La présente invention appartient au domaine technique des inhibiteurs de l'activité chaperon de protéines du ribosome (« protein folding activity of the ribosome » ou « PFAR »). Plus particulièrement, l'invention concerne des inhibiteurs de PFAR pour leur utilisation dans le traitement de maladies liées au mauvais repliement et/ou à l'agrégation de protéines.

Etat de la technique

La plupart des maladies neurodégénératives partagent comme caractéristique commune la présence de protéines mal repliées qui forment des agrégats amyloïdes intra- ou extra cellulaires. Elles sont alors qualifiées d'agrégopathies, de protéinopathies, de foldopathies, de maladies de la conformation ou du mauvais repliement des protéines. Elles englobent par exemple la maladie de Creutzfeldt-Jakob, la maladie d'Alzheimer ou encore la maladie de Parkinson. La présence de protéines qui s'agrègent en raison de leur conformation structurelle a depuis été identifiée dans d'autres cibles que le système nerveux central. Le nombre de maladies dont on découvre qu'elles correspondraient à des protéinopathies est en constante augmentation.

Le concept de protéines infectieuses a été établi initialement pour la protéine prion PrP chez les mammifères avec l'encéphalopathie subaiguë spongiforme transmissible. La protéine prion PrP se retrouve sous deux isoformes : la PrP ^c et la PrP ^res . La PrP ^res diffère de la PrP ^c par sa structure tridimensionnelle et sa propension à former des fibres amyloïdes. Dans sa conformation PrP ^res , la protéine prion s'accumule sous la forme de fibres amyloïdes qui se propagent spontanément en l'absence d'acide nucléique spécifique au prion. Cette accumulation entraîne une dégénérescence du système nerveux central associée notamment à la démence et à de la spongiose. Chez les animaux, des exemples bien connus de maladies à prions sont la tremblante du mouton (ou scrapie), l'encéphalopathie spongiforme bovine et le dépérissement chronique des cervidés. Chez l'humain, on peut citer la maladie de Creutzfeldt-Jakob, l'insomnie familiale fatale et le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker. D'autres protéines sont connues pour s'accumuler sous forme d'agrégats dans des maladies neurodégénératives. Chez l'humain, la maladie d'Alzheimer (accumulation des protéines tau et bêta amyloïde), la maladie de Parkinson (accumulation de l'alpha- synucléine), la sclérose amyotrophique latérale (accumulation de Fus et TDP43), la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (accumulation de PABPN1) en sont quelques exemples. Différentes à plusieurs niveaux, ces protéines ont toutefois en commun leur propension à changer de conformation et à former des fibres amyloïdes.

Les recherches initiées sur les maladies à prions ont montré l'implication du ribosome dans la propagation de la conformation pathologique de protéines prions. Le ribosome, en plus de son activité dans la synthèse protéique, intervient aussi dans le repliement des protéines. Cette seconde activité, dite chaperon de protéines (« protein folding activity of the ribosome » ou « PFAR »), a été associée aux maladies à prions pour la première fois en 2008, avec deux molécules anti-prions : la 6-aminophénanthridine et le guanabenz (Tribouillard-Tanvier et al. 2008). Plus tard, l'imiquimod (Oumata et al. 2013), la flunarizine et le métixène (Nguyen 2013) ont été décrits comme des composés inhibiteurs de la PFAR et actifs dans des modèles de maladies à prions. La 6-aminophenanthridine et le guanabenz, inhibiteurs de la PFAR, ont également montré une efficacité dans d'autres modèles de protéinopathies, telles que pour la maladie d'Huntington (EP2066312B1) et pour la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (Barbezier et al. 2011 ; Malerba et al. 2019). Le guanabenz a aussi été montré comme étant efficace pour diminuer la toxicité de l'agrégation de la protéine TDP43 dans un modèle pour la sclérose amyotrophique latérale (Vaccaro et al. 2013).

Ainsi, l'inhibition de la PFAR apparaît comme une cible thérapeutique de choix pour le traitement des protéinopathies. En l'absence de traitement de ces maladies, il existe donc un besoin urgent à identifier de nouveaux composés médicaments.

Résumé de l'invention

L'invention répond à ce besoin en proposant un ou plusieurs composés inhibiteurs de la PFAR pour leur utilisation dans traitement d'une protéinopathie. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant un ou plusieurs composés inhibiteurs de la PFAR, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter une protéinopathie. L'invention vise aussi une méthode de traitement d'une protéinopathie, comprenant l'administration d'une quantité efficace d'un ou plusieurs composés inhibiteurs de la PFAR, à un sujet en ayant besoin. Ces composés, dont la propriété inhibitrice de la PFAR est mise en évidence pour la première fois par les Inventeurs, sont décrits ci-après.

Ainsi, un objet selon l'invention porte sur une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie. L'invention porte également sur les combinaisons de ces composés.

En particulier, l'invention porte sur une composition comprenant l'ébastine ou un sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.

En alternative, l'invention vise une composition comprenant l'azélastine ou un sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.

En alternative, l'invention vise une composition comprenant la duloxétine ou un sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.

Selon une implémentation préférée, la composition selon l'invention pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend en outre au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie selon l'invention peut être choisie parmi les combinaisons suivantes : l'ébastine et la flunarizine, l'ébastine et l'azélastine, l'ébastine et le lopéramide, l'azélastine et la flunarizine, l'azélastine et le lopéramide, et la flunarizine et le lopéramide, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

De manière préférée, les composés destinés à être utilisés en combinaison selon la présente invention peuvent être administrés simultanément, séparément ou séquentiellement.

D'autre part, la protéinopathie peut-être choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.

Selon une implémentation préférée, ladite protéinopathie est liée à l'accumulation de protéines prion PrP sous forme d'agrégats.

Alternativement, ladite protéinopathie est choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru et la maladie VPSPr.

En conséquence, l'invention vise aussi une composition selon l'invention pour son utilisation dans le traitement de la maladie de Creutzfeldt-Jakob.

D'autre part, l'invention vise une composition comprenant au moins un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

D'autre part, l'invention vise une composition comprenant l'ébastine en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

D'autre part, l'invention vise une composition comprenant au moins un composé choisi l'azélastine en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, D'autre part, l'invention vise une composition comprenant la duloxétine en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, l'invention vise une composition ou une composition pour son utilisation telle que décrite ci-avant, comprenant en outre des véhicules ou excipients pharmaceutiquement acceptables.

D'autre part, les composés selon l'invention qui sont utiles pour le traitement d'une protéinopathie sont des inhibiteurs de la PFAR. En conséquence, l'invention vise aussi au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, la chlorpromazine, la quinacrine (mépacrine) et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, ou l'une quelconque de leurs combinaisons, pour inhiber la PFAR, en d'autres termes, pour inhiber l'activité chaperon de protéines. De manière préférée, ladite utilisation est une utilisation in vitro ou ex vivo.

Définitions

Dans le contexte de l'invention, le terme « environ » est utilisé pour indiquer qu'une valeur comprend les variations inhérentes à la marge d'erreur liée à l'utilisation d'un appareil de mesure, à la méthode employée pour déterminer la valeur, ou les variations pouvant exister entre les cellules au sein de la population étudiée et entre les populations. Ainsi, dans un mode de réalisation, le terme « environ », placé devant une valeur, correspond à plus ou moins 10% de cette valeur.

Dans le contexte de l'invention, le terme « protéinopathie » ou « protéinopathies » désigne une maladie ou un ensemble de maladies également connues sous les termes ou « maladie du mauvais repliement des protéines » ou « maladies de la conformation » ou « agrégopathie » ou « foldopathie ». Ces maladies se caractérisent par l'accumulation de protéines qui présentent une structure tridimensionnelle différente de celle observée pour une même protéine chez un sujet sain, notamment enrichies en feuillets bêta et qui forment des fibres amyloïdes, conduisant à l'accumulation d'agrégats protéiques. Cette accumulation peut avoir lieu à l'intérieur ou à l'extérieur des noyaux cellulaires, à l'intérieur ou à l'extérieur de la cellule. Elle peut survenir dans tous types de cellules, notamment les cellules du système nerveux central, les neurones en général, les cellules musculaires, les cellules b des îlots de Langerhans, et conduit à la mort cellulaire. Une « protéinopathie neurologique » désigne plus spécifiquement une maladie ou un ensemble de maladies caractérisées par l'accumulation des agrégats protéiques dans le système nerveux central.

Au sens de l'invention, l'expression « inhiber la PFAR » signifie la capacité à réduire ou empêcher complètement l'action du ribosome sur le repliement des protéines, notamment en inhibant l'activité de repliement assisté portée par le ribosome, comme par exemple la renaturation des protéines hCA ou BCA II assistée par des ribosomes entiers (70S) d'E. coli ou le domaine V du grand ARNr de la grande sous-unité du ribosome transcrit in vitro (Tribouillard-Tanvier et al. 2008b ; Blondel et al. 2016). L'inhibition de la PFAR peut être évaluée selon le protocole décrit dans les Exemples ci-après (e.g. Figure 1).

Dans le contexte de l'invention, la désignation d'un médicament ou d'un composé particulier est considérée comme n'incluant pas uniquement la molécule nommée, mais aussi ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, dérivés, isomères, racémates, conjugués, prodrogues et dérivés de prodrogues de toute pureté chimique.

L'expression « sel pharmaceutiquement acceptable » fait référence aux sels organiques ou inorganiques, qui conservent l'activité et les propriétés biologiques des composés de l'invention et qui sont relativement non-toxiques. La formation pharmaceutique de sel consiste en l'appariement d'une molécule acide, basique ou sous forme de zwitterion avec un contre-ion pour créer le sel du médicament. Des exemples de sels pharmaceutiquement acceptables selon l'invention incluent ceux obtenus par réaction du composé principal, fonctionnant comme base, avec un acide organique ou inorganique pour former un sel, par exemple, des sels d'acide acétique, acide nitrique, acide tartrique, acide chlorhydrique, acide sulfurique, acide phosphorique, acide méthane sulfonique, acide camphosulfonique, acide oxalique, acide maléique, acide succinique ou acide citrique. Les sels pharmaceutiquement acceptables selon l'invention incluent également ceux pour lesquels le composé principal fonctionne comme un acide et réagit avec une base appropriée pour former, par exemple, des sels de sodium, potassium, calcium, magnésium, ammonium ou choline.

Par « hydrate », on entend une forme d'association ou de combinaison d'un composé avec une ou plusieurs molécules d'eau. Par exemple, on peut nommer les formes hémihydrate, dihydrate et trihydrate d'un composé.

Le terme « dérivé », lorsqu'il fait référence à un composé, inclut toute molécule qui est fonctionnellement ou structurellement liée audit composé, tel qu'un acide, un amide, un ester, un éther, un variant acétylé, un variant hydroxylé, un variant alcyl d'un tel composé. Le terme « dérivé » inclut également les composés qui ont un ou plusieurs des substituants ne modifiant pas, tout du moins de manière substantielle, la fonction dudit composé (ici, l'inhibition de PFAR). Le terme « isomère » désigne ici les stéréoisomères, tels que les énantiomères (e.g. lévogyre, dextrogyre), diastéréoisomères et épimères ainsi que les isomères de conformation. Dans le cadre de la présente invention, il est entendu que l'isomère d'un composé conserve tout ou partie de la fonction dudit composé (ici, l'inhibition de PFAR).

L'expression « racémate », « racémique » ou « mélange racémique » désigne ici un mélange en proportions égales des énantiomères lévogyre et dextrogyre d'un composé chiral.

Par « conjugué », on entend désigner un composé comprenant une succession de simples et de doubles liaisons alternées, qui interagissent entre elles et permettent la délocalisation d'électrons. De ce fait, un composé dit conjugué peut se présenter sous plusieurs formes dites de Lewis (appelées formes mésomères, résonantes ou canoniques). Le terme « prodrogue » est employé dans la présente description pour désigner n'importe quel dérivé fonctionnel ou (précurseur) d'un composé selon l'invention qui, lorsqu'il est administré à un patient, fournit ledit composé suite à une réaction chimique spontanée, une réaction de catalyse chimique, et/ou une réaction métabolique chimique. Les prodrogues ont typiquement une structure X-médicament, dans laquelle X est un groupement porteur inerte et le médicament est le composé actif. Les informations techniques permettant de sélectionner une prodrogue convenable appartiennent aux connaissances générales (Ettmayer et al. 2004 ; Beaumont et al. 2003 ; Heimbach et al.

2003 ; Yang et al. 1999 ; Steffansen et al. 2004). De plus, la préparation de prodrogues peut être réalisée par des méthodes conventionnelles connues de l'homme de l'art. Des méthodes qui peuvent être utilisées pour synthétiser des prodrogues sont décrites dans la littérature (Ettmayer et al. 2004 ; Stella 2007 ; Wermuth 2003 ; Pezron et al. 2002 ; Stella

2004 ; Stella & Nti-Addae 2007 ; Higuchi & Stella 1975).

Selon un mode de réalisation préféré, la désignation d'un composé correspond à la désignation du composé en tant que tel, aussi bien que de n'importe quel sel pharmaceutiquement acceptable, hydrate, isomère et racémate dudit composé.

Au sens de l'invention, « traitement » inclut la thérapie, la prévention, la prophylaxie, le retardement ou la réduction des symptômes provoqués par une maladie du mauvais repliement des protéines. Le terme « traitement » désigne la réduction de la quantité de protéines mal repliées ou son maintien à un niveau relativement constant. Ainsi, le terme « traitement » désigne la réduction de la quantité d'agrégats protéiques ou son maintien à un niveau constant. Le terme « traitement » inclut en particulier le contrôle de la progression de la protéinopathie. Plus précisément, le terme « traitement » inclut l'inhibition de la PFAR chez les sujets traités. De préférence, le traitement est administré à des sujets qui sont des animaux ou des humains. En particuliers, les sujets traités sont des humains, bovidés, camélidés, cervidés, félins, ongulés ou ovins.

Selon l'invention, une « combinaison de composés pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie » désigne un traitement dans lequel au moins deux médicaments sont administrés ensemble ou séparément, au même moment ou séquentiellement. Ces au moins deux médicaments peuvent être administrés par différentes voies ou protocoles, ainsi ils peuvent être formulés ensemble ou séparément. II est entendu par « quantité thérapeutiquement efficace » la quantité d'un composé seul ou en combinaison selon l'invention qui est efficace dans le traitement de la protéinopathie. La quantité thérapeutiquement efficace peut être déterminée par le praticien ou l'homme du métier en fonction de la taille, de l'âge, de l'état de santé général du patient, la maladie spécifiquement impliquée et sa sévérité, le mode d'administration et autres circonstances pertinentes.

Brève description des figures

Figure 1 : Représentation schématique du protocole expérimental utilisé pour identifier les composés capables d'inhiber la PFAR dans des cellules de levures. Les levures de levure Itvlàhspl04à [psi-] (Blondel et al. 2016) sont prétraitées avec différentes concentrations de composés inhibiteurs de la PFAR ou avec du diméthylsulfoxyde (DMSO, traitement témoin) pendant 2 heures. Elles subissent ensuite un choc thermique à 43,5°C pendant une heure, qui conduit à la dénaturation des protéines. La synthèse protéique est alors inhibée par l'ajout de cycloheximide. En présence de DMSO seul, la luciférase retrouve un repliement correct grâce à l'activité PFAR du ribosome. En revanche, lorsque les composés ont la capacité d'inhiber la PFAR, la luciférase ne peut recouvrer son repliement initial. De cette façon, la mesure de l'activité de la luciférase permet d'identifier l'activité inhibitrice de la PFAR des composés testés. DMSO : diméthylsulfoxyde.

Figure 2 : Effets de l'ébastine, l'astémizole, la clémastine, le métixène, la triflupromazine, l'azélastine, la duloxétine, du lopéramide, la thioridazine et de la flunarizine sur la PFAR dans le modèle de levures. L'antazoline et le diazépam, deux molécules inactives contre les prions, ne sont pas capables d'inhiber la PFAR et ont été utilisées comme contrôles. Les mesures ont été réalisées aux temps 0 minute, 90 minutes et 150 minutes. Dans chacun des essais, l'utilisation du DMSO montre que l'activité luciférase évolue de moins de 40% de sa valeur initiale à 0 minute, vers au moins 70% à 90 minutes puis à environ 100% après 150 minutes. Ainsi, en 150 minutes et en l'absence de composés inhibiteurs, l'activité PFAR du ribosome permet de rétablir la conformation fonctionnelle des protéines. Le diazépam et l'antazoline n'inhibent pas la PFAR à concentrations relativement élevées (200 mM). En revanche, les composés testés ont tous permis d'inhiber la PFAR : l'ébastine dès 25 pM ; l'astémizole et la thioridazine dès 50 pM ; la flunarizine, la clémastine, le métixène et la triflupromazine dès 100 pM ; l'azélastine, la duloxétine et le lopéramide dès 150 pM. Les expérimentations ont été répétées deux fois. Les histogrammes représentent les pourcentages moyens incluant trois répétitions techniques ; les barres d'erreur figurent l'écart-type à la moyenne. %LA : activité luciférase exprimée en pourcentage ; DMSO : diméthylsulfoxyde. Figure 3 : Effets de l'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, la flunarizine, du lopéramide, du métixène et de la triflupromazine contre les prions dans un modèle cellulaire (cellules MovS6). La flunarizine ainsi que l'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, le lopéramide, la triflupromazine et le métixène ont montré une bonne activité anti-PrP ^Sc permettant de réduire la charge de PrP ^Sc avec des IC50 < 4 mM. Aucun des composés n'a influé sur la charge de PrP ^tot . Ces résultats démontrent que les composés inhibiteurs de la PFAR sont capables de réduire la propagation du prion PrP ^Sc . Les blots présentés sont représentatifs de deux essais indépendants qui ont donné des résultats similaires.

Figure 4 : Effets de l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, la flunarizine, du lopéramide, du métixène et de l'astémizole contre les prions dans un modèle organotypique. La flunarizine ainsi que l'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, le lopéramide et le métixène ont montré une bonne activité anti-PrP ^Sc permettant de réduire à 64% (azelastine à 20 pM), 59% (duloxétine à 30 pM), 50% (ebastine à 30 pM), jusqu'à même 28% (lopéramide à 30 pM) la charge de PrP ^Sc . Aucun des composés n'a influé sur la charge de PrP ^tot . Ces résultats démontrent que les composés inhibiteurs de la PFAR sont de bons candidats pour le traitement des protéinopathies. Les blots présentés sont représentatifs de deux essais indépendants qui ont donné des résultats similaires.

Figure 5 : Effets des combinaisons azélastine et flunarizine, ébastine et flunarizine, et ébastine et lopéramide contre les prions dans un modèle cellulaire de protéinopathie. Sur les immunoblots, le taux d'accumulation de la PrP ^Sc est estimé par le rapport en pourcentage de la charge de PrP ^Sc sur la charge de tubuline. Le diméthylsulfoxyde seul (DMSO) est utilisé pour fixer la valeur de référence (100%) en l'absence des composés à tester. L'azélastine, la flunarizine, l'ébastine et le lopéramide ont été utilisés à des concentrations particulièrement faibles (respectivement, 1,5 pM, 3,5 pM, 3,5 pM et 0,75 pM), pour lesquelles ils ne montrent pas ou peu d'efficacité pris séparément (respectivement, le rapport PrP ^Sc /tubuline est de 104%, 85%, 118% et 114%). Aux mêmes concentrations, la flunarizine combinée avec l'azélastine ou l'ébastine permet d'abaisser le taux d'accumulation de la PrP ^Sc à 43% ; la combinaison de l'ébastine et du lopéramide permet d'abaisser ce taux à 65%. Ces valeurs sont surprenantes en ce qu'elles sont supérieures à la somme des effets individuels. La photographie de l'immunoblot présenté 5 est représentative des résultats obtenus lors de trois expérimentations indépendantes.

AZE : azélastine ; FLU : flunarizine ; EBA : ébastine ; LOP : lopéramide ; DMSO : diméthylsulfoxyde.

Figure 6 : Effets de la flunarizine, du métixène, de la thioridazine, de l'astémizole, de la lopéramide, duloxetine, triflupromazine, clémastine, dezélastine et de l'ébastine dans un 10 modèle cellulaire de la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (DMOP). En l'absence de traitement (DMSO), plus de 40% de noyaux présentant des agrégats de la protéine PABPN1 nucléaire sont énumérés. Tous les composés ont été testés à une concentration de 10 mM. Le guanabenz a été utilisé comme contrôle positif, tandis que et le diazépam comme contrôle négatif. Le pourcentage de noyaux présentant des agrégats de la protéine PABPN1 15 était significativement réduit par les composés testés, de façon dépendante à la dose. Ces résultats démontrent que les composés inhibiteurs de la PFAR sont efficaces dans le traitement de protéinopathies telle que la DMOP. Les différences avec le traitement au DMSO sont statistiquement significatives avec une valeur de **p<0,01 ; ***p<0,001 ; ****p<0,0001 ; DMSO : diméthylsulfoxyde.

20 Figure 7 : Effets de la flunarizine, du métixène, du guanabenz et de l'ébastine dans un modèle animal de la dystrophie musculaire oculo-pharyngée (DMOP). En présence de DMSO utilisé comme témoin (1,5% ou 2% selon les indications), le nombre de mouches présentant une position anormale des ailes augmente après le jour 3. La flunarizine (panel du haut), le métixène (panel du milieu), ainsi que l'ébastine (panel du bas) permettent de 25 réduire de façon statistiquement significative le pourcentage de mouches qui présentent une position anormale des ailes. Ces résultats confirment que les composés inhibiteurs de la PFAR sont efficaces dans le traitement de protéinopathies telle que la DMOP. Les différences avec le traitement au DMSO sont statistiquement significatives avec une valeur de p : *p<0,l ; **p<0,01 ; ***p<0,001 ; DMSO : diméthylsulfoxyde.

BO Description détaillée

L'invention se rapporte à de nouveaux inhibiteurs de la PFAR, notamment leur utilisation pour inhiber la PFAR, mais aussi pour leur utilisation dans le traitement de protéinopathies.

Il a été préalablement montré que la flunarizine a des capacités à inhiber la PFAR et qu'elle est efficace contre les prions (Nguyen 2013). Ainsi, dans une première étude, les inventeurs ont effectué un criblage de composés selon une approche structure-activité sur la base de la flunarizine. Les composés ainsi criblés ont ensuite été évalués pour leur potentiel anti- prion et leur capacité à inhiber la PFAR.

Grâce à cette méthode, les inventeurs ont pu identifier des composés utiles pour inhiber la PFAR et qui pourraient être repositionnés dans le traitement des protéinopathies.

La PFAR, activité de repliement des protéines portée par le ribosome, a été décrite pour la 1ère fois in vitro par le groupe de C. Das Gupta qui a montré que les protéines dénaturées peuvent retrouver leur conformation fonctionnelle grâce au domaine V du grand ARN ribosomal (ARNr) de la grande sous-unité du ribosome (Das et al. 2008). Le repliement assisté par le ribosome a ensuite été décrit pour les ribosomes de tous les règnes du vivant et pour toutes les classes et les sources de protéines testées (Das et al. 2008 ; Barbezier et al. 2011), ce qui est en adéquation avec la grande conservation de la séquence et de la structure secondaire du domaine V de l'ARNr (Ben-Shem et al. 2011). La PFAR met en jeu le domaine V du grand ARN ribosomique (ARNr) de la grande sous-unité 60S du ribosome, comme cela a été démontré grâce à une approche de criblage inverse pour l'identification d'une des cibles cellulaires de la 6AP et du GA (Tribouillard-Tanvier et al. 2008a et 2008b). Le domaine V du grand ARNr (23S chez E. coli, 25S chez S. cerevisiae, 28S chez les métazoaires) est un ribozyme portant 2 activités enzymatiques : (i) une activité peptidyl transférase, et (ii) la PFAR (Das et al. 2008 ; Voisset et al. 2008). La liaison de la 6AP et du GA à l'ARNr 23S inhibe spécifiquement la PFAR, sans interférer avec l'activité traductionnelle du ribosome (Tribouillard-Tanvier et al. 2008a et 2008b).

Les nucléotides des domaines V des ARNr 23S d'E. coli et 25S de S. cerevisiae qui sont essentiels à l'activité chaperon de protéines du ribosome in vitro ont été identifiés (Pang et al. 2013). Ces travaux ont démontré que la plupart des nucléotides impliqués dans la PFAR sont conservés chez la bactérie (23S) et chez la levure (25S) (Pang et al. 2013), et que la 6AP et le GA sont des inhibiteurs compétitifs de la PFAR (Reis et al. 2011).

Il a récemment été montré que la PFAR est impliquée dans la propagation du prion [ PSI+ ] chez la levure (Blondel ét al. 2016). Composés et compositions pour leur utilisation dans le traitement de protéinopathies

Un objet selon l'invention est une composition pharmaceutique comprenant au moins un composé inhibiteur de la PFAR pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie. L'invention concerne également l'utilisation d'une composition comprenant au moins un composé inhibiteur de la PFAR, pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter une protéinopathie. L'invention vise aussi une méthode de traitement d'une protéinopathie, comprenant l'administration d'une quantité efficace d'au moins un composé inhibiteur de la PFAR, à un sujet en ayant besoin.

En effet, comme divulgué dans les exemples, les inhibiteurs de la PFAR ont montré une activité bénéfique dans des modèles pour les maladies à prions et la dystrophie musculaire oculo-pharyngée.

Les composés utilisés selon l'invention sont décrits ci-après. Leur propriété inhibitrice de la PFAR est mise en évidence ici pour la première fois.

En particulier, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

En particulier, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, en combinaison avec la flunarizine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates. De préférence, la composition comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.

Selon une variante, la composition comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie.

Selon une autre variante, la composition comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie. De façon plus préférée, la composition pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie comprend au moins deux composés choisis parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, de préférence parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide et l'azélastine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates. Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la flunarizine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

En particulier, selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend le lopéramide, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend l'astémizole, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend le métixène, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la clémastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la thioridazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition pour son utilisation comprend la triflupromazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine et la thioridazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

De façon préférée, la composition pour son utilisation comprend une combinaison choisie parmi :

- l'ébastine et la flunarizine,

- l'ébastine et l'azélastine,

- l'ébastine et le lopéramide,

- l'azélastine et la flunarizine,

- l'azélastine et le lopéramide, et

- la flunarizine et le lopéramide,

ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Les composés qui peuvent franchir la barrière hémato-encéphalique, notamment l'alimémazine (triméprazine), l'atomoxétine, l'azélastine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, la diphénhydramine, la duloxétine, l'ébastine, le néfopam, l'orphénadrine, la triflupromazine, la zimélidine, sont plus particulièrement pertinents pour une utilisation dans le traitement des protéinopathies neurologiques. Les composés ne passant pas la barrière hémato-encéphalique tels que la benzydamine, le lopéramide et la prénylamine, sont plus particulièrement pertinents pour une utilisation dans le traitement des protéinopathies non neurologiques. Il peut être avantageux de combiner des composés capables de passer la barrière hémato-encéphalique avec des composés qui ne le peuvent pas afin de réduire la présence de prions de façon plus généralisée.

Il est entendu que les composés destinés à être utilisés en combinaison selon la présente invention peuvent être administrés simultanément, séparément ou séquentiellement. Le tableau 1 ci-après donne des exemples de numéros d'identification CAS des composés pour une utilisation selon l'invention, et éventuellement le numéro CAS ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Tableau 1

De façon générale, les protéines ne peuvent exercer leur fonction que lorsqu'elles revêtent une conformation spatiale convenable appelée conformation fonctionnelle. Une mauvaise conformation entraîne de nombreuses pathologies, chez les animaux dont l'humain. Des exemples de protéinopathies humaines sont donnés ci-après.

Les maladies à prions, au sens de l'invention, regroupent toutes les maladies dues à un prion chez un mammifère, comme par exemple l'encéphalopathie spongiforme bovine, la maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ), le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker (SGSS), l'insomnie fatale familiale (IFF), le kuru, la maladie VPSPr, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés (CWD), l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés (CSE) et l'encéphalopathie exotique des ongulés. La MCJ existe sous plusieurs formes : la forme sporadique (sMCJ), la forme héréditaire (fMCJ), la forme acquise ou iatrogène (iMCJ). Le nouveau variant de la MCJ (vMCJ) est considéré comme un exemple de forme iatrogène de la MCJ. La MCJ est une encéphalopathie transmissible rare (1 cas par million d'individus par an) prévalente surtout entre 50 et 70 ans. La mort survient généralement dans l'année suivant l'apparition des symptômes, qui sont : des troubles du sommeil, des modifications de la personnalité, une ataxie, une aphasie, une perte de la vision, une faiblesse générale, une atrophie musculaire, une myoclonie et une démence évolutive.

La maladie VPSPr (pour « Variably protease sensitive prionopathy ») est une maladie à prions sporadique due à la conversion spontanée de PrP ^c en PrP ^res ou à une mutation somatique. Elle présente des similitudes avec la MCJ mais la protéine sous forme pathologique PrP ^res est moins résistante à la digestion par les protéases. Les patients présentent des symptômes psychiatriques, des déficits de la parole (aphasie et/ou dysarthrie), et aussi des déficiences cognitives. Cette maladie est très rare avec une incidence variant de 2 à B pour 100 millions de personnes. L'insomnie fatale familiale est une encéphalopathie spongiforme transmissible liée à une anomalie du gène PRNP codant la protéine prion PrP ^c . Elle concerne une quarantaine de familles dans le monde.

D'autres protéines que la protéine prion PrP peuvent être associées aux protéinopathies. Par exemple, la maladie à corps de Lewy ou démence à corps de Lewy est une maladie neurodégénérative caractérisée par le dépôt de la protéine alpha-synucléine (ce qui en fait une synucléinopathie) à l'intérieur des neurones. Les symptômes sont principalement le développement d'une démence, un syndrome parkinsonien, des variations des performances cognitives et des hallucinations visuelles. Il s'agit de la seconde démence neurodégénérative la plus fréquente après la maladie d'Alzheimer.

La maladie de Parkinson est également une synucléinopathie. Elle s'associe à des tremblements, de l'hypokinésie et une instabilité de la posture. A l'échelle mondiale, la maladie est diagnostiquée chez plus de 300 000 personnes chaque année. La maladie d'Alzheimer est une maladie neurologique progressive touchant le cerveau et qui est caractérisée essentiellement par la présence de plaques neuritiques composées d'agrégats de peptides bêta-amyloïdes, issus du clivage du précurseur de la protéine amyloïde (APP), et d'agrégats de la protéine Tau. Cette maladie est l'une des neuropathologies les plus fréquentes et a une incidence mondiale. La maladie d'Huntington ou chorée d'Huntington est une maladie rare génétique dominante causée par la synthèse de la protéine huntingtine résultant d'une altération génique (augmentation du nombre de résidus Q codés par l'exon 1 du gène HTT) sur le chromosome 4. Les symptômes peuvent être moteurs (notamment troubles de l'élocution et de la déglutition), cognitifs et psychiatriques. La sclérose latérale amyotrophique (SLA), ou maladie de Charcot, est caractérisée par une dégénérescence progressive des neurones moteurs du cortex cérébral avec destruction consécutive du faisceau pyramidal. La motricité qui est touchée dans la maladie concerne donc aussi bien la mobilité du visage (sourire, parole, mouvement de la langue, faculté d'avaler ou de parler) que celle des bras et des jambes. Parmi les protéines en cause, il y a FUS, TDP43, SOD1, C90rf72, KIF5A.

Dans le diabète de type 2, une accumulation de polypeptides amyloïdes (IAPP, aussi appelée amyline) a été observée dans les cellules b des îlots de Langerhans des pancréas de plus de 80% des patients, qui provoquerait la destruction des cellules bêta- pancréatiques chez les diabétiques. Il a été observé un risque deux fois plus important de développer la maladie d'Alzheimer chez les patients atteints de diabète de type 2, suggérant un mécanisme d'ensemencement croisé de protéines amyloïdes infectieuses entre le cerveau et le pancréas, qui confirmerait un fonctionnement de type prion dans ces deux pathologies.

La dystrophie musculaire oculo-pharyngée (« DMOP ») est une maladie génétique autosomale dominante rare qui affecte environ 1 personne pour 100 000 en Europe. Elle est causée par une expansion du domaine poly-alanine dans la protéine PABPN1 codée par le gène PABPN1 (poly(A)-bi nding protein nuclear 1 ; 14qll.2), ce qui conduit à la synthèse d'une protéine mutante qui s'accumule sous forme d'agrégats nucléaires dans les cellules musculaires. Ainsi, la DMOP est assimilée à une protéinopathie (Harish et al. 2018). Les démences frontotemporales sont héréditaires pour moitié ; les mutations les plus fréquentes impliquent le chromosome 17q21-22 à l'origine d'anomalies de la microtubule- binding tau protein, ce qui les classe parmi les tauopathies. La paralysie supranucléaire et la dégénérescence corticobasale peuvent être considérées comme des formes de démence frontotemporale, car elles partagent des bases neuropathologiques communes et des mutations de gènes similaires affectant la protéine tau. Les autres protéines pathogènes qui ont été décrites sont FUS, TDP43 et SOD1.

De préférence, la protéinopathie est choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. En particulier, la protéinopathie est une protéinopathie humaine choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo- pharyngée. Selon une alternative, la protéinopathie est une protéinopathie touchant des mammifères non-humains, choisie parmi l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.

Selon un mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.

De préférence, l'invention concerne une composition comprenant l'ébastine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt- Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés.

Selon une alternative, l'invention concerne une composition comprenant l'azélastine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo- pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. Selon une autre alternative, l'invention concerne une composition comprenant la duloxétine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. Selon une autre alternative, l'invention concerne une composition comprenant le triflupromazine pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann-Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru, la maladie VPSPr, la maladie à corps de Lewy, la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie d'Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, la démence fronto temporale, le diabète de type 2, la dystrophie musculaire oculo-pharyngée, l'encéphalopathie spongiforme bovine, la tremblante du mouton, la maladie du dépérissement chronique des cervidés, l'encéphalopathie spongiforme féline, l'encéphalopathie spongiforme des camélidés et l'encéphalopathie exotique des ongulés. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, de préférence parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine et la triflupromazine, pour son utilisation dans le traitement d'une protéinopathie liée à la protéine prion PrP, de préférence humaine, de préférence choisie parmi la maladie de Creutzfeldt-Jakob, le syndrome de Gerstmann- Straussler-Scheinker, l'insomnie fatale familiale, le kuru et la maladie VPSPr.

Les compositions pour le traitement de protéinopathies selon l'invention peuvent être administrées en combinaison avec les traitements actuellement en développement pour cette indication, notamment une immunothérapie.

Administration

Les composés selon l'invention sont connus de l'homme du métier pour leur utilisation dans d'autres applications thérapeutiques. Le dosage et la posologie connus peuvent bien entendu être adaptés dans le cadre de la présente invention par le praticien selon ses connaissances générales. Des exemples de noms commerciaux et de doses pouvant être administrées sont donnés ci-après, aux seules fins d'illustration :

- l'ébastine (nom commercial e.g. « Kestin ») : d'environ 1 à environ 30 mg par jour, de préférence d'environ 10 à environ 20 mg par jour, en une, deux ou trois prises.

- l'azélastine (nom commercial e.g. «Allergodil ») : d'environ 0,30 à environ 2,00 mg par jour, de préférence entre environ 0,50 et environ 1,00 mg par jour, notamment 0,56 mg par jour, en une, deux ou trois prises.

- duloxétine (nom commercial e.g. « Cymbalta », « Yentreve », « Xeristar » ou « AriClaim ») : d'environ 15 à environ 150 mg par jour, de préférence environ 30, environ 60, environ 90 ou environ 120 mg par jour, en une, deux ou trois prises, de façon plus préférée environ 60 mg par jour en une prise.

- l'atomoxétine (nom commercial e.g. « Strattera ») sous forme de comprimés à la dose d'environ 0,5 mg/kg/jour à environ 1,8 mg/kg/jour, de préférence environ 1,2 mg/kg/jour.

- Le benzydamine notamment sous la forme de chlorhydrate de benzydamine (nom commercial e.g. « Opalgyne »), par exemple en pastilles à la dose d'environ 9 mg/jour, ou en solution à la dose d'environ 300 mg/jour, de préférence d'environ 200 mg/jour.

- Le bipéridène (nom commercial e.g. « Akineton ») sous forme de comprimés à la dose d'environ 1 mg/jour à environ 12 mg/jour, de préférence environ 4 mg/jour. - La chloropyramine (nom commercial e.g. « Suprastin ») sous forme de comprimés, à la dose d'environ 75 mg/jour à environ 150 mg/jour, de préférence environ 100 mg/jour.

- citalopram, notamment sous la forme de bromhydrate de citalopram (nom commercial e.g. « Celapram », « Celexa », « Cipram », « Cipramil », « Ecosol », Mepha, « Récital », « Seropram » etc.) sous forme de comprimés à la dose d'environ 20 mg/jour à environ 40 mg/jour, de préférence environ 20 mg/jour.

- dicyclomine (nom commercial e.g. « Bentyl », « Dibent », « Dicyclocot ») sous forme de comprimés à la dose d'environ 4 mg/jour à environ 40 mg/jour, de préférence environ 4 mg/jour.

- néfopam (nom commercial e.g. « Acupan ») sous forme de solution injectable à la dose d'environ 20 mg/jour à environ 120 mg/jour, de préférence d'environ 20 à environ 80 mg/jour.

- l'orphénadrine (nom commercial e.g. « Norflex »), notamment citrate d'orphénadrine ou hydrochloride d'orphénadrine, sous forme de solution injectable ou de comprimés, à la dose d'environ 60 mg/jour à environ 120 mg/jour, de préférence environ 60 mg/jour

- prénylamine (nom commercial e.g. « Segontin »), notamment le lactate de prénylamine, sous forme de comprimés à la dose d'environ 60 mg/jour à environ 180 mg/ jour, de préférence environ 60 mg/jour.

- triflupromazine (nom commercial e.g. « Vesprin ») sous forme de comprimé à la dose d'environ 2 mg/jour à environ 40 mg/jour, de préférence environ 10 mg/jour

- zimélidine (nom commercial e.g. « Normud » ou « Zelmid ») sous forme de comprimé à la dose d'environ 10 à environ 200 mg par jour, de préférence d'environ 25 à environ 100 mg par jour, de préférence environ 50 mg par jour, en une ou deux prises.

Compositions en tant pue telles

L'invention porte également sur des compositions en tant que telles, comprenant une combinaison de composés telle que décrite précédemment. En effet, les inventeurs ont montré que de telles combinaisons pouvaient présenter un effet synergique dans l'amélioration de l'activité anti-prion, notamment dans des modèles de cultures cellulaires (Figure 5). En effet, la réduction du taux d'accumulation de la PrP ^Sc obtenue grâce aux combinaisons de composés est nettement plus importante que la somme des effets obtenus par l'utilisation des composés seuls. A 1,5 mM et 3,5 mM, l'azélastine et la flunarizine ne modifient pas le taux de PrP ^Sc (104% et 85%, respectivement). Or le traitement simultané des cellules par 1,5 pM d'azélastine et 3,5 pM de flunarizine réduit le taux de PrP ^Sc à 43%, ce qui est nettement supérieur à l'addition des effets des deux molécules individuelles (15%). L'azélastine utilisée seule à 1,5 pM n'a pas non plus d'effet sur le taux de PrP ^Sc (104%), tandis que sa combinaison avec la flunarizine à 3,5 pM (qui seule résultait en un taux de PrP ^Sc de 85%) permet de réduire ce chiffre à 43%. Le lopéramide, utilisé seul à 0,75 pM n'a pas d'effets sur le taux de PrP ^Sc tandis que sa combinaison avec l'ébastine à 3,5 pM abaisse le taux de PrP ^Sc à 65%.

Ainsi, l'invention concerne une composition comprenant au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, ledit composé étant en combinaison avec au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Par exemple, selon un mode de réalisation, la composition comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon une variante, la composition comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon une autre variante, la composition comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend au moins deux composés choisis parmi l'ébastine, l'azélastine, la duloxétine, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la dicyclomine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la triflupromazine et la zimélidine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend au moins deux composés choisis parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, de préférence parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide et l'azélastine, ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend la flunarizine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

En particulier, selon un mode de réalisation, la composition comprend le lopéramide, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend l'astémizole, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, la duloxétine, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend le métixène, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, le métixène, la clémastine, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend la clémastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la thioridazine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend la thioridazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Selon un mode de réalisation, la composition comprend la triflupromazine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec un composé choisi l'ébastine, l'azélastine, la flunarizine, le lopéramide, l'astémizole, la duloxétine, le métixène, la clémastine et la thioridazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates. De préférence, la composition comprend une combinaison choisie parmi :

- l'ébastine et la flunarizine,

- l'ébastine et l'azélastine,

- l'ébastine et le lopéramide,

- l'azélastine et la flunarizine,

- l'azélastine et le lopéramide, et

- la flunarizine et le lopéramide,

ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Les compositions selon l'invention comprennent typiquement un ou plusieurs excipients ou véhicules acceptables. Ainsi, les compositions selon l'invention en tant que telles ou pour leur utilisation dans le traitement d'une protéinopathie sont généralement mélangées à des véhicules ou des excipients pharmaceutiquement acceptables.

Le terme "véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable" désigne ici un composé de grade pharmaceutique qui améliore l'administration, la stabilité ou biodisponibilité d'un composé et peut être métabolisé par un sujet auquel il est administré et n'est pas toxique pour ledit sujet. Les excipients préférés selon l'invention comprennent l'un quelconque des excipients couramment utilisés dans les produits pharmaceutiques, tels que, par exemple, la cellulose microcristalline, le lactose, l'amidon et la poudre de soja.

Ainsi, un autre objet selon l'invention concerne un procédé de fabrication de compositions pharmaceutiques comprenant le mélange des composés ou combinaisons décrites ci- dessus avec au moins un ou plusieurs véhicules ou excipients pharmaceutiquement acceptables.

Utilisation d'inhibiteurs de la PFAR

Un objet selon l'invention consiste en l'utilisation de composés comme nouveaux inhibiteurs de la PFAR. Pour mieux comprendre le rôle de la PFAR dans les mécanismes physiopathologiques, les inventeurs ont découvert que des médicaments connus pour leur activité sur d'autres cibles cellulaires étaient également efficaces dans l'inhibition de la

PFAR. - BB -

L'utilisation de ces composés pour inhiber la PFAR est particulièrement utile dans la compréhension du rôle du ribosome et de l'étiologie des maladies du mauvais repliement des protéines.

Les inventeurs ont ainsi découvert de façon surprenante que l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, l'ébastine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, la chlorpromazine, la quinacrine (mépacrine) et la zimélidine pouvaient être utilisés comme candidats inhibiteurs de l'activité PFAR.

Selon un mode de réalisation préféré, l'invention concerne l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'au moins un composé choisi parmi l'alimémazine (triméprazine), l'amitriptyline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, l'ébastine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le lopéramide, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, la chlorpromazine, la quinacrine (mépacrine) et la zimélidine, de préférence au moins un composé choisi parmi l'ébastine, l'azélastine, le lopéramide, la duloxétine et la triflupromazine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR. Les combinaisons de ces composés sont également envisagées.

L'utilisation de ces composés pour inhiber la PFAR peut être combinée à l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'au moins un composé distinct choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6- aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates.

Par exemple, selon un mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant de l'ébastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR.

Selon un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant de l'azélastine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR. Selon un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant de la duloxétine, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, le lopéramide, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR.

Selon un autre mode de réalisation particulier, l'invention porte sur l'utilisation, préférablement in vitro ou ex vivo, d'une composition comprenant du lopéramide, ou un de ses sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, en combinaison avec au moins un composé choisi parmi la flunarizine, l'ébastine, l'azélastine, le métixène, le guanabenz, la 6-aminophenanthridine, l'imiquimod, le tacrolimus, l'astémizole, la doxycycline, l'amitriptyline, l'atomoxétine, la benzydamine, le bipéridène, la chloropyramine, la chlorpromazine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, la dicyclomine, la diphénhydramine, la doxépine, la duloxétine, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, le néfopam, l'orphénadrine, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine) et la zimélidine, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, hydrates, isomères et racémates, pour inhiber la PFAR.

Lors de l'utilisation des composés présents en combinaison pour inhiber la PFAR, les composés peuvent être utilisés simultanément, séparément ou séquentiellement. De façon préférée, les utilisations des composés selon l'invention sont des utilisations in vitro et/ou ex vivo.

Selon un mode de réalisation particulier, l'utilisation des composés pour inhiber l'activité PFAR est une utilisation in vitro sur des cellules, telles que des cellules animales ou végétales, eucaryotes ou procaryotes, isolées ou amassées, par exemple en organoïdes. De façon particulière, l'utilisation des composés pour inhiber l'activité de la PFAR est mise en œuvre dans des levures.

Selon un autre mode de réalisation, l'utilisation des composés pour inhiber l'activité PFAR est une utilisation ex vivo sur des organes ou des fragments d'organes isolés à partir d'un animal ou d'une plante et qui ne sont pas destinés à être réintroduits dans les animaux ou les plantes. De façon particulière, l'utilisation de composés pour inhiber l'activité de la PFAR est mise en œuvre dans des tranches de cervelets de souris.

Exemples

L'invention sera mieux comprise grâce aux exemples donnés ci-après à titre illustratif et non limitatif.

Criblage des banques de molécules

Les inventeurs ont opté pour l'approche SOSA (Sélective optimization of side activities) qui permet de faire du repositionnement thérapeutique. Cette approche propose de cribler de préférence les médicaments déjà en clinique ou en cours d'essais cliniques afin de déterminer s'ils sont susceptibles d'avoir des cibles pharmacologiques supplémentaires (Wermuth 2004). Étant donné que leur toxicité, leur sécurité et leur biodisponibilité chez l'homme ont déjà été évaluées, les médicaments issus de chimiothèques basées sur l'approche SOSA pourraient rapidement être administrés en tant que traitement compassionnel aux personnes atteintes de maladies à prions pour lesquelles aucun traitement n'est actuellement disponible. Dans ce cadre, la chimiothèque de Prestwick avait été criblée, permettant l'identification de la flunarizine, possédant une activité anti- prion et qui est un inhibiteur de la PFAR (Nguyen 2013).

La dernière version de DrugBank (version 5.1.0 en date du 02.04.2018) a été téléchargée directement à partir du site internet https://www.drugbank.ca et filtrée de manière à conserver les composés approuvés par la FDA et ceux abandonnés, soit 1887 composés. Ces composés ont été extraits en fichiers multiconformationnels au format oeb.gz en utilisant OMEGA v2.5.1.4. (OpenEye Scientific Software, http://www.eyesopen.com/).

Une recherche ROCS (« Rapid Overlay of Chemical Structures ») permet d'identifier des composés par similarité dans la superposition des formes et/ou des pharmacophores, en utilisant seulement les atomes lourds d'un ligand et en ignorant les hydrogènes. Le degré de similarité de forme et/ou de pharmacophore est illustré par un score dit « ComboScore ». Cette recherche ROCS a été conduite sur la base de la flunarizine. La flunarizine présente une structure pharmacophore composée de trois groupements aromatiques, et de deux atomes d'azote, qui peuvent interagir avec la cible grâce à des interactions avec électrostatiques ou des accepteurs de liaison hydrogène. La structure expérimentalement cristallisée de la flunarizine a été obtenue à partir de The Cambridge Crystallographic Data Centre (www.ccdc.cam.ac.uk/structures, identifiant du composé : « JOBSIE »). Parmi les 1887 composés sélectionnés par cette méthode, 45 composés ont été choisis : l'amitriptyline, l'antazoline, l'astémizole, l'atomoxétine, l'azélastine, la benzydamine, le bipéridène, la cétirizine, la chloropyramine, la chlorpromazine, la cinnarizine, le citalopram, la clémastine, la clomipramine, la désipramine, la desloratadine, le diazépam, la dicyclomine, la diphénhydramine, le diphénidol, la doxépine, la duloxétine, l'ébastine, l'épinastine, l'éthosuximide, la fluoxétine, l'halopéridol, l'imipramine, l'isradipine, le kétotifène, le lopéramide, le métixène, la mirtazapine, le néfopam, l'orphénadrine, la paraméthadione, la prénylamine, la quinacrine (mépacrine), la réboxétine, la thioridazine, la trifluopérazine, la triflupromazine, l'alimémazine (triméprazine), la zimélidine et le zonisamide. Le tableau 2 ci-dessous donne le ComboScore obtenu pour ces composés, excepté l'ébastine pour laquelle la valeur n'a pas pu être calculée (« nd » dans le tableau). Tableau 2

Les composés ont été testés pour leur activité contre le prion PrP ^Sc en culture ce lulaire, comme décrit ci-après.

Les composés selon l'invention sont efficaces pour inhiber la PFAR

Le protocole expérimental permettant d'identifier les composés capables d'inhiber l'activité PFAR in vivo a été repris de Blondel et al. (2016) et est schématisé en figure 1. En détail, la souche [psi-] ltvlA/hspl04A 74-D694 (DίDH, Blondel et al. 2016), délétée du gène HSP104 et enrichie en PFAR grâce à la délétion du gène LTV1, a été transformée par le plasmide pDCM90 (Hasin et al. 2014 ; Parsell et al. 1994) permettant l'expression constitutive du polypeptide LuxAB (luciférase bactérienne thermosensible). Les levures transformées ont été mis en culture exponentielle à 29°C. Les cellules ont été traitées avec les concentrations indiquées de composés ou du DMSO pendant 2 heures avant le choc thermique. La LuxAB a alors été inactivée par la chaleur lors d'une incubation à 43,5°C pendant 60 minutes. Pour empêcher la synthèse de nouvelle luciférase, 10 pg/mL de cycloheximide (Sigma Aldrich) ont été ajoutés après 45 minutes à 43,5°C. Ce qui est mesuré est donc le rétablissement de la conformation fonctionnelle dans le temps, par la PFAR des ribosomes levuriens, des enzymes LuxAB présentes au moment du choc thermique. L'activité de la LuxAB a été mesurée 60 minutes après le choc thermique (correspondant au temps 0 minute sur la figure 1), et les cellules ont été placées en conditions de culture à 29°C pendant les durées indiquées, l'activité luciférase étant mesurée à intervalles de 30 minutes par l'ajout de 10 pL de n-décylaldéhyde (Decanal, Sigma Aldrich) à 120 pL de culture de levure. La luminescence a été mesurée en utilisant un lecteur de microplaques Varioscan (ThermoFisher). L'activité luciférase a alors été exprimée en pourcentage de l'activité mesurée avant le traitement par choc thermique pour chaque souche. La chlorpromazine, la quinacrine, l'azélastine, la thioridazine, la triflupromazine et le chlorure de guanabenz ont été acquis auprès de Sigma Aldrich (Etats-Unis) ; l'astémizole, la duloxétine, la clémastine et l'ébastine ont été acquis auprès de CarboSynth (Royaume- Uni) ; le métixène a été acheté auprès de LGC (Laboratoire de Génie Chimique à Toulouse, France).

Tel que montré en figure 2, pour le DMSO (ensemble des panels), le choc thermique a réduit l'activité de LuxAB à environ 30% de son activité initiale. En présence de DMSO, l'activité LuxAB a augmenté avec le temps, ce qui indique qu'elle a retrouvé sa conformation active. Les composés selon l'invention inhibent la PFAR in vivo chez la levure. L'imiquimod, le guanabenz et la 6AP ont été utilisés comme contrôles positifs (Oumata et al. 2013 ; Tribouillard-Tanvier et al. 2008a). Aux concentrations de 150 mM et 200 pM d'imiquimod, l'activité de la LuxAB ne parvient pas à retrouver son niveau initial.

La figure 2 montre que l'ensemble des composés testés inhibent l'activité PFAR : à partir de 25 pM pour l'ébastine, 50 pM pour l'astémizole et le thioridazine, 100 pM pour la clémastine, le métixène, la flunarizine et la triflupromazine, et à partir de 150 pM pour l'azélastine, la duloxétine et le lopéramide.

Les compositions selon l'invention sont efficaces comme anti-prions in vitro

Les expérimentations in vitro ont été réalisées comme décrit dans la littérature (Nguyen et al. 2014a ; Oumata et al. 2013 ; Archer et al. 2004). Les cellules MovS6 infectées de façon chronique avec la souche ovine de prion 127S ont été traitées pendant 6 jours avec les concentrations indiquées de composés. Elles ont ensuite été lysées, et 250 pg de lysats cellulaires ont été digérés par la protéinase K. La détection de PrP ^tot a été réalisée sur 25 pg de lysats cellulaires bruts. Les protéines PrP ont alors été immunomarquées en utilisant un anticorps anti-PrP (Sha31, Bertin Pharma). Il a ainsi été possible de définir la concentration inhibitrice médiane CI50.

Le tableau 3 donne le détail des doses testées et les valeurs obtenues de Cl ₅₀ , sauf pour la chlorpromazine et la quinacrine pour lesquelles les valeurs de CI ₅₀ sont issues de la littérature. Les western blots sont présentés Figure 3. Les composés les plus efficaces in vitro sont ceux pour lesquels la C o est minimale. Il ressort des tableaux 2 et B que l'activité anti-PrP ^Sc n'est pas corrélée à la similarité du composé avec la flunarizine (plus le ComboScore est bas, plus le composé est proche de la flunarizine). Tableau 3

Les compositions selon l'invention sont efficaces comme anti-prions dans un modèle orqonotypique

Les expérimentations sur les animaux ont été conduites en stricte conformité avec les Directives européennes EU 2010/63 et ont été approuvées par le ministère français de l'enseignement supérieur, de la recherche et de l'innovation (autorisation OGM n°4292). Tous les efforts ont été mis en oeuvre pour minimiser la souffrance des animaux.

L'activité antiprion des composés contre le prion PrP ^Sc a été évaluée dans un test organotypique dans lequel des tranches de cervelets de souris sont infectées par le prion (souche 127S) en culture, comme décrit précédemment (Nguyen et ql. 2014a et b ; Falsig et ql. 2008) en utilisant des souris transgéniques tg338 qui surexpriment l'allèle VRQ de la protéine prion ovine (Vilotte et ql. 2001). La préparation et la culture de tranches ont été effectuées comme décrit ailleurs (Nguyen et ql. 2014a et b ; Falsig et ql. 2008) sauf pour l'infection par le prion qui a été effectuée le jour de la découpe des cervelets pendant 1 heure dans la glace avec 2 pg/mL d'un broyât cerveau préparé à partir de souris tg338 au stade terminal de la maladie expérimentalement infectées avec la souche de prion 127S. Sept jours après l'infection, les composés ont été ajoutés aux tranches de cervelets à la concentration de 20 à 30 mM. Le contrôle a été réalisé en n'ajoutant que du DMSO (0,7%). Les tranches de cervelets ont alors été cultivées pour 21 jours supplémentaires avant les prélèvements. Des composés frais étaient ajoutés à chaque changement de milieu (3 fois par semaine) de culture aux concentrations indiquées.

Les tranches de cervelets (au moins 7 tranches par condition) ont été lysées et homogénéisées dans 350 pL de tampon de lyse (0,5 % déoxycholate de sodium, 0,5 % Triton-X100, 5 mM Tris-HCI pH 7,5) grâce à un homogénéiseur (Beadbug, Benchmark Scientific, Etats-Unis) en présence de billes de verre (référence #079053, Dutscher, France) tel que décrit dans la littérature (Nguyen et ql. 2014a et b ; Falsig et ql. 2008).

L'astémizole, l'azélastine, la duloxétine, l'ébastine, la flunarizine, le lopéramide et le métixène ont été testés selon ce protocole expérimental et ont donné de bons résultats d'activité anti-PrP ^Sc ex vivo (figure 4).

Combingisons et synergie Les composés ont alors été testés en combinaisons. Les cellules MovS6 infectées chroniquement par la souche 127S de prion ovin (scrapie) PrP ^Sc ont été traitées avec les composés seuls ou en combinaison pendant 6 jours. Les concentrations de composés utilisées étaient 3,5 mM pour la flunarizine, 1,5 mM pour l'azélastine, 1,5 pM pour l'ébastine et 0,75 pM pour le lopéramide. Le DMSO était utilisé comme contrôle (0,7%). Les lysats cellulaires ont été alors soumis à la digestion par la protéinase K pour révéler spécifiquement les protéines prions PrP ^Sc par immunoblot. Les effets de la flunarizine sur le niveau d'état stable de PrP (PrP ^tot ) a été déterminé sur les mêmes lysats de cellules MovS6 traitées en absence de traitement par la protéinase K. Après lyse cellulaire, les échantillons ont été digérés par la protéinase K afin de révéler le contenu en PrP ^Sc par immunoblot. Les composés en combinaisons sont plus efficaces que les composés seuls.

La figure 5 montre que les combinaisons de composés ont un effet nettement plus important sur le taux d'accumulation de la PrP ^Sc que l'addition des effets des composés seuls. Ce résultat surprenant démontre l'existence d'une synergie entre les composés. Tous ces résultats montrent que les composés réduisent la charge de PrP ^Sc et démontrent leur potentiel thérapeutique.

Les compositions selon l'invention sont efficaces dans le traitement de de la dystrophie musculaire oculo-pharynqée (DMOP) in vitro

Les myoblastes murins H2K D7e (Raz et al. 2011) ont été ensemencés à 80% de confluence dans des plaques 8 puits (Ibidi) dont les puits étaient recouverts d'une couche de matrigel (l/10ième) et contenaient du milieu de prolifération composé de DMEM, de sérum de veau foetal décomplémenté, de pénicilline, streptomycine, généticine, d'extrait d'embryon de poulet et d'interféron gamma. Vingt-quatre heures après ensemencement, les cellules ont été mises en différenciation pendant 4 jours dans un milieu de différenciation composé de DMEM, sérum de cheval (10%) et d'un mélange de penicilline/streptomycine (1%). A 2 jours de différenciation, la moitié du milieu est remplacée par du milieu frais contenant le composé testé solubilisé dans du DMSO pour atteindre une concentration finale de 10 mM dans le puits (3 puits par conditions). Le puits contrôle contient du DMSO dilué au l/100ième. A 4 jours de différenciation, les myotubes ont été fixés à la paraformaldéhyde à 4% pendant 15 minutes puis perméabilisées au Triton X-100 (CAS n° 9002-93-1) 0,1%. PABPN1 a été marqué par immunofluorescence (anticorps ab75855, Abcam, 1/200) et l'actine F a été marquée par de la Phalloïdine couplée à l'Alexa fluor 555 (1/400). Des photographies ont été prises au grossissement 40X. Entre 500 et 700 noyaux ont été dénombrés par puits. Le guanabenz a été utilisé comme contrôle positif. Les résultats sont présentés en figure 6 et mettent en évidence que la flunarizine, le métixène, la thioridazine, l'astémizole, la lopéramide, la duloxétine, l'azélastine et l'ébastine réduisent la quantité de noyaux de cellules musculaires contenant des agrégats de PABPN1. La flunarizine, le métixène et l'ébastine sont plus actifs que le guanabenz. La triflupromazine et la clémastine sont négatives, comme le contrôle négatif utilisé (diazépam). Les compositions selon l'invention sont efficaces dans le traitement de la dystrophie musculaire oculo-pharynqée (DMOP) in vivo dans un modèle Drosophila

Le modèle utilisé est un modèle drosophile pour la DMOP dans lequel la protéine PABPN1 de mammifère avec une répétition de 17 alanines (PABPN1-17 ala) est spécifiquement exprimé dans les muscles de Drosophila (Chartier et al. 2006 ; Chartier et al. 2015). Ces modèles reproduisent les caractéristiques de la maladie, c'est-à-dire une faiblesse et une dégénération musculaires progressives, ainsi que la formation d'agrégats de PABPN1 nucléaire. Ainsi, l'expression de PABPNl-17ala dans les muscles alaires indirects conduit à une posture alaire anormale, résultant de l'affection de la fonction musculaire et de la dégénération des muscles (Chartier et al. 2006). Des drosophiles DMOP mâles ( Act-88F-PABPNl-17ala/+ ) issus du croisement Females w ¹¹¹⁸ ; Act-88F-PABPNl-17ala/TM3, Sb X Males w ¹¹¹⁸ ) ont été mis en contact avec un milieu gélosé nutritif contenant soit 1.5% de DMSO ou 1.5 mM de flunarizine, soit 2% de DMSO, 2 mM de métixène ou 2 mM de guanabenz (contrôle positif), soit 1,5% de DMSO ou 1,5 mM d'ébastine. Le guanabenz a été utilisé comme contrôle positif car son activité a déjà été décrite pour la DMOP (Barbezier et al. 2011 ; Malerba et al. 2019). Le milieu nutritif contenant les composés médicaments a été changé tous les jours pendant 6 jours. La figure 7 montre que le traitement par la flunarizine (panel du haut) et par le métixène (panel du milieu) et l'ébastine (panel du bas) permet de réduire le nombre de drosophiles ayant un phénotype anormal de la position des ailes. Les composés ont été administrés dans la nourriture, préparée comme suit : un milieu instantané pour Drosophila (Carolina Biological Supply Company) a été reconstitué dans chaque tube avec une solution à 1% de levure dans l'eau, complété par les composés solubilisés dans le DMSO avec une concentration croissante, ou avec du DMSO seul. Chaque tube contenait 2 mL de milieu reconstitué. Les composés étaient administrés oralement dans de la nourriture fraîche proposée à des mouches adultes chaque jour du jour 2 au jour 5. Le guanabenz Le guanabenz, dont l'activité a déjà été décrite pour la DMOP (Barbezier et o/. 2011 ; Malerba ét al. 2019), a été utilisé comme contrôle à la concentration de 2 mM. La flunarizine a été administrée à 1,5 mM. Le métixène a été administré à la concentration de 2 mM. L'ébastine a été testée à 1,5 mM. L'effet des composés a été quantifié par la mesure quotidienne du nombre de mouches présentant une posture anormale des ailes, correspondant aux mouches exprimant le PABPNl-17ala, du jour B au jour 6 de l'âge adulte : des groupes de cinq mâles par conditions sont placés dans un tube vide et le nombre de mâles présentant une position anormale des ailes est enregistré par observation directe des mouches dans le tube, sans anesthésie. Le nombre total de mouches analysées pour chaque condition est indiqué dans la figure 7.

Les composés selon l'invention sont efficaces dans un modèle in vivo de la DMOP. La flunarizine, le métixène et l'ébastine ont montré des effets bénéfiques en permettant la réduction significative (test statistique chi-carré) du nombre de mouches présentant une posture des ailes anormales rapporté aux mouches contrôles (administration de DMSO seul) (figure 7).

Ensemble, ces résultats confirment que les composés identifiés par les inventeurs sont de bons candidats pour une utilisation pour inhiber la PFAR, mais également pour leur utilisation, seuls ou en combinaisons, dans le traitement des protéinopathies, par exemple les maladies à prions. Références

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