 8.22(t, lH, J=5.6Hz), 9.10(s,lH), 9.51(s,lH) 实施例 18

V-18 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-氟 -1H-吲哚 -2-甲酰胺 将 5-氟 -1H-2-吲哚甲酸 (1.79g， lOmmol), 对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol) , 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体 Μ-7)

M-7(0.312g, 1 mmol),邻苯二胺 (0.108g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产 品 V的方法制备得 V -18, 白色固体共 0.341g。 将 V -18 0.21g溶于热的乙醇中， 滴加苹果酸乙醇溶液， 冷却析出 ττ 邈 聲 ώ焉^ '§6Γ乙) ^ώ¾|^-ζ-Ηΐ-聲 ώ篤三 Μ £ 賴 ώ-乙- ¾Ι^-Ηΐ-¾ώ¾≡- (¾¾(¾羅焉 *¾)¾- )^Ηί ΟΖ-Α

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IZSLLO/ZlOZ lD/lDd S6C000/CT0Z OAV (1.51g, lOmmol), 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体 M-9) 2.87g。

M-9(0.362g, 1 mmol)、邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法产 品 V的方法制备得白色固体 V-20 0.366g。 将上述白色固体 V-20 0.26g溶于热的乙醇中， 滴加马来酸乙醇溶 液， 冷却析出 V-20的马来酸盐 V-20' ， 白色固体 0.27g。

MS (ESI): [M+H]+=453

1H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 4.59(d,2H,J=6.0Hz), 5.1 1(s,2H), 7.04(dt,

1H, J=1.2Hz, 9.6Hz), 7.18(s,lH), 7.47(m,5H),7.79(d,lH,J=5.2Hz), 7.94(d,2H,J=

8.4Hz), 8.10(s,lH), 9.10(t,lH, J=6.0Hz), 9.65(s, lH), 1 1.65(s, lH) 实施例 21

V-21 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -3-甲氧基苯并呋喃 -2-甲酰胺 将 3-甲氧基苯并呋喃 -2-甲酸（1.92g， lOmmol) , 对氨甲基苯甲酸

(1.51g, lOmmol), 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体

M-10(0.325g, 1 mmol), 邻苯二胺 (0.108g， 1 mmol), HBTU(0.379g, 1 mmol). Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol)， 按通法 产品 V的方法制备得白色固体 0.31 1g。

MS (ESI): [M+H]+=416

H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 3.83(s,3H) 4.57(d,2H,J=5.6Hz), 5.16 (s,2H),6.35(dt,lH, J=2.8Hz, 8.4Hz), 6.55(dd,2H, J=2.8Hz, 10.8Hz), 7.43(m,4H),

7.94(d,2H,J=8.0Hz), 8.20(s, lH), 8.89(t,lH, J=5.6Hz), 9.49(s,lH), 1 1.27(s,lH) 实施例 22

V-22 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-甲氨基 -IH-吲哚 -2-甲酰胺 将 5-甲氨基 -1H-吲哚 -2-甲酸（1.90g， lOmmol), 对氨甲基苯甲酸

(1.51g, lOmmol), 按通法中间体 ΙΠ的方法制备， 得白色固体 （中间体

M- 11) 2.61g。

M-l l(0.323g, 1 mmol), 邻苯二胺 (0.108g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 N，N-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g， 2 mmol), 按通法 产品 V的方法制备得白色固体 0.324g。

MS (ESI): [M+H]+=414

H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 2.83(s,3H), 4.58(d,2H,J=6.0Hz), 4.83

(s,2H),6.59(dt,lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.77(dd, lH, J=0.8Hz, 8.0Hz), 6.95(dt,

IH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 7.05(dd,lH, J=2.8Hz, 8.4Hz), 7.18(m,2H), 7.47(m,5H), 7.95(d,2H,J=8.4Hz), 9.08(t, lH, J=6.0Hz), 9.56(s,lH), 1 1.65(s,lH) 实施例 23

V-23 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -5-氨基 -IH-吲哚 -2-甲酰胺 将 5-氨基 -1H-吲哚 -2-甲酸（1.76g， lOmmol) , 对氨甲基苯甲酸

(1.51g, lOmmol), 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体 M-12(0.309g, 1 mmol)、 邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 N，N-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g， 2 mmol), 按通法 产品 V的方法制备得白色固体 0.124g。 MS (ESI): [M+H]+=400

H-NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 4.58(d,2H,J=6.0Hz), 4.62(m,2H), 4.83

(s,2H), 6.60(dt, lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.78(dd,lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 6.85(dd,lH, J=2.4Hz, 8.8Hz), 6.97(6.60(dt,lH, J=1.2Hz, 7.6Hz), 7.10(m,2H),7.18(d,lH, J=7.6Hz), 7.33(d,lH, J=8.8Hz), 7.46(d,2H,

J=8.0Hz), 7.95(d,2H, J=8.0Hz), 8.99(t, lH, J=6.0Hz), 9.56(s,lH), 1 1.38(s,lH) 实施例 24

V -24 N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基)苯并噻吩 -2-甲酰胺

将苯并噻吩 -2-甲酸（1.78g， lOmmol) , 对氨甲基苯甲酸（1.51g， lOmmol) , 按通法中间体 III的方法制备， 得白色固体 （中间体 M-13)2.54g o M-13(0.31 1g, 1 mmol), 邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g,

1 mmol), Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol), 按通法 产品 V的方法制备得白色固体 0.354g。

MS (ESI): [M+H]+=402

H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 4.51(d,2H,J=6.0Hz),

4.82(s,2H), 6.60 (t,lH, J=7.2Hz), 6.78(d,lH, J=7.2Hz), 6.92(dt,lH, J=1.2Hz, 8.0Hz), 7.11(d,lH, J=7.2Hz), 7.45(m,5H), 7.94(m,3H), 8.10(s,lH), 8.33(t,lH, J=6.0Hz), 9.57(s,lH) V-25 5-乙酰氨基 -N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺 将 5-乙酰氨基 -1H-吲哚 -2-甲酸 (2.18g， lOmmol), 对氨甲基苯甲酸

(1.51g, lOmmol), 按通法中间体 ΙΠ的方法制备， 得白色固体 （中间体

M-14)3.04g _o

M-14(0.351g, 1 mmol), 邻苯二胺 (0.108g, 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 N，N-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g， 2 mmol)， 按通法 产品 V的方法制备得白色固体 0.368g。 MS (ESI): [M+H]+=442

H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 2.10(s,3H) 4.59(d,2H,J=6.0Hz), 5.11

(s,2H), 5.77(m,lH), 7.04(dt, lH, J=1.2Hz, 9.6Hz), 7.11(s,lH) 7.49(m，5H)， 7.79

(d, lH,J=5.2Hz), 7.94(d,2H,J=8.4Hz), 8.10(s,lH), 9.10(t,lH

J=6.0Hz), 10.01 (s,lH), 9.65(s, lH), 11.65(s,lH) 实施例 26

V-26 5-乙酰基 -N-(4-(2-氨基苯氨羰基)苯基) -1H-吲哚 -2-甲酰胺 将 5-乙酰基 -1H-吲哚 -2-甲酸 (2.03g， lOmmol), 对氨甲基苯甲酸

(1.51g, lOmmol), 按通法中间体 ΙΠ的方法制备， 得白色固体 （中间体

M-15)2.84g ₀

M-15(0.336g, 1 mmol)、 邻苯二胺 (0.108g， 1 mmol)、 HBTU(0.379g, 1 mmol)、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺（10ml)、 三乙胺 (0.202g, 2 mmol)， 按通法 产品 V的方法制备得白色固体 0.31 1g。

MS (ESI): [M+H]+=427

H-NMR (400MHz, DMS0-d6) 5ppm: 2.44(s,3H) 4.58(d,2H,J=6.0Hz), 4.83 LZ

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IZSLLO/ZlOZ lD/lDd S6C000/CT0Z OAV 化合物的组蛋白去乙酰化酶体外抑制活性试验

参照 HDAC抑制剂筛选试剂盒 (Biovision 公司 /Cat: 50051 , BPS) 说明书进行。

①将待测化合物分别配制成 10μΜ、 ΙμΜ 的溶液， 检测化合物在 该浓度下的对 HDAC1酶的抑制情况。 结果如下：

表 2化合物对 HDAC1酶的体外抑制作用

V-23 78.84 0.88 67.08 9.07

V-24 67.38 0.12 59.13 1.37

V-25 76.18 1.90 53.88 2.83

V-26 70.77 2.60 59.28 0.90

V-27 80.25 2.30 47.64 4.06

V-28 77.38 3.84 53.53 4.28

② 用 DMSO 4倍倍比稀释待测化合物， 得到 10个稀释浓度， 依 次为 500 μΜ， 125 μΜ, 31.25 μΜ, 7.81 μΜ, 1.95 μΜ, 0.49 μΜ, 0.12 μΜ， 0.03 μΜ， 7.6 Ε-03 μΜ禾卩 1.9 Ε-03 μΜ。 每个稀释度做一个复孔， 检测化合物的抑酶 IC ₅ 。。 表 3 化合物对组蛋白去乙酰化酶的体外抑制 IC

HDACs HDAC1 化合物 I.D IC ₅₀ 值 (μΜ) IC ₅₀ 值 (nM)

MS-275 3.52 668

V-5 3.29 212

V-6 7.79 344

V-8 1.83 732

V-9 3.99 178

V-10 7.76 1612

V-14 4.91 330

V-15 1.04 517

V-16 3.11 276

V-17 0.92 735

V-19 1.14 414

V-20 3.77 1007

V-21 9.40 758

V-23 6.89 998

V-24 1.72 1579

V-25 1.02 301

V-26 1.37 509 V-27 1.22 276

V-28 1.31 731 实施例 30

化合物的肿瘤细胞体外抑制活性试验

测定化合物对 Hut78 T淋巴细胞白血病细胞、 JurkatE6-l 人 T细 胞淋巴瘤、 A549 人肺癌细胞、 K562 人慢性髓原白血病细胞、 Hep3B2.1-7 人肝癌细胞、 MDA-MB-435s 人乳腺癌细胞、 Colo320 人 直肠癌细胞系和 PC-3 人前列腺癌的抑制作用， IC _5Q 抑制率通过 CCK-8 法测得。 具体结果如下：

表 4. 化合物对肿瘤细胞株的体外增殖抑制作用 IC _5Q 测定

IC50 (μΜ)

化合物

PC-3 MDA-MB-435S A549 Colo320 Hep3B Hut78 K562 Jurkat E6-1

MS-275 0.5020 2.707 2.278 0.5222 6.816 0.5281 4.663 0.5614

V-5 0.242 2.636 2.450 3.461 0.0194 1.312 0.179

V-6 0.370 1.248 3.133 3.068 0.0088 2.092 0.128

V-9 2.236 14.76 21.23 15.89 3.462 17.11 2.132

V-14 3.136 1.523 0.3557 0.4369 0.4578

V-15 2.630 0.5344 9.343 2.760 2.778 2.884 1.369

V-16 86.03 3.363 1.789 6.080

V-19 0.1914 10.22 1.188 1.908

V-25 0.069 0.2953 0.877

V-26 12.17 29.92 88.405 52.172 0.2311 19.851 12.353

V-27 3.568 5.089 26.997 15.997 0.0558 2.811 1.392 实施例 31

化合物灌胃给药最大耐受量毒性试验

取 ICR小鼠 40只， 雌雄各半， 体重 18〜20g， 分为 4组， 每组 10 只动物。 禁食 6 小时后， 每组分别用灭菌塑料注射器抽取受试样品按 0.3ml/10g体积口服灌胃。 给药后 1、 2、 4小时均对动物的一般体征以 及动物的死亡情况进行记录。 给药后连续观察 14天， 每天对动物的体 重以及体征死亡情况进行观察和记录。 对死亡动物进行解剖， 观察动 物脏器有没有出现肉眼可见的病理变化， 对可疑的组织和器官进行病 理学检查。 部分实验结果如下：

化合物 V-5， V-6, V-9, V-14, V-16, V-19, V-25, V-26, V-27对小鼠灌胃给药最大耐受量均大于 2000mg/kg。 实施例 32

化合物对 hERG钾通道影响实验

表 5. 化合物对 hERG钾通道影响实验结果

实施例 33

化合物初步药代实验

表 6. 化合物初歩药代实验结果

实施例 34

片剂： 实施例 1-48的化合物

蔗糖

玉米淀粉

硬脂酸钙 制备方法： 将活性成分与蔗糖、 玉米淀粉混合， 加水湿润， 搅拌 均匀， 干燥， 粉碎过筛， 加入硬脂酸钙， 混合均匀， 压片。 每片重 200 mg , 活性成分含量为 10mg。 实施例 35

针剂： 实施例 1-48的化合物 20mg

注射用水 80mg

制备方法： 将活性成分溶解与注射用水， 混合均匀， 过滤， 将所 获得的溶液在无菌条件下分装与安瓿瓶中， 每瓶 10mg， 活性成分含量 为 2mg/瓶。