本发明涉及分子中含有磷酸或膦酸基的药理活 性分子的新的肝靶向前药 衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、 水合物或溶剂合物， 以及含有该前 药衍生物及其非毒性的药学上可接受的盐、 水合物或溶剂合物作为活性成分 以及适宜的赋型剂形成的药物组合物， 以及该前药衍生物及其非毒性的药学 上可接受的盐、 水合物或溶剂合物、 含有该前药衍生物及其非毒性的药学上 可接受的盐、 水合物或溶剂合物作为活性成分的药物组合物 在制备肝病或代 谢性疾病的治疗药物的用途。 背景技术

肝脏是病毒性肝炎、 肝硬化、 肝癌的耙器官， 也是糖脂代谢的主要器官。 针对这些疾病的治疗技术、 治疗方法和治疗药物的研究， 在近十年中取得了 重要进展， 但是远不能满足临床的需求。 如对于慢性病毒性肝炎， 干扰素疗 效不稳定， 副作用较大； 抗乙肝病毒药物拉米夫定易产生耐药性， 阿德福韦 酯具有剂量限制性的肾脏毒性； 而唯一的小分子抗丙肝病毒药物利巴韦林长 期应用可引起严重的血液毒性。 对于肝癌， 常规化疗药物全身副作用大。 对 于肝纤维化和肝硬化， 临床尚无安全有效的药物。 对于糖尿病及高血脂， 临 床也迫切需要新的更有效的治疗方法。

核苷磷酸 /膦酸是抗病毒药物的重要組成部分。 如拉米夫定、 替比夫定、 恩替卡韦、 利巴韦林、 PSI- 6130等核苷类似物均是通过磷酸化形成具有药� �活 性的核苷酸类似物， 发挥抗病毒作用。

拉米夫定 恩替卡韦 阿昔洛韦

利巴韦林 PS I -6130

阿德福韦 （PMEA)、 替诺福韦 （PMPA) 和 PMPDAP 是具有抗 HIV和

HBV活性的无环核苷膦酸类似物。

阿德福韦 替诺福韦 PMPDAP

MB05032是具有降糖作用的膦酸类果糖 1，6-二磷酸酶抑制剂， MB07344 是具有降脂作用的膦酸类甲状腺受体激动剂。 MB05032 但是， 含有磷酸或膦酸基的药理活性分子由于磷酸或 膦酸基的强极性， 难以透过细胞膜， 因此其口服给药的生物利用度低， 难以达到有效治疗浓度。 因此， 研究开发安全有效的含有磷酸或膦酸基的药理 活性分子的前药是该类 药物研发的关键。

将含膦酸基的药物分子制成羧酸酯或碳酸酯前 药， 可以显著提高膦酸类 药物的口服生物利用度。 阿德福韦酯和 LB-80380是特戊酸活泼酯前药， 替诺 福韦酯是碳酸异丙酯的前药。 阿德福韦酯和替诺福韦酯是临床应用最广泛的

阿德福韦特戊酸酯 LB-80380 替诺福韦吡呋酯 但是， 阿德福韦特戊酸酯、 LB- 80380及替诺福韦吡呋酯化学稳定性差， 其原料药及制剂对温度湿度较敏感， 易分解形成人体不能吸收的单酯； 其体 内代谢产物甲醛对人体具有毒性； 而且由于其在胃肠道不稳定， 易水解生成 强酸性的膦酸化合物， 对胃肠道有刺激性。 另外，阿德福韦特戊酸酯和

LB-80380进入体内， 水解生成的特戊酸， 不易代谢排泄， 有一定的副作用。

MCC-478是具有抗乙肝病毒作用的无环核苷酸的� �氟乙醇酯， 具有较好 的化学稳定性。 MCC-478进入体内后水解释放出游离酸（602076) 发挥抗病毒 作用； 但是 I期临床的药代动力学研究结果表明， MCC-478在人体内的主要 代谢产物为核苷酸单酯 （602074) ，游离酸 602076的血药浓度只有单酯 602074 的 1 /10 ( Clark Chan, et al.Clinical Pharmaco-kinetics of Alamifovir and Its Metabolites Antivicrob Agents Chemother, 2005, 49(5):1813― 1822.) ，而单酯 602074 的细胞毒性 (CC50 = 548μ Μ) 显著高于 MCC- 478和 602076 ( 0：50均> 1000 μ Μ) ( Kamiya N, et al. Antiviral activities of MCC-478, a novel and specific inhibitor of hepatitis B Vims. Antimicrob Agents Chemother 2002 ;46(9):2872 )

602076

MCC-478, Alamifovir 602074

S-乙酰 乙基酯 （SATE) 的设计也是磷酸 /膦酸类药物最常用的前药设计 策略。如 ddUMP 和膦甲酸的双 - (S-乙酰硫乙基酯） 能够显箸提高 ddUMP 和 膦甲酸的口服生物利用度。

bis(SATE)ddU P bis(SATE) foscarnet

但是， 磷酸 /膦酸类药物的 S-乙酰硫乙基酯 （SATE) 进入体内， 产生乙 烯基硫化物， 为强的烷基化试剂。

CGS25463和 CGS26393为膦酸衍生物的双酚酯前药， 进入体内能够释放 活性膦酸药物：

^CGS25462 CGS26393

PSI-7977和 INX- 08189分别为具有抗 HIV活性的核苷酸的磷酰胺酚酯和 磷酰胺萘酚酯的前药， 进入体内后释放核苷单磷酸衍生物， 并进一步转化为 三磷酸产物， 发挥抗 HCV的作用：

PSI-7977 INX-08189

但是， CGS25463> CGS26393> PSI- 7977及 INX-08189进入体内后， 会产 生高毒性的酚类物质。

Pradefovir、 MB07811和 MB07133分别为抗乙肝药物 PMEA、 甲状腺受体 激动剂 MB07344及抗肿瘤药物阿糖胞苷的苯取代环状膦� �酯的前药； 该类前 药具有较好的化学稳定性， 在胃肠道和血液中保持稳定， 而在肝脏中能够被 细胞色素 P450酶选择性氧化， 在肝脏靶向释放活性药物 PMEA、 MB07344或 阿糖胞苷， 发挥抗乙肝病毒作用、 降脂作用或抗肝癌作用：

Pradefovir MB0781 1 麵 7133 但是， Pradefovir、 MB07811和 MB07133进入体内后， 会产生高度致癌作 用的代谢中间体， 具有致癌作用。

发明内容

为了克服上述磷酸 /膦酸类前药的不足，本发明提供式 I所示磷酸 /膦酸衍 生物： 其中， 1^或1 ₂ 代表如下结构：

( Q1 ) ( Q2 ) ( Q3 )

Q1代表 L-氨基酸的酯衍生物， 其中 R ₃ 为碳原子数 1-6的烷基或环烷基， R ₄ 为 H或碳原子数 1-6的烷基； Q2代表羟基取代的笨并二氧六环衍生物； Q3代表 羟基取代的苯并二氧戊环衍生物； ^或 相同或不同， 但是其中至少有一个

0

II

HO— P— D 为 Q2或 Q3 ; D代表含磷酸 /膦酸基的药理活性分子的残基， 即 Η 代表含 磷酸 /膦酸基的药理活性分子； 当 R】和 不同时， 与 1^和1 ₂ 相连的 P原 子的构型为 R型或 S型。 本发明人通过大量研究发现， 与现有技术相比， 式 I所示的磷酸 /膦酸衍 生物具有更高的生物活性和更好的生物安全性 ； 发明人还意外地发现， 目标 化合物在胃肠道和血液中保持稳定， 而在肝脏中能够充分释放活性物质， 具 有较好的肝靶向性； 发明人更意外地发现， 式 I所示的目标化合物口服给药 后， 具有保肝作用， 能够抑制肝炎病毒所致的肝损伤， 快速降低肝炎病毒所 引起的转氨酶升高。

的盐在制备治疗肝脏疾病如病毒性肝炎药物 的用途。

在制备治疗肝脏代谢失调所致的疾病如高血 脂和高血糖药物的用途。

本发明另一方面提供含式 I所示的磷酸 /膦酸衍生物及其非毒性药学上可 接受的盐作为活性成分及药用赋形剂的药物組 合物； 这些药物组合物可以是 片剂， 如速释片、 緩释片、 控释片、 薄膜衣片、 糖衣片、 口含片、 舌下片、 等； 胶囊剂如硬胶嚢剂、 软胶嚢剂等； 注射剂如无菌的或含抑菌剂的水性注 射液、 油性注射液、 冷冻干燥粉针剂、 注射用徵球等。

式 I所示磷酸 /膦酸衍生物可以按照如下合成路线制备：

路线一： 以 5-羟基苯并二氧无环 PMEA 双酯衍生物的制备为例

R ₂ 同时为 Q2或 Q3的膦酸酯类目标化合物可以按照合成路线一� ��备:

PMEA

合成路线一

PMEA在二环己基碳二亚胺作用下， 与 5-羟基苯并二氧无环的羟基缩合， 得到目标化合物。

路线二： 以阿昔洛韦的 5-羟基苯并二氧无环磷酸酯衍生物的制备为例� �� R,和 R ₂ 同时为 Q2或 Q3的嶙酸酯类目标化合物可以按照合成路线二� ��备：

111

合成路线二

阿昔洛韦与三氯氡磷作用， 生成磷酰氯中间体 Π ₁ Π,与 5-羟基苯并二氧 无环反应， 得到目标化合物。

路线三： 以 ΡΜΡΑ的膦酰胺单酯衍生物的制备为例， ！^为 ， R ₂ 为 Q2 或 Q3的膦酰胺单酯类目标化合物可以按照合成路� ��三制备:

IV1

合成路线三

PMEA首先在二环己基碳二亚胺作用下， 与 5-羟基苯并二氧无环的羟基 缩合，得到单酯衍生物 III, , III,与氯化亚砜作用， 生成膦酰氯单酯中间体 IV！， IVi与氨基酸酯反应， 得到目标化合物。 路线四： 以阿昔洛韦的磷酰胺单酯衍生物的制备为例， 1^为 Ql， R ₂ 为 02或 Q3的磷酰胺单酯类目标化合物可以按照合成路� ��四制备：

合成路线四 二氯磷酰酯衍生物与氨基酸衍生物反应得到氯 代磷酰胺酯衍生物 V， V 与阿昔洛韦侧链的羟基反应， 得到目标化合物。 具体实施方式 下述实施例用于具体地解释本发明，然而本发 明的范围并不限于下述实施 例。 参考实施例 1 9- [[双 - (苯氧基） -膦酰基-甲氧基] -乙基] -腺嘌呤 （i-1 ) 的制 备

i-1

9- [(膦酰基 -甲氧基)-乙基] -腺嘌呤（PMEA)及 9.4g苯酚加于 100ml N-甲基吡咯烷酮中， 加热至 90°C搅拌， 然后依次加入 10ml三乙胺， 20g二环 己基碳二亚胺， 于 90°C加热搅拌 15小时。 自然冷却过夜， 滤去固体； 将滤 液减压浓缩， 将残留物用乙酸乙酯溶解， 依次用碳酸钠饱和溶液（2X200ml) 及氯化钠饱和溶液 （2X200m】） 洗涤： 将有机层用无水硫酸钠干燥过夜， 滤 去干燥剂， 将滤液减压蒸干， 用硅胶柱层析分离， 用二氯甲烷： 甲醇 （20 : 1 )混合溶剂洗脱，收集所需組分，减压蒸干，� � i-1 4.1g。核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6 )： 8.16 ( s， 1H)； 8.12(s, 1H); 7.34-7.37 (m, 4H); 7.33(b, 2H); 7.20-7.25 (m, 6H); 4.35-4.33(t, 2H); 3.92-3.90(t, 2H); 3.79- 3.77(d， 2H) ₀ 参考实施例 2 9- [[双 - (萘氧基） -膦酰基-甲氧基] -乙基] -腺嘌呤（i-2 ) 的制 备

i-2 参照参考实施例 1的方法， 用萘酚代替苯酚与 PMEA反应， 反应产物经 分离纯化，得到 i- 2 , 产率 27%。 8.16 ( s , 1H)； 8.12(s, 1 H); 7.73-7.77 (m, 2H) ; 7.45-7.59 (m， 10H)； 7.20-7.25 (m, 6H); 6.22-6.34 (m， 2H)； 4.35-4.33(t, 2H); 3.92-3.90(t, 2H); 3.79-3.77(d, 2H) ₀ 参考实施例 3 5，- [ ( (苯氧基小曱氧基羰基乙胺基) -磷酰基] -2，,3，-二脱氧 -3，- 硫代 -胞苷 （Cfl l09 ) 的制备

将 2.1克 （0.01 mol) 二氯磷酸苯酚酯和 1.3克 （0.01 mol) L-丙氨酸甲酯 溶于 30 mL 无水二氯甲烷中，冷却至 -78°C。搅拌下滴加 ² ml三乙胺溶于 ² 0 mL 无水二氯甲烷的溶液， 控制滴加速度以保持反应温度- 78°C。 加完后， 待反应 温度緩升至室温， 继续搅拌 1 小时。 减压蒸出溶剂， 在残留物中加入 30ml无 水乙醚， 过滤。 将滤液减压蒸干， 得无色油状物， 即为磷酰胺中间体 V _l 直 接用于下步反应。

将 0.21g拉米夫定溶于 50ml THF， 然后加入 7ml吡啶，通氮气，加入 lml 1M特丁基氯化镁的 THF溶液， 搅拌 0.5h, 搅拌下加入 2ml 1M V,的 THF 溶液， 搅拌 2h。 于反应液中加入 50ml二氯甲烷， 100ml 饱和氯化铵水溶液 萃取后； 分出有机层， 水层用二氯甲烷萃取 （3X50ml) ，合并有机层， 用饱和 氯化钠水溶液洗， 然后用无水硫酸镁 f燥过夜， 过滤， 将滤液减压蒸干， 将 残留物用硅胶柱层析分离， 用二氯甲烷： 甲醇： 三乙胺 （100:5:1 ) 混合溶剂 洗脱， 收集所需組分， 蒸干后得到目标化合物 0.18g。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 7.68 (d, IH ); 7.25-7.30 (m, 7H) ； 6.23 (t， IH); 6.11 (m， IH); 5.72(d，1H); 5.35 (t ,1 H); 4.27 (m, 2H); 3.88 (m, IH); 3.58 (s ,3H); 3.42 ( q， IH); 3.05 (m, 2H); 1.21 (d, 3H)。

参考实施例 4 9-[ (R) -2-[[ ( S ) -[[(S)-l- (异丙氧基羰基) -乙基] -胺基] -苯氧基 膦酰基] -曱氧基] -丙基] -腺嘌呤富马酸盐 （GS-7340 ) 的制备

GS-7340 在 50ml N-甲基吡咯烷酮中加入 14,6 g 9-[(R)-2- (膦酸基甲氧基） -丙基] - 腺嘌呤 （PMPA) , 9.6 g苯酚， 加热至 85° C， 加入 6.3ml三乙胺。 搅拌下緩慢 加入 13.4gDCC, 于 100° C加热搅拌过夜， 冷却后加入 30ml水。 放置， 滤去 固体， 合并洗滤液， 减压蒸干， 加入 30ml水， 用 25% 的氢氧化钠调节 pH 至 11, 滤去固体， 合并洗滤液， 用 30ml 乙酸乙酯萃取。 将水溶液用 3 ⁷ %盐 酸调节 pH至 3.1, 放置析出固体。 滤取固体， 加入 50ml 甲醇搅拌洗涤， 过 滤， 真空干燥， 得 PMPA的苯酚单酯衍生物 7.2g。

将上步产物 7.1g加于 30ml乙腈中， 搅拌下滴加 6.2g氯化亚砜， 保持温 度 50° C 以下。 将反应混合物于 75° C加热至固体溶解， 然后加热至 80° C, 蒸干。 冷却至 25° C, 加入 40ml二氯甲烷， 冷却至 -30° C; 在 30min内， 滴加 6.5gL-丙氨酸异丙酯于 35ml二氯甲烷的溶液，保持温度 -18° C。 然后在 15min 内， 滴加 7ml三乙胺， 保持温度 -18° C至- 1Γ C。 室温搅拌 2h， 用 10%的磷 酸二氢钠溶液洗 （3X15ml) 。 将有机罢用无水硫酸钠干燥， 过滤后将滤液减 压蒸干， 将残留物用硅胶柱层析分离， 用丙酮洗脱， 收集所需組分， 减压蒸 干，得油状物 3.6g， 用手性制备色谱（Diacel' s Chiralpak AS) 分离， 用含 30% 甲醇的乙腈洗脱，收集第二个主峰，减压蒸干 ，得 1.3g棕黄色固体。加入 25ml 乙腈， 0.3g富马酸， 加热回流至固体溶解， 趁热过滤， 将滤液冷却至 5° C , 放置过夜。 过滤， 干燥， 得白色固体 1.2g， 熔点 120-122° (：， [a ]D ²⁰

- 41.7。 （c 1.0, 醋酸)。 参考实施例 5 5'- [(S)-[[(S)-1- (异丙氧基羰基) -乙基] -胺基] -苯氧基磷酰基] - (3 -D-2，-脱氧 -2，-α -氟 -2，-β-0曱基尿苷 （PSI-7977) 的制备

PSI-7977

将 2.1克 (0.01 mol) 苯氧基 -二氯氧磷和 1.6克 (0.01 mol) L-丙氨酸异丙 酯溶于 30mL 无水二氯甲烷中， 冷却至 -78° (：。 搅拌下滴加 2ml三乙胺溶于 ² 0 _m L无水二氯甲烷的溶液， 控制滴加速度以保持反应温度 -78° (：。 加完后， 待 反应温度緩升至室温， 继续搅拌 1 小时。减压蒸出溶剂，在残留物中加入 30ml 无水乙醚， 过滤。 将滤液减压蒸干， 得无色油状物， 即为磷酰胺中间体 V ₂ ， 直接用于下步反应。

将 1.5g β -O-2' -脱氧 -2， -a -氟 -2' - β -C-甲基尿苷 （济南中科一通化工 有限公司， 纯度 98%) 溶于 30ml THF, 然后加入 3g N-甲基咪唑， 加入 V ₂ 溶于 20mlTHF的溶液。 室温搅拌过夜， 过滤， 将滤液减压蒸干。 将残留物 用硅胶柱层析分离， 用含 2%异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需组分， 减压 蒸干。 将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色谱柱 为 Diacel' s Chiralpak AS, 流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液， 流速 8ml/min， 收集第二个组分， 减压蒸干， 得到 PSI-7977 0.21g。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 11.21 (s, IH); 7.52 ( d, iH) ； 7.36-7.30 (m, 2H); 7.20-7.12 (m， 3H);6.05-5.95(m, 2H);5.80 (m, IH); 5.51 (d, IH); 4.81(q, IH); 4.36-4.30 (m, IH); 4.21-4.16 (m, IH); 4.00-3.94(m, 1Η);3.82-3.70 (m， 2H); 1.21 (d, 3H); 1.18 (d,3H); 1.10(d, 6H)。 参考实施例 6 5'- [ ( (苯氧基 -1-异丙氧基羰基乙胺基) -磷酰基]- β -D-2，-脱氧

-2'-α -氟 -2，-β-0曱基 -6-0曱基鸟苷 （PSI-353661 ) 的制备

PSI-353661

参照参考实施例 5的方法， 用 β -D- 2， -脱氧 -2' -a -氟 -2' -β — C-甲基 -6-0- 甲基鸟苷 （济南中科一通化工有限公司， 纯度 9 ⁸ %) 代替 β -O-2 ' -脱氧 -2 ' -a -氟 -2 ' -β -C-甲基尿苷， 与磷酰胺中间体 V ₂ 反应， 经类似方法处理及分离 纯化，得到目标化合物 PSI-35366L核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO- d6 )： 10.70 (s, IH); 7.38-7.32 (m, 2H); 7.22-7.15 (m, 3H);6.52 ( s,2H ) ;6.08-5.92(m, 3H); 5.82 (m, lH);4.84(q, IH); 4.39-4.33 (m, IH); 4.25-4.19 (m, IH); 4.03-3.97m, IH); 3.91(s,3H); 3.85-3.73 (m, 2H); 1.24 (d, 3H); 1.22 (d,3H); 1.12(d, 6H)。 参考实施例 Ί 9-[[ [(苯氧基 - 1-曱氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] -氧基] -乙氧基] - 曱基] - 鸟嘌呤 ( i-3 ) 的制备

参照参考实施例 3的方法， 用阿昔洛韦代替拉米夫定， 与磷酰胺中间体¼ 反应， 经类似方法处理及分离纯化，得到目标化合物 i-3。 核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6) ： 10.65 (s, IH); 7.83 (s, IH); 7.38-7.14(m, 5H); 6.53(s, 2H); 6.00-5.93 (m, IH); 5.36 (s, 2H); 4. 13-4.05 (m, 2H); 3.85-3.80 ( m, IH); 3.72-3.63(m, 2H); 3.59(s, 3H); 1.23- 1.19(m, 3H) 。 参考实施例 8 2-氨基 - 1 ,9-二氢 -9-[(l S,3R，4S)-4-羟基 -3-((R)- ( ( S ) -l-乙氧 基羰基乙胺基- 酚氧基-磷酰基) -氧曱基) -2-亚曱基环戊 基 ]-6H- 嘌呤 -6- 酮 （ i-4 ) 及 2-氨基 -1， 9-二 氢 -9- [ (1S， 3R，4S) - 4-羟基- 3_ ( (S) - ( ( S ) -1 -异丙氧基羰基乙 胺基- 酚氧基-嶙酰基) -氧甲基） -2-亚曱基环戊基] -6H-嘌呤 —6 -酮 ( i-5 ) 的制备

将 5.5g 无水恩替卡韦溶于 50ml THF，然后加入 6g N-甲基咪唑，加入 6.3g V ₂ 溶于 30ml THF的溶液。 室温搅拌过夜， 过滤， 将滤液减压蒸干。 将残留 物用硅胶柱层析分离， 用含 2%异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需组分， 减 压蒸干。 将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色谱 柱为 Diacel' s Chiralpak AS ,流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液，流速 8ml/min, 收集第一个组分， 减压蒸干， 得到 i-4 0.20克； 收集第二个组分， 减压蒸干， 得到 i-5 0.24克。

i-4的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 ,400MHz)： 10.51 (bs, IH); 7.63(s, IH); 7.39-7.35 (m, 2H); 7.22-7.17 (m， 3H); 6.09(m, IH); 6.45 (s, 2H)； 5.32 (m, IH); 5.06(m, IH)； 4.89 (d, IH ); 4.85-4.83 (m， 2H ); 4.52 (m, IH ); 4.40 (m, IH); 4.23 (m, IH); 3.51 (m, 2H); 2.52 ( m, IH ); 2.22 (m, IH ); 2.04 (m， IH); 1.19 (d， 3H); 1.16 (d , 6H)。

i-5的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 ,400MHz)： 10.54(bs, IH); 7.67(s, IH); 7.38-7.33 (m， 2H); 7.21-7.15 (m, 3H); 6.45 (s， 2H)； 6.03 (m, IH); 5.80 (m， IH); 5.32 (m， IH); 5.07(m, IH)； 4.87-4.83 ( m, 3H ); 4.58 (m ,1H ); 4.35 (m, IH); 4.23 (m, IH); 3.51 (m, 2H); 2.50 ( m,lH )； 2.21 (m, IH ); 2.03 (m, IH); 1.21 (d, 3H); 1.13(d, 6H)。 实施例 1 9-[ [[双 - ( (苯并 [1,3]二氧五环 -4-基) -氧基) -膦酰基] -曱氧基] -乙基] - 腺嘌呤（IJ 的制备

I,

将 13.7g 9- [(膦酰基-甲氧基) -乙基]-腺嘌呤（PMEA)及 13.8 _g 4-羟基苯并 [1,3]二氧五环加于 100ml N-甲基吡咯烷酮中， 加热至 90°C搅拌， 然后依次加 入 10ml三乙胺， 20g二环己基碳二亚胺， 于 90°C加热搅拌 15小时。 自然冷 却过夜， 滤去固体； 将滤液减压浓缩， 将残留物用乙酸乙酯溶解， 依次用碳 酸钠饱和溶液 （2X200ml) 及氯化钠饱和溶液 （2X200ml) 洗涤， 将有机层用 无水硫酸钠干燥过夜， 滤去干燥剂， 将滤液减压蒸干， 用硅胶柱层析分离， 用二氯甲烷： 甲醇 （20 : 1 ) 混合溶剂洗脱， 收集所需組分， 减压蒸干， 得 I, 3.2g。核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.16( s, IH ), 8.12(s, IH), 7.33(b, 2H)，

6.67-6.71(t, 2H) ; 6.58-6.60(d, 2H) ; 6.53-6.55(d, 2H) ; 5.97-5.98(d, 4H), 4.35-4.33(t, 2H), 3.92-3.90(t, 2H), 3.79-3.77(d, 2H) 。 实施例 2 9-[ [[双 - ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基)-膦酰基] -曱氧基] -乙基] - 腺嘌呤（1 ₂ ) 的制备

参照实施例 1 的方法， 用 5-羟基苯并 [1，3]二氧五环代替 4-羟基苯并 [I, ³ ] 二氧五环， 与 PMEA缩合， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₂ , 产率 14%。 核磁共振氢谱 5 (ppm，DMSO-d6 ) : 8.15 ( s, 1H ) ； 8.11(s, 1H);

7.32(b, 2H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.49-6.47(d, 2H); 5.99(s, 4H)； 4.35-4.33(t, 2H); 3.93-3.91(t, 2H); 3.80-3.78(d， 2H)。 实施例 3 9-[ [[双 - ( (苯并 [1,4]二氧六环 -5-基) -氧基) -膦酰基] -曱氧基] -乙基] - 腺嘌呤 ( 1 ₃ ) 的制备

1 ₃ 参照实施例 1 的方法， 用 5-羟基苯并 [1,4]二氧六环代替 4-羟基苯并 [1， ³ ] 二氧五环， 与 PMEA缩合， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₃ , 产率 19%。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 ) : 8.16 ( s, 1H ) ； 8.12(s， 1H); 7.33(b, 2H); 6.58-6.62(t, 2H); 6.51-6.53(d, 2H); 6.41-6.43(d, 2H); 4.35-4.33(t, 2H); 4.20-4.24(m, 8H ) ； 3.92-3.90(t, 2H); 3.79-3.77(d, 2H)。 实施例 4 9-[ [[双 - ((苯并 [1，4]二氧六环 -6-基) -氧基) -膦酰基] -曱氧基] -乙基] - 腺嘌呤 (L) 的制备

参照实施例 1 的方法， 用 5-羟基苯并 [1,4]二氧六环代替 4-羟基苯升 [1,3] 二氧五环， 与 PMEA缩合， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₄ , 产率 14% o 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.16 ( s, 1H)； 8.12(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s,2H); 6.49-6.47(d, 2H); 4.35-4.33(t, 2H); 4.20-4.24(m, 8H ); 3.92-3.90(t, 2H); 3.79-3.77(d， 2H)。 实施例 5 9-[(R)-2- [[双 - ((苯并 [1,3]二氧五环 -4-基) -氧基) -膦酰基] -曱氧基] - 丙基] -腺嘌呤 (1 ₅ ) 的制备

I

参照实施例 1的方法， 用 4-羟基苯并 [1，3]二氧五环与 9-(R)- [2- (膦酸甲 氧基） -丙基]-腺嘌呤（R-PMPA) 缩合， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目 标化合物 1 ₅ ,产率 23%。核磁共振氢谱 δ (ppm，DMSO-d6)： 8.08 (s,lH); 8.07(s, 1H); 7.60(b, 2H); 6.67-6.71(t, 2H); 6.58-6.60(d, 2H); 6.53-6.55(d, 2H); .97-5.98(s, 4H); 4.4 l(m, 1H); 3.92-3.90(d, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 1.29(d,3H) ₀

实施例 6 9-[ (R) -2- [[双 - ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基) -膦酰基] -曱氧基] - 丙基] -腺嘌呤（1 ₆ ) 的制备

1 ₆ 参照实施例 1 的方法， 用 5-羟基苯并 [1，3]二氧五环与 R-PMPA缩合， 经 类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₆ , 产率 19%。 核磁共振氢谱 δ

(ppm, DMSO- d6 )： 8.08 ( s, 1H ) ; 8.07(s， 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 2H);

6.68(s,2H); 6.49-6.47(d, 2H) ； 5.99(s, 4H); 4.41(m, 1H); 3.92-3.90(d, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 1.29(d，3H)。 实施例 7 2-氨基 -6- ( 4-曱氧基 基 ) -9-[ [[双 - ( (苯并 [1,3]二氧五环 -4-基) - 氧基) -膦酰基] -曱氧基] -乙基] -嘌呤（1 ₇ ) 的制备

I 参照实施例 1 的方法， 用 4-羟基苯并 [1,3]二氧五环与 ² -氨基 -6- ( ⁴ -甲氧 基苯巟基） -9- [(膦酰基 -甲氧基)-乙基] -嘌呤缩合，经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₇ ,产率 14% 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 7.89( s,lH ); 7.54(d,2H)； 7.32(b, 2H); 6.91(d,2H)； 6.67-6.71(t, 2H); 6.58-6.60(d, 2H); 6.53-6.55(d, 2H); 5.97-5.98(s, 4H); 4.35-4.33(t, 2H); 3.93-3.91(t, 2H); 3.89(s， 3H); 3.80-3.78(d, 2H) ₀ 实施例 8 2-氨基 -6- ( 4-曱氧基苯硫基） -9-[ [[双 - ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) - 氧基) -膦酰基] -甲氧基] -乙基] -嘌呤（1 ₈ ) 的制备

参照实施例 1 的方法， 用 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环与 2-氨基 -6- (4-甲氧 基苯硫基） -9- [(膦酰基 -甲氧基)-乙基] -嘌呤缩合，经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₈ ,产率 16%。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO- d6 )： 7.89( s,lH );

7.54(d,2H) ； 7.32(b, 2H) ; 6.91(d,2H) ； 6.77-6.75(d, 2H) ; 6.68(s, 2H) ; 6.49-6.47(d, 2H); 5.99(s, 4H)； 4.35-4.33(t, 2H); 3.93-3.91(t, 2H); 3.89(s， 3H); 3.80-3.78(d, 2H)。 实施例 9 [ ( 3,5-二曱基 -4- ( 4，-羟基 -3，-异丙基苄基） 苯氧基） -曱基] -膦酸- 双- (苯并 [1 ,3]二氧五环 -5-基) -酯 （1 ₉ ) 的制备

I ₉ 参照实施例 1的方法， 用 5-羟基苯并 [1,3]二氧五环与 [ ( 3,5-二甲基 -4- (4'

-羟基 -3' -异丙基苄基） 苯氧基） -甲基]-膦酸缩合， 经类似方法处理及分离纯 化， 得到目标化合物 1 ₉ ,产率 27%。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.99(s,

1H)； 6.77-6.75(d, 2H); 6.71 ( s， 2H ) ； 6.68-6.53( m,7H)； 6.49-6.47(d, 2H); 5.99(s, 4H); 4.03(d, 2H); 3.77(s, 2H); 3.02 ( m, 1H )； 2.15(s, 6H); 1.08(d, 6H)。 实施例 10 [5-[2-氨基 -5- ( 2-曱基丙基） -噻唑 -4-基] -呋喃 -2-基] -膦酸 -双- (苯 并 [1,3]二氧五环 -5-基) -酯 （I _{1 Q} ) 的制备

参照实施例 1 的方法， 用 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环与 [5-[2-氨基- 5- (2-甲 基丙基） -噻唑 -4-基]-呋喃- 2-基] -膦酸缩合， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 Ι,ο.产率 14%。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 7.32(b, 2H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.50 ， 1H )； 6.49-6.47(d, 2H); 6.45(d, 1H ); 5.99(s, 4H) 2.1 l(d, 2H); 1.43(m, 1H)； 0.97(d, 6H)„

实施例 11 9-[ [[双 - ( (苯并 [1 ,3]二氧五环 -4-基) -氧基) - 磷酰氧基] -乙氧基] -曱 基] - 鸟嘌呤（1„) 的制备

In

在 100ml干燥的 THF中加入 4.5克无水阿昔洛韦， 通氮气， 将反应混合 物搅拌冷却至 -15°C至 -20 ：。搅拌下滴加 2.8克三氯氧磷与 8ml无水二氯甲烷 的溶液， 保持反应混合物的温度 -15°C至- 20° (：， 持续搅拌直到阿昔洛韦完全 反应， 将反应液减压蒸干， 得到阿昔洛韦的二氯磷酸酯衍生物 将 II, 用 50ml无水二氯甲烷溶解， 冷却至 -78°C， 搅拌下滴加 8.3克 4-羟 基苯并 [1,3]二氧五环和 6克新蒸三乙胺于 50ml无水二氯甲烷的溶液。加完后 搅拌， 渐升至室温， 搅拌过夜。 过滤， 将滤液减压蒸干， 将残留物用乙酸乙 酯溶解， 依次用碳酸钠饱和溶液 （2X200ml) 及氯化钠饱和溶液 （2X200ml) 洗涤， 将有机层用无水硫酸钠干燥过夜， 滤去干燥剂， 将滤液减压蒸干， 用 硅胶柱层析分离， 用二氯甲烷： 甲醇（20 : 1 ) 混合溶剂洗脱， 收集所需組分, 减压蒸干， 得 i _n l.2go 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 10.65 (s, 1H); 7.81 (s, 1H); 6.67-6.71(t, 2H); 6.58-6.60(d, 2H); 6.53-6.55(d, 2H); 6.5 (bs, 2H); 5.35 (s, 2H); 5.97-5.98(s, 4H); 4.1-4.0 (t, 2H); 3.7-3.6 ( t, 2H)。

实施例 12 9-[ [[双 - ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基)-磷酰氧基] -乙氧基] -甲 基] -鸟嘌呤 ( 1 ₁₂ ) 的制备

I 12 参照实施例 11 的方法， 用 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环代替 4-羟基苯并 [1 ,3] 二氧五环， 与 Π, 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 _{| 2} ,产 率 17%。 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 ) ： 10.65 (s, 1H); 7.81 (s, 1H);

6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.5 (bs, 2H); 6.49-6.47(d, 2H); 5.99(s, 4H); 5.35 (s, 2H); 4.1-4.0 (t, 2H); 3.7-3.6 ( t， 2H)。

实施例 13 ² -氨基 -6-曱氧基 -9-[ [[双 - ( (笨并 [1 ,3]二氧五环 -5-基)-氧基) - 氧基] -乙氧基] -甲基] -嘌呤 （In ) 的制备

1, 3 参照实施例 1 1 的方法，用 2-氨基- 6-甲氧基 -9- [(2-羟基乙氧基)-甲基] -嘌呤 代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应， 经类似方法处理及分离純化， 得到 ² -氨基 -6- 甲氧基 -9-[( ² -二氯磷酰基氧基 -乙氧基)-甲基] -嘌呤 （11 ₂ ) 。 用 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环与 11 ₂ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 1, 3 ,产率 20% 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 7.98 (s, 1H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.5 (bs, 2H); 6.49-6.47(d, 2H); 5.99(s, 4H); 5.35 s, 2H); 3.91(s, 3H); 4.1-4.0 (t, 2H); 3.7-3.6 ( t， 2H)。 实施例 14 5，- 双- [ ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基) -磷酰基 ]-2，，3，-二脱氧

-3，-硫代 -胞苷 ( 1 ₁₄ ) 的制备

参照实施例 11的方法，用拉米夫定代替阿昔洛韦与三氯氧� ��反应，经类 似方法处理及分离纯化， 得到拉米夫定二氯磷酸酯衍生物 π ₃ 。 用 5-羟基苯并 [1，3]二氧五环与 11 ₃ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 1,4,产率 12.0%。核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 ) : 7.71 (d, 1H);

7.30 (b， 2H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.49-6.47(d, 2H) ； 6.25 (t, 1H); 5.99(s, 4H); 5.74(d, 1H); 5.38 (t, 1H); 4.29 (m , 2H); 3.89 (m, 1H); 3.06 (m， 2H)。

实施例 15 9- [ (lS， 3R，4S) -4-羟基- 3- (双- ( ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧 基) - 磷酰基） -氧曱基) -2-亚曱基环戊基] -鸟嘌呤（1 ₁₅ ) 的制备 参照实施例 11的方法，用恩替卡韦代替阿昔洛韦与三氯氧� ��反应，经类 似方法处理及分离纯化， 得到恩替卡韦的二氯磷酸酯衍生物 π ₄ 。

用 5-羟基苯并 [1,3]二氧五环与 11 ₄ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 1,5,产率 23% 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 10.54(bs, 1H); 7.66(s, 1H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.49-6.47(d, 2H); 6.42 ( s, 2H ) ； 5.99(s, 4H); 5.36 (m, 1H); 5.10(m, 1H)； 4.87 (d, 1H ); 4.84(m, 1H ); 4.56 (m,lH); 4.23 (m, 1H); 3.53(m, 2H); 2.52 (m,lH); 2.22 (m, 1H); 2.04 (m， 1H)。

实施例 16 2-氨基 -6-曱氧基 -9- [(IS, 3R, 4S)- 4_羟基- 3_ (双- ( ((苯并 [1,3]二 氧五环 -5-基) -氧基) -磷酰基） -氧甲基)- 2-亚曱基环戊基] -嘌呤 (1 ₁₆ ) 的

I l6 参照实施例 1 的方法， 用 2-氨基 -6-甲氧基 - 9-[(lS,3R,4S)-4-羟基 -3-羟甲 基) -2-亚甲基环戊基]-嘌呤代替阿昔洛韦与三氯氧� ��反应， 经类似方法处理及 分离纯化，得到 2-氨基- 6-甲氧基 -9-[(lS,3R，4S)-4-羟基- 3- (二氯磷酰基氧甲基 )-2- 亚甲基环戊基] -嘌呤 (Π ₅ ) 。

用 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环与 Π ₅ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 1 ₁₅ ,产率 15%。 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 7.96(s, IH);

6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.49-6.47(d, 2H); 6.42 ( s, 2H ) ； 5.99(s, 4H);

5.36 (m, IH); 5.10(m, IH)； 4.87 (d, IH ); 4.84(m, IH ); 4.56 (m ,1H ); 4.23 (m,

IH); 3.94(s, 3H); 3.53(m, 2H); 2.52 ( m, lH ); 2.22 (m, IH ); 2.04 (m, 1H) ₀ 实施例 17 5'-0- [双- ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱 氧 -2，-α -氟 -2，-p-C-曱基尿苷 （1 ₁₇ ) 的制备

1 ₁₇ 参照实施例 11 的方法， 用 2-氨基 -6-甲氧基 -9-[(lS,3R，4S)-4-羟基 - ³ -羟甲 基) -2-亚甲基环戊基] -嘌呤代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应， 经类似方法处理及 分离纯化，得到 2-氨基 -6-甲氧基- 9-[(l S,3R，4S)- 4-羟基- 3- (二氯磷酰基氧甲基) _ ² - 亚甲基环戊基] -嘌呤 (Π ₆ ) 用 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环与 Π ₆ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 1 ₁₅ .产率 12.5%。核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 11.37 (s, IH); 7.82 ( d, IH ) ; 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s,2H); 6.49-6.47(d, 2H) ； 5.99(s, 4H); 5.95(d, IH); 5.51 (d， IH); 3.82-3.70 (m， 3H); 3.63-3.60(m, IH); 1.21 (d, 3H)。 实施例 18 5'- O- [双- ( (苯并 [1，3]二氡五环 -5-基) -氧基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱 氧 -2，-α -氟 -2，-P-C-曱基 -6-0-曱基鸟苷（1 ₁₈ ) 的制备

参照实施例 11的方法， 用 5 ' -0- 磷酰基 -β -D-2' -脱氧 -2' -a -氟 -2， - β -C-甲基 -6- 0-甲基鸟苷代替阿昔洛韦与三氯氧磷反应，经� ��似方法处理及分 离纯化， 得到 5' -0- (二氯磷酰基） -β - D-2， -脱氧 -2' -a -氟- 2' -β - C-甲 基 -6- O-甲基鸟苷 （11 ₇ ) 。 用 5-羟基苯并 [1，3]二氧五环与 11 ₇ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得 到目标化合物 1 ₁₅ ,产率 13.9%。 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 ):7.98(s, IH); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.52( s, 2H ) ; 6.49-6.47(d, 2H); 6.08-5.92(m, 6H); 3.91(s, 3H); 3.85-3.73 (m, 2H); 1.25(d, 3H)。

实施例 19 9-[ (R) -2-[( ( (苯并 [1 ,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-曱氧基羰基乙胺 基) - 膦酰基] -曱氧基]-丙基] -腺嘌呤 ( 1 ₁₉ ) 的制备

在 150 ml N-甲基吡咯烷酮中加入 29.2 g 9-[(R)-2- (膦酸基甲氧基） -丙 基]-腺嘌呤 （PMPA) , 27.6g 5-羟基苯并 [1，3]二氧五环， 加热至 85° (：， 加入 12 ml三乙胺。 搅拌下緩慢加入 26g DCC , 于 100° C加热搅拌过夜， 冷却后 加入 100ml水。 放置， 滤去固体， 合并洗滤液， 減压蒸干， 加入 100ml水， 用 25% 的氢氧化钠调节 pH至 1 ¹ .， 滤去固体， 水洗， 合并洗滤液， 用 30ml 乙酸乙酯萃取。 将水溶液用 3 ⁷ %盐酸调节 pH至 3.1， 放置析出固体。 滤取固 体， 加入 50ml 甲醇搅拌洗涤， 过滤， 真空干燥， 得 9-[(R)- 2-[( ( (苯并 [1，3]二 氧五环 -5-基)-氧基) -膦酰基] -甲氧基]-丙基] -腺嘌呤 (111 的白色固体 13.5g。

将上步产物 III, 1.42g加于 10ml乙腈中， 搅拌下滴加 1.3g氯化亚砜， 保 持温度 50° C以下。将反应混合物于 75° C加热至固体溶解，然后加热至 80° C， 蒸干， 得 9-[(R)-2-[( ((苯并 [1，3]二氧五环- 5-基)-氧基) -一氯-膦跣基] -甲氧基]-丙 基] -腺嘌呤 (IV , 直接用于下步反应。

将 用 10ml干燥的二氯甲烷溶解， 冷却至 -30° C ; 在 30min 内， 滴加 1.3g L-丙氨酸甲酯于 10ml二氯甲烷的溶液， 保持温度- 18° (：。 然后在 15min 内， 滴加 1.4ml三乙胺， 保持温度- 18° C至 -11° (：。 室温搅拌 2h， 用 10%的磷 酸二氢钠溶液洗 （3X10ml) 。 将有机层用无水 ^支酸钠干燥， 过滤后将滤液减 压蒸干， 将残留物用硅胶柱层析分离， 用丙酮洗脱， 收集所需組分， 减压蒸 干， 将残留物用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷:甲� � (95:5)混合溶剂洗脱，收集所 需洗脱组分， 得 I ₁₉ 0.41 go核磁共振氢谱 5 (ppm，DMSO-d6 ) : 8.08 ( s, 1H )；

8.07(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； .99(s, 2H); 4.41(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.59 ( s, H ) ； 3.45(m, 1H); 1.28(d, 3H); 1.25(d, 3H) 。 实施例 20 9-[ (R) -2-[( ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-乙氧基羰基乙胺 基) - 膦酰基] -曱氧基] -丙基] -腺嘌呤（1 ₂₀ ) 的制备

工20 参照实施例 19的方法， 用 L-丙氨酸乙酯代替 L-丙氨酸甲酯与 IV,反应， 将反应产物用 10%的磷酸二氢钠溶液洗 （3X10ml) 。 将有机层用无水硫酸钠 干燥， 过滤后将滤液减压蒸干， 将残留物用硅胶柱层析分离， 用丙酮洗脱， 收集所需组分， 减压蒸干， 得油状物 0.73g, 用硅胶柱层析分离,用二氯甲烷: 甲醇 (95:5)混合溶剂洗脱，收集所需洗脱组分， 得 I ₁₉ 0.41go 经类似方法处理及 分离纯化，得到目标化合物 I ₂ o.产率 11.3%。核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )：

8.08 ( s， 1H )； 8.07(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； 5.99(s, 2H); 4.41(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.62 ( m, 2H ) ； 3.45(m, 1H); 1.28(d, 3H); 1.25(d, 3H), U5(m，3H)。

实施例 21 9-[ (R) -2-[( ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基乙 胺基) - 膦酰基] -曱氧基] -丙基] -腺嘌呤（1 _{2 |} )及其异构体的制备

I ₂ 1 I ₂ |-b

# 2.84g III,加于 20ml乙腈中，搅拌下滴加 2.6g氯化亚砜，保持温度 50° C 以下。 将反应混合物于 75° C加热至固体溶解， 然后加热至 80° (：， 蒸干， 得 IV,， 直接用于下步反应。 将 1^用 20ml干燥的二氯曱烷溶解， 冷却至 -30° C; 在 30min内，滴加 3.1g L-丙氨酸甲酯于 20ml二氯甲烷的溶液，保持温度 -18° Co 然后在 15min内， 滴加 2.8ml三乙胺，保持温度- 18° C至 -11° C。 室温搅拌 2h， 用 10%的磷酸二氢钠溶液洗 （3X20ml) 。 将有机层用无水硫酸钠干燥， 过滤 后将滤液减压蒸干， 将残留物用硅胶柱层析分离， 用丙酮洗脱， 收集所需组 分， 减压蒸干， 将残留物用硅胶柱层析分离,用二氯甲烷:异丙� �� (95:5)混合溶 剂洗脱， 收集所需洗脱組分， 减压蒸干， 得 i 0.75g _o

将 Ι ₂ ι 用手性制备色谱 （Diacel' s Chiralpak AS) 分离， 用含 30%甲醇的 乙腈洗脱， 收集第一个主峰， 减压蒸干， 得 9-[(R)-2-[[ (R) -[[(S)-l- (异丙氧基 羰基) -乙基] -胺基]- (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基)-氧基) -膦酰基]-甲氧基]-丙基] -腺嘌 呤 (I ₂₁ -a) 0.32g; 收集第二个主峰， 减压蒸干， 得 9-[(R)-2-[[ (S) -[[(S)-l- (异 丙氧基羰基)-乙基] -胺基]- (苯并 [1，3]二氧五环- 5-基)-氧基) -膦酰基] -甲氧基] -丙 基]-腺嘌呤 ( I ₂₁ -b) 0.35go

I _2r a的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.08 ( s， 1H ) ； 8.07(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； 5.99(s, 2H); .4 l(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); ,3.79-3.77(d, 2H); 3.76 (m, 1H) ; 3.45(m, 1H); 1.27 ( d, 3H ) ； 1.20(d, 3H); 1.15(d, 6H)。

I ₂ b的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.08 ( s, 1H) ； 8.07(s, 1H); .33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； 5.99(s, 2H); .4 l(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.76 (m, 1H) ; 3.45(m, 1H); 1.26 ( d, 3H ) ； 1.22(d, 3H); 1.13(d, 6H)。 实施例 22 9-[(R) -2-[( ((苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基 -2- 曱基-丙胺基) - 膦酰基] -曱氧基]-丙基] -腺嘌呤（1 ₂₂ ) 的制备

参照实施例 19的方法，用 L-缬氨酸异丙酯代替 L-丙氨酸曱酯与 I 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₂₂ ,产率 18.2%。核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.08 ( s， 1H)； 8.07(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d,

1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； 5.99(s, 2H); 4.4 l(m, 1H); 3.92-3.90(m,

2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.76 (m, 1H) ； 3.45(m, 1H); 1.09-1.28(m, 16H)。 实施例 23 9-[(R)- 2- [(； ((苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基 -3- 甲基-丁胺基) - 膦酰基] -曱氧基] -丙基]-腺嘌呤（1 ₂₃ ) 的制备

参照实施例 19的方法，用 L-亮氨酸异丙酯代替 L-丙氨酸甲酯与 I V!反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₂₃ ,产率 12.8%。 核磁共振氢语 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.08 ( s， 1H )； 8.07(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； 5.99(s, 2H); 4.41(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.76 ( m, 1 H ) ； 3.45(m, 1H); 1.09-1.28(m, 18H)。

实施例 24 9-[ (R) -2-[( ( (苯并 [1,3]二氧五环斗基) -氧基 )小异丙氧基羰基乙 胺基) - 膦酰基] -曱氧基] -丙基]-腺嘌呤 （1 ₂₄ ) 的制备

参照实施例 19的方法， 用 4-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环代替 5-羟基苯并 [1，3] 二氧五环与 PMPA反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到 9-[(R)- 2-[( ( (苯并 [1,3]二氧五环 -4-基)-氧基) -膦酰基]-甲氧基] -丙基]-腺嘌呤 (11¾。 参照实施例 19的方法， 用 ΙΠ ₂ 代替 III,与氯化亚砜反应， 经类似方法处 理及分离纯化， 得到 9-[(R)-2-[( ( (苯并 [1 ,3]二氧五环 -4-基) -氧基) -一氯-膦酰基] - 曱氧基] -丙基]—腺嘌呤 (ιν 。 参照实施例 19的方法， 用 IV ₂ 代替 IV, , 与 L-丙氨酸异丙酯反应， 经类 似方法处理及分离纯化，得 1 ₂₄ ，产率 13.7%，核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )：

8.08 ( s， 1H )； 8.07(s, 1H); 7.33(b, 2H); 6.67-6.71(t, 1H); 6.58-6.60(d, 1H); 6.53-6.55(d, 1H); 5.97(s, 2H); 4.41(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.63 ( m， 1H )； 3.45(m, 1H); 1.12-1.28(m, 12H) 。 实施例 25 9-[ (R) -2-[( ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-环己氧基羰基乙 胺基) - 膦酰基] -曱氧基]-丙基] -腺嘌呤 （1 ₂₅ ) 的制备

参照实施例 19 的方法， 用 L-丙氨酸环己醇酯代替 L-丙氨酸甲酯与 IV, 反应， 经类似方法处理及分离純化， 得到目标化合物 1 ₂₅ ,产率 16.3%。 核磁共 振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )： 8.08 ( s， 1H ) ； 8,07(s， 1H); 7.33(b, 2H);

6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.49-6.47(d, 1H) ； 5.99(s, 2H); 4.4 l(m, 1H); 3.92-3.90(m, 2H); 3.79-3.77(d, 2H); 3.64 ( m, 1H )； 3.45(m, 1H); 1.58 (m, 4H), 1.18-1.39(m, 9H)。 26 ² -氨基 -6- ( ⁴ -甲氧基苯硫基） -9-[[[( ( (苯并 [1,3]二氧五环 _ ⁵ _基) - 氧基) -1-异丙基氧基羰基乙胺基) - 膦酰基] -曱氧基] -乙基] -嘌呤 ( 1 ₂₆ ) 的制备

参照实施例 19的方法， 用 2-氨基 -6- (4-甲氧基笨^ ^基） -9- [(膦酰基 -甲氧 基)-乙基] -嘌呤代替 PMPA, 与 5-羟基苯并 [1,3]二氧五环反应， 经类似方法处 理及分离纯化， 得到 2-氨基 -6- (4-甲氧基苯硫基) -9-[[[( ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基)-氧基) -膦酰基] -甲氧基] -乙基] -嘌呤 (ΠΙ ₃ )。

参照实施例 19的方法， 用 ΠΙ ₃ 代替 III,与氯化亚砜反应， 经类似方法处 理及分离純化， 得到 2-氨基 -6- (4-曱氧基苯硫基) -9-[[[( ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基)-氧基) -一氯膦酰基]-曱氧基]-乙基] -嘌呤 (IV ₃ )。

参照实施例 19的方法， 用 IV ₃ 代替 IV,， 与 L-丙氨酸异丙酯反应， 经类 似方法处理及分离纯化，得 1 ₂₆ ，产率 1U.4% ,核磁共振氢谙 δ (ppm, DMSO-d6 )：

7.89 ( s,lH ) ； 7.54(d,2H)； 7.32(b, 2H); 6.91(d,2H)； 6.77-6.75(d, IH); 6.68(s, IH); 6.49-6.47(d, IH); 5.99(s, 2H) ; 4.35-4.33(t, 2H); 3.93-3.91(t, 2H); 3.89(s, 3H); 3.80-3.78(d, 2H); 3.63 ( m, IH ) ; 3.45(m, IH); 1.12-1.28(m, 9H) 。 实施例 27 9-[[[( ( (苯并 [1 ,3]二氧五环 -5-基)-氧基) -1-异丙基氧基羰基乙胺 基) - 磷酰基] -氧基] -乙氧基] -曱基] - 鸟嘌呤 ( 1 ₂₇ ) 的制备

I 27 将 15.3g 三氯氧磷和 13.8g 5-羟基苯并二氧无环加于 250ml 无水乙醚溶液 中， 氩气保护下， 冷却到 - ⁷ 8° C , 滴加 13.4ml 三乙胺， 加完后在 -Ί ° C搅拌 30分钟， 然后室温搅拌过夜。 过滤， 将滤液减压蒸干， 得苯并 [1，3]二氧五环 -5- 基) -氧基-二氯氧磷备用。

将 2.6克 ( 0.01 mol) 苯并 [1，3]二氧五环- 5-基) -氧基 -二氯氧磷和 1.6克 ( 0.01 mol) L-丙氨酸异丙酯溶于 30 mL 无水二氯曱烷中， 冷却至 -78° (：。 搅拌下滴 加 2ml三乙胺溶于 20 mL无水二氯甲烷的溶液， 控制滴加速度以保持反应温 度 -78° (：。 加完后， 待反应温度緩升至室温， 继续搅拌 1小时。 减压蒸出溶剂， 在残留物中加入 30ml无水乙醚， 过滤。 将滤液减压蒸干， 得无色油状物， 即 为磷跣胺中间体 V ₃ , 直接用于下步反应。

将 0.22g阿昔洛韦溶于 50ml TH 然后加入 7ml吡啶， 通氮气，加入 l ml 1M特丁基氯化镁的 THF溶液， 搅拌 0.5h, 搅拌下加入 2ml 1M V ₃ 的 THF 溶液， 搅拌 2h。 于反应液中加入 50ml二氯甲烷， 100ml 饱和氯化铵水溶液 萃取后； 分出有机层， 水层用二氯甲烷萃取 （3X50ml) ，合并有机层， 用饱和 氯化钠水溶液洗， 然后用无水硫酸镁干燥过夜， 过滤， 将滤液减压蒸干， 将 残留物用硅胶柱层析分离， 用二氯甲烷： 甲醇： 三乙胺 （100:5:1 ) 混合溶剂 洗脱，收集所需组分，蒸干后得到目标化合物 I ₂₇ 0.15g。核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6 )： 10.65 (s， 1H); 7.81 (s, 1H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.5 (bs, 2H); 6.49-6.47(d, 1H); 5.99(s, 2H); 5.35 (s, 2H); 4.1-4.0 (t, 2H); 3.7-3.6 ( m, 3H); 3.45(m, 1H); 1.12-1.28(m, 9H) 。 实施例 28 9-[[[( ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-环己基氧基羰基乙胺 基) - 磷酰基] -氧基] -乙氧基] -曱基]- 鸟嘌呤（1 ₂₈ ) 的制备

128 参照实施例 27的方法， 用 L-丙氨酸环己醇酯代替 L-丙氨酸异丙酯， 与苯 并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基-二氯氧磷反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到 磷酰胺中间体 V ₄ , 直接用于下步反应。

用 V ₄ 代替 V ₃ 与阿昔洛韦反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标 化合物 1 ₂₈ ，产率 14.2%。核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 10.65 (s, 1H); 7.81 (s, 1H); 6.77-6.75(d, 1H); 6.68(s, 1H); 6.5 (bs, 2H); 6.49-6.47(d, 1H); 5.99(s, 2H); 5.35 (s, 2H); 4.1-4.0 (t, 2H); 3.7-3.6 ( m, 3H); 3.45(m, 1H); 1.55 (m， 4H), 1.15-1.37(m, 9H)。 实施例 29 2-氨基 -6-曱氧基 -9-[[[(( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基 )小异丙基 氧基羰基乙胺基) -磷酰基] -氧基] -乙氧基] -曱基] -嘌呤（1 ₂₉ )的制 备

参照实施例 27的方法， 用 2-氨基 -6-甲氧基 -9-[(2-羟基乙氧基)-甲基] -嘌呤 代替阿昔洛韦与 V ₃ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₂₉ , 产率 16.9%。核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 7.98 (s, 1H); 6.77-6.75(d, 1H);

6.68(s, 1H); 6.5 (bs, 2H); 6.49-6.47(d, 1H); 5.99(s, 2H); 5.35 (s, 2H); 3.91(s, 3 H); 4.1-4.0 (t, 2H); 3.7-3.6 ( m, 3H); 3.45(m， 1H); 1.12-1.28(m, 9H) 。 实施例 30 5，- [ ( ( ( (苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-乙氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱氧.2，-α -氟 -2，-β- 甲基尿苷 ( 1 ₃₀ )的制备

参照实施例 27的方法，用 L-丙氨酸乙酯代替 L-丙氨酸异丙商 二氧五环 -5-基)-氧基-二氯氧磷反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到磷酰 胺中间 V ₅ ， 直接用于下步反应。 参照实施例 27 的方法， 用 V ₅ 与 β - D- 2' -脱氧 -2， -a -氟 -2' -β -C-甲基 尿苷反应， 经类似方法处理及分离純化， 得到目标化合物 I _3Q ， 产率 13.5%。 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 11.37 (s, IH); 7.82 ( d, IH) ； 6.77-6.75(d,

IH); 6.68(s, IH); 6.49-6.47(d, IH) ； 5.99(s, 2H); 5.95(d, IH); 5.51 (d, IH); 3.82-3.70 (m, 3H); 3.63-3.60(m, 3H); 3.45(m, IH); 1.12-1.28(m, 9H) 。 实施例 31 5'- [(( ((苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱氧 -2，-α -氟 -2，-p-C-甲基尿苷（ 1 ₃₁ )及其异

将 4.5g β - D-2' -脱氧 -2， -a —氟- 2' -β -C-甲基尿苷 （济南中科一通化工 有限公司， 纯度 98%) 溶于 80mlTHF, 然后加入 9 _g N-甲基咪唑， 加入 10.5g V ₃ 溶于 50mlTHF的溶液。 室温搅拌过夜， 过滤， 将滤液减压蒸干。 将残留 物用硅胶柱层析分离， 用含 2%异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需组分， 减 压蒸干。 将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色傳 柱为 Diacel， s Chiralpak AS ,流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液，流速 8ml/min, 收集第一个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₁ -a0.28g; 收集第二个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₁ -b 0.23g 。 I ₃ .-a 的核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 1 1.37 (s, IH); 7.82 ( d, IH ) ； .77-6.75(d, IH); 6.68(s, IH); 6.49-6.47(d, IH) ； 5.99(s, 2H); 5.95(d, IH); .51 (d, IH); 3.82-3.70 (m, 3H); 3.63-3.60(m, 2H); 3.45(m, IH); 1.25 ( d, 3H )； 1.20(d, 3H); 1.15(d, 6H)。

I ₃₁ -b的核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 )： 1 1.37 (s, IH); 7.82 ( d, IH ) ； .77-6.75(d, IH); 6.68(s, IH); 6.49-6.47(d, IH) ； 5.99(s, 2H); 5.95(d, IH); .51 (d, IH); 3.82-3.70 (m, 3H); 3.63-3.60(m, 2H); 3.45(m, IH); 1.24 ( d, 3H )； 1.21(d, 3H); 1.14(d, 6H)。

实施例 32 5 '- [ ( ( ( (苯并 [l , ³ ]二氧五环 _ ⁵ _基) -氧基 )-1-环己基氧基羰基乙胺 基) - 磷酰基] - β -D-2'-脱氧 -2，-α -氟— 2，-P-C-曱基尿苷（ 1 ₃₂ ) 的制备

Ϊ32

参照实施例 27 的方法， 用 2-氨基 -6-甲氧基 -9-[(lS,3R,4S)-4-羟基- 3-羟甲 基) -2-亚甲基环戊基]-嘌呤与 V ₄ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标 化合物 1 ₃₂ ， 产率 9.8%。 核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6 )： 1 1.37 (s， 1H); 7.82

( d, 1H ) ； 6.77-6.75(d, IH); 6.68(s, IH); 6.49-6.47(d, IH) ； 5.99(s, 2H); 5.95(d, IH); 5.51 (d, IH); 3.82-3.70 (m, 3H); 3.63-3.60(m, 2H); 3.45(m, IH); 1.55 (m, 4H)， 1.15-1.37(m, 12H)。 买施例 33 5'- [ (( ((苯并 [1,3]二氧五环 _ ⁵ _基) -氧基 )-1-乙氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱氧 -2，-α -氟 -2，-β- 曱基 -6-0-曱基鸟苦

(1 ₃₃ ) 的制备

参照实施例 27的方法， 用 V ₅ 与 β -D-2 -脱氧 -2 -a -氟- 2 -β -C-甲基

-6-0-甲基鸟苷反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₃₃ , 产率

24.2%。核磁共振氢谱（ppm， DMS0-d6 ):7.98(s， IH); 6.77-6.75(d, IH); 6.68(s,

IH); 6.52 ( s, 2H ) ; 6.49-6.47(d, IH); 6.08-5.92(m, 4H); 3.91(s, 3H); 3.85-3.73 (m, 2H); 3.62 ( m， 2H ) ; 3.45(m, IH); 1.25(d, 3H); 1.21(d, 3H), 1.15(m, 3H)。 实施例 34 5'- [( (( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱氧 -2，-α -氟 -2'-β- 甲基 -6-0-甲基鸟苷 (1 ₃₄ )及其异构体的制备

将 6.0g β -Ό-2' -脱氧 -2' -a -氟 -2' - β -C-甲基- 6- Ο-甲基鸟苷 （济南中 通化工有限公司，纯度 98%) 溶于 80ml THF，然后加入 9gN-甲基咪唑， 加入 10.5 _§ ¥ ₃ 溶于 50ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压 蒸干。 将残留物用硅胶柱层析分离， 用含 2¼异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需組 分， 减压蒸干。 将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色谱柱为 Diacel' s Chiralpak AS , 流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液， 流速

8ml/min, 收集第一个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₄ -a 0.31g; 收集第二个主峰， 减 压蒸干， 得 I ₃₄ -b 0.25g。

I ₃₄ -a的核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6 ): 7.98(s, 1H); 6.77-6.75(d, 1H);

6.68(s, 1H); 6.52 ( s, 2H ) ； 6.49-6.47(d, 1H); 6.08-5.92(m, 4H); 3.91(s， 3H); 3.85-3.73 (m, 3H); 3.45(m, 1H); 1.25 (d, 3H); 1.22 (d，3H); 1.14(d, 6H)。

I ₃₄ -b的核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6 ): 7.98(s, 1H); 6.77-6.75(d, 1H);

6.68(s, 1H); 6.52 ( s, 2H ) ； 6.49-6.47(d, 1H); 6.08-5.92(m, 4H); 3.91(s, 3H); 3.85-3.73 (m, 3H); 3.45(m, 1H); 1.24 (d, 3H); 1.21 (d,3H); 1.13(d, 6H)。 实施例 35 5，- [ ( (( (苯并 [1 ,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1 -环己氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱氧 -2，-α -氟 -2，-P-C-甲基 -6-0-甲基鸟苷

( 1 ₃₅ ) 的制备

参照实施例 27的方法， 用 5 ' -0- 磷酰基 -β -Ό-2 ' -脱氧 -2 ' -a -氟 -2， - β -C-甲基 -6-0-甲基乌苷与 V ₄ 反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到目标 化合物 I ₃₅ , 产率 13.0%。 核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 ): 7.98(s， IH);

6.77-6.75(d, IH); 6.68(s, IH); 6.52 ( s, 2H )； 6.49-6.47(d, IH); 6.08-5.92(m _: 4H); 3.91(s, 3H); 3.85-3.73 (m, 3H); 3.45(m， IH); 1.55 (m， 4H); 1.15-1.37(m _; 12H 实施例 36 5'- [( (( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基乙胺基) - 磷酰基 ]-2，,3，-二脱氧 -3，-硫代 -胞苷 （1 ₃₆ ) 的制备

1 ₃₆

参照实施例 27的方法， 用拉米夫定代替阿昔洛韦与 V ₃ 反应， 经类似方 法处理及分离纯化， 得到目标化合物 1 ₃₆ .核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )：

7.68 (d， IH ); 7.26 (s, 2H)； 6.77-6.75(d, IH); 6.68(s,lH); 6.49-6.47(d, IH); 6.23 (t, IH); 6.11 (m, IH); 5.99(s, 2H); 5.72(d ,1H); 5.35 (t ,1 H); 4.27 (m, 2H); 3.88 (m， IH); 3.61 (m ,1H); 3.42 ( q， IH); 3.05 (m， 2H); 1.21 (d, 3H); 1.12(d, 6H)。 实施例 37 5，- [ ( ( ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-甲氧基羰基乙胺基) - 磷酰基 ]-2，,3，-二脱氧 -3，-硫代 -胞苷（1 ₃₇ ) 的制备

I ₃ 7 参照实施例 27的方法， 用 L-丙氨酸甲酯代替 L-丙氨酸异丙酯， 与苯并 [1,3]二氧五环 -5-基)-氧基-二氯氧磷反应， 经类似方法处理及分离纯化， 得到 碑跣胺中间体 V ₆ ， 直接用于下步反应。

参照实施例 27的方法， 用 V ₆ 与拉米夫定反应， 经类似方法处理及分离 纯化， 得到目标化合物 Ι ₃₇ , 产率 21.7%。 核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 )：

7.68 (d, IH ); 7.26 (s， 2H)； 6.77-6.75(d, IH); 6.68(s,lH); 6.49-6.47(d, IH); 6.23 (t, IH); 6.11 (m, IH); 5.99(s, 2H); 5.72(d ,1H); 5.35 (t，1 H); 4.27 (m， 2H); 3.88 (m, IH); 3.58 (s ,3H); 3.42 ( q , IH); 3.05 (m, 2H); 1.21 (d, 3H)。

实施例 38 9- [ (IS, 3R， 4S) - 4 -羟基 -3-[ ( ((苯并 [1，3]二氧五环 -5-基) -氧基)- 1- 异丙氧基羰基乙胺基-磷酰基） -氣曱基] -2-亚甲基环戊基] -鸟嘌 呤 （1 ₃₈ ) 及其异构体的制备

将 8.25g 恩替卡韦溶于 80ml THF , 然后加入 9g N-甲基咪唑， 加入 10.5g V ₃ 溶于 50ml THF的溶液。 室温搅拌过夜， 过滤， 将滤液减压蒸干。 将残留 物用硅胶柱层析分离， 用含 2%异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需组分， 减 压蒸干。 将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色谱 柱为 Diacel ' s Chiralpak AS，流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液，流速 8ml/min， 收集第一个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₉ -a 0.28g; 收集第二个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₉ -b 0.22g 。

I ₃₉ -a的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d0 ,400MHz)： 10.51 (bs, IH); 7.63(s, IH); 6.77-6.75(d, IH)； 6.68(s，lH)； 6.49-6.47(d, IH)； 6.09(m, IH); 6.45 (s， 2H)； 5.99(s, 2H); 5.32 (m, IH); 5.06(m, IH)； 4.89 (d, IH ); 4.85-4.83 (m, 2H )，· 4.52 (m， IH ); 4.40 (m, IH); 4.23 (m, IH); 3.51 (m, 2H); 2.52 ( m, IH ); 2.22 (m， IH ); 2.04 (m, IH); 1.19 (d, 3H); 1.16 (d，6H)。

I ₃₉ -b的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMS〇-d6 ,400MHz)： 10.54(bs, IH); 7.67(s， IH); 6.77-6.75(d, IH)； 6.68(s,lH)； 6.49- 6.47 (d, IH)； 6.45 (s， 2H)； 5.98-6.03 (m, 3H); 5.80 (m, IH); 5.32 (m, IH); 5.07 (m, IH)； 4.87-4.83 ( m, 3H ); 4.58 (m，1H ); 4.35 (m, IH); 4.23 (m, IH); 3.51 (m, 2H); 2.50 ( m,lH )； 2.21 (m, IH ); 2.03 (m, IH); 1.21 (d， 3H); 1.13(d, 6H)。

实施例 39 9- [ (IS, 3R， 4S) - 4-羟基 _3- [ ( ((苯升 [1,3]二氧五环 -4-基) -氧基) - 1- 异丙氧基羰基乙胺基-磷酰基） -氧曱基] -2-亚曱基环戊基] -鸟嘌 工39 I ₃₉ -a I ₃₉ -b 将 15.3g 三氯氧磷和 13.8g 4-羟基苯并二氧无环加于 250ml 无水乙醚溶液 中， 氩气保护下， 冷却到 -78° ：， 滴加 13.4ml 三乙胺， 加完后在 -78° C搅拌 30分钟， 然后室温搅拌过夜。 过滤， 将滤液减压蒸干， 得苯并 [1，3]二氧五环 -4- 基)—氧基—二氯氧磷备用。

# 2.6克 (0.01 mol) 苯并 [1,3]二氧五环- 4-基) -氧基 -二氯氧磷和 1.6克 (0.01 mol) L-丙氨酸异丙酯溶于 30 mL 无水二氯甲烷中， 冷却至 -78° (：。 搅拌下滴 加 2ml三乙胺溶于 20 mL无水二氯甲烷的溶液， 控制滴加速度以保持反应温 度 -78 ：。 加完后， 待反应温度緩升至室温， 继续搅拌 1 小时。 减压蒸出溶剂， 在残留物中加入 30ml无水乙醚， 过滤。 将滤液减压蒸干， 得无色油状物， 即 为磷酰胺中间体 V ₇ ， 直接用于下步反应。

将 8.25g 恩替卡韦溶于 80ml THF， 然后加入 9g N-甲基咪唑， 加入 10.5g V ₇ 溶于 50ml THF的溶液。 室温搅拌过夜 过滤， 将滤液减压蒸干。 将残留 物用硅胶柱层析分离， 用含 2%异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需组分， 减 压蒸干。 将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色谱 柱为 Diacel ' s Chiralpak AS，流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液，流速 8ml/min, 收集第一个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₉ -a 0.27g; 收集第二个主峰， 减压蒸干， 得 I ₃₉ -b 0.20g 。

I ₃₉ -a的核磁共振氢谱 δ ( pm, DMSO-d6 ,400MHz)： 10.51 (bs, IH); 7.63(s, IH); 6.67-6.71 (t, lH) ; 6.58-6.60(d, IH) ; 6.53-6.55(d, lH) ; 6.09(m, IH); 6.45 (s, 2H)； 5.99(s, 2H); 5.32 (m, IH); 5.06(m, IH)； 4.89 (d, IH ); 4.85-4.83 (m, 2H ); 4.52 (m, IH ); 4.40 (m, IH); 4.23 (m， IH); 3.51 (m, 2H); 2.52 ( m, IH ); 2.22 (m, IH ); 2.04 (m, IH); 1.19 (d, 3H); 1.16 (d , 6H)。 I ₃₉ -b的核磁共振氢谱 δ (ppm, DMSO-d6 ,400MHz)： 10.54(bs, IH); 7.67 (s, IH); 6.67-6.71 (t, IH); 6.58- 6.60(d, IH) ; 6.53-6.55(d, IH); 6.45 (s, 2H) ； 5.98-6.03 (m, 3H); 5.80 (m, IH); 5.32 (m, IH); 5.07(m, IH)； 4.87-4.83 ( m, 3H ); 4.58

(m ,1H ); 4.35 (m, IH); 4.23 (m, IH); 3.51 (m， 2H); 2.50 (m,lH) ; 2.21 (m, IH ); 2.03 (m, IH); 1.21 (d, 3H); 1.13(d, 6H)。

实施例 40 5'- [( (( (苯并 [1,3]二氧五环 -4-基) -氧基 )-1-异丙氧基羰基乙胺基) - 磷酰基] - β -D-2，-脱氧 -2，-α -氟 -2，-P-C-曱基 -6-0-曱基鸟苷 (1 ₄₀ )及其异构体的制备

将 6.0g β -O-2' -脱氧 -2' -a -氟- 2， - β -C-甲基 -6-0-甲基乌苷 (济南中 科一通化工有限公司，纯度 98%) 溶于 80ml THF，然后加入 9g N-甲基咪唑， 加入 10.5gV ₇ 溶于 50ml THF的溶液。室温搅拌过夜，过滤，将滤液减压 蒸干。 将残留物用硅胶柱层析分离， 用含 2¾异丙醇的二氯甲烷洗脱， 收集所需组 分， 减压蒸干。将残留物用含 20%异丙醇的乙腈溶解， 用手性制备色谱分离， 色谱柱为 Diacel' s Chiralpak AS, 流动相为含 20%异丙醇的乙腈溶液， 流速 8ml/min, 收集第一个主峰， 减压蒸干， 得 I ₄₍₎ -a 0.22g; 收集第二个主峰， 减 压蒸干， 得 I ₄₀ -b 0.24g。

I ₄₀ -a的核磁共振氢谱 (ppm, DMSO-d6 ): 7.98(s, IH); 6.67-6.71(t, IH); 6.58-6.60(d, IH); 6.53-6.55(d, IH); 6.52 ( s, 2H ) ; 6.08-5.92(m, 4H); 3.91(s, 3H); 3.85-3.73 (m， 3H); 3.45(m, IH); 1.25 (d, 3H); 1.22 (d,3H); 1.14(d, 6H)。

I ₄₀ -b 的核磁共振氢谱 （ppm, DMSO-d6 ): 7.98(s， IH); 6.67-6.71(t, IH); 6.58-6.60(d, IH); 6.52-6.55(m, 3H); 6.08-5.92(m, 4H); 3.91(s, 3H); 3.85-3.73 (m, 3H); 3.45(m, IH); 1.25 (d, 3H); 1.20 (d,3H); 1.13(d, 6H)。 实施例 41 9-[[[( ( (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -氧基 )-1-曱氧基羰基乙胺基) -磷 酰基] -氧基] -乙氧基] -曱基] - 鸟嘌呤（1 ₄₁ ) 的制备

参照实施例 27的方法， 用 V ₆ 代替 V ₃ 与阿昔洛韦反应， 经类似方法处理 及分离純化，得到目标化合物 1 ₄₁ ,产率 23.3%。 7.83 (s, 1H) ; 6.77-6.75(d, 1H) ; 6.68(s, 1H)； 6.5 (bs, 2H)； 6.49-6.47(4 1H)； 6.00-5.93 (m， 3H)； 5.36 (s， 2H)； 4.13-4.05 (m, 2H)； 3.85-3.80 ( m, 1H)； 3.72-3.63(m, 2H); 3.59(s, 3H); 1.23-1.19(m, 3H) 。

实施例 42 [ ( 3,5-二曱基 -4- ( 4，-羟基-3，-异丙基苄基）苯氧基） -曱基] -膦酸

-(苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -酯 -(1-异丙氧基羰基乙胺基)-膦酰胺 ( 1 ₄₂ ) 的制备

参照实施例 1 ⁹ 的方法， 用[ ( ³ , ⁵ -二甲基 _ ⁴ _ (4' -羟基 - -异丙基苄基） 苯氧基） -甲基] -膦酸代替 ΡΜΡΑ , 与 5-羟基苯并 [1,3]二氧五环反应， 经类似 方法处理及分离纯化， 得到 [ (3，5-二甲基 -4- {Α' -羟基 -3' -异丙基苄基） 苯 氧基） -甲基]-膦酸- (苯并 [1,3]二氧五环 -5-基) -单酯 (ΠΙ ₄ )。 参照实施例 19的方法， 用 ΙΠ ₄ 代替 III,与氯化亚砜反应， 经类似方法处 理及分离純化， 得到 [ ( ³ ， ⁵ -二甲基 - ⁴ - (4' -羟基 - ³ ' -异丙基苄基） 苯氧基） - 甲基]-膦酸- (苯并 [1 ,3]二氧五环 -5-基)-单酯单膦酰氯 (IV ₄ )。 参照实施例 19的方法， 用 IV ₄ 代替 IV , 与 L-丙氨酸异丙酯反应， 经类 似方法处理及分离纯化，得到目标化合物 1 ₄₂ ，产率 15.5%。核磁共振氢谱 δ (ppm,

DMSO-d6 )： 8.99(s， 1H)； 6.77-6.75(d, IH); 6.71 ( s， IH ) ; 6.68-6.53( m,7H)；

6.49-6.47(d, IH); 5.99(s, 2H); 4.03(d, 2H); 3.77(s, 2H); 3.63 ( m, IH ) ; 3.45(m, IH); 3.02 ( m, IH ) ; 2.15(s, 6H); 1.05-1.23(m, 15H) 。 实施例 43 [5-[2-氨基 -5-( 2-曱基丙基） -噻唑 -4-基] -呋喃 -2-基] -膦酸- (苯并 [1,3]

二氧五环 -5-基) -酯 -(1-异丙氧基羰基乙胺基) -膦酰胺（1 ₄₃ ) 的制备

参照实施例 19的方法， 用 [5-[2-氨基 -5- (2-甲基丙基） -噻唑—4-基] -呋喃 -2- 基] -膦酸 PMPA， 与 5-羟基苯并 [1 ,3]二氧五环反应， 经类似方法处理及分离纯 化， 得到 [5-[2-氨基 -5- (2-甲基丙基） -噻唑 -4-基]-呋喃 -2-基]-膦酸- (苯并 [1,3]二 氧五环 - 5-基)-单酯 (ΙΠ ₅ )。 参照实施例 19的方法， 用 ΙΠ ₅ 代替 III,与氯化亚砜反应， 经类似方法处 理及分离纯化，得到 [5- [2-氨基- 5- (2-甲基丙基） -噻唑 -4-基] -呋喃 -2-基]-膦酸- (苯 并 [1 ,3]二氧五环 -5-基) -单酯单膦酰氯 (IV ₅ )。 参照实施例 19的方法， 用 IV ₅ 代替 IV _{1 5} 与 L-丙氨酸异丙酯反应， 经类 似方法处理及分离纯化，得到目标化合物 1 ₄₃ ,产率 11%。 核磁共振氢谱 δ (ρρπι，

DMSO-d6 ) ： 7.32(b, 2H); 6.77-6.75(d, 2H); 6.68(s, 2H); 6.50 ( d, 1H ) ；

6.49-6.47(d, 2H); 6.45(d, 1H ); 5.99(s, 4H); 3.63 ( m, 1H ) ； 3.45(m, 1H); 2.1 l(d, 2H); 1.43(m， 1H)； 0.98-1.24(m, 15H)。 实施例 44 体外抗 HBV活性筛选

Hep G 2.2.15细胞接种于％孔板中， 细胞数 3.5 x 10 ⁴ 个培养， 置 C0 ₂ 培 养箱中孵育至细胞密度达到 80% , 弃去培养液， 加入含不同浓度待测药物的 新培养液， 设置 3个平行孔； 每隔 2天更换培养液。 在给药后第 10天， 取 100 μ ΐ上清， 通过定量 PCR的方法， 测定 HBV DNA的含量， 计算 IC ₅ 。值。 结果 见表 1。 体外抗 HBV活性筛选结果

实施例 45 体外细胞毒性评价

Hep G 2.2.15细胞接种于％孔板中， 细胞数 5.5 x 10 ⁴ 个， 继续培养 3天， 加入含不同浓度药物的新培养液， 设置 3个平行孔； 在给药后第 3天， 加入 M T至 ⁷ .5mg/ml， 继续培养 2小时， 弃去上清， 加入含 10%吐温 X— 100异 丙醇， 120μ1/孔, 再加入 0.4μ1/孔， 用酶联仪测定 540nm处的吸收， 计算 50% CC ₅ 。值。 结果见表 2。

表 2 细胞毒性评价结果

I4 >200 I31 〉200

Is >200 I32 >200

I ₆ 〉200 I33 >200

Iy >200 I34 >200

Is >200 I ₃₅ >200

I ₉ >200 l36 〉200

I10 >200 l37 193

In 〉200 I ₃₈ -a 139

I12 >200 I ₃₈ -b 〉200

Il3 〉200 I39 182

1)4 〉200 I40 >200

Il 5 〉200 I41 >200

Il6 >200 I42 >200

Il 7 〉200 I43 〉200

实施例 46 肝靶向性评价 采用高效液相色谱-串联质谱法 （HPLC-MS/MS) 测定目标化合物小鼠灌 胃给药后不同时间点血液和肝组织中的活性药 物 (游离膦酸或游离磷酸)浓度 / 含量,计算肝 /血药物浓度比值，比较肝靶向性。

仪器： 美国 Finnigan 公司 TSQ Quantum 型液相色谱 -质谱联用仪 (LC/MS/MS) , 由 Finnigan Surveyor LC泵、 Surveyor AS 自动进样器、 电喷雾离 子化电离源 (ESI)及三级串联质谱組成。 控制软件为 Xcalibur 1.4 , 质谱数据分 析采用 Lcquan 2.0数据处理系统。 色谱柱为 Discovery ODS 柱 （250 mm X 4.6 mm , 5 μ m ) , CI 8 保护柱 （4 mm X 3.0 mm ) , 流动相为甲醇-水 -甲酸 ( 10-30:90- 70:0.5, V/V/V) , 流速 OJ ml/min ; 进样量 20 μ L; 柱温为室温。 动物实验

Balb/C小鼠， 雄性， 禁食 16 h , 随机分为 3组， 每組 3只， 分别灌胃给 予分别灌胃给予磷霉素 (200mg/ kg)或等摩尔剂量的目标化合物的羧甲基纤维 素钠的悬浮液， 分别于给药后 1 小时和 6 小时采血离心取血清， 同时取肝组 织制备匀浆， 离心取上清； 测定血液和肝组织中的活性药物 (游离膦酸或游离 磷酸)浓度 /含量，计算肝 /血药物浓度比值。 结果见表 3。

表 3 肝靶向性评价结果

实施例 47 抗 CC 1 ₄ 所致小鼠肝损伤作用的评价

昆明种小鼠 (20g)， 随机分组 (每组 8只）。通过口服给予 0.2mmol的待测化 合物； 给药 l h后， 皮下注射 0.1% CC1 ₄ 的花生油溶液 (lO mL/k^) , 制备肝损 伤模型； 注射生理盐水作为正常对照组。 造模后 12 小时后， 再次口服给予 0.2mmol的待测化合物。第二次给药后 24小时，采血取血清标本， 测定 ALT, ASTo 结果见表 4。

表 4 抗 CC I ₄ 中毒所致小鼠肝损伤的作用

实施例 48 抗 D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤作用的评价

昆明种小鼠 (20g), 随机分组 (每组 8只）。通过口服给予 0.2mmol的待测化 合物； 给药 2 h后， 按 750 mg/kg的剂量腹腔注射给予 D-氨基半乳糖制备肝 损伤模型， 皮下注射生理盐水作为正常对照组。 造模 12 h后， 再次口服给予 0.2mmol的待测化合物。第二次给药后 24小时，采血取血清标本， 测定 ALT， AST。 结果见表 5。

表 5 抗 D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤的作用

实施例 49 体内抗乙肝病毒作用的评价

将垂直传播感染、 DHBV DNA检测阳性的麻鸭随机分组， 每組 5只。 分别 灌胃给予水及不同剂量的待测化合物， 每天一次， 给药 14天。 分别在给药前、 给药 14天及停药后第 7天时静脉采血， 采用外标准 TaqMan实时荧光 PCR法测定 血清 DHBV DNA含量， 与溶剂组比较， 讨算抑制率。 结果见表 6:

表 6 抗 D-氨基半乳糖所致小鼠肝损伤的作用

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