用于减少局部脂肪的医药组成物及其用途 技术领域

本发明是关于一种用于减少局部脂肪的医药组 成物，特别是关于一种包含多个含药微 胞以及被包覆在含药微胞中的白藜芦醇的医药 组成物， 且该医药组成物用于减少局部脂 肪。 背景技术

近年来由于越来越多人对美感的观念改变， 以及对自我健康、 身型的标准提升， 人们 关注的议题已不再是单纯地减重， 而是更加重视减少局部脂肪或雕塑曲线， 以达到更健康 且身型更美观的效果。 况且， 一般的减重方式， 无论是饮食或运动等方式， 无法减少特定 单一部位的脂肪， 若要减少特定部位的脂肪 (例如腰部、 腹部、 腿部、 手臂、 下巴、 以及 脸部等)， 目前的技术只能用抽脂手术等方式达成。

目前， 减少局部脂肪的方法以抽脂手术为主， 然而抽脂过程会对神经、 血管、 及其他 身体组织造成严重的伤害， 且具有感染、 出血量大、 麻醉时间过长、 以及无法事先预防的 脂肪栓塞与麻醉过敏的致死风险。此外，抽脂 手术后也易产生严重的瘀青红肿、剧烈疼痛、 恢复期长达 3个月至 6个月以上、 抽脂部位凹凸不平等问题。 因此， 统计显示虽然多数人 想利用抽脂改善局部的皮下脂肪囤积或身体曲 线， 但实际进行抽脂手术的人数却还不到 4 成， 显示大多数要改善身体曲线或减少局部脂肪的 消费者， 会受到抽脂手术副作用及术后 疼痛或风险等问题的影响而放弃。

虽然， 有一些非手术的局部减脂医药组成物或仪器能 降低一部份副作用， 却大多疗效 不佳， 且会产生其他副作用， 例如使周边正常细胞坏死 (necrosis；)、 使周边组织发炎、 及引 发剧烈疼痛等， 且实施部位也有一定的限制。 因此， 市场上仍极欠缺一种能有效减少局部 脂肪， 且副作用更低、 安全性更佳、 恢复期更短的局部减脂医药组成物。

在消费者与医师皆有高度需求的情况下，开发 足以突破目前技术限制的局部减脂医药 组成物将是迫切需要被探讨及解决的课题。 发明内容

鉴于习知技术的缺陷， 本发明提供一种用于减少局部脂肪的医药组成 物， 包含表面活 性剂所形成的多个含药微胞、 以及被包覆在所述含药微胞中的白藜芦醇。所 述用于减少局 部脂肪的医药组成物可减少施用部位的脂肪， 且具有高稳定性、高度脂肪组织生体可用率、 低副作用、 以及缓释等优点。

本发明能促使施用部位的脂肪细胞进行细胞凋 亡反应 (apoptosis；)， 达到减少施用部位 局部脂肪的目的。 本发明能大幅改善习知技术使周边细胞坏死 (necrosis；)、 及发炎的不良反 应及副作用， 且局部减脂的效果显著优于其他非手术减少局 部脂肪的医药组成物。本发明 适用于以直接注射、 皮下植入、 埋植式输注、 软膏或贴布等经皮吸收方式施用于需要减少 皮下脂肪的部位， 而无须任何外科手术或仪器的介入或辅助。 较佳者， 以皮下脂肪注射方 式施用于局部部位的皮下脂肪层。较佳者， 本发明的医药组成物的注射剂型包含但不限于 注射液齐 ¹ J或注射用粉齐 ll(powder for injection, or powder for solution for injection)。 本发明中 所指的局部脂肪包含但不限于腰部、 腹部、 腿部、 手臂、 下巴以及脸部等部位。

本发明中， 白藜芦醇指的是自天然植物萃取所取得或商业 上可取得的白藜芦醇。较佳 者， 白藜芦醇的纯度为 90%至 100%。

本发明中，绿茶萃取物指的是以任一种溶剂及 任一种萃取方式所提取出的绿茶成分混 合物、商业上可取得的绿茶萃取物、任一种至 少包含 45 % (重量百分浓度；)表没食子儿茶素 没食子酸酯 (epigallocatechin gallate, EGCG)的混合物、 或商业上可取得的表没食子儿茶素 没食子酸酯。

本发明中， 微胞 (micelle)指的是由表面活性剂所形成的一微形结 构， 该表面活性剂具 有一亲水端以及一亲脂端 (亲油端)， 且该表面活性剂是以该亲水端向外、 亲脂端 (亲油端) 向内而所形成该微形结构。较佳者， 该微形结构为球形、类球形、或其他微形结构 的结构。

本发明中， 含药微胞指的是含白藜芦醇的微胞； 亦即， 含药微胞指的是包覆或包含白 藜芦醇的微胞。

本发明中， 第二脂溶性药物微胞指的是含白藜芦醇以外的 其他脂溶性药物的微胞。 亦 即， 第二脂溶性药物微胞指的是包覆或包含其他脂 溶性药物的微胞。

其中，其他脂溶性药物指的是姜黄素 (Cur _CU min)、槲皮素 (q _Ue r _C etin)、葛根素 (puerari _n )、 及其他白藜芦醇以外的脂溶性药物中的至少一 者或其组合； 亦或是， 其他脂溶性药物指的 是白藜芦醇以外的脂溶性药物。

本发明中， 水溶性药物指的是绿茶萃取物、 表没食子儿茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate；)、表儿茶素 (Epicatechin；)、表儿茶素没食子酸酯 (Epicatechin gallate；)、 表没食子儿茶素 (Epigallocatechin)、 没食子儿茶素没食子酸酯 (Gallocatechin gallate) ^ 没食 子儿茶素 (Gallocatechin；)、 儿茶素没食子酸酯 (Catechin gallate；)、 儿茶素 (Catechin；)、 表没食 子儿茶素没食子酸酉旨 (epigallocatechin gallate, EGCG)、 咖啡因 (Caffeine)、 肉碱 (Carnitine; 又称为卡尼丁或卡尼汀)、左旋肉碱 (L-carnitine；)、辛内弗林 (Synephrine；)、绿原酸（Chlorogenic acid) 、 及其他水溶性药物中的至少一者或其组合。

本发明中，所用的 "无沉淀物产生的状态"一词指不含人类肉眼可� ��到的任何沉淀物， 亦即， 无需藉助人工装置。

本发明提供一种用于减少局部脂肪的医药组成 物， 包含：

多个含药微胞 (micelle), 均匀分布在该医药上可接受的水溶液中； 以及

被包覆在所述含药微胞中的白藜芦醇 (resveratrol);

于一较佳实施例中，所述含药微胞为医药上可 接受的一表面活性剂所形成的一微形结 构， 且该表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值;)大 于 10。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 3 250 nm。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 5 ~ 50 nm。

于一较佳实施例中， 该医药组成物中更包括一医药上可接受的水溶 液， 且该含药微胞 均匀分布在该医药上可接受的水溶液中。该医 药上可接受的水溶液为注射用水、 注射用水 溶液、 或生理食盐水。

于一较佳实施例中， 该表面活性剂为非离子性表面活性剂。

于一较佳实施例中， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中，该聚氧乙烯蓖麻油衍生物 为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Cremophor ELP；)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者 或其组合。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 4至 1 : 500。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 5至 1 : 200。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 8至 1 : 80。

于一较佳实施例中， 该医药组成物在温度 25°C±2°C、 相对湿度 RH60%±5%、 避免光 线直射的条件下进行加速稳定性试验时，该医 药组成物仍维持于无沉淀物产生的状态至少 达 24小时。

于一较佳实施例中， 该医药组成物在温度 25°C±2°C、 相对湿度 RH60%±5%、 避免光 线直射的条件下进行加速稳定性试验时，该医 药组成物仍维持于无沉淀物产生的状态至少 达 6个月。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇在该医药组成物中的浓度为 0.2~166.7mg/mL。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇在该医药组成物中的浓度为 2.5 〜 60 mg/mL。

于一较佳实施例中， 该医药组成物中更包含绿茶萃取物， 且该绿茶萃取物溶解在该医 药上可接受的水溶液中； 其中， 该绿茶萃取物包含：

一第一绿茶萃取成分， 所述第一绿茶萃取成分为表没食子儿茶素没食 子酸酯 (epigallocatechin gallate, EGCG)。

于一较佳实施例中，表没食子儿茶素没食子酸 酯在该医药组成物中的浓度为 0.25~ 300 于一较佳实施例中， 表没食子儿茶素没食子酸酯在该医药组成物中 的浓度为 1 200 于一较佳实施例中， 该表没食子儿茶素没食子酸酯的含量， 以该绿茶萃取物的总重量 于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重量比为 30: 1至 1 : 30。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重量比为 20: 1至 1 : 20。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重量比为 10: 1至 1 : 10。

于一较佳实施例中， 以该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量为一个 重量单位计之， 该 表面活性剂的重量为 0.24 70个重量单位； 抑或是， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量 与该表面活性剂的重量比为 4: 1至 1 : 70。

于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含一 医药上可接受的水溶液以及一第二脂溶 性药物微胞， 该第二脂溶性药物微胞均匀分布在该医药上可 接受的水溶液中。

该第二脂溶性药物微胞为第二表面活性剂所形 成的另一微形结构，且一其他脂溶性药 物 （或第二脂溶性药物） 被包覆在所述第二脂溶性药物微胞中。

于一较佳实施例中， 该第二表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10。

于一较佳实施例中， 该第二表面活性剂为非离子性表面活性剂。

于一较佳实施例中， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、

2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物

(polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中，该聚氧乙烯蓖麻油衍生物 为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Cremophor ELP；)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者 或其组合。

于一较佳实施例中， 该脂溶性药物为槲皮素 (quercetin)、 辛弗林 (synephrine)、 葛根素 (puerarin), 姜黄素 (C _UrCU mi _n )、 以及白藜芦醇以外的其他脂溶性药物中的至少 一者或其组 合。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 30 1 ~1 20 于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 20 1 ~1 于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 15 1 ~1 于一较佳实施例中，该医药组成物中更包括一 医药上可接受的水溶液以及一水溶性药 于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物、 表没食子儿茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate)、表儿茶素 (Epicatechin)、表儿茶素没食子酸酯 (Epicatechin gallate)、 表没食子儿茶素 (Epigallocatechin)、 没食子儿茶素没食子酸酯 (Gallocatechin gallate)、 没食 子儿茶素 (Gallocatechin；)、 儿茶素没食子酸酯 (Catechin gallate；)、 儿茶素 (Catechin；)、 表没食 子儿茶素没食子酸酉旨 (epigallocatechin gallate, EGCG；)、 咖啡因 (Caffeine；)、 肉碱 (Carnitine; 又称为卡尼丁或卡尼汀)、左旋肉碱 (L-carnitine；)、辛内弗林 (Synephrine；)、绿原酸（Chlorogenic acid) 、 及其他水溶性药物中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 20: 1-1： 30。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 15: 1-1： 20。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 10: 1-1： 15。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为表没食子儿茶素没食子酸酯， 且表没食子儿茶素 没食子酸酯在该医药组成物中的浓度为 0.25 〜 300 mg/mL。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为表没食子儿茶素没食子酸酯， 且表没食子儿茶素 没食子酸酯在该医药组成物中的浓度为 1~200 mg/mL。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 30: 1至 1 : 30。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 20: 1至 1 : 20。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 10： 1至 1： 10。

于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含助 溶剂 (Cosolvent )，用以增加药物溶解度。 于一较佳实施例中， 该助溶剂为聚乙二醇 (polyethylene glycol)、 丙二醇 (； propylene glycol) ^ 乙醇 (ethanol)、 以及其他助溶剂中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该聚乙二醇为聚乙二醇 200 (PEG 200)、 聚乙二醇 400 (PEG 400)、 聚乙二醇 600 (PEG 600)、 及其他聚乙二醇中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药组成物中更包含助悬剂 (又称为悬浮剂； suspending agent；)， 用以降低药物或微胞的沉降速度。

于一较佳实施例中， 该助悬剂为海藻酸钠 (Sodium alginate)、 甘油 (glycerol)、 羟甲基纤 维素钠 (carboxymethylcellulose sodium；)、 甘露醇 (mannitol)、 以及其他助悬剂中的至少一者 或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药组成物中更包含油相赋形剂 (oil phase excipients )， 用以增 加医药组成物的稳定性及药物的溶解度。

于一较佳实施例中， 油相赋形剂为不饱和脂肪酸、 甘油 (glycerol)、 三酸甘油脂 (triglyceride；)、 及其他油相赋形剂中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该不饱和脂肪酸为油酸 (oleic acid；)、 蓖麻油 (castor oil)、 芝麻油 (sesame oil)、 棉子油 (cottonseed oil)、 大豆油 (soybean oil)、 红花子油 (safflower oil)、 玉米油 (corn oil), 以及其他不饱和脂肪酸中的至少一者或其组合 。

于一较佳实施例中， 该三酸甘油脂为中链三酸甘油酯 (medium chain triglycerides) ^ 及 其他三酸甘油脂中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉剂。

于一较佳实施例中， 该局部麻醉剂为酰胺类、 对氨基苯甲胺脂类、 及胺基醚类中的至 少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该酰胺类为待布卡因 (Dibucaine)、 利多卡因 (Lidocaine)、 甲哌卡 因盐酸盐 (Mepivacaine HC1 ) 、 布比卡因盐酸盐 (Bupivacine HC1 ) 、 吡咯卡因盐酸盐 (Pyrrocaine HC1 ) 、 丙胺卡因盐酸盐 (Prilocaine HC1 ) 、 Digammacaine、 及奥昔卡因 (Oxethazaine) 中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该对氨基苯甲胺脂类为布他卡因（Butacaine；)� � 二甲卡因 (Dimethocaine)、 及图托卡因 (Tutocaine)中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该胺基醚类为奎尼卡因 (Quinisocaine；)、 及普莫卡因 (Pramocaine) 的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药上可接受的水溶液中包含抗氧化剂。

于一较佳实施例中， 该抗氧化剂为 β-胡萝卜素 (beta-carotene)、 叶黄素 (lutein)、 番茄红 素 (lycopene；)、 胆红素 (bilirubin；)、 维生素 A(vitamin A；)、 维生素 C (vitamin C; 又称为抗坏 血酸， 即 ascorbic acid)、维生素 E (vitamin E)、尿酸 (uric acid)、一氧化氮 (nitric oxide) 、 硝基氧（nitroxide)、丙酮酸盐（pyruvate)、过氧� �氢酶 (catalase；)、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase；)、 谷胱甘肽过氧化物酶 (； glutathione peroxidases；)、 N-乙酰半胱氨酸 (N-acetyl cysteine；)、 及柚皮素 (naringenin)中的至少一者或其组合。

本发明再提供一种用于减少局部皮下脂肪量的 皮下脂肪层注射针剂或皮下注射针剂， 包含- 医药上可接受的水溶液；

多个含药微胞 (micelle), 均匀分布在该医药上可接受的水溶液中； 以及

被包覆在所述含药微胞中的白藜芦醇 (resveratrol);

其中， 所述含药微胞为医药上可接受的一表面活性剂 所形成的一微形结构， 且该表面 活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值；)大于 10。

于一较佳实施例中， 所述局部皮下脂肪量为施用部位的皮下脂肪量 。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 3 ~ 250nm。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 5 ~ 50 nm。

于一较佳实施例中， 该医药上可接受的水溶液为注射用水、 注射用水溶液、 或生理食 盐水。

于一较佳实施例中， 该表面活性剂为非离子性表面活性剂。

于一较佳实施例中， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(Tween 80)、

2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中，该聚氧乙烯蓖麻油衍生物 为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Cremophor ELP；)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cr _e m _O ph _O r RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者 或其组合。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 4至 1 : 500。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 5至 1 : 200。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 8至 1 : 80。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇在该皮下脂肪层注射针剂或皮下注射 针剂中的浓度为

0.2 166.7 mg/mL。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇在该皮下脂肪层注射针剂或皮下注射 针剂中的浓度为

于一较佳实施例中， 该皮下脂肪层注射针剂或皮下注射针剂中更包 含绿茶萃取物， 且 该绿茶萃取物溶解在该医药上可接受的水溶液 中； 其中， 该绿茶萃取物包含：

一第一绿茶萃取成分， 所述第一绿茶萃取成分为表没食子儿茶素没食 子酸酯

(epigallocatechin gallate, EGCG)。

于一较佳实施例中，表没食子儿茶素没食子酸 酯在该皮下脂肪层注射针剂或皮下注射 针剂中的浓度为 0.25 ~300mg/mL。

于一较佳实施例中，表没食子儿茶素没食子酸 酯在该皮下脂肪层注射针剂或皮下注射 针剂中的浓度为 1~200 mg/mL。

于一较佳实施例中， 该表没食子儿茶素没食子酸酯的含量， 以该绿茶萃取物的总重量 为 100重量百分比计之， 为 45 ~ 100%。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重量比为 30: 1至 1 : 30。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重量比为 20: 1至 1 20。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重量比为 10: 1至 1 10。

于一较佳实施例中， 以该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量为一个 重量单位计之， 该 表面活性剂的重量为 0.24 70个重量单位； 抑或是， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量 与该表面活性剂的重量比为 4: 1至 1 : 70。

于一较佳实施例中， 该施用部位的施用剂 ：为每平方公分注射 0.2

于一较佳实施例中， 该施用部位的施用剂 ：为每平方公分注射 0.4

于一较佳实施例中， 该施用部位的施用剂 ：为每公斤 0.2 40毫克。

于一较佳实施例中， 该施用部位的施用剂 ：为每公斤 0.4~20毫克。

于一较佳实施例中， 施用频率为每间隔 1天至 30天施予该施用部位 1次至 12次。 于一较佳实施例中， 施用频率为每间隔 1天至 21天施予该施用部位 1次至 8次。 于一较佳实施例中，该皮下脂肪层注射针剂或 皮下注射针剂中更包含一第二脂溶性药 物微胞， 且该第二脂溶性药物微胞为均匀分布在该医药 上可接受的水溶液中。

该第二脂溶性药物微胞为另一表面活性剂所形 成的一微形结构，且该其他脂溶性药物 被包覆在所述第二脂溶性药物微胞中。

于一较佳实施例中， 该另一表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10。

于一较佳实施例中， 该另一表面活性剂为非离子性表面活性剂。

于一较佳实施例中， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、

2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中，该聚氧乙烯蓖麻油衍生物 为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Cremophor ELP；)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者 或其组合。

较佳者， 该脂溶性药物为姜黄素 (Curcumin)、 槲皮素 (quercetin)、 葛根素 (puerarin)、 及 其他白藜芦醇以外的脂溶性药物中的至少一者 或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药上可接受的水溶液中更包含一水溶性药 物。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物、 表没食子儿茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate；)、表儿茶素 (Epicatechin；)、表儿茶素没食子酸酯 (Epicatechin gallate；)、 表没食子儿茶素 (Epigallocatechin)、 没食子儿茶素没食子酸酯 (Gallocatechin gallate) ^ 没食 子儿茶素 (Gallocatechin；)、 儿茶素没食子酸酯 (Catechin gallate；)、 儿茶素 (Catechin；)、 表没食 子儿茶素没食子酸酉旨 (epigallocatechin gallate, EGCG)、 咖啡因 (Caffeine)、 肉碱 (Carnitine; 又称为卡尼丁或卡尼汀)、左旋肉碱 (L-carnitine；)、辛内弗林 (Synephrine；)、绿原酸（Chlorogenic acid) 、 及其他水溶性药物中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉剂。

于一较佳实施例中， 该局部麻醉剂为酰胺类、 对氨基苯甲胺脂类、 及胺基醚类中的至 少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该酰胺类为待布卡因 (Dibucaine)、 利多卡因 (Lidocaine)、 甲哌卡 因盐酸盐 (Mepivacaine HC1 ) 、 布比卡因盐酸盐 (Bupivacine HC1) 、 吡咯卡因盐酸盐 (Pyrrocaine HC1 ) 、 丙胺卡因盐酸盐 （Prilocaine HC1 ) 、 Digammacaine、 及奥昔卡因 (Oxethazaine) 中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该对氨基苯甲胺脂类为布他卡因（Butacaine；)� � 二甲卡因 (Dimethocaine)、 及图托卡因 (Tutocaine)的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该胺基醚类为奎尼卡因 (Quinisocaine；)、 及普莫卡因 (Pramocaine) 的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该医药上可接受的水溶液中包含抗氧化剂。

于一较佳实施例中， 该抗氧化剂为 β-胡萝卜素 (beta-carotene)、 叶黄素 (lutein)、 番茄红 素 (lycopene；)、 胆红素 (bilirubin；)、 维生素 A(vitamin A；)、 维生素 C (vitamin C; 又称为抗坏 血酸， 即 ascorbic acid)、维生素 E (vitamin E)、尿酸 (uric acid)、一氧化氮 (nitric oxide) 、 硝基氧（nitroxide)、丙酮酸盐（pyruvate)、过氧� �氢酶 (catalase；)、超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase)、 谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidases)、 N-乙酰半胱氨酸 (N-acetyl cysteine；)、 及柚皮素 (naringenin)中的至少一者或其组合。

本发明提供一种减少个体局部部位的皮下脂肪 量的方法，包括在该个体的该局部部位 施用一医药组成物， 其中， 该医药组成物包含：

多个含药微胞 (micelle); 以及

被包覆在所述含药微胞中的白藜芦醇 (resveratrol);

其中， 所述含药微胞为医药上可接受的一表面活性剂 而形成的一微形结构， 且该表面 活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值；)大于 10。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 3 〜 250 nm。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 5 ~ 50 nm。

于一较佳实施例中， 该表面活性剂为非离子性表面活性剂。

于一较佳实施例中， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中，该聚氧乙烯蓖麻油衍生物 为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Cremophor ELP；)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者 或其组合。

于-一较佳实施例中， 其中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 4至 1 : 500。 于-一较佳实施例中， 其中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 :

于-一较佳实施例中， 其中， 白藜芦醇与该表面活性剂的重量比为 1 : 8至 1 : 80

o 于-一较佳实施例中， 其中， 白藜芦醇在该医药组成物中的浓度为 0.2 〜166.7 mg/m oL。 于-一较佳实施例中， 其中， 白藜芦醇在该医药组成物中的浓度为 2.5 〜 60 mg/mL。 于-一较佳实施例中，该医药组成物中更包含� �医药上可接受的水溶液以及一第二脂溶 性药物微胞， 该第二脂溶性药物微胞为均匀分布在该医药上 可接受的水溶液中； 其中， 该 第二脂溶性药物微胞为第二非离子性表面活性 剂所形成的另一微形结构，且一第二脂溶性 药物被包覆在所述第二脂溶性药物微胞中。

于一较佳实施例中， 该第二非离子性表面活性剂的亲水亲油性平衡 值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10。

于一较佳实施例中， 该第二非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、

2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中， 该第二非离子性表面活性剂为聚氧乙烯 35 蓖麻油 (Cremophor ELP), 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至 少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该第二脂溶性药物为槲皮素 (quercetin)、 辛弗林 (synephrine)、 葛 根素（puerarin)、 姜黄色素类物质（curcuminoid)、 姜黄素（curcumin)、 及其他白藜芦醇 (resveratrd)以外的脂溶性药物至少一者或其组合 。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 ： 。 于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 ： 。 于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 ： 。 于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含一 医药上可接受的水溶液以及一水溶性药 于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物、 表没食子儿茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate)、表儿茶素 (Epicatechin)、表儿茶素没食子酸酯 (Epicatechin gallate)、 表没食子儿茶素 (Epigallocatechin)、 没食子儿茶素没食子酸酯 (Gallocatechin gallate)、 没食 子儿茶素 (Gallocatechin；)、 儿茶素没食子酸酯 (Catechin gallate；)、 儿茶素 (Catechin；)、 表没食 子儿茶素没食子酸酉旨 (epigallocatechin gallate, EGCG；)、 咖啡因 (Caffeine；)、 肉碱 (Carnitine; 又称为卡尼丁或卡尼汀)、左旋肉碱 (L-carnitine；)、辛内弗林 (Synephrine；)、绿原酸（Chlorogenic acid) 、 及其他水溶性药物中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 20

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 20 于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为表没食子儿茶素没食子酸酯， 且表没食子儿茶素 没食子酸酯在该医药组成物中的浓度为 0.25 300 mg/mL。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为表没食子儿茶素没食子酸酯， 且表没食子儿茶素 没食子酸酯在该医药组成物中的浓度为 mg/mL。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 至 。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 至 。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 ： 至 ： 。

于一较佳实施例中， 以该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量为一个 重量单位计之， 该 表面活性剂的重量为 0.24 70个重量单位； 抑或是， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量 与该表面活性剂的重量比为 至 。

于一较佳实施例中， 在该局部部位施用该医药组成物的剂量为每平 方公分注射 0.2 ~ 20毫克。

于一较佳实施例中， 在该局部部位施用该医药组成物的剂量为每平 方公分注射 0.4 ~ 于一较佳实施例中， 在该局部部位施用该医药组成物的剂量为每公 斤 0.2 ~ 40毫克。 于一较佳实施例中， 在该局部部位施用该医药组成物的剂量为每公 斤 0.4 ~ 20毫克。 于一较佳实施例中，施用该医药组成物的频率 为每间隔 1天至 30天施予该施用部位 1 次至 12次。

于一较佳实施例中，施用该医药组成物的频率 为每间隔 1天至 21天施予该施用部位 1 次至 8次。

于一较佳实施例中， 该个体为一动物或一人类。

于一较佳实施例中， 为在该个体的该局部部位注射、 或涂抹 (apply)该医药组成物。 于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含一 助溶剂 (cosolvent；)、一助悬剂 (suspending agent ) , 以及一油相赋形剂 (oil phase excipients；)中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该油相赋形剂及 /或助溶剂与该非离子性表面活性剂共同形成� � 微形结构。

本发明提供一种医药组成物在制备用于减少个 体局部部位皮下脂肪量的药物或皮下 注射剂 (subcutaneous inj ection formulation)的用途； 该医药组成物包含：

多个含药微胞 (micelle); 以及

被包覆在所述含药微胞中的白藜芦醇 (resveratrol);

其中， 所述含药微胞为医药上可接受的一非离子表面 活性剂所形成的一微形结构， 且 该非离子表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值；)大 于 ιο。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 3 250 nm。

于一较佳实施例中， 该些含药微胞的粒径为 5~50 nm。

于一较佳实施例中， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中，该聚氧乙烯蓖麻油衍生物 为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Cremophor ELP；)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者 或其组合。

于一较佳实施例中， 白藜芦醇与该非离子表面活性剂的重量比为 1 : 4至 1 : 500。 于一较佳实施例中， 白藜芦醇在该医药组成物中的浓度为 0.2〜 166.7 mg/mL。

于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含一 医药上可接受的水溶液以及一第二脂溶 性药物微胞， 该第二脂溶性药物微胞为均匀分布在该医药上 可接受的水溶液中； 其中， 该 第二脂溶性药物微胞为第二非离子性表面活性 剂所形成的另一微形结构，且一第二脂溶性 药物被包覆在所述第二脂溶性药物微胞中。 于一较佳实施例中， 该第二非离子性表面活性剂的亲水亲油性平衡 值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10。

于一较佳实施例中， 该第二非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(T _ween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives；)、 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组 合。

于一较佳实施例中， 该第二非离子性表面活性剂为聚氧乙烯 35 蓖麻油 (Cremophor ELP)^ 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至 少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该第二脂溶性药物为槲皮素 (quercetin)、 辛弗林 (synephrine)、 葛 根素 Cpuerarin)、 姜黄色素类物质 (curcuminoid)及其他白藜芦醇 (resveratrol)以外的脂溶性药 物中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该第二脂溶性药物的重量比为 30: 1 - 1： 20。 于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含一 医药上可接受的水溶液以及一水溶性药 物。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物、 表没食子儿茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate)、表儿茶素 (Epicatechin)、表儿茶素没食子酸酯 (Epicatechin gallate)、 表没食子儿茶素 (Epigallocatechin)、 没食子儿茶素没食子酸酯 (Gallocatechin gallate)、 没食 子儿茶素 (Gallocatechin；)、 儿茶素没食子酸酯 (Catechin gallate；)、 儿茶素 (Catechin；)、 表没食 子儿茶素没食子酸酉旨 (epigallocatechin gallate, EGCG；)、 咖啡因 (Caffeine；)、 肉碱 (Carnitine; 又称为卡尼丁或卡尼汀)、左旋肉碱 (L-carnitine；)、辛内弗林 (Synephrine；)、绿原酸（Chlorogenic acid) 、 及其他水溶性药物中的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 20: 1 - 1： 30。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为表没食子儿茶素没食子酸酯， 且表没食子儿茶素 没食子酸酯在该皮下脂肪层注射针剂或皮下注 射针剂中的浓度为 0.25~300mg/mL。

于一较佳实施例中， 该水溶性药物为绿茶萃取物， 且该白藜芦醇与该绿茶萃取物的重 量比为 30: 1至 1 : 30。

于一较佳实施例中， 以该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量为一个 重量单位计之， 该 非离子表面活性剂的重量为 0.24 70个重量单位； 抑或是， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的 总重量与该非离子表面活性剂的重量比为 4: 1至 1 : 70。

于一较佳实施例中， 该药物或皮下注射剂中包含治疗有效量的该医 药组成物。

于一较佳实施例中， 治疗有效量为每平方公分局部部位施用 0.2〜 20毫克该医药组成 于一较佳实施例中， 治疗有效量为每公斤体重施用 0.2 40毫克该医药组成物。

于一较佳实施例中， 该药物或皮下注射剂的施用频率为每间隔 1天至 30天施予该施 用部位 1次至 12次。

于一较佳实施例中， 该个体为一动物。

于一较佳实施例中， 为在该个体的该局部部位注射该药物或皮下注 射剂； 抑或是， 在 该个体的该局部部位涂抹 (apply)该药物。

于一较佳实施例中，该医药组成物中更包含一 助溶剂 (cosolvent；)、一助悬剂 (suspending agent ) , 以及一油相赋形剂 (oil phase excipients；)的至少一者或其组合。

于一较佳实施例中， 该油相赋形剂及 /或助溶剂与该非离子性表面活性剂共同形成� � 微形结构。 附图说明

图 1A: 无微胞的白藜芦醇皮下注射液及无微胞的绿茶 萃取物皮下注射液对大鼠皮下 脂肪量影响的长条图。

图 1B: 无微胞的白藜芦醇皮下注射液及无微胞的绿茶 萃取物皮下注射液对大鼠相对 总增重影响的长条图。

图 2A: 利用不同赋形剂制备出的白藜芦醇皮下注射针 剂， 对大鼠局部皮下脂肪量影 响的长条图。

图 2B: 利用不同赋形剂制备出的白藜芦醇皮下注射针 剂， 对大鼠相对总增重影响的 长条图。

图 3 : 白藜芦醇医药组成物对大鼠皮下脂肪量影响的 长条图。

图 4A: 白藜芦醇复方医药组成物对大鼠皮下脂肪量影 响的长条图。

图 4B: 白藜芦醇复方医药组成物对大鼠相对总增重影 响的长条图。

图 5 : 白藜芦醇 -其他脂溶性药物复方医药组成物对成熟脂肪� �胞进行细胞凋亡的影 响。

图 6: 白藜芦醇 -其他水溶性药物复方医药组成物对成熟脂肪� �胞进行细胞凋亡的影 响。 具体实施方式

白藜芦醇 (resveratrol)为一种多酚类化合物， 主要存在于红葡萄皮、 虎杖、 或红酒中。 由于白藜芦醇难溶于水溶液、 容易在体内快速代谢成葡萄糖醛酸与硫酸盐代 谢物、 会快速 经由尿液及粪便排出、 以及其身体可利用率极差等原因， 利用白藜芦醇开发减少局部脂肪 的医药组成物会面临相当程度的困难。发明人 在开发此医药组成物的初期，即面临此困境。

实验一： 白藜芦醇及绿茶萃取物皮下注射液对大鼠皮下 脂肪量及体重的影响 配制绿茶萃取物皮下注射液： 利用注射用水 (water for injection)将绿茶萃取物配制成 5 mg/mL水溶液。 以 0.2 μιη滤膜过滤， 即为本实验所述的 5 mg/mL绿茶萃取物皮下注射液。 须避光保存于 4°C冰箱。 配制白藜芦醇皮下注射液：利用习知常用于非 水溶性药物注射剂的赋形剂聚山梨醇酯 80 (polysorbate 80, Tween 80)、 溶媒乙醇、 以及注射用水将白藜芦醇配制成 5 mg/mL溶液。 详细配制方法如下： 将 0.5 g白藜芦醇与适量溶媒乙醇混合， 使白藜芦醇完全溶解后， 再 加入 0.1 g聚山梨醇酯 80 (Tween 80)， 使聚山梨醇酯完全溶解； 抽气挥发 2 ~ 4小时， 使乙 醇挥发； 待乙醇完全挥发后， 加入注射用水， 使总体积为 100 mL; 搅拌均匀后， 再以 0.2 μιη滤膜过滤， 即为本实验所述的 5 mg/mL的白藜芦醇皮下注射液。 须避光保存于 4°C冰 箱。

使用 7周龄 SD品系雄性大鼠 (male Sprague-Dawley rat)进行实验。 首先， 以高脂饲料 (high-fat diet, 厂牌为 Research Diets, Inc.; 型号为 #1)12492；)喂食 18只大鼠诱导皮下脂肪增 力 B， 连续喂食至大鼠体重达 330±10 g后， 将大鼠随机分成 3组， 分别为高脂对照组、 白 藜芦醇组、 及绿茶萃取物组， 每组 6只大鼠， 使各组大鼠的体重无统计差异。 记录每只大 鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验前体重" 。 然后， 以下列方式给予药物。

将 5 mg/mL的白藜芦醇皮下注射液， 注射至白藜芦醇组大鼠的下腹股沟的皮下脂肪 层，每次注射量为每公斤体重注射 8 mg (8 mg/kg)白藜芦醇；亦即，每公斤体重注射 1.6 mL 上述 5 mg/mL的白藜芦醇皮下注射液。 将 5 mg/mL的绿茶萃取物皮下注射液， 注射至绿 茶萃取物组大鼠的下腹股沟的皮下脂肪层， 每次注射量为每公斤体重注射 8 mg (8 mg/kg) 绿茶萃取物； 亦即， 每公斤体重注射 1.6 mL上述 5 mg/mL的绿茶萃取物皮下注射液。 高 脂对照组则以上述同样注射方式给予同体积注 射用水。

上述注射部位为大鼠下腹股沟脂肪处， 平均注射于左、 右两侧， 于试验第 1、 3、 5日 各注射 1次。试验期间持续给予高脂饲料，并每日记� �体重变化，每周记录饮水摄食一次， 于试验第 20天禁食， 第 21天以二氧化碳牺牲大鼠。

记录每只大鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验后体重"。 将每只大鼠的 "试验后体 重"扣除 "试验前体重"， 得到 "总增重" 。 将各组大鼠的总增重除以高脂对照组大鼠的 总增重， 得到 "相对总增重" 。

取大鼠左右两侧下腹股沟的脂肪进行秤重， 并计算各组下腹股沟的脂肪量。 以平均值

±SD方式呈现数据， 并以单因子变异数分析 （one-way ANOVA) 进行统计。 统计结果以 符号或英文字母表示， 不同符号或字母表示组间具有统计差异 (p< 0.05)， 相同符号或字母 则表示组间不具有统计差异 (p> 0.05)。

请参阅图 1A以及图 1B， 图 1 A为无微胞的白藜芦醇皮下注射液及无微胞的� �茶萃取 物皮下注射液对大鼠皮下脂肪量影响的长条图 。 图 1B为无微胞的白藜芦醇皮下注射液及 无微胞的绿茶萃取物皮下注射液对大鼠相对总 增重影响的长条图。其中， 所述下腹股沟脂 肪量为左右两侧下腹股沟脂肪量的总和。

图 1A结果显示， 经 3次皮下脂肪注射给药后， 与高脂对照组相比， 白藜芦醇组和绿 茶萃取物组注射部位局部脂肪量都没有显著减 少 (p> 0.05), 显示直接将溶解后的白藜芦醇 或绿茶萃取物注射到皮下脂肪层， 无法减少注射部位的局部脂肪。 图 IB结果显示， 经 3次皮下脂肪注射给药后， 与高脂对照组相比， 白藜芦醇组和绿 茶萃取物组大鼠的体重都没有显著减少 (p> 0.05), 显示直接将溶解后的白藜芦醇或绿茶萃 取物注射到皮下脂肪层， 无法减少体重。

其中， 绿茶萃取物为水溶性极佳的成分， 先前的细胞实验研究发现， 其可促进脂肪细 胞凋亡， 但将绿茶萃取物溶解后直接注射于皮下脂肪处 ， 竟无法减少其局部皮下脂肪， 也 无法减少体重。 由本实验可知， 直接将白藜芦醇或绿茶萃取物溶解后注射到皮 下脂肪层， 不足以减少局部脂肪及体重。发明人为了克服 此问题， 进一步研究开发出本发明包含白藜 芦醇的医药组成物。

实验二： 不同种类的白藜芦醇皮下注射针剂对大鼠皮下 脂肪量及体重的影响 以下列方式配制白藜芦醇生理食盐水溶液、 白藜芦醇 PEG溶液、 以及白藜芦醇 ELP 溶液。

白藜芦醇生理食盐水溶液的配制方法：

将 500mg白藜芦醇与适量的注射用生理食盐水混合� �� 使最终体积达 100mL。 搅拌均 匀， 使白藜芦醇完全溶解， 即可得到白藜芦醇生理食盐水溶液， 且所述白藜芦醇生理食盐 水溶液中的白藜芦醇浓度为 5mg/mL。

白藜芦醇 PEG溶液的配制方法：

将 15 g 聚乙二醇 400 (polyethylene glycol 400， 简称为 PEG400)、 15 g甘油 (glycerol)、 以及适量的注射用生理食盐水混合， 使最终体积达 100 mL。 搅拌均匀， 使聚乙二醇 400 及甘油完全溶解， 得到聚乙二醇暨甘油混合液。 将 450 mg白藜芦醇与适量的聚乙二醇暨 甘油混合液混合， 使最终体积达 90 ml。 搅拌均匀， 使白藜芦醇完全溶解， 即可得到白藜 芦醇 PEG溶液。 所述白藜芦醇 PEG溶液中的白藜芦醇浓度为 5mg/mL。

白藜芦醇 ELP溶液的配制方法：

将 500 mg 白藜芦醇与 100 160 mL 二氯甲垸 (dichloromethane)混合， 于室温下以 150~500rpm搅伴至白藜芦醇完全溶解。 加入 20 g聚氧乙烯 35蓖麻油 (Kolliphor ELP, 简 称为 ELP)， 在转速 100 300 rpm条件下搅拌均匀， 使二氯甲垸挥发。 待二氯甲垸完全挥 发后， 缓慢加入注射用生理食盐水， 使最终体积达 100 mL, 搅拌均匀， 即可得到白藜芦 醇 ELP溶液。 所述白藜芦醇 ELP溶液中的白藜芦醇浓度为 5mg/mL、 聚氧乙烯 35蓖麻油 (ELP)的浓度约为 20% (重量百分比；)、 且白藜芦醇与聚氧乙烯 35蓖麻油的重量比为 1 : 40。

使用 6周龄 SD品系雄性大鼠 (male Sprague-Dawley rat)进行实验。 首先， 以高脂饲料 (high-fat diet, 厂牌为 Research Diets, Inc.; 型号为 #D12492)喂食 20只大鼠诱导皮下脂肪增 力口， 连续喂食至大鼠体重达 330±10 g后， 将大鼠随机分成 4组， 分别为控制组、 生理食 盐水组、 PEG组及 ELP组， 每组 5只大鼠， 使各组大鼠的体重无统计差异。 记录每只大 鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验前体重" 。 然后， 以下列方式给予药物。

将白藜芦醇生理食盐水溶液、 白藜芦醇 PEG溶液、 以及白藜芦醇 ELP溶液， 分别注 射至生理食盐水组、 PEG组及 ELP组大鼠的下腹股沟的皮下脂肪层， 每次注射量为每公 斤体重注射 4 mL(4mL/kg), 使得每次注射剂量都是每公斤体重施予 20 mg白藜芦醇 （20 mg/kg _; 计算方式为 4mL/kg χ 5 mg/mL = 20 mg/kg), 控制组则以上述同样注射方式给予同 体积注射用生理食盐水。

上述注射部位为大鼠下腹股沟脂肪处， 平均注射于左、 右两侧， 于试验第 1、 2、 3、 4 日各注射 1次。 试验期间持续给予高脂饲料， 并每日记录体重变化， 每周记录饮水摄食一 次， 试验共进行 14天， 于第 15天以二氧化碳牺牲大鼠。

记录每只大鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验后体重"。 将每只大鼠的 "试验后体 重"扣除 "试验前体重"， 得到 "总增重" 。 将各组大鼠的总增重除以控制组大鼠的总增 重， 得到 "相对总增重" 。

取大鼠左右两侧下腹股沟的皮下脂肪进行秤重 ，并将左右两侧下腹股沟皮下脂肪量加 总， 以计算出下腹股沟皮下脂肪量。将各组大鼠的 下腹股沟皮下脂肪量除以控制组大鼠的 下腹股沟皮下脂肪量， 得到 "下腹股沟皮下脂肪相对重量" 。

以平均值±80方式呈现数据， 并以单因子变异数分析 （ one-way ANOVA) 进行统计。 统计结果以符号或英文字母表示， 不同符号或字母表示组间具有统计差异 (p< 0.05)， 相同 符号或字母则表示组间不具有统计差异 (p> 0.05)。

请参阅图 2A及图 2B。 图 2A是利用不同赋形剂制备出的白藜芦醇皮下注� ��针剂， 对 大鼠局部皮下脂肪量影响的长条图。 图 2B是利用不同赋形剂制备出的白藜芦醇皮下注� �� 针剂， 对大鼠相对总增重影响的长条图。

图 2A的结果显示， 控制组大鼠的下腹股沟皮下脂肪相对重量为 100±27.6%， 生理食 盐水组大鼠的下腹股沟皮下脂肪相对重量为 108.2±24.7%， PEG组大鼠的下腹股沟皮下脂 肪相对重量为 114.0±4.4%， ELP组大鼠的下腹股沟皮下脂肪相对重量为 72.5±0.0%。 生理 食盐水组大鼠的下腹股沟皮下脂肪相对重量与 控制组大鼠之间无显著差异，显示直接将白 藜芦醇注射至施用部位的皮下脂肪层， 无法减少施用部位的脂肪 (局部脂肪；)。 PEG组大鼠 的下腹股沟皮下脂肪相对重量与控制组大鼠之 间无显著差异； ELP组大鼠的下腹股沟皮下 脂肪相对重量与控制组大鼠之间则有显著差异 (p<0.05)， 且 ELP组大鼠的下腹股沟皮下脂 肪相对重量减少 27.5%。

图 2B的结果显示， 控制组大鼠的相对总增重为 100.0±30.8 %， 生理食盐水组大鼠的 相对总增重为 128.3±16.9%， PEG组大鼠的相对总增重为 120.8±18.2%， ELP组大鼠的相 对总增重为 101.3±22.0%， 四组之间无显著差异 (p> 0.05)。

由上述实验可知， 直接将白藜芦醇注射至施用部位的皮下脂肪层 ， 无法减少施用部位 的脂肪 (局部脂肪；)， 也无法减少体重。 将添加赋形剂 PEG (—般常见的助溶剂;)的白藜芦醇 组合物注射至施用部位的皮下脂肪层， 无法减少施用部位的脂肪 (局部脂肪；)， 也无法减少 体重， 但将添加非离子性表面活性剂 ELP 的白藜芦醇组合物注射至施用部位的皮下脂肪 层， 却能够显著减少施用部位的脂肪 (局部脂肪；)。 因此， 需要进一步探讨白藜芦醇组合物 是否必须含有非离子性表面活性剂，才能减少 施用部位的皮下脂肪 (局部脂肪)、减少体重。 进一步分析发现上述施用的白藜芦醇 PEG溶液中没有微胞， 白藜芦醇 ELP溶液中则 具有微胞， 且白藜芦醇是被包覆在 ELP 形成的微胞中。 因此， 更需要进一步探讨微胞对 减少局部脂肪及减少体重的影响。

实验三：包含微胞的白藜芦醇单方组成物皮下 注射针剂对大鼠皮下脂肪量及体重的影 响

以下列方式配制白藜芦醇 ELP部分微胞剂型、 白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型、 白藜 芦醇 ELP微胞剂型、 以及白藜芦醇 HS-15微胞剂型。

白藜芦醇 ELP部分微胞剂型的配制方法： 将 20 g聚氧乙烯 35蓖麻油 (即 ELP)与适量 的注射用生理食盐水混合，使最终重量达 100 go搅拌均匀，使聚氧乙烯 35蓖麻油 (即 ELP) 完全溶解， 获得 20% ELP溶液。将 400 mg白藜芦醇与适量的 20% ELP溶液混合， 使最终 重量达 80 g。搅拌均匀， 使白藜芦醇完全溶解， 即可得到白藜芦醇 ELP部分微胞剂型。所 述白藜芦醇 ELP部分微胞剂型中的白藜芦醇浓度约为 5mg/mL、 聚氧乙烯 35蓖麻油 (ELP) 的浓度约为 20% (重量百分比；)、 且白藜芦醇与聚氧乙烯 35蓖麻油的重量比约为 1 : 40。

白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型的配制方法:将 20 g聚乙二醇硬脂酸酯 15 (Kolliphor HS 15， 简称为 HS-15)与适量的注射用生理食盐水混合， 使最终重量达 100 g。 搅拌均匀， 使 聚乙二醇硬脂酸酯 15 (BP HS-15;)完全溶解， 获得 20% HS-15溶液。 将 400 mg白藜芦醇与 适量的 20% HS-15溶液混合， 使最终重量达 80 g。搅拌均匀， 使白藜芦醇完全溶解， 即可 得到白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型。所述白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型中的白藜芦醇浓度 约为 5mg/mL、 聚乙二醇硬脂酸酯 15 (即 HS-15)的浓度约为 20% (重量百分比)、 且白藜芦 醇与聚乙二醇硬脂酸酯 15 (即 HS-15)的重量比约为 1 : 40。

白藜芦醇 ELP微胞剂型的配制方法： 与实验二中的白藜芦醇 ELP溶液的配制方法相 同。

白藜芦醇 HS-15微胞剂型的配制方法： 将 500 mg的白藜芦醇与 80 140 mL的二氯甲 垸混合， 于室温下以 150~500rpm搅拌至白藜芦醇完全溶解。 加入 20 g聚乙二醇硬脂酸酯 15 (Kolliphor HS 15, 简称为 HS-15), 在转速 100 ~300 rpm条件下搅拌均匀， 使二氯甲垸 挥发。 待二氯甲垸完全挥发后， 缓慢加入注射用生理食盐水， 使最终体积达 100 g， 搅拌 均匀， 以形成多个含药微胞， 即可得到白藜芦醇 HS-15 微胞剂型。 所述白藜芦醇 HS-15 微胞剂型中的白藜芦醇浓度约为 5mg/g、聚乙二醇硬脂酸酯 15 (HS-15)的浓度为 20% (重量 百分比；)、 且白藜芦醇与聚乙二醇硬脂酸酯 15 (HS-15)的重量比为 1 : 40。

利用粒径分析仪 (particle size analyzer)测定白藜芦醇 ELP 部分微胞剂型、 白藜芦醇

HS-15部分微胞剂型、 白藜芦醇 ELP微胞剂型、 以及白藜芦醇 HS-15微胞剂型中是否含有 微胞 (micelle), 并测量微胞的粒径大小。

结果显示， 白藜芦醇 ELP部分微胞剂型、 以及白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型中都含 有大量沉淀物， 且含药微胞的数量较少。 白藜芦醇 ELP微胞剂型、 以及白藜芦醇 HS-15 微胞剂型则为澄清无分层， 且含药微胞的数量较多。 由此可知， 虽然白藜芦醇 ELP部分微胞剂型、 以及白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型中 都含有大量沉淀物， 但上清液中仍含有微胞， 因此， 白藜芦醇 ELP 部分微胞剂型、 白藜 芦醇 HS-15部分微胞剂型、 白藜芦醇 ELP微胞剂型、 以及白藜芦醇 HS-15微胞剂型都是 本发明的医药组成物。

使用 6周龄 SD品系雄性大鼠 (male Sprague-Dawley rat)进行实验。 首先， 以高脂饲料

(high-fat diet, 厂牌为 Research Diets, Inc.; 型号为 #D 12492)喂食 20只大鼠诱导皮下脂肪增 力口， 连续喂食至大鼠体重达 330±10 g后， 将大鼠随机分成 5组， 分别为控制组、 ELP部 分微胞组、 HS-15部分微胞组、 ELP微胞组、 以及 HS-15微胞组， 每组 4只大鼠， 使各组 大鼠的体重无统计差异。记录每只大鼠的体重 ， 定义为每只大鼠的"试验前体重"。然后， 以下列方式给予药物。

将白藜芦醇 ELP部分微胞剂型、 白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型、 白藜芦醇 ELP微胞 剂型、 以及白藜芦醇 HS-15微胞剂型分别混合均匀后 (使部分微胞剂型中的沉淀物均匀悬 浮；)， 分别注射至 ELP部分微胞组、 HS-15部分微胞组、 ELP微胞组、 以及 HS-15微胞组 大鼠的下腹股沟的皮下脂肪层，每次注射量为 每公斤体重注射 4 mL(4mL/kg)，使得每次注 射剂量都是每公斤体重施予 20 mg白藜芦醇 C20 mg/kg; 计算方式为 4mL/kg χ 5 mg/mL = 20 mg/kg), 控制组则以上述同样注射方式给予同体积注射 用生理食盐水。

上述注射部位为大鼠下腹股沟脂肪处， 平均注射于左、右两侧， 于试验第 1、 2、 3、 4、 5、 6日各注射 1次。试验期间持续给予高脂饲料， 并每日记录体重变化， 每周记录饮水摄 食一次， 试验共进行 14天， 于第 15天以二氧化碳牺牲大鼠。

记录每只大鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验后体重"。 将每只大鼠的 "试验后体 重"扣除 "试验前体重"， 得到 "总增重" 。 将各组大鼠的总增重除以控制组大鼠的总增 重， 得到 "相对总增重" 。

取大鼠左右两侧下腹股沟的皮下脂肪进行秤重 ，并将左右两侧下腹股沟皮下脂肪量加 总， 以计算出下腹股沟皮下脂肪量。将各组大鼠的 下腹股沟皮下脂肪量除以控制组大鼠的 下腹股沟皮下脂肪量， 得到 "下腹股沟皮下脂肪相对重量" 。

以平均值±80方式呈现数据， 并以单因子变异数分析 （one-way ANOVA)进行统计。 统计结果以符号或英文字母表示， 不同符号或字母表示组间具有统计差异 (p< 0.05)， 相同 符号或字母则表示组间不具有统计差异 (p> 0.05)。

由上述的剂型配制方法以及粒径分析结果可知 ， 白藜芦醇 ELP 部分微胞剂型及白藜 芦醇 ELP微胞剂型中的 ELP浓度、 白藜芦醇浓度都一致， 仅含药微胞的数量具有差异。 因此， 与白藜芦醇 ELP部分微胞剂型相比， 若是白藜芦醇 ELP微胞剂型使得施用部位局 部脂肪显著减少，代表形成含药微胞是白藜芦 醇组成物能显著减少施用部位局部脂肪的关 键因子； 若是白藜芦醇 ELP微胞剂型使得体重显著减少， 代表形成含药微胞是白藜芦醇 组成物能显著减少体重的关键因子。

同样地， 白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型及白藜芦醇 HS-15微胞剂型中的 HS-15浓度、 白藜芦醇浓度都一致， 仅含药微胞的数量具有差异。 因此， 与白藜芦醇 HS-15部分微胞剂 型相比， 若是白藜芦醇 HS-15微胞剂型使得施用部位局部脂肪显著减少� �� 代表形成含药微 胞是白藜芦醇组成物能显著减少施用部位局部 脂肪的关键因子；若是白藜芦醇 HS-15微胞 剂型使得体重显著减少， 代表形成含药微胞是白藜芦醇组成物能显著减 少体重的关键因 子。

实验结果显示， 将白藜芦醇 ELP部分微胞剂型、 或白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型注 射至施用部位的皮下脂肪层， 都能减少施用部位脂肪 (局部脂肪)。 另一方面， 将白藜芦醇 ELP微胞剂型、或白藜芦醇 HS-15微胞剂型注射至施用部位的皮下脂肪层， 也能减少施用 部位脂肪 (局部脂肪)。 四种剂型之间， 以白藜芦醇 ELP微胞剂型的局部溶脂效果最好。

与白藜芦醇 ELP部分微胞剂型相比， 白藜芦醇 ELP微胞剂型能显著减少局部脂肪。 与白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型相比， 白藜芦醇 HS-15微胞剂型能显著减少局部脂肪。

由此可知， 形成微胞是白藜芦醇组成物能显著减少施用部 位局部脂肪的关键因子， 且 以含有聚氧乙烯蓖麻油衍生物 (例如 ELP)所形成的含药微胞的局部溶脂效果最好。

实验结果显示， 将白藜芦醇 ELP部分微胞剂型、 或白藜芦醇 HS-15部分微胞剂型注 射至施用部位的皮下脂肪层， 都能减少体重。 另一方面， 将白藜芦醇 ELP微胞剂型、 或 白藜芦醇 HS-15微胞剂型注射至施用部位的皮下脂肪层， 也能减少体重。 四种剂型之间， 以白藜芦醇 ELP微胞剂型的减重效果最好。

由本实验可知， 形成微胞是白藜芦醇组成物能显著减少体重的 关键因子， 且以含有聚 氧乙烯蓖麻油衍生物 (例如 ELP)所形成的含药微胞的减重效果最好。

实验四： 制备用于减少局部脂肪的医药组成物

本实验利用白藜芦醇制备第一医药组成物，并 利用白藜芦醇及绿茶萃取物制备第二医 药组成物。

制备第一医药组成物的步骤如下：

(a)将第一重量的白藜芦醇与溶媒混合，于室温 下以 200~500rpm搅拌至白藜芦醇完全 溶解；

(b) 加入第二重量的医药上可接受的一表面活性剂 ， 在转速 100 300 rpm条件下搅拌 均匀，使溶媒挥发， 其中， 该表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10;

(c) 待溶媒完全挥发后， 缓慢加入第三重量的医药上可接受的水溶液， 搅拌均匀， 获 得多个含药微胞； 以及

(d) 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 将含有含药微胞的滤液避光冷藏保存；

其中， 步骤 (c)中， 该含药微胞为表面活性剂所形成的一微形结构 ， 且白藜芦醇被包覆 在所述含药微胞中。

较佳者， 第三重量为大于或等于 0g。

较佳者， 步骤 (a)中， 溶媒的沸点小于纯水的沸点。 较佳者， 步骤 (a)中， 溶媒为亲水性溶媒。

较佳者，该亲水性溶媒为甲醇、乙醇、丙酮及 其他亲水性溶媒中的至少一者或其组合。 较佳者， 步骤 (a)中的溶媒为亲脂性溶媒。

较佳者， 该亲脂性溶媒为乙醚、 苯、 氯仿、 乙酸乙酯、 二氯甲垸、 己垸及其他亲脂性 溶媒中的至少一者或其组合。

较佳者， 步骤 (b)中， 该表面活性剂为非离子性表面活性剂。

较佳者， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(Tween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙炼蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives) ^ 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该聚氧乙烯蓖麻油衍生物为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Crem ₀ ph ₀ r ELP)、 聚氧乙烯

40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者或 其组合。

较佳者， 步骤 (a)及 (b)中， 该第一重量的白藜芦醇与该第二重量的表面活 性剂的重量 比为 1 : 4至 1 : 500。

较佳者，步骤 (a)及 (c)中，该第一重量的白藜芦醇与该第三重量的 医药上可接受的水溶 液的重量比为 1 : 400至 3 : 50。

较佳者， 步骤 (c)中， 该该医药上可接受的水溶液为注射用水、 注射用水溶液、 或生理 食盐水。

较佳者， 步骤 (c)中， 该医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉剂。

较佳者， 该局部麻醉剂为酰胺类、 对氨基苯甲胺脂类、 及胺基醚类中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该酰胺类为待布卡因 (Dibucaine；)、 利多卡因 (Lidocaine；)、 甲哌卡因盐酸盐 (Mepivacaine HC1) 、 布比卡因盐酸盐 （ Bupivacine HC1 ) 、 吡咯卡因盐酸盐 （Pyrrocaine HC1 ) 、 丙胺卡因盐酸盐 （Prilocaine HC1) 、 Digammacaine、 及奥昔卡因 （Oxethazaine) 中的至少一者或其组合。

较佳者， 该对氨基苯甲胺脂类为布他卡因 (Butacaine；)、 二甲卡因 (Dimethocaine；)、 及图 托卡因 (Tutocaine)的至少一者或其组合。

较佳者， 该胺基醚类为奎尼卡因 (Quinisocaine；)、 及普莫卡因 (Pramocaine)的至少一者 或其组合。

较佳者， 步骤 (c)中， 该医药上可接受的水溶液中包含抗氧化剂。

较佳者，该抗氧化剂为 β-胡萝卜素 (beta-carotene；)、叶黄素 (lutein；)、番茄红素 (lycopene；)、 胆红素 (bilirubin；)、维生素 A(vitamin K)、维生素 C (vitamin C;又称为抗坏血酸，即 ascorbic acid)、维生素 E (vitamin E)、尿酸 (uric acid)、一氧化氮 (nitric oxide)、硝基氧 (nitroxide)、 丙酮酸盐 (pyruvate) 、 过氧化氢酶 (catalase)、 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase)、 谷 胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidases；)、 N-乙酰半胱氨酸 (N-acetyl cysteine；)、 及柚皮素 (naringenin)中的至少一者或其组合。 制备第二医药组成物的步骤如下：

(al)将第四重量的白藜芦醇与溶媒混合， 于室温下以 200~500rpm搅拌至白藜芦醇完 全溶解；

(bl) 加入第五重量的医药上可接受的一表面活性剂 ， 在转速 100 -300 rpm条件下搅 拌均匀， 使溶媒挥发， 其中， 该表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10;

(cl) 待溶媒完全挥发后， 缓慢加入第六重量的第一医药上可接受的水溶 液， 在转速 100 300 rpm条件下搅拌均匀， 以形成多个含药微胞； 以及

(dl) 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 将含有含药微胞的滤液避光冷藏保存；

其中， 该第一医药上可接受的水溶液中包含第七重量 的绿茶萃取物； 该绿茶萃取物包 含一第一绿茶萃取成分， 所述第一绿茶萃取成分为表没食子儿茶素没食 子酸酯。

较佳者， 步骤 (al)中， 溶媒的沸点小于纯水的沸点。

较佳者， 步骤 (al)中， 溶媒为亲水性溶媒。

较佳者，该亲水性溶媒为甲醇、乙醇、丙酮及 其他亲水性溶媒中的至少一者或其组合。 较佳者， 步骤 (al)中的溶媒为亲脂性溶媒。

较佳者， 该亲脂性溶媒为乙醚、 苯、 氯仿、 乙酸乙酯、 二氯甲垸、 己垸及其他亲脂性 溶媒中的至少一者或其组合。

较佳者， 步骤 (bl)中， 该表面活性剂为非离子性表面活性剂。

较佳者， 该非离子性表面活性剂系聚山梨醇酯 80(Tween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙炼蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives) ^ 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该聚氧乙烯蓖麻油衍生物为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Crem ₀ ph ₀ r ELP)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者或 其组合。

较佳者， 在步骤 (cl)与步骤 (dl)之间， 更包含步骤：

(cl l) 加入第八重量的第二医药上可接受的水溶液， 搅拌均匀， 使第二医药上可接受 的水溶液完全溶解。

较佳者， 该绿茶萃取物为溶解在该第一医药上可接受的 水溶液中， 该含药微胞为表面 活性剂所形成的一微形结构， 且白藜芦醇被包覆在所述含药微胞中。

较佳者， 该第一医药上可接受的水溶液中的绿茶萃取物 中， 表没食子儿茶素没食子酸 酯的含量， 以该绿茶萃取物的总重量为 100重量百分比计之， 为 45 ~ 100 %。

较佳者，步骤 (al)及 (cl)中，该第四重量的白藜芦醇与该第七重量� �绿茶萃取物的重量 比为 30: 1至 1 : 30 。

较佳者， 步骤 (al)~(cl)中， 以该第四重量的白藜芦醇与该第七重量的绿茶 萃取物的总 重量为一个重量单位计之， 该第五重量的表面活性剂的重量为 0.24 70个重量单位； 抑或 是， 该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量与该表面 活性剂的重量比为 4: 1至 1 : 70。 较佳者， 步骤 (al)、 (cl), 及 (cl l)中， 以该第四重量的白藜芦醇与该第七重量的绿茶 萃取物的总重量为一个重量单位计之，该第六 重量的第一医药上可接受的水溶液与该第八 重量的第二医药上可接受的水溶液的总重量为 16 400个重量单位； 抑或是， 该第四重量 与该第七重量的总和： 该第六重量与该第八重量的总和为 1 :400 3:50。

该白藜芦醇与该绿茶萃取物的总重量为一个重 量单位计之，该第一医药上可接受的水 溶液与该第二医药上可接受的水溶液的总重量 为 10 1000个重量单位； 抑或是， 该白藜芦 醇与该绿茶萃取物的总重量：该第一医药上可 接受的水溶液与该第二医药上可接受的水溶 液的总重量为 1 : 1000 - 1： 10。

较佳者， 步骤 (cl)及 (cl l)中， 该第一医药上可接受的水溶液及该第二医药上 可接受的 水溶液为注射用水、 注射用水溶液、 或生理食盐水。

较佳者， 步骤 (cl)中， 该第一医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉 剂。

较佳者， 该局部麻醉剂为酰胺类、 对氨基苯甲胺脂类、 及胺基醚类中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该酰胺类为待布卡因 (Dibucaine；)、 利多卡因 (Lidocaine；)、 甲哌卡因盐酸盐 (Mepivacaine HC1) 、 布比卡因盐酸盐 （ Bupivacine HC1 ) 、 吡咯卡因盐酸盐 （Pyrrocaine HC1 ) 、 丙胺卡因盐酸盐 （Prilocaine HC1) 、 Digammacaine、 及奥昔卡因 （Oxethazaine) 中的至少一者或其组合。

较佳者， 该对氨基苯甲胺脂类为布他卡因 (Butacaine；)、 二甲卡因 (Dimethocaine；)、 及图 托卡因 (Tutocaine)的至少一者或其组合。

较佳者， 该胺基醚类为奎尼卡因 (Quinisocaine；)、 及普莫卡因 (Pramocaine)的至少一者 或其组合。

较佳者， 步骤 (cl)中， 该医药上可接受的水溶液中包含抗氧化剂。

较佳者，该抗氧化剂为 β-胡萝卜素 (beta-carotene)、叶黄素 Clutein)、番茄红素 Clycopene)、 胆红素 (bilirubin；)、维生素 A(vitamin K)、维生素 C (vitamin C;又称为抗坏血酸，即 ascorbic acid)、维生素 E (vitamin E)、尿酸 (uric acid)、一氧化氮 (nitric oxide)、硝基氧 (nitroxide)、 丙酮酸盐 (pyruvate) 、 过氧化氢酶 (catalase)、 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase)、 谷 胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidases；)、 N-乙酰半胱氨酸 (N-acetyl cysteine；)、 及柚皮素 (naringenin)中的至少一者或其组合。

本实验利用白藜芦醇及水溶性药物制备第三医 药组成物，并利用白藜芦醇及其他脂溶 性药物制备第四医药组成物以及第五医药组成 物。

制备第三医药组成物的步骤如下：

(a2)将白藜芦醇与溶媒混合， 于室温下以 200~500rpm搅拌至白藜芦醇完全溶解； (b2) 加入医药上可接受的一表面活性剂， 在转速 100 -300 rpm条件下搅拌均匀， 使 溶媒挥发， 其中， 该表面活性剂的亲水亲油性平衡值 Chydrophilic-lipophilic balance value, HLB值；)大于 10; (c2)待溶媒完全挥发后， 缓慢加入第一医药上可接受的水溶液， 在转速 100 300 rpm 条件下搅拌均匀， 以形成多个含药微胞； 以及

(d2) 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 将含有含药微胞的滤液避光冷藏保存；

其中， 该第一医药上可接受的水溶液中包含水溶性药 物。

较佳者， 该第一医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉 剂。

较佳者， 该局部麻醉剂为酰胺类、 对氨基苯甲胺脂类、 及胺基醚类中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该酰胺类为待布卡因 (Dibucaine；)、 利多卡因 (Lidocaine；)、 甲哌卡因盐酸盐 (Mepivacaine HC1) 、 布比卡因盐酸盐 （ Bupivacine HC1 ) 、 吡咯卡因盐酸盐 （Pyrrocaine HC1 ) 、 丙胺卡因盐酸盐 （Prilocaine HC1) 、 Digammacaine、 及奥昔卡因 （Oxethazaine) 中的至少一者或其组合。

较佳者， 该对氨基苯甲胺脂类为布他卡因 (Butacaine；)、 二甲卡因 (Dimethocaine；)、 及图 托卡因 (Tutocaine)的至少一者或其组合。

较佳者， 该胺基醚类为奎尼卡因 (Quinisocaine；)、 及普莫卡因 (Pramocaine)的至少一者 或其组合。

较佳者， 该医药上可接受的水溶液中包含抗氧化剂。

较佳者，该抗氧化剂为 β-胡萝卜素 (beta-carotene)、叶黄素 (lutein)、番茄红素 (lycopene)、 胆红素 (bilirubin；)、维生素 A(vitamin K)、维生素 C (vitamin C;又称为抗坏血酸，即 ascorbic acid)、维生素 E (vitamin E)、尿酸 (uric acid)、一氧化氮 (nitric oxide)、硝基氧 (nitroxide)、 丙酮酸盐 （pyruvate) 、 过氧化氢酶 (catalase)、 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase)、 谷 胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidases；)、 N-乙酰半胱氨酸 (N-acetyl cysteine；)、 及柚皮素 (naringenin)中的至少一者或其组合。

较佳者， 步骤 (a2)中， 溶媒的沸点小于纯水的沸点。

较佳者， 步骤 (a2)中， 溶媒为亲水性溶媒。

较佳者，该亲水性溶媒为甲醇、乙醇、丙酮及 其他亲水性溶媒中的至少一者或其组合。 较佳者， 步骤 (a2)中的溶媒为亲脂性溶媒。

较佳者， 该亲脂性溶媒为乙醚、 苯、 氯仿、 乙酸乙酯、 二氯甲垸、 己垸及其他亲脂性 溶媒中的至少一者或其组合。

较佳者， 步骤 (b2)中， 该表面活性剂为非离子性表面活性剂。

较佳者， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(Tween 80)、 2-hydroxyethyl

12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙炼蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives) ^ 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该聚氧乙烯蓖麻油衍生物系聚氧乙烯 35蓖麻油 (Crem ₀ ph ₀ r ELP)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者或 其组合。

较佳者， 在步骤 (c2)与步骤 (d2)之间， 更包含步骤： (c21) 加入第二医药上可接受的水溶液， 搅拌均匀， 使第二医药上可接受的水溶液完 全溶解。

较佳者， 该水溶性药物溶解在该第一医药上可接受的水 溶液中， 该含药微胞为表面活 性剂所形成的一微形结构， 且白藜芦醇被包覆在所述含药微胞中。

较佳者， 该第一医药上可接受的水溶液中的水溶性药物 ， 为绿茶萃取物、 表没食子儿 茶素没食子酸酯 (Epigallocatechin gallate)、 表儿茶素 (Epicatechin)、 表儿茶素没食子酸酯 (Epicatechin gallate)、 表没食子儿茶素 (Epigallocatechin)、 没食子儿茶素没食子酸酯 (Gallocatechin gallate)、 没食子儿茶素 (Gallocatechin)、 儿茶素没食子酸酯 (Catechin gallate)、 儿茶素 (Catechin；)、 表没食子儿茶素没食子酸酯 (epigallocatechin gallate, EGCG)^ 咖啡因 (Caffeine；)、 肉碱 (Carnitine; 又称为卡尼丁或卡尼汀）、 左旋肉碱 (L-carnitine；)、 辛内弗林 (Synephrine)^ 绿原酸 （ Chi orogenic acid) 、 及其他水溶性药物中的至少一者或其组合。

较佳者， 步骤 (a2)及 (c2)中， 该白藜芦醇与该水溶性药物的重量比为 30: 1至 1 : 30。 较佳者， 步骤 (a2)~(c2)中， 以该白藜芦醇与该水溶性药物的总重量为一个 重量单位计 之， 该表面活性剂的重量为 0.24 70个重量单位； 抑或是， 该白藜芦醇与该水溶性药物的 总重量与该表面活性剂的重量比为 4: 1至 1 : 70。

较佳者， 步骤 (a2)、 (c2), 及 (c21)中， 以该白藜芦醇与该水溶性药物的总重量为一个 重量单位计之，该第一医药上可接受的水溶液 与该第二医药上可接受的水溶液的总重量为 16-400 个重量单位； 抑或是， 该第四重量与该第七重量的总和： 该第六重量与该第八重 量的总和为 1 :400~3 :50。

较佳者， 步骤 (c2)及 (c21)中， 该第一医药上可接受的水溶液及该第二医药上 可接受的 水溶液为注射用水、 注射用水溶液、 或生理食盐水。

制备第四医药组成物的步骤如下：

(A) 制备含药微胞次组合物的步骤， 用以制备一含药微胞次组合物；

(B ) 制备第二脂溶性药物微胞次组合物的步骤， 用以制备一第二脂溶性药物微胞次 组合物： 以及

( C ) 将该含药微胞次组合物与该第二脂溶性药物微 胞次组合物混合， 以制备出该第 四医药组成物；

其中， 该制备含药微胞次组合物的步骤 (A)包含下列步骤 (a3)~(d3) _:

(a3) 将白藜芦醇与第一溶媒混合，于室温下以 200~500rpm搅拌至白藜芦醇完全溶解； (b3) 加入医药上可接受的第一表面活性剂， 在转速 100 -300 rpm条件下搅拌均匀， 使第一溶媒挥发， 其中， 该第一表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10;

(c3) 待第一溶媒完全挥发后， 缓慢加入医药上可接受的水溶液， 搅拌均匀， 以形成多 个含药微胞； 以及

(d3) 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 滤液即为含有含药微胞的该含药微胞次组合物 ； 而且， 该制备第二脂溶性药物微胞次组合物的步骤 (B)包含下列步骤 (a4)~(d4):

(a4)将一其他脂溶性药物与第二溶媒混合， 于室温下以 200~500rpm搅拌至使该其他 脂溶性药物完全溶解；

(b4) 加入医药上可接受的第二表面活性剂， 在转速 100 -300 rpm条件下搅拌均匀， 使第二溶媒挥发， 其中， 该第二表面活性剂的亲水亲油性平衡值 (hydrophilic-lipophilic balance value, HLB值)大于 10;

(c4)待第二溶媒完全挥发后， 缓慢加入医药上可接受的水溶液， 搅拌均匀， 以形成多 个第二脂溶性药物微胞； 以及

(d4) 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 滤液即为含有第二脂溶性药物微胞的该第二脂 溶性药物 微胞次组合物。

其中， 步骤 (c3)中， 该含药微胞为第一表面活性剂所形成的一微形 结构， 且白藜芦醇 被包覆在所述含药微胞中。 步骤 (c4)中， 该第二脂溶性药物微胞为第二表面活性剂所形 成 的一微形结构， 且该其他脂溶性药物被包覆在所述第二脂溶性 药物微胞中。

较佳者， 该脂溶性药物为姜黄素 (Curcumin)、 槲皮素 (quercetin)、 葛根素 (puerarin)、 及 其他白藜芦醇以外的脂溶性药物的至少一者或 其组合。

较佳者， 步骤 (a3)或 /及步骤 (a4)中， 第一溶媒或 /及第二溶媒的沸点小于纯水的沸点。 较佳者， 步骤 (a3)或 /及步骤 (a4)中， 第一溶媒或 /及第二溶媒为亲水性溶媒。

较佳者，该亲水性溶媒为甲醇、乙醇、丙酮及 其他亲水性溶媒中的至少一者或其组合。 较佳者， 步骤 (a3)或 /及 (a4)中的第一溶媒或 /及第二溶媒为亲脂性溶媒。

较佳者， 该亲脂性溶媒为乙醚、 苯、 氯仿、 乙酸乙酯、 二氯甲垸、 己垸及其他亲脂性 溶媒中的至少一者或其组合。

较佳者， 步骤 (b3)或 /及 (b4)中， 该第一表面活性剂或 /及第二表面活性剂为非离子性表 面活性剂。

较佳者， 该非离子性表面活性剂为聚山梨醇酯 80(Tween 80)、 2-hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate (solutol HS 15)、 聚氧乙炼蓖麻油衍生物 (polyoxyethylene castor oil derivatives) ^ 及其他非离子性表面活性剂中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该聚氧乙烯蓖麻油衍生物为聚氧乙烯 35蓖麻油 (Crem ₀ ph ₀ r ELP)、 聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40)、 及其他聚氧乙烯蓖麻油衍生物中的至少一者或 其组合。

较佳者， 步骤 (a3)及 (b3)中， 该白藜芦醇与该第一表面活性剂的重量比为 1 : 4至 1 : 500。

较佳者， 步骤 (a4)及 (b4)中， 该其他脂溶性药物与该第二表面活性剂的重量 比为 1 : 4 至 1 : 500。

较佳者，步骤 (a3)及 (c3)中，该白藜芦醇与该医药上可接受的水溶� �的重量比为 1 : 400 至 3 : 50。

较佳者，步骤 (a4)及 (c4)中，该其他脂溶性药物与该医药上可接受� �水溶液的重量比为 1： 400至 3 : 50。

较佳者， 步骤 (c3)或 /及 (c4)中， 该医药上可接受的水溶液为注射用水、 注射用水溶液、 或生理食盐水。

较佳者， 步骤 (c3)或 /及 (c4)中， 该医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉剂。

较佳者， 该局部麻醉剂为酰胺类、 对氨基苯甲胺脂类、 及胺基醚类中的至少一者或其 组合。

较佳者， 该酰胺类为待布卡因 (Dibucaine；)、 利多卡因 (Lidocaine；)、 甲哌卡因盐酸盐 (Mepivacaine HC1) 、 布比卡因盐酸盐 （ Bupivacine HC1 ) 、 吡咯卡因盐酸盐 （Pyrrocaine HC1 ) 、 丙胺卡因盐酸盐 （Prilocaine HC1) 、 Digammacaine、 及奥昔卡因 （Oxethazaine) 中的至少一者或其组合。

较佳者， 该对氨基苯甲胺脂类为布他卡因 (Butacaine；)、 二甲卡因 (Dimethocaine；)、 及图 托卡因 (Tutocaine)的至少一者或其组合。

较佳者， 该胺基醚类为奎尼卡因 (Quinisocaine；)、 及普莫卡因 (Pramocaine)的至少一者 或其组合。

较佳者， 步骤 (c3)或 /及 (c4)中， 该医药上可接受的水溶液中包含抗氧化剂。

较佳者，该抗氧化剂为 β-胡萝卜素 (beta-carotene)、叶黄素 (lutein)、番茄红素 (lycopene)、 胆红素 (bilirubin；)、维生素 A(vitamin K)、维生素 C (vitamin C;又称为抗坏血酸，即 ascorbic acid)、维生素 E (vitamin E)、尿酸 (uric acid)、一氧化氮 (nitric oxide)、硝基氧 (nitroxide)、 丙酮酸盐 (pyruvate) 、 过氧化氢酶 (catalase)、 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase)、 谷 胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidases；)、 N-乙酰半胱氨酸 (N-acetyl cysteine；)、 及柚皮素 (naringenin)中的至少一者或其组合。

制备第五医药组成物的步骤如下：

(a5)将白藜芦醇以及其他脂溶性药物与溶媒混� �， 于室温下以 200~500rpm搅拌至完 全溶解；

(b5) 加入医药上可接受的一表面活性剂， 在转速 100 -300 rpm条件下搅拌均匀， 使 溶媒挥发， 其中， 该表面活性剂的亲水亲油性平衡值 Chydrophilic-lipophilic balance value, HLB值；)大于 10;

(c5)待溶媒完全挥发后， 缓慢加入医药上可接受的水溶液， 搅拌均匀， 以形成多个含 药微胞以及多个第二脂溶性药物微胞； 以及

(d5) 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 将含有含药微胞以及多个第二脂溶性药物微胞 的滤液避 光冷藏保存。

第五医药组成物中使用的溶媒、 表面活性剂、 医药上可接受的水溶液、 以及其他脂溶 性药物的种类范围与第四医药组成物均相同。 而且， 第五医药组成物中的各成分间的比例 关系范围， 也与第四医药组成物相同。

较佳者， 该医药上可接受的水溶液中包含局部麻醉剂或 /及抗氧化剂。 较佳者， 第五医药组成物中使用的局部麻醉剂或 /及抗氧化剂的种类范围与第四医药 组成物均相同。

实验五： 测定医药组成物的品质

实验 5-1 组成份分析

将医药组成物静置至少 20分钟， 若未发生分层现象， 则进一步利用粒径分析仪测试。 利用粒径分析仪 (particle size analyzer)测定医药组成物中是否含有微胞 (micelle)。 若医 药组成物经粒径分析仪分析后， 测得的粒径小于 250nm、 PDI值小于 0.4、 以肉眼观察发 现医药组成物中的溶液为澄清透明、且使用激 光照射溶液后能观察到光径， 则代表医药组 成物中具有微胞。

若医药组成物具有微胞，则所制备出的组成物 即为本发明的可用于减少局部脂肪的医 药组成物。

若医药组成物静置后未分层且具有微胞，则所 制备出的组成物即为本发明的可用于减 少局部脂肪的较佳医药组成物。

实验 5-2 利用粒径分布状况分析医药组成物的稳定性

利用粒径分析仪 (particle size analyzer) (购自 Malvern)测定粒径的分布状况及多分散性 指数 (polydispersity index; PDI), 若多分散性指数小于 0.4， 则代表医药组成物的稳定性佳， 也就是医药组成物中的微胞能稳定地存在。

实验 5-3 利用加速稳定性试验测定医药组成物的稳定性 。

本发明的医药组成物的储存条件为 2~8°C。 为了测试医药组成物的稳定性， 发明人将 医药组成物放置在相对高温度且高湿度的环境 (温度 25°C ±2°C、 相对湿度 RH60%±5%)， 观察医药组成物中的微胞在相对高温的状态下 ，能稳定存在多久，以推算医药组成物在 2~8 °C 的状态下能保存多久。

若医药组成物在 25°C条件下可以储存 n个月，则该医药组成物在 5°C条件下可以储存 的时间长度为 n个月的 2 ⁽⁽²⁵ — ^5)/1Q) 倍。 亦即， 该医药组成物在 5°C条件下可以储存的时间长 度为 n个月的 2 ² 倍， 也就是 4倍。

举例而言， 若医药组成物在 25°C条件下可以储存 6个月， 则该医药组成物在 5°C条件 下可以储存的时间长度为 24个月 (6个月 X 4倍 =24个月）。

较佳者， 在温度摄氏 25±2度 (25±2°C；)、 相对湿度 RH60%±5%、 避免光线直射的条件 下进行加速试验时， 该医药组成物仍维持于无沉淀物产生的状态至 少达 24小时。

较佳者， 在温度摄氏 25±2度、 相对湿度 RH60%±5%、 避免光线直射的条件下进行加 速试验时， 该医药组成物仍维持于无沉淀物产生的状态至 少达 6个月。

较佳者， 在温度 2~8°C条件下， 该医药组成物仍维持于无沉淀物产生的状态至 少达 24 个月。

实验六： 各种非离子性表面活性剂形成的含药微胞的最 大载药量

由于含药微胞的最大载药量直接影响注射体积 ， 对局部皮下脂肪层 (例如脸部的皮下 脂肪层)单次须容纳的药物体积、 副作用、 及负担影响甚巨。 因此， 本实验将探讨各种非 离子性表面活性剂形成的含药微胞的最大载药 量， 以评估哪一种非离子性表面活性剂为制 备本发明医药组成物的最佳赋形剂。

选用 4种非离子性表面活性剂进行本实验。所述 4种非离子性表面活性剂为聚氧乙烯 35蓖麻油 (即 ELP)、聚乙二醇硬脂酸酯 15 (即 HS-15)、聚氧乙烯 40氢化蓖麻油 (Cremophor RH 40， 简称为 RH 40)、 以及聚山梨醇酯 80(即 Tween 80)。

实验分为 4组， 分别为 ELP组、 HS-15组、 RH40组、 以及 Tween 80组。

实验步骤：

(a') 将 2.0 g (第一重量的示例）白藜芦醇与 300 500 mL 二氯甲垸混合， 于室温下以 150~500rpm搅拌至白藜芦醇完全溶解；

(b') 加入 18.0 g (第二重量的示例)单一种上述非离子性表面活� ��剂， 在转速 100 -300 rpm条件下搅拌均匀， 使二氯甲垸挥发； 以及

(C)待溶媒完全挥发后， 获得一组成物， 共 20 g; 取 2 g该组成物， 缓慢加入 8 g (第 三重量的示例；)注射用生理食盐水， 搅拌均匀， 获得待检测组成物。 该待检测组成物中的 白藜芦醇浓度为 20 mg/g， 且非离子性表面活性剂的浓度为 18%。

将 ELP组、 HS-15组、 RH40组、 以及 Tween 80组的待检测组成物静置至少 20分钟， 观察是否发生分层现象。若发生分层现象， 代表白藜芦醇浓度太高而使第一阶段组成物中 的微胞破裂， 亦即， 利用该非离子性表面活性剂无法制备出白藜芦 醇浓度为 20 mg/g的本 发明医药组成物。

评估各种赋形剂 (ELP、 HS-15 , RH40、 以及 Tween 80)是否具有毒性， 依各国药典

(pharmacopoeia)规范的赋形剂注射浓度限制， 推算各种赋形剂形成的含药微胞的载药量上 限。

为了得知 ELP的最大载药限制， 发明人进行后续实验七， 得知 ELP的最大载药量为 大于或等于 166.7 mg/g (白藜芦醇与 ELP的比例为 1 :5时，制备出的医药组成物中含有 166.7 mg/g白藜芦醇；)。

实验结果显示， ELP是制备本发明医药组成物的最佳赋形剂。 利用 ELP制备出的医 药组成物中， 白藜芦醇浓度可达 166.7 mg/g。

实验七： 利用聚氧乙烯 35蓖麻油 (ELP)制备医药组成物

本实验利用白藜芦醇及聚氧乙烯 35蓖麻油 (ELP)的比例变化， 制备出一系列的本发明 医药组成物， 并进行稳定性分析， 以得知白藜芦醇及聚氧乙烯 35蓖麻油 (ELP)的适当比例 以及利用 ELP制备本发明医药组成物时的最大载药量。

实验共分为 9组， 即第 1~9组， 各组医药组成物的配制方法与实验六的实验步 骤大致 相同， 仅白藜芦醇的重量 (步骤 (a')中的第一重量；)、 ELP的重量 (步骤 (b')中的第二重量；)、注 射用生理食盐水的重量 (步骤 (c')中的第三重量；)不同。 本实验中， 白藜芦醇的重量 (第一重 量；)、 ELP的重量 (第二重量；)、注射用生理食盐水的重量 (第三重量)的添加原则如表一所示。 本实验中， 第 1~9组的白藜芦醇与 ELP比例 (重量比)依序为一比一 (1 : 1)、 一比二点 五 (1 : 2.5)、 一比五 (1 : 5)、 一比八 (1 : 8)、 一比十 (1 : 10)、 一比四十 (1 : 40)、 一比八十 (1 : 80)、 一比两百 (1 : 200)、 以及一比五百 (1 : 500)， 且第 1~9组配制出的医药组成物中， 白 藜芦醇终浓度依序为 1000 mg/g、 285.71 mg/g、 166. 7 mg/g、 60 mg/g、 30 mg/g、 7.5 mg/g、 3.75 mg/g, 0.5 mg/g、 0.2 mg/g。 亦即， 第 1~9组医药组成物的配制方法中， 步骤 (a')中的 白藜芦醇与步骤 ( _b ')中的 ELP 的重量比 (第一重量与第二重量的比例；)依序为一比一� �� 一比 二点五、 一比五、 一比八、 一比十、 一比四十、 一比八十、 一比两百、 以及一比五百， 且 在步骤 (c')加入第三重量注射用生理食盐水后， 将依序配制出白藜芦醇终浓度为 1000 mg/g、 285.71 mg/g、 166.7 mg/g、 60 mg/g、 30 mg/g、 7.5 mg/g、 3.75 mg/g、 0.5 mg/g、 以 及 0.2 mg/g的医药组成物。 其中， 药物终浓度以 mg/g表示时， 代表每克医药组成物中含 有的白藜芦醇毫克数。

利用粒径分析仪 (particle size analyzer)测定医药组成物中是否含有微胞 (micelle), 并测 量微胞的粒径大小。

利用粒径分析仪 (particle size analyzer)测定粒径的分布状况及多分散性指数 (polydispersity index; PDI)， 以评估医药组成物的稳定性。 利用高效能液相色谱仪 (high performance liquid chromatography, HPLC; 例如 HPLC-UV)分析微胞中的白藜芦醇含量， 定义为 "起始药物含量" 。

利用加速稳定性试验观察医药组成物在高温储 存条件 (摄氏 25±2度；)下 3个月是否发生 分层现象， 并利用高效能液相色谱仪 (； high performance liquid chromatography, HPLC; 例 如 HPLC-UV)分析微胞中的药物含量， 定义为 "加速实验后的药物含量" 。 将 "加速实验 后的药物含量"除以 "起始药物含量"， 得到 "药物含量百分比" 。 若药物含量百分比大 于或等于 95%， 代表医药组成物的稳定性极佳。 表一 利用 ELP配制医药组成物的样品配制表

白藜芦醇与 ELP比例 医药组成物中的白藜

(重量比；） 芦醇终浓度 (mg/g)

1 1 : 1 1000

2 1 :2.5 285.71

3 1 :5 166.7

4 1 :8 60 1:40

1:80 3.75

1:200

1:500 0.2

请参见表二， 表二为医药组成物的安定性分析结果。 表二显示， 白藜芦醇与 ELP 的 重量比为 1: 5至 1: 500时，各组医药组成物中都具有微胞，测得的 微胞粒径为 10 250 nm， 因此， 白藜芦醇与 ELP比例为 1: 5至 1: 500所制备出的医药组成物， 都是本发明可用 于减少局部脂肪的医药组成物。

在稳定性方面， 白藜芦醇与 ELP的比例为 1: 5至 1: 500时， PDI均小于 0.4。 因此， 若要制备稳定性较佳的本发明可用于减少局部 脂肪的医药组成物， 以白藜芦醇的重量为 1 个重量单位计之， ELP的重量应大于或等于 5个重量单位。 较佳者， 以白藜芦醇的重量为 1个重量单位计之， ELP的重量为 5 500个重量单位。 较佳者， 以白藜芦醇的重量为 1个 重量单位计之， ELP的重量为 10 80个重量单位。 较佳者， 以白藜芦醇的重量为 1个重量 单位计之， ELP的重量为 8~80个重量单位。 表二 医药组成物的稳定性分析

加速实验后 白藜芦醇与 ELP 微胞 加速实验后

PDI 的药物含量 比例 (重量比） 粒径 (nm) 的外观

百分比 C¼)

1:1 404.13 ± 64.70 1.00 ± 0.00

1:2. 787.07 ± 186.84 0.71 ± 0.50

240.63 ± 9.49 0.189 ± 0.06 澄清无分层 97.41 ±0.17

30 1 : 8 174 ± 1.97 0.15 ± 0.05

1 : 10 15.61 ± 0.39 0.180 ± 0.01 澄清无分层 98.32 ± 0.23

1 :40 13.66 ± 0.49 0.237 ± 0.03 澄青无分层 95.76 ± 0.66

1 : 80 12.22 ± 0.13 0.181 ± 0.0 澄清无分层 95.54 ± 0.03

1 :200 12.84 ± 0.29 0.17 ± 0.02

1 : 500 12.08 ± 0.96 0.15 ± 0.09 上表中， 空白的栏位代表未进行分析。 由表二的数据可知， 将第 3、 5~7组医药组成物储存在摄氏 25度的环境下 3个月， 各 组样品的白藜芦醇药物含量百分比皆大于 95%， 且与起始药物含量相比无明显下降趋势。 由该结果可知， 所述医药组成物具有良好的稳定性， 且依据加速实验的经验法则推估， 该 些医药组成物在 2~8 °C冷藏的状态下， 至少可储存 24个月。

实验八： 利用聚氧乙烯 35蓖麻油制备医药组成物对局部溶脂及减重的� ��响

实施例 1 : 利用聚氧乙烯 35蓖麻油及白藜芦醇制备白藜芦醇医药组成物

(a') 将 0.4 g (第一重量的示例）白藜芦醇与 20 70 mL 乙醇混合， 于室温下以 200~500rpm搅拌至白藜芦醇完全溶解；

(b') 加入 4 g (第二重量的示例)聚氧乙烯 35蓖麻油， 在转速 100 -300 rpm条件下搅拌 均匀， 使乙醇挥发；

(C) 待乙醇完全挥发后， 缓慢加入注射用生理食盐水， 使注射用生理食盐水的重量达 80 g (第三重量的示例；)， 搅拌均匀， 以形成多个含药微胞； 以及

(d') 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 滤液即为含有含药微胞的白藜芦醇医药组成物 。 避光冷 藏保存。

在此具体实施例中， 注射用生理食盐水的比重为 l g/mL。 因此， 80 g注射用生理食盐 水的体积为 80 mLo据此， 该白藜芦醇医药组成物中的白藜芦醇的浓度约 为 5 mg/mL (0.4g ÷ 80 mL = 0.005 g/mL = 5 mg/mL) ₀

在此具体实施例中， 第一重量的白藜芦醇与第二重量的聚氧乙烯 35蓖麻油 (表面活性 剂)的重量比为 0.4: 4， 亦即， 重量比为 1 : 10。

在此具体实施例中，第一重量的白藜芦醇与第 三重量的注射用生理食盐水的重量比为 0.4： 80， 亦即， 重量比为 1 : 200ο

实施例 2:利用聚氧乙烯 35蓖麻油、 白藜芦醇及绿茶萃取物制备白藜芦醇复方医药 组 成物

(al') 将 0.36 g (第四重量的示例）白藜芦醇与 20~70 mL乙醇混合，于室温下以 200~500 rpm搅拌至白藜芦醇完全溶解；

(bl') 加入 4 g (第五重量的示例)聚氧乙烯 35蓖麻油， 在转速 100 -300 rpm条件下搅 拌均匀， 使乙醇挥发；

(cl') 待乙醇完全挥发后， 缓慢加入第六重量的第一注射用生理食盐水， 在转速 100 ~300 rpm条件下搅拌均匀， 以形成多个含药微胞， 其中， 该第一注射用生理食盐水中包含 0.04 g (第七重量的示例)绿茶萃取物， 且该绿茶萃取物的组成分中包含表没食子儿茶 素没 食子酸酯；

(cir) 加入第八重量的第二注射用生理食盐水， 使注射用生理食盐水的总体积为 so mL (亦即， 第六重量的第一注射用生理食盐水及第八重量 的第二注射用生理食盐水的总体 积为 80 mL)， 搅拌均匀， 使第二注射用生理食盐水完全溶解。

(dl') 以 0.2 μιη滤膜过滤后， 含有含药微胞的滤液即为白藜芦醇复方医药组 成物。 避 光冷藏保存。

在此具体实施例中，此白藜芦醇复方医药组成 物中的白藜芦醇暨绿茶萃取物的浓度约 为 5 mg/mL [(0.36g + 0.04g) ÷ 80mL = 0.4g ÷ 80 mL = 0.005 g/mL = 5 mg/mL]。

在此具体实施例中，若以该绿茶萃取物的总重 量 (0.04 g)为 100重量百分比计之， 该绿 茶萃取物中表没食子儿茶素没食子酸酯的含量 为 95 %

在此具体实施例中， 第四重量的白藜芦醇与第七重量的绿茶萃取物 的重量比为 0.36: 0.04， 亦即， 重量比为 9: 1。

在此具体实施例中， 以该第四重量的白藜芦醇与该第七重量的绿茶 萃取物的总重量 (0.36g + 0.04g = 0.4g)为一个重量单位计之， 该第五重量的表面活性剂的重量为 10个重量 单位 (4g ÷ 0.4g = 10)。

在此具体实施例中， 注射用生理食盐水的比重为 l g/mL。 因此， 在本具体实施例中第 六重量的第一注射用生理食盐水及第八重量的 第二生理食盐水的总体积为 80 mL 的示例 下， 该些生理食盐水的总重量为 80 g。

据此， 以该第四重量的白藜芦醇与该第七重量的绿茶 萃取物的总重量 (0.36g + 0.04g = o.4g)为一个重量单位计之，该第六重量的第一� ��射用生理食盐水与该第八重量的第二注射 用生理食盐水的总重量 (80 g)为 200个重量单位 (80g ÷ 0.4g = 200)。

实施例 3 : 白藜芦醇医药组成物的溶脂效果

使用 6周龄 SD品系雄性大鼠 (male Sprague-Dawley rat)进行实验。 首先， 以高脂饲料 喂食 15只大鼠诱导皮下脂肪增加， 连续喂食至大鼠体重达 330±10 g后， 将大鼠随机分成 3组， 分别为高脂对照组、 白藜芦醇低剂量组、 及白藜芦醇高剂量组， 每组 5只大鼠， 使 各组大鼠的体重无统计差异。

将上述实施例 1的 5 mg/mL白藜芦醇医药组成物注射至白藜芦醇低剂� ��组大鼠的下腹 股沟的皮下脂肪层， 每次注射量为每公斤体重注射 10 mg (10 mg/kg)白藜芦醇； 亦即， 每 公斤体重注射 2 mL上述实施例 1的 5 mg/mL白藜芦醇医药组成物。 将上述实施例 1的 5 mg/mL白藜芦醇医药组成物注射至白藜芦醇高剂� ��组大鼠的下腹股沟的皮下脂肪层，每次 注射量为每公斤体重注射 20 mg (20 mg/kg)白藜芦醇； 亦即， 每公斤体重注射 4 mL上述实 施例 1的 5 mg/mL白藜芦醇医药组成物。高脂对照组则以上� ��同样注射方式给予同体积注 射用生理食盐水。

上述注射部位为大鼠下腹股沟脂肪处， 平均注射于左、 右两侧， 于试验第 1、 2、 3、 4 日各注射 1次。 试验期间持续给予高脂饲料， 并每日记录体重变化， 每周记录饮水摄食一 次， 于试验第 14天禁食， 第 15天以二氧化碳牺牲大鼠。

取大鼠左右两侧下腹股沟的脂肪进行秤重， 并计算各组下腹股沟的脂肪量。 以平均值 ±SD方式呈现数据， 并以单因子变异数分析 （one-way ANOVA) 进行统计。 统计结果以 符号或英文字母表示， 不同符号或字母表示组间具有统计差异 (p< 0.05)， 相同符号或字母 则表示组间不具有统计差异 (p> 0.05)。

请参阅图 3及表三。 图 3为白藜芦醇医药组成物对大鼠皮下脂肪量影� �的长条图。表 三为白藜芦醇医药组成物使大鼠皮下脂肪量减 少的程度。其中， 下腹股沟皮下脂肪量为左 右两侧脂肪重量的总和。

实验结果显示， 与高脂对照组相比， 白藜芦醇低剂量组 (给药剂量为 10 mg/kg)大鼠的 下腹股沟皮下脂肪量已有减少趋势，局部脂肪 减少百分比为 5.6%;而白藜芦醇高剂量组 (给 药剂量为 20 mg/kg)大鼠的下腹股沟皮下脂肪量与高脂对照组 相比则呈现显著下降的结果 (p<0.05), 其局部脂肪的减少百分比达到 18.1%。 表三、 白藜芦醇医药组成物使大鼠皮下脂肪量减少的 程度

下腹股沟皮下脂肪量 (g) 脂肪减少百分比

Mean士 SD (%) 高脂对照组 .4± 0.8 白藜芦醇低剂量组 .1± 0.4 .6% 白藜芦醇高剂量组 4.4± 0.8 18.1%

依发明人的经验，适用于大鼠的给药频率为 4次时，适用于人类的给药频率即为 1~12 次。 较佳者， 施用于人类的给药频率为每间隔 1天至 30天施予药物 1~12次。 较佳者， 施 用于人类的给药频率为每间隔 1天至 30天施予药物 1~6次。

依发明人的经验， 适用于大鼠的给药剂量为 10mg/kg ~ 20mg/kg时， 适用于人类的给 药剂量即为 0.2 40 mg/kg。

较佳者， 施用于人类的给药剂量为 0.4 20 mg/kg。

较佳者， 施用于人类的剂量为每平方公分注射 0.2~ 20毫克。

较佳者， 施用于人类的剂量为每平方公分注射 0.4 ~ 12毫克。

实施例 4: 白藜芦醇复方医药组成物的溶脂及减重效果

配制绿茶萃取物组成物： 利用注射用生理食盐水将绿茶萃取物溶解， 以配制 5 mg/mL 的绿茶萃取物组成物。

使用 6周龄 SD品系雄性大鼠 (male Sprague-Dawley rat)进行实验。 首先， 以高脂饲料 喂食 20只大鼠诱导皮下脂肪增加， 连续喂食至大鼠体重达 330±10 g后， 将大鼠随机分成 4组， 分别为高脂对照组、 绿茶萃取物组、 白藜芦醇组、 及白藜芦醇-绿茶萃取物复方组， 每组 5只大鼠， 使各组大鼠的体重无统计差异。 记录每只大鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验前体重" 。 然后， 以下列方式给予药物。

将本实施例的 5 mg/mL绿茶萃取物组成物注射至绿茶萃取物组大� ��的下腹股沟的皮 下脂肪层， 每次注射量为每公斤体重注射 10 mg (10 mg/kg)绿茶萃取物； 亦即， 每公斤体 重注射 2 mL本实施例的 5 mg/mL绿茶萃取物组成物。将上述实施例 1的 5 mg/mL白藜芦 醇医药组成物注射至白藜芦醇组大鼠的下腹股 沟的皮下脂肪层，每次注射量为每公斤体重 注射 10 mg (10 mg/kg)白藜芦醇； 亦即， 每公斤体重注射 2 mL上述实施例 1的 5 mg/mL 白藜芦醇医药组成物。将上述实施例 2的 5 mg/mL白藜芦醇复方医药组成物注射至白藜芦 醇-绿茶萃取物复方组大鼠的下腹股沟的皮下� �肪层，每次注射量为每公斤体重注射 10 mg (10 mg/kg)白藜芦醇暨绿茶； 亦即，每公斤体重注射 2 mL上述实施例 2的 5 mg/mL白藜芦 醇复方医药组成物。 高脂对照组则以上述同样注射方式给予同体积 注射用生理食盐水。

上述注射部位为大鼠下腹股沟脂肪处， 平均注射于左、 右两侧， 于试验第 1、 2、 3、 4 日各注射 1次。 试验期间持续给予高脂饲料， 并每日记录体重变化， 每周记录饮水摄食一 次， 于试验第 14天禁食， 第 15天以二氧化碳牺牲大鼠。

记录每只大鼠的体重， 定义为每只大鼠的 "试验后体重"。 将每只大鼠的 "试验后体 重"扣除 "试验前体重"， 得到 "总增重" 。 将各组大鼠的总增重除以高脂对照组大鼠的 总增重， 得到 "相对总增重" 。

取大鼠左右两侧下腹股沟的脂肪进行秤重， 并计算各组下腹股沟的脂肪量。 以平均值 ±SD方式呈现数据， 并以单因子变异数分析 （one-way ANOVA) 进行统计。 统计结果以 符号或英文字母表示， 不同符号或字母表示组间具有统计差异 (p< 0.05)， 相同符号或字母 则表示组间不具有统计差异 (p> 0.05)。

由于每组每一次都是施予 10 mg/kg的药物， 白藜芦醇-绿茶萃取物复方组大鼠的局部 溶脂效果应介于白藜芦醇组及绿茶萃取物组之 间。 若白藜芦醇-绿茶萃取物复方组大鼠的 局部溶脂效果比白藜芦醇及绿茶萃取物组佳， 代表白藜芦醇-复方医药组成物中的白藜芦 醇及绿茶萃取物在局部溶脂的功效上具有协同 效应 (sy _nerg y)。

请参阅图 4A及表四。 图 4A为白藜芦醇复方医药组成物对大鼠皮下脂肪� ��影响的长 条图。 表四为白藜芦醇复方医药组成物使大鼠皮下脂 肪量减少程度。 其中， 下腹股沟皮下 脂肪量为左右两侧脂肪重量的总和。

图 4A实验结果显示， 与高脂对照组相比， 绿茶萃取物组大鼠的注射部位皮下脂肪并 没有减少 (给药剂量为每公斤体重给予 10 mg绿茶萃取物)。 白藜芦醇组大鼠的注射部位皮 下脂肪量与高脂对照组相比虽无统计差异， 但已呈现减少趋势， 其局部脂肪减少百分比为 5.6% (给药剂量为每公斤体重给予 10 mg白藜芦醇)。 白藜芦醇 -绿茶萃取物复方组大鼠的 注射部位皮下脂肪量则呈现显著下降的结果 (p<0.05)， 其局部脂肪减少百分比达到 18.9% (给药剂量为每公斤体重给予 10 mg白藜芦醇暨绿茶萃取物；)。 亦即， 白藜芦醇复方医药组 成物更能显著达到减少局部脂肪的效果， 所述效果为白藜芦醇医药组成物效果的 3.4倍。

本实施例显示本发明的白藜芦醇加上绿茶萃取 物的复方医药组合物，较相同剂量的白 藜芦醇单方具有更佳的局部溶脂效果。

比较白藜芦醇组、 绿茶萃取物组、 以及白藜芦醇-绿茶萃取物复方组大鼠的局部� �脂 效果可知， 白藜芦醇复方医药组成物中的白藜芦醇及绿茶 萃取物在局部溶脂的功效上具有 协同效应 (synergy)。 表四、 白藜芦醇复方医药组成物使大鼠皮下脂肪量减 少程度

下腹股沟皮下脂肪量 (g) 脂肪减少百分比 组别

Mean士 SD (%) 高脂对照组 5.4± 0.8 - 绿茶萃取物组 5.4士 0.9 0% 白藜芦醇组 5.1± 0.4 5.6% 白藜芦醇 -绿茶

4.4士 0.6 18.9% 萃取物复方组 请参见图 4B 以及表五。 图 4B为白藜芦醇复方医药组成物对大鼠相对总增� ��影响的 长条图。 表五为白藜芦醇复方医药组成物使大鼠减重的 程度。

图 4B实验结果显示， 与高脂对照组相比， 绿茶萃取物组大鼠的相对总增重并没有减 少 (给药剂量为每公斤体重给予 10 mg绿茶萃取物；)。 白藜芦醇组大鼠的相对总增重与高脂 对照组相比虽无统计差异， 但呈现减少趋势， 其局部脂肪减少百分比为 7.4% (给药剂量为 每公斤体重给予 10 mg白藜芦醇；)。 与高脂对照组相比， 白藜芦醇-绿茶萃取物复方组大鼠 的相对总增重减少百分比达到 15.9% (给药剂量为每公斤体重给予 10 mg白藜芦醇暨绿茶 萃取物；)， 虽然仍未具有显著差异， 但效果比白藜芦醇组更佳。 依据发明人的经验， 只要 将给药剂量或频率提高， 利用本发明制备出的白藜芦醇单方医药组成物 及白藜芦醇 -绿茶 萃取物复方医药组即可达到显著的减重效果。 表五、 白藜芦醇复方医药组成物使大鼠减重的程度

体重减少百分比 组别 相对总增重(％)

(%) 高脂对照组 100.0± 16.3 - 绿茶萃取物组 103.7± 21.8 0% 白藜芦醇组 92.6士 17.8 7.4% 白藜芦醇-绿茶萃取

84.1± 0.6 15.9%

物复方组 实验九： 白藜芦醇与其他脂溶性药物形成的复方医药组 成物对溶脂的影响

本实验利用白藜芦醇及其以外的其它脂溶性药 物配制成复方医药组成物， 以评估各种 脂溶性复方医药组成物对成熟脂肪细胞的溶脂 效果。

本实验选用葛根素 (pu _era rin)、 以及槲皮素 (quercetin)制备各种脂溶性复方医药组成物。 实验 9-1 细胞毒性测试

利用细胞存活率实验 (MTT assay)评估 50 ppm的白藜芦醇、 葛根素 (puerarin)、 或槲皮 素 (quercetin)是否对脂肪细胞以外的其他细胞具有� ��性， 若不具毒性， 才进行溶脂测试。

实验结果显示， 50 ppm的白藜芦醇、 葛根素 Cpuerarin)、 及槲皮素 (quercetin)对大鼠脂 肪细胞以外的一般体细胞 (somatic cells)不具细胞毒性， 因此此剂量不会对一般体细胞造成 影响。

实验 9-2 成熟脂肪细胞溶脂效果

以下列方式配制 DMSO控制组细胞培养液、 白藜芦醇细胞培养液、 葛根素细胞培养 液、 槲皮素细胞培养液、 白藜芦醇 -葛根素复方细胞培养液、 以及白藜芦醇-槲皮素复方细 胞培养液液。 DMSO控制组细胞培养液： 将 DMSO与适量的无菌水混合， 以配制出 0.5% DMSO 溶液。 将 0.5% DMSO溶液与细胞培养液 (；产品名称为 Dulbecco's Modified Eagle Medium, 购自 Gibco)混合， 以配制出 DMSO控制组细胞培养液， 其中， 0.5% DMSO溶液与细胞培 养液的体积比为 1 : 1000。

白藜芦醇细胞培养液： 将白藜芦醇与适量的 0.5% DMSO溶液混合， 以配制出白藜芦 醇溶液。 将白藜芦醇溶液与细胞培养液 (产品名称为 Dulbecco's Modified Eagle Medium ， 购自 Gibco)混合， 以配制出含有 50 ppm白藜芦醇的白藜芦醇细胞培养液， 其中， 白藜芦 醇溶液与细胞培养液的体积比为 1： 1000。

葛根素细胞培养液： 将葛根素 (购自 Sigma-Aldrich)与适量的 0.5% DMSO溶液混合， 以配制出葛根素溶液。 将葛根素溶液与细胞培养液混合， 以配制出含有 50 ppm葛根素的 葛根素细胞培养液， 其中， 葛根素溶液与细胞培养液的体积比为 1 : 1000。

槲皮素细胞培养液： 将槲皮素 (购自 Sigma-Aldrich)与适量的 0.5% DMSO溶液混合， 以配制出槲皮素溶液。 将槲皮素溶液与细胞培养液混合， 以配制出含有 50 ppm槲皮素的 槲皮素细胞培养液， 其中， 葛根素溶液与细胞培养液的体积比为 1 : 1000。

白藜芦醇 -葛根素复方细胞培养液： 将白藜芦醇、 葛根素、 以及适量的 0.5% DMSO溶 液混合， 以配制出白藜芦醇 -葛根素复方溶液。 其中， 白藜芦醇与葛根素的重量比为 2: 3。 将白藜芦醇-葛根素复方溶液与细胞培养液混� �，以配制出含有 50 ppm白藜芦醇-葛根素复 方药物的细胞培养液， 其中， 白藜芦醇的浓度为 20 ppm， 葛根素的浓度为 30 ppm， 且白 藜芦醇-葛根素复方溶液与细胞培养液的体积� �为 1 : 1000。

白藜芦醇 -槲皮素复方细胞培养液： 将白藜芦醇、 槲皮素、 以及适量的 0.5% DMSO溶 液混合， 以配制出白藜芦醇 -槲皮素复方溶液。 其中， 白藜芦醇与槲皮素的重量比为 2: 3。 将白藜芦醇-槲皮素复方溶液与细胞培养液混� �，以配制出含有 50 ppm白藜芦醇-槲皮素复 方药物的细胞培养液， 其中， 白藜芦醇的浓度为 20 ppm， 槲皮素的浓度为 30 ppm， 且白 藜芦醇-槲皮素复方溶液与细胞培养液的体积� �为 1 : 1000。

成熟脂肪细胞溶脂效果的实验步骤：

将 3T3-L1前驱脂肪细胞 (购自台湾食品工业发展研究所，简称为 BCRC)接种在 12 well plate中， 使每 well中含有 1 X 10 ⁵ 个细胞。 培养 2天后， 利用细胞诱导分化培养液 (DMI medium); 其中含有 0.5 μΜ ΙΒΜΧ (购自 Sigma-Aldrich), 0.1 μΜ Dexamethasone (购自 Sigma-Aldrich), 以及 5 μ^ιηΐ Insulin (购自 Humunlin R.))培养 2天。 然后， 利用含 5 μ^ιηΐ 胰岛素 (Insulin)的培养液培养 6天， 待细胞型态由纺锤状变为球形且细胞内堆积许 多脂肪 油滴 (lipo droplets)时， 表示已分化为成熟脂肪细胞 (Mature adipocytes；)。

将成熟脂肪细胞分成 6组， 分别为 DMSO控制组、 白藜芦醇组、 葛根素组、 槲皮素 组、 白藜芦醇-葛根素复方组、 以及白藜芦醇-槲皮素复方组。

以 DMSO控制组细胞培养液、 白藜芦醇细胞培养液、 葛根素细胞培养液、 槲皮素细 胞培养液、 白藜芦醇 -葛根素复方细胞培养液、 以及白藜芦醇 -槲皮素复方细胞培养液， 分 别培养 DMSO控制组、 白藜芦醇组、 葛根素组、 槲皮素组、 白藜芦醇-葛根素复方组、 以 及白藜芦醇 -槲皮素复方组中的成熟脂肪细胞 24小时。

将 Annexin V 蛋白 (；购自 eBioscience)以及 Propidium iodide 染剂 (；简称为 PI; 购自 eBioscience)与各组细胞混合一段时间后， 利用流式细胞仪 (flow cytometry)分析各组细胞被 Annexin V 蛋白以及 PI 染剂标定 (label)的比例， 藉以评估成熟脂肪细胞进行细胞凋亡 (apoptosis)的比例。 其中， 同时被 Annexin V蛋白以及 PI染剂标定的成熟脂肪细胞， 代表 已进入细胞凋亡程序； 越多成熟脂肪细胞进行细胞凋亡， 代表所施予的药物的溶脂效果越 好， 且代表溶脂是透过细胞凋亡程序而非使细胞坏 死 (necrosis；)。

以平均值±80方式呈现数据， 并以单因子变异数分析 （one-way ANOVA) 进行统计。 统计结果以符号或英文字母表示， 不同符号或字母表示组间具有统计差异 (p< 0.05)， 相同 符号或字母则表示组间不具有统计差异 (p> 0.05)。

由于每组施予药物的总剂量都是 50 ppm， 白藜芦醇 -葛根素复方组的细胞凋亡效果应 介于白藜芦醇组以及葛根素组之间。 若白藜芦醇 -葛根素复方组的细胞凋亡效果比白藜芦 醇组以及葛根素组佳， 代表白藜芦醇-葛根素复方医药组成物中的白� �芦醇及葛根素在溶 脂的功效上具有协同效应 ( _Syner gy)。 同样地， 白藜芦醇-槲皮素复方组的细胞凋亡效果应介 于白藜芦醇组以及槲皮素组之间。 若白藜芦醇-槲皮素复方组的细胞凋亡效果比� �藜芦醇 组以及槲皮素组佳， 代表白藜芦醇 -槲皮素复方医药组成物中的白藜芦醇及槲皮� �在溶脂 的功效上具有协同效应 (synergy)。

请参阅图 5。图 5是白藜芦醇-其他脂溶性药物复方对成熟脂肪� ��胞进行细胞凋亡的影 响。

图 5结果显示， DMSO控制组细胞凋亡百分比为 4.9±2.5%， 白藜芦醇组细胞凋亡百 分比为 19.0±1.1%， 葛根素组细胞凋亡百分比为 7.2±3.7%， 槲皮素组细胞凋亡百分比为 5.9±2.6%， 白藜芦醇 -葛根素复方组细胞凋亡百分比为 50.6±3.8%， 白藜芦醇-槲皮素复方组 细胞凋亡百分比为 12.1±2.7%。

比较白藜芦醇组、 葛根素组、 以及白藜芦醇-葛根素复方组的细胞凋亡效果� �知， 白 藜芦醇 -葛根素复方医药组成物在溶脂的功效上具有� �同效应 (sy _nerg y)。

由此可知， 白藜芦醇与各种脂溶性药物形成的复方医药组 成物都能够达到溶脂效果， 且白藜芦醇与各种脂溶性药物在溶脂的功效上 具有协同效应 (sy _nerg y)。 因此， 本发明利用 白藜芦醇与各种脂溶性药物制备出含药微胞及 第二脂溶性药物微胞，进而制备出白藜芦醇 -其他脂溶性药物复方医药组成物， 可作为局部溶脂及减重的医药组成物。

实验十： 白藜芦醇与水溶性药物形成的复方医药组成物 对溶脂的影响

本实验利用绿茶萃取物以外的其它水溶性药物 以及白藜芦醇配制成复方医药组成物， 以评估各种白藜芦醇-水溶性药物复方医药组� �物对成熟脂肪细胞的溶脂效果。

本实验选用咖啡因 (caffeine；)、 以及左旋肉碱 (L-camitine)制备各种白藜芦醇-水溶性药 物复方医药组成物。 实验 10-1 细胞毒性测试

利用细胞存活率实验 (MTT assay)评估 50 ppm 的咖啡因 (caffeine；)、 以及左旋肉碱 (L-camitine)是否对脂肪细胞以外的其他细胞具有 毒性， 若不具毒性， 才进行溶脂测试。

实验结果显示， 50 ppm的咖啡因 (caffeine；)、 以及左旋肉碱 (L-carnitine)对大鼠脂肪细胞 以外的一般体细胞不具细胞毒性， 因此此剂量不会对一般体细胞造成影响。

实验 10-2 成熟脂肪细胞溶脂效果

以下列方式配制无菌水控制组细胞培养液、白 藜芦醇细胞培养液、咖啡因细胞培养液、 左旋肉碱细胞培养液、 白藜芦醇 -咖啡因复方细胞培养液、 以及白藜芦醇-左旋肉碱复方细 胞培养液。

无菌水控制组细胞培养液： 将无菌水 (sterile water)与细胞培养液混合， 以配制出无菌 水控制组细胞培养液。 其中， 无菌水与细胞培养液的体积比为 1 : 1000。

白藜芦醇细胞培养液： 与实验 9-2中的白藜芦醇细胞培养液的配制方法相同。

咖啡因细胞培养液： 将咖啡因 (购自 Sigma-Aldrich)与适量的无菌水混合， 以配制出咖 啡因溶液。 将咖啡因溶液与细胞培养液混合， 以配制出含有 50 ppm咖啡因的咖啡因细胞 培养液， 其中， 咖啡因溶液与细胞培养液的体积比为 1 : 1000。

左旋肉碱细胞培养液： 将左旋肉碱 (购自 Sigma-Aldrich)与适量的无菌水混合， 以配制 出左旋肉碱溶液。 将左旋肉碱溶液与细胞培养液混合， 以配制出含有 50 ppm左旋肉碱的 左旋肉碱细胞培养液， 其中， 左旋肉碱溶液与细胞培养液的体积比为 1 : 1000。

白藜芦醇 -咖啡因复方细胞培养液： 将白藜芦醇、 咖啡因、 以及适量的无菌水混合， 以配制出白藜芦醇 -咖啡因复方溶液。 其中， 白藜芦醇与咖啡因的重量比为 2: 3。 将白藜 芦醇-咖啡因复方溶液与细胞培养液混合，以� �制出含有 50 ppm白藜芦醇-咖啡因复方药物 的细胞培养液， 其中， 白藜芦醇的浓度为 20 ppm， 咖啡因的浓度为 30 ppm， 且白藜芦醇- 咖啡因复方溶液与细胞培养液的体积比为 1 : 1000。

白藜芦醇-左旋肉碱复方细胞培养液： 将白藜芦醇、 左旋肉碱、 以及适量的无菌水混 合， 以配制出白藜芦醇-左旋肉碱复方溶液。 其中， 白藜芦醇与左旋肉碱的重量比为 2: 3。 将白藜芦醇 -左旋肉碱复方溶液与细胞培养液混合，以配� �出含有 50 ppm白藜芦醇-左旋肉 碱复方药物的细胞培养液， 其中， 白藜芦醇的浓度为 20 ppm， 左旋肉碱的浓度为 30 ppm， 且白藜芦醇-左旋肉碱复方溶液与细胞培养液� �体积比为 1 : 1000。

制备成熟脂肪细胞的方法与实验 9-2相同。

将成熟脂肪细胞分成 6组， 分别为无菌水控制组、 白藜芦醇组、 咖啡因组、 左旋肉碱 组、 白藜芦醇-咖啡因复方组、 以及白藜芦醇 -左旋肉碱复方组。

以无菌水控制组细胞培养液、 白藜芦醇细胞培养液、 咖啡因细胞培养液、 左旋肉碱细 胞培养液、 白藜芦醇 -咖啡因复方细胞培养液、 以及白藜芦醇-左旋肉碱复方细胞培养液， 分别培养无菌水控制组、 白藜芦醇组、 咖啡因组、 左旋肉碱组、 白藜芦醇-咖啡因复方组、 以及白藜芦醇-左旋肉碱复方组中的成熟脂肪� �胞 24小时。 将 Annexin V 蛋白（购自 eBioscience)以及 Propidium iodide 染剂（简称 PI; 购自 eBioscience)与各组细胞混合一段时间后， 利用流式细胞仪 (flow cytometry)分析各组细胞被 Annexin V 蛋白以及 PI 染剂标定 (label)的比例， 藉以评估成熟脂肪细胞进行细胞凋亡 (apoptosis)的比例。 其中， 同时被 Annexin V蛋白以及 PI染剂标定的成熟脂肪细胞， 代表 已进入细胞凋亡程序； 越多成熟脂肪细胞进行细胞凋亡， 代表所施予的药物的溶脂效果越 好， 且代表溶脂是透过细胞凋亡程序而非使细胞坏 死 (necrosis；)。

由于每组施予药物的总剂量都是 50 ppm，且白藜芦醇的比例占 40%而咖啡因占 60%， 因此， 白藜芦醇-咖啡因复方组的细胞凋亡效果应趋� �于白藜芦醇组以及咖啡因组的平均 值。 若白藜芦醇素-咖啡因复方组的细胞凋亡效果� �著优于白藜芦醇组以及咖啡因组的平 均值， 代表白藜芦醇 -咖啡因复方医药组成物中的白藜芦醇及咖啡� �在溶脂的功效上具有 协同效应 (synergy)。 同样地， 由于每组施予药物的总剂量都是 50 ppm， 且白藜芦醇的比例 占 40%而左旋肉碱占 60%， 因此， 白藜芦醇-左旋肉碱复方组的细胞凋亡效果应� �近于白 藜芦醇组以及左旋肉碱组的平均值。 若白藜芦醇 -左旋肉碱复方组的细胞凋亡效果显著优 于白藜芦醇组以及左旋肉碱组的平均值， 代表白藜芦醇 -左旋肉碱复方医药组成物中的白 藜芦醇及左旋肉碱在溶脂的功效上具有协同效 应 ( _Syner gy)。

请参阅图 6。图 6是白藜芦醇-其他水溶性药物复方医药组成物� ��成熟脂肪细胞进行凋 亡的影响。

图 6结果显示，无菌水控制组细胞凋亡百分比为 9.6±1.5%， 白藜芦醇组细胞凋亡百分 比为 19.0±1.1%， 咖啡因组细胞凋亡百分比为 6.9±1.1%， 左旋肉碱组细胞凋亡百分比为 5.2±1.2%， 白藜芦醇-咖啡因复方组细胞凋亡百分比为 43.1±4.5%， 白藜芦醇-左旋肉碱复方 组细胞凋亡百分比为 19.3±0.5%。

比较白藜芦醇组、 咖啡因组、 以及白藜芦醇-咖啡因复方组的细胞凋亡效果� �知， 白 藜芦醇-咖啡因复方医药组成物中的白藜芦醇� �咖啡因在溶脂的功效上具有协同效应

(synergy)

比较白藜芦醇组、 左旋肉碱组、 以及白藜芦醇 -左旋肉碱复方组的细胞凋亡效果可知， 白藜芦醇-左旋肉碱复方医药组成物中的白藜� �醇及左旋肉碱在溶脂的功效上具有协同效 应 (synergy)。

由此可知， 白藜芦醇与各种水溶性药物形成的复方医药组 成物都能够达到溶脂效果， 且白藜芦醇与各种水溶性药物在溶脂的功效上 具有协同效应 (sy _nerg y)。 因此， 本发明利用 白藜芦醇与各种水溶性药物制备出包含含药微 胞的白藜芦醇 -水溶性药物复方医药组成 物， 可作为局部溶脂及减重的医药组成物。

由本发明的实施例可知， 本发明提供的第一医药组成物、 第二医药组成物、 第三医药 组成物、 第四医药组成物、 第五医药组成物、 以及本发明提供的其他医药组成物， 均可使 得局部脂肪量减少。 因此， 本发明提供的第一医药组成物、 第二医药组成物、 第三医药组 成物、 第四医药组成物、 第五医药组成物、 以及本发明提供的其他医药组成物， 可用于制 备皮下植入装置、 皮下植入物、 埋植式输注液、 软膏 (ointment或 salve)、 或贴布， 而能透 过皮下植入、 埋植式输注、 涂抹 (apply)或贴布等经皮吸收方式施用于需要减少� �下脂肪的 部位。

较佳者， 本发明提供的第一医药组成物、 第二医药组成物、 第三医药组成物、 第四医 药组成物、 第五医药组成物、 以及本发明提供的其他医药组成物， 可透过皮下脂肪注射方 式， 使施用部位的脂肪减少。 因此， 本发明提供的第一医药组成物、 第二医药组成物、 第 三医药组成物、 第四医药组成物、 第五医药组成物、 以及本发明提供的其他医药组成物， 可用于制备用于减少局部皮下脂肪的皮下脂肪 层注射针剂或皮下注射针剂。

以上所述仅为本发明的较佳实施例， 并非用以限定本发明的权利要求， 因此凡其它未 脱离本发明所揭示的精神下所完成的各种更动 或润饰等， 均应包含于本发明的权利要求 内。