NOUVELLES UTILISATIONS DE DéRIVéS DE D-MANNOPYRANOSE ACTIVATEURS DE L'ANGIOGENèSE

La présente Invention est relative à l'utilisation de certains dérivés de D-mannopyranoside pour le contrôle de l'angiogenèse. Ces composés présentent une activité pro-angiogénique et peuvent notamment être utilisés pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement des maladies cardiovasculaires ou au traitement de l'atrophie musculaire. L'invention est également relative, à certains dérivés D-mannopyranoside, à une composition pharmaceutique ou cosmétique comprenant ces dérivés et à l'utilisation d'une telle composition cosmétique pour prévenir et/ou traiter la chute des cheveux.

De nombreuses pathologies ont été décrites comme ayant une composante ou un stade lié au phénomène d'angiogénèse. On peut citer entre autres de très nombreux cancers, les rétinopathies liées au diabète, l'athérosclérose, l'arthrose, la polyarthrite rhumatoïde, le psoriasis, ainsi que les pathologies inflammatoires ou celles liées à une cicatrisation retardée.

L'angiogenèse est un mécanisme de néovascularisation prenant naissance à partir d'un réseau capillaire préexistant. Le bourgeonnement de petits vaisseaux, les capillaires, à partir de ceux préexistants, intervient pour le meilleur lors du développement embryonnaire et l'implantation du placenta, lorsqu'il s'agit de cicatriser une blessure, ou de pallier l'obstruction d'un vaisseau ; mais également pour le pire dans les cancers (croissance des tumeurs et développement des métastases), l'arthrite rhumatoïde, certaines maladies ophtalmologiques comme la rétinopathie diabétique ou la dégénérescence maculaire liée à l'âge... Pour l'ensemble de ces processus, le schéma général reste le même. L'activation des cellules endothéliales conduit à la dégradation de la membrane basale et de la matrice extracellulaire environnante. La migration orientée est suivie d'une phase proliférative. Les cellules se différencient ensuite en une structure de type capillaire pour former un réseau vasculaire nécessaire au développement des tissus. Au cours de ces dernières années, il est devenu clair que l'angiogenèse n'est pas contrôlée par un seul facteur, mais par une balance d'inducteurs et d'inhibiteurs produits par les cellules normales ou tumorales. Parmi ces facteurs, des polypeptides comme le facteur de croissance des fibroblastes-2 ("Fibroblast Growth Factor-2" : FGF-2) et le "facteur de croissance de

l'endothélium vasculaire ("Vascular Endothelial Growth Factor" : VEGF) sont apparus comme étant des régulateurs clés de l'angiogenèse.

De nombreuses molécules ont été étudiées pour leur effet inhibiteur ou activateur de l'angiogénèse. En particulier, les molécules présentant une activité pro-angiogénique font l'objet de nombreuses recherches dans le domaine des pathologies cardiovasculaires. En effet, favoriser la formation de nouveaux vaisseaux collatéraux dans les tissus ischémiques en utilisant des molécules pro-angiogéniques (angiogenèse thérapeutique) représente un avenir très prometteur dans les maladies cardiovasculaires, notamment ischémiques. En effet, et malgré les progrès réalisés dans leur prévention et leurs traitements, les maladies cardiovasculaires ischémiques restent la première cause de morbidité et de mortalité dans les pays industrialisés. Les stratégies thérapeutiques actuelles qui visent à ralentir la progression de l'athérosclérose et à réduire la survenue des accidents thrombotiques ou les lésions d'ischémie ont certes gagné en efficacité mais la protection est encore insuffisante pour déclasser les maladies cardiovasculaires ischémiques. Il en est de même des stratégies qui consistent à réparer ou à remplacer : angioplasties, stents, pontages et autres greffes sauvent des vies mais la problématique d'ensemble demeure. Une autre approche thérapeutique consiste donc à favoriser la régénération de néovaisseaux de suppléance. Les recherches effectuées jusqu'à ce jour dans ce domaine ont cependant conduit à des thérapies lourdes et complexes, telles que la thérapie génique qui pose en outre un réel problème de galénique, et/ou peu efficaces telles que l'utilisation de protéines recombinantes dont la biodisponibilité après administration ne donne pas toujours entièrement satisfaction (Lazarous DF, Shou M, Stiber JA, et al. Cardiovasc Res 1997 ; 36 : 78-85).

Il existe donc un réel besoin en molécules pro-angiogéniques faciles à synthétiser et à formuler afin de permettre leur utilisation notamment pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention et/ou au traitement des maladies cardiovasculaires, en particulier ischémiques. C'est donc afin de remédier à l'ensemble de ces inconvénients et de pourvoir à des composés ayant une activité pro-angiogénique pouvant notamment être utilisés pour la préparation d'un médicament pour le traitement des pathologies dans

lesquelles une activation de l'angiogenèse est profitable que les Inventeurs ont mis au point ce qui fait l'objet de la présente Invention.

Les Inventeurs ont en effet découvert que certains dérivés sélectionnés de D-mannopyranoside tels qu'ils vont être décrits ci-après (composés de formule (I)) présentaient une activité pro-angiogénique, et qu'ils pouvaient par conséquent être notamment utilisés pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement des pathologies dans lesquelles une activation de l'angiogenèse est profitable telles que les pathologies cardiovasculaires et l'atrophie musculaire. La présente Invention a donc pour objet l'utilisation, à titre de principe actif, d'au moins un composé de formule (I) ci-après :

dans laquelle :

- Ri représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en C ₁ -C ₄ ; un radical alkyle comportant un ou plusieurs groupements fonctionnels choisis parmi les groupements hydroxyle, aminé, thiol, carboxyle, azide et nitrile ; un cycle hydrocarboné, saturé ou insaturé, en C ₃ -C ₆ ; un cycle hydrocarboné, saturé ou insaturé, en C ₃ -C ₆ comportant un ou plusieurs groupements fonctionnels choisis parmi les groupements hydroxyle, aminé, alkyle en Ci-C ₄ , thiol, carboxyle, azide et nitrile ; un hétérocycle saturé ou insaturé comportant au moins un hétéroatome choisi parmi les atomes d'oxygène, d'azote et de souffre ;

- n est un nombre entier égal à 0 ou 1 ,

- R ₂ est choisi parmi les groupements (Gi) à (G ₄ ) suivants :

H ₂ N y >=NH

HN

I (G ₄ )

dans lesquels :

* R ₃ et R' ₃ , identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène ou de sodium ; * la flèche représente le point d'attachement du groupement sur l'atome de carbone porteur de R ₂ , pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée à la prévention et/ou au traitement des pathologies dépendantes d'une activation de l'angiogenèse. Selon l'invention, parmi les radicaux alkyle en C ₁ -C ₄ mentionnés pour R ₁ , le radical méthyle est particulièrement préféré.

Parmi les radicaux alkyle fonctionnalisés cités pour R ₁ , on peut en particulier mentionner les radicaux mono et dihydroxyalkyle en Ci-C ₄ , mono et diaminoalkyle en C ₁ -C ₄ , mono et dithioalkyle en C ₁ -C ₄ et mono et dicarboxyalkyle en C ₁ -C ₄ .

Parmi les cycles hydrocarbonés cités pour R ₁ , on peut en particulier mentionner les cycles cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane, phényle, benzyle.

Parmi les hétérocycles cités pour R ₁ , on peut en particulier mentionner les cycles oxadiazole, triazole, oxazole, isoxazole, imidazole, thiadiazole, pyrrole, tetrazole, furane, thiophène, pyrazole, pyrazoline, pyrazolidine, thiazole, isothiazole, pyridine, pyrimidine, pipéridine, pyranne, pyrazine et pyridazine.

Dans les composés de formule (I) ci-dessus, lorsque n = 0, R ₂ est de préférence un groupement G ₃ et lorsque n = 1 , R ₂ est de préférence choisi parmi les groupements Gi, G ₂ et G ₄ .

Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, lorsque les composés de formule (I) sont choisis parmi ceux dans lesquels R ₂ représente un groupement G ₁ tel que défini ci-dessus, alors dans ledit groupement G ₁ , R ₃ et R' ₃ sont de préférence identiques et représentent un atome de sodium. Parmi les composés de formule (I) ci-dessus, on peut en particulier citer :

- le 7-amino-6,7-didésoxy-D-manno-heptopyranoside de méthyle ;

- le 6-azido-6-déoxy-D-mannopyranoside de méthyle ;

- le 6-amino-6-deoxy-D-mannopyranoside de méthyle ; - le 7-(disodium)phosphonato-6,7-didésoxy-D-manno- heptopyranoside de méthyle ;

- le 7-phosphonato-6,7-didésoxy-D-manno-heptopyranoside de méthyle.

Parmi ces composés, le 7-(disodium)phosphonato-6,7-didésoxy-D- manno-heptopyranoside de méthyle, le 6-azido-6-déoxy-D-mannopyranoside de méthyle et le 7-amino-6,7-didésoxy-D-manno-heptopyranoside de méthyle sont particulièrement préférés.

Certains des composés de formule (I) listés ci-dessus sont connus en tant que tels et ont déjà été proposés dans le domaine pharmaceutique, notamment pour améliorer la cicatrisation de la peau tout en diminuant la formation de cicatrices disgracieuses (Clavel, C. et al, II Farmaco, 2005, 60, 721-725). Ils n'y ont cependant encore jamais été utilisés et aucune activité de ces composés sur la modulation de l'angiogénèse n'a encore été décrite. Leur effet concerne la prévention du désordre fibrotique. Parmi les pathologies dans lesquelles une activation de l'angiogénèse est profitable, on peut tout particulièrement citer les pathologies cardiovasculaires, notamment ischémiques, ainsi que l'atrophie musculaire.

Lorsqu'elle est destinée à la prévention et/ou au traitement des pathologies cardiovasculaires, la composition pharmaceutique peut en outre renfermer, un ou plusieurs principes actifs additionnels utiles dans le traitement des maladies cardiovasculaires et parmi lesquels on peut notamment mentionner les anticoagulants fluidifiants tels que l'aspirine et l'héparine, les inhibiteurs du système

rénine angiotensine, les béta bloquants, les inhibiteurs de l'hydroxy-méthyl-glutaryl- coenzyme A (HMG CoA) synthase, etc...

Lorsqu'elle est destinée au traitement de l'atrophie musculaire, la composition pharmaceutique conforme à l'invention peut en outre renfermer un ou plusieurs principes actifs additionnels utiles dans le traitement de l'atrophie musculaire et parmi lesquels on peut notamment citer la somatotrophine (hormone de croissance humaine), l'érythropoïétine (EPO), les facteurs de croissance analogues à l'insuline ("Insuline-like Growth Factor" : IGF) tels que l'IGF ₁ également connu sous la dénomination somatomédine C, les stéroïdes, etc .. Parmi les composés de formule (I) décrits ci-dessus, certains sont nouveaux en soi et constituent à ce titre un autre objet de l'invention. Il s'agit des dérivés de D-mannopyranose de formule (I ¹ ) suivante :

dans laquelle : - R'i représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en C ₁ -C ₄ ; un radical alkyle comportant un ou plusieurs groupements fonctionnels choisis parmi les groupements hydroxyle, aminé, thiol, carboxyle, azide et nitrile ; un cycle hydrocarboné, saturé ou insaturé, en C ₃ -C ₆ ; un cycle hydrocarboné, saturé ou insaturé, en C ₃ -C ₆ comportant un ou plusieurs groupements fonctionnels choisis parmi les groupements hydroxyle, aminé, alkyle en C ₁ -C ₄ , thiol, carboxyle, azide et nitrile ; un hétérocycle saturé ou insaturé comportant au moins un hétéroatome choisi parmi les atomes d'oxygène, d'azote et de souffre ;

- n' est un nombre entier égal à 0 ou 1 ,

- R' ₂ est choisi parmi les groupements (G' ₂ ), (G ₃ ) et (G' ₄ ) suivants :

dans lesquels :

* la flèche représente le point d'attachement du groupement sur l'atome de carbone porteur de R ₂ . Selon l'invention, parmi les radicaux alkyle en C ₁ -C ₄ mentionnés pour R'i, le radical méthyle est particulièrement préféré.

Parmi les radicaux alkyle fonctionnalisés cités pour R'i, on peut en particulier mentionner les radicaux mono et dihydroxyalkyle en C ₁ -C ₄ , mono et diaminoalkyle en Cj-C ₄ , mono et dithioalkyle en C ₁ -C ₄ et mono et dicarboxyalkyle en C ₁ -C ₄ .

Parmi les cycles hydrocarbonés cités pour R' _l5 on peut en particulier mentionner les cycles cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane, phényle et benzyle.

Préférentiellement, ces cycles hydrocarbonés sont choisis parmi les cycles cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclohexane et phényle.

Parmi les hétérocycles cités pour R'i, on peut en particulier mentionner les cycles oxadiazole, triazole, oxazole, isoxazole, imidazole, thiadiazole, pyrrole, tetrazole, furane, thiophène, pyrazole, pyrazoline, pyrazolidine, thiazole, isothiazole, pyridine, pyrimidine, pipéridine, pyranne, pyrazine et pyridazine. Dans les composés de formule (I ¹ ) ci-dessus, lorsque n' = 0, R' ₂ est de préférence un groupement G ₃ et lorsque n' = 1, R' ₂ est de préférence un groupement G ₂ ou G ₄ .

Selon une forme de réalisation préférée de l'invention, les composés de formule (I ¹ ) ci-dessus sont choisis parmi ceux dans lesquels R' ₂ représente un groupement G' ₃ .

Parmi les composés de formule (I ¹ ) ci-dessus, on peut en particulier citer :

- le 7-amino-6,7-didésoxy-D-manno-heptopyranoside de méthyle ;

- le 6-azido-6-déoxy-D-mannopyranoside de méthyle ; et

- le 6-amino-6-deoxy-D-mannopyranoside de méthyle.

De part leur propriétés d'activation de l'angiogénèse, les composés de formule (T) peuvent être utilisés à titre de médicament. L'invention a donc également pour objet les composés de formule

(T) telle que définie ci-dessus pour une utilisation à titre de médicament, en particulier de médicament pour la prévention et/ou le traitement des maladies dépendantes d'une activation de l'angiogénèse.

Plus particulièrement, l'invention a pour objet les composés de formule (I ¹ ) telle que définie ci-dessus pour une utilisation à titre de médicament pour la prévention et/ou le traitement des maladies cardiovasculaires, en particulier ischémiques ou à titre de médicament pour la prévention et/ou de l'atrophie musculaire.

Un autre objet de l'invention est une composition pharmaceutique caractérisée par le fait qu'elle comprend, à titre de principe actif, au moins un composé de formule (T) tel que défini ci-dessus et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.

L'homme du métier choisira un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables en fonction de la voie d'administration de la composition pharmaceutique. Bien entendu, l'homme de l'art veillera à cette occasion à ce que le ou les excipients utilisés soient compatibles avec les propriétés intrinsèques attachées à la composition conforme à la présente invention.

En outre, la forme du médicament ou de la composition pharmaceutique (par exemple, une solution, une suspension, une émulsion, des comprimés, des gélules, des suppositoires, etc..) dépendra de la voie d'administration choisie.

Ainsi, au sens de la présente Invention, le médicament ou la composition pharmaceutique peut être administré par n'importe quelle voie appropriée, par exemple par la voie orale, locale, systémique, intraveineuse, intramusculaire ou mucosale, ou bien en utilisant un patch.

On peut notamment citer, à titre d'exemples non limitatifs d'excipients appropriés pour une administration par voie orale, le talc, le lactose,

l'amidon et ses dérivés, la cellulose et ses dérivés, les polyéthylèneglycols, les polymères d'acide acrylique, la gélatine, le stéarate de magnésium, des matières grasses animales, végétales ou synthétiques, les dérivés de la paraffine, les glycols, les stabilisants, les conservateurs, les anti-oxydants, les agents mouillants, les anti- agglomérants, les dispersants, les émulsionnants, les agents modifiants du goût, les agents de pénétrations, de solubilisation, etc....

Les techniques de formulation et d'administration des médicaments et compositions pharmaceutiques sont bien connues dans la technique ici considérée, l'homme du métier pouvant notamment se référer à l'ouvrage Remington's Pharmaceutical Sciences, dernière édition.

Les composés de formule (I) conformes à l'invention peuvent également être utilisés pour la préparation d'une composition cosmétique ou d'un complément alimentaire destiné à prévenir et/ou freiner la chute des cheveux, ce qui constitue un objet supplémentaire de la présente invention. La présente invention a donc également pour objet une composition cosmétique caractérisée par le fait qu'elle comprend, dans un milieu cosmétiquement acceptable, au moins un composé de formule (I) telle que définie précédemment.

Cette composition se présente de préférence sous forme liquide, par exemple sous la forme d'une lotion ou d'un shampooing et peut être appliquée de façon topique directement sur le cuir chevelu, avec ou sans rinçage.

L'invention a pour objet un complément alimentaire caractérisé par le fait qu'il comprend au moins un composé de formule (I) telle que définie précédemment.

Ce complément alimentaire peut notamment se présenter sous la forme de gélules ou de comprimés et est destiné à être ingéré par voie orale.

Les composés de formule (I) (incluant les composés de formule (I ¹ )) peuvent être aisément préparés, à partir d'un D-mannopyranoside de formule (II) définie ci-après, par déplacement nucléophile du précurseur sulfate cyclique de formule (IV) correspondant, par analogie à la méthode décrite par exemple par Van der Klein P.A.M. et al, Carbohydr. Res., 1992, 224, 193-200 suivi de la déprotection des radicaux hydroxyle portés par le motif saccharidique, selon le schéma réactionnel A suivant :

SCHEMA A dans lequel R ₁ , R ₂ et n ont la même signification que celle indiquée ci-dessus pour les composés de formule (I) et Nu représente un groupement nucléophile correspondant au groupement R ₂ que l'on souhaite introduire.

Cette méthode correspond à une adaptation de la méthode décrite dans l'article de Khanjin N.A. et al, Tetrahedr. Lett, 2002, 43, 4017-4020.

Le sulfate cyclique de formule (IV) préparé selon ce procédé peut être stocké plusieurs mois à température ambiante sous la forme d'une poudre blanche sans observer de décomposition. Les intermédiaires purs des sels de monosulfate peuvent être facilement séparés des groupements nucléophiles n'ayant pas réagi et des autres impuretés, par partition entre l'eau et un solvant tel que le dichlorométhane avant l'étape de déprotection. Le clivage simultané et quantitatif des groupes monosulfate cyclique et isopropylidène des composés de formule (V) peut être réalisé sur une résine échangeuse d'ions telle qu'une résine Amberlyst-15 (H+) qui permet la déprotection du groupement monosulfate cyclique en 10 à 30 minutes et celle du groupement isopropylidène en 3 à 5 heures à température ambiante dans un mélange méthanol/tetrahydrofuranne. Tous les composés de formule (I) préparés selon ce procédé peuvent être obtenus avec un rendement compris entre 60 et 95 %. Outre les dispositions qui précèdent, l'Invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront de la description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de préparation des composés de formule (I ¹ ) conformes à l'invention, ainsi

qu'à un exemple de mise en évidence de l'activité pro-angiogénique des composés de formule (I) par rapport à d'autres dérivés de D-mannopyranose ne répondant pas à la formule (I) et ne faisant donc pas partie de l'invention, ainsi qu'à la figure 1 annexée qui représente des photos de la vascularisation d'embryons de poulets après mise en culture en présence de 6 mg/ml de différents composés de formule (I) conformes à l'invention comparativement à quatre dérivés de D-mannopyranoside (DM) ayant une activité inhibitrice de l'angiogenèse et ne faisant donc pas partie de l'invention (DMl : le (disodium)-6-phosphate-D-manno-pyranoside de méthyle ; DM2 : le 6,7-didéoxy- 7-sulfonato-D-manno-heptopyranoside de méthyle ; DM3 : le 6-deoxy-6-malonate-D- mannopyranoside de méthyle et DM4 : l'acide (6,7-didésoxy-D-manno- heptopyranoside de méthyle) uronique)).

Il doit être entendu toutefois que ces exemples ne sont donnés qu'à titre purement illustratif de l'Invention dont ils ne constituent en aucune manière une quelconque limitation.

EXEMPLE 1 : PRéPARATION DU 7-AMINO-6,7-DIDESOXY-α-D-M4iVM?- HEPTOPYRANOSIDE DE MéTHYLE (Composé 1-1)

0-1)

1) Première étape : Préparation du 2,3-0-Isopropylidène-4,6-Q-(sulfate cyclique)-α-D-mannopyranoside de méthyle (composé 3)

Le composé (3) a été obtenu en 2 sous-étapes, sans purification intermédiaire, via le sulfite correspondant (2).

1-a) Préparation du sulfite correspondant (2)

(1) (2)

3,79 g (16,18 mmol - 1 éq.) de 2,3-0-isopropylidène-α-D- mannopyranoside de méthyle (1) et 6,75 mL (48,54 mmol - 3 éq.) de triéthylamine ont été dissous dans 75 mL de dichlorométhane (CH ₂ Cl ₂ ). Le mélange a été refroidi à 0°C et 1,3 mL (17,80 mmol - 1,1 éq.) de chlorure de thionyle (SOCl ₂ ) ont été ajoutés lentement. Le précipité blanc de chlorure de triéthylarnrnonium s'est formé instantanément, et le mélange réactionnel est devenu progressivement jaune, puis marron, en 5 à 10 minutes. Une chromatographie sur couche mince (CCM) a alors été réalisée en utilisant comme phase mobile un mélange d'éther de pétrole (EP) et d'acétate d'éthyle (AcOEt) (8/2 v/v). Les résultats de cette CCM ont indiqué alors qu'il ne restait plus de produit de départ (Rf=O) et que le sulfite désiré avait été obtenu sous forme de 2 diastéréoisomères (Rf=0,45 et 0,60). Le mélange réactionnel a alors été filtré, et la phase organique a été lavée avec de l'eau distillée, une solution d'acide chlorhydrique (HCl) IN, et de l'eau distillée à nouveau. Elle a été séchée sur sulfate de sodium (Na ₂ SO ₄ ), filtrée et concentrée pour donner un solide légèrement marron qui a été directement remis en réaction. 1-b) Oxydation du sulfite (2) en sulfate (3)

(2) (3)

Le sulfite brut (2) obtenu ci-dessus à la sous étape 1-a)

(16,18 mmol - 1 éq., théoriquement) a été dissous dans 60 mL d'une solution composée d'un mélange de CH ₂ Cl ₂ et d'acétonitrile (CH ₃ CN) (1/1 v/v) avant d'ajouter successivement 3,8 g (17,80 mmol - 1,1 éq.) de métaperiodate de sodium, 20 mL d'eau et 14 mg (0,06 mmol - 0,004 éq.) de chlorure de ruthénium. La réaction a été

exothermique, et la formation du précipité d'iodate de sodium (NaIO ₃ ) a été observée très rapidement. Après 1 heure de réaction, il ne restait plus de sulfite et seul le sulfate (3) a été observé sur CCM. Le mélange réactionnel a alors été filtré et dilué avec 100 mL de CH ₂ Cl ₂ . L'eau résiduelle de la réaction a été supprimée et la phase organique a été lavée 2 fois avec une solution de bicarbonate de sodium (NaHCO ₃ ) à 5%, puis avec de l'eau distillée. Elle a ensuite été séchée sur Na ₂ SO ₄ , filtrée et concentrée pour donner un solide légèrement marron.

Ce solide a été dissous dans un minimum de CH ₂ Cl ₂ en présence de charbon actif, et filtré sur silice. La silice a été rincée avec 300 mL de CH ₂ Cl ₂ . Les impuretés marron, contenant les sels de ruthénium, sont restés à la surface. Le solide blanc obtenu a ensuite été engagé dans l'étape 2) sans aucune autre purification.

Rendement : 84 % sur 2 étapes.

Rf : 0,48 (EP/AcOEt 7/3 v/v).

SM : (ESI ⁺ /MeOH) m/z : 297 [M+H] ⁺ , 319 [M+Na] ⁺ . RMN ¹ H (400,13 MHz, Acétone-d ₆ ) δ ppm : 1,38 et 1,53 (2s, 6H,

H ₂ -) ; 3,46 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 4,17 (td, IH, J ₅ _ ₄ = J _5-6b = 10,6 Hz, J _5-63 = 5,5 Hz, H ₅ ) ; 4,32 (dd, IH, J _2-3 = 5,6 Hz, J _2-I = 0,4 Hz, H ₂ ) ; 4,42 (dd, IH, J _3-2 = 5,6 Hz, J _3-4 = 7,7 Hz, H ₃ ) ; 4,59 (dd, IH, J _4-3 = 7,8 Hz, J _4-5 = 10,4 Hz, H ₄ ) ; 4,64 (t, IH, J _6b-S - 10,7 Hz, J _6b - _6a = -10,7 Hz, H _6b ) ; 4,87 (dd, IH, J _6a-5 = 5,5 Hz, J _6a-6b = -10,5 Hz, H _6a ) ; 5,01 (d, IH, J _1-2 = 0,5 Hz, H ₁ ).

RMN ¹³ C (100,62 MHz, CDCl ₃ ) δ ppm : 26,4 et 28,3 (2C, C ₂ ) ; 56,1 (IC, OCH ₃ ) ; 58,9 (IC, C ₅ ) ; 72,3 (IC, C ₆ ) ; 73,6 (IC, C ₃ ) ; 76,3 (IC, C ₂ ) ; 84,6 (IC, C ₄ ) ; 99,4 (IC, C ₁ ) ; 111,0 (IC, C ₁ -).

2) Deuxième étape : Préparation 6-cvano-6-déoxy-4-0-sodiumsuIfate-2,3-0- isopropylidène-α-D-manno-pyranoside de méthyle (composé 4).

1 g (3,38 mmol - 1 éq.) de 2,3-O-Isopropylidène-4,6-O-(sulfate cyclique)-α-D-mannopyranoside de méthyle (composé 3) tel qu'obtenu ci-dessus à l'issue de l'étape 1) a été est dissous dans 3 mL de diméthylformamide (DMF), avant d'ajouter 331 mg (6,75 mmol - 2 éq.) de cyanure de sodium. Le mélange a été laissé sous agitation magnétique à température ambiante pendant 20 heures. Le milieu réactionnel a alors été dilué avec 20 mL de NaHCO ₃ à 1% (pour éviter un éventuel dégagement de cyanure d'hydrogène (HCN), et lavé avec 10 mL de CH ₂ Cl ₂ . Le produit a encore été extrait de la phase organique avec 2 x 10 mL d'eau distillée. Les phases aqueuses rassemblées ont été lyophilisées pour donner un solide un peu jaune, qui était assez pur pour être remis en réaction directement. Cependant, ce produit peut également être purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient d'élution (CH ₂ Cl ₂ jusqu'à CH ₂ Cl ₂ ZMeOH 91/9 v/v) pour donner une mousse très légèrement jaune.

Rendement : Quantitatif. Rf : 0,49 (CH ₂ Cl ₂ /MeOH 85/15 v/v).

Le produit s'est révélé de couleur bordeaux à l'anisaldéhyde.

SM (ESI ⁺ /MeOH) m/z : 384 [M+Na] ⁺ .

SM (ESITMeOH) m/z : 322 [M-Na] ^" .

RMN ¹ H (400,13 MHz, Acétone-d ₆ ) δ ppm : 1,24 et 1,41 (2s, 6H, H ₂ -) ; 2,76 (dd, IH, J _6a-5 = 9,3 Hz, J _6a-6b = - 17,3 Hz, H _6a ) ; 3,18 (dd, IH, J _6b-5 = 2,8 Hz, J6b-6a = - 17,3 Hz, H _6b ) ; 3,46 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 3,86 (td, IH, J _5-6a = J _5-4 = 9,6 Hz, J _5-6b = 2,8 Hz, H ₅ ) ; 4,15 (d, IH, J _2-3 ≈ 7,4 Hz, H ₂ ) ; 4,21 (dd, IH, J _4-5 = 9,9 Hz, J _4-3 = 7,0 Hz, H ₄ ) ; 4,44 (dd _{mal résolu} , IH, H ₄ ); 4,93 (s, IH, Hj).

RMN ¹³ C (100,62 MHz, Acétone-d ₆ ) δ ppm : 20,6 (IC, C ₆ ) ; 25,5 et 27,1 (2C, C ₂ -) ; 54,5 (IC, OCH ₃ ) ; 64,9 (IC, C ₅ ) ; 75,6 (IC, C ₂ ) ; 76,3 (IC, C ₄ ) ; 76,9 (IC, C ₃ ) ; 98,1 (IC, C ₁ ) ; 109,8 (IC, C ₁ -) ; 118,1 (IC, C ₇ ).

3) Troisième étape : Préparation du 6-cvano-6-déoxy-α-D-mannopyranoside de méthyle (composé 5)

873 mg (2,53 mmol - 1 éq.) de 6-déoxy-6-cyano-4-sodiumsulfate-

2,3-O-isopropylidène-α-D-manno-heptopyranoside de méthyle (4) obtenu ci-dessus à l'étape précédente ont été dissous dans 20 mL d'une solution constituée d'un mélange de méthanol (MeOH) et de THF (1/1 ; v/v), puis 1 g de résine Amberlyst-15 H ⁺ ont été ajoutés. Après 1 heure et 15 min de réaction, les résines ont été filtrées et le milieu réactionnel a été neutralisé avec une solution de NaHCO ₃ à 5% jusqu'à pH = 8. Les solvants organiques ont été éliminés à l'évaporateur rotatif et l'eau restante a été lyophilisée. Le mélange a été repris au MeOH, et le NaHCO ₃ insoluble a été filtré. Le produit a ensuite été purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient d'élution (CH ₂ Cl ₂ jusqu'à CH ₂ Cl ₂ /Me0H 92/8 v/v) pour donner une mousse blanche.

Rendement : 72 %.

Rf : 0,56 (CH ₂ Cl ₂ MeOH 85/15 v/v).

SM : (ESI ⁺ /MeOH) m/z : 226 [M+Na] ⁺ , 242 [M+K] ⁺ , 429 [2M+Na] ⁺ .

RMN ¹ H (400,13 MHz, D ₂ O) δ ppm : 2,86 (dd, IH, J _6a-5 = 7,4 Hz, J _6a -6b = - 17,3 Hz, H _6a ) ; 3,04 (dd, IH, J _6b-5 = 3,6 Hz, J _6b-6a = - 17,3 Hz, H _6b ) ; 3,44 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 3,60 (t, IH, J _4-5 = J _4-3 = 9,7 Hz, H ₄ ); 3,76 (dd, IH, J _3-4 = 9,6 Hz, J _3-2 = 3,4 Hz, H ₃ ) ; 3,84 (ddd, IH, J _5-63 = 7,1 Hz, J _5-6b = 3,2 Hz, J _5-4 = 10,1 Hz, H ₅ ) ; 3,96 (dd, IH, J _2-3 = 3,4 Hz, J _2-1 = 1,7 Hz, H ₂ ) ; 4,78 (d, IH, J _1-2 = 1,5 Hz, H ₁ ).

RMN ¹³ C (100,62 MHz, D ₂ O) δ ppm : 51,4 (IC, C ₆ ) ; 55,2 (IC, OCH ₃ ) ; 67,8 (IC, C ₅ ) ; 70,2 (IC, C ₂ ) ; 70,7 (IC, C ₃ ) ; 71,6 (IC, C ₄ ) ; 101,4 (IC, C ₁ ).

4) Quatrième étape : Préparation du 7-amino-6,7-didesoxy-α-D-mfl/t«o- heptopyranoside de méthyle (composé 1-1)

450 mg (2,21 mmol - 1 éq.) de 6-déoxy-6-cyano-α-D-manno- heptopyranoside de méthyle (5) tel qu'obtenu ci-dessus à l'issue de l'étape 3) ont été dissous dans 10 mL d'eau, avant ajout d'une pointe de spatule de nickel de Raney en suspension dans l'eau. Un ballon d'hydrogène a ensuite été placé sur la réaction et le mélange a été laissé sous agitation magnétique pendant 3 heures. Le nickel a ensuite été filtré. Puis le méthanol a été éliminé à l'évaporateur rotatif et l'eau restante a été lyophilisée. Rf : 0,52 (IPrOH/NH ₄ OH 5/5 v/v).

SM : (ESI ⁺ /MeOH) m/z : 208 [M+H] ⁺ .

SM : (ESITMeOH) m/z : 206 [M-H] ^" , 413 [2M-H] ^" .

RMN ¹ H (400,13 MHz, D ₂ O) δ ppm : 1,57 (m, IH, H _7a ) ; 1,88 (m,

IH, H _7b ) ; 2,68 (m, IH, H _6a ) ; 2,78 (m, IH, H _6b ) ; 3,25 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 3,36 (t, IH, J _4-5 = J _4-3 = 9,6 Hz, H ₄ ) ; 3,45 (td, IH, J _5-6a = J _5-4 = 9,4 Hz, J _5-6b = 2,7 Hz, H ₅ ) ; 3,57 (dd,

IH, J _3-4 = 9,4 Hz, J _3-2 = 3,5 Hz, H ₃ ) ; 3,79 (dd, IH, J _2-3 = 3,4 Hz, J _2-1 = 1,7 Hz, H ₂ ) ;

4,57 (s, IH, H ₁ ).

RMN ¹³ C (100,62 MHz, D ₂ O) δ ppm : 32,9 (IC, C ₇ ) ; 37,7 (IC, C ₆ ) ; 55,1 (IC, OCH ₃ ) ; 70,2 (IC, C ₂ ) ; 70,5 (IC, C ₄ ) ; 70,8 (IC, C ₃ ) ; 71,0 (IC, C ₅ ) ; 101,2 (1C ₅ C ₁ ).

EXEMPLE 2 : PRéPARATION DU 6-AZIDO-6-DéOXY-α-D- MANNOPYRANOSIDE DE MéTHYLE (Composé 1-2)

1) Première étape : Préparation du 6-azido-6-déoxy-4-0-sodiumsulfate-2,3-0- isopropylidène-α-D-mannopyranoside de méthyle (Composé 6)

500 mg (1,69 mmol - 1 éq.) de 2,3-0-Isopropylidène-4,6-O(sulfate cyclique)-α-D-mannopyranoside de méthyle (composé 3) tel qu'obtenu ci-dessus à l'issue de l'étape 1) de l'exemple 1 ont été dissous dans 3 mL de THF. 143 mg (2,20 mmol - 1,3 éq.) d'azidure de sodium ont été mis en suspension dans cette solution, puis 1,1 mL de HMPT (6,08 mmol - 3,6 éq.) ont été ajoutés. Le mélange a été laissé sous agitation magnétique à température ambiante pendant 12 heures. Le mélange réactionnel a alors été dilué avec 20 mL de CH ₂ Cl ₂ . Le produit a été extrait par 2 x 10 mL d'eau distillée. Cette phase aqueuse a ensuite été lavée au CH ₂ Cl ₂ jusqu'à ce que tout le HMPT soit éliminé. Après lyophilisation, le solide un peu jaune ainsi obtenu était assez pur pour être remis en réaction directement. Cependant, il peut être purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient d'élution (CH ₂ Cl ₂ /Me0H 95/5 v/v jusqu'à CH ₂ Cl ₂ /Me0H 92/8 v/v) pour donner une mousse blanche.

Rendement : Quantitatif. Rf : 0,52 (CH ₂ Cl ₂ /MeOH 85/15 v/v).

Le produit a été révélé de couleur orange/rouge à l'anisaldéhyde. SM : (ESI ⁺ /MeOH) m/z : 384 [M+Na] ⁺ . SM : (ESITMeOH) m/z : 338 [M-Na] ^" .

RMN ¹ H (400,13 MHz, Acétone-d ₆ ) δ ppm : 1,24 et 1,41 (2s, 6H,

H ₂ ') ; 3,31 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 3,33 (dd, IH, J _6a-5 = 8,4 Hz, J _6a-6b = - 13,4 Hz, H _6a ) ; 4,41

(dd, IH, J _6b-5 = 2,2 Hz, J _6b-6a = - 13,4 Hz, H _6b ) ; 3,60 (m, IH, H ₅ ) ; 4,00 (dd, IH, J _2-3 -

5,7 Hz, J _2-I = 0,6 Hz, H ₂ ) ; 4,10 (dd, IH, J _3-4 = 10,0 Hz, J _3-2 = 6,8 Hz, H ₃ ) ; 4,25 (t, IH, J _4-5 = J _4-3 = 6,2 Hz, H ₄ ) ; 4,77 (s, IH, H ₁ ).

RMN ¹³ C (100,62 MHz, Acétone-d ₆ ) δ. ppm : 25,8 et 27,4 (2C, C ₂ O ; 52,3 (IC, C ₆ ) ; 54,7 (IC, OCH ₃ ) ; 69,0 (IC, C ₅ ) ; 75,1 (IC, C ₃ ) ; 75,8 (IC, C ₂ ) ; 77,0 (IC, C ₄ ) ; 98,5 (IC, C ₁ ) ; 109,9 (IC, C ₁ -).

2) Deuxième étape : Préparation du 6-azido-6-déoxy-α-D-mannopyranoside de méthyle (Composé 1-2)

611 mg (1,69 mmol - 1 éq.) de 6-déoxy-6-azido-4-sodiumsulfate-

2,3-O-isopropylidène-α-D-manno-heptopyranoside de méthyle (8) obtenu ci-dessus à l'étape précédente ont été dissous dans 10 mL d'une solution constituée d'un mélange de MeOH et de THF (1/1 ; v/v). 1 g de résine Amberlyst-15 H ⁺ ont été ajoutés. Après 1 heure et 15 minutes de réaction, les résines ont été filtrées et le mélange réactionnel a été neutralisé avec une solution de NaHCO ₃ à 5% jusqu'à pH = 8. Les solvants organiques ont été éliminés à l'évaporateur rotatif et l'eau restante a été lyophilisée.

Le mélange a été repris au méthanol, et le NaHCO ₃ insoluble a été filtré. Le produit a ensuite été purifié par chromatographie sur gel de silice avec un gradient d'élution (CH ₂ Cl ₂ jusqu'à CH ₂ Cl ₂ ZMeOH 94/6 v/v) pour donner une mousse blanche.

Rendement : 79 %.

Rf : 0,50 (CH ₂ Cl ₂ /Me0H 9/1 v/v).

SM : (ESlVMeOH) m/z : 242 [M+Na] ⁺ .

SM : (ESITMeOH) m/z : 218 [M-H] ^" , 437 [2M-H] ^" . RMN ¹ H (400,13 MHz, D ₂ O) δ ppm : 3,40 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 3,54

(dd, IH, J _63-5 = 6,2 Hz, J _6a-6 b = - 13,3 Hz, H _6a ) ; 3,60-3,73 (m, 4H, H _6b , H ₅ , H ₄ et H ₃ ) ; 3,91 (dd, IH, J _2-3 = 3,3 Hz, J _2-1 = 1,7 Hz, H ₂ ) ; 4,73 (d, IH, J _1-2 = 1,6 Hz, H ₁ ).

RMN ¹³ C (100,62 MHz, D ₂ O) δ ppm : 51,4 (IC, C ₆ ) ; 55,2 (IC, OCH ₃ ) ; 67,8 (IC, C ₅ ) ; 70,2 (IC, C ₂ ) ; 70,7 (IC, C ₃ ) ; 71,6 (IC, C ₄ ) ; 101,4 (IC, C ₁ ). EXEMPLE 3 : PRéPARATION DU 6-AMINO-6-DEOXY-α-D- MANNOPYRANOSIDE DE MéTHYLE (Composé 1-3)

(1-3)

Ce composé a été préparé en utilisant une réaction de Staudinger. 130 mg (0,59 mmol - 1 éq.) de 6-déoxy-6-azido-α-D- mannopyranoside de méthyle (Composé 1-2 tel qu'obtenu ci-dessus à l'exemple 2) ont été dissous dans 3 mL de THF. 171 mg (0,65 mmol - 1,1 éq.) de triphénylphosphine et 16 μL (0,86 mmol — 1,5 éq.) d'eau ont successivement été ajoutés au mélange. Après 12 heures, le milieu réactionnel a été concentré et déposé directement sur la colonne. La chromatographie sur gel de silice a été effectuée avec un gradient d'élution (CH ₂ Cl ₂ /MeOH 8/2 v/v jusqu'à CH ₂ Cl ₂ /Me0H 2/8 v/v) pour donner une mousse blanche. Rendement : 64 %.

Rf : 0,10 (CH ₂ Cl ₂ /Me0H 8/2 v/v).

SM : (ESI ⁺ /MeOH) m/z : 194 [M+H] ⁺ , 387 [2M+H] ⁺ , 409 [2M+Na] ⁺ .

SM : (ESITMeOH) m/z : 192 [M-H] ^" , 385 [2M-H] ^" . RMN ¹ H (400,13 MHz, D ₂ O) δ ppm : 2,74 (dd, IH, J _6a-5 = 7,3 Hz,

J _6a-6b = - 13,6 Hz, H _6a ) ; 2,96 (dd, IH, J _6b-5 = 2,3 Hz, J _6b-6a = - 13,6 Hz, H _6b ) ; 3,36 (s, 3H, OCH ₃ ) ; 3,47 (td, IH, J _5-6a = J _5-4 = 8,7 Hz, J _5-6b = 2,3 Hz, H ₅ ) ; 3,51 (t, IH, J _4-5 = J _4-3 = 9,4 Hz, H ₄ ) ; 3,69 (dd, IH, J _3-4 = 9,1 Hz, J _3-2 = 3,5 Hz, H ₃ ) ; 3,88 (dd, IH, J _2-3 = 3,5 Hz, J _2-1 = 1 ,7 Hz, H ₂ ) ; 4,70 (d, IH, J _1-2 = 1,6 Hz, H ₁ ). RMN ¹³ C (100,62 MHz, D ₂ O) δ ppm : 41,9 (IC, C ₆ ) ; 55,0 (IC,

OCH ₃ ) ; 68,6 (IC, C ₄ ) ; 70,3 (IC, C ₂ ) ; 70,8 (IC, C ₃ ) ; 73,2 (IC, C ₅ ) ; 101,2 (IC, C ₁ ). EXEMPLE 4 : MISE EN éVIDENCE DE L'ACTIVITé PRO- ANGIOGéNIQUE DE TROIS DéRIVéS DE D-MANNOPYRANOSIDE DE FORMULE (I) - COMPARATIF AVEC QUATRE DéRIVéS DE D-MANNOPYRANOSIDE NE FAISANT PAS PARTIE DE L'INVENTION

Dans cet exemple on a étudié l'activité des composés de formule (1-1), (1-2) tels que préparés respectivement aux exemples 1 et 2 ci-dessus ainsi que celle du 7-phosphonato-6,7-didésoxy-D-manno-heptopyranoside de méthyle (composé 1-4) sur l'activation de l'angiogénèse, comparativement à quatre dérivés de D-mannopyranoside (DM) ayant une activité inhibitrice de l'angiogénèse et ne faisant donc pas partie de l'invention :

DMl : le (disodium)-6-phosphate-D-manno-pyranoside de méthyle ;

DM2 : le 6,7-didéoxy-7-sulfonato-D-manno-heptopyranoside de méthyle ;

DM3 : le 6-deoxy-6-malonate-D-mannopyranoside de méthyle ; DM4 : l'acide (6,7-didésoxy-D-manno-heptopyranoside de méthyle) uronique.

Cette étude a été réalisée sur des embryons de poulet selon la méthode décrite par Ribatti D. et al, Nat. Protoc, 2006, 1(1), 85-91 avec quelques modifications mineures. 1) Matériel et Méthode Cette étude a été réalisée sur la membrane chorioallantoïdienne

(CAM) d'embryon de poulet. La CAM est une membrane extra-embryonnaire formée le 4 ^eme jour de l'incubation par la fusion du chorion et de l'allantoïde. Elle permet d'assurer les échanges gazeux entre l'embryon de poulet et l'environnement extra embryonnaire jusqu'à la naissance. Cette CAM est composée d'un réseau capillaire très épais qui forme une surface continue en contact direct avec la coquille. La prolifération capillaire rapide de cette membrane continue jusqu'au l l ^ème jour ; l'index mitotique diminue alors rapidement et le système vasculaire atteint son organisation finale au 18 ^eme jour, juste avant la naissance (éclosion le 21 ^ème jour).

Des œufs fertilisés de poulet de race Leghorn blanche ont été placés dans un incubateur dès le début de l'embryogenèse où ils ont été conservés sous humidité constante à une température de 38°C. Au deuxième jour de l'incubation, une fenêtre a été ouverte dans la coquille après élimination de 2 à 3 ml d'albumine afin de détacher la CAM de la coquille. La fenêtre a ensuite été scellée avec du ruban adhésif et l'œuf a été remis dans l'incubateur pour poursuivre son développement jusqu'au jour de l'expérience. Au 7 ^eme jour, des morceaux de polymères synthétiques inertes (disques filtres de nitrocellulose de 0,4 cm de diamètre) ont été imbibés par 20 μl de chacune des solutions des composés à tester (6 mg/ml dans du PBS) puis positionnés sur la CAM. L'impact des substances testées sur l'angiogenèse a alors été observé au 12 ^eme jour et l'évaluation quantitative de la réponse pro- ou anti-angiogénique a été estimée visuellement.

2) Résultats

Les résultats obtenus ont été photographiés et sont donnés sur la figure 1 annexée sur laquelle on peut observer que les composés (1-1) (1-2) et (1-4) ont un effet activateur sur la vascularisation des embryons de poulet. A l'inverse, les dérivés DMl, DM2 ; DM3 et DM4 ne faisant pas partie de l'invention ont un effet inhibiteur sur la vascularisation des embryons de poulets. Ces résultats démontrent que malgré une structure chimique très proche des dérivés de D-mannopyranose peuvent avoir des comportements totalement opposés sur la modulation de l'angiogenèse. L'ensemble de ces résultats démontre clairement que les composés de formule (I) conformes à l'invention ont une action pro-angiogénique.