【발명의 명칭】

호모에고놀을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약 학적 조성물

【기술분야】

본 발명은 호모에고놀 (homoegonol ) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강식품에 관한 것이다.

[배경기술】

만성폐쇄성 폐질환 (chronic obstruct ive pulmonary di sease , COPD)은 폐의 비정상쩍인 염증반웅으로 기도가 좁아지는 폐질환으로 하나이다. 만성폐쇄성 폐질환은 주로 유해입자나 가스의 흡입에 의해 발생하게 되며， 특히 흡연이 주요 원인으로 알려져 있다. 현재 우리나라의 40세 이상 만성폐쇄성 폐질환 유병률은 해마다 증가하는 추세이며， 또한 전 세계적으로 다른 질환의 유병률 및 사망를은 감소 되는 반면, 만성폐쇄성 폐질환은 유일하게 유병률과 사망률이 증가하는 질환으로， 2020년에는 세계적으로 3번째 사망원인이 될 것으로 추정하고 있다. 흡연은 폐조직내 강력한 자극물질로 작용하여， 다양한 전염증 인자， 성장인자, 산화물질 및 화학 주성 인자들의 생성올 증가시키며， 염증성 신호전달체계를 활성화시켜 호중구 및 대식세포를 비롯한 많은 염증세포의 유주를 촉진시켜 폐 염증을 더욱 악화시키게 된다. 담배연기 및 염증세포들에서 유래 된 기질금속단백질분해효소 (metal loproteinase)와 같은 단백분해 효소가 활성화되어 폐 간질 조직 내 구성물을 파괴하게 된다. 이는 결국 폐 조직의 비정상적인 변화 즉 기도벽의 비후， 폐섬유화를 야기하여 폐기능 저하를 야기하게 된다. 흡연은 기도와 폐실질에 염증을 일으키며， 폐의 염증으로 발생된 많은 종류의 산화물질 (oxi dant ) , 단백분해효소 (protease)， 사이토카인 (cytokine)이 폐기종성 폐실질의 파괴， 폐혈관 재형성, 폐고혈압 등의 만성폐쇄성 폐질환의 증상을 야기시키는 것으로 알려져 있다 (Sethi JM, Rochester CL.， Clin. Chest Med. 21:67-86, 2000； D'Armiento J, et al. , Cell 71 :955-961, 1992； Selman M, et al. , Am. J. Physiol. 271:L734-L743, 1996； Segura-Valdez L, et al.， Chest 117:684- 694, 2000； Finlay GA, et al. , Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156:240-247， 1997； Hautamaki RD, et al. , Science 277 :2002ᅳ 2004, 1997； Wright 儿， et al. , Inhalation toxicology 10:969-994， 1998). 특히 폐기종은 염증세포에서 분비된 단백분해효소가 주변 조직을 파괴시켜 발생한다고 생각되고 있으며， 최근의 연구에 의하면 폐포대식세포와 중성구에서 분비된 應 Ps가 폐실질 파괴에 관여하는 중요한 단백질 분해효소로 여겨지고 있다 (Ohnishi K, et al. , Lab. Invest . 78:1077-1087, 1998； Frankenberger M, et al. , Mol. Med. 7:263-270, 2001).

이에 관한 몇몇 연구들은， 흡연으로 인한 염증과 폐기종의 소견이 醒 P-12 넉아웃 마우스 (knock-out mouse)에서는 관찰되지 않았으며 (Hautamaki RD, et al . , Science 277 :2002-2004, 1997) , 만성폐쇄성 폐질환 환자의 폐포 대식세포에서는 醒 P-12의 분비가 증가했고 (Finlay GA, et al. , Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156:240-247, 1997), 만성폐쇄성 폐질환 환자의 기관지 폐포세척액 (BAL fluid)에서는 匪 P-2와 醒 P-9의 증가를 보였다 (Segura-Valdez L, et al. Chest 117:684-694, 2000)고 보고하고 있다. 또한， 최근에는 흡연으로 유도된 기니아ᅳ 피그 폐기종 모델에서 匪 P 억제제 투여가 폐기종 발생을 약화시켰다 (Selman M, et al. , Chest 123:1633-1641, 2003)고 보고되었다. 그러나 이러한 만성폐쇄상 폐질환의 폐실질 파괴와 폐고혈압은 비가역적이며 점차 진행하는 것이 특징이며， 아직까지 어떠한 치료도 이의 진행을 막을 수 있는 것은 없는 상태이다 (National Heart , Lung, and Blood Institute. Morbidity & . Mortality: Chart book on Cardiovascular , Lung, and Blood Diseases. Global Strategy for the Diagnosis, Management , and Prevent ion of Chronic Obstructive Pulmonary Disease, 2003) . 따라서, 만성폐쇄성 폐질환의 예방 및 치료를 위하여， 질병의 주요 원인인 폐 염증의 개선을 중점에 두고 다양한 물질들의 개발이 이뤄져 오고 있다. 천식 치료와 유사하게 만성폐쇄성 폐질환의 염증개선을 위해 스테로이제제 및 항생제의 치료는 매우 매력적인 치료방법이 될 수 있다. 그러나 스테로이드제제 및 항생제의 경우， 면역억제 및 면역관용 등으로 인한 많은 부작용이 발생할 수 있기 때문에 장기간 치료를 필요로 _ᅵ 하는 만성폐쇄성 폐질환 환자에게는 적합하지 않다. 따라서， 기존의 치료물질보다 치료 및 예방효과가 크며， 또한 부작용이 적은 치료물질의 개발이 대두 되고 있다. 때죽나무는 면역조절 및 항산화활성, 항염증， 항암활성에 대하여 알려진 바가 있으나 (Lee and Lim 2010 , 2013 Har ikr i shnan et al . 2011 Yun et al . 2007) , 때죽나무에서 유래된 호모에고놀의 만성폐쇄성 폐질환에 관한 연구는 보고된 바가 없다. 이에， 본 발명자들은 생체 내 부작용 및 안정성을 고려하여 인체에 안전한 천연물 유래 물질로부터 만성폐쇄성 폐질환 치료제를 개발하기 위해 노력한 결과， 호모에고놀이 만성폐쇄성 폐질환 진행에 매개 인자로 작용하는 호중구의 수를 감소시키고， 염증세포의 이동을 촉진하는 MCP— 2 및 염증성 사이토카인인 TNF- α생성을 억제함을 확인함으로써 상기 호모에고놀은 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 밝함으로써 본 발명을 완성하였다. 【발명의 상세한설명】

[기술적 과제】

본 발명은 호모에고놀 (homoegonol ) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 제공하기 위한 것이다.

【기술적 해결방법】

상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 하기 화학식 1로 기재되는 호모에고놀 (homoegonol ) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 만상폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다: [화학식 1]

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 기재되는 호모에고놀의 제조방법을 제공한다.

아울러 , 본 발명은 상기 화학식 1로 기재되는 호모에고놀 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 개선용 건강 기능 식품을 제공한다.

【유리한 효과]

본 발명의 호모에고놀 (homoegonol )은 담배추출물로 유도된 만성폐쇄성 폐질환 동물 모델에서 만성폐쇄성 폐질환 진행에 매개 인자로 작용하는 호중구의 감소효과를 나타냈고， 염증세포들의 이동을 촉진하는 MCP-2 및 염증성 사이토카인인 TNF- α의 생성올 억제하여 폐조직 내 염증세포의 수를 현저하게 감소시켰다. 따라서， 호모에고놀은 염증매개체의 억제를 통해 효과적으로 폐조직 내 염증 반웅을 유의적으로 억제하므로 만성폐쇄성 폐질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로싸 유용하게 이용할 수 있다.

[도면의 간단한 설명】

도 1은 호모에고놀 (homoegonol )의 제조 과정을 나타낸 그림이다.

【발명의 실시를 위한 최선의 형태】

본 발명에서 사용되는 용어를 설명한다. 본 발명에서 사용되는 용어 "추출물"은 당업계에서 조추출물 (crude extract )로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 하기 분획물도 포함한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "분획물"은 추출 시 이용한 용매와 다른 용매를 이용하여 본 발명에서 목적으로 하는 활성을 분획하여 얻은 활성 분획물 ( fract i on)올 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방' '은 본 발명의 조성물의 투여로 만성폐쇄성 폐질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선' '은 본 발명의 조성물의 투여로 만성폐쇄성 폐질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다 .

본 발명에서 사용되는 용어 "투여 "는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "개체 "는 본 발명의 조성물을 투여하여 만성폐쇄성 폐질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간， 원숭이， 개， 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다. 이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 호모에고놀 (homoegonol ) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 치료용 약학작 조성물을 제공한다.

상기 호모에고놀은 하기 화학식 1로 기재되는 "3-[2-(3 , 4-디메특시페닐 )-7- 메톡시벤조퓨란 -5-일]프로판 -1-올' '인 것이 바람직하고， 때죽나무 ( 5 jT y ^' < /2/c )로부터 분리된 스티락스리그놀리드 (styraxl ignol i de) A 화합물의 비당체인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며 , 화학적으로 합성한 것도 사용할 수 있다.

[화학식 1]

상기 화학식 1로 기재되는 호모에고놀은 하기와 같은 방법으로 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

1) 때죽나무 ( 5 ra japonica)^ 물， d-C ₂ 의 저급 알코을 또는 이들의 ^' 흔합용매로 추출하는 단계 ;

2) 상기 단계 1)의 추출물을 추가로 핵산 및 에틸아세테이트를 차례로 가하여 계통 분획하는 단계;

3) 상기 단계 2)에서 에틸아세테이트 층을 분리하고 남은 수용액 충에 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 스티락스리그놀리드 A 화합물을 수득하는 단계; 및 4) 상기 단계 3)에서 스티락스리그놀리드 A로부터 당류를 제거하여 상기 화학식 1로 기재되는 화합물을 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조될,수 있으나 이에 한정되지.않는다.

상기 때죽나무는 전초를 사용할 수 있고， 줄기 및 나무껍질을 사용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

이하, 본 발명의 상기 제조방법을 단계별로 설명한다.

먼저， 단계 1)은 때죽나무 CS japonic^ ^ 물， d-C ₂ 의 저급 알코을 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 단계이다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 때죽나무는 재배한 것， 채취한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 때죽나무는 줄기 및 나무 ¾질을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 추출 용매는 물， 알코을 또는 이들의 흔합물， 바람직하게는 d 내지 C ₂ 의 저급 알코을 또는 이들의 흔합 용매로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며， 상기 d-Cs의 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 더욱 바람직하고， 메탄올인 것이 가장 바람직하나 이에 한정되지 않는다. ,

상기 추출 용매의 양은 비 건조 중량의 1 내지 50 배인 것이 바람직하나， 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 방법은 열수추출， 침지추출， 환류 넁각 추출 및 초음파 추출 등 당업계의 통상적인 추출방법은 모두 사용될 수 있으며， 1회 내지 5회 추출될 수 있다. 추출시 은도는 10 ^° C 내지 100 ^° C 인 것이 바람직하며 상온인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 시간은 1일 내지 7일인 것이 바람직하고， 3일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 때죽나무 추출물을 제조하는 방법은 초임계추출， 아임계추출, 고온추출, 고압추출 또는 초음파추출법 등의 추출장치를 이용한 방법 또는 XAD 및 HP-20을 포함한 흡착 수지를 이용하는 방법 등 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며， 가온하며 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하나， 이에 한정되지 않는다. 상기 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며， 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 수득한 추출액의 농축은 감압농축의 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 또한， 건조는 감압건조, 진공건조， 비등건조， 분무건조， 상온건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

다음으로， 단계 2)는 단계 1)에서 수득한 추출물로부터 유기용매를 가하여 물 분획물을 수득하는 단계이다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 유기용매는 핵산 또는 에틸아세테이트인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다 . 상기 분획물은 때죽나무 추출물을 물에 현탁시킨 후， 핵산， 에틸아세테이트로 순차적으로 계통 분획하여 수득한 핵산 분획물 _, 에틸아세테이트 분획물， 또는 물 분획물 중 어느 하나인 것이 바람직하며， 물 분획물인 것이 가장 바람직하나 , 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물은 상기 때죽나무 추출물로부터 분획 과정을 1 내지 5회， 바람직하게는 3회 반복하여 수득할 수 있고， 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정되지않는다 .

다음으로， 단계 3)은 단계 2)에서 에틸아세테이트 충을 분리하고 남은 수용액 층에 Diaion HP-20 컬럼 크로마토그래피 및 RP C—18 컬럼 크로마토그래피를 순차적으로 수행하여 상기 화학식 1의 스티락스리그놀리드 A 화합물을 수득하는 단계이다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 크로마트그래피는 메탄올 용매를 사용하여 수행되며 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 구체적인 실시예에서， 본 발명자들은 상기 합성한 호모에고놀의 만성폐쇄성 폐질환 유도 마우스에 대한 기관지 폐포세척액 내 염증 세포 수 감소 효과를 확인하기 위하여， 정상대조군， 만성폐쇄성 폐질환 유도군 (음성대조군)， 만성폐쇄성 폐질환 유도 군에 호모에고놀을 투여한 실험군의 기관지 폐포세척액 내 염증 세포 수의 변화를 측정하였다. 그 결과， 호모에고놀을 경구투여한 음성대조군의 경우 현저한 염증 세포 수의 감소를 확인하였으며， 만성폐쇄성 폐질환 진행에 중요한 매개 인자로 작용하는 호중구의 수에 있어서 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다 (표 1 참조) .

또한， 본 발명자들은 호모에고놀의 투여에 따른 만성폐쇄성 폐질환 유도 마우스에 대한 기관지 폐포세척액 내 D4 ⁺ 및 Neutrophi ls Gr-1 ⁺ 의 생성 억제 효과를 확인하기 위하여， 면역 형광염색을 실시하였다. 그 결과， 호모에고놀을 경구투여한 음성대조군의 경우 현저한 4 ⁺ 및 Neutrophi ls Gr-1 ⁺ 의 생성 억제 효과를 확인하였다 (표 2 참조) .

또한， 본 발명자들은 호모에고놀의 만성폐쇄성 폐질환 유도 마우스에 대한 폐조직 내 세포 수 감소 효과를 확인하기 위하여， 정상대조군, 음성대조군， 호모에고놀을 투여한 실험군의 폐조직 내 세포 수의 변화를 측정하였다. 그 결과， 호모에고놀을 경구투여한 음성대조군의 경우 세포 수의 효과적인 억제를 확인하였다 (표 3 참조) .

또한, 본 발명자들은 호모에고놀의 만성폐쇄성 폐질환 유도 마우스에 대한 기관지 폐포세척액 내 염증성 사이토카인으로써 염증성 신호전달 체계를 활성화시켜주는 TNF- α와 다양한 염증세포를 염증부위로 이주시키는 매개체인 MCP- 2의 생성 감소 효과를 확인하기 위하여, 정상대조군， 음성대조군, 호모에고놀을 투여한 실험군의 기관지 폐포세척액 내 TNF- α와 MCP-2의 생성 변화를 측정하였다. 그 결과， 호모에고놀을 경구투여한 음성대조. 의 경우 TNF- a와 MCP-2의 생성 감소의 효과적인 억제를 확인하였다 (표 4 및 5 참조)，

따라서， 본 발명의 호모에고놀은 담배추출물로 유도된 만성폐쇄성 폐질환 동물 모델에서 만성폐쇄성 폐질환 진행에 매개 인자로 작용하는 호증구의 감소효과를 나타냈고， 염증세포들의 이동을 촉진하는 MCP-2 및 염증성 사이토카인인 TNF- a의 생성을 억제하여 폐조직 내 염증세포의 수를 현저하게 감소시켰다. 따라서， 호모에고놀은 염증매개체의 억제를 통해 효과적으로 폐조직 내 염증 반웅을 유의적으로 억제하므로 만성폐쇄성 폐질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로써 유용하게 이용할 수 있다. 본 발명은 상기 화학식 1로 기재되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 뿐만 아니라， 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물， 수화물을 모두 포함한다.

본 발명의 상기 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 ( free ac id)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산， 질산, 인산， 황산， 브롬화수소산， 요드화수소산， 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트， 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류， 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트， 피로설페이트, 바이설페이트， 설파이트， 바이설파이트， 니트레이트， 포스페이트， 모노하이드로겐 포스페이트， 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트， 피로포스페이트 클로라이드， 브로마이드， 아이오다이드， 플루오라이드， 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트， 카프릴레이트， 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트， 헵타노에이트， 프로피을레이트, 옥살레이트， 말로네이트， 석시네이트， 수베레이트， 세바케이트, 푸마레이트， 말리에이트, 부틴- 1， 4-디오에이트， 핵산 -1， 6-디오에이트, 벤조에이트， 클로로벤¾에이트, 메틸벤조에이트， 디니트로 벤조에이트， 하이드록시벤조에이트， 메톡시벤조에이트， 프탈레이트， 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트， 를루엔설포네이트， 클로로벤젠설포네 ᅵ트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트， 시트레이트， 락테이트， β-하이드록시부티레이트， 글리콜레이트, 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법， 예를 들면， 본 발명의 상기 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고， 이 염을 수흔화성 유기 용매， 예를 들면 메탄올, 에탄올， 아세톤 ^는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.

동량의 화학식 1로 표시되는 상기 화합물 및 물 중와 산 또는 알코올을 가열하고， 이어서 이 흔합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염올 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고， 비용해 화합물 염을 여과하고， 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약 상 적합하다. 또한， 이에 대웅하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염 (예, 질산은)과 반웅시켜 얻는다. 본 발명의 조성물의 치료적으로 유효한 양은 여러 요소， 예를 들면 투여방법， 목적부위， 환자의 상태 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서， 인체에 사용 시 투여량은 안전성 및 효율성을 함께 고려하여 적정량으로 결정되어야한다. 동물실험을 통해 결정한 유효량으로부터 인간에 사용되는 양을 추정하는 것도 가능하다. 유효한 양의 결정시 고려할 이러한 사항은， 예를 들면 Hardman and Limbird, eds. , Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th ed. (2001) , Pergamon Press； 및 E.W. Mart in ed. , Remington' s Pharmaceutical Sciences, 18th ed.(1990), Mack Publ ishing Co.에 기술되어있다. 본 발명의 조성물은 또한 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제， 부형제 또는 둘 이상의 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 조성물을 생체 내 전달에 적합한 것이면 특별히 제한되지 않으며， 예를 들면， Merck Index , 13th ed. , Merck & Co . Inc .에 기재된 화합물， 식염수， 멸균수， 링거액， 완충 식염수， 덱스트로스 용액， 말토 덱스트린 용액, 글리세를, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 흔합하여 이용할 수 있으며， 필요에 따라 항산화제， 완층액， 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한， 희석제， 분산제 , 계면활성제， 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액 , 현탁액， 유탁액 등과 같은 주이용 제형， 환약， 캡슐， 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당 분야의 적정한 방법으로 또는 Remington ' s Pharmaceut i cal Science(Mack Publ i shing Company, East on PA, 18th , 1990)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 조성물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을

1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은， 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.0001 내지 10 중량 %로, 바람직하게는 0.001 내지 1 중량 %를 포함할 수 있다 ·

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 비 경구 투여 (예를 들어 정맥 내 , 피하， 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며， 투여량은 환자의 체중， 연령， 성별， 건강상태， 식이， 투여시간， 투여방법， 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명에 따른 조성물의 일일 투여량은 0.0001 ~ 10 mg/me이며， 바람직하게는 0.0001 - 5 mg/n 이며， 하루 일 회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.

또한， 본 발명은 호모에고놀 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 만성폐쇄성 폐질환 예방 및 개선용 건강 기능 식품을 제공한다,

상기 호모에고놀은 하기 화학식 1호 기재되는 "3-[2-(3，4-디메톡시페닐 )-7- 메록시벤조퓨란 -5-일]프로판 -1-올"인 것이 바람직하고, 때죽나무 ( 5iyra

로부터 분리된 스티락스리그놀리드 A 화합물의 비당체를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며 , 화학적으로 합성한 것을 사용할 수 있다.

[화학식 1]

본 발명의 호모에고놀은 담배추출물로 유도된 만성폐쇄성 폐질환 동물 모델에서 만성폐쇄성 폐질환 진행에 매개 인자로 작용하는 호중구의 감소효과를 나타냈고， 염증세포들의 이동올 촉진하는 MCP-2 및 염증성 사이토카인인 TNF- α의 생성을 억제하여 폐조직 내 염증세포의 수를 현저하게 감소시켰다. 따라서， 호모에고놀은 염증매개체의 억제를 통해 효과적으로 폐조직 내 염증 반웅올 억제하는 것을 확인하였으며， 이는 호모에고놀이 효과적인 만성폐쇄성 폐질환의 예방 또는 개선을 위한 건강 기능 식품의 유효성분으로써 유용하게 이용할 수 있다. 본 발명의 호모에고놀 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

본 발명의 건강 기능 식품은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며， 예를 들어, 단백질， 탄수화물， 지방， 영양소 및 조미제를 포함한다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 호모에고놀 화합물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류， 소시지, 빵， 초콜릿， 캔디류， 스넥류， 과자류, 피자, 라면， 기타 면류， 껌류， 아이스크림류를 포함한 낙농제품， 각종 스프， 음료수， 차， 드링크제， 알코을음료 및 비타민 복합제 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료용 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등올 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당， 과당과 같은 모노사카라이드， 말토스， 슈크로스와 같은 디사카라이드， 및 덱스트린, 사이클로텍스트린과 같은 폴리사카라이드， 자일리를， 소르비를， 에리트리를 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴， 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나， 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ^당 일반적으로 약 0.01 -0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 호모에고놀 화합물은 여러 가지 영양제 , 비타민， 전해질, 풍미제, 착색제， 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염， 유기산， 보호성 콜로이드 증점제， pH 조절제， 안정화제， 방부제, 글리세린, 알코을， 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 호모에고놀 화합물은 천연 과일주스， 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육올 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 흔합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 증량부 당 으 01 - 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. 본 발명은 하기 반웅식 1에 나타낸 바와 같이， 상기 화학식 1로 표시되는 호모에고놀의 제조방법올 제공한다.

구체적으로， 화학식 2로 표시되는 화합물의 카복시기를 브름화 (brominat ion) 반웅을 통해 화학식 3으로 표시되는 화합물을 얻는 단계 (단계 1) ;

상기 단계 1에서 얻은 화학식 3으로 표시되는 화합물에 LDACLithium di i sopropylamide)를 가하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 얻는 단계 (단계 2) ; 상기 단계 2에서 얻은 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 소노가시라 교차 결합 (Sonogashira Cross cou l ing) 반웅을 통해 화학식 6으로 표시되는 화합물을 얻는 단계 (단계 3) ;

상기 단계 3에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 비티히 (wi tt ig) 반응을 통해 화학식 8로 표시되는 화합물은 얻는 단계 (단계 4)；

상기 단계 4에서 얻은 화학식 8로 표시되는 화합물에 팔라듐 촉매를 가하여 화학식 9로 표시되는 화합물을 얻는 단계 (단계 5) ; 및

상기 단계 5에서 얻은 화학식 9로 표시되는 화합물의 카르복시산 에스터 (carboxyl ic acid ester)를 알코올로 환원하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계 (단계 6) ;를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다.

[반웅삭 1]

이하， 상기 제조방법을 단계별로 구체적으로 설명한다. 본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 2로 표시되는 화합물의 카복시기를 브름화 반웅을 통해 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.

이때， 사용 가능한 브름화 시약 (Brominat ion reagent )은 CBr ₄ /PPh ₃ 등을 사용할 수 있다.

또한， 상기 반응 용매는 테트라하이드로퓨란; 다이옥산; 에틸에테르， 1 , 2- 다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매 ; 메탄을, 에탄올， 프로판을 및 부탄을을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드 (DMF) , 디메틸설폭사이드 (DMS0) , 디클로로메탄， 디클로로에탄， 물， 아세토나젠설포네이트, 를루엔설포네이트， 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트， 페닐부티레이트, 시크레이트， 락테이트， β -하이드록시부티레이트， 글리콜레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트 등을 사용할 수 있다.

나아가， 반웅온도는 or에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나， 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 화학식 3으로 표시되는 화합물에 LDA촉매를 가하여 화학식 4로 표시되는 화합물을 얻는 단계이다.

이때， 사용 가능한 촉매는 LDA둥을 사용할 수 있다.

또한， 상기 반웅 용매는 테트라하이드로퓨란; 다이옥산; 에틸에테르， 1 , 2- 다이메특시에탄 등을 포함하는 에테르용매 ; 메탄올， 에탄올 , 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드 (DMF) , 디메틸설폭사아드 (DMS0) , 디클로로메탄， 디클로로에탄, 물, 아세토나젠설포네이트， 를루엔설포네이트， 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트， 페닐부티레이트， 시크레이트， 락테이트， -하이드록시부티레이트， 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트등을 사용할 수 있다.

나아가， 반웅온도는 0 ^° C에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나， 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 화학식 4로 표시되는 화합물과 화학식 5로 표시되는 화합물을 소노가시라 교차 결합 (Sonogashi ra Cross coupl ing) 반웅을 통해 화학식 ' 6으로 표시되는 화합물올 얻는 단계이다.

이때， 사용 가능한 촉매는 Pd/C , PPh ₃ /CuI 등을 사용할 수 있다. 또한 상기 반웅 용매는 트리에틸아민 (TEA) ; 테트라하이드로퓨란; 다이옥산; 에틸에테르， 1.2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올， 프로판을 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드 (DMF) , 디메틸설폭사이드 (DMS0) , 디클로로메탄， 디클로로에탄， 물， 아세토나젠설포네이트， 를루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시크레이트, 락테이트， β - 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트， 타트레이트, 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트, 만델레이트 등을 사용할 수 있다.

나아가， 반웅은도는 o ^° c에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나， 0.5- 10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 제조방법에 있어서, 상기 단계 4는 상기 단계 3에서 얻은 화학식 6으로 표시되는 화합물과 화학식 7로 표시되는 화합물을 비티히 (wi U ig) 반웅을 통해 화학식 8로 표시되는 화합물은 얻는 단계이다.

이때， 사용 가능한 용매는 테트라하이드로퓨란; 다이옥산; 에틸에테르，

1，2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올， 에탄을， 프로판을 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드 (DMF) , 디메틸설폭사이드 (DMS0) , 디클로로메탄， 디클로로에탄， 물， 아세토나젠설포네이트， 를루엔설포네이트， 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트， 페닐부티레이트， 시크레이트， 락테이트， β -하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌 -1-설포네이트, 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트 등을 사용할 수 있다.

또한, 반웅온도는 ( C에서 용매의 비둥점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반응하는 것이 바람직하다ᅳ

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 단계 5는 상기 단계 4에서 얻은 화학식 8로 표시되는 화합물에 팔라듐 촉매를 가하여 화학식 9로 표시되는 화합물을 얻는 단계이다. 이때, 사용 가능한 촉매는 Pd/C , 린들라 (Lindl ar ) 촉매 등을 사용할 수 있다.

또한， 상기 반웅 용매는 테트라하이드로퓨란; 다이옥산; 에틸에테르, 1 , 2- 다이메특시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올， 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드 (DMF) , 디메틸설폭사이드 (DMS0) , 디클로로메탄, 디클로로에탄， 물， 아세토나젠설포네이트, 를루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트， 시크레이트, 락테이트, β -하이드록시부티레이트, 글리콜레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트， 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트 등을 사용할 수 있다.

*98나아가， 반웅은도는 0 ^° C에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고， 반웅시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다. ^'

본 발명에 따른 제조방법에 있어서， 상기 단계 6은 상기 단계 5에서 얻은 화학식 9로 표시되는 화합물의 카복시산 에스터 (carboxyl i c ac i d ester )를 알코을로 환원하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 얻는 단계이다.

이때， 사용 가능한 환원제로는 LiAlH ₄ , NaBH ₄ 등을'사용할 수 있다.

또한， 상기 반웅 용매는 테트라하이드로퓨란; 다이옥산; 에틸에테르， 1 , 2- 다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매 ; 메탄을 , 에탄올， 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드 (DMF) , 디메틸설폭사이드 (DMS0) , 디클로로메탄， 디클로로에탄， 물， 아세토나젠설포네이트， 를루엔설포네이트 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페닐프로피오네이트， 페닐부티레이트， 시크레이트, 락테이트， β -하이드록시부티레이트， 글리콜레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌 -1-설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트， 만델레이트 등을 사용할 수 있다.

나아가, 반웅은도는 0 ^° C에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반웅시간은 특별한 제약은 없으나, 0.5-10시간 동안 반웅하는 것이 바람직하다. 이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 단 하기 실사예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 발명의 범위가 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>호모에고놀 (Homoegonol) 화합물의 제조

. 호모에고놀의 합성은 기존에 보고된 방법 (Xue Fei Yang and Ling Yi Kong, Chinese Chemical Letters 18， 2007， 380-382 참조)을 활용하되 특허공개번호 제 10-2012-0089784호에 개시된 바와 같이 신규한 단계 (단계 3)를 추가하는 합성 경로를 통해 제조하였다.

구체적으로， 호모에고놀의 합성은 도 1에 나타낸 바와 같이 먼저 단계 1에서 중간체 3을 합성하였고， 단계 2에서 화합물 4와 중간체 3의 소노가시라 교차 결합 (Sonogashira Cross cou ling) 반웅으로 중간체 5를 합성한 후 비티히 Oittig) 반웅, 수소화 (hydrogenation) 반웅을 통하여 호모에고놀 전구체인 화합물 7을 제조하였다. 마지막으로 중간체 7의 카르복시산 에스터 (carboxylic acid ester)를 알코올로 환원하여 원하는 최종화합물 8(호모에고놀)을 수득하였다 (도 1).

<실시예 2>표준담배 추출물 (Cigarette smoking, CS)의 제조

본 발명의 실험 마우스에 담배 추출물로 유발되는 만성폐쇄성 폐질환을 일으키기 위해 하기와 같이 표준담배 추출물을 제조하였다.

<2-1>표준담배 담배연기의 포집

ISO 3402 규정에 의거하여 표준담배 CM7(Coresta Monitering Cigarette 7， Heinr Borgwaldt, Germany) 60개피의 담배연기 웅축물 포집을 온도 22±2 ^' C 및 상대습도 60 ±5 %로 유지되는 흡연실에서 실시하였으며， ISO 3308 규정에 의거하여 자동흡연장치 (Automatic smoking machine. RM20, Heinr Borgwaldt, ISO 3308 규격품)를 이용하여 흡연부피 35.0土 0.3 mL, 흡연주기 60土 0.5초， 흡연시간 2.00±0.02초로 궐련담배를 연소시켰고, 꽁초길이는 팁페이퍼 ( p paper)길이 + 3 瞧 (겉포장지 (overwrap) + 3 隱)로 하였으며， 92 瞧의 캠프릿지 필터 (Cambridge filter, IS03308 규격품)로 담배연기 응축물을 포집하였다. <2-2>표준담배 담배연가 웅축물추출

담배연기 웅축물이 포집 된 캠프릿지 필터를 시가 ¾ 홀더 (cigaratte holder)에서 분리하여 각각 100 mL 삼각플라스크에 넣고 추출용매 아이소프로파놀을 50 mL씩 가하여 잘 흔든 다음， 실온에서 8시간 이상 방치하여 추출하였다. 추출 후에 여과한 후， 감압여과 농축기로 농축하였으며 3개의 삼각플라스크에 들어있는 농축액을 신티레이션 바이알 (scintillation vial)에 모으고 질소 가스를 이용하여 완전 농축하였다.

<2-3>총 입자상물질 (Total particulate matter, ΊΡΜ) 함량의 계산 표준담배 주류연 중 총 입자상 물질의 함량은 하기 수학식 1을 이용하여 계산되었다.

[수학식 1]

TPM ： 총 입자상 분진 물질

W _FHA ： 흡연 후 필터 홀더의 무게

W _FHB ： 흡연 전 필터 홀더의 무게

N ： 한 트랩 (Trap) 당 흡연한 담배 개피 수 (cig.)

<실시예 3> 만성폐쇄성 폐질환 (Chronic obstructive pulmonary disease, COPD)을유발한동물모델의 제조

본 발명의 실험 마우스에 담배 추출물로 유발되는 만성폐쇄성 폐질환을 일으키기 위해 하기와 같은 실험을 시행하였다.

오리엔트바이오사 (한국)에서 공급받은 수컷 8주령의 마우스 (BALB/c, specific pathogen-free, SPF, 18-20 g)에 실험 당일까지 고형사료 (항생제 무첨가， 삼양사료 Co.)와 물을 충분히 공급하였고， 온도 22±2 ^° C, 습도 55±15 % 및 12시간의 명암사이클 (light-dark cycle)의 환경에서 1주간 적웅시킨 후 실험에 사용하였다.

8주령 BALB/c 마우스를 7 % 클로랄 하이드레이트 (chloral hydrate)로 마취한 후 움직임이 없을 때 생쥐의 앞니를 고무밴드로 고정 시킨 후， 리포다당체 (lipopolysaccharide, LPS) 100 /g/ml에 표준담배 추출물 (Cigarette smoking, CS) 4 mg/ml을 1:1로 섞은 것 (LPS+CS)을 주 1회 3주간 마우스 코와 입에 각각 50 ^씩 합 100 ^를 기관 내 주사 (intratrachea)흡입시켜 만성폐쇄성 폐질환 마우스 모델을 만들었다. <실시예 4>기관지 폐포세척액 내 염증 세포 수의 억제 효과 확인

본 발명의 호모에고놀이 만성폐쇄성 폐질환 마우스 모델에서 기관지 폐포세척액 내 염증 세포 수 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 하기와 같은 실험을 하였다.

호모에고놀은 30 mg/kg을 농도별로 0.5 )의 CMC carboxmethylcellulose sodium)에 녹여， 상기의 LPS+CS를 마우스의 기관 내 주사하기 1시간 전에 경구투여하였다ᅳ 본 실험에서는 아무런 처리를 하지 않은 정상대조군과 LPS+CS를 처리한 음성대조군 및 LPS+CS를 처리하기 1시간 전 호모에고놀을 경구투여한 실험군으로 나누었다.

구체적으로， 각 군의 마우스의 혈액 채혈 후， 폐포세척액 (bronchoalveolar lavage fluid, BALF)을 얻기 위해 기관을 해부하였으며 폐포세척액으로부터 세포를 분리하기 위해 FBS(Fetal bovine serum)가 포함되지 않은 DMEM(Dulbecco' s Modified Eagle's Medium) 배양액 1 ml을 주사기로 기관지 (trachea)에 주입시키고 끈으로 묶어 고정한 후 3회 순환시켜 분리하였으며， ACK(acetate kinase) 용액을 넣고 37 ^° C에서 5분 동안 처리하여 적혈구를 용해시키기고 다시 FBS가 포함되지 않은 DMEM 배양액으로 세척한 후 0.04 % 트리판 블루 (trypan blue)로 염색한 후 총 세포 수를 측정하였다.

본 발명의 실험 결과에 ^' 대한 통계처리는 일원분산분석 (one-way AN0VA)을 실시하였으며 사후검정으로 두네트의 다중비교검정 (Dunnett 's multiple comparison test)을 이용하여 각 그룹간 유의성을 검증하였다. 그 결과， 표 1에 나타낸 바와 같이 만성폐쇄성 폐질환에 있어서 폐 염증은 중요한 특징으로 염증세포 가운데 호중구 수가 증가 되므로 본 발명의 만성폐쇄성 폐질환 유발 마우스 (음성대조군)는 정상대조군에 비하여 기관지 폐포세척액 내 총 염증세포 수가 증가되는 것을 확인하였으며， 또한 염증세포 가운데 호중구의 수의 현저한 증가를 확인하였다. 또한， 본 발명의 호모에고놀을 투여한 만성폐쇄성 폐질환 유발군 (실험군)은 음성대조군에 비해 염증세포 수가 감소되는 것을 확인하였으며 (PO.05, 억제율 62.9 ), 또한 호중구의 수에 있어서 69.8 ¾>(P<0.05)까지 억제되는 것올 확인하였다 (표 1). ―

【표 1】 .

호모에고놀의 기관지 폐포세척액 내 염증세포 수 억제 효과

<실시예 5> 기관지 폐포세척액 내 CD4 ⁺ 및 Neutrophils Gr-1 ⁺ 세포 수 억제 효과 확인

본 발명의 호모에고놀이 만성폐쇄성 폐질환 마우스 모델에서 기관지 폐포세척액 내 유세포 수 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 하기와 같은 실험을 하였다.

구체적으로， 폐포세척액으로부터 분리한 세포들을 5 X 10 ⁵ 세포로 조정한 후 4 ^° C에서 면역 형광염색 (i讓 unof luorescence staining)을 실시하였다. 각각에 PE- ant i-CD4( 553047， BD Pharmingen) 및 PE-ant i-Gr-l(553128, BD Pharmingen)을 넣고 30분간 얼음에서 반웅시켰다. 반웅 후 3회 이상 인산 완충 생리식염수로 수세 한 후 유세포 분석기 (flow cytometer)의 Cell Quest 프로그램 (643274， BD Biosciences)을 이용하여 CD4 ⁺ 과 호중구 (Neutrophils) Gr-1 ⁺ 의 세포빈도를 백분율 (%)로 분석한 후 총 세포수 (total cells)를 적용하여 각 조직에서의 절대 총 세포수 (absolute number)를 산출하였다. 그 결과， 표 2에 나타낸 바와 같이 만성폐쇄성 폐질환 유발군은 CD4 ⁺ 과 Neutrophi l s Gr-1 ⁺ 의 세포 수가 정상대조군에 비하여 모두 크게 증가 하는 것을 확인하였으며， 만성폐쇄성 폐질환 유발군에 호모에고놀을 투여한 실험군에서는 CD4 ⁺ 세포 수가 62.9 %(P<0.05) , 호중구 (Neutrophi I s) Gr—1 ⁺ 의 세포 수가 62.9 %(P<0.05) 억제되는 것올 확인하였다 (표 2) .

【표 2】

호모에고놀의 기관지 폐포세척액 내 CD4 ⁺ 및 Neutrophi l s Gr-1 ⁺ 의 세포 수 억제 효과

<실시예 6>폐조직 내 세포 수 억제 효과 확인

본 발명의 호모에고놀이 만성폐쇄성 폐질환 마우스 모델에서 폐조직 내 세포 수 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 상기 <실시예 3>와 동일한 방법으로 실험하였다.

그 결과， 표 3에 나타낸 바와 같이 만성폐쇄성 폐질환 유발군은 폐조직 내 총 세포 수가 정상대조군에 비해 크게 증가하였으며， 만성폐쇄성 폐질환 유발군에 호모에고놀을 투여한 실험군은 음성대조군에 비하여 44.2%(P<0.05) 억제되는 것을 확인하였다 (표 3) .

【표 3】

호모에고놀의 폐조직 내 총 세포 수 억제 효과

그룹 총 세포수 ( x ioVml ) 억제 (%)

정상대조군 70.0 ± 28.0 - 음성대조군 130.0 ± 15.0 -

<실시예 1>기관지 폐포세척액 내 TNF-α 생성 억제 효과 확인

본 발명의 호모에고놀이 만성폐쇄성 폐질환 마우스 모델에서 기관지 폐포세척액 내 TNF-a 생성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 하기와 같은 실험을 하였다.

구체적으로， 마우스에서 분리한 기관지 폐포세척액에서 TNF-a와 MCP-2의 생성 수준을 효소결합면역흡착 ^' 측정법 (enzyme— 1 inked immuno-sorbent assay, ELISA)으로 측정하였다. TNF-α와 MCP-2의 각각의 항체 (antibody)를 코팅 (coating) 완층용액 (291195， R&D System)에 희석하여 마이크로플레이트 (microplate)에 코팅한 후 4 ^° C에서 하루동안 방치 (overnight)하고 각 웰 (well)올 3회 워싱 (washing) 완층용액으로 세척한 후 10배 희석한 혈청을 100 ^씩 분주하였다. 또한， 1 시간 동안 실온에서 방치한 후 2회 워싱 완충용액으로 세척한 다음 아비 ¾ -에이치알피 결합 항체 (Avidin-HRP conjugeted antibody, DY998, R&D System)를 100 ≠ 처리하고 1 시간 동안 실온에서 방치한 후 다시 세척하였다. 그 후에， ΤΜΒ(5,5'- tetramethylbenzidine) 기질을 1Q0 씩 분주하고 암소에서 30 분간 방치한 후 50 ^의 스탑 (stop) 용액을 처리하고 ELISA leader (Emax, Molecular Devices)로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. ^~

그 결과, 표 4에 나타낸 바와 같이 만성폐쇄성 폐질환 유발군은 기관지 폐포세척액 내 TNF-α의 생성이 정상대조군에 비해 현저하게 증가하였으며， 만성폐쇄성 폐질환 유발군에 호모에고놀을 투여한 실험군은 음성대조군에 비해 50.0 %(P<0.05) 억제되는 것을 확인하였다 (표 4).

[표 4】

호모에고놀의 기관지 폐포세척액 내 TNF-a 생성 억제 효과

그 ¾ TNF-a(pg/mL) 억제 (%) 정상대조군 10.8 ± 2.53 ― 음성대조군 28.3 ± 3.57 ― 실험군 14.2 ± 2.92 50.0 <실시예 8>기관지 폐포세척액 내 MCP-2 생성 억제 효과 확인

본 발명의 호모에고놀이 만성폐쇄성 폐질환 마우스 모델에서 기관지 폐포세척액 내 MCP-2 생성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위해 상기 <실시예 6>과 동일한 방법으로 실험하였다.

그 결과, 표 5에 나타낸 바와 같이 만성폐쇄성 폐질환 유발군은 기관지 폐포세척액 내 MCP-2의 생성이 정상대조군에 비해 현저하게 증가하였으며, 만성폐쇄성 폐질환 유발군에 호모에고놀을 투여한 실험군은 음성대조군에 비해 54.2 % 억제되는 것을 확인하였다 (표 5) .

^' 【표 5】

호모에고놀의 기관지 폐포세척액 내 MCP-2 생성 억제 효과

<제조예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1>산제의 제조

본 발명의 호모에고놀 2 uig

유당 1 g

상기의 성분을 흔합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2>정제의 제조

본 발명의 호모에고놀 100 nig

옥수수전분 100 nig

유 당 100 nig

스테아린산 마그네슘 2 nig

상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다. <l-3> 캠술제의 제조

본 발명의 호모에고놀 화합물 100 nig

옥수수전분 100 nig

유 당 100 nig

스테아린산 마그네슘 2 nig ^'

상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4>환의 제조

본 발명의 호모에고놀 화합물 1 mg 유 당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리를 0.5 g

상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 _g 이 되도록 제조하였다,

<1-5>과립의 제조

본 발명의 호모에고놀 화합물 150 nig

대두 추출물 50 mg

포도당 200 nig

전분 600 mg

상기의 성분을 흔합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 섭씨 60 ^° C에서 건 조하여 과립을 형성한 후 포에 충진 하였다.