ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ С ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫМ

ДЕЙСТВИЕМ

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Техническое решение относится к области медицины, а именно к средствам для лечения туберкулеза.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Туберкулез (или сокращенно ТБ) - опасное инфекционное заболевание, которое может привести к летальному исходу, и которое широко распространено в мире на сегодняшний день. Лечение туберкулеза осуществляется с использованием антибиотиков для борьбы с бактериями возбудителями туберкулеза, которыми являются микобактерии рода Mycobacterium (чаще всего Mycobacterium tuberculosis).

Туберкулезом заболевают миллионы людей каждый год, в частности, в 2015 году туберкулез был одним из десяти самых распространенных факторов, вызывающих смерть по всему миру, опередив ВИЧ/СПИД в качестве причины смерти от инфекционных заболеваний. Согласно информации, раскрытой в ежегодном отчете ВОЗ о туберкулезе от 2016 Году (Global Tuberculosis Report 2016), в 2015 году было зафиксировано 1 ,4 миллиона случаев смерти от туберкулеза и еще 0,4 миллиона случаев смерти от туберкулеза среди людей, живущих с ВИЧ. Также в 2015 году по всему миру было зарегистрировано 10,4 миллионов новых случаев заболевания туберкулезом.

Как известно, первые успешные разработки противотуберкулезных препаратов приходятся на 40-е годы XX столетия.

Согласно Сопроводительного пособия ВОЗ по лечению резистентного туберкулеза (Companion handbook to the WHO guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis. WHO 2014), выделяют следующие группы препаратов с противотуберкулезным действием:

I группа. Пероральные препараты первой линии с соединениями:

- Изониазид;

- Рифампицин;

- Этамбутол;

- Пиразинамид;

- Рифабутин;

- Рифапентин.

II группа. Инъекционные противотуберкулезные препараты (инъекционные агенты или парентеральные агенты) с соединениями:

- Стрептомицин;

- Канамицин;

- Амикацин;

- Капреомицин.

III группа. Препараты с соединениями из группы фторхинолонов:

- Левофлоксацин;

- Моксифлоксацин; - Гатифлоксацин.

IV группа. Пероральные бактериостатические противотуберкулезные препараты второй линии с соединениями:

- Этионамид;

- Протионамид;

- Циклосерин;

- Теризидон;

- Пара-аминосалициловая кислота;

- Натрий пара-аминосалицилат.

V группа. Противотуберкулезные препараты с ограниченными данными об эффективности и/или безопасности при лечении резистентного ТВ (в эту группу входят новые противотуберкулезные препараты) с соединениями:

- Бедаквилин;

- Деламанид;

- Линезолид;

- Клофазимин;

- Амоксициллин/клавуланат;

- Имипенем/циластатин;

- Меропенем;

- Изониазид в повышенных дозах

- Тиоацетазон;

- Кларитромицин;

Одним из наиболее эффективных противотуберкулезных препаратов, который на сегодняшний день широко используется в клинической практике, является такое химическое соединение как изониазид. Изониазид - это производное изоникотиновой кислоты, гидразид изоникотиновой кислоты (сокращенно ГИНК). ГИНК был впервые получен в начале XX века, а с 50-х годов XX века началось активное клиническое применение противотуберкулезных препаратов на основе ГИНК.

Фармацевтический препарат изониазид может иметь различные формы выпуска, в частности:

- Таблетки и порошки, содержащие ГИНК по 0,1 г (100 мг), по 0,2 г (200 мг), по 0,3 г (300 мг) соответственно, которые дополнительно содержат фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

- раствор для инъекций, содержащий 10% ГИНК соответственно, который дополнительно содержит фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.

- Дополнительно, из уровня техники является известным ингаляционный путь введения изониазида.

Преимущества изониазида состоят в том, что соединение:

- имеет очень мощный бактерицидный эффект, может использоваться для лечения всех форм и локализаций активного туберкулеза;

- имеет наибольший эффект в случаях впервые выявленного туберкулеза с острым течением; - в связи с высокой эффективностью терапевтическая доза изониазида небольшая;

- относительно редко вызывает побочные реакции, пригодно для лечения туберкулеза у взрослых и детей;

- является сравнительно дешевым.

Вместе с этим, в связи с длительной историей использования изониазида для лечения ТБ на протяжении нескольких десятилетий, в частности, в виде монотерапии, все чаще стали наблюдаться случаи развития устойчивости возбудителей туберкулеза к изониазиду. В частности, из открытых данных ВОЗ известно, что в 2015 году примерно 480 тысячам человек был поставлен диагноз мультирезистентный туберкулез.

Лечение мультирезистентного туберкулеза требует длительного применения токсичных и дорогостоящих препаратов, и имеет, как правило, плохие последствия для пациента. Случаи мультирезистентного ТБ характеризуются, в частности высокой смертностью (только в 60% случаев лечение мультирезистентного ТВ является эффективным и успешным) и последующим распространением резистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis в пределах человеческого сообщества. Кроме того, на сегодняшний день, оптимальный состав фармацевтических композиций для лечения мультирезистентного ТБ и продолжительность режима его лечения остаются неопределенными. В связи с увеличением частоты случаев мультирезистентного ТБ, очевидной необходимостью является направленность современных противотуберкулезных программ на борьбу именно с туберкулезом, который является резистентным к известным лекарственным средствам и способам лечения.

Таким образом, на сегодняшний день актуальной проблемой является разработка новых лекарственных средств для лечения ТБ и способов лечения ТБ (новые лекарственные препараты, новые режимы и подходы лечения и т.д.), которые будут более эффективными по отношению к возбудителям туберкулеза, в том числе по отношению к возбудителям туберкулеза, резистентных к известным противотуберкулезным препаратам, которые на данный момент используются в терапевтической практике.

В связи с этим возникает необходимость в поиске новых активных соединений, которые способны проявлять противотуберкулезную активность и являются безопасными для использования в лечении ТБ, в частности, в лечении резистентного ТБ, и создании новых фармацевтических композиций и фармацевтических препаратов для использования в лечении туберкулеза, в том числе, в лечении резистентного ТБ.

Одним из наиболее перспективных направлений является исследование противотуберкулезной активности производных известных соединений, которые имеют клинически подтвержденное противотуберкулезное действие. Известно, что противотуберкулезную активность способны проявлять соединения различных химических классов: производные ГИНК или изоникотиновой кислоты, производные тиосемикарбазона, соединения таких классов как аминогликозиды, фторхинолоны, тиоамиды и тому подобных. В частности, особый интерес вызывают соединения, являющиеся производными тиосемикарбазона.

з Задачей данного технического решения является создание фармацевтической композиции с противотуберкулезным действием на основе новых активных соединений, которые проявляют активность в отношении бактерий возбудителей туберкулеза, в частности, проявляют антимикобактериальную активность в отношении возбудителей туберкулеза, резистентных к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; расширение арсенала и ассортимента лекарственных средств для лечения туберкулеза, в частности, расширение арсенала и ассортимента лекарственных средств для лечения туберкулеза, который является резистентным к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; повышение эффективности лечения туберкулеза, в частности, туберкулеза, который является резистентным к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату; улучшение качества жизни больных туберкулезом, в частности, больных формой туберкулеза, резистентного к, по меньшей мере, одному известному противотуберкулезному препарату, за счет уменьшения срока лечения болезни, пониженной токсичности фармацевтической композиции, уменьшение возможности рецидива заболевания, улучшение показателей излечиваемости и выживаемости больных.

СУТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задача решается фармацевтической композицией для лечения туберкулеза, которая содержит активный ингредиент и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, причем как активный ингредиент содержит соединение формулы I

или соединение формулы II

или соединение формулы III

III

или соединение формулы IV

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для перорального введения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может быть изготовлена в лекарственной форме, пригодной для перорального введения, которая может быть выбрана из группы лекарственных форм, которая включает таблетку, капсулу, порошок, диск, каплету, гранулу, гранулу в капсуле, минитаблетку, минитаблетку в капсуле, пеллету, пеллету в капсуле, саше, таблетку для рассасывания, жевательную таблетку, шипучие таблетки, пленку для растворения во рту, жидкую форму в твердых желатиновых капсулах, жидкую форму в мягких желатиновых капсулах, жидкую форму в капсулах из гидроксипропилметилцеллюлозы, полутвердую форму в твердых желатиновых капсулах, полутвердую форму в мягких желатиновых капсулах, полутвердую форму в капсулах из гидроксипропилметилцеллюлозы.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы веществ, включающих наполнитель, связывающий агент, смазочный агент, дезинтегратор, глидант, антиоксидант, подсластитель, краситель, ароматизатор, консервант, хелатирующий агент, агент для маскировки вкуса.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для ингаляционного введения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать в качестве фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества фармацевтически приемлемый носитель, в котором суспендируют или растворяют активный ингредиент.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включая суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать как агент для регулирования значения уровня рН, по меньшей мере, одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемое основание.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 90% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 50% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 25% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 10% по массе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих суспендирующий агент, эмульгирующий агент, смачивающий агент, мукоадгезивний агент, изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН, в количестве от 0,001 % до 1 % по массе. Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть предназначена для инъекционного введения.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать как фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества воду для инъекций и, по меньшей мере, один сорастворитель или солюбилизатор.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих изотонирующий агент, консервант, агент для регулирования значения уровня рН.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать как агент для регулирования значения уровня рН, по меньшей мере, одно вещество, которое выбрано из группы таких веществ, включающих буферный агент, фармацевтически приемлемую кислоту, фармацевтически приемлемую основание.

Некоторые данные объекта изобретения показаны с помощью чертежей, которые предоставлены на Фигурах 1 -4.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения I.

Фиг. 2 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения II.

Фиг. 3 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения III.

Фиг.4 - изображение спектра 1 Н-ЯМР Соединения IV.

СВЕДЕНИЯ, ПОДТВЕРЖДАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Фармацевтическая композиция согласно техническому решению содержит как активный ингредиент соединение формулы I

или соединение формулы

нение формулы

или соединение формулы IV

В дальнейшем в тексте соединение формулы I

будем для сокращения называть Соединение I, соединение формулы будем для сокращения называть Соединение II, соединение формулы

будем для сокращения называть Соединение III, соединение формулы

будем для сокращения называть Соединение IV.

Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV принадлежат к классу таких соединений как производные тиосемикарбазонов, и могут быть получены следующими способами:

5 г (55 ммоль) тиосемикарбазида растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 100 мл изопропанола растворяют 12,4 г (55 ммоль) 4-(2-фенилетокси)бензальдегида при температуре 60 °С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры (3-12 часов), кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 61 %. Чистота продукта не ниже 92%.

Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения из 70%-го или чистого изопропанола.

Структуру синтезированного Соединения I устанавливали с помощью спектров 1 Н-ЯМР, записанных в ДМСО-йб на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом - ТМС, который представлен на ФИГ.1 . Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленному Соединению I. 5 г (55 ммоль) тиосемикарбазида растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 100 мл изопропанола растворяют 9,9 г (55 ммоль) 4-этокси-З-метоксибезальдегида при температуре 60 °С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры (3-12 часов), кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 69%. Чистота продукта не ниже 96%.

Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения с 70%-го или чистого изопропанола.

Структуру синтезированного Соединения II устанавливали с помощью спектров 1 Н-ЯМР, записанных в ДМСО-йб на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом - ТМС, который представлен на ФИГ. 2. Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленному Соединению II.

5 г (55 ммоль) тиосемикарбазида растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 100 мл изопропанола растворяют 6,6 г (55 ммоль) 4-метилбезальдегида при температуре 60 °С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры (3-12 часов), кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 65%. Чистота продукта не ниже 96%.

Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения с 70%-го или чистого изопропанола. Структуру синтезированного Соединения III устанавливали с помощью спектров 1 Н-ЯМР, записанных в ДМСО-йб на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом - ТМС, который представлен на ФИГ. 3. Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленному Соединению III.

5 г (55 ммоль) тиосемикарбазида растворяют в 100 мл дистиллированной воды, в результате получают первый раствор. Отдельно в 100 мл изопропанола растворяют 8,2 г (55 ммоль) 4-диметиламинобезальдегида при температуре 60 °С, в результате получают второй раствор. Первый и второй раствор смешивают, смесь этих растворов кипятят при перемешивании 1 час, в результате получают третий раствор. После охлаждения третьего раствора до комнатной температуры (3-12 часов), кристаллический осадок продукта отфильтровывают, промывают в 10 мл изопропанола и сушат. Конечный выход продукта - 73%. Чистота продукта не ниже 96%.

Для повышения чистоты продукта могут быть использованы приемлемые общеизвестные методы очистки химических соединений, например, метод перекристаллизации, в частности, перекристаллизация соединения с 70% -го или чистого изопропанола.

Структуру синтезированного Соединения IV устанавливали с помощью спектров 1 Н-ЯМР, записанных в ДМСО-йб на приборе "Varian MercuryVRX-400" с рабочей частотой 400 МГц и внутренним стандартом - ТМС, который представлен на ФИГ. 4. Полученные результаты свидетельствуют о соответствии синтезированного низкомолекулярного органического соединения заявленному Соединению IV.

Фармацевтическая композиция по техническому решению, содержащая Соединение I или Соединение II, или Соединение III, или Соединение IV и вспомогательное вещество, может быть воплощена в более чем одной лекарственной форме.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена перорально или приготовлена для перорального введения. Фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может быть изготовлена в форме таблеток, капсул, порошков, диска, каплет, гранул, пеллет, гранул в капсуле, минитаблеток, минитаблеток в капсуле, пеллет в капсуле, саше, таблеток для рассасывания, жевательных таблеток, шипучих таблеток, пленки для растворения во рту, жидкой или полужесткой формах в твердых желатиновых капсулах, мягких желатиновых капсул, капсулах ГПМЦ (гидроксипропилметилцеллюлоза) и других лекарственных формах, пригодных для перорального применения. Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, где одно или более вспомогательное вещество может быть выбрано из группы, которая включает связующие агенты, наполнители, смазочные агенты, дезинтеграторы, глиданты, солюбилизаторы и тому подобное.

Приемлемые связующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает повидон, крахмал, стеариновую кислоту, камеди, целлюлозу и тому подобное.

Приемлемые наполнители могут быть выбраны из группы, которая включает микрокристаллическую целлюлозу, фосфат кальция, сульфат кальция, каолин, сухой крахмал, сахарную пудру и тому подобное.

Приемлемые смазочные агенты могут быть выбраны из группы, которая включает стеарат магния, стеарат цинка, стеарат кальция, стеариновую кислоту, стеарилфумарат натрия и тому подобное.

Приемлемые дезинтеграторы могут быть выбраны из группы, которая включает крахмал, кроскармеллозу натрия, кросповидон, крахмалгликолят натрия и тому подобное.

Приемлемые глиданты могут быть выбраны из группы, которая включает коллоидный диоксид кремния, тальк, кукурузный крахмал и тому подобное.

Приемлемые солюбилизаторы могут быть выбраны из группы полимеров, включая гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), гидроксиэтилцеллюлозу (ГЭЦ), метилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу (ГПЦ), эудрагит, поливинилпирролидон (ПВП) и др.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать один или несколько других вспомогательных агентов, известных в данной области, таких как антиоксиданты, подсластители, красители, ароматизаторы, консерванты, хелатирующие агенты, маскирующие вкус агенты и др.

Приемлемые подсластители могут быть выбраны из группы, которая включает моносахариды, дисахариды и полисахариды, такие как, например, ксилоза, рибоза, глюкоза, манноза, галактоза, фруктоза, сахароза, мальтоза, инвертный сахар, частично гидролизованный крахмал, концентрированный кукурузный сироп, маннитол, ксилит, D-сорбит, эритрит, пентитол, гекситол, мальтитол, дигидрохальконы, монелин, стевиозиды или глицирризин; сахарин в форме свободной кислоты, растворимые соли сахарина, например соли натрия или кальция, цикламатные или соли ацесульфама К; подсластители на основе дипептида, такие как подсластители, полученные из L-аспарагиновой кислоты, например аспартам; водорастворимые подсластители, полученные из природных водорастворимых подсластителей, например сукралоза; и белковые подсластители, например Thaumatococcus danielli (Тауматин I и II) и др.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать приемлемые ароматизаторы, которые известны для специалиста в данной области, такие как натуральные, "идентичные натуральным" и искусственные ароматизаторы. Эти ароматизаторы могут быть выбраны, например, из синтетических ароматических масел, усилителей вкуса и аромата, экстракционных эфирных масел, полученных, например, из растений, листьев, фруктов и тому подобное.

Типичные ароматы могут быть выбраны из группы, которая включает масла мяты курчавой, корицы, мяты перечной, гвоздики, лавра, чабреца, кедровых листьев, мускатного ореха, шалфея, горького миндаля, ванили, масла бобов кофейного дерева, какао-бобов и цитрусовых, лимона, апельсина, вишни, винограда, лайма, грейпфрута; фруктовые эссенции, например яблоки, груши, персика, клубники, малины, вишни, сливы, ананаса или абрикоса; мяты, такие как перечная мята (включая ментол, в частности L-ментол) альдегиды и эфиры, например циннамилацетат, циннамальдегид, цитраль, диэтилацеталь, дигидрокарвилацетат, п-метиланизол; альфа-цитраль и бета-цитраль деканаль; этилванилин; пиперональ (гелиотропин); ванилин; альфа-амилциннамальдегид; бутиральдегид; валеральдегид; цитронеллаль; деканаль; альдегиды С-8; альдегиды С-9; альдегиды С-12; 2-этилбутирадегид; гексенали, например, транс- 2-гексеналь; толилальдегид; вератральдегид; 2,6-диметил-5-гептеналь (мелональ) 2-6-диметилоктаналь; 2-додеканаль и тому подобное.

Приемлемые хелатирующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает лимонную кислоту, малеиновую кислоту, янтарную кислоту, винную кислоту, ЕГТА (этиленгликоль-бис ((3-аминоэтиловий эфир) тетрауксусной кислоты) и ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота). Такие хелатирующие агенты являются коммерчески доступными в различных формах, например, в формах солей натрия или калия, или свободных кислот и тому подобное.

Приемлемые антиоксиданты могут быть выбраны из группы, которая включает токоферол, токоферолацетат, витамина Е полиэтиленгликоль сукцинат, пропилгалат, бутилгидрокситолуол и бутилгидроксианизол и тому подобное.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для перорального введения согласно техническому решению может содержать один или несколько других вспомогательных агентов, известных в данной области, таких как антиоксиданты, подсластители, красители, ароматизаторы, консерванты, хелатирующие агенты, маскирующие вкус агенты и тому подобное.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена ингаляционно или приготовлена для ингаляционного введения. Фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению содержит активный ингредиент, суспендированный в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе.

Преимущественно, фармацевтически приемлемым носителем может быть вода, в частности, вода для инъекций. Вода для инъекций является коммерчески доступной, и, как известно специалисту в данной области, может быть получена, например, методом дистилляции или обратного осмоса.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать другие ингредиенты, такие как суспендирующие агенты, смазочные агенты, мукоадгезивние агенты, изотонирующие агенты, консерванты, буферные агенты и/или фармацевтически приемлемые кислоты или основания для регулирования значения уровня рН растворов.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть изотоничной по отношению к жидкостям легких. Уровень тоничности фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулирован путем добавления приемлемого для этих целей соединения, например, хлорида натрия, глюкозы или хлорида кальция.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может иметь значение уровня рН от 6 до 8, в частности от 6,5 до 7,5, более точно от 6,7 до 7,3.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать буферную систему или буфер для установления значения уровня рН композиции в необходимом интервале. Для этого может быть использована любая фармацевтически приемлемая буферная система, которая способна установить значение уровня рН композиции в необходимом интервале. Например, буферы, которые могут быть использованы, включают фосфатный, ацетатный, цитратный буфер или их смеси.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать фосфатный буфер. Этот буфер может быть приготовлен, например, путем растворения монокалий фосфата и гидроксида натрия в воде.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать от примерно 0,001 % до 90%, от примерно 0,001 % до 50%, от примерно 0,001 % до 25%, от примерно 0,001 % до 10%, от примерно 0,001 % до 1 % одного или более вспомогательных веществ, выбранных из группы эмульгирующих агентов, увлажняющих агентов или суспендирующих веществ.

Приемлемые вспомогательные вещества могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: полисорбаты, включая, но не ограничиваясь веществами полиэтиленсорбитан моноолеат (полисорбат 80), полисорбат 20, полисорбат 65, полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат, полиоксиэтилен (20) сорбитан монопальмитат, полиоксиэтилен (20) сорбитан моностеарат; лецитины; альгиновая кислота; натрий альгинат; калий альгинат; аммоний альгинат; кальций альгинат; пропан-1 ,2-диол альгинат; агар-агар; каррагинан; камедь рожкового дерева; гуаровая камедь; трагакант; камедь акации; ксантановая камедь; камедь карайи; пектин; амидированный пектин; фосфатиды аммония; микрокристаллическая целлюлоза; метилцеллюлоза; гидроксипропилцеллюлоза; гидроксипропилметилцеллюлоза; этил метил целлюлоза; карбоксиметил целлюлоза; соли жирных кислот натрия, калия и кальция; моно- и диглицериды жирных кислот; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и уксусной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и молочной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и лимонной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и винной кислоты; сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и диацетилвинной кислоты; смешанные сложные эфиры моно- и диглицеридов жирных кислот и уксусной и винной кислот; сложные эфиры сахарозы и жирных кислот; сахароглицериды; сложные эфиры полиглицерина и жирных кислот; сложные эфиры полиглицерина и поликонденсированных жирных кислот рицинового масла; сложные эфиры пропан-1 ,2-диола и жирных кислот; стеароил-2-лактилат натрия; стеароил-2- лактилат кальция; стеарилтартрат; сорбитан моностеарат; сорбитан тристеарат; сорбитан монолаурат; сорбитан моноолеат; сорбитан монопальмитат; экстракт квиллайи; сложные эфиры полиглицерина и димерных жирных кислот соевого масла; оксидативно полимеризованное соевое масло; и экстракт пектина. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению содержит полисорбат 80, микрокристаллическую целлюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу и/или декстрозу.

Преимущественно, значение уровня рН фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулировано путем добавления приемлемой кислоты или основания, обычно для таких целей используют разбавленный водный раствор соляной кислоты, где содержание соляной кислоты составляет, например, 10% масс, или разбавленный водный раствор гидроксида натрия, где содержание гидроксида натрия составляет, например, 4% масс.

Приемлемые мукоадгезивные агенты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: метил-, гидроксипропил- и натрий карбоксиметилцеллюлоза, хитозан, поливинилпирролидон и гидрогели.

В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать консервант. Приемлемые консерванты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: бензалкония хлорид, бензиловый спирт, хлорбутанол, хлорокрезол, крезол, этанол, фенол, фенилэтанол, сульфиты, тиомерсал, парабены, пропиленгликоль, бензоат натрия, фенил меркурий борат или фенил меркурий нитрат.

Преимущественно, фармацевтическая композиция согласно техническому решению может быть введена путем инъекции или приготовлена для инъекционного введения. Фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению содержит активный ингредиент, суспендированный в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать воду для инъекций и, по меньшей мере, один сорастворитель или солюбилизатор. Вода для инъекций является коммерчески доступной, и, как известно специалисту в данной области, может быть получена, например, методом дистилляции или обратного осмоса.

Приемлемые сорастворители могут быть выбраны из группы, которая включает, в общем, неводные агенты, смешанные с водой, которые являются пригодными для парентерального введения. Преимущественно, сорастворитель представляет собой спирт, многоатомный спирт или сложный эфир. Например, сорастворитель может быть выбран из группы, которая включает этанол, 1 ,3- бутандиол (бутиленгликоль), глицерин, пропиленгликоль, 2-этоксиэтанол, глицеринформаль и их смеси.

В предпочтительном варианте осуществления сорастворителем является этанол.

Приемлемым солюбилизатором фармацевтической композиции для инъекционного введения согласно техническому решению может быть циклодекстрин. Циклодекстрины являются циклическими олигосахаридами с гидроксильными группами на внешней поверхности молекулы и пустой полостью в центре. Внешняя поверхность, как правило, является гидрофильной, поэтому циклодекстрины растворимы в воде. С другой стороны, полость, как правило, является гидрофобной. Циклодекстрины обладают способностью образовывать комплексы с посторонними молекулами, такими как зипразидон.

Приемлемые циклодекстрины могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: α-, β-, γ-циклодекстрины, метилированные циклодекстрины, гидроксипропил- β-циклодекстрин, гидроксиэтил-р-циклодекстрин, разветвленные циклодекстрины, в которых одна или две глюкозы или мальтозы присоединены к циклодекстриновому кольцу, этил- или этилкарбоксиметилциклодекстрин ы, дигидропропилциклодекстрины и сульфоалкил-циклодекстриновые эфиры, такие как сульфобутиловый эфир-β- циклодекстрин. Циклодекстрины могут быть незамещенными или полностью, или частично замещенными, как известно в данной области техники, смеси циклодекстринов также являются полезными. Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать γ-циклодекстрин, гидроксипропил-β- циклодекстрин, сульфобутиловый эфир-р-циклодекстрин или их смеси, в наиболее предпочтительных вариантах реализации - сульфобутиловый эфир-β- циклодекстрин.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать другие вспомогательные вещества, например, изотонирующие агенты, консерванты, буферы и/или фармацевтически приемлемые кислоты или основания для регулирования значения уровня рН растворов. Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может иметь осмолярность от 200 до 380 мОсм/кг. В случае необходимости, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может дополнительно содержать изотонирующий агент для регулировки осмолярности раствора до значения в этом интервале.

Приемлемые изотонирующие агенты могут быть выбраны из группы, которая включает хлорид натрия, хлорид калия, глюкозу, декстрозу и их смеси.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать буферную систему или буфер для установления значения уровня рН композиции в необходимом интервале. Для этого может быть использована любая фармацевтически приемлемая буферная система, которая способна установить значение уровня рН композиции в необходимом интервале. Например, буферы, которые могут быть использованы, включают фосфатный, ацетатный, цитратный буфер или их смеси.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения согласно техническому решению может содержать фосфатный буфер. Этот буфер может быть приготовлен, например, путем растворения монокалий фосфата и гидроксида натрия в воде.

Преимущественно, значение уровня рН фармацевтической композиции для ингаляционного введения согласно техническому решению может быть отрегулировано путем добавления приемлемой кислоты или основания, обычно для таких целей используют разбавленный водный раствор соляной кислоты, где содержание соляной кислоты составляет, например, 10% масс, или разбавленный водный раствор гидроксида натрия, где содержание гидроксида натрия составляет, например, 4% масс.

В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция для ингаляционного введения согласно техническому решению может содержать консервант. Приемлемые консерванты могут быть выбраны из группы, которая включает, но не ограничивается веществами: бензалкония хлорид, бензиловый спирт, хлорбутанол, хлорокрезол, крезол, этанол, фенол, фенилэтанол, сульфиты, тиомерсал, парабены, пропиленгликоль, бензоат натрия, фенил меркурий борат или фенил меркурий нитрат.

Способ изготовления фармацевтической композиции согласно техническому решению в заявленных лекарственных формах показано далее в примерах 1 -27.

Получение композиций для перорального введения

Пример 1

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I и 25 г повидона добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 2 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 2

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I, 20 г повидона и 5 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 5 г кроскармеллозы натрия, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера. Пример 3

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 70 г Соединения I, 10 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 8 г кроскармеллозы натрия и 2 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 4

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 2 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 5

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 4 г кроскармеллозы натрия и 1 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 6

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 60 г Соединения I, 20 г повидона и 10 г меглюмина добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 7 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 7

Получение капсулы

Смесь изопропилового спирта и воды (в соотношении 60:40), помещают в реактор. После этого 54 г Соединения I, 25 г повидона и 10 г добавляют в реактор к указанной смеси и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. После этого из полученного раствора получают распыленный сухой порошок методом распылительной сушки. Полученный распыленный сухой порошок смешивают с 8 г кроскармеллозы натрия и 3 г стеарата магния, полученную смесь помещают в подходящие капсулы соответствующего размера.

Пример 8

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 10 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 5 г кроскармеллозы натрия, 2 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ.

Формование полученного порошка осуществляется следующим способом: Полученный порошок формуют в таблетки с помощью пресса. Получают таблетки овальной формы, массы (в среднем) 349 мг с хорошим показателем истираемости. Готовые таблетки в дальнейшем обрабатывают с использованием стандартных процедур и известных специалисту в данной области ингредиентов: ставят печать, покрывают таблетки пленкой и полируют.

Пример 9

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 18 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 3 г кроскармеллозы натрия, 6 г пептизированного крахмала, 2 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 1 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8. Пример 10

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (65 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 2 г кроскармеллозы натрия, 8,5 г пептизированного крахмала, 1 ,5 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 2 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Пример 1 1

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (50 г Соединения I, 20 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 4 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Пример 12

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (50 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 1 ,5 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 0,5 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Пример 13

Получение таблетки, покрытой оболочкой

Сухие ингредиенты (44 г Соединения I, 25 г микрокристаллической целлюлозы, 10 г гидроксипропилметилцеллюлозы, 5 г кроскармеллозы натрия, 10 г пептизированного крахмала, 3 г коллоидного диоксида кремния) взвешивают и помещают в гранулятор. Полученную смесь сухих ингредиентов предварительно перемешивают в грануляторе в течение 2-х минут. После этого в гранулятор медленно добавляют необходимое количество воды в течение 2-х минут, и включают гранулятор дополнительно на 4 минуты. Влажный гранулят помещают в сушилку кипящего слоя и сушат примерно 30 минут при температуре входящего воздуха 60 ° С, до конечной влажности гранулята 2,4%. Полученный сухой гранулят пропускают через сито 30 меш и получают мелкий порошок. После этого полученный порошок смешивают с 3 г стеарата магния и пропускают полученную смесь через сито 30 меш. Параметры полученного порошка для формирования таблеток характеризуются следующим образом: влажность 2%, угол естественного откоса 26 °, насыпная плотность 0,48 г/смЗ. Формование полученного порошка осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 8.

Композиции для ингаляционного введения могут быть получены с помощью способов получения композиций для небулайзеров, которые известны для специалиста в данной области:

Пример 14

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 10 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I).

Упаковка полученной суспензии осуществляется следующим способом: Конечную суспензию стерилизуют, в частности, подходящим является метод термической стерилизации с использованием пара. Аликвоты суспензии после стерилизации помещают в пригодные стерильные контейнеры, например, одноразовые контейнеры, такие как флаконы или ампулы, которые соответствующим образом формируют из термопластичных материалов.

Пример 15

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 20 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.

Пример 16

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 30 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.

Пример 17

Получение композиции для ингаляционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор. После этого 20 г микрокристаллической целлюлозы, 5 г натрий карбоксиметилцеллюлозы, 1 ,7 г монокалий фосфата добавляют в реактор и перемешивают до получения гомогенного прозрачного раствора. Отдельно, 40 г Соединения I смешивают с 2 г полисорбата 80, после чего смесь добавляют в реактор до гомогенного раствора. После этого полученную смесь непрерывно перемешивают до получения гомогенной суспензии. Значение уровня рН полученной гомогенной суспензии, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Упаковка полученной суспензии осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 14.

Пример 18

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 5 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I).

Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется следующим способом:

Конечный раствор может быть стерилизован, например, путем фильтрации. После этого, полученный раствор может быть распределен в приемлемые контейнеры для применения в единичной дозе стандартной лекарственной формы, например, в стерильных флаконах или шприцах.

Преимущественно, фармацевтическая композиция для инъекционного введения по техническому решению может иметь дозировку в количестве 5 мл раствора в каждой дозе, хотя можно использовать единичную дозу с большим объемом, например, до 30 мл.

В определенных вариантах осуществления, флаконы или шприцы, содержащие фармацевтическую композицию для инъекционного введения по техническому решению, стерилизуются в автоклаве, например, путем обработки при температуре примерно 121 ° С в течение примерно 15 минут.

Пример 19

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 25 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 20

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 35 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 21

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 55 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 22

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 100 г этанола, полученный раствор перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 70 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 23

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 5 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 24

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 25 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 25

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 35 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 26

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 55 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Пример 27

Получение композиции для инъекционного введения

Необходимое количество воды помещают в реактор с мешалкой, после чего в реактор добавляют 140 г сульфобутилового эфира-р-циклодекстрина, полученную смесь перемешивают. После этого 1 ,7 г монокалий фосфата и 0,3 г гидроксида натрия добавляют в реактор, полученную смесь перемешивают до образования гомогенного раствора. Значение уровня рН полученного гомогенного раствора, при необходимости, может быть отрегулировано путем добавления разбавленных растворов соляной кислоты или гидроксида натрия. После установки необходимого значения уровня рН раствора в интервале от 6 до 8, в реактор добавляют 70 г Соединения I, полученную смесь перемешивают до полного растворения Соединения I. При необходимости, к полученному конечного раствора дополнительно добавляют воду для инъекций, чтобы получить желаемую концентрацию активного ингредиента (Соединения I). Стерилизация и упаковка полученного раствора осуществляется способом, аналогичным способу, раскрытом в Примере 18.

Способ изготовления фармацевтической композиции согласно техническому решению в заявленных лекарственных формах, содержащий Соединение II или Соединение III, или Соединение IV, осуществляется аналогично способам, показанным выше в примерах 1 -27.

Объем данного технического решения не должен ограничиваться конкретными вариантами реализации, описанными в примерах, которые предназначены только для иллюстрации нескольких вариантов реализации заявленного технического решения. Различные модификации данного технического решения дополнительно к представленным и описанных в данной заявке очевидны для специалиста в данной области, и, предполагается, что они подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.

Для изучения фармацевтической эффекта от применения предложенной фармацевтической композиции по техническому решению, был проведен ряд исследований.

1 . Исследование антимикобактериальной активности соединений при аэробных условиях.

Антимикробную активность соединений в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv, который культивировали при аэробных условиях, оценивали путем определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) соединения, то есть концентрации, которая полностью прекращала рост бактерий. Метод основан на измерении роста бактерий в жидкой среде флуоресцентного репортерного штамма H37Rv, где показателями были или оптическая плотность, или флуоресценция. Использование двух параметров оценки минимизирует проблемы, вызванные преципитацией соединения или автофлуоресценцией. Рассчитывали значение ICso - концентрацию соединения, при которой рост микроорганизмов ингибируется на 50% и Юэо - концентрацию соединения, при которой рост микроорганизмов ингибируется на 90%.

МИК определяли путем измерения бактериального роста через 5 дней в присутствии исследуемых соединений. Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем двукратного уменьшения концентрации. Вещество разводили в среде 7H9-Tw-OADC (4,7 г/л питательной среды Middlcbrook 7Н9 Base (VWR), Tween 80 (Fisher) (0,05%), Middlebrook OADC Supplement (VWR) (10%)) в 96-луночных планшетах (финальная концентрация ДМСО составляла 2%). Каждый планшет содержал несколько контролей (только среда/ДМСО, без бактериальных клеток), отсутствие роста (100 мкМ рифампицина (Sigma-Aldrich)) и максимальный рост (только ДМСО). Планшеты инокулировали клетками М. tuberculosis и инкубировали в течение 5 дней: рост измеряли по оптической плотности (OD590) и флуоресценции (Ex 560/Ет 590), используя планшетный ридер BioTek ™ Synergy 4. Для измерения численного значения МИК строили 10-точечную дозозависимую кривую как % роста и подгоняли к модели Гомпертца с использованием GraphPad Prism 5. МИК рассчитывали с точки перегиба кривой, подогнанной к нижней асимптоте (отсутствующий рост бактерий). Кроме того, дозозависимые кривые генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрации, при которых наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% и на 90% (значение ICso и Юэо, соответственно).

Данные по антимикобактериальной активности соединений при аэробных условиях приведены в таблице 1 . Таблица 1

Антимикобактериальная активность (МИК (мкМ), ICso (мкМ) и эо (мкМ)) Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения I/IV при аэробных условиях

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV проявляют достоверную антимикобактериальная активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv при аэробных условиях.

2. Исследование антимикобактериальной активности соединений в условиях низкого содержания кислорода.

Антимикробную активность соединений в отношении штамма Mycobacterium tuberculosis H37Rv в условиях гипоксии определяли методом LORA (low oxygen recovery assay). Бактерии сначала адаптировали к условиям низкого содержания кислорода и затем экспонировали к соединениям при гипоксии. Это сопровождалось определенным периодом роста при аэробных условиях, а рост измеряли, используя люминесценцию.

Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем двукратного уменьшения концентрации. Вещества разводили в среде Dubos-Tw- Albumin (DTA) (6,5 г/л питательной среды Dubos Broth Base (Fisher), Dubos medium albumin (Fisher) (10%), Tween 80 (Fisher) (0,05%)) в 96-луночных планшетах (финальная концентрация ДМСО составляла 2%).

Клетки М. tuberculosis, которые конститутивно экспрессируют оперон luxABCDE инокулировали в среду DTA в газонепроницаемых стеклянных пробирках и инкубировали 18 дней для достижения условиях гипоксии (модель гипоксии Вейна). При отсутствии кислорода бактерии находятся в нереплицирующем состоянии. Их инокулировали в планшеты со средой, содержащей соединения и инкубировали в анаэробных условиях в течение 10 дней, а затем инкубировали в течение 28 часов в аэробных условиях. Кроме того, нереплицирующие бактерии инокулировали в планшеты со средой, содержащей соединения и инкубировали при аэробных условиях в течение 5 дней. Рост в обоих случаях измеряли по показателям люминесценции. Рифампицин (SigmaAldrich) и метронидазол (SigmaAldrich) использовали как положительные контроли гибели М. tuberculosis при аэробных и анаэробных условиях, соответственно.

Антимикобактериальная активность исследуемых соединений в условиях гипоксии приведена в таблице 2.

3. Исследование минимальной бактерицидной концентрации соединений. Бактерицидную активность соединений исследовали в отношении штамма

М. tuberculosis H37Rv, который выращивали в аэробных условиях в среде 7H9-Tw- OADC. Расчет живых клеток проводили через 3 недели экспозиции к соединениям для определения уровня гибели.

Клетки М. tuberculosis выращивали в аэробных условиях до логарифмической фазы и инокулировали в жидкую среду, содержащую четыре различные концентрации соединений с максимальной концентрацией ДМСО 2%. Для соединений со значением МИК> 20 μΜ, отобранные концентрации были 10Х МИК, 5Х МИК, 1Х МИК и 0.25Х МИК (200, 100, 20 и 5 μΜ). Культуры инкубировали с соединениями в течение 21 дня, а выживаемость клеток определяли путем подсчета колоний-образующих единиц на агаровых планшетах в 0-й, 7-й, 14-й и 21 -й день. Минимальную бактерицидную концентрацию определяли как минимальную концентрацию, необходимую для достижения 2-log гибели на 21 -й день.

ДМСО был использован в качестве положительного контроля роста.

Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) соединений приведена в таблице 2.

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV проявляют достоверную антимикобактериальная активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv в условиях низкого содержания кислорода.

Таблица 2

Активность соединений МИК (мкМ), ICso (мкМ), эо (мкМ) в анаэробных условиях и минимальная бактерицидная концентрация МБК (мкМ)

4. Исследование цитотоксичности и внутриклеточной активности.

а. Цитотоксичность.

Цитотоксичность соединений в отношении эукариотических клеток определяли на клеточной линии моноцитов человека ТНР-1 . Клетки дифференцировали в макрофагоподобные клетки с использованием 4-форбол-12 миристат-13-ацетата (ФМА) (Sigma-Aldrich) и инкубировали с соединениями в течение трех дней и определяли выживаемость клеток. Значение ICso определяли как концентрацию, которая приводит к снижению уровня выживания клеток на 50%.

Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем трехкратного уменьшения концентрации. Самая высокая концентрация тестируемого соединения составляла 50 мкМ, где соединения были растворимы в ДМСО в 10 мМ концентрации. Клетки ТНР-1 культивировали в среде RPMI (RPMI- 1640 (Fisher), эмбриональная бычья сыворотка, рН 7,2 (10%) (Fisher)), 2 мМ GlutaMAX (Fisher), 1 мМ пирувата натрия) и дифференцировали в макрофагоподобные, используя 80 нМ РМА в течение ночи при 37 °С, 5% СОг. Клетки культивировали в плашках в течение 24 часов перед добавлением растворов соединений (финальная концентрация ДМСО составляла 0,5%). В качестве контроля использовали стауроспорин. Затем клетки инкубировали в течение 3 дней при 37 °С, 5% СОг; рост измеряли с помощью CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega), использующий АТФ как индикатор роста клеток. Относительные единицы люминесценции измеряли, используя планшетный ридер Biotek Synergy 4. Дозозависимую кривую генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрацию, при которой наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% (значение ICso) (таблица 3).

Таблица 3

Цитотоксичность соединений (ICso, мкМ)

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV имеют низкий показатель цитотоксичности, поэтому являются безопасными в использовании для лечения ТБ.

Ь. Измерение внутриклеточной активности.

Внутриклеточную активность соединений определяли при использовании клеток ТНР-1 , инфицированных М. tuberculosis. Клетки дифференцировали в макрофагоподобные клетки при использовании ФМА и инфицировали бактериями. Инфицированные клетки инкубировали с соединениями в течение 72 часов.

Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем трехкратного уменьшения концентрации. Самая высокая концентрация тестируемого соединения составляла 50 мкМ, где соединения были растворимы в ДМСО в 10 мМ концентрации. Клетки ТНР-1 культивировали в среде RPMI (RPMI- 1640 (Fisher), эмбриональная бычья сыворотка, рН 7,2 (10%) (Fisher)), 2 мМ GlutaMAX (Fisher), 1 мМ пирувата натрия) и дифференцировали в макрофагоподобные, используя 80 нМ РМА в течение ночи при 37 °С, 5% СО2.

Клетки ТНР-1 инфицировали люминесцентным штаммом H37R.V (который конститутивно экспрессирует luxABCDE) и инкубировали в течение ночи при 37 °С, 5% СО2. Инфицированные клетки восстанавливали с помощью раствора Accutase/EDTA (Fisher), дважды отмывали фосфатным буфером для удаления внеклеточных бактерий и высевали в планшеты. К клеткам добавляли растворы соединений (конечная концентрация ДМСО составляла 0,5%). Планшеты инкубировали в течение 72 ч. при 37 °С, 5% СО2. В качестве контроля использовали изониазид. Количество живых бактериальных клеток определяли по уровню люминесценции. Относительные единицы люминесценции определяли при использовании смесевого ридера Biotek Synergy 2. Дозозависимую кривую генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрации, при которых наблюдалось ингибирование роста бактерий на 50% и на 90% (значение ICso и 1Сэо, соответственно) (таблица 4).

Таблица 4

Внутриклеточная активность (ICso, 1Сэо (мкМ)) соединений

По результатам проведенных исследований видно, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV проявляют достоверные бактерицидные свойства в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv, где микобактерии локализуются внутриклеточно. Таким образом, использование Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV для лечения ТБ способствует более эффективному лечению и уменьшению рецидивов заболевания.

5. Исследование активности соединений по отношению к резистентным штаммам М. tuberculosis.

Активность соединений в отношении пяти резистентных штаммов М. tuberculosis определяли при аэробных условиях. Использовали два изониазидрезистентных штамма (INH-R1 и INH-R2), два рифампицинрезистентных штамма (RIF-R1 и RIF-R2) и фторхинолонрезистентный штамм (FQ-R1 ). Метод основан на измерении роста бактерий в жидкой среде по показателю оптической плотности. INH-R1 был получен из H37Rv (мутация гена katG (Y155 ^* )), INH-R2 - штамм АТСС35822. RIF-R1 был получен из H37Rv (мутация гена rpoB (S522L)), RIF-R2 - штамм АТСС35828. FQ-R1 был получен из H37Rv (мутация гена gyrB (D94N)).

МИК соединения определяли путем измерения бактериального роста через пять дней в присутствии исследуемого соединения. Соединения растворяли в ДМСО (Fisher) и делали серию разведений путем двукратного уменьшения концентрации. Вещества разводили в среде 7H9-Tw-OADC в 96-луночных планшетах (финальная концентрация ДМСО составляла 2%). Каждый планшет содержал несколько контролей (только среда/ДМСО, без бактериальных клеток), отсутствие роста - (100 мкМ рифампицина (Sigma-Aldrich)) и максимальный рост (только ДМСО). Планшеты инокулировали клетками М. tuberculosis и инкубировали в течение 5 дней: рост измеряли по оптической плотности (OD590). Для измерения численного значения МИК строили 10-точечную дозозависимую кривую как % роста и подгоняли к модели Гомпертца с использованием GraphPad Prism 5. МИК рассчитывали с точки перегиба кривой, подогнанной к нижней асимптоте (отсутствующий рост бактерий).

Кроме того, дозозависимые кривые генерировали, используя алгоритм Левенберга-Марквардта и определяли концентрации, при которых наблюдали ингибирование роста бактерий на 50% и на 90% (значение ICso и Юэо, соответственно).

МИК производных бензальдегида тиосемикарбазона (МИК, мкМ) в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis приведена в таблице 5, ICso (мкМ) - в таблице 6, Юэо (мкМ) - в таблице 7.

Таблица 5

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК, мкМ) соединений в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis

Таблица 6

ICso соединений в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis (мкМ)

Таблица 7

Юэо соединений в отношении резистентных штаммов М. tuberculosis (мкМ)

Соединение INH-R1 INH-R2 RIF-R1 RIF-R2 FQ-R1

Соединение I 0,77 0,20 0,30 0,84 0,74

Соединение II 0,53 0,20 0,72 0,51 0,57

Соединение III 0,96 0,39 0,68 2,6 1 ,0

Соединение IV 0,25 0,22 0,28 0,32 0,37 рифампицин 0,022 0,0071 4,3 >50 0,025 рифампицин 0,024 0,012 3,4 >50 0,024 изониазид >200 >200 0,31 0,97 0,63 изониазид >200 >200 0,36 1 ,0 0,86 левофлокса ин 1 ,5 2,3 1 ,5 1 ,5 23 левофлокса ин 1 ,5 2,3 1 ,3 1 ,9 24

По результатам проведенных исследований видно, что Соединения I-IV проявляют антимикобактериальную активность в отношении пяти резистентных штаммов М. tuberculosis: (INH-R1 , INH-R2, RIF-R1 , RIF-R2, FQ-R1 ). Согласно результатам исследований, Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV в относительно небольших концентрациях могут быть использованы для лечения ТБ, который является резистентным по отношению к другим известным противотуберкулезным препаратам. Таким образом, использование Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV для лечения резистентного ТВ является целесообразным и более эффективным.

6. Фармакология безопасности.

Было проведено исследование фармакологии безопасности, по оценке воздействия Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV и их метаболитов на центральную нервную, сердечно-сосудистую, дыхательную и почечную системы. Никаких связанных с лечением эффектов на центральную нервную систему не было отмечено на уровнях концентрации вещества в плазме крови ~ в 10 раз выше, чем предложенные в клинике. Кроме того, не наблюдалось ни одного, связанного с лечением, эффекта, влияющего на частоту дыхания, при экспозициях, которые в 2,8 раза превышали максимальную предложенную в клинике дозу. При проведении ряда фармакологических исследований безопасности, проводимых для исследования влияния на сердечно-сосудистую систему, негативного фармакологического эффекта не наблюдалось. Также не было зафиксировано влияния на потенциал действия папиллярной мышцы при исследовании влияния Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV (> 13 мг/кг/сут) на мышечную сократительную активность морских свинок. Также было показано влияние на интервал QT in vivo после однократного введения внутрь кроликам, где уровень Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в плазме был в <3,2, <2,2, <3,4 и <2, 1 раза выше соответственно, чем у человека.

7. Фармакокинетика

Было проведено исследование абсорбции, распределения, метаболизма, экскреции и фармакокинетических исследований взаимодействия лекарственных средств для исследуемых Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV. У исследуемых животных биодоступность при пероральном введении ультрадисперсного порошка исследуемых соединений крысам и собакам составила соответственно 34,9% и 61 ,3% (Соединение I), 37% и 64% (Соединение II), 39% и 61 % (Соединение III) и 38% и 58% (Соединение IV).

Для исследуемых четырех соединений Стах и AUC увеличиваются в меньшей степени пропорционально дозе. У собаки, потребление пищи привело к заметному увеличению системной экспозиции после перорального введения исследуемых соединений.

зз Связывания Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV in vitro с белками и метаболитами сыворотки крови крыс, кроликов и человека было выше > 93,4%, > 84,4%, > 79,3% и > 94, 8% соответственно. Распределение исследуемых соединений и/или их метаболитов в легких наблюдалось как у крыс, так и у кроликов. Радиоактивно меченые исследуемые соединения, после перорального ввода, характеризировались широким распределением. Наиболее высокое соотношение соединений по отношению к плазме/сыворотке наблюдалось в надпочечниках и печени, что кореллирует с путем вывода и исследуемыми мишенями токсического действия данных соединений.

После повторного введения исследуемых соединений в течение 21 дня наибольшее накопление меченого материала наблюдалось в тестикулах. Соотношение распределения исследуемых соединений в различных группах было < 1 через 48 и 72 часа. В целом, метаболизм исследуемых соединений, опосредуется прежде всего, плазматическим альбумином и в меньшей степени ферментами CYP3A4, CYP1A1 , CYP2D6 и CYP2E1 . После разового и повторного приема внутрь крысам и кроликам, уровень метаболитов в плазме был значительно ниже, чем исходного вещества для всех четырех соединений. Исследуемые соединения не выступали субстратом или ингибитором Р- гликопротеин обусловленного транспорта при исследовании in vitro. Исследование взаимодействия испытуемых с левофлоксацином показало, что концентрация Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV составляет 50-80%; следовательно, существует вероятность запрета совместного введения исследуемых соединений.

8. Острая токсичность и токсичность при повторных введениях

Исследование острой токсичности в условиях единоразового ведения, и подострой, субхронической и хронической токсичности в условиях повторных введений, было проведено на крысах и кроликах путем перорального и внутривенного введения общим сроком до 9 месяцев. Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV были относительно хорошо переносимы животными после однократного или многократного приема внутрь. У крыс одноразовые пероральные дозы LD50 составляли 1300 мг/кг Соединения I, 1500 мг/кг Соединения II, 1350 мг/кг Соединения III и 1400 мг/кг Соединения IV. Смертность у крыс и кроликов после однократных и повторных токсичных уровней доз, в основном, была связана с повреждением скелетных мышц/дегенерацией миокарда и/или панкреатитом. 13-недельное исследование ежедневного перорального введения исследуемых соединений у крыс показало, что значение доз при котором отсутствует негативный еффект NOAEL составило 30 мг/кг (Соединение I), 25 мг/кг (Соединение II), 28 мг/кг (Соединение III), 23 мг/кг (Соединение IV) для крыс. Установлено, в течение 26 недель системной экспозиции, которая в 5-10 раз была выше предложенной клинической концентрации в крови (С max) не проявлялся токсический эффект. Основными органами-мишенями у крыс были печень, скелетные мышцы, легкие, щитовидная железа и почки в долгосрочных исследованиях. Показано неполное восстановление ткани в течение 13-недельного периода без лечения. 9. Генотоксичность

Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV не проявляли влияние на генотоксический потенциал в стандартных тестах in vitro и in vivo, включая исследования на культуре Salmonella typhimurium, клетках лимфомы мышей и оценку мутагенного воздействия с помощью AMES test.

10. Канцерогенность.

Исследования канцерогенное™ на крысах Sprague-Dawley продолжаются. Учитывая отсутствие мутагенного эффекта, можно ожидать отсутствие канцерогенного действия.

1 1 . Репродуктивная токсичность

Потенциал репродуктивной токсичности исследовался у крыс и кроликов в исследованиях, охватывающих все стадии репродуктивного процесса. Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV не влияли на фертильность у самок крыс в условиях введения дозировок в 2-5 раз выше, чем ожидаемое применение в клинике. В исследованиях эмбриофетальной токсичности крыс и кроликов, исследуемые соединения не проявляли вредного влияния на развитие эмбрионов, а частота вариаций и аномалий в развитии плода в группах животных Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV не превышала нормы.

12. Исследования местно-раздражающего действия на при нанесении исследуемых соединений на сетчатку глаза не выявили значимого эффекта.

На втором этапе проводили клинические исследования с целью изучения безопасности, фармакокинетики и токсичности фармацевтической композиции согласно техническому решению.

Клинические исследования оральной, ингаляционной и инъекционной формы фармацевтической композиции согласно техническому решению проводились как на здоровых добровольцах, так и на пациентах с диагнозом туберкулез.

А. Изучение безопасности, фармакокинетики и токсичности Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в оральной, ингаляционной и ингаляционной форме фармацевтической композиции согласно техническому решению у здоровых добровольцев.

1 . Дизайн клинических исследований

Изучение влияния оральной, инъекционной, ингаляционной формы фармацевтической композиции согласно техническому решению с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV было проведено путем трех или четырех последовательных клинических исследований Фазы I, II, III для каждого соединения. С учетом того, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV принадлежат к одному классу противотуберкулезных соединений, дизайн клинических исследований, методы оценки, общие требования к рассматриваемым субъектам были идентичными.

В течение исследований Фазы I, в которых изучалась безопасность, переносимость и фармакокинетика Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в оральной, инъекционной форме, и в виде порошка для ингаляции у здоровых добровольцев, было проведено 4 исследования для каждой формы фармацевтической композиции с каждым соединением.

1 ) В исследование для ингаляционной формы фармацевтической композиции были включены 4 группы по 20 здоровых добровольцев, по 5 субъектов в каждой из исследуемых подгрупп, которые получали соответственно дозы 10, 50, 100 и 150 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, путем использования простого ингалятора для доставки фармацевтической композиции.

Фармацевтическая композиция в ингаляционной форме содержит следующие компоненте в составе:

Соединение I или Соединение II или Соединение III или Соединение IV

Микрокристаллическая целлюлоза

Натрий карбоксиметилцеллюлоза

Полисорбат 80

Двухосновный фосфат калия

Гидрохлорид натрия

Соляная кислота

Вода для инъекций

Ингаляции хорошо переносились всеми субъектами исследования. Наиболее распространенной неблагоприятной реакцией был легкий или умеренный кашель у пяти пациентов. У пациентов не было выявлено изменений в функции легких или в лабораторных параметрах. Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV быстро всасывается после аспирации. Была проведена оценка системных концентраций в каждой группе доз в течение 20 мин после аспирации. Пиковая и средняя концентрация Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в плазме крови была пропорциональна к принятой дозе.

Концентрации соединений в сыворотке крови превышали 1 ,9 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы Соединения I; 2,0 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения II; 1 ,8 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения III; 2, 1 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения IV.

Период полураспада (t1/2) составил: 4,8±1 ,0 ч для Соединения I; 4,6±1 ,0 ч для Соединения II; 4,5±1 ,0 ч для Соединения III; 4,4±1 ,0 ч для Соединения IV.

Фармацевтическая композиция в ингаляционной форме порошка с микрочастицами Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV переносилась хорошо. Единоразовая доза в 150 мг для всех соединений быстро достигла значения концентрации соединения в сыворотке выше МИК для Mycobacterium tuberculosis, что свидетельствует о потенциале ингаляционной терапии как части режима лечения мультирезистентного туберкулеза легких.

С учетом того, что доклинические исследования инъекционных препаратов с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV обнаружили низкий уровень распределения этих препаратов в легких животных, получение ингаляционной формы фармацевтической композиции позволяет усилить и улучшить протоколы лечения мультирезистентного туберкулеза легких.

Все исследования включали пациентов обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет; которые в течение последних 6 месяцев не употребляли табака; не использовали лекарств; без патологических изменений в лабораторных анализах крови и мочи. Жизненный объем легких и другие параметры спирографии должны были соответствовать возрастной норме. В исследование не включались беременные женщины и женщины, кормящие грудью, пациенты с известной аллергией на любые антибиотики.

Во всех исследованиях была проведена оценка функции легких в начале исследования и после 24-х часов после получения исследуемой фармацевтической композиции. После включения в исследование пациентам была последовательно назначена одна из четырех доз соединений (10 мг, 50 мг, 100 мг и 150 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV).

Каждый субъект получал одну дозу ингаляционной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III или Соединением IV в соответствии с групповой дозой, которую самостоятельно вводил с помощью портативного ингалятора.

Каждая группа проходила анализ крови для оценки фармакокинетики Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в 13 часовых точках: перед применением; на 10, 20, 30 и 45 минуте после ингаляции дозы, а также на 1 , 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после ингаляции дозы исследуемой фармацевтической композиции. Концентрации соединений были определены с помощью высокочувствительной жидкостной хроматографии (HPLC-MS/MS). Нижняя граница количественного определения Соединения I в плазме человека составляла 71 мкг/мл, с точностью 86, 1 %; Соединения II составляла 73 мкг/мл с точностью 84,6%; Соединения III составляла 72 мкг/мл с точностью 85, 1 %; Соединения IV составляла 74 мкг/мл с точностью 83,8%. Линейный диапазон количественной оценки был определен от 71 до 3856 мкг/мл для Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Кроме того, испытуемым субъектам были проведены анализ крови и мочи, аускультация и рентген грудной клетки через 24 часа после получения дозы соединения для оценки безопасности фармацевтической композиции.

Клинические и демографические данные о субъектах исследования были оценены с использованием итоговых мероприятий. Оценка фармакокинетики состояла из параметров всех субъектов исследований, которые получили полную дозу исследуемых соединений и завершили исследования.

Анализ фармакокинетики проводился с помощью стандартных методов, которые используют в исследованиях на людях.

Далее приведены фармакокинетические данные Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Соединение I было обнаружено в сыворотке крови в течение 22 мин после ингаляции у 16/20 (80%) пациентов; Соединение II было обнаружено в сыворотке крови в течение 25 мин после ингаляции у 17/20 (85%) пациентов; Соединение III было обнаружено в сыворотке крови в течение 23 мин после ингаляции у 15/20 (75%) пациентов; Соединение IV было обнаружено в сыворотке крови в течение 21 мин после ингаляции у 16/20 (80%) пациентов. У трех субъектов первоначальное выявление Соединения I произошло в промежуток от 1 до 2,5 часов после ингаляции; в двух субъектов первоначальное выявление Соединения II произошло в промежуток от 1 ,2 до 2,4 часов после ингаляции; у одного субъекта первоначальное выявление Соединения III произошло в промежуток от 1 ,4 до 2,3 часов после ингаляции, в двух субъектов первоначальное выявление Соединения IV произошло в промежуток от 1 , 1 до 2,1 часов после ингаляции. Все эти субъекты были в группах, которым была назначена доза 10 мг (самая низкая).

Для Соединения I: в группе, получившей дозу 10 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 821 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 16 285 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 121 мкг/мл, 832 мкг/мл, 1286 мкг/мл и 2,486 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 ,4 ч (для группы 10 мг), 2,0 ч (для группы 50 мг), 2,8 ч (для группы 100 мг) и 2,9 ч (для группы 150 мг); значения t1 /2 составляли 5, 1 1 ±1 , 1 ч (для группы 10 мг), 4,2±1 , 1 ч (для группы 50 мг), 4,4±1 ,3 ч (для группы 100 мг) и 4,8±1 ,0 ч (для группы 150 мг).

Для Соединения II: в группе, получившей дозу 10 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 835 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 15 935 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 120 мкг/мл, 834 мкг/мл, 1 198 мкг/мл и 2785 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 ,3 ч (для группы 10 мг) 2, 1 ч (для группы 50 мг) 2,7 ч (для группы 100 мг) и 3,0 ч (для группы 150 мг); значения t1/2 составляли 5, 21 ±1 , 1 ч (для группы 10 мг) 4,4±1 ,2 ч (для группы 50 мг), 4,5±1 ,3 ч (для группы 100 мг) и 4,9±1 , 1 ч (для группы 150 мг).

Для Соединения III: в группе, получившей дозу 10 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 824 мин мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 15835 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 131 мкг/мл, 824 мкг/мл, 1385 мкг/мл и 2589 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 ,3 ч (для группы 10 мг), 2, 1 ч (для группы 50 мг), 2,6 ч (для группы 100 мг) и 2,8 ч (для группы 150 мг); значения t1 /2 составляли 5,21 ±1 , 1 ч (для группы 10 мг), 4, 14±1 ,0 ч (для группы 50 мг), 4,6±1 ,2 ч (для группы 100 мг) и 4,7±1 ,2 ч (для группы 150 мг).

Для Соединения IV: в группе, получившей дозу 10 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 835 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 17012 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 125 мкг/мл, 840 мкг/мл, 1317 мкг/мл и 2561 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 ,2 ч (для группы 10 мг), 2,3 ч (для группы 50 мг), 2,9 ч (для группы 100 мг) и 3,2 ч (для группы 150 мг); значения t1/2 составляли 5,23±1 , 1 ч (для группы 10 мг), 4, 1 ±1 ,0 ч (для группы 50 мг), 4,5±1 ,2 ч (для группы 100 мг) и 5,0±1 , 1 ч (для группы 150 мг).

Данные о безопасности Соединения И Соединения ИИ, соединения III и соединения IV.

Вдыхание Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV не было связано с изменениями клинических или лабораторных параметров. Легочная функция была неизменной после ингаляции. Функция почек не изменялась после введения препарата. Также не наблюдалось изменений в анализах функций печени, общих анализах крови и мочи. Аускультативная картина не изменялась после приема препарата во всех группах пациентов.

Данные о наличии побочных реакций.

В этом исследовании не было тяжелых или серьезных нежелательных реакций. Несколько субъектов испытали легкие или умеренные побочные эффекты, наиболее распространенным был кашель, встречался у 27 субъектов из 80 включенных в исследование в целом.

При возникновении кашля он начинался после введения фармацевтической композиции и заканчивался в течение 5 мин. Также пациенты отмечали такие побочные реакции: головная боль, ощущение сжатия в груди, жажду, умеренную слабость и утомляемость.

2) В клиническом исследовании Фазы I было проведено изучение влияния однократной дозы Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в пероральной форме фармацевтической композиции в виде таблеток, покрытых оболочкой, на здоровых волонтеров, были оценены безопасность и фармакокинетика у здоровых пациентов натощак.

Фармацевтическая композиция в пероральной форме в виде таблеток содержит следующие компоненты в составе:

Соединение I или Соединение II или Соединение III или Соединение IV

Микрокристаллическая целлюлоза

Гидроксипропилметилцелюлоза

роскармеляоза натрия

Крахмал прежелатинизированный

Коллоидный диоксид кремния

Стеарат магния

Вода очищенная

В исследовании 01 для пероральной формы фармацевтической композиции для каждого из Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, восемь субъектов получали однократно дозу 50 и 150 мг. Результаты этих исследований показали небольшую разницу в возникновении побочных реакций у добровольцев, получавших 50 мг дозы по сравнению с пациентами, получавших дозу 150 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Второе клиническое испытание Фазы I - 02 было проведено с назначением нескольких доз, клиническое испытание было разработано для дальнейшей оценки безопасности Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV у здоровых добровольцев.

Безопасность исследуемой фармацевтической композиции подтверждалась физикальным осмотром, мониторингом функций жизнедеятельности, оценкой изменений параметров лабораторных анализов крови, мочи и документации побочных реакций. Системный уровень Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV измеряли в каждой группе доз.

Исследования 02 Фазы I были рандомизированными, открытыми исследованиями с введением нескольких доз Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, исследуемые фармацевтические композиции предназначались в течение 7 дней в дозе соединений 300 мг и 600 мг, а также изучалось состояние пациентов в течение 7 дней после приема фармацевтической композиции. Все пациенты получали фармацевтические композиции в течение 30 минут после стандартизированного завтрака. Пациенты были разделены на две группы для каждого исследования. В группу 1 были включены восемь пациентов, которые были рандомизированы в группу, получавшую ежедневную дозу Соединения I, Соединения III, Соединения III и Соединения IV 600 мг, и шесть пациентов были рандомизированы в группу 2, получавшую дозу 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV. После назначения пациентам группы 1 дозы соединений 600 мг в течение первых суток у большинства пациентов начали возникать побочные реакции для всех соединений, что позволило сделать вывод, что назначение дозы в 450 мг для всех соединений является более безопасным для пациентов. Итак, после пересмотра данных о безопасности была внесена поправка к протоколам исследования для продолжения исследования с меньшей дозой в 450 мг для группы 1 для всех соединений.

Группа 2 состояла из шести субъектов, принимавших ежедневную дозу 300 мг дозы Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Исследование 02 Фазы I включали 7-дневный период наблюдения после последней дозы Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, в течение которого пациенты не принимали никаких лекарств, предназначенный для оценки количества и тяжести побочных реакций, а также оценки временного промежутка, в течение которого исчезало подавляющее количество побочных реакций. Безопасность подтверждалась физикальным осмотром, мониторингом функций жизнедеятельности, оценкой изменений параметров лабораторных анализов крови, мочи и документации побочных реакций.

Побочные реакции, которые наблюдались после введения Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV у здоровых добровольцев.

Наиболее распространенной побочной реакцией, выявленной при проведении обследований пациентов клинических исследований Фазы I была тошнота. Другими распространенными побочными реакциями были головная боль, головокружение, сердцебиение, нарушение сна, рвота, слабость, сухость кожи.

Витальные функции и данные физикальной оценки находились в пределах возрастной нормы и не имели существенных различий в исследованиях. Все изменения, выявленные во время электрокардиограммы, были расшифрованы как клинически незначительные и ограничивались возрастными нормами.

В клинических исследованиях Фазы I были обнаружены побочные реакции, изменения лабораторных показателей, и проводилось изучение фармакокинетики Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV у здоровых добровольцев, принимавших исследуемые соединения в дозе 50, 100, 300 и 450 мг.

Большее количество побочных реакций наблюдалась у пациентов, получавших дозу соединений в 450 мг.

Тяжесть побочных реакций, частота распространения побочных реакций, распределение побочных реакций по отношению к органам и системам организма для исследований 01 и 02 предоставлено в таблице 8.

На основании данных таблицы 8 можно сделать вывод, что количество побочных реакций, их тяжесть напрямую зависит от дозы введения Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, а также продолжительности приема введение Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Таблица 8

Тяжесть побочных реакций в исследованиях 01 и 02 для Соединения I,

Соединения II, Соединения III и Соединения IV

Соединение IV 2 2 5 2 1 1

Сердечно- Соединение 1 0 1 2 1 4 сосудистая Соединение II 1 1 1 0 3 система Соединение III 1 0 1 1 3

Сердцебиение Соединение IV 0 1 1 0 2

Желудочно- Соединение 1 1 0 2 0 3 кишечный Соединение II 0 1 3 1 5 тракт Соединение III 0 0 3 1 4

Рвота Соединение IV 0 1 2 0 3

Соединение 1 1 1 1 0 3

Диспепсия Соединение II 0 1 2 1 4

Соединение III 0 0 2 1 3

Соединение IV 0 0 1 0 1

Соединение 1 2 1 4 1 8

Тошнота Соединение II 2 2 5 2 1 1

Соединение III 1 1 6 2 10

Соединение IV 1 1 4 1 7

Соединение 1 1 0 1 0 2

Жажда Соединение II 1 1 2 1 5

Соединение III 0 1 3 0 4

Соединение IV 1 0 1 1 3

Соединение 1 2 1 4 1 8

Сухость во рту Соединение II 1 2 4 0 7

Соединение III 1 1 3 1 6

Соединение IV 0 0 4 1 5

Соединение 1 0 0 1 0 1

Диарея Соединение II 0 1 2 1 4

Соединение III 0 0 1 0 1

Соединение IV 0 0 0 0 0

Опорно- Соединение 1 3 2 3 2 10 двигательный Соединение II 1 1 2 2 6 аппарат Соединение III 0 1 1 1 3

Артралгия Соединение IV 1 0 0 1 2

Соединение 1 2 1 2 1 6

Соединение II 0 1 1 0 2

Миалгия

Соединение III 2 2 0 0 4

Соединение IV 1 1 1 0 3

Нервная Соединение 1 2 1 3 0 6 система Соединение II 1 3 4 1 9

Соединение III 2 1 3 0 6

Головокружение Соединение IV 1 3 2 1 7

Соединение 1 1 0 1 0 2

Соединение II 2 0 0 2 4

Бессонница

Соединение III 1 2 3 1 7

Соединение IV 0 1 0 0 1

Соединение 1 1 1 2 1 5

Кожа

Соединение II 2 3 4 0 9

Соединение III 1 1 5 2 9

Сухость кожи

Соединение IV 2 2 4 3 1 1

Соединение 1 1 0 0 1 2

Соединение II 0 2 3 0 5

Потливость

Соединение III 1 1 2 0 4

Соединение IV 1 1 0 0 2 Показатели фармакокинетики введения Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в клинических исследованиях 01 и 02 в цельной крови были схожими с концентрациями введения Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в плазме. По сравнению с данными, полученными при исследованиях на животных, можно сделать вывод о том, что у людей введение Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV приобретает более высокую концентрацию в сыворотке крови (1 ,7: 1 ; 1 ,68: 1 , 1 ,71 : 1 ; 1 ,69: 1 ). Проведенные исследования фармакокинетики были направлены на изучение концентраций Соединения I, II, III и IV в плазме крови.

Измерение концентрации введения Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в плазме непосредственно и их трех основных метаболитов (IN-2401 , IN-2402 и IS-2406), а также 5 других метаболитов (IS-2501 , 2512, 261 1 -2613), которые являются одинаковыми для всех изученных соединений проводили с использованием специфической и чувствительной методики HPLC- MS/MS. Исследование показало линейную зависимость концентрации в диапазоне 1 -500 нг/мл для Соединения I, 1 -520 нг/мл для Соединения II, 1 -480 нг/мл для соединения III, 1 -510 нг/мл для Соединения IV в плазме, и 1 -100 нг/мл для Соединения I, 1 -1 10 нг/мл для Соединения II, 1 -98 нг/мл для Соединения III, 1 -1 15 нг/мл для Соединения IV для концентраций метаболитов. Концентрации Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в моче не определялись из-за низкой экскреции, продемонстрированной результатами хроматографии.

Абсолютная оральная биодоступность Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV у человека не определена. Предполагая, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV не выделяются без изменений у людей (основано на отсутствии экскреции системой желчеотделения в доклинических исследованиях), было проведено наблюдение. 54, 1 - 76,8% дозы Соединения I, 53, 2 - 76,5% дозы Соединения II, 53,2 - 74,8% дозы Соединения III, 53,6 - 77, 1 % дозы Соединения IV выводилось в неизменном виде с калом, и это свидетельствует о том, что от 23 до 48% дозы Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV всасывается в желудочно-кишечном тракте.

В исследовании с однократным введением Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV было обнаружено меньшее дозо-зависимое увеличение концентрации Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV и их первичных метаболитов. При применении единичных доз 50- 450 мг натощак практически не было обнаружено разницы в Стах или AUC0-°° между группами, получавшими 50 мг и группами, которые получали 150 мг. Хотя Стах и AUC0- ⁰⁰ на 150, 300 и 450 мг увеличились при увеличении дозы, увеличение были меньшими по отношению к пропорциям дозы.

Введение одиночных доз Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV для субъектов исследований 01 не показало линейности для коэффициентов накопления Стах или AUC, значения коэффициентов накопления Cmax, AUC 0-12, AUC 0-24, С12 и С24 у здоровых добровольцев при введении дозы в 300 мг и 450 мг для Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV предоставлено в таблице 9. Таблица 9

Коэффициенты накопления Cmax, AUC 0-12, AUC 0-24, C12 и C24 у здоровых добровольцев при введении дозы в 300 мг и 450 мг для Соединения I,

Соединения II, Соединения III и Соединения IV

Исходя из предыдущих исследований фармакокинетики на животных и результатов исследований 01 и 02 был сделан вывод, что Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV удовлетворительно всасываются в желудочно-кишечном тракте, легко проникают через гематоэнцефалический барьер, равномерно распределяются в различных тканях и жидкостях организма. После приема внутрь максимальная концентрация Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в крови определяется в среднем на 2,5-3 часа, концентрация в крови после приема одной дозы сохраняется до 24 часов. Вывод соединений происходит в основном с почками в виде неактивных метаболитов, небольшая часть выделяется с фекалиями.

3) В исследования для инъекционной формы фармацевтической композиции в виде раствора для инъекций были включены 4 группы по 20 здоровых добровольцев, по 5 субъектов в каждой из исследуемых подгрупп, которые получали соответственно дозы 50, 150, 300 и 450 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, который вводился внутривенно, используя 200 мл раствора натрия хлорида 0,9% для инфузий. Фармацевтическая композиция в инъекционной форме в виде раствора для инъекций содержит следующие компоненты в составе:

Соединение I или Соединение II или Соединение III или Соединение IV

Этанол

Двухосновный фосфат калия

Гидроксид натрия

Соляная кислота

Вода для инъекций

Инъекции хорошо переносились всеми субъектами исследования. Наиболее распространенной неблагоприятной реакцией было легкая или умеренная тошнота, которая наблюдалась во всех группах пациентов. У пациентов не было выявлено изменений в функции внутренних органов или лабораторных параметрах. Соединение I, Соединение II, Соединение III и Соединение IV быстро распространяются по органам и системам после введения.

Была проведена оценка системных концентраций соединений каждой группы доз в течение 10 мин после инъекции. Пиковая и средняя концентрация Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в плазме крови была пропорциональна введенной дозе. Концентрации в сыворотке крови превышали 2,5 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы Соединения I; 2,6 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения II; 2,8 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения III; 2,9 мкг/мл (МИК для Mycobacterium tuberculosis) после наибольшей дозы для Соединения IV. Период полураспада (t1/2) составлял 3,8±1 ,0 часов для Соединения I; 3,6±1 ,0 часов для Соединения II; 3,5±1 ,0 часов для Соединения III; 3,4±1 ,0 часов для Соединения IV. Инъекционное введение Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV хорошо переносилось. Доза в 150 мг для всех соединений быстро достигла концентрации соединения в сыворотке выше МИК для Mycobacterium tuberculosis, что свидетельствует о потенциале инъекционной формы Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в терапии лечения мультирезистентного туберкулеза легких.

Все исследования включали пациентов обоего пола в возрасте от 18 до 65 лет; которые в течение последних 6 месяцев не употребляли табака; не использовали лекарств; без патологических изменений в лабораторных анализах крови и мочи. В исследование не включались беременные женщины и женщины, кормящие грудью, пациенты с известной аллергией на любые антибиотики.

Во всех исследования была проведена оценка функции внутренних органов в начале исследования и после 24-х часов после получения исследуемой фармацевтической композиции. После включения в исследование пациентам была последовательно назначена одна из четырех доз соединений (50 мг, 150 мг, 300 мг и 450 мг) Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV. Каждый субъект получал одну инъекцию Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в соответствии с групповой дозой, которая вводилась под наблюдением квалифицированных специалистов.

Каждая группа проходила анализ крови для оценки фармакокинетики Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV в 13 часовых точках: перед применением; на 10, 20, 30 и 45 минуте после инъекции дозы, а также на 1 , 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после введения дозы исследуемой фармацевтической композиции. Концентрации соединений были определены с помощью высокочувствительной жидкостной хроматографии (HPLC-MS/MS). Нижняя граница количественного определения Соединения I в плазме человека составляла 80, 1 мкг/мл, с точностью 85, 1 %; Соединения II составила 83 мкг/мл с точностью 85,6%; Соединения III составляла 85 мкг/мл с точностью 84, 1 %; Соединения IV составляла 82 мкг/мл с точностью 87, 1 %. Линейный диапазон количественной оценки был определен от 71 до 3856 мкг/мл для Соединения I Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Кроме того, испытуемым субъектам были проведены анализ крови и мочи, оценка состояния внутренних органов через 24 часа после получения дозы для оценки безопасности фармацевтической композиции.

Клинические и демографические данные о субъектах исследования были оценены с использованием итоговых мероприятий. Оценка фармакокинетики состояла из параметров всех субъектов исследований, которые получили полную дозу исследуемых соединений и завершили исследования.

Анализ фармакокинетики проводился с помощью стандартных методов, которые используют в исследованиях на людях.

Далее приведены фармакокинетические данные Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV были обнаружены в сыворотке крови у 100% исследуемых течение 5 минут.

У трех субъектов первоначальное выявление Соединения I произошло в промежуток от 1 до 2,5 минут после инъекции; у двух субъектов первоначальное выявление Соединения II произошло в промежуток от 1 ,2 до 2,4 минут после инъекции; у одного субъекта первоначальное выявление Соединения III произошло в промежуток от 1 ,4 до 2,3 минут после инъекции; у двух субъектов первоначальное выявление Соединения IV произошло в промежуток от 1 , 1 до 2,1 минут после инъекции. Все эти субъекты были в группах, которым была назначена доза 50 мг (самая низкая).

Для Соединения I: в группе, получившей дозу 50 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 1682 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 32151 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 252 мкг/мл, 1638 мкг/мл, 2386 мкг/мл и 4856 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 13 минут (для группы 50 мг), 1 1 минут (для группы 150 мг), 12,8 минут (для группы 300 мг), и 12,9 минут (для группы 450 мг); значения t1/2 составляли 2,2±1 , 1 часа (для группы 50 мг), 2,4±1 ,4 часа (для группы 150 мг), и 2,8±1 ,5 часа (для группы 300 мг) и 2, 1 1 ±1 ,1 часа (для группы 450 мг).

Для Соединения II: в группе, получившей дозу 50 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 1735 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 24752 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 242 мкг/мл, 1634 мкг/мл, 2498 мкг/мл и 4785 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 1 ,3 минут (для группы 50 мг), 14, 1 минут (для группы 150 мг), 12,7 минут (для группы 300 мг) и 13,1 минут (для группы 450 мг); значения t1/2 составляли 2,4±1 ,2 часа (для группы 50 мг), 2,4±1 ,3 часа (для группы 150 мг), 2,9±1 , 1 часа (для группы 300 мг) и 2,52±1 , 1 часа (для группы 450 мг).

Для Соединения III: в группе, получившей дозу 50 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 1625 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 30825 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 261 мкг/мл, 1625 мкг/мл, 2375 мкг/мл и 4580 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 12,3 минут (для группы 50 мг), 1 1 , 1 минут (для группы 150 мг), 10,6 минут (для группы 300 мг) и 12,7 минут (для группы 450 мг); значения t1/2 составляли 2,14±1 ,0 часа (для группы 50 мг), 2,6±1 ,3 часа (для группы 150 мг), 2,7±1 ,2 часа (для группы 300 мг) и 2,68±1 , 1 часа (для группы 450 мг).

Для Соединения IV: в группе, получившей дозу 50 мг - среднее значение концентрации в промежуток от 0 часов до последнего измерения (AUC0-t) составляло 1634 мин - мкг/мл, тогда как в группе, получавшей дозу 150 мг, среднее значение AUC0-t составляло 34125 мин - мкг/мл; средние значения Стах для каждой группы последовательно были 232 мкг/мл, 840 мкг/мл, 2816 мкг/мл и 4561 мкг/мл; средняя максимальная концентрация (Ттах) в каждой группе составила 1 1 ,2 минут (для группы 50 мг), 1 1 ,3 минут (для группы 150 мг), 14,9 минут (для группы 300 мг) и 15,2 минут (для группы 450 мг); значение t1/2 составляло 2, 1 ±1 ,0 часа (для группы 50 мг), 2,5±1 ,.2 часа (для группы 150 мг), 3,0±1 , 1 часа (для группы 300 мг) и 3, 18±1 , 1 часа (для группы 450 мг).

Данные о безопасности фармацевтической композиции с Соединением I Соединения II, Соединением III и Соединением IV.

Введения фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в инъекционной форме не были связаны с изменениями клинических или лабораторных параметров. Функция почек не изменялась после введения препарата. Также не наблюдалось изменений в анализах функций печени, общих анализу крови и мочи.

Данные о наличии побочных реакций после введения фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

В этом исследовании не было тяжелых или серьезных нежелательных реакций. Несколько субъектов испытали легкие и умеренные побочные эффекты, наиболее распространенными явлениями были тошнота и головная боль, которые встречались у 65 субъектов из 80 включенных в исследование в целом. Также пациенты отмечали такие побочные реакции: жажду, умеренную слабость, утомляемость, сухость во рту.

А. Эффективность лечения фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV у больных туберкулезом - исследование 02 и исследования 03.

После проведения клинических испытаний у здоровых добровольцев следующим шагом было провести исследования у пациентов с подтвержденным мультирезистентным туберкулезом, индуцированным М. tuberculosis (исследование 02 и исследование 03).

1 ) Пероральная и инъекционная формы.

В связи с тем, что в терапии мультирезистентного туберкулеза рутинно используются схемы, которые комбинируют оральные и инъекционные схемы лечения туберкулеза, было принято решение о проведении одновременных исследований для фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, которые будут исследовать последовательное лечение пациентов инъекционными и оральными формами фармацевтической композиции.

Исследования 03 Фазы II были плацебо-контролируемыми, двойными слепыми, рандомизированными исследованиями для оценки антибактериальной активности, безопасности и переносимости фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде раствора для инъекций по 100 мг во флаконе, и в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 и 300 мг у пациентов с мультирезистентной формой легочного туберкулеза с подтвержденным бактериовыделением путем исследования мокроты больных. Больные в исследованиях были разделены на 2 группы. Группа 1 получала фармацевтическую композицию с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде раствора для инъекций по 100 мг во флаконе, Группа 2 получала лечение пероральной формой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV (таблетки, покрытые пленочной оболочкой по 150 и 300 мг).

Исследования проводились в 2 последовательных этапа: 1 -й этап исследования (8 недель лечения фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединение IV) и 2-й этап подтверждения эффективности (24 недели лечения фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV). Субъекты, которые принимали участие в первом этапе, не имели права вступать в этап 2. Анализ этапов проводился отдельно. После фазы лечения субъекты продолжали получать лечение согласно протоколам лечения больных мультирезистентным туберкулезом, утвержденных ВОЗ.

Качественный состав исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в пероральной форме и инъекционной форме не отличался от состава, использованного в исследовании 01 и 02 в соответствии с назначенной дозой.

Исследования были направлены на изучение безопасности, переносимости и микробиологической эффективности фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в течение 24 недель после получения последней дозы Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, или плацебо.

Исследования состояли из двух этапов, которые скорее можно считать двумя отдельными исследованиями. Однако оба этапа имели одинаковые методы, конечные точки и режимы назначения сопутствующей терапии.

После проведения скрининга (в течение первой недели исследования), пациенты, которые отвечали критериям исследования были госпитализированы в лечебное учреждение. Режимы лечения, предназначенные схемы лечения на этапах 1 и 2, приведены в таблице 10.

Включение пациентов:

Согласно протоколам исследований, процедура блочной рандомизации проводилась отдельным расслепленным членом исследовательской команды. Распределение пациентов в группы лечения произошло следующим образом.

Таблица 10

Схемы лечения

Период скрининга (неделя -1)

Лечение не проводилось.

Период лечения (8 недель на этапе 1 , 24 недели на этапе 2):

Недели 1 и 2: - оральная форма 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV или плацебо (1 : 1) в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 или 300 мг

- инъекционная форма 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и

Соединения IV или плацебо (1 : 1) в виде раствора для инъекций;

Неделя 3-8 (этап 1): - оральная форма 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV или плацебо (1 : 1) в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 или 300 мг

- инъекционная форма 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и

Соединения IV или плацебо (1 : 1) в виде раствора для инъекций

Недели 3-24 (этап 2): - оральная форма 450 мг Соединения I, Соединения II,

Соединения III и Соединения IV или плацебо 1 раз в сутки (1 : 1) в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 или 300 мг

- инъекционная форма 450 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и

Соединения IV или плацебо (1 : 1) в виде раствора для инъекций.

Длительность наблюдения (после отмены лечения) 24 недели для этапов 1 и 2

Наблюдение происходило в течение 6 месяцев, по крайней мере, в течение 3-х

месяцев после получения первого отрицательного исследования мокроты.

В группы исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV и к группе плацебо включалось одинаковое количество пациентов, независимо от пола пациентов. Всего в исследовании приняло участие 160 пациентов для Соединения I; 162 пациента для Соединения II, 158 пациентов для Соединения III и 162 пациента для Соединения IV. Распределение пациентов в группы пероральной формы и инъекционной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV происходило поочередно. Таким образом, исследования для пероральной и инъекционной группы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединение III и Соединение IV пациентов происходило на одинаковом количестве пациентов для каждого из соединений. Пациенты, которые были рандомизированными, но при любой причине были исключены из исследования, были включены в анализ безопасности исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

Плацебо было сделано должным образом: во внешнем виде исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV и плацебо не было различий.

Исследуемую фармацевтическую композицию с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV/плацебо пациенты получали в течение 10 минут после завтрака для пероральной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, или через 30 минут после завтрака для инъекционной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV. Препараты сопутствующей терапии принимались перед завтраком. Наблюдение за лечением проводилось в течение всех этапов лечения и периода наблюдения. Все препараты принимались под наблюдением квалифицированного медицинского персонала.

Поддерживающая терапия.

Поддерживающая терапия состояла из 5 агентов, которые давали в течение 3-6 месяцев (по крайней мере, 3 месяца после первого документального подтверждения негативного посева мокроты): канамицин, офлаксацин, этионамид, пиразинамид и циклосерин/теризидон. Дозировки препаратов с агентами сопутствующей терапии приведены в таблице 1 1 .

Таблица 1 1

Агенты сопутствующей терапии, которые используют в поддерживающей терапии у пациентов с мультирезистентным туберкулезом в исследовании 03

Форма выпуска Суточная дозировка

Агенты препаратов с (мг) Этап

сопутствующей агентами (Лечение/поддерживающая

Мини- Макси- терапии сопутствующей терапия)

мальная мальная

терапии

доза доза

Аминогликозиды

750 1000

Канамицин Флаконы Лечение

750 1000

Амикацин

Тиоамиды Лечение/поддерживающая

Табл. 250 мг 500 1000

- Етионамид терапия

Пиразинамид Табл. 400/500 мг 1200 1600 Лечение

Фторхинолоны

Табл. 200 мг 600 800 Лечение/поддерживающая

- Ципрофлоксацин

Табл. 250 мг 1000 1500 терапия

- Офлоксацин

Лечение/поддерживающая

Этамбутол Табл. 400 мг 1000 1200

терапия

Теризидон/ Лечение/поддерживающая

Капе. 250 мг 500 750

Циклосерин терапия Пациенты, получавшие исследуемую фармацевтическую композицию с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде раствора для инъекций, получали поддерживающую терапию в виде пероральных форм препаратов.

Поддерживающая терапия для каждого участника исследования была назначена в соответствии с протоколами лечения туберкулеза ВОЗ. Некоторые заранее определенные изменения разрешались в случае отсутствия препарата или выявления у пациента непереносимости отдельных препаратов. Если изменения поддерживающей терапии были внесены по причине токсического эффекта препарата или в связи с угрозой безопасности здоровью пациента, об этом было сообщено как о побочной реакции. Дополнительные изменения (у заранее определенных участников исследования) были внесены по причинам выявления резистентности к препарату (в посеве мокроты, полученных во время лечения или наблюдения).

Лечение проводилось с использованием утвержденной терапии в течение всего исследования, со временем (то есть, когда пациент был выписан из больницы) по протоколу лечения под наблюдением участкового фтизиатра.

Индивидуальные схемы поддерживающей терапии могли меняться со временем (главным образом в течение периода наблюдения) с добавлением некоторых других агентов (в частности, пара-аминосалициловой кислоты и капреомицина). Такие изменения были более распространены в группе плацебо, чем в группах Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Этап 1 : Целью этапа 1 было оценить антибактериальную активность, безопасность и переносимость фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV по сравнению с плацебо при добавлении к стандартной терапии лечения мультирезистентного туберкулеза в течении 8 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких после получения положительного посева мокроты.

Этап 2: Основная цель этапа 2 заключалась в том, чтобы продемонстрировать превосходство антибактериальной активности фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV по сравнению с плацебо, прилагаемой к стандартной терапии в течение 24 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких после получения положительного посева мокроты.

Первичная конечная точка эффективности.

Первичной конечной точкой эффективности является время получения отрицательного посева мокроты при лечении фармацевтической с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, или плацебо. Этот параметр базировался на качественной оценке роста культуры на жидких и твердых средах с использованием образцов мокроты.

Подтверждением подавляющей эффективности было получение двух последовательных отрицательных посевов культуры мокроты, полученных в течение 8 недель на этапе 1 . На этапе 2 применялось такое же определение, однако негативные культуры должны были быть получены в интервале не менее 25 дней друг от друга. Случаи при получении 1 -го отрицательного результата посева, после которого был получен 1 или 2 положительных результата, были определены в отчете как рецидив заболевания (во время лечения или после прекращения лечения).

Для тех, кто прекратил участие исследования к концу периода наблюдения расчет времени получения отрицательного посева мокроты не применялся.

Полный курс лечения: полностью пролеченным считался пациент с мультирезистентным туберкулезом, который прошел лечение в соответствии с протоколом и имел постоянно отрицательные результаты посева мокроты (по крайней мере три последовательных результата) в течение последних 6 месяцев лечения. Если в течение этого времени сообщается только об одном положительном посеве мокроты, пациент все равно будет считаться излеченным, при условии, что за этим следовало по крайней мере три последовательных негативных посевы мокроты в течение не менее 56 дней.

Соотношение времени и получения отрицательного посева мокроты.

Культуральная эрадикация была обнаружена быстрее и более часто в группах фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV по сравнению с группой плацебо; среднее время получения отрицательного посева было от 83 до 125 дней для всех соединений.

Микробиологические тесты образцов мокроты, проведенные последовательно у пациентов, получавших фармацевтическую композицию с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, и у пациентов в группе плацебо, показали, что в группе фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV рост М. Tuberculosis существенно замедлился, фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV демонстрируют высокую эффективность против мультирезистентных штаммов М. Tuberculosis. В качестве диагностической находки было выявлено, что фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV влияют на штаммы М. Avium complex, полученные в посеве мокроты у 6% пациентов в группах фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV. Назначение фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV привело к значительному замедлению роста и полному прекращению роста в образцах, полученных после 24 недель лечения, при том, что у пациентов группы плацебо, в образцах которых также были обнаружены штаммы М. Avium complex, не было получено значительное замедление роста этих штаммов.

При лечении у пациентов в группах фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в течение длительного периода были зарегистрированы следующие побочные реакции, такие как "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головную боль; со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, запор, сухость во рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия; со стороны кожи - зуд, сыпь (макулезно-папулезная сыпь); со стороны сердечно-сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди; со стороны нервной системы - нарушение сна, нарушение памяти; со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия; со стороны опорно-двигательного аппарата - артралгия, миалгия.

Данные, полученные от больных туберкулезом, свидетельствуют, о том, что лечение фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV показало значительно меньше побочных эффектов, тяжесть и продолжительность которых были менее выраженными, чем у пациентов, получавших стандартное лечение. Количество побочных реакций у пациентов в группе плацебо существенно не отличалось от группы пациентов, получавших фармацевтическую композицию с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, поэтому можно сделать вывод, что большинство побочных реакций, зарегистрированных в исследовании, были вызваны агентами поддерживающей терапии.

Проведенный ретроспективный анализ по сравнению данных, полученных от исследований фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, и исследований, которые имели схожий дизайн и использовали аналогичные классы противотуберкулезных агентов в лечении мультирезистентного туберкулеза легких. Полученные сравнительные данные говорят о том, что статистически степень, тяжесть и продолжительность побочных реакций не имеют большого различия для исследований фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, что позволяет сделать вывод, что фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV являются безопасными и эффективными при применении у пациентов согласно стандартам лечения ВОЗ.

2) Ингаляционная форма фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

Исследования 02 Фазы II для фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III, Соединением IV было плацебо- контролируемыми, двойными слепыми, рандомизированными исследованиями для оценки антибактериальной активности, безопасности и переносимости ингаляционной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде порошка для ингаляций в дозе 50, 100 и 150 мг у пациентов с мультирезистентной формой легочного туберкулеза с подтвержденным бактериовыделением путем исследования мокроты больных.

Качественный состав исследуемого препарата в виде порошка не отличался от состава, использованного в исследовании 01 в соответствии с назначенной дозой.

Исследование проводилось в 2 последовательных этапа: 1 -й этап исследования (8 недель лечения фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV); и 2-й этап подтверждения эффективности (24 недели лечения фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV). После фазы лечения субъекты продолжали получать лечение согласно протоколам лечения больных мультирезистентным туберкулезом, утвержденных ВОЗ.

Исследование было направлено на изучение безопасности, переносимости и микробиологической эффективности фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в течение 24 недель после получения последней дозы Соединения I, II, III и IV, или плацебо.

Исследование состояло из двух этапов, которые скорее можно считать двумя отдельными исследованиями. Однако оба этапа имеют одинаковые методы, конечные точки и режимы назначения сопутствующей терапии.

После проведения скрининга (в течение первой недели исследования), пациенты, которые отвечали критериям исследования, были госпитализированы в лечебное учреждение. Режимы лечения, назначенные на этапах 1 и 2, приведены в таблице 12.

Таблица 12

Схемы лечения

Период скрининга (неделя -1)

Лечение не проводилось

Период лечения (8 недель на этапе 1 , 24 недели на этапе 2):

Недели 1 и 2: 300 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, или плацебо (1 : 1) назначают как в режиме ингаляций в дозе 150 мг 2 раза в сутки

Неделя 3-8 (стадия 1); Недели 3-24 (стадия 2): 150 мг Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV, или плацебо назначают как в режиме ингаляций 1 раз в сутки.

Длительность наблюдения (после отмены лечения) 24 недели для этапов 1 и 2

Наблюдение происходило в течение 6 месяцев, по крайней мере, в течение 3-х месяцев после получения первого отрицательного исследования мокроты.

Включение пациентов:

Согласно протоколу исследования, процедура блочной рандомизации проводилась отдельным расслепленным членом исследовательской команды. Распределение пациентов в группы лечения произошло следующим образом:

В группу Соединения I были рандомизированы 59 пациентов, в группу плацебо было включено 61 пациента, всего в исследовании приняло участие 120 пациентов. В группу Соединения II были рандомизированы 69 пациентов, в группу плацебо было включено 61 пациента, всего в исследовании приняло участие 130 пациентов. В группу Соединения III были рандомизированы 58 пациентов, в группу плацебо были включены 59 пациентов, всего в исследовании приняло участие 1 17 пациентов. В группу Соединения IV были рандомизированы 64 пациентов, в группу плацебо были включены 63 пациента, всего в исследовании приняли участие 127 пациентов. Пациенты, которые были рандомизированы, но при любой причине были исключены из исследования, были включены в анализ безопасности исследуемого препарата. Фармацевтическая композиция с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в ингаляционной форме была представлена как порошок для ингаляций, дозировкой по 100 и 150 мг. Плацебо было сделано должным образом: во внешнем виде исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV и плацебо не было различий.

Ингаляцию исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV/плацебо пациенты получали в течение 30 минут после завтрака. Агенты сопутствующей терапии принимались перед завтраком. Наблюдение за лечением проводилось в течение всех этапов лечения и периода наблюдения. Все препараты принимались под наблюдением врача.

Поддерживающая терапия.

Поддерживающая терапия состояла из 5 агентов, которые давали в течение 3-6 месяцев (по крайней мере, 3 месяца после первого документального подтверждения негативного посева мокроты): канамицин, офлаксацин, этионамид, пиразинамид и циклосерин/теризидон. Дозировки препаратов с агентами сопутствующей терапии приведены в таблице 13.

Таблица 13

Агенты, использующие в поддерживающей терапии у пациентов с

мультирезистентным туберкулезом в исследовании 02

Поддерживающая терапия для каждого участника исследования была назначена в соответствии с протоколами лечения туберкулеза ВОЗ. Некоторые заранее определенные изменения разрешались в случае отсутствия препарата или выявления у пациента непереносимости отдельных препаратов. Если изменения поддерживающей терапии были внесены по причине токсического эффекта препарата или в связи с угрозой безопасности здоровью пациента, об этом было сообщено как о побочной реакции. Дополнительные изменения (у заранее определенных участников исследования) были внесены по причинам выявления резистентности к препарату (в посеве мокроты, полученных во время лечения или наблюдения).

Лечение проводилось с использованием утвержденной терапии в течение всего исследования, со временем (то есть, когда пациент был выписан из больницы) по протоколу лечения под наблюдением участкового фтизиатра.

Индивидуальные схемы поддерживающей терапии могли меняться со временем (главным образом в течение периода наблюдения) с добавлением некоторых других агентов (в частности, пара-аминосалициловой кислоты и капреомицина). Такие изменения были более распространены в группе плацебо, чем в группах Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV.

Этап 1 : Целью этапа 1 было оценить антибактериальную активность, безопасность и переносимость фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV по сравнению с плацебо при добавлении к стандартной терапии лечения мультирезистентного туберкулеза в течении 8 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких после получения положительного посева мокроты.

Этап 2: Основная цель этапа 2 заключалась в том, чтобы продемонстрировать превосходство антибактериальной активности фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV по сравнению с плацебо, прилагаемой к стандартной терапии в течение 24 недель у пациентов с впервые выявленным туберкулезом легких после получения положительного посева мокроты.

Первичная конечная точка эффективности.

Первичной конечной точкой эффективности является время получения отрицательного посева мокроты при лечении фармацевтической с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, или плацебо. Этот параметр базировался на качественной оценке роста культуры на жидких и твердых средах с использованием образцов мокроты.

Подтверждением подавляющей эффективности было получение двух последовательных отрицательных посевов культуры мокроты, полученных в течение 8 недель на этапе 1 . На этапе 2 применялось такое же определение, однако негативные культуры должны были быть получены в интервале не менее 25 дней друг от друга.

Случаи при получении 1 -го отрицательного результата посева, после которого был получен 1 или 2 положительных результата, были определены в отчете как рецидив заболевания (во время лечения или после прекращения лечения).

Для тех, кто прекратил участие в исследованиях к концу периода наблюдения расчет времени получения отрицательного посева мокроты не применялся.

Полный курс лечения: полностью пролеченным считался пациент с мультирезистентным туберкулезом, который прошел лечение в соответствии с протоколом и имел постоянно отрицательные результаты посева мокроты (по крайней мере три последовательных результата) в течение последних 6 месяцев лечения. Если в течение этого времени сообщается только об одном положительном посеве мокроты, пациент все равно будет считаться излеченным, при условии, что за этим следовало по крайней мере три последовательных негативных посевы мокроты в течение не менее 56 дней.

Популяции пациентов в исследованиях.

Определены три группы:

1 . Пациенты основной группы: все рандомизированные пациенты, которые получали как минимум 1 дозу исследуемой фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV/плацебо.

2. Модифицированная группа, которая относится к основной группе лечения: подгруппа основной группы за исключением:

- пациенты, результаты посева которых не позволяют оценить первичную эффективность (т.е. нет положительного посева мокроты до первого приема или отсутствуют негативные данные посева мокроты в течение первых 8 недель после первого приема).

- субъекты, инфицированные штаммом М. tuberculosis DS или XDR или субъекты, для которых статус мультирезистентного туберкулеза не может быть подтвержден на основе результатов посева мокроты, полученных до рандомизации.

3. Относительно протокола исследования: подгруппа пациентов, у которых не было серьезных нарушений протокола.

Соотношение времени и получения отрицательного посева мокроты.

Культуральная эрадикация была обнаружена быстрее и более часто в группе фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV по сравнению с группой плацебо; среднее время получения отрицательного посева был от 48 до 1 10 дней для групп фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

Микробиологические тесты образцов мокроты, проведенные последовательно у пациентов, получавших фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединение IV, и у пациентов в группе плацебо показали, что в группе фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, рост М. Tuberculosis существенно замедлился. Фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV демонстрируют высокую эффективность против мультирезистентных штаммов М. Tuberculosis. Были получены данные о том, что фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV влияют на штаммы М. Avium complex, полученные в посеве мокроты у 6% пациентов в группе Соединения I, в 7% пациентов в группе Соединения II, у 5% пациентов в группе Соединения III и у 4% пациентов в группе Соединения IV. Назначение фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV привело к значительному замедлению роста и полному прекращению роста в образцах, полученных после 24 недели лечения, при том, что у пациентов группы плацебо, в образцах которых также были обнаружены штаммы M. Avium complex, не было получено значительное замедление роста этих штаммов.

При лечении у пациентов в группах фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в течение длительного периода были зарегистрированы следующие побочные реакции, такие как "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головную боль; со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, запор, сухость во рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия; со стороны кожи - зуд, сыпь (макулезно-папулезная сыпь); со стороны сердечно-сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди; со стороны нервной системы - нарушение сна, нарушение памяти; со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия; со стороны опорно-двигательного аппарата - артралгия, миалгия.

Следует заметить, что наиболее распространенной побочной реакцией среди всех групп пациентов и возникшей более чем у 83% пациентов был кашель различной степени тяжести. У некоторых пациентов возникла необходимость в применении противокашлевых препаратов центрального типа действия. Однако, следует отметить, что после определенного временного промежутка кашель становился менее выраженным и не нуждался в дополнительном лечении и не приводил к снижению уровня жизни пациентов.

Данные, полученные от больных туберкулезом, свидетельствуют, что лечение фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV выявило значительно меньше побочных эффектов, тяжесть и продолжительность которых были менее выраженными, чем у пациентов, получавших стандартное лечение. Количество побочных реакций у пациентов в группе плацебо существенно не отличалась от группы пациентов, получавших фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

Исследование III Фазы.

1 ) Пероральная и инъекционные формы:

В связи с тем, что в терапии мультирезистентного туберкулеза рутинно используются схемы, которые комбинируют пероральные и инъекционные схемы лечения туберкулеза, было принято решение о проведении одновременных исследований для фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, которые будут исследовать последовательное лечение пациентов инъекционными формами и пероральными формами фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

Были проведены открытые, рандомизированные, многоцентровые, контролируемые в параллельных группах, сравнительные исследования эффективности, безопасности и переносимости схемы лечения туберкулеза пероральной формой фармацевтической композиции Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде таблеток, покрытых пленочной оболочкой по 150 и 300 мг, изониазидом, рифампицином и этамбутолом для внутривенного введения и в инъекционной форме; фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде раствора для инъекций 300 мг во флаконе, изониазидом, рифампицином и этамбутолом для внутривенного введения в интенсивной фазе лечения у пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Качественный состав исследуемого препарата в оральной и инъекционной форме не отличался от состава, использованного в исследовании 01 и 02 в соответствии с назначенной дозы.

В исследование были включены 318 пациентов для Соединения I, 316 для Соединения II, 306 для Соединения III и 310 для Соединения IV в возрасте от 18 до 65 лет включительно, у которых впервые был диагностирован мультирезистентный туберкулез легких с бактериовыделением и деструкцией легочной ткани, что было подтверждено любым из методов исследования выделений из дыхательных путей и рентгенологическим исследованием, и у которых было получено информированное согласие на участие в исследовании.

Продолжительность исследований: общая продолжительность исследований составляла 18 месяцев (19 месяцев для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах), включая 3-дневный период скрининга и 8-недельный интенсивный период лечения (12-недельная интенсивная терапия для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах).

Все пациенты, включенные в исследование методом блочной рандомизации, распределялись на основную и контрольную группы в соотношении 1 :1 . Пациенты были распределены путем блочной рандомизации в группы по 159 пациентов для Соединения I, 158 пациентов для Соединения II, 153 пациентов для Соединения III и 155 пациентов для Соединения IV. Пациенты основной группы были отнесены к режиму лечения фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, также пациенты получали изониазид, рифампицин и этамбутол внутривенно и пиразинамид перорально в интенсивной фазе (первые 2 месяца), а затем в течение 4 месяцев они получали стандартное лечение с рифампицином, изониазидом и фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV. Пациенты контрольной группы получали химиотерапию противотуберкулезными препаратами per os. Длительность наблюдения составила 6 месяцев после окончания лечения.

Пациентов основной и контрольной группы во время интенсивной фазы госпитализировали в специализированное медицинское учреждение. Во время интенсивной фазы лечения мониторинг осуществлялся сотрудниками учреждения, в течение амбулаторного периода лечения препараты один раз в месяц передавались участковому специалисту, который осуществлял надзор за пациентами для наблюдения за приемом препарата и выявления побочных реакций. Госпитализация могла быть продолжена при наличии показаний и в соответствии со стандартами медицинской помощи. Во время интенсивной фазы лечения в течение первых двух месяцев исследования пациенты после приема 15 доз каждого препарата интенсивной фазы, а затем в течение следующих 4 месяцев - после приема каждых 30 доз каждого препарата, пациенты проходили комплексный обзор на 3-м и 6-м месяцах от начала лечения. При каждом визите (и, при необходимости, по клиническим показаниям чаще) у каждого пациента было отобрано 2 образца мокроты для проведения бактериоскопического исследования и 1 образец для посева на твердую среду. Рентгенография проводилась при поступлении в лечебное учреждение, а также в конце интенсивной фазы лечения (после приема пациентами 60 доз каждого из лекарственных средств для пациентов) и в конце периода наблюдения. Компьютерная томография выполнялась, если это было необходимо в спорных случаях.

Продолжительность интенсивной фазы для пациентов, не достигших абациляции после 60 дозы была увеличена до 90 доз в пероральной форме или инъекционной форме фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, изониазида, этамбутола, рифампицина и пиразинамида (продолжительность интенсивной фазы для таких больных составляла 3 месяца (60 доз инъекционных препаратов и 30 доз таблетированных препаратов))

Поддерживающая терапия: фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, изониазид и рифампицин для перорального применения в течение 4 месяцев (120 доз).

Терапевтические дозы определяли индивидуально, в зависимости от веса тела пациента и степени тяжести процесса - колебания ежедневных доз для Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV были от 50 до 450 мг для пероральной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, и от 50 до 450 мг для инъекционной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV

Цель исследования:

Целью данного исследования является сравнение схем лечения, содержащих внутривенные противотуберкулезные фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде раствора для инъекций, изониазида, в виде раствора для инъекций, рифампицина, в виде лиофилизата для приготовления раствора для инфузий, этамбутола, в виде раствора для инъекций; и фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, изониазид, рифампицин, и пиразинамид в форме таблеток для внутреннего применения, с точки зрения безопасности, клинической эффективности и фармакоэкономики в лечении пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Первичной конечной точкой эффективности исследований было: процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа мокроты на М. Tuberculosis (прекращение бактериального выделения по данным микроскопического исследования мокроты и посева) к концу 1 -го месяца от начала лечения (после приема пациентом 30 доз каждого препарата) в основной и контрольной группах. При бактериологическом анализе полученных показателей результатов микроскопического анализа мокроты и результатов посева на твердую среду было обнаружено, что лечение фармацевтической композицией с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV вместе с комплексной терапией привело к значительному подавлению роста М. Tuberculosis, по сравнению с контрольной группой. При анализе штаммов, выявленных у пациентов основной и контрольной группы, было выявлено, что в основной группе количество резистентных штаммов пропорционально понижалось согласно времени лечения, при том, что в контрольной группе количество резистентных штаммов в течение исследования не претерпело существенных изменений.

По результатам статистического анализа исследование показало, что количество пациентов, которые были включены в исследование в основной группе, достигло первичной конечной точки в 86%, по сравнению с 54% в контрольной группе для Соединения I; 85% и 55% для Соединения II; 84 % и 51 % для Соединения III; 87% и 52% для Соединения IV. Согласно анализу вторичных критериев эффективности исследование показало, что в основных группах временной промежуток до достижения отрицательного результата анализа на М. Tuberculosis (микроскопическое исследование мокроты и посев) был значительно меньше и составлял в среднем 18.5±1 ,2 дней по сравнению с временным промежутком в контрольной группе, составил 28.2±0,9 дней для Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV. Также оценивалось комбинированное процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа на М. Tuberculosis и клиническим улучшением (по данным клинической оценки и по данным рентгенографии (компьютерной томографии) органов грудной клетки через 2 месяца после начала лечения (после приема пациентом по 60 доз каждого из препаратов интенсивной фазы). По данным анализа процентное соотношение у пациентов основной и контрольной группы составило 79.1 % и 56% для Соединения I, 80,1 % и 52% для Соединения II, 83,2% и 54% для Соединения III и 82, 3% и 51 ,5% для Соединения IV. Таким образом, согласно результатам исследования можно сделать вывод, что назначение фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединение III и Соединением IV в комплексе со стандартным лечением мультирезистентного деструктивного легочного туберкулеза привело к значительному улучшению показателей лечения, уменьшению длительности лечения, улучшению результатов микробиологических исследований, и уменьшению общей продолжительности лечения.

В течение исследований изучалась количество, тяжесть и продолжительность побочных эффектов у пациентов обеих групп. В ходе исследования было обнаружено 3 случая тяжелых непредсказуемых побочных реакций, которые привели к изменениям в режиме лечения и привели к увеличению госпитализации. 1 случай (повышение уровня печеночных ферментов более 3-х норм) был зафиксирован в основной группе, 2 (снижение уровня гемоглобина ниже 80 г/л и острый панкреатит) случаи в контрольной группе для Соединения I. В исследованиях для Соединения II, Соединения III и Соединения IV не было зафиксировано тяжелых побочных реакций. Все случаи тяжелых непредсказуемых побочных реакций завершились благополучно и не привели к инвалидизации пациентов.

В общем у пациентов наблюдались следующие побочные реакции: со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, запор, сухость во рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия; со стороны сердечно- сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди, со стороны нервной системы - нарушение сна, нарушение памяти; со стороны кроветворной системы: гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия; со стороны опорно-двигательного аппарата - артралгия, миалгия; "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головную боль, со стороны кожи - зуд, сыпь (макулезно-папулезная сыпь);

Количество и тяжесть побочных реакций не несли значительные изменения в основной и контрольной группе.

2) Ингаляционная форма:

Были проведены открытые, рандомизированные, многоцентровые, контролируемые в параллельных группах, сравнительные исследования эффективности, безопасности и переносимости схемы лечения туберкулеза ингаляционной формы фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV, в виде порошка для ингаляции в дозе по 100 и 150 мг в комбинации с изониазидом, рифампицином и этамбутолом для перорального введения в интенсивной фазе лечения у пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Всего в исследование было включено 212 пациентов для изучения Соединения I, 208 пациент для изучения Соединения II, 214 пациентов для изучения Соединения III и 202 пациентов для изучения Соединения IV. Включались пациенты в возрасте от 18 до 65 лет включительно, в которых впервые был диагностирован мультирезистентный туберкулезом легких с бактериовыделением и деструкцией легочной ткани, что было подтверждено любым из методов исследования выделений из дыхательных путей и рентгенологическим исследованием, и в которых получено информированное согласие на участие в исследовании.

Продолжительность исследования: общая продолжительность исследования составила 12 месяцев (18 месяцев для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах), включая 3-дневный период скрининга и 8-недельный интенсивный период лечения (12-недельная интенсивная терапия для пациентов, не достигших абациляции на 60 дозах).

Все пациенты, включенные в исследование методом блочной рандомизации, распределялись на основную и контрольную группы в соотношении 1 :1 . Пациенты были распределены путем блочной рандомизации в группы по 106 человек для исследования для Соединения I, по 104 человека для Соединения II, 107 человек для Соединения III и 101 человек для Соединения IV. Пациенты основной группы были отнесены к режиму лечения фармацевтической композицией из Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде порошка для ингаляций с дозировкой по 100 и 150 мг, также пациенты получали изониазид, рифампицин и этамбутол и пиразинамид перорально в интенсивной фазе ( первые 2 месяца), а затем в течение 4 месяцев они получали стандартное лечение с рифампицином, изониазидом и фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде порошка для ингаляций. Пациенты контрольной группы получали химиотерапию с противотуберкулезными препаратами per os. Длительность наблюдения составила 6 месяцев после окончания лечения.

Пациентов основной и контрольной группы во время интенсивной фазы было госпитализировано в специализированное медицинское учреждение. Во время интенсивной фазы лечения мониторинг осуществлялся сотрудниками учреждения, в течение амбулаторного периода лечения препараты один раз в месяц были переданы участковому специалисту, который будет осуществлять наблюдение за пациентом для наблюдения за приемом препарата и выявления побочных реакций. Госпитализация могла быть продолжена при наличии показаний и в соответствии со стандартами медицинской помощи. Во время интенсивной фазы лечения в течение первых двух месяцев исследования пациенты после приема 15 доз каждого препарата интенсивной фазы, а затем в течение следующих 4 месяцев - после приема каждые 30 доз каждого препарата пациенты проходили комплексный обзор на 3-м и 6-м месяцах от начала лечения. При каждом визите (и, при необходимости, по клиническим показаниям чаще) пациенту было отобрано 2 образца мокроты для проведения бактериоскопического исследования и 1 образец для посева на твердую среду. Рентгенография проводилась при поступлении в лечебное учреждение, а также в конце интенсивной фазы лечения (после приемом пациентами 60 доз каждой из лекарственных средств для пациентов) и в конце периода наблюдения. Компьютерная томография выполнялась, если это было необходимо в спорных случаях.

Продолжительность интенсивной фазы для пациентов, не достигших абациляции после 60 дозы была увеличена до 90 доз фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде порошка для ингаляции, и в оральной форме препаратов с изониазидом, этамбутолом, рифампицином и пиразинамидом (длительность интенсивной фазы для таких больных составляла 3 месяца).

Поддерживающая терапия: фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде порошка для ингаляций, изониазид и рифампицин для орального применения в течение 4 месяцев (120 доз).

Терапевтические дозы определяли индивидуально, в зависимости от веса тела пациента и степени тяжести процесса (колебания ежедневных доз для Соединения I, Соединения II, Соединения III и Соединения IV были от 50 до 150 мг).

Цель исследования: целью данного исследования является оценка схемы лечения, содержащий таки препараты как: фармацевтические композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в форме порошка для ингаляций, изониазид, рифампицин, и пиразинамид в форме таблеток для внутреннего применения с точки зрения безопасности, клинической эффективности и фармакоэкономики в лечении пациентов с распространенным деструктивным мультирезистентным туберкулезом легких с подтвержденным бактериовыделением.

Первичной конечной точкой эффективности исследования было: процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа мокроты на М. Tuberculosis (прекращение бактериального выделения по данным микроскопического исследования мокроты и посева) к концу 1 -го месяца от начала лечения (после приема пациентом 30 доз каждого препарата) в основной и контрольной группах.

При бактериологическом анализе полученных показателей результатов микроскопического анализа мокроты и результатов посева на твердую среду было обнаружено, что лечение фармацевтической композицией из Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV вместе с комплексной терапией привело к значительному подавлению роста М. Tuberculosis, по сравнению с контрольной группой. При анализе штаммов, выявленных у пациентов основной и контрольной группы, было выявлено, что в основной группе количество резистентных штаммов пропорционально понижалось согласно времени лечения, при том, что в контрольной группе количество резистентных штаммов в течение исследования не несла существенные изменения.

По результатам статистического анализа исследование показало, что количество пациентов, было включено в исследование в основной группы, достигла первичной конечной точки в 78%, по сравнению с 51 % в контрольной группе для Соединения I, соотношение 74% до 49% для Соединения II, соотношение 76% к 50% для Соединения III, соотношение 71 % до 53% для Соединения IV. Согласно анализу вторичных критериев эффективности исследование показало, что в основной группе временной промежуток до достижения отрицательного результата анализа на М. Tuberculosis (микроскопическое исследование мокроты и посев) был значительно меньше и составлял в среднем 15,2±1 ,3 дней по сравнению с временным промежутком в контрольной группе, составил 24.1 ±1 , 1 дней для Соединения I, 16, 1 ±1 ,5 дней по сравнению с 25.1 ±1 ,2 дней для Соединения II, 14,2±1 , 1 дней по сравнению с 23.1 ±1 ,0 дней для Соединения III, 15,2±1 ,3 дней по сравнению с 24.1 ±1 , 1 дней для Соединения IV. Также оценивалось комбинированное процентное соотношение пациентов с отрицательным результатом анализа на М. Tuberculosis та клиническим улучшением (по данным клинической оценки и по данным рентгенографии (компьютерной томографии) органов грудной клетки через 2 месяца после начала лечения (после приема пациентом по 60 доз каждого из препаратов интенсивной фазы). По данным анализа процентное соотношение у пациентов основной и контрольной группы составило 81.1 % и 44% для Соединения I, 79.2% и 45% для Соединения II, 83.1 % и 43% для Соединения III и 82,6% и 51 % для Соединения IV. Таким образом, согласно результатам исследования можно сделать вывод, что назначение фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в комплексе к стандартному лечению мультирезистентными деструктивного легочного туберкулеза привело к значительному улучшению показателей лечения, уменьшению длительности лечения, улучшению результатов микробиологичних исследований, и уменьшению общей продолжительности лечения.

Во время исследований изучалось количество, тяжесть и продолжительность побочных эффектов у пациентов обеих групп для фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV. В ходе исследования было обнаружено 2 случая тяжелых непредсказуемых побочных реакций, которые привели к изменениям в режиме лечения и привели к увеличению госпитализации. 1 случай (астмоподобный синдром) был зафиксирован в основной группе, 1 (снижение уровня тромбоцитов ниже 80/10 ⁹ /л) случай в контрольной группе пациентов, находившихся в исследовании Соединения III. Все случаи тяжелых непредсказуемых побочных реакций завершились благополучно и не привели к инвалидизации пациентов.

В общем у пациентов наблюдались следующие побочные реакции: общей побочной реакцией во всех группах всех исследований у пациентов был кашель различной степени тяжести, 81 % пациентов высказывали жалобы на возникновение кашля. Следует заметить, что кашель исчезал в течение определенного времени (в среднем в течение 2 недель) после регулярного приема препарата. Возникновение кашля является побочной реакцией, которую можно связать с приемом фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV в виде порошка для ингаляций, в то время, когда все другие реакции могут быть связаны с назначением препаратов сопутствующей терапии.

Другие побочные реакции:

1 ) со стороны желудочно-кишечного тракта - тошнота, рвота, сухость во рту, дискомфорт в области брюшной полости, снижение аппетита, повышение уровня печеночных ферментов, желтуха, гипербилирубинемия;

2) со стороны сердечно-сосудистой системы - артериальная гипертензия, сердцебиение, боль в груди,

3) со стороны нервной системы - нарушение сна, нарушение памяти;

4) со стороны кроветворной системы - гемолитическая анемия, тромбоцитопения, агранулоцитоз, эозинофилия;

5) со стороны опорно-двигательного аппарата- артралгия, миалгия

6) общие - "гриппоподобный синдром", включая лихорадку, озноб, головная боль

7) со стороны кожи - зуд, сыпь (макулезно-папулезная сыпь);

Количество и тяжесть побочных реакций не имели значительных различий в основной и контрольной группе для фармацевтической композиции с Соединением I, Соединением II, Соединением III и Соединением IV.

Таким образом, согласно приведенных выше результатов клинических исследований, можно сделать вывод о том, что заявленная фармацевтическая композиция является эффективной в использовании для лечения ТБ, в частности для лечения ТБ, который был вызван возбудителями, резистентными по отношению к известным противотуберкулезным препаратам. В частности, достоверным антимикобактериальным действием обладают варианты осуществления заявленной фармацевтической композиции, предназначенные для перорального, ингаляционного и инъекционного введения.

Суммируя данные доклинического и клинического исследований можно сделать вывод, о том, что использование фармацевтической композиции согласно техническому решению, которая содержит как активный ингредиент Соединение I или Соединение II, повышает эффективность лечения туберкулеза, в частности, туберкулеза, который был вызван возбудителями, резистентными по отношению к известным противотуберкулезным препаратам, улучшает качество жизни больных за счет уменьшения срока лечения болезни, пониженной токсичности фармацевтической композиции, уменьшения возможности рецидива заболевания, улучшения показателей излечимости и выживаемости больных ТБ, в частности, больных резистентным ТБ.

Из приведенных результатов исследований видно, что:

1 ) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет антимикобактериальную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv при аэробных условиях.

2) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет достоверную внутриклеточную активность в отношении штамма М. tuberculosis H37Rv.

3) Фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению проявляет достоверно большое антимикобактериальное действие по пяти резистентных штаммах М. tuberculosis: INH-R1 , INH-R2, RIF-R1 , RIF-R2, FQ- R1 .

4) Фармацевтическая композиция заявленным техническим решением не является цитотоксичной, имеет относительно небольшой показатель связываемое™ с белками крови, легко проникает в ткани и клетки и легко выводится из организма, что способствует большей эффективности и безопасности при использовании в лечении ТБ, в частности, лечении резистентного ТБ.

Приведенное выше свидетельствует о том, что фармацевтическая композиция согласно заявленному техническому решению является высокоэффективной и перспективной для внедрения в медицинскую практику в качестве средства для лечения ТБ, в частности, резистентного ТБ.

Приведенные примеры осуществления технического решения только иллюстрируют его и никак не ограничивают.