苯丁酰基姜黄素衍生物及其在制备抗肿瘤药 物中的应用

技术领域

本发明属制药领域， 尤其涉及苯丁酰基姜黄素衍生物及其制备方法 ， 以及 其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

姜黄素（Curcumin, 简称 Cur)是从姜科姜黄属植物姜黄、 莪术、 郁金等的 根茎中提取的有效成分， 具有抗肿瘤、 抗炎、 抗人类免疫缺陷病毒、 抗胆固醇、 抗氧化等多种药理作用,具有良好的临床应用� �力。 但 Cur不稳定， 在体内代谢 迅速， 生物利用度低， 体内难以达到有效浓度， 严重制约了姜黄素开发成有效 的抗癌药。 通过结构改造合成姜黄素衍生物， 提高生物利用度、 延长生物消除 半衰期 t _1/2 有重要意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供 4- [双 (2-氯乙基：)氨基]苯丁酰基姜黄素和 4,4'- [双 (2-氯乙基：)氨基]双苯丁酰基姜黄素及其药学� ��可接受的盐。 本发明的目的之二在于提供 4- [双 (2-氯乙基：)氨基]苯丁酰基姜黄素和 4,4'- [双 (2-氯乙基：)氨基]双苯丁酰基姜黄素及其药学� ��可接受的盐的制备方法。 为实现本发明的目的采用的技术方案如下： 本发明所述的 4- [双 (2-氯乙基:) 氨基]苯丁酰基姜黄素其结构式如下列化合物 1 所示； 4,4'- [双 (2-氯乙基)氨基] 双苯丁酰基姜黄素其结构式如下列化合物 2所示， 以及本发明所述的姜黄素衍 生物的盐类是下式结构的化合物 1和化合物 2在药学上可接受的盐类：

说 明 书

在药学上可接受盐包括碱金属盐、 碱土金属盐、 含有机碱的盐、 含有机碱 的盐。 该可接受盐包括钙盐、 镁盐、 铵盐、 三乙基胺盐、 乙醇胺盐。

本发明所述的姜黄素衍生物和盐类的制备方法 ， 具体歩骤如下： 将姜黄素 溶于干燥过的二氯甲垸， 加入催化量 DMAP (Ν,Ν-4-二甲基氨基吡啶）， 而后加 入已溶解于二氯甲垸的 4- [双 (2-氯乙基：)氨基]苯丁酸进行酯化反应， 而后将产物 经过柱层析分离纯化。在上述本发明的方法中 可以先加脱水剂 DCC (二环己基 碳二亚胺） 或 EDCI ( 1 -乙基 -3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐）， 再加化学 领域的通用催化量的 DMAP。

本发明所合成的化合物 1和化合物 2结构的姜黄素衍生物， 均获得核磁共 振光谱 （NMR)、 红外线光谱 （IR)、 紫外线光谱 （UV)、 液相色谱-质谱法 (HPLC-Mass) 鉴定， 在鉴定后的化合物 1和化合物 2， 依据需要而制成合适 的药物学上的剂型。

本发明是保护化合物 1或化合物 2的药物或其药学上可接受的盐， 或含有 化合物 1或化合物 2的药物或其药学上可接受的盐组成的药物组� �物或制剂。

在制备药物学上的剂型中， 其载体为药学领域常规的药物载体， 例如稀释 剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 崩解剂、 表面活性剂、 润滑剂等； 其可以制成 口服和其他给药方式的各种剂型， 如口服液、 混悬液、 胶囊、 片剂、 丸剂、 颗 粒剂、 及粉针注射液等； 按药学领域的常规生产方法制备， 其选用含有重量百 分比为 0.1 %— 99.5 %活性成分的化合物 1或化合物 2。 也可含有 0.1 %— 99.5 % 的化合物 1或化合物 2的药物组合物； 为同领域一般技术人员能实现的技术。

本发明的使用量可根据用药途径， 患者的年龄、 体重、 所治疗的疾病的类 型和严重程度等变化， 其服用量可以是 0. 001— 10 _g / k _g 体重， 可以一次或多 次给药。 本发明目的之三在于 4- [双 (2-氯乙基：)氨基]苯丁酰基姜黄素和 4,4'- [双 (2-氯 乙基)氨基]双苯丁酰基姜黄素， 用于制备抗肿瘤药物的应用。 姜黄素衍生物， 可用于但不局限于制备治疗白血病、 皮肤癌、 胃癌、 结肠 癌、 肝癌、 乳腺癌或前列腺癌药物。 白血病优选人慢性粒细胞白血病。 说 明 书 本发明的有益效果： 本发明所述的化合物 1姜黄素 4- [双 (2-氯乙基)氨基]苯 丁酸酯在体内对多种动物肿瘤细胞移植模型均 有明显抑制， 尤其是对人慢性粒 细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤的抑制作用可高达 60%， 而且给药组裸鼠体 重无明显下降， 无动物发生死亡。 化合物 1对人慢性粒细胞白血病 K562细胞 株接种 NOD-SCID小鼠构建人慢性粒细胞白血病模型， 生命延长率也提高了， 且未见有对小鼠的严重毒性。对小鼠肝癌 H22在体抑瘤率为 40— 75 %， 同样化 合物 2由于结构相似， 实验证明也有同样的效果。 因此， 该类化合物具有比姜 黄素更强的抑瘤作用。 附图说明 图 1 是化合物 1静脉给药对小鼠肝癌 H22移植瘤的抑制作用图

图 2 是化合物 1口服给药对小鼠肝癌 H22移植瘤的抑制作用图

图 3 是化合物 1对人慢性粒细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤生长曲线 图

图 4 是化合物 1对人慢性粒细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤的作用图 图 5和图 6 是化合物 1对人慢性粒细胞白血病小鼠模型的小鼠大体� �剖 和小鼠骨髓 bcr-abl基因表达图

图 7和图 8 是 NS组和化合物 1给药对人慢性粒细胞白血病模型小鼠外 周血象图

图 9是化合物 2对小鼠肝癌 H22移植瘤的抑制作用图；

如图 1所示， 建立 H22小鼠移植瘤， 分别静脉给予小鼠生理盐 （对照组）， 化合物 1 : 50、 70mg/kg (给药组）。 抑瘤率高达 60%。

如图 2所示， 建立 H22小鼠移植瘤， 分别口服给予小鼠生理盐 （对照组）， 化合物 1 : 50、 75、 100mg/kg (给药组）， 姜黄素 50 mg/kg (姜黄素对照组）。 给药组抑瘤率分别为 41.21%、 52.93%、 75.06%。 姜黄素对照组 （与化合物 lOOmg/kg等摩尔）抑瘤率仅为 16.58%,可见化合物抑瘤作用明显比姜黄素要强� �

如图 3所示， 建立人慢性粒细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤模型， 分别 口服给予裸鼠生理盐 （对照组）， 化合物 1 : 40、 60mg/kg (给药组） 。 于第 0、 4、 8、 11天用游标卡尺测小鼠瘤的长、 宽、 高， 计算瘤体积 =长><宽 X高 x l/2， 增长百分率 （％) = (实验组平均瘤体积一对照组平均瘤体积） I对照组平均瘤 体积 χ 100%。 从图 3可见， 给药组肿瘤的生长受到明显抑制。

如图 4所示， 建立 Κ562细胞裸鼠移植瘤模型， 分别口服给予裸鼠生理盐 (对照组）， 化合物 1 : 40、 60mg/kg (给药组）。 抑瘤率分别为 66.6%、 56.7%。

如图 5、 图 6所示， 用 NOD-SCID小鼠构建人慢性粒细胞白血病模型， 对 照组小鼠大体解剖， 腹腔内见大量血性腹水， 并出现实体瘤。 小鼠骨髓细胞 说 明 书

RT-PCR均检到人人慢性粒细胞白血病的特征基 因 bcr-abl， 说明人慢性粒细胞 白血病细胞 K562归巢至 NOD-SCID小鼠骨髓。

如图 7、 图 8所示， NOD-SCID小鼠人慢性粒细胞白血病模型， 分别口服 给予小鼠生理盐水 （对照组）， 化合物 1 : 60mg/kg (给药组） ， 给药组外周血 象幼稚细胞亦明显少于对照组。

如图 9所示， 分别口服给予小鼠生理盐（对照组）， 化合物 2: 35、 50、 75、 115mg/kg (给药组）， 姜黄素 50 mg/kg (姜黄素对照组）。 给药组抑瘤率分别为 27.43%、 32.25%、 62.60%、 58.39%。 姜黄素对照组 （与化合物 100m _g /kg等摩 尔） 抑瘤率仅为 13.42%， 可见化合物 2的抑瘤作用明显比姜黄素要强。 具体实施方式

下列结合附图和实例对本发明进行详细说明

实施例 1 4- [双 (2-氯乙基：)氨基]苯丁酰基姜黄素 （化合物 1 ) 的合成

EDCI 1. 92g (10mmol)溶于无水二氯甲垸 200ml中， 在冰浴下搅拌并加入姜 黄素 7. 36g (20mmol)， DMAP 0. 244g ( 2mmol ) ， 再缓慢滴加溶有 4- [双（2-氯乙 基)氨基]苯丁酸 3. 04g (10mmol) 的二氯甲垸 200ml， 室温下继续搅拌反应 6小 时。 用蒸馏水洗涤， 有机相用无水硫酸镁干燥后， 过滤浓缩得粗品， 粗品用中 压制备色谱分离，反向 C18柱， 流动相甲醇： 水 50%→100% (体积百分比） 梯度 洗脱， 得到 4- [双 (2-氯乙基)氨基]苯丁酰基姜黄素纯品 1. 30g，产率 20%, 化学 结构式如下：

分子式 C ₃₅ H ₃₇ C1 ₂ N0 ₇ , mpl00-102°C

1H MR (D6-DMSO): 51.88(t,2H, -COCH ₂ CH ₂ CH ₂ Ph), 2.51(t,2H, -COCH ₂ CH ₂ CH ₂ Ph), 2.58(m,2H,-COCH ₂ CH ₂ CH ₂ Ph), 3 62(t,4H,-NCH ₂ CH ₂ Cl),3.71 (t,4H,-NCH ₂ CH ₂ Cl),3.85

(s,6H,2Ar-OCH3), 6.14 (s, 1H, -COCH=C(OH)-), 6.70 (d, 2H, 2-CH=CH-Ar), 6.78-6.99(m,2H) _: 7.13-7.19(m,2H) , 7.33(m,2H), 7.51 (d,2H),7.58 (d,2H),7.62 (d,2H ,2Ar-CH=),9.72 (s,lH , Ar-OH);HPLC-MS m/z: 654.2(M+1) 说 明 书 实施例 2 4,4 ' - [双 (2-氯乙基：)氨基]双苯丁酰基姜黄素 （化合物 2) 的合 成

EDCI 1. 92g (10mmol)溶于无水二氯甲垸 100ml中， 在冰浴下搅拌并加入姜 黄素 1. 84g (5mmol)， DMAP 0. 122g ( lmmol ) , 再缓慢滴加溶有 4- [双（2-氯乙 基)氨基]苯丁酸 3. 04g (10mmol) 的二氯甲垸 200ml， 室温下继续搅拌反应 6小 时。 用蒸馏水洗涤， 有机相用无水硫酸镁干燥后， 过滤浓缩得粗品， 粗品用中 压制备色谱分离，反向 C18柱， 流动相甲醇： 水 50%→100% (体积百分比） 梯度 洗脱，得到 4, 4 ' - [双 (2-氯乙基)氨基]双苯丁酰基姜黄素纯品（化合� �� 2 ) 1. 88g， 产率 40%， 化学结构式如下：

C49H54C14N2O8, mp58-60°C,1H MR (CDC1 ₃ ): 52.04(m,4H, -COCH ₂ CH ₂ CH ₂ Ph), 2.29(t,4H, -COCH ₂ CH ₂ CH ₂ Ph),2.60(m,4H,-COCH ₂ CH ₂ CH ₂ Ph),3.63(t,4H,-NCH ₂ CH ₂ Cl),3.70(t,4H,-NCH ₂ C H ₂ Cl),3.87(s,6H,2Ar-OCH3),6.58(d,2H,J=16Hz,2-CH=CH-Ar),6 .63(d,4H,J=8Hz),6.66(s, 1H,-C0 CH=C(OH)-),7.03(s,2H),7.05(m,2H),7.08(m,2H),7.12(d,4H,J=8Hz) ,7.17(m,2H),7.51(d,2H),7.53 (d,2H),7.62 (d,2H ,J=16Hz,2Ar-CH=)； HPLC-MS m/z: 941.3(M+1) 实施例 3 化合物 1对小鼠肝癌 H22移植瘤模型的作用 3.1 材料

8〜12周龄昆明种健康小鼠， 雌性， 体重为 (20±2) _g; 小鼠由福建医科大学实 验动物中心提供 (合格证号 SCXK(闽:) 200420002)。 小鼠肝癌细胞株 H22。 化合物

1使用前用配成所需浓度。

3.2 方法

3.2.1荷瘤小鼠模型的建立

H22肿瘤细胞传两代以上,调整细胞数至 10 ⁷ /ml, 0.2mL/只接种于小鼠右前 肢皮下，接种 2只， 待约两周， 剥瘤， 匀浆， 再接种 80只。 说 明 书

3.2.2 分组

A: 共分为 3组： 接种瘤株 24 h后的小鼠随机分成 3组: I组为生理盐水对照组， 化合物 1采用上述实施例方法制得的， 以下同， II组为化合物 1低剂量组 （化 合物 1 50mg/kg)， III组为化合物 1高剂量组 （70mg/kg)， 给药方法为尾静脉 注射， 0.1ml/10g。

B: 共分为 5组： 接种瘤株 24 h后的小鼠随机分成 5组： I组为生理盐水组 （即 肿瘤对照组）， II组为化合物 1低剂量组（剂量为 50mg/kg)， III组为化合物 1中 剂量组 （剂量为 75mg/kg)， IV组为化合物 1高剂量组 （剂量为 100m _g /k _g )， V 组为 Cur 组 （剂量为 50mg/kg， 与高剂量 IV组等摩尔）， 给药方法为灌胃，

3.2.3抑瘤率 处死小鼠后剥瘤称瘤质量， 计算抑瘤率. 肿瘤抑制率 （％) =对照组平均 瘤质量 -实验组平均瘤质量 /对照组平均瘤质量 χΐοο%。

3.3 结果

3.3.1 化合物 1静脉给药的抑瘤作用

观察不同给药剂量的抑瘤作用， 可见化合物 1对小鼠肝癌 H22移植瘤率具有 明显的抑制作用 （见表 1， 说明书附图的图 1 )。

表 1 化合物 1静脉给药对小鼠肝癌 H22移植瘤抑制作用 剂 里 鼠 数 瘤 重（g ) 抑 瘤 率 组 另 mg/kg > <day 前 /后 (%)

NS 0χ 10 10/10 1.01±0.47 0

低剂量组 50 χ7 10/9 0.40士 0.15 60.84** 高剂量组 70 χ5 10/6 0.335士 0.16 66.83** 注： NS (生理盐水对照组）， 与 NS组相比， * P<0.05;** P<0.01.

3.3.2 化合物 1口服给药的抑瘤作用

观察口服给药 6天的抑瘤作用。 可见随剂量的增加抑瘤率逐渐提高， 呈现 良好的量效关系。 给药组 （100m _g /k _g ) 比等摩尔的对照药姜黄素 （50 mg/kg) 抑瘤率有显著提高， 而且大剂量未见有小鼠死亡， 可见化合物 1较安全。 （见表 2 及说明书附图的图 2) 说 明 书

表 2口服给药对小鼠肝癌 H22移植瘤的抑制作用

鼠 数 体 重 ( ± s) 瘤 重 （g ) 抑瘤率 组 另 J

前 /后 前 1 后 (%)

NS 10/10 20.26±1.68/ 26.43±4.00 1.60±0.24 0 化合物 1 ( 50mg/kg ) 10/10 20.79±1.63/ 22.12±2.48 0.94±0.33

化合物 1 ( 75mg/kg ) 10/10 21.02±1.54/ 22.00±3.98 0.76±0.26 52.93** 化合物 1 ( 100mg/kg ) 10/10 21.10±1.57/ 18.64±1.91 0.40±0.15 75.06** 姜黄素 50mg/kg 10/10 21.17±1.62/ 26.61±3.67 1.34±0.25 16.58 注： 与 NS组相比， * P<0.05;** P<0.01. Cur为姜黄素

实施例 4 化合物 1对人慢性粒细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤模型的作用 4.1 材料

4-6周龄 SPF级裸鼠,雄性,购自由上海斯莱克实验动物有� ��责任公司提供（许 可证号： SCXX (沪) 2007-0005 )，在 SPF实验室饲养。人类慢性粒细胞白血病 K562 细胞购自中国科学院上海细胞生物学研究所细 胞库。化合物 1使用前配成所需浓 度。

4.2 方法 i)s

* *

4.2.1荷瘤小鼠模型的建立

K562细胞传两代以上,调整细胞数至 5 X 10 ⁷ /ml, 0.2mL/只接种于裸鼠右前 肢皮下， 接种 30只。

4.2.2 分组 共分为 3组： 接种瘤株 6天后， 根据小鼠肿瘤大小， 将小鼠分层随机随机 分成 3组： I组为生理盐水对照组， II组为化合物 1低剂量组 （40mg/kg)， III组 为化合物 1高剂量组 （60mg/kg)， 给药方法为灌胃给药， 0.1ml/10g。

4.2.3瘤增长百分率 分别于第 0、 4、 8、 11天用游标卡尺测小鼠瘤的长、 宽、 高， 计算瘤体积 = 长 X宽 X高 χ 1/2， 增长百分率 （％) = (实验组平均瘤体积一对照组平均瘤体积） I对照组平均瘤体积 χ 100%。 说 明 书

4.2.4抑瘤率 处死小鼠后剥瘤称瘤质量， 计算抑瘤率. 肿瘤抑制率 （％) = (对照组平均 瘤质量一实验组平均瘤质量） /对照组平均瘤质量 X 1 oo%。

4.3 结果

4.3.1瘤增长百分率

各组荷瘤小鼠肿瘤生长的动态变化见说明书附 图的图 3， 可见给药组的肿瘤 增长速率明显比 NS对照组要低。

4.3.2 口服给药的抑瘤作用 观察口服给药 11天的抑瘤作用。 结果显示化合物 1能明显抑制 K562细胞裸 鼠移植瘤的生长,其抑瘤率分别为 66.6%、 56.7%, 经统计学处理 （t检验） 具有 显著性差异， 具有一定的量效关系 （见表 3， 说明书附图的图 4)。 与生理盐水组 比较,给药组裸鼠体重无明显下降， 无动物发生死亡， 提示化合物在提高药物抗 癌作用的同时并没有增加药物的毒性。试验表 明化合物 1对人慢性粒细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤模型具有显著的抑瘤作用� � 表 3 口服给药对人慢性粒细胞白血病 K562细胞裸鼠移植瘤的抑制作用 鼠 数 体 重（ ± s) 瘤 重 （g ) 抑瘤率 组 另 J

前 /后 前 1 后 (%)

NS 6/6 19.9±1.8 1 21.1±1.0 1.36±1.19 0 化合物 1 ( 40mg/kg ) 6/6 19.6±1.9 1 20.6±1.6 0.46±0.17 65.90** 化合物 1 ( 60mg/kg ) 6/6 20.7±1.6 1 21.5±1.2 0.50±0.40 57.70** 注： 与 NS组相比， * P<0.05;** P<0.01. 实施例 5 化合物 1对人慢性粒细胞白血病小鼠模型的作用 5.1 材料

5.1.1 NOD-SCID小鼠

雌性和雄性兼用， 4 〜6周龄， 体重 18~22g, 中国医学科学院实验动物研究 所提供， 许可证编号： SCXK (京） 2005-0013。 NOD-SCID小鼠在 SPF实验室层 流架内带盖鼠盒中饲养 (符合 SPF标准：） 。标准颗粒饲料,饮水,垫料及一切与鼠接 触物品均经灭菌处理。

5.1.2 人白血病细胞株（K562) 说 明 书 购自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库 ， 本室常规传代培养， 采用 对数生长期的细胞做动物体内移植。

5.1.3 化合物 1使用前配成所需浓度。 5.2 方法

5.2.1小鼠慢性粒细胞白血病模型的建立

NOD-SCID小鼠接受 2.0 Gy X射线全身照射， 次日取对数生长期 K562细 胞用于移植， 尾静脉一次性注射 l xlO ⁷ cell/ 鼠。

5.2.2化合物 1对 NOD-SCID小鼠慢性粒细胞白血病模型作用

NOD-SCID小鼠移植 K562细胞后， 随机分组， 分设生理盐水对照组及给 药治疗组， 每组四只。 空白对照组给予生理盐水 0.2ml/只灌胃， 给药治疗组给 予化合物 1 60mg/kg灌胃， 于移植后两周开始给药， 连续给药 5天， 给药治疗 组停药 5天后再连续用药 8天。给药期间密切观察小鼠一般情况、体重� �食量， 评估药物毒性及动物对药物的耐受程度以调整 给药方案。 记录各实验组小鼠生 存时间， 观察时间为三个月， K562细胞移植后存活两个月以上者为长期生存� �

5.2.3外周血涂片及白细胞计数 各实验组小鼠分别于接种前和接种后 1周、 2周、 3周、 4周、 5周， 取尾 静脉血计数白细胞总数， 并制备血涂片， 经瑞氏-吉姆萨染色， 油镜下分类、 计 数。

5.3结果

5.3.1 NOD-SCID小鼠人慢性粒细胞白血病模型构建

生理盐水对照组小鼠移植人慢性粒细胞白血病 细胞 K562后， 自然存活时间 为 32.5±9.0天。 动物皮毛起皱、 萎糜少动、 歩态不稳,体重逐渐减轻。 移植后三 周外周血白细胞明显升高， 可达移植前 2-10倍， 外周血涂片见大量幼稚细胞。 死亡小鼠大体解剖， 腹腔内见大量血性腹水， 并出现实体瘤， 脾大不明显 （见 说明书附图 5 )。 生理盐水对照组 NOD-SCID小鼠骨髓细胞 RT-PCR均检到人 bcr-abl基因 （见说明书附图 6)， 说明人慢性粒细胞白血病细胞 K562归巢至 NOD-SCID小鼠骨髓。 证明人慢性粒细胞白血模型构建成功。

5.3.2 口服给药对小鼠慢性粒细胞白血病作用

给药治疗组截至结束为止 4只小鼠中有 2只尚存活， 生存时间已达 85天， 实 现长期生存， 其余小鼠生存时间较生理盐水对照组明显延长 ， 外周血白细胞数 明显低于生理盐水对照组， 外周血象幼稚细胞亦明显少于对照组。 （见表 4、 5， 及说明书附图 7、 8)， 试验表明实施例 1所合成的化合物 1对小鼠慢性粒细胞白血 说 明 书 病有作用。

表 4 口服给药对慢性粒细胞白血病小鼠生存时间影 响 剂 量 给药前后体重 长期生存 生存时间 （d) 生存时间 组 别 前 1后 延长率

(mg/kg) ( ± S) ( ±5) (%)

NS 0 26.3±2.5/ 28 0/4 32.5±9.0 0 化合物 1 60 25.5±2.1/ 23.3±0.6 2/4 68.5±24.4 110.77*

*： P<0.05， VS NS组。

表 5 各实验组小鼠外周血白细胞数 （X 107L) 组 别 K562细胞接种后时间 （周）

0 1 2 3 4 5

NS 4.02±1.02 3.31±1.34 4.68±1.52 14.03±5.52 8.91±2.66 死亡 化合物 1 3.92±0.34 2.53±0.70 2.52±1.27 7.86±2.52 7.35±3.11 6.47±3.86

实施例 6 化合物 2对小鼠肝癌 H22移植肿瘤的抑制作用

化合物 2为上述实施例方法制得的， 本实例的测试方法同化合物 1。 将化 合物 2使用前配成所需浓度。 取肿瘤生长良好的种鼠脱颈处死， 无菌条件下剥 取瘤块， 取生长状态良好的肿瘤组织， 匀浆过滤制成单细胞悬液， 调整细胞数 为 1. O X IOVml , 每只接种 0. 2ml于小鼠右腋下， 建立 H22小鼠移植瘤模型。接 种次日， 将小鼠按体重随机分组， 每组 9 只小鼠， 并且记录给药前体重。 按 0. 2ml/10g体重给药， 每天一次， 共 8次口服给药。 于末次给药后 24h脱颈处 死， 剥瘤拍照并称重（见表 6和说明书附图 9)， 计算肿瘤平均重量及肿瘤抑制 率。肿瘤抑制率（％) = [对照组平均瘤质量一实验组平均瘤质量] /对照组平均瘤 质量 X 100 %。 说 明 书

组

表 6 化合物 2口服给对小鼠肝癌 H22移植瘤的抑制作用

体: ( s) 瘤重 (g)

¾7后 (x±s)

NS 9/9 20.08士 1.03/28.9士 3.15 1.24士 0.64

19.83±0.96/30.08士 3.77 1.08士 0.33 13.42

50mg/kgX8

阳性对照

9/9 19.96士 1.19/21.56士 3.28 0.90士 0.20 27.25 20mg/kgX8

化合物 2

20.52±1.23/26.23±3.41 0.90±0.36 27.43 35mg/kgX8

化合物 2

20.38士 1.24/23.74士 1.85 0.84士 0.42 32.25 50mg/kgX8

化合物 2

20.56士 1.82/21.08士 1.01 0.46士 0.26 62.60** 75mg/kgX8

化合物 2

9/9 20.14±1.52/18.69士2.55 0.52士 0.16 58.39** 115mg/kgX8

注： 与 NS组相比， 叩 < 0.05; **P< 0.01 。 本发明以上述实施例同样的方式也可验证包括 化合物 1或化合物 2或其在 药学上可接受盐以及含有化合物 1或化合物 2或其在药学上可接受盐形式的药 物组合物具有类似的特性；药学上可接受盐的 例子包括碱金属盐如钠盐或钾盐， 碱土金属盐如钙盐或镁盐， 含有机碱的盐如铵盐， 或舍有机碱的盐如三乙基胺