La présente invention concerne de nouvelles formulations antalgiques liquides, stables, à base de paracetamol. associé ou non à un dérivé analgésique.

Il est connu, depuis de nombreuses années et notamment par un article de FAIRBROTHER J.E., intitulé - Acetaminophen, paru dans Analytical Profiles of Drug Substances (1974), volume 3, Pages 1-109, que le paracetamol placé en milieu humide, et « a fortiori » également lorsqu'il se trouve en solution aqueuse, est susceptible de subir une hydrolyse pour former du p-aminophénol, lui-même susceptible de se dégrader en qumoneimine. La vitesse de dégradation du paracetamol croît avec l'augmentation de la température et à la lumière

Par ailleurs, on a déjà largement décπt l'instabilité du paracetamol en solution aqueuse en fonction du pH de la solution. Ainsi, selon l'article « Stabiiity of aqueous solutions of N-acetyl-p-aminophenol » (KOSHY K.T. et LACH J.l. J. Pharm. Sci., 50, (1961), pages 113-118), le paracetamol en solution aqueuse présente une instabilité qui se traduit par, en premier lieu, une hydrolyse aussi bien en milieu acide qu'en milieu alcalin. Cette dégradation est minimale à un pH voisin de 6, la demi-vie de dégradation atteignant dans ce cas 21,8 années à 25°C.

L'application de la loi d'Arrhenius à l'aide de la constante de réaction spécifique déterminée par ces auteurs conduit à calculer un temps d'environ 19 mois pour observer une baisse de 5 % du titre en paracetamol d'une solution aqueuse conservée à 25°C au pH optimum. Indépendamment de l'hydrolyse, la molécule de paracetamol subit un autre type de décomposition par foπnation d'une quinone-imine susceptible de se polymériser en donnant naissance à des polymères azotés.

Ces polymères et notamment ceux de N-acétyl p-benzoquinone-imine ont été décrits en outre comme étant le métabolite toxique du paracetamol, notamment cytotoxique et hémoiytique. La décomposition de ce métabolite en milieu aqueux est encore plus complexe et donne naissance à de la p-benzoquinone et à de l'hydroquinone (D.DAHLIN J.Med Chem. 25 (1982) 885-886).

Dans l'état actuel de l'art et compte tenu des exigences de qualité propres à la réglementation pharmaceutique, la stabilité du paracetamol en solution aqueuse est de ce fait insuffisante et ne permet pas la réalisation de compositions pharmaceutiques liquides injectables. En conséquence la mise au point de formes pharmaceutiques liquides, notamment injectables, de paracetamol, était restée sans solution.

Certains essais ont été réalisés afin de limiter la dégradation du paracetamol en solution aqueuse. Ainsi, dans un article intitulé : Stabilisation by éthylènediamine tétraacetic acid of amid and other groups in drug compound, (FOGG Q.G et SUMMAN A.M, J. Clin. Pharm. Ther, 17, (1992) 107-109), il est indiqué qu'une solution aqueuse de paracetamol à 0,19% présente un taux de p-aminophénol, produit d'hydrolyse du paracetamol, qui atteint 19,8% du taux initial de paracetamol après conservation à l'obscurité pendant 120 jours. L'addition d'EDTA à raison de 0,0075%, limite cette dégradation à 7%. Par ailleurs, la distillation d'une solution alcaline de paracetamol engendre une teneur de 14% en ammoniaque, en présence ou non de 1000 ppm d'acide ascorbique. En effet, l'acide ascorbique présente des propriétés satisfaisantes pour une telle stabilisation. Cependant, exposée à une lumière intense, une solution de paracetamol contenant 1000 ppm d'acide ascorbique produit malgré cela de l'ammoniaque avec un rendement de 98%. En revanche, l'addition d'EDTA (0,0075%) à cette solution limite la dégradation, le rendement en ammoniaque n'excédant pas 14%.

En dépit de toutes ces tentatives, on n'avait pas pu préparer des solutions liquides aqueuses de paracetamol et notamment des solutions injectables, dont la stabilité puisse être garantie.

La présente invention a pour objet de résoudre ce problème d'une manière commode et satisfaisante. Elle concerne des compositions pharmaceutiques stables renfermant du paracetamol dans un solvant aqueux additionné d'un agent anti- radicalaire. Le solvant aqueux peut être de l'eau ou bien des mélanges aqueux renfermant de l'eau et un polyol comme le polyéthylène glycol (PEG) 300, 400, 1 000, 1 540, 4 000 ou 8 000, le propylène glycol ou le tétraglycol. On peut également utiliser un alcanol soluble dans l'eau, comme par exemple l'éthanol.

La stabilité de ces solutions aqueuses n'est pas conditionnée seulement par le choix d'un véhicule. Elle est déterminée également par d'autres paramètres, comme l'ajustement judicieux du pH, l'élimination de l'oxygène dissout dans le véhicule et l'adjonction d'un agent anti-radicalaire ou capteur de radicaux libres.

L'élimination de l'oxygène dissout s'effectue commodément par barbotage d'un gaz inerte de préférence par barbotage d'azote.

L'agent anti-radicalaire approprié est choisi parmi les dérivés de l'acide ascorbique, les dérivés porteurs d'au moins une fonction thiol et les polyols linéaires ou cycliques.

Le dérivé de l'acide ascorbique est de préférence l'acide D - ou l'acide L-ascorbique, un ascorbate de métal alcalin, un ascorbate de métal alcalino-terreux ou bien encore un ester d'acide ascorbique soluble en milieu aqueux.

Le capteur de radicaux libres, porteur d'une fonction thiol peut être un composé organique substitués par une ou plusieurs fonctions thiol, de la série aliphatique comme la cystéine, l'acétylcysteine, l'acide thioglycolique et ses sels, l'acide thiolactique et ses sels, le dithiothréitol, le glutathion réduit, la thiourée, I' α- thioglycérol, la méthionine et l'acide mercaptoéthane sulfonique.

Le polyol capteur de radicaux libres est de préférence un alcool polyhydroxylé linéaire ou cyclique comme le mannitol, le sorbitol, l'inositol, l'isosorbide, le glycérol, le glucose et les propylène glycols.

Parmi les capteurs de radicaux libres dont la présence est nécessaire pour la stabilité du paracetamol, le dérivé de l'acide ascorbique actuellement préféré est l'ascorbate de sodium. Les dérivés à fonction thiol. préférés sont la cystéine, le glutathion réduit, la N-acétylcystéine et l'acide mercaptoéthane sulfonique.

Il peut s'avérer avantageux d'associer plusieurs capteurs de radicaux libres dans la mesure où ils sont solubles dans l'eau et compatibles entre-eux. Un capteur de

radicaux libres particulièrement avantageux est le mannitol, le glucose, le sorbitol ou encore le glycérol Ils peuvent être associés sans difficulté.

Il peut être avantageux d'ajouter à la préparation, un agent ou plusieurs complexants pour assurer une meilleure stabilité de la molécule du fait que le principe actif est sensible à la présence de traces métalliques susceptibles de favoriser sa dégradation

Les agents chelatants sont par exemple l'acide nitπlo t acétique, l'acide éthylène diamino tétracétique, l'acide éthylène diamino NN' -diacétique NN' -dipropionique, l'acide éthylène diamino tétra phosphonique, l'acide 2, 2' -(éthylène dimino) dibutyπque ou l'acide éthylèneglycol bis (diaminoéthyl éther) N, N, N', N' - tétracétique et leurs sels sodiques ou calciques

Le rôle de l'agent chelatant sera également de complexer les ions divalents (Cuivre, Zinc, Cadmium) éventuellement présents qui ont une influence défavorable sur l'évolution de la forme pendant la durée du stockage

Le gaz utilisé pour le barbotage de la solution en vue de chasser l'oxygène peut être l'azote ou le dioxyde de carbone ou encore un gaz rare. Le gaz préféré est l'azote.

L'isotonie de la préparation peut être obtenue par ajout d'une quantité judicieusement choisie de chlorure de sodium, de glucose, de lévulose ou de chlorure de potassium, ou de chlorure de calcium, ou de gluconoglucoheptonate de calcium, ou de leurs mélanges. L'agent isotonisant préféré est le chlorure de sodium

Le tampon utilisé est un tampon compatible avec une administration injectable à l'homme, et dont le pH peut être ajusté entre 4 et 8. Les tampons préférés sont à base d'acétates ou de phosphates d'un métal alcalin ou alcalmo-terreux Le tampon davantage préféré est l'acétate de sodium, l'hydrofenophosphate ajusté au pH requis par de l'acide chlorhydπque ou de l'hydroxyde de sodium. La concentration de ce tampon peut être comprise entre 0,1 et 10 mg/ml La concentration préférée est incluse dans les limites de 0,25 à 5 mg/ml

Par ailleurs, les préparations injectables doivent être stériles, et doivent pouvoir être stérilisées par la chaleur. Il est connu que dans certaines conditions, des antioxydants comme le glutathion peuvent se dégrader [FIALAIRE A. et al., J. Pharm. Biomed. Anal.. Vol 10. N° 6. p.457-460 (1992)]. Le taux de dégradation du glutathion réduit lors d'une stérilisation par la chaleur varie de 40 à 77 % selon les conditions de température retenues. Au cours de telles stérilisations, il est donc judicieux de mettre en oeuvre les moyens susceptibles de préserver l'intégrité de ces antioxydants. L'addition de complexants à des solutions aqueuses, inhibe la dégradation par la chaleur de dérivés thiols, tels que le glutathion.

Les compositions pharmaceutiques liquides selon l'invention sont de préférence des compositions injectables. La concentration en paracetamol de la solution peut être comprise entre 2 mg/ml et 50 mg/ml s'il s'agit de solutions dites « diluées », c'est-à- dire directement prêtes à être perfusées par vois intraveineuse et entre 60 mg/ml et 350 mg/ml s'il s'agit de solutions dites « concentrées », c'est-à-dire soit destinées à être injectées directement par voie intraveineuse ou par voie intramusculaire, soit destinées à être diluées avant de les administrer en perfusion lente. Les concentrations préférées sont comprises en 5 et 20 mg/ml pour les solutions diluées et entre 100 et 250 mg/ml pour les solutions concentrées.

Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent en outre renfermer un autre principe actif qui renforce l'effet propre du paracetamol.

En particulier les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent renfermer un antalgique central comme par exemple un analgésique morphinique.

L'analgésique morphinique est sélectionné parmi les dérivés morphiniques d'extraction, d'hémi-synthèse ou de synthèse et les dérivés pipéridiniques choisis dans la liste suivante, sans que celle-ci soit exhaustive : buprénorphine, ciramadol, codéine, dextromoramide, dextropropoxyphène, hydrocodone, hydromorphone, kétobémidone, lévométhadone, lévorphanol, meptazinol, méthadone, morphine, nalbuphine, nicomorphine, dizocine, diamorphine, dihydrocodéine, dipipanone, méthorphane, dextrométhorphan...

Les dérivés morphiniques préférés sont le sulfate de codéine ou le chlorhydrate de morphine.

La concentration de codéine ou du dérivé de la codéine, exprimée en codéine base, est comprise entre 0.2 et 25 % de celle du paracetamol. Le dérivé de la codéine préféré est le sulfate de codéine. Sa concentration préférée est fixée entre 0,5 et 15% de celle du paracetamol.

La concentration en morphine ou en dérivé de la morphine, exprimée en morphine base, est comprise entre 0,05 et 5 % de celle du paracetamol. Le dérivé de la morphine préféré est le chlorhydrate de morphine. Sa concentration préférée est fixée entre 0,5 et 15 % de celle du paracetamol.

Les compositions selon l'invention peuvent également être additionnées d'un agent anti-inflammatoire du type AINS et en particulier dérivé d'un acide phénylcétique. Un exemple de tels agents est le kétoprofène, le flurbiprofène, l'acide tiaprofénique, l'acide niflumique, le diclofénac ou le naproxène.

Les compositions selon l'invention peuvent également être additionnées d'un agent anti-émétique soit neuroleptique d'action centrale tel que l'haloperidol ou la chlorpromazine ou la metopimazine ou d'action gastrokinetique comme le métochlopramide ou la dompéridone ou encore un agent serotoninergique.

Les compositions selon l'invention peuvent également être additionnées d'un médicament anti-épileptique comme le valproate de sodium, le chlonazépam, la carbamazépine ou la phénytoïne.

On peut également associer au paracetamol un corticostéroïde comme par exemple la prednisone, la prednisolone, la métyl prednisone, la dexaméthasone, la bétamétasone ou un de leurs esters.

On peut également associer au paracetamol un antidépresseur tricyclique comme l'amitriptiline, l'imipramine, la chlomipramine.

Les concentrations en agents anti-inflammatoires peuvent s'échelonner de 0,100 g à 0,500 g pour 1.000 ml de préparation.

Pour les solutions concentrées La quantité d'eau utilisée en pourcentage est de préférence supérieure à 5% du volume final et de préférence comprise entre 10 et 65%.

La quantité de propylèneglycol utilisée en pourcentage est de préférence supérieure à 5% et de préférence comprise entre 20 et 50%.

Le PEG utilisé est de préférence le PEG 300, le PEG 400, le PEG 1000, le PEG 1540 ou le PEG 4000. Les concentrations utilisées sont comprises entre 10 et 60% en poids. Le PEG 300 et le PEG 400 sont davantage préférés. Les concentrations préférées vont de 20 à 60%.

Les concentrations d'ethanol vont de 0 à 30% du volume final et de préférence vont de 0 à 20%.

Les concentrations de tétraglycol utilisées n'excèdent pas 15% afin de tenir compte des quantités maximales administrables quotidiennement par voie parentérale, à savoir 0,7 ml/kg de poids corporel.

La concentration en glycérol varie de 0,5 à 5 % en fonction de la viscosité du milieu compatible vu le mode d'administration.

Pour les solutions diluées La quantité d'eau utilisée en pourcentage est de préférence supérieure à 20% du volume final et de préférence comprise entre 25 et 100%.

La quantité de propylèneglycol utilisée est en pourcentage de préférence comprise entre 0 et 10%.

Le PEG utilisé est de préférence le PEG 300, le PEG 400 ou le PEG 4000. Le PEG 4000 est préféré.

Les concentrations préférées vont de 0 à 10%.

Les concentrations de tétraglycol utilisées n'excèdent pas 5%. Elles sont comprises de préférence entre 0 et 4%.

La concentration d'acide ascorbique ou de dérivé d'acide ascorbique qui est utilisée est de préférence supérieure à 0,05 mg/ml et d'une manière davantage préférée, comprise entre 0,15 mg/ml et 5 mg/ml. Des quantités supérieures peuvent être utilisées en effet, dans les limites de la solubilité. Des doses d'acide ascorbique ou de dérivé d'acide ascorbique plus élevées sont administrées à titre préventif ou curatif à l'homme.

La concentration en dérivé thiol est comprise entre 0,001% et 30% et d'une manière davantage préférée, comprise entre 0,005% et 0,5% pour les solutions diluées, et entre 0,1% et 20% pour les solutions concentrées.

Le pH de la solution est ajusté de préférence en tenant compte de l'optimum de stabilité du paracetamol en solution aqueuse, c'est-à-dire à un pH voisin de 6,0.

La composition ainsi préparée pourra être conditionnée en ampoules de verre scellées, ou en flacons de verre bouchés ou en flacons d'un polymère tel que le polyéthylène, ou en poches souples de polyéthylène, de polychlorure de vinyle ou de polypropylène.

La composition pourra être stérilisée par traitement thermique, par exemple à 121 °C pendant 20 minutes ou bien par filtration stérilisante.

Les compositions actuellement préférées selon l'invention ont les compositions suivantes :

Solutions concentrées

Solution injectable de Solution injectable de paracetamol

Constituant paracetamol seul associé à un morphinique

(par ml) (par mi)

Codéine Morphine

Paracetamol 0,160 g 0,160 g 0,160 g

Sulfate de codéine 3 H ₂ 0 - 0,0036 g -

Chlorhydrate de morphine 3 H ₂ 0 - - 0,00037 g

Propylène glycol 0,270 ml 0,270 ml 0,270 ml

PEG 400 0,360 ml 0,360 ml 0,360 ml

Acétate de sodium 0,002 g 0,002 g 0,002 g

Glutathion réduit 0,002 g 0,002 g 0,002 g

Acide chlorhydrique 1N qsp pH 6,0* qsp pH 6,0* qsp pH 6,0*

Eau pour préparations injectables qsp 1.000 ml qsp 1 ,000 ml qsp 1 ,000 ml

Azote qsp barbotage qsp barbotage qsp barbotage

* le pH indiqué est un pH réel. Il est obtenu par pHmétrie après dilution au 1/5 de la solution par de l'eau distillée. Le pH apparent de la solution pure est différent.

Cette solution composée d'un mélange solvant constitué de 30% de propylèneglycol, de 40% de polyéthylèneglycol 400 et de 30% d'eau (solution n°20), permet de solubiliser environ 200 mg/ml de paracetamol à 20°C. Le choix d'une concentration de 160 mg/ml permet d'éviter tout risque de recristallisation, notamment à basse température. Dans ces conditions, un volume de 6,25 ml de ladite solution renferme 1000 mg de paracetamol.

Solutions diluées

Solution paracetamol Solution de paracetamol associé à la

Constituant seul (par ml) codéine (par ml)

Ce morphinique Ce morphinique est la codéine est la morphine

Paracetamol 0,0125 g 0,125 g 0,125 g

Sulfate de codéιne3H ₂ 0 0,00018 g -

Chlorhydrate de _

0,000019 g morphine 3 H ₂ 0

Mannitol 0,025 g 0,025 g 0,025 g

Hydrogénophosphate 0,00025g 0,00025g 0,00025g de sodium dihydraté

Chlorure de sodium 0,0020 g 0,0020 g 0,0020 g

Ethylène diamino tetra- 0,0001 g 0,0001 g 0,0001 g acétate disodique

Acide chlorhydnque ou qsp pH 5,5 qsp pH 5,5 qsp pH 5,5 hydroxyde de sodium

Eau pour préparations qsp 1,000 ml qsp 1 ,000 ml qsp 1,000 ml injectables

Azote qsp barbotage qsp barbotage qsp barbotage

Les compositions selon l'invention trouvent leur emploi en thérapeutique comme médicament de la douleur Pour les douleurs modérées, les solutions contiennent seulement du paracetamol. Pour les douleurs plus aiguës, les solutions contiennent, en outre, un analgésique morphinique Par ailleurs, les solutions de paracetamol ont des propriétés antipyrétiques.

Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter .

EXEMPLE I

Détermination du mélange solvant optimal

1.1 - Solutions concentrées Des quantités croissantes de paracetamol ont été introduites dans des mélanges de solvants. La vitesse de dissolution du paracetamol augmentant avec la température, les essais de solubilisation dans ces différents milieux ont été réalisés en chauffant à

60°C le mélange de solvants. Après dissolution complète du paracetamol, les solutions ont été placées 72 heures à 25°C et à 4°C.

Les solubilités obtenus sont rassemblées dans le tableau ci-après

Solubilité Solubilité

N° Eau Propylène PEG 400 Ethanol Tétraglycol à +4°C à +25°C essai (ml) glycol (ml) (ml) (ml) (ml) (mg/ml) (mg/ml)

1 0.3 0,4 0.3 - - 110 130

2 0,4 0,3 0,3 - - 110 130

3 0,15 0,3 0,4 - 0,15 190 230

4 0,5 - 0,5 - - 110 150

5 0,4 0,3 0,2 0,1 - < 110 120

6 0,5 0,3 0,1 0,1 - < 100 130

7 0,4 0,4 0,1 0,1 - < 100 150

8 0,5 0,3 0,2 - - < 100 120

9 0,6 0,3 0,1 - - < 100 < 100

10 0,5 0,4 0,1 - - < 100 110

11 0,55 0,3 0,05 0,1 - < 100 < 100

12 0,45 0,4 0,05 0,1 - < 100 120

13 0,65 0,3 0,05 - - < 100 < 100

14 0,55 0,4 0,05 - - < 100 < 100

15 0,4 0,4 0,2 - - < 100 150

16 0,45 0,45 0,1 - - < 100 110

17 0.4 0,2 0,4 - - 160 200

18 0,5 0,2 0,3 - - 100 160

19 0,5 0,1 0,3 0,1 - 100 190

20 0,3 0,3 0,4 - - 190 200

21 0,3 0,2 0,35 - 0,15 160 210

22 0,25 0,25 0,35 - 0,15 170 220

La solubilité dans les mélanges de solvants n'augmente pas toujours avec la température. L'adjonction d'ethanol n'augmente pas la solubilité.

En outre, en raison des phénomènes de sursaturation qui apparaissent dans de telles solutions, notamment dans les milieux contenant du PEG, on observe un retard à la cristallisation après refroidissement. Dans ces conditions, ces solutions ont été maintenues pendant 14 jours à 20°C, puis on a ajouté, dans les solutions ne présentant pas de cristaux après cette période, un cristal de paracetamol afin de provoquer la cristallisation des solutions en sursaturation éventuelle. Finalement c'est la solution n° 20 ou la solution n° 3 qui a présenté la solubilité la plus élevée en paracetamol, comprise entre 160 mg/ml et 170 mg/ml selon la température.

1.2 - Solutions diluées

Des quantités de paracetamol très supérieures à la limite de solubilité ont été introduites dans des mélanges de solvants portés à 30° C. Après agitation et refroidissement à 20°C, les solutions sont filtrées. La teneur de ces solutions en paracetamol est déterminée par mesure de l'absorbance à 240 nm d'une dilution au 1/200ème du filtrat.

Les résultats figurent dans les tableaux ci-après.

Nature de la solution Concentration en paracetamol (sauf indication contraire, le solvant principal est l'eau (mg/50 ml) distillée)

Eau 720

Glucose 5 % 710

Lévulose 4,82 % 730

Mannitol 7 % 680

Sorbitol 5 % 685

Chlorure de sodium 0,9 % 615

Gluconoglucoheptonate de calcium 10 % 670

Solution de Lestradet (glucose 5%, chlorure de sodium 0,2%, chlorure de potassium 0,15%, glucono 730 glucoheptonate de calcium 1 ,1%)

Solution de Ringer (chlorure de sodium 0,7%, chlorure de potassium 0,1%, chlorure de sodium 730 0,013%)

Solution de Ringer phosphate (chlorure de sodium 0,7%, phosphate monopotassique 0,182%, chlorure 710 de calcium 0,013%)

Solution de Ringer acétate (chlorure de sodium 0,7%, acétate de potassium 0,131%, chlorure de calcium 715 0,013%)

Urée 0,3 molaire 725

Nature de la solution Concentration en I

(les solutions suivantes ont été réalisées dans la paracetamol solution de Ringer) (mg/50 ml)

Solution de Ringer pure 735

+ PEG 40004,0% + Propylèneglycol 1,0% + Ethanol 0,5 % 905

+ PEG 40004,0% + Propylèneglycol 1,0% + Ethanol 1,0 % 905

+ PEG 40004,0% + Propylèneglycol 1 ,0% + Ethanol 2,0 % 930

Nature de la solution Concentration en

(les solutions suivantes ont été préparées dans une paracetamol solution de chlorure de sodium 0,9 %) (mg/50 ml)

Chlorure de sodium 0.9 % 615

+ Tétraglycol 0,6 % 640

+ Tétraglycol 1 ,2 % 680

+ Tétraglycol 3,0 % 720

+ PEG 4000 1,0 % 630

+ PEG 4000 1 ,0% + Tétraglycol 0,6 % 660

+ PEG 4000 1 ,0% + Tétraglycol 1 ,2 % 710

+ PEG 4000 3,0% + Tétraglycol 2,0 % 950

La présence de PEG augmente la solubilité du paracetamol.

On a déterminé les solubilités du paracetamol dans des mélanges de PEG 4000 et de solution de chlorure de sodium à 0,9% dans l'eau distillée, à des concentrations variant entre 0 et 7%, en fonction de la température.

Les résultats figurent dans le tableau suivant :

Volume (ml) de solvant nécessaire pour solubiliser 1000 mg de paracetamol en fonction de la température

I Concentration en PEG 4000 (%/v) dans la solution de chlorure de sodium à 0,9% 4°C 17°C 22°C 30°C 42°C

0 % 130 92 80 65 42

1 % 99 78 67 63 47

2 % 91 72 63 59 45

3 % 80 64 56 54 41

4 % 82 62 57 49 36

5 % 79 59 51 46 34

7% 78 61 48 42 30

4 1 - Solution concentrée

QUANTITE

CONSTITUANT Solution sans Solution avec barbotage d'azote barbotage d'azote

Paracetamol 0,160 g 0,160 g

Propylène glycol 0,270 ml 0,270 ml

PEG 400 0,360 ml 0,360 ml

Hydroxyde de sodium ou HC1 1 N qsp pH 6,0 qsp pH 6,0

Azote néant qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1 ,000 ml qsp 1 ,000 ml

La solution 20 contenant le paracetamol à raison de 160 mg/ml, ajustée à pH 6,0 par l'hydroxyde de sodium ou l'acide chlorhydrique 1N, a subi ou non un barbotage d'azote Des flacons remplis sous azote ou sous air, à raison de 10 ml de ces solutions, soigneusement bouchés et sertis, ont été stérilisés par autoclavage à 121°C pendant 20 minutes. On a mesuré ensuite, par chromatographie liquide, le pourcentage de pics secondaires par rapport au pic principal du paracetamol, ainsi que l'intensité de la coloration rose par mesure de l'absorbance de la solution par spectrophotometne d'absorption à la longueur d'onde maximale d'absorption, soit 500 nm.

Résultats

Pics secondaires en %

Solution testée du pic pπncipal du Absorbance de la paracetamol solution à 500 nm

Solution autoclavée sans azote 0,054 0,08

Solution autoclavée avec azote 0,036 0,03

La différence de coloration de la solution sous azote est donc très nette.

Afin de vérifier que les solutions de paracetamol à 0% et 1% de PEG restaient limpides au froid, les solutions suivantes ont été réalisées :

Après maintien de ces solutions à 4°C pendant 10 jours, aucun des flacons testés ne présentait de cristallisation. La présence du PEG n'est donc pas nécessaire pour le maintien de la clarté de la solution dans le laps de temps étudié.

EXEMPLE II Essais de détermination de la nature de la décomposition du paracetamol en solution

2.1 - Mise en évidence de l'instabilité du paracetamol en solution

Une solution de paracetamol dans l'eau ou dans la solution n°20 se colore rapidement en rose par exposition à la lumière ou par maintien à température élevée. A 50°C, cette coloration se produit après 2 semaines. L'application de cette coloration se traduit par une augmentation de l'absorbance de la solution à un max de 500 nm. Selon l'article de FAIRBROTHER cité plus haut, l'exposition du paracetamol à l'humidité peut conduire à une hydrolyse en para-aminophénol, suivie d'une oxydation, avec apparition d'une coloration rose, caractéristique de la formation de quinoneimine.

2.2 - Nature des produits de dégradation du paracetamol

Dans les solutions aqueuses ou partiellement aqueuses, on ne retrouve pas de p- aminophénol au cours de la conservation. Il se forme rapidement des composés colorés de teinte rosâtre, la vitesse de réaction étant fonction de la température et de la lumière. Au cours du temps, l'intensité de la coloration de ces dérivés augmente et évolue vers le brun.

Tout se passe donc comme si, contrairement à ce qui est indiqué dans la littérature, la dégradation du paracetamol faisait d'abord appel à un processus oxydatif puis à une hydrolyse. Dans cette hypothèse, le paracetamol pourrait réagir avec un oxydant contenu dans la solution, par exemple l'oxygène dissous dans la phase aqueuse. Ce mécanisme mettrait en jeu la formation de radicaux libres permettant des couplages moléculaires, responsables de la formation de dérivés coiorés évoluant du rose au brun.

2.3 - Essais d'inhibition de la formation de composés radicalaires

Une réaction typique mettant en jeu la formation de radicaux libres est constituée par l'addition d'une solution aqueuse d'eau oxygénée à 30 % et de sulfate de cuivre pentahydraté à 62,5 mg/ml à une solution aqueuse de paracetamol à 1,25 %. En quelques minutes, il se produit une réaction colorée évoluant du jaune au brun foncé. L'intensité de la coloration obtenue décroit si l'on ajoute préalablement à la solution de paracetamol des capteurs de radicaux libres ou du glycerol. L'intensité de la coloration est fonction de la nature du capteur de radicaux libre ajouté, dans l'ordre d'intensité décroissante suivant :

Paracetamol seul > paracetamol + N-acétylcystéine > paracetamol + cystéine > paracetamol + sorbitol > paracetamol + mannitol > paracetamol + glycerol.

EXEMPLE III

Stabilisation du paracetamol en solution par choix du pH de stabilité optimale

3.1 - Solution concentrée Solution testée

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,160 g

Propylène glycol 0,270 ml

PEG 400 0,360 ml

Hydroxyde de sodium 1N pH 7,0 - 8,0 - 8,5 - 9,0 - 9,5 - 10,0 ou Acide chlorhydrique 1 N correspondant à pH réel : pH 5,8 - 6,7 - qsp 7,1 - 7,5 - 8,0 - 8,5

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1 ,000 ml

La solution 20 contenant le paracetamol à raison de 160 mg/ml a été ajustée à différents pH : pH apparent au pH réel après dilution au 1/5 (entre parenthèses) : 7,0 (5,8) - 8,0 (6.7) - 8,5 (7,1) - 9,0 (7,5) - 9,5 (8,0) - 10,0 (8,5) par une solution d'hydroxyde de sodium ou d'acide chlorhydrique normale. Des flacons remplis sous azote à raison de 10 ml de ces solutions, soigneusement bouchés et sertis ont été stérilisés par autoclavage à 121 °C pendant 20 minutes, puis dans tous les cas. exposés soit à 105°C à l'obscurité pendant 72 heures, soit au rayonnement d'une lumière actinique à 5000°K à 25°C pendant 264 heures.

Résultats

Après autoclavage, seule la solution ajustée à pH 10 présente une coloration rose. Après conservation à 105°C pendant 72 heures, l'absorbance à 500 nm ainsi que la teneur en produits de dégradation du paracetamol est minimale dans la gamme de pH comprise entre 7,0 et 9,5. Après conservation à la lumière, l'intensité de la coloration croît avec le pH. Elle est minimale à pH 7,0 (réel 5,8). Ni la teneur en paracetamol, ni le taux de produits de dégradation ne sont affectés par le pH.

3.2 - Solution diluée

Solution testée

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,008 g

Chlorure de sodium 0,0067 g

Phosphate disodique dihydraté 0,0012 g

Acide citrique à 5 % qsp pH 5,0 - 6,0 - 7,0

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1 ,000 ml

La solution aqueuse diluée et tamponnée contenant le paracetamol à raison de 8 mg/ml a été ajustée à différents pH : pH 5,0 - 6,0 - 7,0 à l'aide d'une solution d'acide citrique.

Des flacons remplis sous azote à raison de 10 ml de ces solutions, soigneusement bouchés et sertis, ont été stérilisés ou non, par autoclavage à 121°C pendant 20 minutes, puis dans tous les cas, exposés à 70°C à l'obscurité pendant 231 heures.

Résultats

Après autoclavage, seule la solution ajustée à pH 7 présente une coloration rose. Après conservation, la même solution présente la coloration rose la plus intense. A pH 6,0 et 5,0, les solutions sont faiblement colorées.

EXEMPLE IV

Stabilisation du paracetamol en solution par élimination de l'oxygène par barbotage d'azote

4.2 - Solution diluée

Solution testée

QUANTITE

CONSTITUANT Solution sans Solution avec barbotage d'azote barbotage d'azote

Paracetamol 0,008 g 0,008 g

Chlorure de sodium 0,008 g 0,008 g

Phosphate disodique dihydraté 0,001 g 0,001 g

Acide citrique à 5 % qsp pH 6,0 qsp pH 6,0

Azote néant qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1,000 ml qsp 1 ,000 ml

La solution aqueuse diluée contenant le paracetamol est ajustée à pH 6,0 à l'aide d'une solution d'acide citrique.

Des flacons remplis sous azote à raison de 10 ml de ces solutions, soigneusement bouchés et sertis sont maintenus à l'étuve à 98°C pendant 15 heures. On mesure ensuite, par chromatographie liquide, le pourcentage des pics secondaires par rapport au pic principal du paracetamol, ainsi que l'intensité de la coloration rose par mesure de l'absorbance de la solution par spectrophotométrie d'absoφtion à la longueur d'onde maximale d'absorption, soit 500 nm.

Résultats

Pics secondaires en %

Solution testée du pic principal du Absorbance de la paracetamol solution à 500 nm

Solution conditionnée sans azote 1 ,57 0,036

Solution conditionnée avec azote 0,44 0,016

La coloration rose de la solution conditionnée sous azote est considérablement plus faible que celle obtenue après stérilisation sous azote de ta solution conditionnée sans azote.

EXEMPLE V Stabilisation de solutions de paracetamol par addition d'agents anti- radicalaires

5.1 - Solution concentrée

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,160 g

Propylène glycol 0,270 ml

PEG 400 0,360 ml

Acide chlorhydrique 1 N ou Na-OH 1 N qsp pH 6,0

Capteur de radicaux libres qs (voir # résultats) (voir # résultats)

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1 ,000 ml

Les solutions ainsi préparées sont réparties en flacons de 10 ml, bouchés à l'aide d'un bouchon en Bromobutyl et operculés par une capsule aluminium. Après autoclavage à 121°C pendant 20 minutes, les flacons ont été conservés 48 heures, soit sous une lumière actinique à 5500°K à température ambiante, soit à 70°C à l'obscurité. On examine l'apparition d'une coloration éventuelle de la préparation.

Résultats

Capteur de radicaux Concentration Aspect de la Aspect de la libres solution à la lumière solution à 70°C

Couleur intensité Couleur intensité

Pas de capteur - rose (+) rose (++)

Disulfite de sodium 0,295 mg/ml incolore incolore

Ascorbate de sodium 1 ,0 mg/ml jaune (+) jaune (+)

Glutathion réduit 1 mg/ml incolore incolore

Glutathion réduit 8 mg/ml incolore incolore

Cystéine chlorhydra. 1 mg/ml trouble trouble α-monothiogiycérol 1 mg/ml incolore incolore

Dithiothréitol 1 mg/ml incolore incolore

Mannitol 50 mg/ml incolore incolore

5.2 - Solution diluée

Solutions testées

CONSTITUANT QUANTITE 1 formulation A formulation B formulation C

Paracetamol 0,008 g 0,01 g 0,0125 g

Chlorure de sodium 0,008 g 0,008 g 0,00486 g

Phosphate disodique dihydraté ou 0,001 g 0,001 g 0,00125 g acétate de sodium

Acide chlorhydrique qsp pH 6,0 qsp pH 6,0 qsp pH 5,5

C.R.L qs (voir # résultats)

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1,000 ml

Les solutions ainsi préparées ont été réparties en flacons de 10 ml, 100 ml ou 80 ml, bouchés à l'aide d'un bouchon en Bromobutyl et operculés par une capsule aluminium. On a examiné le rosissement éventuel de la préparation.

Après autoclavage à 121°C pendant 20 minutes, les flacons ont été conservés 48 heures, soit sous une lumière actinique à 5500°K à température ambiante, soit à 70°C à l'obscurité (formulation A).

Après autoclavage à 124°C pendant 7 minutes, les flacons ont été conservés pendant 48 heures à température ambiante à l'obscurité (formulation B et C). On a examiné le rosissement éventuel de la préparation et on a dosé le paracetamol ainsi que le C.R.L. lorsqu'il s'agissait d'un dérivé thiol.

Résultats

C.R.L. utilisé Concentration Aspect de la Aspect de la solution à la lumière solution à 70°C

Couleur intensité Couleur intensité

Pas de C.R.L. - rose (+) rose (++)

Thio-urée 0,5 mg/ml incolore incolore

Dithiothréitol 1 mg/ml incolore incolore α-monothioglycérol 1 mg/ml incolore incolore

Glutathion 1 mg/ml incolore incolore

Ascorbate de sodium 0,2 mg/ml rose (+) rose (+)

0,4 mg/ml incolore jaune (+)

0,6 mg/ml rose (+) jaune (+)

1 ,0 mg/ml incolore jaune (+)

Cystéine chlorhydrate 0,05 mg/ml incolore incolore

0,1 mg/ml incolore incolore

0,25 mg/ml incolore incolore

0,5 mg/ml incolore incolore

0,75 mg/ml incolore incolore

1 mg/ml incolore incolore

2 mg/ml incolore incolore

5 mg/ml incolore incolore

C.R.L. utilisé Aspect de la Dosages (en % de la

Concentration solution théorie)

Couleur intensité C.R.L Paracetamol

Cystéine chlorhydrate 0.2 mg/ml incolore 80 % 99.2 % monohydrate

Cystéine chlorhydrate 0,5 mg/ml incolore 95 % 99,6 % monohydrate

N-acétylcystéine 0,2 mg/ml incolore 88 % 99,2 %

Mannitol 20 mg/ml incolore

Mannitol 40 mg/ml incolore

Mannitol 50 mg/ml incolore

Glucose 50 mg/ml incolore

EXEMPLE VI

Stabilisation de solutions de paracetamol contenant un dérivé morphinique par l'addition de capteur de radicaux libres

6.1 - Solution concentrée

Solutions testées

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,160 g

Phosphate de codéine 0,008 g

Propylène glycol 0,270 mt

PEG 400 0,360 ml

Acide chlorhydrique 1N qsp qsp pH 6,0

Capteur de radicaux libres qs (voir # résultats)

Eau pour préparations injectables qsp 1 ,000 ml

Les solutions ainsi préparées sont réparties en flacons de 10 ml, bouchés à l'aide d'un bouchon en Bromobutyl et operculés par une capsule aluminium. Après

autoclavage à 121 °C pendant 20 minutes, les flacons ont été conservés 48 heures, soit sous une lumière actinique à 5500°K à température ambiante, soit sous une lumière actinique à 5500°K à température ambiante, soit à 70°C à l'obscurité. On examine l'apparition d'une éventuelle coloration de la préparation.

Résultats

Capteur de Aspect de la Aspect de la radicaux libres Concentration solution à la lumière solution à 70°C

Couleur intensité Couleur intensité

Pas de capteur de rose (+) rose (++) radicaux libres

Disulfite de sodium 0,295 mg/ml jaune (+) jaune (++)

Ascorbate de sodium 1 ,0 mg/ml jaune (++) jaune (+++)

Gluthation réduit 1 mg/ml jaune (+) jaune caramel (+++)

8 mg/ml incolore jaune (++)

16 mg/ml incolore jaune (+)

Dithiothréitol 1 mg/ml rose violet (+++) rose violet (++++)

Hypophosphite de sodium 5 mg/ml rose (+) rose (++)

6.2 - Solution diluée

Solutions testées

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,008 g

Phosphate de codéine 0,0004 g

Chlorure de sodium 0,008 g

Phosphate disodique dihydraté 0,0015 g

Acide chlorhydique qsp pH 6,0

Capteur de radicaux libres qs (voir # résultats)

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1 ,000 ml

Les solutions ainsi préparées ont été réparties en flacons de 10 ml, bouchés à l'aide d'un bouchon en Bromobutyl et operculés par une capsule aluminium. Après autoclavage à 121°C pendant 20 minutes, les flacons ont été conservés 48 heures, soit sous une lumière actinique à 5500°K à température ambiante, soit à 70°C à l'obscurité. On a examiné l'apparition d'une coloration de la préparation.

Sur la solution ne contenant pas de capteur de radicaux libres et sur la solution contenant 0,5 mg/ml de chlorhydrate de cystéine comme agent anti-radicalaire, on dose le paracetamol et la codéine par chromatographie liquide à haute performance, immédiatement après autoclavage, comparativement aux mêmes solutions non autoclavées.

Résultats sur l'aspect des solutions

Capteur de Aspect de la Aspect de la radicaux libres Concentration solution à la lumière solution à 70°C

Couleur intensité Couleur intensité

Pas de capteur de rose (+) rose (+) radicaux libres

Disulfite de sodium 0,295 mg/ml incolore incolore

Dithiothréitol 0,5 mg/ml incolore incolore

Monothioglycérol 0,5 mg/ml gris gris

Gluthation réduit 2,0 mg/ml incolore incolore

N-acétylcystéine 2,0 mg/ml gris (+) gris (+)

Cystéine chlorhydrate 0,05 mg/ml incolore rose (+)

0,1 mg/ml incolore incolore

0,25 mg/ml incolore incolore

0,5 mg/ml incolore incolore

0,75 mg/ml incolore incolore

1 ,0 mg/ml incolore incolore

2,0 mg/ml incolore incolore

5,0 mg/ml incolore incolore

Résultats sur le dosage du paracetamol et de la codéine

Solution non

Solution testée Constituant dosé stérilisée Après stérilisation

Solution sans Paracetamol 0,0078 g/ml 0,0077 g/ml capteur de radicaux Codéine 0,00043 g/ml 0.00042 g/ml libres

Solution contenant 0,5 mg/ml de Paracetamol 0,0082 g/ml 0,0081 g/ml chlorhydrate de Codéine 0,00042 g/ml 0,00042 g/ml cystéine

On constate ainsi d'une part l'absence d'apparition d'une coloration et d'autre part une parfaite conservation des principes actifs après stérilisation à la chaleur.

EXEMPLE VII

Tolérance biologique de la préparation

7.1 - Tolérance hématoloqique

Solution testée

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,160 g

Propylène glycol 0,270 ml

PEG 400 0,360 ml

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1,000 ml

Le pH de cette solution n'a pas été ajusté. Le pH apparent est de 7,6, soit un pH réel de 6,5.

Du sang total humain est incubé avec la solution testée, à volume égal. Toutes les 10 minutes. 2 ml du mélange sont prélevés et centrifugés 5 minutes à 5000 T/minute. 100 μl du surnageant sont dilués dans 1 ml d'eau distillée. L'absorbance de cette solution est déterminée contre de l'eau à 540 nm. longueur d'onde du maximum d'absorption de l'hémoglobine.

L'étude est réalisée comparativement à un témoin négatif (sérum physiologique) et un témoin positif (eau pour préparations injectables pure).

Résultats

Les absorbances des différentes solutions après différents temps d'incubation sont fournies dans le tableau ci-après :

Solution T0 10 min 20 min 30 min 40 min 50 min 60 min

Eau p.p.i 2,23 2,52 2,30 2,37 2,38 2,33 2,36

Sérum 0,04 0,05 0,05 0,05 0,04 0,05 0,04 physiol.

Sol. testée 0,09 0,19 0,27 0,25 0,24 0,24 0,25

Aucun effet d'hémolyse ne peut être décelé.

7.2 - Tolérance musculaire

Solution testée

CONSTITUANT QUANTITE

Paracetamol 0,160 g

Propylène glycol 0,270 ml

PEG 400 0,360 ml

Azote qsp barbotage et remplissage

Eau pour préparations injectables qsp 1,000 ml

Le pH de cette solution n'a pas été ajusté. Le pH apparent est de 7,6.

Des rats Sprague-Dawley, pesant entre 260 g et 450 g sont anesthésiés par une injection IP de carbamate d'éthyle (2 ml/kg d'une solution aqueuse à 50%). Le muscle extensor digitorum longus est prélevé de la patte arrière, gauche ou droite, et placé dans un milieu tampon répondant à la composition suivante :

CONSTITUANT QUANTITE

Chlorure de sodium 6,8 g

Chlorure de potassium 0,4 g

Dextrose 1 ,0 g

Bicarbonate de sodium 2,2 g

Rouge de phénol (sel de sodium) 0,005 g

Eau distillée qsp 1 litre

Acide chlorhydrique 1 qsp pH 7,4

Le muscle est provisoirement fixé sur une planchette et maintenu par les tendons. Le produit à étudier est injecté à raison de 15 μl à l'aide d'une seringue Hamiiton n°702 de 25 μl de capacité. Le muscle est ensuite placé sur une grille et plongé dans la solution tampon maintenue à 37°C sous barbotage de carbogène pendant toute la durée de l'incubation. Toutes les 30 minutes, les muscles sont introduits dans un tube contenant un tampon neuf à 37°C. L'opération est recommencée 4 fois. La solution de tampon incubée est analysée pour détermination de l'activité de la créatine-kinase.

L'étude est menée comparativement à :

• muscle seul non injecté (blanc) • aiguille seule (introduction de l'aiguille sans injection de produit)

• sérum physiologique

• solution de Triton X-100 (témoin positif)

• solution 20

• solution 20 + paracetamol 160 mg/ml

La créatine-kinase est dosée sur un automate HITACHI 704 à l'aide du kit réactif Enzyline CK NAC optimisé 10 (Biomérieux).

Résultats

Les activités de la créatine-kinase (Ul/I) dans les différentes solutions après différents temps d'incubation sont fournies dans le tableau ci-après :

Solution testée 30 min 60 min 90 min 120 min TOTAL

Muscle seul 23 + 6 24 + 12 15 + 7 13 + 5 75

Aiguille seule 35 + 6 33 + 10 20 + 4 18 + 7 106

Sérum physiol. 30 + 6 30 + 12 17 + 5 23 + 4 100

Triton X-100 12802 + 2114 1716 + 978 155 + 89 289 + 251 14962

Solution 20 71 + 24 89 + 40 39 + 27 62 + 39 261 (excipients)

Solution 20 141 + 40 150 + 60 68 + 63 34 + 24 393 + paracetamol

Aucun phénomène de nécrose ne peut être constaté avec les compositions selon l'invention, les différences entre les résultats cumulés avec la solution excipient n'étant pas significatives.