COMPOSIÇÃO"

CAMPO DA INVENÇÃO

[0001] A presente invenção encontra-se no campo da bioquímica e farmacologia. A presente invenção se refere a uma composição farmacêutica para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae e ainda ao uso da referida composição farmacêutica para a produção de um medicamento para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[0002] A família Flaviviridae é composta pelos gêneros Flavivirus, Pestivírus e Hepacivírus. O gênero Flavivirus compreende mais de 70 vírus que circulam por praticamente todos os continentes, exceto Antártica. Os flavivirus transmitidos por mosquitos, como o vírus da febre amarela, os sorotipos de vírus da dengue 1-4, o vírus da encefalite japonesa e o vírus do Nilo Ocidental causam doenças endémicas e epidêmicas com alta taxa de mortalidade ao redor do mundo.

[0003] Os flavivirus são codificados por um genoma de RNA senso positivo, de fita simples e com aproximadamente 11 kb de comprimento. O genoma é um quadro de leitura aberto único que codifica 10 proteínas virais que são clivadas co- e pós-traducionalmente a partir da poliproteína, das proteínas estruturais do capsídeo (C) , da membrana (M) e do envelope (E) e das proteínas não estruturais (NS) 1, 2A, 2B, 3, 4A, 4B e 5. A poliproteína é flanqueada por regiões não codificantes 5' e 3' (Lindenbach & Rice, 2003) [0004] As sindromes que causam infecção humana por flavivirus variam de infecções assintomáticas a doenças graves e às vezes fatais, incluindo manifestações hemorrágicas de infecção grave por virus da febre amarela e dengue e encefalite causada por infecção com o virus da encefalite japonesa e o virus do Nilo Ocidental (Barrett & Higgs, 2007; Barrett & Monath, 2003; Gubler, 2004) .

[0005] A febre amarela é endémica em diversas regiões da América do Sul e da África, e é espalhada pelo Aedes aegypti , o mosquito que também carrega o virus da dengue e Zika. Os primeiros sintomas - febre, náuseas, vómitos e dor muscular - são razoavelmente leves e geralmente duram apenas de 3 a 4 dias. Cerca de 15% dos acometidos pela doença, no entanto, apresentam uma segunda fase mais tóxica 24h após a recuperação dos sintomas iniciais. Os pacientes sofrem dor abdominal severa, tornam-se ictéricos e pode ocorrer sangramento da boca, nariz, olhos ou estômago. Cerca de metade das pessoas que entram na fase tóxica morrem no período de 7 a 10 dias.

[0006] O pedido de patente internacional PCT/US2008/076806, revela composições e métodos de tratar um hospedeiro infectado com um vírus da família Flaviviridae, e que utilizou também uma biblioteca LOPAC para chegar a um determinado composto (veja abaixo) . Entretanto, o composto não é o mesmo e nem se assemelha ao da presente invenção. Nesse pedido foi utilizado um análogo de clemizol, com a fórmula que segue:

[0007] Já a presente invenção relata a triagem de uma biblioteca de compostos farmacologicamente ativos, contendo diversos fármacos experimentais e de uso clinico, para a descoberta de inibidores da infecção de virus da febre amarela. O trabalho utilizou a estratégia de High Content Screening (HCS), ou Triagem de Alto Conteúdo. Esta tecnologia permite que coleções de compostos químicos, tanto de origem sintética quanto natural, sejam rapidamente tríadas contra o vírus em um ambiente fisiológico, com o vírus infectando células humanas.

[0008] Nenhum documento do estado da técnica descreve a composição farmacêutica da presente invenção compreendendo o composto de fórmula (I) aqui definido e um veículo farmaceuticamente aceitável para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae e nem seu uso para a produção de um medicamento para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0009] A vacinação é um importante modo de prevenção da febre amarela. Entretanto, há grupos de risco que não podem se beneficiar de tal prevenção, como pessoas com mais de 60 anos, bebés com menos de 9 meses, gestantes ou portadores de imunodeficiência . Além disso, já houve epidemia da doença em Angola e, aparentemente, há riscos da doença se espalhar pela Ásia, especificamente países de alta taxa populacional como China e índia. Há muitos trabalhadores chineses em Angola e, é provável que não haja vacina suficiente para todos caso o vírus atinja estes países de alto índice populacional. Neste sentido, é importante um tratamento da doença para que haja aumento na taxa de sobreviventes. No momento não há um tratamento antiviral específico para a febre amarela, somente cuidados para tratar desidratação, insuficiência hepática e renal e febre. Este fato demonstra a importância do presente pedido de patente.

[0010] Em um aspecto, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae compreendendo o composto definido pela fórmula (I)

ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma concretização, o composto definido pela fórmula (I) pode ser utilizado na concentração de 12,5 mM a 25 mM. Em uma concretização adicional, o composto definido pela fórmula (I) é utilizado preferencialmente na concentração de 12,5 mM.

[0011] Em outro aspecto, a invenção se refere ao uso da composição como definida anteriormente para a produção de um medicamento para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae. Em uma concretização adicional, os vírus da família Flaviviridae incluem vírus selecionados do grupo que consiste de: vírus do Nilo Ocidental, vírus da dengue, vírus Zika, vírus da encefalite transmitido por carrapato, vírus da encefalite de St. Louis, hepatite C e vírus da febre amarela. Em uma concretização ainda adicional, a infecção causada por vírus da família Flaviviridae é ocasionada pelo vírus da febre amarela.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0012] O objetivo da invenção, juntamente com vantagens adicionais da mesma, poderá ser melhor entendido mediante referência às figuras em anexo e às seguintes descrições :

[0013] Figura 1 - Imagens representativas do High Content Analysis de células Huh7 (azul) infectadas com YFV- YFP (amarelo) coradas com DAPI 72 h após a infecção. As imagens mostram o processo de análise automatizada de imagem: A) dados brutos; B) segmentação de núcleos de células hospedeiras; C) segmentação do citoplasma de células hospedeiras; D) intensidade YFP; E) Células infectadas (verde) .

[0014] Figura 2 - Triagem da biblioteca LOPAC1280 contra YFV-YFP. Correlação entre taxa celular (eixo Y) e atividade normalizada (eixo X) . Controle negativo representado em pontos vermelhos [(-) DMSO] ; pontos azuis indicam poços tratados com 6,25 ng/mL de Interferon alfa 2A [controle positivo - (+) EC100]; pontos verdes indicam poços infectados com mock [controle positivo - (+) MOCK] ; o ponto laranja representa a amostra selecionada para triagem secundária [hit] - atividade normalizada de mais de 70% e taxa celular próxima a 0,8.

[0015] Figura 3 - Imagens representativas obtidas do Operetta High Content System (objetiva de 20x WD - coloração de DNA com DAPI) mostrando os controles, o composto de referência Interferon alpha 2A (a 6.25 ng/mL) - ECiocv controle negativo (DMSO) e controle positivo (infectado com mock) , além de diversas concentrações do composto HA155 - LOPAC- 886.

[0016] Figura 4 - Atividade antiviral do composto HA155 - LOPAC-886 YFV-YFP infectando célula hospedeira Huh7. Eixo esquerdo-Y: valores da atividade normalizada (pontos e curvas pretos); Eixo Direito-Y: valores de taxa celular normalizada (quadrados e curvas vermelhos); Eixo X: Log de composto / concentração de amostra. Os valores médios (pontos e quadrados) e o desvio padrão (barras) são mostrados. Dados de duas experiências independentes.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0017] Embora a presente invenção possa ser suscetível a diferentes concretizações, é mostrada nos desenhos e na seguinte discussão detalhada, uma concretização preferida com o entendimento de que a presente descrição deve ser considerada uma exemplificação dos princípios da invenção e não pretende limitar a presente invenção ao que foi ilustrado e descrito aqui.

Composição farmacêutica para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae

[0018] Em uma primeira concretização, a presente invenção se refere a uma composição farmacêutica para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae compreendendo o composto como definido pela fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Em outra concretização, o composto definido pela fórmula (I) pode ser utilizado na concentração de 12,5 a 25 mM. Ainda em outra concretização, o composto definido pela fórmula (I) é utilizado preferencialmente na concentração de 12,5 mM.

Descrição do composto HA155 - LOPAC-886

[0019] O composto definido por fórmula I

apresenta como sinónimos ácido ( Z ) -4- ( ( 4 ( 3- ( 4-Fluorobenzil ) - 2, 4-dioxo-l, 3-tiazolan-5-iliden) - metil ) fenoxi ) metil ) benzenoboronico, B— [ 4— [ [ 4— [ ( Z )— [ 3— [ (4- fluorofenil ) metil ] -2 , 4-dioxo-5- tiazolidinilideno ] metil ] fenoxi ] metil ] fenil ] -boronico .

Apresenta também como fórmula empírica (Notação de Hill) C24H19BFN05S, peso molecular de 463,29, IC50 de 5,7 nM.

[0020] O composto de fórmula (I) é um inibidor de autotaxina IV. A autotaxina converte a lisofosfatidilcolina em ácido lisofosfatídico (LPA) , que pode mediar mudanças na proliferação celular, angiogênese e secreção de citocinas. HA-155 é um composto à base de ácido boronico que inibe a autotaxina (IC50 = 5,7 nM) por ligação seletiva à sua treonina catalítica (Hausmann J et al, 2011 e Albers, H. M. H. G. et al, 2011) . Demonstrou-se bloquear de forma dose- dependente a secreção de LPA induzida por trombina em plaquetas (Fulkerson Z et al, 2011) .

[0021] A autotaxina (ATX) , uma fosfodiesterase segregada, hidrolisa a abundante fosfolipidio lisofosfatidilcolina (LPC) para produzir ácido lisofosfatidico (LPA) . O eixo de sinalização ATX-LPA foi relatado como envolvido na fibrose, inflamação e progressão do tumor, tornando ATX um alvo de drogas atraente. In vitro, HA155 - LOPAC-886 foi identificado como um inibidor à base de ácido borônico de ATX com base na estrutura cristalina de ATX em complexo com HA155. Além disso, as sínteses e atividades do HA155 - LOPAC-886 podem ser explicadas por dados estruturais. A fim de compreender melhor a diferença de atividade, realizaram-se experimentos de acoplamento molecular. O acoplamento molecular indicou uma forma de ligação notável para um dos isômeros, que diferia da forma de ligação original de HA155 - LOPAC-886 para ATX. Além disso, o aumento mediado pela trombina no LPA derivado de plaquetas foi completamente atenuado de maneira dose dependente por HA155 - LOPAC-886. HA155 - LOPAC-886 poderia inibir a autotaxina por ligação seletiva à sua treonina catalítica. O HA155 - LOPAC-886 mostrou bloquear de forma dose-dependente a secreção de LPA induzida por trombina nas plaquetas (Albers, H. M. H. G. et al, 2011 e Fulkerson Z et al, 2011) .

[0022] Conforme usado na presente invenção, o emprego do termo " farmaceuticamente aceitável" significa, essencialmente, ser não-tóxico ao indivíduo ao qual o material farmaceuticamente aceitável é administrado.

[0023] Ainda conforme usado na presente invenção, o emprego do termo "veiculo farmaceuticamente aceitável" significa um sólido não-tóxico, inerte, excipiente liquido semi-sólido, diluente, formulação auxiliar de qualquer tipo, tal como solução salina, exceto água. Alguns exemplos dos materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis são açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose, os amidos, tais como amido de milho e o amido de batata, a celulose e os seus derivados, tais como a carboximetilcelulose de sódio, a etilcelulose e o acetato de celulose, ciclodextrina; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de girassol, óleo de gergelim, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de semente de soja; glicóis, tais como propilenoglicol , polióleos, tais como glicerinaglicol , sorbitol, manitol e de polietileno; ésteres, tais como o laurato etílico, oleato etílico, ágar; agentes tamponantes, tais como o hidróxido de alumínio e hidróxido de magnésio; ácido algínico; salina isotônica, solução de Ringer; soluções tampões de álcool etílico e fosfato, emulsão oleosa em água contendo mycobacteria morta pela ação do calor ou componentes de sua parede celular (adjuvante completo de Freund) , DMSO, assim como outras substâncias não tóxicas compatíveis usadas em formulações farmacêuticas .

[0024] Ainda, "vírus da família Flaviviridae" é utilizado neste pedido de patente como sinónimo de "flavivírus" e " flavivirose" como sinónimo de "infecção causada por vírus da família Flaviviridae".

Uso da composição para a produção de um medicamento para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae

[0025] Em uma segunda concretização, a presente invenção se refere ao uso da composição como definida anteriormente para a produção de um medicamento para o tratamento de infecção causada por vírus da família Flaviviridae. Em outra concretização, a infecção causada por vírus da família Flaviviridae incluem vírus selecionados do grupo que consiste de: vírus do Nilo Ocidental, vírus da dengue, vírus Zika, vírus da encefalite transmitido por carrapato, vírus da encefalite de St. Louis, hepatite C e vírus da febre amarela. Em outra concretização, a infecção causada por vírus da família Flaviviridae é ocasionada pelo vírus da febre amarela.

EXEMPLOS

Compostos

[0026] O composto de referência Interferon alpha 2A foi obtido de Sigma-Aldrich . A biblioteca LOPAC1280 contendo 1280 amostras foi adquirida da Sigma-Aldrich.

Células

[0027] Huh7 A linha celular Huh7 foi derivada de um carcinoma hepato celular humano. As células formam uma monocamada contígua que pode ser mantida por várias semanas. Este estoque foi adquirido na Coleção Japonesa de Bioressources de Pesquisa (JCRB) . Esta linhagem celular foi mantida em meio DMEM F12 (Sigma-Aldrich) , suplementado com 10% de FBS (Sigma Aldrich) , 100 U/ml de penicilina (GIBCO) e 100 pg/ml de estreptomicina (GIBCO) , doravante descrito como "DMEM F12".

[0028] C6/36: A linhagem celular C6/36 foi derivada de larvas incubadas de Aedes albopictus. Células C6/36 exibem morfologia epitelial aderente. Este estoque foi cedido pelo Prof. Dr . Amilcar Tanuri, da Universidade Federal do Rio de Janeiro. Esta linhagem celular foi mantida em meio L15 ( Sigma-Aldrich) , suplementado com 10% de FBS

(Sigma Aldrich) , 100 U/ml de penicilina (GIBCO) e 100 pg/ml de estreptomicina (GIBCO), doravante descrito como "L15".

[0029] Vírus da Febre Amarela : vacina contra o vírus da febre amarela atenuado (YFV) 17D que expressa a proteína repórter fluorescente amarela (YFP) (YFV-YFP) foi doada por Laura Gil (Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães, Fiocruz, Pernambuco, Brasil) . Os vírus da febre amarela foram obtidos a partir do sobrenadante de culturas de tecido C6/36 infectadas com o vírus . As culturas infectadas foram mantidas em meio L15 e congeladas em alíquotas de 250 pL . Preparação da solução composta

[0030] A biblioteca de amostras foi enviada em placas de 96 poços (25 pL/poço) a uma concentração estoque de 10 mM em 100% de sulfóxido de dimetila (DMSO) . As amostras foram transferidas manualmente para placas estoques de polipropileno de 384 poços (placas Mãe) (Greiner Bio-One) . Estas placas foram utilizadas para preparar novas placas em menor concentração. As amostras foram transferidas manualmente para novas placas de polipropileno de 384 poços (10 pL/poço) a uma concentração final de 1 mM em 100% de DMSO. Antes de executar o ensaio, placas intermediárias foram preparadas. As amostras foram diluídas na solução de tampão salina (PBS IX) até uma concentração final de 600 pM de composto e 6% de DMSO. Os hits selecionados foram coletados da placa mãe de 384 poços.

Ensaios de atividade antiviral

[0031] HCS permite a avaliação de amostras com atividade antiviral contra células Huh7 infectadas. Na triagem primária, 10 pL de cada amostra foram transferidas manualmente de placas intermediárias (Greiner Bio-One) para placas de ensaio de poliestireno preto de 384 poços (Greiner Bio-One) por meio de uma pipeta multicanal que produz uma concentração final de 10 mM com 1,0% de DMSO (diluição de 100 vezes) . Em seguida, as infecções foram realizadas com 3.000 células Huh7/poço co-plaqueadas com MOI 2,5 de YFP- YFP, todas ressuspendidas em DMEM F12 e dispensadas com a ajuda de uma pipeta multicanal. As placas foram incubadas durante 72 h a 37 °C / 5% de C02 sob atmosfera umidifiçada. Todas as placas continham o seguinte conjunto de poços controle: células Huh7 não infectadas, células infectadas tratadas com 6,25 ng/mL de Interferon alfa 2A e células infectadas tratadas com veiculo (1% DMSO, v/v) . O ensaio primário foi realizado em duplicata (isto é, dois experimentos independentes) . Na seleção confirmatória, as amostras selecionadas (ver abaixo) foram testadas em dose- resposta. O ensaio foi realizado da mesma forma que o primário. Os compostos foram diluídos em série por um fator de 2 (ou seja, em diluições seriadas de 2 vezes) em DMSO puro em 10 pontos de diluição em uma placa separada de polipropileno de 384 poços (Greiner BioOne) usando uma pipeta manual de 16 canais equipada com pontas descartáveis (ThermoScientific) . Para todas as amostras testadas, a concentração mais alta começou a 100 mM, exceto para Interferon alfa 2A, que começou a 6,25 ng/mL. Dez microlitros de solução composta foram transferidos para placas de ensaio, produzindo uma concentração final de 1% de DMSO (v/v) . Os controles descritos na seleção primária foram utilizados para este ensaio de confirmação. Os ensaios de confirmação foram realizados em duplicata (isto é, dois experimentos independentes) .

[0032] No estágio final do ensaio, para as seleções primária e confirmatória, as placas foram fixadas com 4% de paraformaldeido (PFA) , coradas com DAPI ( Sigma-Aldrich) por 30 minutos no escuro à temperatura ambiente e quatro imagens de cada poço foram adquiridas no High Content Imaging System Operetta (PerkinElmer) com ampliação de 20X. As imagens foram analisadas pelo software de análise de alto conteúdo (HCA) Harmony (PerkinElmer) para identificação, segmentação e quantificação do núcleo da célula hospedeira, citoplasma e parasitas intracelulares (Figura 1) . O HCA forneceu como dados de saida para todas as imagens de um poço o número total de células, número total de células infectadas e intensidade de YFP de células infectadas. A taxa de infectadas para o número total de células foi então calculada e definida como a Taxa de Infecção (IR) . Os dados brutos para valores de IR foram normalizados para 1% de células infectadas tratadas com DMSO (controle negativo) e células não infectadas (controle positivo) para determinar a atividade antiviral normalizada, de acordo com a seguinte fórmula :

Atividade Norrralizacfe ( A) = [1- (ftv. H¾ - A/. P¾) / (ftv. H¾ - A/. P¾ _> ) ] x 100

Onde: Av. IR _N : taxa de infecção média de poços de controle negativo.

Av. IRp: taxa de infecção média de poços de controle positivo .

Av. IR _T : taxa de infecção média de poços do composto teste (em uma dada concentração) .

[0033] O controle do ensaio de qualidade foi medido pelo fator Z'; este fator estatístico foi calculado para cada placa, considerando a média e o desvio padrão dos valores da taxa de infecção (IR) dos controles positivos (mock - infectados) e negativos (DMSO puro tratado) - de acordo com a seguinte fórmula (ii) :

(ii) Z' = 1 (Sdv.IRp + Sdv.n¾) / | (An.P¾ _> - An.P¾) |]

Onde: Sdv.IRp : desvio padrão da taxa de infecção do controle positivo

Sdv.IR _N : desvio padrão da taxa de infecção do controle negativo

Av.IRp: média da taxa de infecção do controle positivo AV.IR _N : média da taxa de infecção do controle negativo

[0034] As placas que apresentaram fator Z'³ 0,5 foram consideradas aprovadas, pois indica uma separação satisfatória entre os controles de ensaio negativo e positivo .

[0035] As leituras de análise de triagem primária foram processadas usando o Microsoft Excel e o Tibco Sporfire. Em relação aos dados de triagem secundária, os valores de atividade normalizados foram processados com o software Graphpad Prism, versão 6, para geração de ajuste de curva não-linear de dose-resposta sigmoidal (inclinação variável) e determinação de valores EC50 por interpolação. Para o propósito deste estudo, EC50 foi definido como a concentração do composto correspondente a 50% de atividade normalizada após 72 h de incubação do composto. A potência refere-se ao EC50 - quanto mais potente o composto, menor é seu EC50 - enquanto a eficácia se relaciona com a atividade máxima observada de um composto (em %) - quanto mais eficaz o composto, mais próxima é a sua atividade máxima de 100%. O mesmo racional é usado para a definição CC50: a concentração do composto, que reduz a taxa celular em 50%, quando comparada à média de controle negativo. O índice de seletividade (SI) foi calculado com base na taxa entre o valor composto EC50 e seu CC50 (SI = EC50/CC50) , sempre que a análise de dados dos compostos não gera valores de CC50 (porque não era tóxico nas concentrações testadas) a mais alta concentração testada é usada para estimar o SI (SI = Max [] testado / EC ₅₀ ) .

Exemplo 1 :

[0036] A biblioteca LOPAC1280 foi rastreada a uma diluição de 100 vezes, e as placas de ensaio foram consideradas aprovadas com fator Z'³ 0,5; o fator Z' médio do ensaio foi de 0,84 ± 0,06. Os valores de taxa celular de todas as amostras testadas na biblioteca revelaram que apenas 9, 61% apresentaram toxicidade celular hospedeira superior a 50% na concentração testada (Figura 2) . Além disso, os hits primários foram selecionados como as melhores vinte e oito amostras mais ativas produzindo uma toxicidade celular hospedeira £ 20% e atividade normalizada igual ou aproximadamente 70%, à medida que as imagens individuais dos poços testados foram investigadas e confirmou a redução da taxa de infecção. A seleção de amostras na triagem primária resultou em uma taxa de hit global de 2,18% (Figura 2) . Os resultados estimulam o processo com os ensaios posteriores, uma vez que a concentração testada para os hits na triagem primária é considerada baixa (10 mM) . Foram observados diferentes perfis de toxicidade de células hospedeiras e antivirais a partir de amostras hit e controles (Figura 3) . O rastreio secundário foi realizado utilizando uma abordagem de dose-resposta de 10 pontos com 72 h de exposição da amostra para determinar a atividade antiviral de hits selecionados, tais como: valor EC50, atividade máxima (MA) e citotoxicidade contra células hospedeiras, como mostrado pelo valor CC50. A seletividade das amostras é mostrada pelo índice de seletividade (SI) (Tabela 1) . Um critério de confirmação de hit foi estabelecido da seguinte forma: pelo menos um ponto de atividade normalizada igual ou superior a 70% no gráfico de ajuste de curva gerado e um valor de índice de seletividade igual ou superior a 1,0 (Tabela 1 e Figura 4) . Apenas vinte e seis dos vinte e oito hits preencheram este critério na triagem confirmatória (92,85% do hit de confirmação) e três amostras apresentaram resultados prósperos, uma delas o composto utilizado na composição do presente pedido, o LOPAC-886 (EC50: 2,51 mM; MA: 99,48%) . Em amostras de 10 mM, o composto LOPAC-886 apresentou taxa celular de 0,96 e atividade normalizada de 97,05%. Os outros hits confirmados apresentaram EC50 moderado a alto.

Tabela 1. Dados de triagem de confirmação: valor EC50 (em pg/mL) , valor CC50 (em pg/mL) , atividade máxima (em %) e índice de seletividade (SI) .

ECso CC50 Atividade

índice de

Amostra (pM ou (pM ou Máxima

seletividade ng/mL) ng/mL) (%)

Interferon

0.39 ng/mL ND 100.2 > 253.9 a 2A

LOPAC-886 2 . 5 pM 59.4 pM 99.5 23.6

Dados médios de duas repetições. índice de seletividade (SI) : taxa do valor CC ₅₀ pelo valor EC ₅₀ (CC ₅₀ /EC ₅₀ ) . Sempre que o CC ₅₀ não é gerado por ajuste de curva, a concentração mais alta testada é usada para estimar o SI (Max [] testado/ECso) . Sempre que o EC ₅₀ não é gerado por ajuste de curva, a menor concentração testada é usada para estimar o SI (CC ₅₀ /Min [] testado) . A atividade máxima foi obtida a partir do ponto de valor mais alto pela curva de regressão não-linear.

Referências

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[0040] Fulkerson, Z. et al . Binding of Autotaxin to Integrins Localizes Lysophosphatidic Acid Production to Platelets and Mammalian Cells *. (2011) . doi : 10.1074/jbc.Ml 11.276725

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