La présente invention concerne des dérivés du lupane, de formule générale :

CH-,

/

H ₃ C CH ₃

leurs sels, leur préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent .

Dans la demande de brevet japonais J 01 143 832 ont été décrits des dérivés de la bétulme de formule générale :

dans laquelle * _] et R ₂ sont hydroxy ou acyloxy et R3 est notamment méthyle. Ces dérivés sont utiles dans le domaine des anticancéreux.

Il a été maintenant trouvé que les dérivés du lupane de formule géné¬ rale (I) dans laquelle :

R représente un radical de formule générale : (CH 2-, ) n — X— (CH 2-, ) m — Y _/ (C _χ )p COOR ' ( II)

R° R° °

dans laquelle R' est un atome d'hydrogène ou de radical alcoyle,

X représente un radical carbamoyle, N-méthyl carbamoyle, aminocarbo- nyle ou N-métlιylaιnιnocdrbonyle,

y est un radical phénylène substitué de formule générale :

dans laquelle *| et R ₂ identiques ou différents représentent des atomes d'hydrogène ou d'halogène ou des radicaux alcoyle, alcoyloxy ou nitro, l'un au moins étant autre que l'hydrogène,

R° et R°° identiques ou différents sont des atomes d'hydrogène ou des radicaux alcoyle (étant entendu que chaque motif -CR ⁰ R°° n'est pas nécessairement identique au précédent) et,

n est un nombre entier de 6 à 12, m est un nombre entier de 0 à 2 et p est un nombre entier de 0 à 2 et sont tels que m + n + p soit compris entre 6 et 12,

ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables lorsqu'ils existent, manifestent un effet cytoprotecteur de cellules infectées par un virus HIV (Human Immunodefîciency Virus) ainsi qu'une activité inhibitrice de la production de transcriptase inverse d'un virus HIV.

Dans la formule générale ci-dessus, il est entendu que les radicaux alcoyle sont droits ou ramifiés et contiennent 1 à 4 atomes de carbone et que les atomes d'halogène peuvent être choisis parmi le fluor, le chlore, le brome et l'iode.

Dans les cas où R° et R ^oc sont différents, les produits de formule générale (I) présentent des formes stéréo somères, il est également

entendu que lf*; forint- _^ stéiéoisomères ainsi que leurs mélanges en¬ trent aussi dans le cadre de la présente invention.

Selon l'invention le dérivé du lupane de formule générale (I) peut être obtenu à partir d'un dérivé du lupane de formule générale :

dans laquelle R" représente un radical de formule générale (CH ₂ )n—COOH (IVa) ou (CH ₂ )n-NH—R'" (IVb)

dans lesquelles n est défini comme précédemment et R"' est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, par action respectivement d'une aminé ou d'un acide de formules générales :

R" ' -HN— (CΙ )m—Y (C)p—COOR' (Va)

/ \

R° R°° ou

IIO—CO— (CH->)m—y — (C )p—COOR' (V b)

/ \

R° R°°

dans lesquelles R°, R°°, m et p sont définis comme précédemment et R" ' est défini comme ci-dessus.

Il est entendu que les radicaux hydroxy du dérivé du lupane de for- mule générale (IV) sont de préférence protégés par des radicaux

compatibles qui peuvent être mis en place et éliminés sans toucher au reste de la molécule. De même lorsque R' est un atome d'hydrogène il est nécessaire de protéger préalablement la fonction acide du produit de formule générale (Va) ou (Vb) . A titre d'exemple les groupements protecteurs peuvent être choisis parmi les radicaux décrits par T.W. GREENE, Protective Groups m Organic Synthesis, J. WILEY- Interscience Publication (1991) ou par Me OMIE, Protective Groups in Organic Chemistry, Plénum Press (1973) . Il est notamment avantageux d'utiliser des radicaux protecteurs pouvant être éliminés simultanément. On choisira des radicaux pouvant être éliminés en milieu neutre, basique ou acide.

Notamment, les radicaux hydroxy peuvent être protégés à l'état d'es¬ ter (for yloxy, acétoxy, î.butoxy, trichloracétyloxy, phénoxyacétyl- oxy, benzyloxy) ; dans ce cas, l'élimination s'effectue par hydrolyse en milieu basique, notamment en présence de soude à une température comprise entre 10 et 50°C. La protection peut également être effec¬ tuée à l'état de cétone, sous forme de carbonate par un radical -C00R _a dans lequel R _a est un radical alcoyle ou benzyle éventuelle¬ ment substitués ou encore par un radical trialcoylsilyle; les radi- eaux protecteurs d'acide peuvent être choisis parmi les radicaux al¬ coyle (méthyle, éthyle, t.butyle) , alcoyle substitué (trichloréthyle, haloéthyle, p.toluenesulfonyl-éthyle, benzyle, benzyle substitué par un radical nitro, benzhydryle, triphénylméthyle, benzyloxymé- thyle...) , alcoyloxyalcoyle (méthoxyméthyle) , tétrahydropyranyle ou triméthylsilyle.

La réaction s'effectue selon les méthodes habituelles de condensation d'une amme sur un acide. Notamment, on opère en présence d'un accep¬ teur d'acide tel qu'une base organique azotée (trialcoylamme, pyri- dme, N-méthyl-morpholme, dιaza-1,8 bιcyclo[5. .0]undécène-7, diaza- 1,5 bicyclo[4.3.0] nonène-5 par exemple) dans un solvant organique comme un solvant chloré (dichloromethane, dichloréthane, chloroforme par exemple) ou un amide (diméthylformamide par exemple) . Il est éga¬ lement possible d'opérer en présence d'un agent de condensation tel qu'un carbodiimide (dicyclohexylcarbodnmide, chlorhydrate de 1-(3- diméthylammopropyl) -3-éthylcarbodnmιde par exemple) et éventuelle-

ment en présence d'un catalyseur tel que le N-hydroxybenzotriazole ou le N-hydroxysuccinimide, à une température comprise entre -20 et 40°C.

La condensation de 1 'drame de formule générale (Va) s'effectue de préférence à partir du chlorhydrate de l'aminé. On opère généralement sur le chlorure de l'acide ou sur un ester activé.

L'acide dérivé du lupane, de formule générale (IVa) peut être préparé par action d'un ammo acide de formule générale :

H ₂ N- (CII ₂ ) _n -C00H (VI)

dans laquelle n est défini comme précédemment et dont la fonction acide a été préalablement protégée, sur le chlorure de l'acide de formule :

H ₃ C CH ₃

suivie de l'élimination des radicaux protecteurs.

La réaction de 1 'ammo acide sur le chlorure de l'acide lupèn-20 (29)oιque-28 de formule générale (VII) s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'altèrent pas le reste de la molécule. On opère notamment en présence d'une base organique azotée telle qu'une trialcoylamme (triéthylamme par exemple) dans un solvant organique tel qu'un solvant chloré (chloroforme, dιchloro-1,2 éthane, dichloro¬ methane) ou dans le tetrahydrofurane ou dans un mélange de ces solvants, à une température comprise entre 15 et 30°C.

Le chlorure d'acide- du dérivé du lupane de formule générale (VII) peut être préparé selon les méthodes connues. A titre d'exemple, on opère par action du chlorure d'oxalyle ou du chlorure de thionyle, dans un solvant chloré comme le chloroforme, le dichloroéthane ou le dichloromethane.

La protection et la libération des radicaux protecteurs s'effectuent comme décrit précédemment

L'am o acide de formule générale (VI) peut être préparé comme décrit ci-après dans les exemples.

L'aminé dérivée du lupane, de formule générale (IVb) , pour laquelle R' ' ' est un atome d'hydrogène, peut être préparée à partir d'un dérivé du lupane de formule générale (VII) , par action d'une diamine de formule générale :

H ₂ N-(CH ₂ ) _n -NH ₂ (VIII)

dans laquelle n est défini comme précédemment .

Les dérivés (IVb) pour lesquels R' ' ¹ est un radical méthyle peuvent être obtenus par N-méthylation du produit de formule générale (IVb) pour lequel R ¹ ' ' est un atome d'hydrogène, selon la méthode de A. KATRITSKY, J. Chern. Soc. Perkin Trans. I, 2539 (1987) .

Les produits de formule générale (Va) ou (Vb) peuvent être préparés selon ou par analogie avec les méthodes décrites ci-après dans les exemples.

Les nouveaux dérivés du lupane de formule générale (I) peuvent être purifiés le cas échéant par des méthodes physiques telles que la cristallisation ou la chromatographie.

Lorsque le dérivé du lupane de formule générale (I) présente des formes stéréoisomères, la préparation s'effectue au moyen de dérivés chiraux de formule générale (Va) ou (Vb) . Il est entendu que lorsque l'on veut obtenir un intermédiaire chiral, la séparation s'effectue selon les méthodes habituelles qui n'affectent pas le reste de la

molécule, telles que par exemple la chromatographie sur phase chirale, ou par conversion du mélange racémique en diastéréoisomères et séparation par cristallisation ou chromatographie.

Lorsque le radical R' (dans R) est un atome d'hydrogène, les produits selon l'invention peuvent être transformés en sels métalliques ou en sels d'addition avec une base azotée selon les méthodes connues en soi. Ces sels être obtenus par action d'une base métallique (par exemple alcaline ou alcalino terreuse), de l'ammoniaque ou d'une am e sur un produit selon l'invention, dans un solvant approprié. Le sel formé précipite après concentration éventuelle de la solution ; il est séparé par filtration.

Comme exemples de sels pharmaceutiquement acceptables peuvent être cités les sels avec les métaux alcalins (sodium, potassium, lithium) ou avec les métaux alcal oterreux (magnésium, calcium), le sel d'am- onium, les sels de bases azotées (éthanolamme, diéthanolamme, tri- méthylamme, triéthylamine, méthylamme, propylamme, dusopropyl- amme, NN-diméthyléthanolamme, benzylamme, dicyclohexylamme, N-benzylphénéthylamine, NN'-dibenzyléthylènediamme, diphénylènedia- mme, benzhydrylam e, quinine, choline, argimne, lysine, leucine, dibenzylamine) .

Les nouveaux dérivés du lupane selon la présente invention sont par¬ ticulièrement utiles pour la prophylaxie et le traitement du SIDA (syndrome d'immunodéfîcience acquise) et de syndromes associés [ARC (AIDS related complex) ] . Par prophylaxie nous sous-entendons le trai- tement des sujets qui ont été exposés aux virus HIVs, en particulier les séropositifs asy ptomatiques qui présentent le risque de dévelop¬ per la maladie dans les mois ou les années à venir après la primoin- fection.

Les produits selon l'invention, qui sont inhibiteurs de l'effet cytopathogene du HIV et inhibiteurs de la production de transcriptase inverse en culture cellulaire à des concentrations dépourvues d'effet cytotoxique ou cytostatique, sont particulièrement intéressants.

Il a été également démontré que les produits selon l'invention sont actifs pour le traitement des affections dans lesquelles interviennent des virus de la famille des herpès.

La famille des herpès est en effet à l'origine de nombreuses affections dont certaines peuvent être très graves. Elle comprend l'Herpès simplex, le varicella-zoster, le cytomégalovirus et le virus d'Epstem-Bar . L'Herpès simπley peut varier de formes bénignes comme l'herpès labial aux formes plus sérieuses comme l'herpès génital et peut même être responsable d'encéphalites mettant la vie du patient en danger. Le varicella zoster est le virus responsable de la varicelle et du zona, il peut également être à l'origine d'affections plus graves parmi lesquelles des encéphalites. Les infections à cytomégalovirus sont en général asymptomatiques chez les sujets sains, mais peuvent devenir la cause d'infections ophtalmiques graves (retmites) pouvant conduire à la cécité, de morbidité et de mortalité chez des sujets immunodéprimés (malades atteints du SIDA ou de toute autre immunodéfîcience, par exemple après transplantation d'organes ou après chimiothérapie anticancéreuse) . Le cytomégalovirus est également responsable de manifestations cliniques sévères pour le foetus ou le nouveau-né dans le cas d'une primo-infection pendant la grossesse ou lors de la transfusion de sang séropositif à un nouveau- né séronégatif.

Les activités ont été mises en évidence dans les tests suivants :

Activité vis-à-vis de l'effet cytopathogene du virus HIV

Les produits en poudre ont été mis en solution à raison de 2 mg de produit par 2 ml (environ 4 x 10 M) dans du diméthylformamide (DMF) pour obtenir une solution stock de produit à 100 % de DMF. Le test est réalisé sur la lignée lymphoblastoide CEM 4. Dans une microplaque de 96 puits on dépose 25 μl/puits d'une solution de produit à tester dans du tampon phosphate isotonique (TPI) ou de TPI seul dans le cas des contrôles. Les produits sont étudiés à 8 concentrations, à raison de 6 puits par concentration. On ajoute alors 125 μl d'une suspension

4 de cellules CEM (8 x 10 cellules par ml) dans le milieu RPMI contenant 10 % de sérum de veau foetal, 100 Ul/ml de pénicilline, 100

μg/ml de stîeptomyc e et 2 μmoles/ml de glutamine et les microplaques sont incubées une heure à 37°C, sous une atmosphère contenant 5 % de gaz carbonique. Pour chaque concentration, l'essai est partagé en deux parties : une partie (3 puits) sur cellules - fectées, pour la détermination de l'activité antivirale et l'autre partie (3 puits) sur cellules non infectées, pour déterminer la cy- totoxicité des produits. On infecte alors la première série avec HIV-1 (100 μl par puits d'une suspension de virus LAV-1-BRU contenant 200-300 TCID50) tandis que l'autre série reçoit 100 μl de milieu RPMI tel que défini précédemment. Au bout de 5 jours d'incubation, 100 μl de cellules sont prélevés pour mesurer la viabilité cellulaire [déterminée selon une modification de la technique décrite par R. PAUWELS et coll., J. VIROL. Meth., 2__ , 309-321 (1988)] . On ajoute à ce prélèvement 10 μl d'une solution contenant 7 mg de MTT [bromure de 3- (4, 5-dιméthyl 2-thιazolyl) -2, 5-dιphényltétrazolιum] par ml de tampon phosphate îsotonique. Après 3 heures d'incubation à 37°C le surnageant est enlevé. Le MTT est converti en un sel de formazan (bleu) uniquement à l'intérieur des cellules vivantes. On ajoute alors 100 μl d' îsopropanol (contenant 0,04 mole/1 d'acide chlorhy- drique) et les microplaques sont agitées jusqu'à la solubilisation du bleu de formazan. L'absorbance à 540 nm est lue avec un lecteur au¬ tomatique de réactions ELISA en microplaques. Cette absorbance est proportionnelle à la quantité de cellules vivantes.

Le taux de protection (en %) d'un produit donné est déterminé à partir des densités optiques (DO) par la formule :

DO(cell. traitées et inf.) -DO(cell. non traitées et inf.)

DO(cell. traitées et non inf.) -DO(cell. non traitées et inf. )

Le cas échéant la concentration inhibitrice 50 % est déterminée.

Les résultats démontrent que pour des concentrations de produit testé comprises entre 0,01 et 10 μg/ml, on obtient une diminution signifi¬ cative de l'effet cytopathogene.

Le taux de protection procuré par les produits selon l'invention est compris entre 20 et 100 %.

La concentration înhibitrice 50 % des produits selon l'invention est comprise entre 0,05 et 50 μg/ml lorsqu'elle peut être déterminée.

Détermination multiplication virale Ώ___: dosage de la transcriptase inverse du virus HIV

L'activité de la transcriptase inverse est mesurée dans 10 μl de surnageant de cultuie. A l'aide du kit de dosage poly r (A) reverse transcriptase [-- ll-SPΛ enzyme assay (RPQN 0100, Amersham, GB) selon la procédure piéconisée par le fabricant. Le temps de réaction est de 6 heures et la radioactivité comptée à l'aide d'un compteur microbeta [TOPCOUNT PACKARD] .

On observe des inhibitions de la production de transcriptase inverse associée au virus, comprises entre 20 et 100 % aux concentrations testées (0,01 à 10 μg/ml) .

Action sur le*-- virus de la famille des herpès :

L'action de^ dérivés de- formule générale (I) sur les virus de la famille des herpès a été mise en évidence dans la technique décrite par NEYTS et coll., Virology, __!__., 41-50 (1990).

La technique employée consiste dans la mesure de l'effet cytopathogene du virus et de sa protection par utilisation des produits de formule générale (I) . L'activité antivirale est appréciée par la mesure de la CE-^Q (concentration nécessaire pour inhiber 50 % de l'effet cytopathogene- induit par le virus) .

Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la présente invention.

Exemple 1

A une solution 1 g d'acide N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-

3 3 am ooctanoiqut- dan- ^' .. 30 cm de dichloromethane, on ajoute 1 , 15 cm de chlorure de thionyl-≈. La solution est agitée 15 heures à une tempéra¬ ture voisine d<= 20°C puis le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le

résidu obtenu (1,05 g) et 695 mg de chlorhydrate de 5-amιno-2-chloro- benzoate de méthyle sont mis en suspension dans 50 cm de dichlorome¬ thane puis on ajoute 0,44 cm de triéthylamine. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le mélange reactionnel est concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi-

3 sine de 45°C. Au solide résiduel, on ajoute 25 cm d'acétate

3 d'éthyle. L'insoluble est filtré et rincé par au total 25 cm d'acé¬ tate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le solide obtenu (1,06 g) est chromatographie sur une colonne de 4 cm de diamètre et 40 cm de haut de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 95:5 (en volumes), en

3 recueillant des fractions de 25 cm . Les 35 premières fractions sont éliminées, et l'éluant est remplacé par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 90:10 (en volumes) en recueillant des fractions

3 de 25 cm . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient 380 mg de N' - [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -

8-amιnooctanoyl] -3-amιno-6-chloro benzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,10 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 95:5 en volumes) .

3 0,45 cm de soude 5N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N' - [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -

3 3-amιno-6-chloro benzoate de méthyle dans 4,6 cm de méthanol et

2,3 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis on ajoute 50 cm d'eau distillée. Après 1 heur :ee 3 d'agitation, le solide est séparé par filtration et rincé par 50 cm ^" au total d'eau distillée puis séché à l'air. Le solide est rais en

3 3 suspension dans 20 cm d'eau distillée, filtré et rmcé par 50 cm au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 285 mg d'acide N'- [N- (3β-hydroxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -3-ammo-6-chloro benzoïque fondant à une température voisine de 135-40°C (pâteux) .

L'acide N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoιque peut être préparé de la manière suivante :

Après avoir chauffé au reflux pendant 3 heures un mélange de 330 mg d'acide 8-ammooctanoιque et 410 mg de chlorotriméthylsilane dans 50 cm ³ de dichloromethane, la solution est refroidie vers 20°C et on a _j oute 1 g de chlorure de 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyle (préparé à partir d'acide 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oιque) puis 0,81 cm ³ de triéthylam e. L'agitation est maintenue pendant 15 heures à une température voisine de 20°C et le solvant est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35 ^C C. Le résidu est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle (60-40 en volumes) . Les fractions contenant le produit sont rassemblées et concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,1 g d'acide N- (3β-acétoxylup- 20 (29) -èn-28-oyl) -8-ammooctanoιque sous la forme d'un meringue blanche (Rf = 0,4 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : cyclohexane, acétate d'éthyle (60-40 en volumes)).

Le 5-ammo-2-chlorobenzoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante :

3 A 100 cm de méthanol refroidis a une température voisine de -20°C, ajouter en 1 minute, 1 , 5 cm de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 5 minutes à une température voisine de -20°C puis on ajoute

1,72 g d'acide 5-amιno-2-chlorobenzoιque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 30 minutes et maintient l'agitation

15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est chauffé 6 heures à une température voisine du reflux. Le mélange est ramené à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 20°C. Le

3 solide obtenu est repris par 50 cm de diéthyléther, filtré, rincé par 60 cm au total de diéthyéther puis séché à pression atmosphé¬ rique. On obtient ainsi 2,6 g de chlorhydrate de 5-ammo-2-chloroben- zoate de méthyle sous la forme d'un solide blanc.

Exemple 2

A une solution de 1,3 g d'acide H- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) 8-

3 3 aminooctanoique dans 6 cm de tetrahydrofurane et 0,282 cm de trié- thylamme refroidie à une température voisine de -10°C, on ajoute en 10 minutes 0,273 cm de chloroformiate d'isobutyle. Le mélange reac¬ tionnel est agité 30 minutes à une température voisine de -10°C puis on ajoute goutte à goutte en 15 minutes une solution de 440 mg de chlorhydrate de 2-ammo-5-fluorobenzoate d'éthyle dans 6 cm de dioxane et 2 cm d'eau distillée maintenant la température voisine de -10°C. Le mélange reactionnel est agité 48 heures à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine dp 40"C. Le résidu obtenu est repris par

3 3

20 cm de dichloromethane et lavé successivement par 20 cm d'eau distillée, une solution aqueuse d'acide méthanesulfonique 1N puis 3 fois par 20 cm d'eau distillée. La phase organique est sechée sur sulfate de sodium puis concentrée à sec sous pression réduite

(2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le solide résiduel (1,6 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) , éluée avec un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 97-3 (en volumes) , les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 550 mg de N'- [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-

28-oyl) -8-ammooctanoyl] -2-ammo-5-fluorobenzoate d'éthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,20 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 97:3 en volumes) .

3 1,75 cm de soude 4N sont ajoutes en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N' - [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -

3 3

2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle dans 3 cm de méthanol et 6 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant

15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température

3 voisine de 30°C. Le résidu est repris par 30 cm d'eau distillée est

3 acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide de 2,2 cm d'acide chlorhy- drique 5N. Après 1 heure d'agitation, le solide est séparé par filtra-

tion et rincé par 30 cm au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On ob¬ tient ainsi 465 mg d'acide N' - [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8- ammooctanoyl] -2-ammo-5-fluorobenzoïque fondant à une température voisine de 145°C.

Le 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle peut être obtenu de la manière suivante :

Dans une solution de 3, 1 g d'acide 2-ammo-5-fluoro benzoïque dans 50 cm d'éthanol à une température voisine de 40°C, on fait passer durant approximativement 20 minutes un courant d'acide chlorhydrique gazeux de manière à obtenir une solution saturée, puis on chauffe 3 heures à une température voisine du reflux. Le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide pâteux obtenu est repris par un mélange de

3 3 20 cm d'éthanol et de 100 cm d'oxyde d' îsopropyle, puis refroidi à une température voisine de 5°C. Le solide est séparé par filtration, lavé par 60 cm au total d'oxyde d'isopropyle et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 30°C. On obtient ainsi

3,54 g de chlorhydrate de 2-amιno-5-fluorobenzoate d'éthyle sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 120°C.

Exemple 3

A une solution de 2 g d'acide N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-

3 3 am ooctanoique dans 60 cm de dichloromethane, on ajoute 2,30 cm de chlorure de thionyle. La solution est agitée 15 heures à une tempéra- ture voisine de 20°C puis le mélange reactionnel est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu obtenu (2,10 g) et mis en suspension dans 60 cm de dichloro¬ methane, puis 1,16 g de 3-amιno-4-chlorobenzoate de méthyle sont ajoutés. Après 15 heures d'agitation à une température voisine de 20°C, le mélange reactionnel est concentré sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Au solide résiduel, on ajoute 50 cm d'acétate d'éthyle. L'insoluble est filtré et rincé par

3 au total 50 cm d'acétate d'éthyle. Le filtrat est concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 45°C. Le

solide obtenu (2,07 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle 93:7 (en volumes) . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempéra- ture voisine de 40°C. On obtient 540 mg de N"- [N- (3β-acétoxy-20 (29) - lupèn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl] -3-ammo-4-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,22 ; chromatographie sur couche miiiotr ,ιhιr , éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 93:7 en volumes) .

3 0,66 cm de soude 5N sont ajoutés en 5 minutes environ à une solution de 370 mg de N' - [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8-ammooctanoyl) - 3-amιno-4-chlorobenzoate de méthyle dans 6,6 cm de méthanol et 3,3 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pen¬ dant 15 heures à une température voisine de 20°C, acidifié à un pH voisin de 2 à l'aide d'acide chlorhydrique 5N puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. Le résidu est repris par 20 cm d'eau distillée après 1 heure d'agita¬ tion à une température voisine de 20°C. Le solide est séparé par fil- tration et rincé par 50 cm au total d'eau distillée puis séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ob¬ tient ainsi 450 mg d'acide N' - [N- (3β-hydroxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -8- aminooctanoyl] -3-ammo-4-chlorobenzoιque fondant à une température voisine de 135-1 0°C (pâteux) .

Le 3-amιno-4-chloro! ^* v*nzoate de méthyle peut être obtenu de la manière suivante :

A 100 cm de méthanol refroidis à une température voisine de -20°C,

3 on ajoute en 1 minute, 1,5 cm de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue 5 minutes à une température voisine de -20°C puis on ajoute 1,72 g d'acide 3-ammo-4-chlorobenzoïque. On laisse revenir à une température voisine de 20°C en 30 minutes et on maintient l'agitation 15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel est chauffé 3 heures à une température voisine du reflux.

Le mélange est ramené à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température

3 voisine de 20°C. Le solide obtenu (2,25 g) est repris par 50 cm de

3 , diéthyléther , filtre, rince par 40 cm au total de diethyether puis séché sous pression atmosphérique. On obtient ainsi 2,09 g de chlorhydrate de 3-ammo-4-chlorobenzoate de méthyle sous la forme d'un solide blanc. Le chlorhydrate est mis en solution dans un

3 3 mélange de 50 cm d'eau distillée, 5 cm d'hydroxyde de sodium 2N et

3 50 cm d'acétate d'éthyle. La phase aqueuse est décantée, la phase aqueuse est extraite pai 2 ^r -> cm d'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de magnésium puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 1,71 g de 3-ammo-4-chlorobenzoate de méthyle.

Exemple 4

A une solution de 1 g de N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amι-

3 nooctanoique, dans 100 cm de dichloromethane, on ajoute 300 mg de 3- amιno-4-méthylbenzoate de méthyle, 240 mg d'hydrate de 1 -hydroxyben- zotriazole, 610 mg de chlorhydrate de 1 - (3-dιméthylamιnopropyl)-3- éthylcarbodumide et 0,67 cm de triéthylam e. La solution est agi¬ tée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le sol- vant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40 ^C C. On ajoute 50 cm d'eau distillée et 50 cm d'acétate d'éthyle. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 75 cm au total d'acétate d'éthyle. Les extraits orga¬ niques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,8 g) est chromatographie sur une colonne de 5,5 cm de diamètre contenant 240 g de silice (0,02- 0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acé¬ tate d'éthyle 9-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm . Les 43 premières fractions sont éliminées; les 37 suivantes sont ré¬ unies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempéra¬ ture voisine de 40°C. On obtient ainsi 950 mg de N' - [N- (3β-acétoxy- lup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl) -3-ammo-4-méthylbenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,18 ; chromato-

graphie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène- acétate d'éthyle (9-1 en volumes)).

Une solution de 950 mg de N'- [N- (3β-acétoxylup-20(29) -èn-28-oyl)-8- aminooctanoyl] -3-ammo-4-méthylbenzoate de méthyle, 1,4 cm-- de soude 5N, 6 cm**- de t trahydrofurane et 12 cm-- de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25°C puis 1,5 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm3 d'eau distillée sont ajoutés. Après 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm*** au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 720 mg d'acide N'- [N- (3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl)-8-amι- nooctanoyl] -3-amιno-4-méthylbenzoιque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 155°C.

Exemple 5

Une solution de 420 mg d'acide 3-ammo-2-méthylbenzoique et 0,71 cm

3 de chlorotriméthylsilane dans 30 cm de dichloromethane est chauffée au reflux pendant 3 heures, puis refroidie à une température voisine

3 de 25°C. A cette solution, on ajoute successivement 30 cm de dichloromethane, 1,5 g d'acide N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl)-8- a mooctanoique, 360 mg d'hydrate de 1 -hydroxybenzotriazole, 900 mg de chlorhydrate de 1 - (3-dιméthylamιnopropyl) -3-éthylcarbodnmιde et

3 1,47 cm de triéthylamme. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le solvant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (4,5 g) est chromatographie sur une colonne de 6 cm de diamètre contenant 240 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de chlorure de méthylène, d'acétate d'éthyle et de méthanol 9-9-1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm . Les 7 premières fractions sont éliminées; les 43 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 780 mg d'acide N'- [N- (3β-acétoxylup-20(29)- èn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl] -3-ammo-2-méthylbenzoιque, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,1 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle-méthanol (9-9-1 en volumes) ) .

Une solution de 780 mg d'acide N' - [N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28- oyl) -8-amιnooctanoyl] -T-amιno-2-méthylbenzoιque, 0,7 cm de soude 5N, 5 cm de tétrahydrofui ne et 10 cm de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25°C puis 1,0 cm d'acide chlorhydrique

3 5N et 10 cm d'eau distillée sont ajoutés. Apres 30 minutes sous agi-

3 tation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché à l'air. Le résidu obtenu (650 mg) est chro¬ matographie su ^* , une colonne de 3,5 cm de diamètre contenant 115 g de silice (0,02-0,045 mm), éluée avec un mélange de méthanol et d'acé- tate d'éthyle 1-19 en volumes en recueillant des fractions de 50 cm . Les 3 premières fractions sont éliminées ; les 4 suivantes sont ré¬ unies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempéra¬ ture voisine de 40°C. On obtient ainsi 570 mg qui sont purifiés une nouvelle fois par chromatographie (colonne de 3,5 cm de diamètre, 100 g de silice (0,02-0,045 mm), éluant : acétate d'éthyle, volume des fractions : 75 cm ). Les 19 premières fractions sont éliminées ; les 31 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite

(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Les 190 mg obtenus sont

3 3 dissous dans 1 cm de méthanol et additionnés de 20 cm d'eau distil- lée. Le solide obtenu est séparé par filtration et lavé par 100 cm 3 d'eau distillée. On obtient ainsi 330 mg d'acide N'- [N- (3β-hydroxy- lup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnooctanoyl] -3-amιno-2-méthylbenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 152°C.

Exemple 6

A une solution de 1 g d'acide N- (3β-acétoxylup-20 (29)-èn-28-oyl) -8- ammooctanoique, dans 100 cm ³ de dichloromethane, on ajoute 330 mg de 3-amιno-4-méthoxybenzoate de méthyle, 240 mg d'hydrate de 1-hydroxy- benzotriazole, 610 mg de chlorhydrate de 1- (3-dιméthylamιnopropyl) -3- éthylcarbodumide et 0,67 cm3 de triéthylamme. La solution est agi- tée pendant 12 heures à une température voisine de 20°C puis le sol¬ vant est éliminé sous presssion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute 50 cm3 d'eau distillée et 50 cm ³ d'acétate d'éthyle. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 75 cm ³ au total d'acétate d'éthyle. Les extraits orga- niques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium anhydre et

concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,6 g) est chromatographie sur une colonne de 5 cm de diamètre contenant 210 g de silice (0,02- 0,045 mm) , éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acé- tate d'éthyle 1 -1 en volumes en recueillant des fractions de 75 cm3. Les 67 premières fractions sont éliminées; les 63 suivantes sont ré¬ unies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une tempéra¬ ture voisine de 40°C. On obtient ainsi 780 mg de N' - [N- (3β-acétoxy- lup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -3-ammo-4-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,18 ; chromato¬ graphie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène- acétate d'éthyle (19-1 en volumes)) .

Une solution de 780 mg de N' - [N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- aminooctanoyl) -3-ammo-4-méthoxybenzoate de méthyle, 1,4 cm ³ de soude 5N, 5 cm ³ de tetrahydrofurane et 10 cm3 de méthanol est agitée 24 heures à une température voisine de 25 ^C C et on ajoute 2,0 cm3 d'acide chlorhydrique 5N et 10 cm ³ d'eau distillée. Après 30 minutes sous agitation, le solide est séparé par filtration, lavé par 50 cm ³ au total d'eau distillée et séché à l'air. On obtient ainsi 650 mg d'acide N'- [N- (3β-hydroxylup-20(29)-èn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -3- ammo-4-méthoxybenzoique, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 138°C.

Exemple 7

A une solution, refroidie à -10°C, de 1,96 g de N- (3β-acétoxylup- 20 (29) -èn-28-oyl) -8-ammooctanoique, dans 9 cm de tétrahydrofuranne et 0,45 cm de triethylamme, on ajoute 0,3 cm de chloroformiate d'isobutyle. L'agitation est maintenue pendant 30 minutes et on ajoute goutte a goutte une solution de 597 mg de 4-amιno-3-méthoxy-

3 3 benzoate de méthyle dans 9 cm de dioxane et 3 cm d'eau distillée. La solution est agitée pendant 12 heures à une température voisine de

3 3

20°C puis on ajoute 80 cm d'eau distillée et 20 cm de chlorure de méthylène. La phase organique est extraite et la phase aqueuse est épuisée par 40 cm au total de chlorure de méthylène. Les extraits organiques sont rassemblés, séchés sur du sulfate de magnésium an-

hydre et concentrés à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une tem¬ pérature voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,74 g) est chromatogra¬ phie sur une colonne de 2,5 cm de diamètre contenant 50 g de silice (0,02-0,045 mm) , éluée avec un mélange de chlorure de méthylène et d'acétate d'éthyle 19-1 en volumes en recueillant des fractions de

3 5 cm . Les 73 premières fractions sont éliminées ; les 80 suivantes sont réunies et concentrées sous pression réduite (20 mm de mercure;

2,7 kPa' a une tempeiature voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,18 g de N' - [N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -4-amιno-3- méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une meringue blanche

(Rf = 0,41 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chlorure de méthylène-acétate d'éthyle (19-1 en volumes)) .

Une solution de 420 mg de N' - [N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-

3 ammooctanoyl] - -ammo-3-methoxybenzoate de méthyle, 1,3 cm de soude

3 3 4N, 3,5 cm de tetrahydrofurane et 2 cm de méthanol est agitée

24 heures à une température voisine de 25°C puis le solvant est éva¬ poré à sec, sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est dilué dans 20 cm d'eau distillée et on ajoute

3 2 cm d'acide chlorhydrique 4N. Après 1 heure sous agitation, le so- lide obtenu est séparé par filtration, lavé par 50 cm au total d'eau distillée et séché sous pression réduite (15,5 Pa) à une température voisine de 35°C. On obtient ainsi 172 mg d'acide N' - [N- (3β-hydroxy- lup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-ammooctanoyl] -4-amιno-3-méthoxybenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 133°C.

Exemple 8

A une solution de 2 g de N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amι-

3 3 nooctanoique, dans 100 cm de dichloromethane, on ajoute 2,13 cm de chlorure de thionyle. L'agitation est maintenue pendant 15 heures puis le solvant est évaporé sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On ajoute au résidu une solution de 1,51 g de 4-ammo-5-chloro-2-methoxybenzoate de méthyle et 0,84 cm 3 de triethylamme dans 100 cm de dichloromethane. La solution est agitée pendant 15 heures à une température voisine de 20°C puis on ajoute 100 cm d'eau distillée. La phase organique est extraite, la-

vée 2 fois par 100 cm d'eau distillée, séchée sur du sulfate de ma¬ gnésium anhydre et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40 ^U C. Le résidu obtenu (3,2 g) est chroma¬ tographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée avec un mélange de cyclohexane et d'acétate d'éthyle 70-30 en volumes. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pres¬ sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,7 g de H' - [N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8-amιnoocta- noyl] -4-amιno-5-chloro-2-méthoxybenzoate de méthyle, sous la forme d'une poudre blanche fondant vers 156°C.

Une solution de 1,7 g de N' - [N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -8- aminooctanoyl] -4-amιno-5-chloro-2-méthoxybenzoate de méthyle,

3 3 3

25,5 cm de soude 5N, 25,5 cm de tetrahydrofurane et 51 cm de mé¬ thanol est agitée 15 heures à une température voisine de 20°C. Le

3 mélange reactionnel est dilué par 20 cm de méthanol puis acidifié

3 par de l'acide chlorhydrique 2N. On ajoute 200 cm d'eau distillée et après 2 heures sous agitation, le solide obtenu est séparé par fil¬ tration, lavé jusqu'à neutralité par de l'eau distillée et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. La poudre obtenue est chromatographiée sur une colonne de silice (0,02- 0,045 mm) éluée avec de l'acétate d'éthyle. Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite

(2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu est repris par

3 3

10 cm d'éther éthylique, filtré, lavé par 5 cm d'éther éthylique et séché sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de

20°C. On obtient ainsi 120 mg d'acide N' - [N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-

28-oyl) -8-ammooctanoyl] -4-ammo-5-chloro-2-méthoxybenzoïque, sous la forme d'un solide blanc fondant vers 164°C.

Exemple 9

A une suspension de 383 mg d'acide 3-méthoxycarbonyl-5-nitro ben- zoïque dans 20 cm ³ de dichloromethane, on ajoute 260 mg d'hydrate de

1-hydroxybenzotriazole et 916 mg de N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-

3 oyl) -1 , 7-dιammoheptane dans 20 cm de dichloromethane. A la solutior obtenue, on ajoute successivement 844 mg de chlorhydrate de 1-(3-

3 diméthylammopropyl) -3-éthylcarbodnmιde puis 0,87 cm de

3 triethylamme en solution dans 20 cm de dichloromethane. La solution est agitée à une température voisine de 20°C durant 15 heures puis le mélange reactionnel est lavé 3 fois avec 20 cm d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de sodium est concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur une colonne de silice ιU, U2-0, 04 mm) éluée avec du dichloromethane. Les 120 fractions de 2 cm sont éliminées et l'éluant est remplacé par un mélange de dichloromethane et d'acétate d'éthyle (8:2) (en volumes) . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 740 mg de N- [ (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -7- aminoheptylcarbamoyl] -5-nιtrobenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,80 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - acétate d'éthyle 8:2 en volumes) .

3 9 cm de soude N sont ajoutes en 5 minutes environ a une solution de

740 mg de 3- [N- (3β-acétoxy-20 (29) -lupèn-28-oyl) -7-ammoheptylcarba-

3 3 moyl] -5-nιtrobenzoate de méthyle dans 4 cm de méthanol et 9 cm de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité pendant

15 heures à une température voisine de 20°C. Le mélange reactionnel

3 est acidifié à un pli voisin de 2 à l'aide 4 cm d'acide chlorhydrique

4N. Après 1 heure d'agitation, on ajoute 100 cm d'eau distillée et

50 cm de dichlorom thane. La phase organique est décantée, la phase

3 aqueuse est extraite par 50 cm de dichloromethane. Les phases orga¬ niques réunies sont séchée sur sulfate de sodium, puis concentrées à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide obtenu (360 mg) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02-0,045 mm) éluée par un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24:6:1 (en volumes) , en recueillant des fractions de 5 cm Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi¬ sine de 35°C. On obtient 170 mg d'acide 3- [N- (3β-hydroxy-20 (29) -lu- pèn-28-oyl) -7-am oheptylcarbamoyl] -5-nιtrobenzoιque fondant à une température voisine de 118°C.

Le N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 , 7-diaminoheptane peut être obtenu de la manière suivante :

3 1000 cm d'une solution dans le dichloromethane de chlorure de 3β- acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyle (préparée à partir de 30 g d'acide 3β- acétoxylup-20 (29) -èn-28-oïque) sont ajoutés goutte à goutte en envi¬ ron 10 heures à une solution de 46,8 g de 1 , 7-diaminoheptane dans

120 cm 3 de dichloromethane. Le mé ,lange re ,actionnel est agite durant

15 heures à une température voisine de 20°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40 ^C C. Le ré-

3 sidu est repris par 2000 cm d'eau distillée. Le solide est filtré,

3 lavé par 3 fois 200 cm d'eau distillée, puis mis en solution dans

500 cm d'éthanol. La solution est filtrée, le solide est lavé 2 fois avec 50 cm d'éthanol et les filtrats sont évaporés à sec sous pres¬ sion réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 50°C. Le résidu obtenu est chromatographie sur colonne de silice (0,02-0,045 mm) , éluée avec un mélange de chloroforme, méthanol et ammoniaque à 20 % (24-6-1 en volumes) . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voi¬ sine de 40°C. On obtient ainsi 28 g de N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28- oyl) -1 ,7-diaminoheptane sous la forme d'une meringue jaune. (Rf = 0,25 ; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant : chloro- forme-méthanol-a moniaque à 20 % (24-6-1 en volumes) ) .

Le chlorure de 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyle est préparé d'après J. PROVITA et Λ. VYSTRCIL, Collect . Czech. Chem. Commun., Al, 1200 (1976) .

Exemple 10

En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β- hydroxylup-20 (29) -en-28-oyl] -8-ammooctanoyl}-4-amino-2-hydroxyben- zoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28- oyl] -8-aminooctanoïque et de 4-amino-2-hydroxybenzoate de méthyle, pF=206°C, (28%) .

L'acide 3β-acétoxyluρ-20 (29) -èn-28-oyl] -8-aminooctanoïque peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .

Le 4-amιno-2-hydroyybeιιzoate de méthyle peut être préparé selon D.J. Drain, D.D. Martin, B.W. Mitchell, D.E. Seymour et F.S. Spnng, J. Chem. Soc, 1498-1503 (1949) .

Exemple 11

En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β- hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-amιnooctanoyl)-4-amιno-2- chlorobenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup- 20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoιque et de 4-ammo-2-chlorobenzoate de méthyle, pF=165°C, (54%) .

L'acide 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoique peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .

Le 4-aπuno-2-cl_loro]-.enzoate de méthyle peut être préparé selon M. Rubm, U.C. Mark-,, Il. ishmsky et Λ. Lanzilotti, J. Am.Chem. Soc, 68, 623-24 (1946) .

Exemple 12

En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β- hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoyl}-3-amιno-2- hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup- 20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoιque et de 3-amιno-2-hydroxybenzoate de méthyle, pF=132°C, (22%) .

L'acide 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoique peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .

Le 3-ammo-2-hydroxybenzoate de méthyle peut être préparé selon A. Emborn et B. Pfyl J. Liebig's Ann. Chem., 311, 34-73 (1900) .

Exemple 13

En opérant par analogie avec l'exemple 1, l'acide N-{N-[3β- hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoyl}-5-ammo-2- hydroxybenzoïque a été préparé à partir de l'acide 3β-acétoxylup- 20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoιque et de 5-ammo-2-hydroxybenzoate de méthyle, (6%) .

L'acide 3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -8-ammooctanoιque peut être obtenu comme décrit dans l'exemple 1 .

Le 5-ammo-2-hydroyybenzoate de méthyle peut être préparé selon F. Wessely, K. Benedikt et 11. Benger, Monat . Chem., 80, 197-201 (1949) .

Exemple 1

A une solution de 310 mg d'acide 5-méthylιsophtalιque dans 55 cm ^*5 de dichloromethane, on ajoute 0,50 cm ^*5 de triethylamme et 0,15 cm-3 de chlorure d'oxalyle. Après 20 minutes d'agitation à une température voisine de 25°C, on ajoute une solution de 910 mg de N-(3β- acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 , 7-dιamιnoheptane dans 10 cm* ³ de dichloromethane. La solution est agitée à une température voisine de 20°C durant 5 heures puis le mélange reactionnel est lavé avec 20 cm ^* - ⁵ d'une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 0,5N et 60 cm ^*3 d'eau distillée. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de magnésium et concentrée à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (1,1 g) est chromatographi sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes) . Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 400 mg d'acide N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn- 28-oyl) -3- (7-ammoheptylcarbamoyl) -5-méthylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,37; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 19:1 en volumes) .

1 cm ^**5 de soude 5N sont ajoutés à une solution de 400mg d'acide N-(3β- acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) - . - (7-ammoheptylcarbamoyl) -5-méthyl-

^"* '-ï benzoïque dans 40 cm ⁵ de méthanol et 20 cm- ⁵ de tetrahydrofurane et le mélange reactionnel est agité 38 heures à une température voisine de

20°C. Le mélange reactionnel est acidifié à un pH voisin de 2 par de l'acide chlorhydrique concentré. Après une heure d'agitation, on ajoute 150 cm-- d'eau distillée. Le solide est filtré et rincé par 25 cm*- ⁵ d'eau distillée. Le solide est dissout dans 30 cm ^* - ⁵ de chloroforme, séché sur du sulfate de magnésium, puis évaporé sous pression réduite- (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On

obtient ainsi 250 mg d'acide N- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -3- (7- ammoheptylcarbamoyl) -5-méthylbenzoique sous la forme d'un solide blanc fondant à une température voisine de 180°C.

Le N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 ,7-dιammoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.

Exemple 15

En opérant par analogie avec l'exemple du RPR107926 (Exemple 9 de ST93023) , l 'acide M- (3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -3- (7-ammo- heptylcarbamoyl) -5-bromobenzoιque a été préparé à partir de N-(3β- acétoxylup-20(29)-èn-28-oyl) -1 ,7-dιammoheptane et d'acide 3-bromo-5- méthoxycarbonylbenzoique, pF=121°C, (31%).

Le N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 ,7-dιammoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.

L'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière ci-dessous. Une suspension de 5 g de 3-bromoιsophtalate de méthyle dans 20 cm* ³ d'une solution 0,50 N d'hydroxyde de baryum est agitée 20 heures à une température voisine de 20°C. Le solide est filtré, lavé avec 5 cm ^*3 de méthanol puis traité par 20 cm* ³ d'acide chlorhydrique 4N. La phase aqueuse est extraite par 40 cm* ³ de diéthylether. Les phases organiques réunies sont lavées par 40 cm* ³ d'eau distillée, séchée sur du sulfate de magnésium, puis évaporées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le solide obtenu (2,19 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque 24-6-1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 1,65 g d'acide 3-bromo-5-méthoxycarbonylbenzoique sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,80; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant: chloroforme, méthanol et ammoniaque 24-6-1 (en volumes) .

Fypmnl 16

En opérant par analogie avec l'exemple 9, l'acide N- (3β-hydroxylup- 20 (29) -èn-28-oyl) -4- (7-ammoheptylcarbamoyl) -2-fluorobenzoïque a été préparé à partir de N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 , 7-dι- am oheptane et d'acide 3-fluoro-4-méthoxycarbonylbenzoιque, pF=150°C, (32%) .

Le N- (3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 , 7-dιammoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.

L'acide 3-fluoro-4-méthoxycarbonylbenzoιque peut être préparé de la manière suivante:

Une solution de 2,5 g de fluoro téréphtalate de diméthyle et de 11,8 cm* ³ d'hydroxyde de sodium 1N dans 30 cm ^*3 de méthanol est portée durant 90 min. à une température voisine du reflux. Le milieu reactionnel refroidi à une température voisine de 25°C est acidifié par 12 cm- ³ d'acide chlorhydrique IN. Le solide blanc formé est filtré, lavé par moyen de 100 cm ^*3 d'eau distillée puis mis en solution dans 100 cm ⁵ d'acétate d'éthyle. La phase organique est séchée sur sulfate de- magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (520 mg) est recristallise successivement dans le 1 , 2-dιchloroéthane et dans l'eau. On obtient ainsi 230 mg d'acide 3-fluoro-4- éthoxycarbonylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,49; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 17:3 en volumes) .

Exemple 17

En opérant par analogie avec l'exemple 9, l'acide 5-(t- butyloxycarbonylammo) -3-{N- [3β-hydroxylup-20 (29) -èn-28-oyl] -7- aminoheptylcarbamoyl) benzoïque a été préparé à partir de N-(3β- acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 , 7-dιammoheptane et d'acide 5-(t- butyloxycarbonyla mo) -3-méthoxycarbonylbenzoιque, pF=180-90°C, (38%) .

Le N-(3β-acétoxylup-20 (29) -èn-28-oyl) -1 ,7-dιaminoheptane peut être obtenu comme décrit à l'exemple 9.

L'acide 3- (t-butyloxycarbonylammo) -5-méthoxycarbonylbenzoïque peut être préparé de la manière suivante: Une solution de 2 g de 3-(t- butyloxycarbonylammo) -5-méthoxycarbonylbenzoate de méthyle et de 428 mg d'hydroxyde de potassium dans un mélange de 40 cm ^*3 de méthanol et de 5 cm ³ de di éthylformamide est agitée 20 heures à une température voisine de 25°C puis 20 heures à une température voisine de 50°C. Le illieu reactionnel est évaporé à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C puis repris par 150 cm* ³ d'eau distillée et acidifié à pH = 2 au moyen d'acide chlorhydrique 4N. La suspension obtenue est extraite au moyen de 200 cm- ³ d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée par 200 cm* ³ d'eau distillée. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (3,4 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec un mélange de dichloromethane et de méthanol 9:1 (en volumes). Les fractions contenant le produit sont réunies et concentrées sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 2,4 g acide 3-(t- butyloxycarbonylammo) -5-méthoxycarbonylbenzoïque sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,34; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane - méthanol 9:1 en volumes).

A une solution de 5 g de 5-amιnoιsophtalate de diméthyle et de 24 cm* ³ d'hydroxyde de sodium 2N, refroidie à 5°C, on ajoute goutte à goutte en approximativement 30 mm. une solution de 6,27 g de carbonate de di tert-butyle dans 12 cm- ³ de tetrahydrofurane. Après

5heures de chauffage à une température voisine de 50°C, 6,27 g de carbonate de di tert-butyle dans 12 cm ^*3 de tetrahydrofurane sont ajoutés et le milieu reactionnel est chauffé 8 heures à une température voisine de 50°C. Le mélange reactionnel est ensuite refroidi à une température voisine de 25°C puis concentré à sec sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Au résidu obtenu, 100 cm- ³ d'eau distillée sont additionnés. La phase aqueuse est extraite par 200 cm ^*3 d'acétate d'éthyle. La phase

organique est lavée successivement par 200 cm ^*3 d'eau distillée, 200 cm* ³ d'une solution saturée en acide citrique, 200 cm ³ d'une solution saturée en chlorure de sodium et finalement par 100 cm- ³ d'eau distillée. La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium, puis évaporée sous pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. Le résidu obtenu (5,0 g) est chromatographie sur une colonne de silice (0,02 - 0,045 mm) éluée avec du dichlorométhan- Le- ^** fraction ^* *- contenant le produit sont réunies et concentrées sou*-- pression réduite (2,7 kPa) à une température voisine de 40°C. On obtient ainsi 3,52 g de 3- (t-butyloxycarbonylammo) -5- méthoxycarbonylbenzoate de méthyle sous la forme d'une meringue blanche (Rf = 0,25; chromatographie sur couche mince de silice ; éluant dichloromethane) .

La présente invention concerne également les compositions pharmaceu- tiques contenant au moins un produit de formule générale (I) éven¬ tuellement sous forme de sel, à l'état pur ou sous forme d'une asso¬ ciation avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables, ou avec un autre agent destiné au traitement du SIDA, un agent antiviral, immunomodulateur ou antimi- crobien.

La composition selon l'invention est capable de maintenir en vie les cellules infectées par un virus IIIV et donc de réduire la progression vers le SIDA ou de diminuer sa gravité chez les sujets déjà infectés en réduisant la mortalité des cellules infectées. Les compositions peuvent être utilisées par voie orale, parentérale ou rectale.

Les compositions peuvent être utilisées à titre curatif ou à titre préventif chez des sujets présentant une immunodéfîcience et/ou in¬ fectés par un virus HIV. Bien entendu, la constitution de ces compo¬ sitions sera adaptée au cas particulier du tractus digestif des îmmu- nodéprimés.

Comme compositions solides pour administration orale peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des gélules, des poudres ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif selon l'invention

est mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon.

Ces compositions peuvent comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium ou un enrobage destiné à une libération contrôlée.

Comme compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des solutions pharmaceutiquement acceptables, des suspen¬ sions, des émulsions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple des produits mouillants, édulcorants ou aromatisants.

Les compositions pour administration parentérale, peuvent être des solutions stériles ou des émulsions. Comme solvant ou véhicule, on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végétales, en particulier l'huile d'olive, des esters organiques injectables, par exemple l'oléate d'éthyle.

Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en parti¬ culier des agents mouillants, îsotonisants, émulsifiants, dispersants et stabilisants.

La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, par irradiation ou par chauffage. Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui peuvent être dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou tout autre milieu stérile injectable.

Les compositions par administration rectale sont les suppositoires ou les capsules rectales, qui contiennent outre le principe actif, des excipients tels que le beurre de cacao, des glycérides semi-synthé¬ tiques ou des polyéthylèneglycols.

En thérapeutique humaine, le médecin déterminera la posologie qu'il estime la plus appropriée en fonction d'un traitement préventif ou curatif, en fonction de l'âge, du poids, du degré de l'infection et

des autre facteurs propres au sujet à traiter. Généralement, les doses sont comprises entre 10 et 100 mg/kg par voie orale pour un adulte.

La présente invention concerne également les associations constituées d'un ou plusieurs dérivés du lupane de formule générale (I), et/ou le cas échéant leurs sels, et d'un autre principe actif connu pour son activité anti-rétrovirus, éventuellement en présence d'excipients pharmaceutiquement acceptables.

Les agents anti-rétrovirus pouvant être associés sont choisis parmi des agents compatibles et inertes vis-à-vis du dérivé du lupane de formule générale (I) . Λ titre non limitatif ces agents sont choisis parmi des inhibiteurs de la reverse transcriptase [zidovudine (AZT) , didanosme (DD1) , didéoxycytidme (DDC) , TIBO, névirapme, PMEA, D4T, pyridones, α-APΛ, 1IEPT... ], parmi des inhibiteurs de la protéase [comme par exemple le RO 31-8959 ou le A 77003], ou parmi des inhibi¬ teurs de la protéine tat [comme par exemple le RO 24-7429] .

L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention.

Exemple

On prépare selon la technique habituelle des comprimés de produit actif ayant la composition suivante :

- acide N'- [N- [3β-hydroxylup-20 (29)-èn-28-oyl] -8-ammooctanoyl]-3- amιno-2-méthylbenzoιque 100 mg

- amidon 332 mg

- silice 120 mg

- stéarate de magnésium 12 mg