本发明属于医药化工领域，涉及一种青蒿琥酯 聚乙二醇化衍生物、 其药物组合物及其用途。 背景技术

青蒿素（ Artemi s inin, 如下面的式 A所示）是从中药青蒿中提取 的有过氧基团的倍半萜内酯药物。 其对鼠疟原虫红内期超微结构的影 响， 主要是疟原虫膜系结构的改变， 该药首先作用于食物泡膜、 表膜、 线粒体， 内质网， 此外对核内染色质也有一定的影响。 提示青蒿素的 作用方式主要是干扰表膜-线粒体的功能。可� �是青蒿素作用于食物泡 膜，从而阻断了营养摄取的最早阶段，使疟原 虫较快出现氨基酸饥俄， 迅速形成自噬泡，并不断排出虫体外，使疟原 虫损失大量胞浆而死亡。

式 A

青蒿素为高效、 速效抗疟药。 作用于疟原虫红细胞内期， 适用于 间日疟及恶性疟， 特别是抢救脑型疟均有良效。 其退热时间及疟原虫 转阴时间都较氯喹短。 对氯喹有抗药性的疟原虫， 使用该品亦有效。

世界卫生组织在对全球抗疟工作进行总结和分 析后， 认为使用单 方青蒿素易使疟原虫产生耐药性， 提出了停止使用单方青蒿素， 改用 复方青蒿素的建议。 在复方青蒿素处方中， 开发出了双氢青蒿素 ( ihydroartemi s inin ) 、 青蒿號醋 ( Artesunate ) 和蒿 甲酸 ( Ar temether )等。

青蒿琥酯 （如下面的式 B所示）适用于脑型疟及各种危重疟疾的 抢救， 口服首剂 l OOmg , 第 2 日起一日 2次， 每次 50mg， 连服 5 日。 静脉注射临用前， 加入所附的 5 %碳酸氢钠注射液 0. 6mi , 振摇 2分 钟，待完全溶解后，加 5 %葡萄糖注射液或葡萄糖氯化钠注射液 5. 4ml 稀释， 使每 1ml 溶液含青蒿琥酯 l Oing , 緩慢静注。 首次按体重 1. 2mg/kg , 首次剂量后 4、 24、 48 小时各重复注射 1 次。 危重者， 首次剂量可加倍， 3 日为一疗程。

但青蒿琥酯存在溶解性较差、 作用时间短、 用药频率高等不足， 因此青蒿素及其衍生物的研发仍然是疟疾治疗 药物开发的重点， 尤其 是水溶性好、 代谢稳定的衍生物引起了广泛的关注。

聚乙二醇是一类生物相容性优良、 水溶性极好， 已成功应用于蛋 白、 多肽以及小分子药物修饰的人工合成共分子。 偶联聚乙二醇的青 蒿琥酯， 除水溶性将得到极大改善外， 更重要的是还将达到长效目的。

然而目前 PEG修饰的结构选择上， 多采用单功能或双功能线性分 子。 实际上， PEG 修饰剂多适用于蛋白、 多肽药物的修饰， 而应用于 小分子药物的修饰时， 明显的缺点在于有效载药小， 无效分子的比例 高。 而多价 PBG修饰的衍生物往往难以获得， 并且修饰后的最终产物 不一定具有活性， 即可能是无效修饰。

因此， 尚需要发现新的 PEG分子修饰的青蒿琥酯。 发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动， 发现青蒿琥酯经多价 聚乙二醇共价修饰后， 活性保持相当； 本发明人还惊奇地发现， 其水溶 性和稳定性显著增加， 并且其在体内的半衰期显著延长。 由此提供了下 述发明：

本发明的一个方面涉及通式（ I )所示的 琥酯聚乙二醇衍生物，

( I )

其中，

P0LY表示聚乙二醇残基， 分子量为 200至 100， 000 Da;

X表示氨基或氧或甲氧基；

Y 表示含有双氨基和单羧基的氨基酸结构化合物 ， 其羧基与 POLY 的 X成酰胺键或酯键，向远端引出多氨基基团与� �蒿琥酯的^ &成酰胺； n和 m表示 Y的聚合度， m和 n独立地为 0至 12的任一整数； r和 s代表青蒿琥酯的聚合度； 并且

当 m和 n均不为 0时， r和 s分别为 n和 m的 2倍数， 并且青蒿琥 酯通过 与 Y引出的多 成酰胺；

当 m为 0并且 n不为 0, 或者 m不为 0并且 n为 0时， r和 s分别 为 η和 m的 2倍数， 并且青蒿琥酯通过 与 Y引出的多 成酰胺， m为 0或 n为 0的一端的 X为甲氧基； 或

当 m和 n同时为 0时， r和 s均为 1， 青蒿琥酯通过氣基与 X成酯 或酰胺。

根据本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其中， Y为 L- 赖氨酸、 L-鸟氨酸、 2， 3-二氨基丙酸、 或 2， 4-二氨基丁酸。

根据本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其中， m和 n 独立地为 0、 1、 2、 或 3。

根据本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其中， 所述聚 乙二醇残基的分子量为 2, 000至 40， 000,例如 10， 000至 30, 000、 15, 000 至 25， 000、 18， 000至 22， 000、 20， 000等。 根据本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其如下面的通 Π) 所示，

(II)

其中， POLY和 X如上面任一项所定义。

根据本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物，其为化合物 1:

[(Artesunate -) -Lys-] -PEG _m (其结构式如下面的式 a所示） ，

其中， PBG _2Dk 代表 20kD分子量 PEG。

根据本发明任一项利要求所迷的青蒿琥酯聚乙 二醇衍生物， 其如下 面的通式（III) 所示，

( III )

其中， P0LY、 Y、 m和 s如上面任一项所定义， 并且 n为 0， m不为

0。

根据本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其为：

(匕合物 2: mPEGjo-Lys- (Artesunate) ₂ (其结构式如下面的式 b所 示）

式 b

其中， 20kD分子量单曱氧基 PEG;

或

化合物 3: mPEG _2c -Lys ₂ - (Ar tesunate) ₄ (其结构式如下面的式 c所 示） ， 式 C

其中， mPEG _2Dk 代表 20kD分子量单甲氧基 PEG _e

根据本发明任一项所迷的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其如下面的通 IV) 所示，

(IV)

其中， POLY和 X如上面任一项所定义， 并且 m和 n同时为 0。

根椐本发明任一项所述的青蒿琥酯聚乙二醇衍 生物， 其为： 化合物 4： Artesunate-NH-PEG _20k -NH-Artesunate(其结构式如下面的式 d所示），

式 d

其中， PEG ₂ 。 _k 代表 20kD分子量 PEG。

本发明人用小鼠为实验动物， 采用鼠疟 4天抑制法试验考察青蒿琥 酯不同程度 PEG化修饰衍生物对鼠疟原虫血症的抑制作用， 结杲显示， 腹腔注射 10 mg/kg体重青蒿琥酯及等摩尔剂量的青蒿琥酯 PEG化衍生 物可显著抑制鼠疟原虫血症的发展， 抑制率达 80%以上， 且 PBG衍生物 与等摩尔剂量青蒿琥酯的抑制率无显著性差异 。

用正常大鼠测定药物的体内过程。 结果显示， 通过尾静脉单剂量注 射化合物 1 (相当于青蒿琥酯 10mg/kg) , 可获得延长的药时曲线， 半 衰期延长 5倍左右。 本发明的化合物（包括化合物 1 - 4 )具有显著延长 半衰期的效果。 本发明的另一方面涉及本发明中任一项所述的 青蒿琥酯聚乙二醇 衍生物的制备方法， 包括下述步骤：

将青蒿琥酯和含有游离氛基的多价聚乙二醇修 饰剂置于惰性溶剂 中， 在偶联剂和有机碱催化作用下， 青蒿琥酯的^ ^和多价聚乙二醇修 饰剂的氨基或羟基进行偶联反应。

根据本发明任一项所述的制备方法， 其特征在于如下的任一项或多 项：

( 1 )所述聚乙二醇修饰剂为 mPEG ₂ 。 _k 或 [Lys- ] ₂ - PEG ₂ 。 _k ;

(2) 所述惰性溶剂选自二氯甲烷、 氯仿、 甲苯、 或二甲基甲酰胺 (匿） ；

( 3)所述偶联剂选自 N-乙基 -N， -(3-二曱胺丙基)碳二亚胺盐酸盐 (EDO, 1, 3二异丙基碳二亚胺（ DIC )、 N， N-二环己基碳二亚胺（ DCC )；

(4)反应温度控制在 0- 25 ; ( 5 )所述有机碱选自吡啶、 三乙胺、 二异丙基乙基胺。 本发明的再一方面涉及一种药物组合物， 其包含本发明中任一项所 述的青蒿琥酯聚乙二醇衍生物； 可选地， 还包含药学上可接受的载体或 辅料。

通常本发明的药物组合物含有 0. 1 - 90 重量％的本发明的化合物 (即青蒿琥酯聚乙二醇衍生物）。 药物组合物可根据本领域已知的方法 制备。 用于此目的时， 如果需要， 可将化合物与一种或多种固体或液体 药物赋形剂和 /或辅剂结合， 制成可作为人用的适当的施用形式或剂量 形式。

本发明的化合物或含有它的药物组合物可以单 位剂量形式给药， 给 药途径可为肠道或非肠道， 如口服、 肌肉、 皮下、 鼻腔、 口腔粘膜、 皮 肤、 腹膜或直肠等。 给药剂型例如片剂、 胶囊、 滴丸、 气雾剂、 丸剂、 粉剂、 溶液剂、 混悬剂、 乳剂、 颗粒剂、 脂质体、 透皮剂、 口含片、 栓 剂、 冻千粉针剂等。 可以是普通制剂、 緩释制剂、 控释制剂及各种微粒 给药系统。 为了将单位给药剂型制成片剂， 可以广泛使用本领域公知的 各种载体。 关于载体的例子是， 例如稀释剂与吸收剂， 如淀粉、 糊精、 硫酸 、 乳糖、 甘露醇、 蔗糖、 氯化钠、 葡萄糖、 尿素、 碳酸钙、 白陶 土、微晶歼维素、 硅酸铝等； 湿润剂与粘合剂， 如水、 甘油、 聚乙二醇、 乙醇、 丙醇、 淀粉浆、 糊精、 糖浆、 蜂蜜、 葡萄糖溶液、 阿拉伯胶浆、 明胶浆、 羧曱基纤维素钠、 紫胶、 甲基纤维素、 磷酸钟、 聚乙烯吡咯烷 酮等； 崩解剂， 例如干燥淀粉、 海藻酸盐、 琼脂粉、 褐藻淀粉、 碳酸氢 钠与枸橼酸、碳酸钙、 聚氧乙烯、 山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、 甲基歼维素、 乙基纤维素等； 崩解抑制剂， 例如蔗糖、 三硬脂酸甘油酯、 可可脂、 氢化油等； 吸收促进剂， 例如季铵盐、 十二烷基减酸钠等； 润 滑剂， 例如滑石粉、 二氧化硅、 玉米淀粉、 硬脂酸盐、 硼酸、 液体石蜡、 聚乙二醇等。 还可以将片剂进一步制成包衣片， 例如糖包衣片、 薄膜包 衣片、 肠溶包衣片， 或双层片和多层片。 为了将给药单元制成丸剂， 可 以广泛使用本领域公知的各种载体。 关于载体的例子是， 例如稀释剂与 吸收剂， 如葡萄糖、 乳糖、 淀粉、 可可脂、 氢化植物油、 聚乙烯吡咯烷 酮、 Ge luc ire、 高岭土、 滑石粉等； 粘合剂如阿拉伯胶、 黄蓍胶、 明胶、 乙醇、 蜂蜜、 液糖、 米糊或面糊等； 崩解剂， 如琼脂粉、 干燥淀粉、 海 藻酸盐、 十二烷基磺酸钠、 甲基纤维素、 乙基紆维素等。 为了将给药单 元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种 载体。关于载体的例子是， 例如聚乙二醇、 卵磷脂、 可可脂、 高级醇、 高级醇的酯、 明胶、 半合成 甘油酯等。 为了将给药单元制成胶囊， 将有效成分式化合物与上述的各 种载体混合， 并将由此得到的混合物置于硬的明明胶袭或软 胶嚢中。 也 可将有效成分化合物制成微囊剂， 混悬于水性介质中形成混悬剂， 亦可 装入硬胶囊中或制成注射剂应用。 为了将给药单元制成注射用制剂， 如 溶液剂、 乳剂、 冻干粉针剂和混悬剂， 可以使用本领域常用的所有稀释 剂， 例如， 水、 乙醇、 聚乙二醇、 1，3-丙二醇、 乙氧基化的异硬脂醇、 多氧化的异硬脂醇、 聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。 另外， 为了制备等渗 注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化 钠、 葡萄糖或甘油，此夕卜， 还可以添加常规的助溶剂、 緩冲剂、 pH调节剂等。

此外， 如需要， 也可以向药物制剂中添加着色剂、 防腐剂、 香料、 矫味剂、 甜味 剂或其它材料。

本发明的化合物的给药剂量取决于许多因素， 例如所要预防或治疗 疾病的性质和严重程度， 患者或动物的性别、 年龄、 体重及个体反应， 所用的具体化合物， 给药途径及给药次数等。 上述剂量可以单一剂量形 式或分成几个， 例如二、 三或四个剂量形式给药。

本文所用的术语 "组合物" 意指包括包含指定量的各指定成分的产 品， 以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合 产生的任何产品。

可改变本发明药物组合物中活性成分的实际剂 量水平， 以便所得的 活性化合物量能有效针对具体患者、 組合物和给药方式得到所需的治疗 反应。 剂量水平须根据具体化合物的活性、 给药途径、 所治疗病况的严 重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选 定。 但是， 本领域的做法 是， 化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要 求的水平开始， 逐渐 增加剂量， 直到得到所需的效果。 本发明的再一方面涉及中任一项所述的青蒿琥 酯聚乙二醇衍生物 在制备抗疟原虫的药物、 或者预防和 /或治疗疟原虫所致疾病例如疟疾 的药物中的用途。

本发明的再一方面涉及一种在体内或体内抗疟 原虫的方法， 包括 使用有效量的本发明中任一项所述的青蒿琥酯 聚乙二醇衍生物的步骤。

本发明的再一方面涉及一种预防和 /或治疗疟原虫所致疾病例如疟 疾的方法， 包括使用有效量的本发明中任一项所述的青蒿 琥酯聚乙二醇 衍生物的步骤。

当用于上述治疗和 /或预防或辅助治疗时， 治疗和 /或预防有效量的 一种本发明化合物可以以纯形式应用， 或者以药学可接受的酯或前药形 式 (在存在这些形式的情况下）应用。 或者， 所述化合物可以以含有该目 的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药 物组合物给药。 词语"预 防和 /或治疗有效量 "的本发明化合物指以适用于任何医学预防和 /或治 疗的合理效果 /风险比治疗障碍的足够量的化合物。 但应认识到， 本发 明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在 可靠的医学判断范围内 作出决定。 对于任何具体的患者， 具体的治疗有效剂量水平须 据多种 因素而定， 所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程 度； 所采用的 具体化合物的活性； 所采用的具体组合物； 患者的年龄、 体重、 一般健 康状况、 性别和饮食； 所采用的具体化合物的给药时间、 给药途径和排 泄率； 治疗持续时间； 与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的 药 物； 及医疗领域公知的类似因素。 例如， 本领域的做法是， 化合物的剂 量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开 始， 逐渐增加剂量， 直到 得到所需的效果。 一般说来， 本发明式 I化合物用于哺乳动物特别是人 的剂量可以介于 0. 001-1000 rag/kg体重 /天， 例如介于 0. 01-100 mg/kg 体重 /天， 例如介于 0. 01- 10 mg/kg体重 /天。

根据本发明的化合物可以有效地预防和 /或治疗本发明所述的各种 疾病或病症。

本发明所称的化合物， 如果没有特别说明， 是指本发明的青蒿琥酯 聚乙二醇衍生物。 在本发明中，

在本发明中， 术语 "有效量"是指可在受试者中实现治疗、 预防、 减轻和 /或緩解本发明所述疾病或病症的剂量。

术语 "受试者" 可以指患者或者其它接受本发明组合物以治疗 、 预防、减轻和 /或緩解本发明所述疾病或病症的动物，特别� �哺乳动物， 例如人、 狗、 猴、 牛、 马等。

术语 "疾病和 /或病症"是指所述受试者的一种身体状态， 该身体 状态与本发明所述疾病和 /或病症有关。

本发明中使用的一些缩写词具有下面的含义：

PEG 聚乙二醇

Ar tesuna te 青蒿琥酯

BOC 叔丁氧叛基

Lys 赖氨酸

DCC 二环己基碳二亚胺

NHS N-羟基琥珀酰亚胺

TFA 三氟乙酸

其它未标示的缩写具有本领域公知的含义。 发明的有益效杲

本发明的青蒿琥酯聚乙二醇化衍生物与青蒿琥 酯的活性相当， 其 水溶性和稳定性显著增加， 并且其在体内的半衰期显著延长。 附图说明

F i g. 1： 给药后双氢青蒿素药一时曲线。 双氢青蒿素包括化合物 1 和普通的青蒿琥酯。

F i g. 2： 青蒿琥酯及其 PEG化衍生物对鼠疟模型原虫血症的抑制作 用。 *P<0. 01。 其中， 黑色填充表示平均值 （Mean ) ； 网格填充表示标 准差 （ STD ) 。 具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详 细描述， 但是本领 域技术人员将会理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限 定本发明的范围。 实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造 商建议的奈件进行 _β 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通 过市购获得的常规产品。 二氨基聚乙二醇及单曱氧基-氨基聚乙二醇为� �京凯正公司产品，

1-乙基- 3- (3-二曱胺丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC HC1 )与二甲氨基吡 啶（DMAP ) 均为国产分析纯试剂。 青蒿琥酯为市购原料。 实施例 1 : 化合物 1 : [ (Ar tesunate - ) ₂ -Lys- ] ₂ -PEG 的制备

PEG - (NH2) ₂ 20. 0g( 1麵 ol )和 BOC-Lys (BOC) -OH 1. 04g( 3mmol ) 溶于 100ml 二氯甲烷中 ， O 条件下 ， 加入 DCC 0. 618g (MW: 206, 3mmol)， N-羟基琥珀酰亚胺 0. 445g (3mmol)，搅拌 30min; 室温 25 搅拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚沉淀， 自然干燥； 千品溶于 100mlTFA/DCM ( V/V: 1/3 ) , 室温 25 搅拌 2小 时， 脱去 B0C保护基； 减压浓缩至干， 加 200ml氢氧化钠水溶液（M/M: 4/96 )溶解， 加适量氯化钠， 二氯甲烷提取 3次， 合并有机相， 无水硫 酸钠干燥， 减压浓缩至干， 乙醚沉淀， 真空干燥至恒重； 取 18. 2 克千 品， 溶于 90ml二氯甲烷中， 加入 Ar tesima te 2, 3g (6膽 ol)， 0 条件 下， 加入 DCC 1.2g (6腿 ol)， N-羟基琥珀酰亚胺 0.69g(6讓 ol), 搅拌 30min; 室温 25 搅拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至 干，乙醚沉淀，自然干燥，得干品 17.5g，收率 87.5% ₀ MR (CDCL3, 300MHz): δθ.94 (s, 12H, C9-CH3), 0.95 (s, 12H, C6-CH3) , 1.44 (s, 12H, C3-CH3) , 1.5-1.8(bs，CH2 (lys β Y )) , 2.68 (m, 4H， H-9)， 3.63 (bs， 1868H, PEG主链）， 5.44 (s， 4H, H-12)。 备

式 b

mPEG _20K -NH ₂ 20.0g( lmmol )和 BOC-Lys (B0C) -OH 0.52g( 1.5腿 ol ) 溶于 100ml二氯甲烷中， 0C奈件下， 加入 DCC 0.309g (1.5mmol),N- 羟基琥珀酰亚胺 0.223g (1.5mmol)，搅拌 30min;室温 25 搅拌 2小时， 反庄结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚沉淀， 自然干燥； 千品 溶于 100mlTFA/DCM (V/V: 1/3) ， 室温 25 3搅拌 2小时， 脱去 B0C保 护基； 减压浓缩至干， 加 200ml 氢氧化钠水溶液（M/M: 4/96) 溶解， 加适量氯化钠， 二氯甲烷提取 3次， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 减 压浓缩至干， 乙醚沉淀， 真空干燥至恒重； 取 18.8克干品， 溶于 95ml 二氯甲烷中， 加入 Artesunate 1.15g (MW: 384.42， 3mmol)， O 奈件下， 加入 DCC0.62g (3mmol), N-羟基琥珀酰亚胺 0.35g (3腿 ol)，搅拌 30min; 室温 25TC搅拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚 沉淀， 自然干燥， 得干品 18. lg， 收率 90,5%。 NMR (CDCL3, 300ΜΗζ): δ 0.94 (s， 6H， C9-CH3)， 0.95 (s, 6H, C6-CH3)， 1.44 (s, 6H, C3-CH3)， 1.5-1.8(bs,CH2 (lys β γ )) , 2.68 (m, 2H, H-9) , 3.15 (s， 3H， CH3-0PEG) , 3.63 (bs, 1824H, PEG主链）， 5.44 (s， 2H， H-12)。 实施例 3: 化合物 3: mPEG -Lys ₂ - (Artesunate) ₄ 的制备

式 C

mPEG _20K -NH ₂ 20.0g( lniraol )和 BOC- Lys (BOC) -OH 0.52g( 1.5mmol ) 溶于 100ml 二氯甲烷中， 条件下， 加入 DCC 0.309g (l,5mmol) ，N- 羟基琥珀酰亚胺 0.223g (1.5隱 1)，搅拌 30min;室温 搅拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚沉淀， 自然千燥； 千品 溶于 lOOmlTFA/DCM ( V/V: 1/3) , 室温 25匸搅拌 2小时， 脱去 B0C保 护基； 减压浓缩至千， 加 200ml 氢氧化钠水溶液（M/M: 4/96) 溶解， 加适量氯化钠， 二氯曱烷提取 3次， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 减 压浓缩至干， 乙醚沉淀， 真空干燥至恒重； 取干品和 BOC- Lys(B0C)-0H 1.04g ( 3匪 ol )溶于 100ml二氯甲烷中， 条件下， 加入 DCC 0.618g (3麵 1)， N-羟基琥珀酰亚胺 0· 445g嶽 115， 3睡 1) , 搅拌 30m in; 室 温 25X:搅拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚沉 淀， 自然干燥； 干品溶于 100ml TFA/DCM (V/V: 1/3) , 室温 25 搅拌 2小时，脱去 B0C保护基；减压浓缩至千，加 200ml氢氧化钠水溶液 (M/M: 4/96)溶解， 加适量氯化钠， 二氯甲烷提取 3次， 合并有; M目， 无水硫 酸钠干燥， 减压浓缩至干， 乙醚沉淀， 真空干燥至恒重； 取 17克干品， 溶于 85ml二氯甲烷中， 加入 Artesunate 2.3g (6mmol) , 0"C条件下， 加 入 DCC 1.2g (6mmol), N-羟基琥珀酰亚胺 0.69g (6mmol) , 搅拌 30m in; 室温 搅拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚 沉淀， 自然干燥，得千品 16g，收率 80%。NMR(CDC13， 300MHz): δ 0.94 (s， 12H, C9-CH3), 0.95 (s， 12H, C6-CH3), 1.44 (s, 12H, C3-CH3), 1.5-1.8(bs,CH2 (lys α β γ )) , 2.68 (m, 4H, H-9), 3.15 (s， 3H, CH3 - OPEG) , 3.63 (bs, 1824H, PEG主链）， 5.44 (s， 4H, H-12)。 备

取 PEG ₂ 。 _S -(NH2) ₂ 20克， 溶于 100ml二氟甲坑中， 加入 Artesunate 1.15g (MW: 384.42, 3mmol), 0 条 件 下 ， 加 入 DCC 0.618g (MW: 206, 3mmol),NHS 0.35g(MW: 115, 3mmol) , 搅拌 30min; 室温 25 搅 拌 2小时， 反应结束； 过滤除去沉淀， 浓缩滤液至干， 乙醚沉淀， 自然 千 燥 ， 得干 品 19.2g ， 收率 96% 。 NMR(CDCL3， 300MHz): δ 0.94 (s,6H,C9-CH3), 0.95 (s, 6H, C6-CH3) , 1.44 (s， 6H, C3-CH3), 1.5-1.8 (bs,CH2 (lys α β γ)) , 2.68 (m， 2H， H-9)， 3.63 (bs, 1868H, PEG 主链），5.44(s，2H，H- 12)。 实施例 5: 体内药时曲线测定

样品： 青蒿琥酯 （Artesunate ) 、 化合物 1 - 4。

样品配制： 青蒿琥酯用含 5% NaHC0 ₃ 的生理盐水溶解， 配制成 10 mg/ral的无色澄清溶液； 化合物 1用注射用生理盐水溶解， 配制成相当 '于含 10 mg/ml青蒿琥酯的无色澄清溶液。

动物： SD大鼠购自军事医学科学院动物中心， 体重 200 ± 10 g， 雄 性， 常规饲养， 自由饮食。

实验方法： 青蒿琥酯与化合物 1样品溶液， 按每只大鼠 0. 2 ml静 脉注射给药 （剂量相当于 10 mg/kg 青蒿琥酯） 。 分别于（kin, lO min, 20 min, 30 min, 45 min, lhr, 1. 5hr , 2hr， 2. 5hr, 3hr , 4hr， 6hr, 8hr, lOhr采血， 采用液 联用法测定双氢青蒿素的血清浓度。

实验结果： 见 Fig. 1。

结杲表明， 与青蒿琥酯相比较， 化合物 1获得了延长的药时曲线， 半衰期延长 5倍左右。

化合物 2 - 4的半衰期也得到了显著延长。 实施例 6: 抗疟作用的评价

样品： 青蒿琥酯 （Artesunate ) 、 化合物 1、 化合物 ² 、 化合物 ³ 、 化合物 4。

样品配制： 青蒿琥酯用含 5% NaHC0 ₃ 的生理盐水溶解， 配制成 2. ⁵ mg/ml的无色澄清溶液； 化合物 1、化合物 2、 化合物 3用注射用生理盐 水溶解， 配制成相当于含 2. 5 mg/ml青蒿琥酯的无色澄清溶液（分别为 9. 3 mg/mK 19. 1 mg/mK 35. 2 mg/ml ) ； 化合物 4用注射用生理盐水 溶解，配制成相当于含 1 mg/ml青蒿琥酯的无色澄清溶液（ 27. 2 mg/ml )。

动物及病理模型制备： 昆明小鼠购自军事医学科学院动物中心， 体 重 20 ± 2 g, 雌性， 常规饲养， 自由饮食。 实验当天（DO ) 小鼠腹腔注 射接种 1 X 10 ⁷ 个疟原虫感染红细胞建立鼠疟感染模型。

给药方案： 青蒿琥酯与 PEG化衍生物样品溶液用注射用水稀释至相 当于 1 mg/ml青蒿琥酯的浓度， ^^只小鼠 0. 2 ml腹腔注射给药 （剂 量相当于 10 rag/kg 青蒿琥酯） 。 首次给药在小鼠感染后 3小时进行， 之后每 ²⁴ 小时给药一次， 直至感染后第 3天（D3) ， 共给药 4次。 安 慰剂对照组注射相同容积生理盐水。

实验结果：

a)青蒿琥酯及其 PEG化衍生物腹腔注射可显著抑制伯氏疟原虫感 染 小鼠原虫血症 (Parasitemia) 的发展。

给药 4天后 （D4) ， 安慰剂 （Placebo)对照组平均原虫寄生率达 13.7%, 而 10mg/kg体重青蒿琥酯及相当剂量各 PEG化衍生物腹腔注射 组的平均原虫寄生率相当， 仅在 0.4- 2.6%之间， 且与对照组有显著性 差异（ P<0.01 )， 表明各受试样品都具有显著的抗疟活性 (见 Fig.2 ) 。

b)青蒿琥酯及其 PEG化衍生物腹腔注射可显著抑制伯氏疟原虫感 染 小鼠原虫血症（Parasitemia) 的发展。

10mg/kg体重青蒿琥酯及其 PEG化衍生物腹腔注射 4天对伯氏疟原 虫抑制率都达到了 80%以上， 且衍生物与青蒿琥酯的抑制率无显著性差 别 （表 1) 。 由此可见， 在该剂量下， 不同程度的 PEG化修饰对青蒿琥 酯的抗疟活性无明显影响。

表 1: 青蒿琥酯及其 PEG化衍生物对伯氏疟原虫抑制率的比较

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描 述， 本领域技术人 员将会理解。 根据已经公开的所有教导， 可以对那些细节进行各种修 改和替换， 这些改变均在本发明的保护范围之内。 本发明的全部范围 由所附权利要求及其任何等同物给出。