DOROSHENKO ALEKSANDR SERGEEVICH (RU)
FILIMONOV VIKTOR DMITRIEVICH (RU)
SHTRYKOVA VIKTORIA VIKTOROVNA (RU)
KUKSIONOK VERA YURIEVNA (RU)
| RU1401842C | ||||
| RU510890C | ||||
| RU2092478C1 | 1997-10-10 | |||
| US6172228B1 | 2001-01-09 |
UMADEVI P. ET AL.: "Synthesis and in-vitro antibacterial activity of some new urea, thiourea and thiosemicarbazide derivatives.", INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACY AND PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 4, no. SUPPL, 2012, pages 379 - 383
БУТЕНКО, Людмила Васильевна (RU)
| Формула изобретения 1. Оптические изомеры (+)-бензгидрилмочевин формулы (1+) с положительным вращением плоскости поляризации. где R R' и выбранные из группы водород, алкил, галоген, нитро, амино, алкиламино, гидрокси-групп и находящиеся в орто-, пара- или мета-положениях бензольных колец. 2. Оптические изомеры (-)-бензгидрилмочевин формулы (I-) с отрицательным вращением плоскости поляризации. 3. Оптические изомеры (+)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочевины формулы (11+) с положительным вращением плоскости поляризации. NHCONH2 CI (11+) 4. Оптические изомеры (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочевины формулы (И-) с отрицательным вращением плоскости поляризации. (II-) 5. Фармацевтическая композиция, обладающая противосудорожным действием, содержащая терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного из соединений, соответствующих формулам (I+), (I-), (II+), (II-) по п.1, п.2, п.З, п.4. в смеси, по меньшей мере, с одним приемлемым носителем. 6. Способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-), в котором из рацемической смеси бензгидриламинов формулы (III) (III) где R R' и выбранные из группы водород, алкил, галоген, нитро, амино, алкиламино, гидрокси-групп и находящиеся в орто-, пара- или мета-положениях бензольных колец, получают диастереомеры тартратов бензгидриламинов формулы (Ш+) (щ.) в присутствии винных кислот в органическом растворителе, а оптические изомеры (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-) получают при осуществлении взаимодействия диастереомеров тартратов бензгидриламинов формулы (Ш+) и формулы (III-) с цианатами щелочных металлов в водном растворе. Способ по п.6, отличающийся тем, что взаимодействие диастереомеров тартратов (+)- и (-)-бензгидриламинов с водными растворами цианатов щелочных металлов осуществляют при комнатной температуре. , Способ по п.6, отличающийся тем, что в качестве винной кислоты выбирают L- или D-винную кислоту. Способ по п.6, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют метанол, или другие алифатические спирты. 10. Способ по п.6, отличающийся тем, что в качестве рацемической смеси бензгидриламинов формулы (III) выбирают (З-хлорфенил)-фенил-метанамин. 11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что из рацемической смеси (3-хлорфенил)- фенил-метанамина получают (+)- и (-)диастереомеры тартратов (3-хлорфенил)- фенил-метанамина в присутствии винных кислот в органическом растворителе. 12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что осуществляют взаимодействие (+)- и (-) диастереомеров тартратов (З-хлорфенил)-фенил-метанамина с цианатами щелочных металлов в водном растворе в результате которого получают оптические изомеры (+)- и (-)-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочевины. |
КОМПОЗИЦИЯ НА ИХ ОСНОВЕ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ
Область техники
Настоящее изобретение относится к новым веществам, а именно к оптическим изомерам (+) и (-)-бензгидрилмочевин общей формулы (I), галодифа ((+) и (~)-1-[(3- хлорфенил)-фенил-метил] мочевины), фармацевтической композиции на их основе, способу их получения и использования на основе выявленной различной терапевтической активности.
Где R Ф R' и выбранные из группы водород, алкил, галоген, нитро, амино, алкиламино, гидрокси-групп и находящиеся в орто-, пара- или мета-положениях бензольных колец.
Предшествующий уровень техники
Известно, что рацемические бензгидрилмочевины формулы (I) обладают противосудорожными свойствами (Патенты РФ М°675790, 2070039, 2033412, 2033411, 2024504). Среди них известен препарат на основе рацемической 1-[(3-хлорфенил)- фенил-метил]мочевины, относящийся к лекарственным препаратам противосудорожного действия и получивший международное непатентованное наименование «галодиф». Все известные методы получения бензгидрилмочевин формулы (I) приводят к образованию рацемических форм.
Так, например, известен способ синтеза галодифа, заключающийся в том, что целевой продукт получается при конденсации 3-хлорфенил-фенил-метанола с мочевиной при нагревании в присутствии концентрированной серной кислоты (SU 1833611 A3, от 11.11.1994). Недостатком способа является то, что полученный галодиф представляет собой рацемическую смесь оптических изомеров, в то время как терапевтическая активность оптических изомеров может быть различной.
Известен способ получения м-хлордифенилметилмочевины, (Патент РФ Х°2092478, МПК С07С275/24, от 28.05.1992), основанный на конденсации производного м- хлордифенилметана общей формулы:
где Х=-ОН, -ОСОСНз, -OCOCF 3 , -OS0 2 Ph, -NH 2 , -NH 2 HC1, -NHCOH с мочевиной в присутствии минеральной кислоты, выбранной из ряда H2SO4, НС1, НСЮ 2 , при 40-160°С при следующих молярных соотношениях реагентов: производное м-хлордифенилметана мочевина минеральная кислота 1 (1.1-8.0) (0.01-1.5). Однако галодиф, получаемый по данному методу, также представляет собой рацемическую смесь оптических изомеров, терапевтическая активность которых может быть различна, что при использовании рацемических смесей может приводить к возникновению побочных эффектов, в частности при комбинированной терапии.
Указанные способы синтеза бензгидрилмочевин формулы (I), и в частности 1-[(3- хлорфенил)-фенил-метил] мочевины не позволяют получить индивидуальные оптические изомеры из рацематов и в полной мере проявиться фармакологическим свойствам оптических изомеров, которые могут заключаться в различном проявлении их терапевтического эффекта.
К известным способам расщепления рацематов относится способ расщепления через диастереомеры. Суть способа может быть выражена следующей схемой:
На расщепляемый рацемат 1ι . di действуют оптическим активным реагентом d 2 : при этом получается новая пара веществ li . d 2 и di . d 2 , диастереомеров, различающихся по физическим свойствам. Разницы в растворимости, давлении пара, коэффициентах адсорбции во многих случаях оказывается достаточно, чтобы разделить диастереомеры кристаллизацией, перегонкой или хроматографически.
Известно, что для расщепления рацемических аминов наибольшее распространение получили асимметрические реагенты кислотного характера. Как правило, это (+)-винная кислота (наиболее дешевый и доступный из асимметрических реактивов). (Учебные материалы, органическая химия, методы получения стереоизомеров, хим.фак.МГУ, http://www.chem.msu.su/rus/teaching/stereo/iii.html)
В патенте РФ Ха2132845 (MIIKC07D211/90 от 06.03.1995) описан способ выделения R -/+/- и S -/-/-изомеров амлодипина из их смесей, заключающийся во взаимодействии смеси изомеров с L- или D-винной кислотой в органическом растворителе, содержащем количество диметилсульфоксида /ДМСО/, достаточное для осаждения соответственно ДМСО-сольвата соли L-винной кислотой и R-/ +/-амлодипина или ДМСО-сольвата соли D-винной кислотой и S -/-/-амлодипина.
Общими существенными признаками указанного аналога является выделение изомеров взаимодействием рацемической смеси изомеров с L- или D-винной кислотой в органическом растворителе.
Известен способ получения (+) и (-) энантиомеров (З-хлорфенил)-фенил- метанамина реакцией рацемического (З-хлорфенил)-фенил-метанамина с (+) и (-) винными кирлотами с последующей нейтрализацией образующихся диастереомеров тартратов водным раствором аммиака в хлороформе ( патент US JVe6172228 (В2)) с последующей отгонкой растворителя. Общими существенными признаками этого аналога является взаимодействие рацемической смеси изомеров (З-хлорфенил)-фенил-метанамина с L- или D-винной кислотой.
Раскрытие изобретения
Основной задачей заявляемой группы изобретений является получение оптических изомеров (+)- и (-) бензгидрилмочевин формулы (I) и (+)- и (-) [(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочевин ы, фармацевтической композиции на их основе и разработка способа их получения, с целью определения индивидуальной терапевтической активности оптических изомеров для последующего использования.
Техническим результатом, достигаемым при осуществлении заявляемой группы изобретений, является расширение функциональных возможностей противосудорожных препаратов на основе бензгидрилмочевин формулы (I) и на основе [(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочевин ы, имеющей международное непатентованное наименование «галодиф», путем получения оптических изомеров с различной терапевтической активностью. При этом заявляемый способ получения указанных оптических изомеров обладает более высокой технологичностью по сравнению с известным способом по патенту US N°6172228 (В2).
Поставленная задача решается ниже представленным способом получения оптических изомеров (+)- и (-) бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-).
Согласно настоящему изобретению, предлагаются оптические изомеры (+)-бензгидрилмочевин формулы (1+) с положительным вращением плоскости поляризации.
(1+) где R Ф R' и выбранные из группы водород, алкил, галоген, нитро, амино, алкиламино, гидрокси-групп и находящиеся в орто-, пара- или мета-положениях бензольных колец.
Согласно настоящему изобретению, предлагаются оптические изомеры (-)-бензгидрилмочевин формулы (I-) с отрицательным вращением плоскости поляризации.
(I-)
Согласно настоящему изобретению, предлагаются оптические изомеры (+)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины с положительным вращением плоскости поляризации.
Согласно настоящему изобретению, предлагаются оптические изомеры (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины с отрицательным вращением плоскости поляризации. NHCON H2
CI (II-)
Согласно настоящему изобретению, предлагается фармацевтическая композиция, обладающая противосудорожным действием, содержащая терапевтически эффективное количество, по меньшей мере, одного из соединений, соответствующих формулам (I+), (I-), (П+), (II-) в смеси, по меньшей мере, с одним приемлемым носителем.
Термин «фармацевтически приемлемый» означает группу или соединение, которые используют при получении фармацевтической композиции, и которые являются безопасными в биологическом или ином отношении, нетоксичными и приемлемыми как в ветеринарии, так и в фармацевтике.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-), в котором из рацемической сме и бензгидриламинов формулы (III)
где R Ф R' и выбранные из группы водород, алкил, галоген, нитро, амино, алкиламино, гидрокси-групп и находящиеся в орто-, пара- или мета-положениях бензольных колец,
получают диастереомеры тартратов бензгидриламинов формулы (III+)
и формулы (III-)
в присутствии винных кислот в органическом растворителе, а оптические изомеры (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-) получают при осуществлении взаимодействия диастереомеров тартратов бензгидриламинов формулы (Ш+) и формулы (III-) с цианатами щелочных металлов в водном растворе.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-), в котором взаимодействие диастереомеров тартратов (+)- и (-)-бензгидриламинов с водными растворами цианатов щелочных металлов осуществляют при комнатной температуре.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-), в котором в качестве винных кислот выбирают L- или D-винную кислоту.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-), в котором в качестве органического растворителя используют метанол, или другие алифатические спирты.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы (1+) и (I-), в котором в качестве рацемической смеси бензгидриламинов формулы (III) выбирают (З-хлорфенил)-фенил- метанамин.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин в котором из рацемической смеси (З-хлорфенил)-фенил-метанамина получают (+)- и (-)диастереомеры тартратов (З-хлорфенил)-фенил-метанамина в присутствии винных кислот в органическом растворителе.
Согласно настоящему изобретению, предлагается способ получения оптических изомеров (+)- и (-)-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочев ины, в котором из рацемической смеси (З-хлорфенил)-фенил-метанамина получают (+)- и (-)диастереомеры тартратов (З-хлорфенил)-фенил-метанамина в присутствии винных кислот в органическом растворителе, осуществляют взаимодействие (+)- и (-) диастереомеров тартратов (З-хлорфенил)-фенил-метанамина с цианатами щелочных металлов в водном растворе.
В отличие от известного (Патент US Ν°6172228), в заявляемом способе нет необходимости получения (+) и (-) энантиомеров бензгидриламинов, поскольку как показано на Фиг.1, образование (+) и (-) энатиомеров бензгидридмочевин (I) достигается реакций цианатов щелочных металлов с диастереомерами соответствующих (+) и (-) тартратов бензгидриламинов, что является существенным технологическим преимуществом и новизной.
Краткое описание фигуры чертежа
На фиг. 1 показана схема осуществления способа получения оптических изомеров (+)- и (-)-бензгидрилмочевин формулы формулы (1+) и (I-) , основанная на получении из рацемической смеси соответствующих бензгидриламинов формулы (III) диастереомеров тартратов этих бензгидриламинов формулы (Ш+) и формулы (III-) в присутствии винных кислот в органическом растворителе, взаимодействии полученных (+)- и (-) диастереомеров тартратов бензгидриламинов с цианатами щелочных металлов в водном растворе.
Изобретение в дальнейшем иллюстрируется примерами его осуществления, которые, однако, не ограничивают возможные варианты его осуществления в пределах сущности и объема настоящего изобретения.
Примеры наиболее предпочтительного способа выполнения изобрет Пример 1. Получение диастереомерных солей (З-хлорфенил)-фенил-метанамина.
Растворили 4.5 г (0.03 моль) Э-(-)-винной кислоты в 63 мл метанола при температуре 60-65°С. К горячему метанольному раствору 0-(-)-винной кислоты добавили 6.4 г (0.03 моль) рацемического (З-хлорфенил)-фенил-метанамина и продолжали нагрев при этой же температуре еще 5 минут. Затем смесь диастереомеров перемешивали 3 часа без нагрева. Выпавший осадок тартрата (-)(-)-(3-хлорфенил)- фенил-метанамина отфильтровывали и промывали на фильтре 10 мл охлаждённого до 10 °С метанола, сушили, после чего перекристаллизовывали из метанола. Выход тартрата(-)(-)-(3-хлорфенил)-фенил-м танамина составил 5.3 г (48%) в пересчете на теоретическую массу амина рацемического.
Температура плавления:
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса Ή ЯМР:
Ή ЯМР (300 MHz, D 2 0), δ, м.д.: 5.6с (ЗН, ΝΗ 3 + ), 7.3д (1Н, СН), 7.4м (9Н, Аг), 4.4 (2Н, СН).
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса |3 С ЯМР :
,3 С ЯМР (300 MHz, DMSO-dfi), δ, м.д.: 130, 128.5, 126.5, 125, 72,57.
Фильтрат, содержащий тартрат(-)(+)-(3-хлорфенил)-фенил-ме анамина сгущали, отгоняя метанол, после чего охлаждали до комнатной температуры и отфильтровывали осадок тартрата(-)(+)-(3-хлорфенил)-фенил-м танамина, который промывали на фильтре 5 мл толуола и сушили, после чего перекристаллизовывали из метанола. Выход тартрата(-)(+)-(3-хлорфенил)-фенил-м танамина составил 5.3 г (48%) в пересчете на теоретическую массу амина рацемического.
T M =143-145 °С.
Спектры ЯМР тартратов(-)(-)- и (-) (+)-(3-хлорфенил)-фенил-метанамина совпадают.
Получение (+)- и (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины. К раствору 5.3 г (0.014 моль) тартрата(-) (-)-(3-хлорфенил)-фенил-метанамина в 30 мл этанола добавили раствор 2.1 г (0.032 моль) цианата натрия в 24 мл воды. Смесь перемешивали 1 час при комнатной температуре. Конец реакции контролировали методом ТСХ. После охлаждения к реакционной массе добавляли воду до полного осаждения (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины, которую отфильтровывали, промывали водой, сушили и очищали, растворяя ее в этилацетате и осаждая гексаном. Выход (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины составил 3.1 г (85 %). При кристаллизации (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины из водного этанола образуются игольчатые кристаллы.
Температура плавления:
Τ Μ -137-138 °α
Удельное вращение:
[а ъ ° - 5,00° (этанол, с 6.6).
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса Ή ЯМР :
Ή ЯМР (300 MHz, DMSO-d 6 ), δ, м.д.: 5.6с (2Н, ΝΗ 2 ), 5.9д (1Н, СН), 7.0д (1Н, ΝΗ), 7.3м (6Н, Аг).
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса 13 С ЯМР :
13 С МР (300 MHz, DMSO-d 6 ), δ, м.д.: 158, 146, 143, 133, 130, 128, 127, 126, 125,
56.
ИК-спектроскопия :
И (КВг), у/см "1 : 3440 (NH 2 ); 3340 (NH); 1650 (С=0).
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ):
Agilent 1200 Compact LC, колонка 150 х 4.6 мм, неподвижная фаза ZorbaxExtend С- 18 (5 мкм), подвижная фаза ацетонитрил-вода (градиентное элюирование, соотношение ацетонитрил-вода в начале анализа 0%: 100%; в конце анализа 100%: 0%); скорость потока подвижной фазы: 1.0 мл/мин; детектирование при длине волны 230 нм; объем вводимой пробы - 20 мкл (петля-дозатор), время удерживания (-)-галодифа 7.23 мин.
(+)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вину получали из тартрата(-)(+)- (З-хлорфенил)-фенил-метанамина аналогично представленному выше методу. Выход (+)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины составил 3.1 г (85 %). При кристаллизации (+)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины из водного этанола образуются кубические кристаллы.
Тпл=137-138 °С. t ff ]B° + 5,00 е ( эта нол, с 6.6).
Спектры ЯМР и ИК, время удерживания ВЭЖХ(-)-и (+)-1-[(3-хлорфенил)-фенил- метил]мочевины совпадают.
Пример 2. Получение диастереомерных солей (4-хлорфенил)-фенил-метанамина. Растворили 4.5 г (0.03 моль) D-(-)-BHHHOH кислоты в 63 мл метанола при температуре 60-65°С. К горячему метанольному раствору 0-(-)-винной кислоты добавили 6.4 г (0.03 моль) рацемического (4-хлорфенил)-фенил-метанамина и продолжали нагрев при этой же температуре еще 5 минут. Затем смесь диастереомеров перемешивали 3 часа без нагрева. Выпавший осадок тартрата(-)(-)-(4-хлорфенил)- фенил-метанамина отфильтровывали и промывали на фильтре 10 мл охлаждённого до 10 °С метанола, сушили, после чего перекристаллизовывали из метанола. Выход тартрата(-)(-)-(4-хлорфенил)-фенил-м танамина составил 5.4 г (49%) в пересчете на теоретическую массу амина рацемического.
Температура плавления:
Т ПЛ =179-180°С.
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса Ή ЯМР :
Ή ЯМР (300 MHz, D 2 0), 5, м.д.: 5.6с (ЗН, ΝΗ 3 + ), 7.3д (1Н, СН), 7.4м (9Н, Аг), 4.4 (2Н, СН).
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса ,3 С ЯМР :
13 С ЯМР (300 MHz, DMSO-d 6 ), δ, м.д.: 130, 128.5, 126.5, 125, 72,57.
Фильтрат, содержащий тартрат(-)(+)-(4-хлорфенил)-фенил-ме анамина сгущали, отгоняя метанол, после чего охлаждали до комнатной температуры и отфильтровывали осадок тартрата(-)(+)-(4-хлорфенил)-фенил-м танамина, который промывали на фильтре 5 мл толуола и сушили, после чего перекристаллизовывали из метанола. Выход тартрата(-)(+)-(4-хлорфенил)-фенил-м танамина составил 5.4 г (49%) в пересчете на теоретическую массу амина рацемического.
Тпл.=163-164°С.
Спектры ЯМР тартратов(-)(-)- и (-)(+)-(4-хлорфенил)-фенил-метанамин совпадают.
Получение (+)- и (-)-1-[(4-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины.
К раствору 5.3 г (0.014 моль) тартрата(-)(-)-(4-хлорфенил)-фенил-м танамина в 30 мл этанола добавили раствор 2.1 г (0.032 моль) цианата натрия в 24 мл воды. Смесь перемешивали 1 час при комнатной температуре. Конец реакции контролировали методом ТСХ. После охлаждения к реакционной массе добавляли воду до полного осаждения(-)- 1 -[(4-хлорфенил)-фенил-метил]мочеви ы, которую отфильтровывали, промывали водой, сушили и очищали, растворяя ее в этилацетате и осаждая гексаном. Выход (-)-1-[(4-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины составил 3.2 г (88 %). При кристаллизации(-)-1-[(4-хлорфенил)-ф енил-метил] мочевины из водного этанола образуются игольчатые кристаллы.
Температура плавления:
T^=153-154°C.
Удельное вращение:
[бг]£,° - 8,73° (этанол, с 6.6).
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса Ή ЯМР :
Ή ЯМР (300 MHz, DMSO-d 6 ), δ, м.д.: 5.6с (2Н, ΝΗ 2 ), 5.9д (Ш, СН), 7.0д (1Н, ΝΗ), 7.3м (6Н, Аг).
Спектроскопия ядерного магнитного резонанса 1 С ЯМР :
,3 С ЯМР (300 MHz, DMSO-d 6 ), δ, м.д.: 158, 146, 143, 133, 130, 128, 127, 126, 125,
56.
ИК-спектроскопия :
ИК(КВг), V/CM- 1 : 3440 (NH 2 ); 3340 (NH); 1650 (С=0).
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ):
Agilent 1200 Compact LC, колонка 150 х 4.6 мм, неподвижная фаза ZorbaxExtend С- 18 (5 мкм), подвижная фаза ацетонитрил-вода (градиентное элюирование, соотношение ацетонитрил-вода в начале анализа 0%: 100%; в конце анализа 100%: 0%); скорость потока подвижной фазы: 1.0 мл/мин; детектирование при длине волны 230 нм; объем вводимой пробы - 20 мкл (петля-дозатор), время удерживания (-)-галодифа 6.4 мин.
(+)-1-[(4-хлорфенил)-фенил-метил]моче вину получали из тартрата(-)(+)-(4- хлорфенил)-фенил-метанамина аналогично представленному выше методу. Выход (+)-1-[(4-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины составил 3.1 г (85 %). При кристаллизации (+)-1-[(4-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины из водного этанола образуются кубические кристаллы.
Тпл.=153-154°С. Мл + 8, 3° ( этаН ол, с 6.6).
Спектры ЯМР и ИК, время удерживания ВЭЖХ(-)-и (+)-1-[(4-хлорфенил)-фенил- метил]мочевины совпадают.
Исследовалась терапевтическая активность полученных оптических изомеров (+) и (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины (галодифа). Судороги вызывали введением коразола, тяжесть (стадии) судорог оценивали по пятибалльной шкале. Противосудорожную активность оценивали по способности субстанции снижать тяжесть судорожных проявлений, вызванных коразолом. Субстанции галодифа вводили внутрижелудочно за 2 часа до коразола, коразол вводили подкожно. Для статистической обработки результатов использовали пробит-анализ, t- критерий Стьюдента, ANOVA, критерий х. Различия полученных результатов считались статистически достоверными при уровне значимости р<0,05.
На 1-м этапе исследования была установлена оптимальная судорожная доза коразола СД97, которая составила 110 мг/кг (Таблица 1).
Таблица 1. Количество животных с 3-й стадией судорожных проявлений в зависимости от дозы коразола.
На 2-м этапе была изучена противосудорожная активность эталонной субстанции в дозах 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг и 500 мг/кг (Таблица 2). В качестве эталонной субстанции использовался рацемический галодиф. На основании полученных результатов для проведения сравнительного исследования образцов галодифа были выбраны 3 дозы: 100 мкг/кг, 150 мкг/кг и 250 мкг/кг. Эталонную субстанцию галодифа использовали в дозах 50 мг/кг, 100 мг/кг, 150мг/кг, 200 мг/кг и 500 мг/кг. Через 2 часа после введения субстанции галодифа животным вводили коразол (ПО мг/кг) и оценивали судорожные проявления 3-й и 5-й стадий. Результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Влияние эталонной субстанции галодифа в разных дозах на число животных с судорожными проявлениями 3-й и 5-й стадии 50 100 80
100 100 20
150 70 10
200 60 0
500 60 0
Проведенные исследования показали, что эталонная субстанция галодифа предотвращала развитие клонических судорог у 30-40 % животных (3-я стадия судорожных проявлений), начиная с дозы 150 мкг/мл (табл. 2). От тонических судорог всех конечностей (5-я стадия) эталонная субстанция защищала 20% животных в наименьшей дозе (50 мг/кг), а при увеличении дозы до 200 мг/кг и выше эталонная субстанция полностью предотвращала появление судорожных проявлений этой стадии.
На основании полученных результатов для проведения сравнительного исследования образцов (+) и (-)-галодифа были выбраны 3 дозы препарата:
- максимальная доза, не влияющая на клонические судороги— 100 мкг/кг;
- минимальная доза, снижающая число животных с клоническими судорогами— 150 мкг/кг;
- доза 250 мкг/кг для выявления образца с наиболее более высокой активностью. Для сравнения противосудорожной активности образцы субстанций галодифа вводили в трех дозах: 100 мг/кг, 150 мг/кг и 250мг/кг за 2 часа до коразола (110 мг/кг).
Было проведено сравнение образцов по средним баллам судорожных проявлений, вызванных коразолом на фоне введения исследуемых образцов. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3. Влияние эталонной субстанции и образцов субстанций (+) и
(-)-изомеры галодифа на судорожные проявления (баллы), вызванные коразолом (X±SE)
Доза исследуемого образца (мг/кг)
Исследуемый образец
субстанции галодифа 100 150 250
Образец jVs 1 / (-) изомер 3,8±0,39 2,9±0,29 2,8±0,41
Образец N° 2 1 (-) изомер 4,1±0,23* 3,5±0,22* 3,0±0,37 Образец jN° 3 / (+) изомер 3,2±0,42 2,5±0,31 1,9±0,28
Образец Ν° 4/ (+) изомер 3,0±0,21 2,6±0,31 2,5±0,27
Эталонный образец 3,5±0,31 2,9±0,28 2,6±0,33
Примечание: * — различие достоверно в сравнении с соответствующим показателем группы контроля (п=10, р<0,05).
Из таблицы 3 видно, что чем выше доза препарата, тем ниже величина среднего балла судорожных проявлений. Так, для дозы исследуемого образца Nel равной 100(мг/кг) средний балл судорожных проявлений составил 3,8±0,39, а для того же образца Jfel в дозе 250 (мг/кг) средний балл судорожных проявлений снизился до величины 2,8±0,41.
При сравнении данных из таблицы 3 для эталонного образца и образцов jN° 1, 2 ((-)-изомер галодифа) видно, что средний балл судорожных проявлений для образцов N°l,2 для всех исследованных доз препарата выше, чем у эталонного образца, т.е. (-)- изомер галодифа проявил меньшую противосудорожную активность, чем эталонная субстанция. По средним баллам судорожных проявлений образцы N° 3, 4 во всех исследованных дозах 100 мг/кг, 150 мг/кг, 250 мг/кг обладали более низким баллом судорожных проявлений, т.е (+)-изомер галодифа проявил большую противосудорожную активность, чем эталонная субстанция (р<0,05).
Также было проведено сравнение противосудорожной активности исследуемых образцов субстанции галодифа по доле животных, у которых исследуемое вещество предотвратило развитие судорожных проявлений разной степени тяжести, вызванных коразолом. В таблице 4 приведены результаты, выраженные в проценте животных, у которых не развивались судорожные проявления определенной стадии (% протекции).
Таблица 4. Сравнение исследуемых образцов в разных дозах по их способности защищать животных (% протекции) от судорожных проявлений 3-й, 4-й и 5-й стадий, вызванных коразолом
Исследуемый образец субстанции Доза исследуемого образца (мг/кг) галодифа 100 150 250
Протекция от 3-й стадии
Образец 1 / (-) изомер 10 20 40
Образец е 2 / (-) изомер 10 10 30
Образец jN° 3 / (+) изомер 30 40 70 Образец N° 4 / (+)изомер 20 30 50
Эталонный образец 20 30 50
Протекция от 4-й стадии
Образец N° 1 / (-) изомер 40 70 80
Образец N° 2 / (-) изомер 20* 40* 70
Образец Ν° 3 / (+) изомер 60 90 100
Образец Ν° 4 / (+)изомер 80 90 90
Эталонный образец 50 70 80
Протекция от 5-й стадии
Образец Л » 1 / (-) изомер 60* 80 100
Образец Ν° 2 / (-) изомер 70 70 100
Образец Ν° 3 / (+) изомер 80 100 100
Образец Ν° 4 / (+)изомер 100 100 100
Эталонный образец 80 90 100
Примечание: *— различие достоверно в сравнении с соответствующим показателем группы контроля (п=10; р<0,05).
Из таблицы 4 видно, что доля животных, защищенных от судорожных проявлений 3-й, 4-й, 5-й стадий для всех исследованных образцов повышается с увеличением дозы галодифа. Наибольшую протекцию от судорожных проявлений всех стадий показали образцы Ν°3,4, соответствующие (+)- изомеру галодифа. Рацемический галодиф обладал достоверно более низкой протекторной защитой, чем образцы 3,4
((+)- изомер галодифа), и достоверно более высокой протекторной защитой, чем образцы jN°l,2 ((-)-изомер галодифа) в дозах 100 мг/кг и 150 мг/кг для 3-й и 4-й стадий.
Все исследованные образцы полностью защищали животных от развития судорожных проявлений 5-й стадии в дозе 250 мг/кг.
Результаты экспериментов подтверждают, что оптические изомеры
1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче ины (изомеры галодифа), полученные способом согласно изобретению, могут применяться в качестве лекарственных препаратов противосудорожного действия.
Промышленная применимость Таким образом, в результате проведенных испытаний установлено, что оптический изомер (+)- 1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочеви ны (+изомер галодифа) обладает более высокой противосудорожной активностью, чем его оптический антипод (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины ((-)изомер галодифа). При разделении рацемического галодифа 1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]мочеви ны способом согласно изобретению были получены оптические изомеры (+)- и (-)-1-[(3-хлорфенил)-фенил-метил]моче вины (изомеры галодифа), обладающие различной силы терапевтической активностью.
Next Patent: CANDY