本发明涉及一种健脾和胃的药物组合物及其制 备方法。

背景技术

消化不良是一种临床症候群， 是由胃动力障碍所引起的疾病， 也包括 胃蠕动不好的胃轻瘫和食道反流病。 消化不良主要分为功能性消化不良和 器质性消化不良。 症状表现为断断续续地有上腹部不适或疼痛、 饱胀、 烧心（反酸）、 嗳气等。 常因胸闷、 早饱感、 腹胀等不适而不愿进食或 尽量少进食，夜里也不易安睡， 睡后常有恶梦。到医院检查， 除胃镜下 能见到轻型胃炎外， 其他检査如 B超、 X光造影及血液生化检査等， 都 不能检査出不正常的表现。

人参： 五加科植物人参 Gi nseng的根。 人参中可分离出 30余种人 参皂甙和多糖。

白术：菊科植物白术 Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎。 苦、 甘， 温。 归脾、 胃经。 健脾益气， 燥湿利水， 止汗， 安胎。 用于脾虚食少， 腹胀泄泻， 痰饮眩悸， 水肿， 自汗， 胎动不安。

茯苓： 茯苓， 为寄生在松树根上的菌类植物。 茯苓味甘、 淡、 性平， 归心 经、 肺经、 脾经、 肾经。 具有利水渗湿、 益脾和胃、 宁心安神之功用。 山药： 为薯蓣的根， 味甘、 温、 平、 无毒。 归肺、 脾、 肾经。 主治脾 胃虚弱、 倦怠无力、 食欲不振、 久泄久痢、 肺气虚燥、 痰喘咳嗽、 肾 气亏耗、 腰膝酸软、 下肢痿弱、 消渴尿频、 遗精早泄、 带下白浊、 皮 肤赤肿、 肥胖等病症。

莲子： 睡莲科水生草本植物莲的的干燥成熟种子。 味甘， 性微凉， 无毒。 入脾、 肾、 心经。 具有清心醒脾， 补脾止泻， 养心安神明目、 补中养 神， 健脾补胃， 止泻固精， 益肾涩精止带。 滋补元气。 主治心烦失眠， 脾虚久泻， 大便溏泄， 久痢， 腰疼， 男子遗精， 妇人赤白带下。 还可 预防早产、 流产、 孕妇腰酸。

山楂： 为蔷薇科，苹果亚科植物山里红或山楂的干燥 成熟果实。 味 酸、 甘， 性微温。 归脾、 胃、 肝经。 具有开胃消食、 化滞消积、 活血散瘀、 化痰行气。 麦芽： 本品为禾本科植物大麦 ^ferafe vulgare L.的成熟果实经发芽干燥 而得。 味甘， 平。 归脾、 胃经。 具有行气消食， 健脾开胃， 退乳消胀。 用于食积不消， 脘腹胀痛， 脾虚食少， 乳汁郁积， 乳房胀痛， 妇女断 乳。

泽泻： 为泽泻科植物泽泻的块茎， 味 甘； 淡； 性寒， 归肾， 膀胱经。 具有利水渗湿； 泄热通淋。 主小便不利； 热淋涩痛； 水肿胀满； 泄泻； 痰 饮眩晕； 遗精作用。

橘皮： 橘皮是芸香科植物橘的果皮， 味辛、 苦温。 入脾、 肺两经。 有理气调中， 燥湿化痰功效， 可用于治疗脾胃气滞， 脘腹胀满， 呕吐， 或湿浊中阻所致胸闷、 纳呆、 便溏。

甘草： 为双子叶植物豆科甘草的根及根茎。 性平， 味甘， 归十二经。 有解毒、 祛痰、 止痛、 解痉以至抗癌等药理作用。 用于脾胃虚弱， 倦怠乏 力， 心悸气短， 咳嗽痰多， 脘腹、 四肢挛急疼痛， 痈肿疮毒， 缓解药物毒 性、 烈性。

发明内容

本发明的目的是提供一种健脾和胃的药物组合 物及其制备方法。 本发明提供的方法， 包括如下歩骤：

将如下四种物质混合， 得到混合物， 即得到健脾和胃的药物组合物： A、 人参乙醇提取物； B、 白术和橘皮的挥发油； C、 茯苓、 山药、 莲 子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术和泽泻的水提取物； D、 果蔬发酵转 化液；

所述 A按照包括如下步骤的方法制备得到： 用乙醇水溶液对人参进行 回流提取， 得到提取液， 即得到人参乙醇提取物；

所述 B按照包括如下步骤的方法制备得到：将白术� �橘皮浸泡在水中， 蒸馏提取， 得到馏出液和残渣， 收集馏出液， 即得到白术和橘皮的挥发油； 所述 C按照包括如下步骤的方法制备得到： 将茯苓、 山药、 莲子、 甘 草、 山楂、 麦芽、 泽泻、 所述 B制备中得到的残渣和水混合， 进行煎煮， 过滤， 收集滤液， 加入无水乙醇， 静置、 收集上清液， 即得到茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术和泽泻的水提取物；

所述 D 按照包括如下歩骤的方法制备得到： 将果蔬、 嗜乳酸杆菌 {Lac tobacillus acidophilus)菌液、 长双歧杆菌 ( Bifidobac treium longum ) 菌 液 、 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) 菌液、 嗜热链球菌 {Streptococcus thermophilus) 菌液混合， 发酵，得到发酵产物， 即得到果蔬发酵转化液。

所述人参 、 白术、 茯苓、 甘草、 橘皮、 山药、 莲子、 山楂、 麦芽和 泽泻的质量比为 （1.5-2.5) ： (1.5-2.5)： (1.5-2.5) : (0.5-1.5) : (0.5-1.5): (1.5-2.5): (1.5-2.5): (0.5—1.5): (0.5—1.5): (0.5—1.5);

所述人参 、 白术、 茯苓、 甘草、 橘皮、 山药、 莲子、 山楂、 麦芽和 泽泻的质量比具体为（1.5、 2或 2.5): (1.5、 2或 2.5): (1.5、 2或 2.5): (0.5、 1或 1.5): (0.5、 1或 1.5): (1.5、 2或 2.5): (1.5、 2或 2.5) ： (0.5、 1或 1.5) ： (0.5、 1或 1.5) ： (0.5、 1或 1.5)。

所述 A的制备方法中：

每次所述回流提取的时间为 2 h -5h， 每次所述回流提取的时间具体 为 2 h、 3 h或 5h;

所述乙醇水溶液的浓度为 70% (体积百分含量）；

所述 B的制备方法中：

所述浸泡的时间为（1-60) min，所述浸泡的时间具体为 1 min、 30 min 或 60min;

所述蒸馏的温度为 90°C-100°C， 所述蒸馏的温度具体为 90°C、 95 °C 或 100。C;

所述 c的制备方法中：

所述煎煮的温度为 90°C-10(TC， 所述煎煮的温度具体为 90°C、 95 °C 或 100°C， 所述煎煮的吋间为 lh-2h， 所述煎煮的时间具体为 lh或 2h;

所述加入无水乙醇的方式为向所述滤液中加入 乙醇， 使滤液中乙醇的 体积百分含量为 70%;

所述 D的制备方法中：

所述发酵的温度为 18°C_37°C， 所述发酵的温度具体为 18Ό、 23Ό或 37°C， 所述发酵时间为 10天 -180天， 所述发酵时间具体为 10天、 15天 或 180天， 所述发酵方式为边搅拌边发酵。

所述 A的制备方法中： 还包括如下步骤：

将所述提取液去除乙醇、 再进行浓縮和干燥， 得到干燥产物， 即得到 人参乙醇提取物； 所述 c的制备方法中，在所述收集上清液的步骤后� �还包括如下步骤: 将上清液去除乙醇、 过滤取滤液、 滤液浓缩、 干燥， 得到干燥产物， 即为 茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术和泽泻的水提取物； 所述 D的制备方法中，

在所述发酵之前， 还包括将果蔬粉碎成 40-50目大小的步骤； 在所述发酵之后，还包括如下步骤：将所述发 酵产物过滤、收集滤液、 超滤、 收集超滤后液体， 即为果蔬发酵转化液。

超滤为将滤液经 10万分子量分超滤（进液压力 1. 3 kg, 出液压力 0. 5 kg)。

所述果蔬为如下 54种果蔬的混合物：

魔芋、 茄子、 芦笋、 菠菜、 豆芽、 花椰菜、 甘蓝、 萝卜、 黄瓜、 豌豆、 红椒、 芹菜、 葱、 蒜、 葡萄、 柚子、 西瓜、 桃、 橘、 蓝莓、 甜橙、 香蕉、 荔枝、 苦瓜、 韭菜、 石榴、 火龙果、 胡萝卜、 蕃茄、 白菜、 西芹、 甜椒、 莴苣、 梨、 姜、 芋头、 菜豆、 南瓜、 莲藕、 樱桃、 猕猴桃、 酸梅、 草莓、 无花果、 金桔、 芦柑、 南国梨、 香瓜、 哈密瓜、 木瓜、 洋葱、 桑椹、 甜菜 和柠檬。

所述果蔬中每种果蔬的质量相同。

所述方法中， 每 1L混合物按照如下方法制备： 将（5-50) g所述人参 乙醇提取物、 （5_50) g所述白术和橘皮的挥发油、 （5-200) g所述茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术和泽泻的水提取物和所述果 蔬发酵转化液混合， 用所述果蔬发酵转化液补足体积；

每 1L混合物具体按照如下方法制备： 将 (5、 25或 50) g所述人参乙 醇提取物、 （5、 30或 50) g所述白术和橘皮的挥发油、 （5、 150或 200) g 所述茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术和泽泻的水提取 物和所述果蔬发酵转化液混合， 用所述果蔬发酵转化液补足体积；

所述 A的制备方法中：

所述乙醇水溶液和所述人参的配比为 （1-10) ml : lg _;

所述乙醇水溶液和所述人参的配比具体为 （1、 5或 10 ) ml : lg _; 所述 B的制备方法中：

所述白术、 橘皮和水的配比为（l-10) g _: (l-10) g: (5-50) ml ;

所述白术、橘皮和水的配比具体为（1、 2或 10) g _: (1、 5或 10) g: (5、 15或 50) ml;

所述 C的制备方法中：

所述茯苓、山药、莲子、甘草、山楂、麦芽、 泽泻、和水的配比为（1-10) g: (l-10)g: (l-10)g: (l-10)g: (l-10)g: (1-10) g: (1-10) g: (5-100)ml _; 所述茯苓、 山药、 莲子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽泻、 和水的配比具体 为（1、 2或 10)g: (1、 2或 10)g: (1、 2或 10)g: (1、 5或 10)g ： (1、 5 或 10)g: (1、 5或 10)g: (1、 5或 10)g: (50、 60或 100) ml;

所述 D的制备方法中：

所述嗜乳酸杆菌 scio aci7 s acidopMlu )蔑狼、 所述长双歧杆 菌 Bifidobactreiim longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种

( Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌、Str印 tococcus thermophilus) 菌液、 所述果蔬禾 B水的配比为

(2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml: (2000-8000) ml:

(1000-1500) kg: (1000-1500) kg;

所述嗜乳酸杆菌（Zsc o&¾ci7 i/s acidophilus)^狼、 所述长双歧杆 菌 Bifidobactreium longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种

( Lactobacillus delbruecki i subsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌（ ire ococa/s thermophilus) 菌液、 所述果蔬和水的配比为 （2000、 5000或 8000) ml: (2000、 5000或 8000) ml、 (2000、 5000或 8000) ml:

(2000、 5000或 8000) ml: (1000、 1200或 1500) kg: (1000、 1200或 1500) kg。

所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜乳酸杆菌（Zacto½«77^ 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为嗜乳酸杆菌（Zaci ₀ ½«7 /s a ^^Ji/s)菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;

所述长双歧杆菌 Bifidobactreium longum ) 菌液按照如下方法制 备： 将长双歧杆菌 Bifidobactreiwii longum ) 发酵培养， 得到发酵产 物， 即为长双歧杆菌 fidobactreiwi longum ) 菌液； 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41°C， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h; 所 述 德 氏 乳 杆 菌 保 加 利 亚 种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液按照如下方法制备： 将德氏乳杆菌 保力口禾 ¹ J亚禾中 (Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 发酵培养， 得到发酵产物， 即为德氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus)菌液； 所述发酵温度为 20°C -41 °C， 所述 发酵温度具体为 2(TC、 37°C或 41 Ό， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发 酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h;

所述嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus)菌液按照如下方法制 备： 将嗜热链球菌（Sir toraca^ the wphi lu ) 翁凫赛, 得到发酵产 物， 即为嗜热链球菌（S re ^ococci/s therm _0p hilus、 狼 所述发酵温度 为 20°C-4rC， 所述发酵温度具体为 20°C、 37°C或 41 °C， 所述发酵吋间为 15 h-36 h， 所述发酵时间具体为 15 h、 16 h或 36h。

所述嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus)为嗜乳酸杆菌 {Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854， 所述长双歧杆菌 { Bifidobactreium longum ) 为长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186 ， 所述德 氏乳杆菌保加利亚种 （ Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 为德氏乳杆菌保力口禾 lj亚种 ( Lactobaci l lus delbruecki isubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480， 所述嗜热链球菌 {Streptococcus thermophilus) 为 嗜 热 链 球 菌 {Streptococcus thermophilus) CGMCC 1 · 2471。

所述发酵培养的培养基配方： 将 10g蛋白胨、 10g牛肉膏、 5g酵母抽提 物、 20g葡萄糖、 lg吐温 -80、 2gK ₂ HP04、 lg吐温 _80、 5gNaAC、 2g柠檬酸三 铵、 0. 2gMgS0 ₄ 、 0. 05gMnS0 ₄ 和水混合， 用水补至 1L得到的培养基。 由所述 的方法制备的改善疲劳的药物也是本发明保护 的范围；

所述白术为白术（炒），所述莲子为莲子（炒 ）、所述山楂为山楂（炒）、 所述麦芽为麦芽 （炒）。

由所述的方法制备健脾和胃的药物也是本发明 保护的范围。

本发明的实验证明， 本发明方法提取的人参提取物、 白术和橘皮挥发 油、 茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术和泽泻的水提取 物、 果蔬酵素 （发酵转化液）， 提取吋间短， 且可以用以上原料制备健脾 和胃的药品， 而且针对我国免疫力低下人群亚健康比例较大 并同时可能伴 有高血糖症状， 本品的调味剂采用百胜糖， 降低了口服液中葡萄糖、 蔗糖 等易引起血糖增高的甜味剂的使用使用量， 以使更多的人群受益。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明 ， 均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、 试剂等， 如无特殊说明， 均可从商业途径 得到。

实施例 1、 健脾和胃的人参酵素组合物的获得

方法一：

人参酵素组合物的活性成分的原料如下： 200g人参、 200g白术（炒）、 200g茯苓、 100g甘草、 100g 橘皮、 200g山药 、 200g莲子 （炒）、 100g 山楂 （炒）、 100g麦芽 （炒）、 100g泽泻。

一、 人参提取物的制备

1、 原料的准备： 人参 （吉林紫鑫药业股份有限公司） 符合 《中华人 民共和国药典》 的规定。 投料前严格按照企业标准要求进行质量的监控 。

2、 按配方量称取人参， 经过水洗、 沥干， 用 10倍量 （v/w) 70%乙醇 水溶液回流提取 2次， 每次提取 3小时； 过滤， 合并滤液， 减压回收乙醇。

3、滤液浓缩至相对密度 1. 10-1. 15时（60°C 0. 07MPa)，喷雾干燥（入 口温度为 170°C， 出口温度 70°C )， 得喷雾干燥细粉， 即为人参提取物； 二、 白术、 橘皮挥发油的制备

1、 原料的准备： 白术、橘皮（吉林紫鑫药业股份有限公司）符 合《中 华人民共和国药典》 的规定。 投料前严格按照企业标准要求进行质量的监 控。

2、 按配方量称取白术、 橘皮， 经过水洗、 沥干， 将药材用水浸渍 30 分钟 （白术、 橘皮和水的配比为 2 g: lg: 15 ml ) , 加入水量以浸透没进 药材为宜， 一般加入药材量的 5倍量水， 蒸熘温度 100°C， 按 5: 1比例另 器收集蒸馏液（收集的是蒸馏液水的 1/5体积； 工艺此时挥发油可以提取 干净了。）。 收集蒸馏容器中的剩余的药材即为白术渣和橘 皮渣。

三、 茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术、 泽泻水提 取物的制备

1、 原料的准备： 茯苓、 山药、 莲子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽泻 （吉 林紫鑫药业股份有限公司）， 符合《中华人民共和国药典》 的规定。 投料 前严格按照企业标准要求进行质量的监控。

2、 按配方量称取茯苓、 山药、 莲子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽泻， 经 过水洗、 沥干。

3、 取橘皮渣、 白术渣、 茯苓、 山药、 莲子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽 泻合并加水煎煮 （温度为 100°C ) 两次， 用水量分别为药材量的 6倍， 5 倍， 吋间分别为 2， 1 小时， 合并二次滤液浓缩至相对密度为 1. 12-1. 20

(热测 80°C-9(TC， 减压浓缩）， 加乙醇搅拌至含醇量为 70%， 静置 24小 时，取上清液回收乙醇至尽过滤，滤液浓缩至 相对密度 1. 10—1. 15时（60 V 0. 07MPa)， 喷雾干燥 （入口温度为 170°C， 出口温度 70°C )， 得喷雾干 燥细粉； 即为水提取物； 第一次煎煮： 茯苓、 山药、 莲子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽泻、 和水的配比具体为 2 g _: 2 g _: 2 g _: 5 g ： 5 g: 5 g: 5 g: 60 ml。

四、 果蔬发酵转化液的制备

1、 选用的果蔬材料

表 1果蔬材料

西瓜 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 无花果 消化果蔬发酵转化物、 维生素、 矿物质 桃 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 金桔 维生素 Bl、 B2、 C、 果蔬发酵转化物 橘 维生素 Bl、 B2、 C、 果蔬发酵转化物 芦柑 维生素 C、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 拔卷 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 南国梨 维生素 Bl、 B2、 C、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 甜橙 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 香瓜 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 香蕉 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 哈密瓜 果糖、 钾、 维生素 A、 果蔬发酵转化物 荔枝 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 木瓜 维生素 B、 C、 E、 柠檬酸、 胡萝卜素、 果蔬发酵 转化物

苦瓜 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 洋葱 维生素 B、 C, 胡萝卜素、 果蔬发酵转化物 韭菜 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 桑椹 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 石榴 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 甜菜 甜菜碱、 果蔬发酵转化物

火龙果 维生素 Bl、 B2、 柠檬酸、 果蔬发酵转化物 ίί檬 柠檬酸、 果蔬发酵转化物

2、 果蔬发酵转化

1) 菌种选择与购买

益生菌种购于中科院微生物所， 益生菌分别为嗜乳酸杆菌

{Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1.1854、 长双歧杆菌

iBifidobactreium longum ) CGMCC 1.2186、 德氏乳杆菌保加利亚种

(Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) CGMCC 1.1480、 嗜热链球 菌（ "ir£^iococa/s thermophilus) CGMCC 1.2471， 所有菌种结尾砂土管保 存菌种， 作为出发菌株；

2) 主种子制备

益生菌主种子制备 （主种子传代不超过 10代， 本制备传 4代）

①用无菌不锈钢匙分别取嗜乳酸杆菌 (Zs _C to½ _C i7 ^

acido hilus)^^ 1.1854、 长双歧杆菌 Bifidobactreium longum )

CGMCC 1.2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobacillus

delbrueckiisubsp. bulgaricus) CGMCC 1.1480、 嗜热链球菌 (Sire ococctAS thermophilus) CGMCC 1.2471砂土管 1/10量，其余冻存，分别接在 50ml (250

三角瓶) MRS液体培养基 （10g/l蛋白胨、 lOg/1牛肉膏、 5g/l酵母抽提物、

20g/l葡萄糖、 lg/1吐温 -80、 2g/lK ₂ HP04、 lg/l吐温 -80、 5g/lNaAC、 2g/l

柠檬酸三铵、 0.2g/lMgS0 ₄ 、 0.05g/lMnS0 ₄ ， 121°C灭菌 20min) 中， 37 V、

100转摇床培养 16h; ②各挑取一环，分别划线接种在 MRS固体培养基（lOg/1蛋白胨、 lOg/1 牛肉膏、 5g/l酵母抽提物、 20g/l葡萄糖、 lg/1吐温 -80、 2g/lK ₂ HP04、 lg/1 吐温 -80、 5g/lNaAC、 2g/l柠檬酸三铵、 0. 2g/lMgS0 ₄ 、 0. 05g/lMnS0 ₄ 、 1. 5% 琼脂， 121°C灭菌 20min) 上， 37°C培养箱培养 16h;

③分别挑取长势最旺的一个菌落， 各自接在 50ml MRS液体培养基中， 30°C、 180转摇床培养 16h;

④各自接在 500ml MRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h， 加入甘油至 20%， 摇匀， 以 lml分装入冻存管， 分别作为益生菌嗜乳酸杆 菌、 长双歧杆菌、 短双歧杆菌、 嗜热链球菌主种子， -40Ό以下温度保藏；

3、 工作种子的制备

益生菌工作种子制备 （工作种子传代不超过 5代， 本制备传 4代）

①用无菌接种环分别取嗜乳酸杆菌

acidophi 1 us) CGUCC 1. 1854、 长双歧杆菌 {Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobacillus

delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480、 嗜热链球菌 (Stre ? ococctAS thermophilus) CGMCC 1. 2471主种子， 分别划线接种在 MRS固体培养基上， 37 °C培养箱培养 16h;

②分别挑取长势最旺的一个菌落， 各自接在 50mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h;

③各自接在 500mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转摇床培养 16h，；

④各自再转接至 5000mlMRS液体培养基中， 37°C、 100转搅拌， 培养 16h _; 即得嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854菌液、 长双歧杆菌 Bifidobactreium longim ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌 保力口禾 ¹ 」亚种 (Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) CGMCC 1. 1480 菌液、 嗜热链球菌（5"iri^tococ«/s CGMCC 1. 2471菌液。 以 上菌液均为发酵容器中所有发酵产物。

4、 果蔬处理

1 ) 取上述材料称重；

2) 洗净去杂， 控干水分， 称重 '

3) 粉碎成 40-50目， 投入发酵罐；

对于 3吨的发酵罐 （有效使用溶剂 =3吨 xO. 8=2. 4吨） 实际投料控制 在 2400kg _; 按果蔬与水 1 : 1的比例，果蔬投料 1200kg,水加入量为 1200kg _o

5、 果蔬快速酶解物发酵转化

再向发酵罐中加入嗜乳酸杆菌 Lactobacillus acidophilus) CGMCC 1. 1854菌液、 长双歧杆菌 Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌 液、 德氏乳杆菌保力口禾 'J亚种 ( Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480 菌液、 嗜热链球菌（ re ^ococras thermophilus) CGMCC 1. 2471菌液各 5000ml， 控制发酵罐温度 23°C， 搅拌 15山

3 ) 200目滤布过滤， 弃果蔬渣， 取滤液；

4 ) 滤液经 10万分子量分超滤 （进液压力 1. 3 kg, 出液压力 0. 5 kg)、 得到 1200-1500 kg澄清液体， 密封、 转入 4 °C贮藏， 即得到果蔬发酵转 化液。

6、 检测

果蔬发酵转化液主要产物是乳酸、 乙酸， 因此将酸度作为其特征成分 进行鉴定， 具体如下- 果蔬发酵转化液酸度： 指滴定 100ml果蔬发酵转化液， 消耗的 0. 1N NaOH溶液的毫升数， 检验吋一般采用 10ml样品。

测定步骤： 取 10ml果蔬发酵转化液 +20ml水 +0. 5%酚酞指示剂 0. 5ml ， 用 0. IN NaOH标液滴定到微红色 30秒不褪色。 计算： 酸度 =消耗 的 0. IN NaOH标液体积 X 10

结果:该产品酸度为 42。

五、 组合物的制备

将上述得到的各提取物与果蔬发酵转化液按如 下配方混合- 25g人参提取物、 30g白术、 橘皮挥发油、 150g白术、 橘皮与其它 7 味水提取物与果蔬发酵转化液混合， 用果蔬发酵转化液补充体积至 10000ml , 即得到组合物， 制成 1000瓶， 10ml/瓶备用。

方法二、

人参酵素组合物的活性成分的原料如下： 150g人参、 150g白术（炒）、 150g茯苓、 50g甘草、 50g 橘皮、 150g山药 、 150g莲子 （炒）、 50g山 楂 （炒）、 50g麦芽 (炒）、 50g泽泻。

一、 人参提取物的制备：

提取方法与方法一基本相同， 不同的是将人参用 1倍量 （v/w) 70%乙 醇水溶液回流提取； 每次所述回流提取的时间为 2 h ;

二、 白术、 橘皮挥发油的制备

提取方法与方法一基本相同， 不同的是将白术、 橘皮和水的配比具体 为 lg: 5g: 5ml _; 浸泡的时间为 lmin ;所述蒸馏的温度为 90°C ;

三、 茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术、 泽泻水提 取物的制备： 提取方法与方法一基本相同， 不同的是所述茯苓、 山药、 莲 子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽泻、 和水的配比具体为 1 g _: 1 g: 1 g: 1 g: 1 g: 1 g: 1 g : 50 ml ; 所述煎煮的温度为 90°C。

四、 果蔬发酵转化液的制备

提取方法与方法一基本相同， 不同的是加入嗜乳酸杆菌 {Lactobacillus acidophil us) CGUCC 1. 1854 菌液、 长双歧杆菌 { Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobaci llus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热 链球菌（5¾reptoc cci/s thermophilus) CGMCC 1. 2471 菌液各 2000ml， 果 蔬投料 1000kg, 水加入量为 1000kg。

果蔬发酵转化液的发酵的温度为 18°C， 发酵时间为 10天。

所述嗜乳酸杆菌 acidophilusH 所述长双歧杆 菌 、 Bmdobactreiim longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种 ( Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 菌（Sir^tococc thermophilus) 菌液的制备中的发酵温度均为 20°C， 发酵吋间均为 15 h o

检测方法与方法一相同， 结果与方法一无显著差异。

五、 组合物的制备

与方法一基本相同， 不同的是 5g人参提取物、 5g白术、橘皮挥发油、 5g白术、橘皮与其它 7味水提取物与果蔬发酵转化液混合， 用果蔬发酵转 化液补充体积至 10000ml , 即得到组合物。

方法三、

人参酵素组合物的活性成分的原料如下： 250g人参、 250g白术（炒）、 250g茯苓、 150g甘草、 150g 橘皮、 250g山药 、 250g莲子 （炒）、 150g 山楂 （炒）、 150g麦芽 (炒）、 150g泽泻。

一、 人参提取物的制备： 提取方法与方法一基本相同， 不同的是将人参用 5倍量 （v/w) 70%乙 醇水溶液回流提取； 每次所述回流提取的时间为 5h;

二、 白术、 橘皮挥发油的制备

提取方法与方法一基本相同， 不同的是将白术、 橘皮和水的配比具体 为 10g: 10g: 50ml ; 浸泡的时间为 60min; 所述蒸馏的温度为 95°C。

三、 茯苓、 山药、 莲子、 橘皮、 甘草、 山楂、 麦芽、 白术、 泽泻水提 取物的制备： 提取方法与方法一基本相同， 不同的是所述茯苓、 山药、 莲 子、 甘草、 山楂、 麦芽、 泽泻、 和水的配比具体为 10 g: 10 g: 1 0g: 10 g: 10 g: 10 g: 10 g: 100 ml ; 所述煎煮的温度为 95°C。

四、 果蔬发酵转化液的制备

提取方法与方法一基本相同， 不同的是加入嗜乳酸杆菌 (Lactobacillus acidophil us) 1. 1854 菌液、 长双歧杆菌

{ Bifidobactreium longum ) CGMCC 1. 2186菌液、 德氏乳杆菌保加利亚种 (Lactobaci llus delbrueckiisubsp. bulgaricus ) CGMCC 1. 1480菌液、 嗜热 链球菌（Strep tococcf/s thermophilus) CGMCC 1. 2471 菌液各 8000ml， 果 蔬投料 1500kg， 水加入量为 1500kg。

果蔬发酵转化液的发酵的温度为 37°C， 发酵时间为 180天。

所述嗜乳酸杆菌（^2cto½ci 7 acidophilusH 所述长双歧杆 菌 Bifidobactreiim longum ) 菌液、 所述德氏乳杆菌保加利亚种 ( Lactobacillus delbrueckiisubsp. bulgaricus) 菌液禾口所述嗜热链球 0 (Streptococcus thermophilus) 菌液的制备中的发酵温度均为 41 °C， 发酵吋间均为 36 h。

检测方法与方法一相同， 结果与方法一无显著差异。

五、 组合物的制备

与方法一基本相同， 不同的是 50g人参提取物、 50g白术、 橘皮挥发 油、 200g白术、 橘皮与其它 7味水提取物与果蔬发酵转化液混合， 用果蔬 发酵转化液补充体积至 lOOOOml , 即得到组合物。

实施例 2、 人参术苓口服液的制备

本产品工艺采用常规的口服液生产工艺： 混合一过滤一瞬时灭菌一灌 装一压盖一检漏一澄明度检查一外包装一检验 一入库， 其中检漏以前的工 艺都在 10万级洁净区。 生产工艺设计和设备条件符合我国 GMP要求。 具体生产方法- 将实施例 1方法一得到的组合物与调味剂（具体为白砂� �， 购自长春 欧亚百货商都， w/v) 混合配料后， 投入配液罐内， 混合 30 min, 确保均 匀， 瞬时高热灭菌。 即得到人参术苓口服液。

2、 灌装口服液瓶： 用口服液灌装机灌装口服液瓶， 每瓶灌装 10ml， 填充期间应注意监测产品装量差异， 控制在差异范围内。

3、 压盖： 用口服液压盖机对口服液瓶压盖， 筛选去不合格品。

4、 检漏： 采用真空检漏仪对压盖后的口服液检漏。

5、 内包装： 采用纸板盒， 每盒 10瓶。

6、 外包装： 外包装采用瓦楞纸箱。

7、 检验： 按照企业标准进行检验。

8、 入库： 产品经检验合格后方可入库。

实施例 3、 人参术苓口服液改善消化不良实验研究

1、 材料

1. 1实验动物

清洁级昆明种小白鼠 60只， 体重 18_ 22g; 清洁级 W i sta r雄性大 白鼠 20 只， 体重 180_ 200g， 均由吉林大学动物实验中心提供。

1. 2、 实验用药

1. 2. 1、 药品：

人参术苓口服液由实施例 2制备，吗丁啉片： 西安扬森制药有限公司 生产， 规格 10mg X 30片。

1. 2. 2 药物配制：

吗丁啉： 10mg 吗丁啉片加入蒸馏水 100ml 制成吗丁啉溶液， 即每毫 升溶液含吗丁啉 0. lmg。

1. 3 主要试剂

多聚甲醛（ E. M erk )； 碘化乙酰硫代胆碱（ Fluka)； 葡聚糖蓝 2000 ( pharm ac ia)； 醋酸钠（ 上海化学试剂站）； 枸椽酸钠（ 青岛海 洋化工厂）； 硫酸铜 (沈阳红旗化工厂）； 铁氰化钾（台州市生化材料厂） ； 四异丙基磷酰胺（ 青岛海洋化工厂）。

1. 4 主要仪器设备

恒冷箱冰冻切片机； 台式平衡记录仪； 全波长分光光度计， 离心沉 淀器； 光学显微镜； 多媒体彩色病理图像分析系统， OlympusPM - 30照相 系统。

2、 方法

计数资料、 计量资料全部数据以均数士标准差 (x ± s) 表示。 两组间 比较用 U/t 检验。 多组间比较用方差分析（AN0VA)。 用医学 SAS统计软件 包在计算机上处理。

2. 1 小鼠小肠推动功能的检测

取昆明种小白鼠 30 只， 禁食 20- 24小吋， 随机分为 3组， 即对照组， 人参术苓口服液组， 吗丁啉组， 每组 10 只动物， 用苦味酸标记。 用药组 分别给予人参术苓口服液原液 (20. 0ml/kg) 及吗丁啉溶液（ 3. 9mg/kg )灌 胃，对照组给予等量生理盐水灌胃， 90分钟后各组给予 0. 3ml墨汁液灌胃。 20分钟后， 颈椎脱白处死， 打开腹腔分离肠膜， 上端至幽门、下端至回盲 部剪取肠管， 置于托盘上。 轻轻将小肠拉成直线， 测量肠管长度作为小肠 总长度 。 从幽门至墨汁前沿的距离作为 "墨汁在肠内推进距离" 。 用公 式计算墨汁推进百分率。

墨汁推进率 (％ ) = 墨汁在肠内推进距离（ cm )

小肠全长（ cm ) X 100%

各组小鼠小肠推动功能比较结果见表 2 :

各组小鼠小肠推进功能的比较 （X士 s)

与生理盐水组比较， AP < 0. 01 ; 与吗丁啉组比较，

2. 2 小鼠胃排空功能的检测

将小白鼠 30只随机分为人参术苓口服液组、 吗丁啉组和对照组，每组 10只， 人参术苓口服液 组以 20. 0ml/kg， 吗丁啉组以 3. 9mg/kg， 对照组 以等容积去离子水， 分别灌胃给药， 10分钟后灌服 2%葡聚糖蓝 2000溶液， 每只 0. 4ml。再经 30分钟颈椎脱白处死动物， 开腹取出全部胃肠， 自幽门 括约肌处取胃， 将其内残留色素 (葡聚糖蓝 2000)充分溶于 2ml去离子水中， 3500rpm离心 15分钟， 取上清液， 玻璃棉滤器过滤， 滤液用 723型分光光 度计入 620nm测吸光度为胃内色素残留量， 并求出各组均值。以对照组均 值为 100%， 各组均值与其之百分比为相对胃内色素残留率 。

与对照组比较， ΔΡ<0. 01 ; 与吗丁啉组比较， * Ρ<0. 01。

2. 3 动物模型的建立

根据激怒刺激的方法， 利用大鼠性情暴躁， 易于激怒，适当给予低强 度刺激就能引发大鼠间剧烈打斗的特性。将 W i star雄性清洁级大白鼠（吉 林大学实验动物中心）提供，清洁级。 20只， 随机分为 4组： 模型组 3组， 正常对照组 1组。 模型组， 采用纱布包裹尖端的止血钳夹鼠尾巴刺激， 使 大鼠互相打斗、 激怒， 每次剌激 30 分钟， 每隔 3小时 1次， 每天刺激 4 次， 1周后， 动物饮水、 进食明显减少，甚至不思饮食， 多呈困倦状， 毛发 变暗、 枯黄， 体重随之下降。 呈现出较典型的肝胃不和 NUD大鼠模型。

2. 4 大鼠胃运动频率、 幅度的检测

将肝胃不和大鼠模型， 再次随机分为模型组、 人参术苓口服液组、 吗 丁啉组， 每组 5只， 人参术苓口服液组按 20. 0ml/kg. d， 分 2次灌胃治疗， 吗丁啉组按 2. 7mg/kg. d， 分 3次灌胃治疗， 模型组以等量生理盐水灌胃。 疗程全部为 2周。 治疗完毕， 用 10%乌拉坦麻醉动物（0. lml/kg)， 然后将 其仰卧固定于手术台，沿腹壁中剪开腹腔， 在胃大弯靠近胃窦部找到一块 纵行肌，近端缝合 1针， 固定。 远端缝合 1针， 引线连于张力换能器，用台 式平衡记录仪， 术后 1小时开始记录胃运动频率和幅度， 初始张力设定为 5mV。 实验中也观察到， 所有实验动物未出现溃疡等器质性病变。

表 4 各组大鼠收缩幅度比较 (x± s) 实验分组 收缩幅度 正常对照组 5 18.72±0.8818

模型组 5 14.976±0.9465

人参术苓口服液组 5 21.024±1.7972* ^A 吗丁啉组 5 17.372±1· 6270* 与对照组比较， AP<0.01; 与模型组比较， * P<0.01; 与吗丁啉组比 较， AP< 0.05。

表 5 各组大鼠收缩频率比较 (X士 s)

与正常组比较， AP<0.01;与模型组比较， *Ρ<0.01与吗丁啉比较， ▲ Ρ<0.05。

实验结果显示， 该模型组动物未引起溃疡等器质性改变， 但在胃肠 机械收缩频率、收缩幅度方面均明显差于正常 组， 从而说明了紧张、焦虑、 烦燥等不良情绪， 是导致非溃疡性消化不良的一个重要因素。

本研究证实， 人参术苓口服液能有效地恢复胃正常机械运动 ， 模型 动物经本方治疗后， 其胃收缩频率、 幅度均明显提高， 并能明显增强胃排 空及小肠推进功能，说明人参术苓口服液能够 有效的治疗非溃疡性消化不 良。

采用同样的方法检测实施例 1中方法二、 三得到的组合物， 结果与方 法一得到的组合物无显著差异。