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Title:
PI3K AND/OR MTOR INHIBITOR
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2014/040373
Kind Code:
A1
Abstract:
Provided are a class of compounds of general formula (I), pharmaceutically acceptable salts, stereoisomers and solvates thereof, as well as a preparation method of the compounds and pharmaceutical compositions containing the compounds of general formula (I). Also provided are the uses of the compounds in the preparation of drugs for treating and/or preventing proliferative diseases.

Inventors:
WU FRANK (CN)
SHU CHUTIAN (CN)
Application Number:
PCT/CN2013/001061
Publication Date:
March 20, 2014
Filing Date:
September 12, 2013
Export Citation:
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Assignee:
XUANZHU PHARMA CO LTD (CN)
International Classes:
C07D471/14; A61K31/519; A61K31/5377; A61P13/08; A61P17/00; A61P35/00; C07D519/00
Domestic Patent References:
WO2013071698A12013-05-23
Foreign References:
CN102256966A2011-11-23
CN102399220A2012-04-04
CN102399218A2012-04-04
Other References:
"Discovery of 9-(6-Aminopyridin- 3-yl)-1-(3-(trifluoromethyl) phenyl)benzo[h][1,6]naphthyridin-2(1H)-one (Torin2) as a potent, selective, and orally available mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor for treatment of cancer, discloses a compound named as Torin2 and reports the study result abou", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, vol. 54, no. 5, 2011, pages 1473 - 1480
Attorney, Agent or Firm:
CHINA PATENT AGENT (H.K.) LTD (CN)
中国专利代理(香港)有限公司 (CN)
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Claims:
权 利 要 求

1. 通式(I )所示的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化物:

X、 Y分别独立地为 0或 S;

A和 B分别独立地为 CR6, R6为氢、 卤素原子、 氰基、 羟基、 羧 基 、 -(CH2)nNR8aR8b 、 -(CH2)nC(0)R9 、 -(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b、 -(CH2)nOC(0)R9、 -(CH2)nC(0)(CH2)nOR9、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9 , 或任 选被 1 ~ 3个选自 素原子、 羟基、 羧基中的取代基取代的 C1-6烷基、

Cl-6坑 基;

R1为氢, 或任选被 1 - 5个 R7a取代的 C1-6烷基、 C2-8烯基、 C2-8 炔基、 C 8环烷基、 6 ~ 14元芳基、 5 ~ 14元杂芳基、 3 - 14元杂环基、 7 ~ 12元螺环基、 7 ~ 12元桥环基;

R2为氢, 或任选被 1 ~ 5 个 R7b取代的 C1-6烷基、 C2-8烯基、 C2_8 炔基、 C38环烷基、 6 ~ 14元芳基、 5 - 14元杂芳基、 3 ~ 14元杂环基、 7 ~ 12元螺环基、 7 ~ 12元桥环基;

R3为氢、 羧基, 或任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 羧基中的 取代基取代的 d.6烷基;

R4为氢, 8环烷基, 或任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 羧 基中的取代基取代的 C1-6烷基;

R7a、 R7b分别独立地为

( 1 ) 卤素原子、 氰基、 羟基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b 、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9

-(CH2)nC(0)NR8aR8b 、 -(CH2)nOC(0)R9 、 -(CH2)nC(0)(CH2)nOR9 、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9,

( 2 )任选被 1 ~ 3 个选自 素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 <:1-6烷基、 c2-8烯基、 c2-8炔基、 c1 -6烷氧基, 或

( 3 )任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 ^6 烷基、 C2-8烯基、 C2-8炔基、 C1-6烷氧基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b 、 -(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b 、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9、 -(CH2)nOC(0)R9、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9 中的取 代基取代的 C3-8环烷基、 6 ~ 14元芳基、 5 ~ 14元杂芳基、 3 ~ 14元杂 环基;

R8a、 R8b分别独立地为氢, 或任选被〗 - 3个羟基、 卤素原子、 氰 基、 羧基、 -(CH2)nNR8aR8b、 氨基磺酰基、 氨基甲酰基、 磺酰胺基取代 的 C1-6烷基、 C3-8环烷基、 6 ~ 14元芳基、 5 ~ 14元杂芳基、 3 ~ 14元 杂环基;

R9为氢, 或任选被 1 - 3 个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 羧基、 -(CH2)nNR8aR8b、氨基磺酰基、氨基曱酰基中的取代基取代的 C1-6烷基、

C] -6坑氣基;

m为 0、 1或 2;

n为 0 ~ 4。

2. 如权利要求 1 所迷的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异 构体、 溶剂化物:

A 和 B 分别独立地为 CR6 , R6为氢、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b, 或任选被 1 ~ 3个选自卤 素原子、 羟基、 羧基中的取代基取代的 6烷基、 d_6烷氧基;

R1为任选被 1 ~ 3个 R7a取代的 C3-8环烷基、 6 - 10元芳基、 5 ~ 10 元杂芳基、 5 - 10元杂环基;

R2为任选被 1 ~ 3个 R7b取代的 C3-8环烷基、 6 ~ 10元芳基、 5 - 10 元杂芳基、 5 ~ 10元杂环基;

R3、 R4分别独立地为氢, 或任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 羧基中的取代基取代的 烷基;

R7a、 R7b分别独立地为

( 1 ) 卤素原子、 氰基、 羟基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b 、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9 、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b 、 -(CH2)nOC(0)R9 、 -(CH2)nC(0)(CH2)nOR9 、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9, (2)任选被 1 ~3 个选自 素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的(^.6烷基、 烷氧基, 或

(3)任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C1-6 烷基、 C1-6烷氧基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b、 -(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b 、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9 、 -(CH2)nOC(0)R9、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9中的取代基取代的 C3-8环烷基、 6 ~ 10元芳基、 5 ~ 10元杂芳基、 5 - 10元杂环基;

R8a、 R8b分别独立地为氢, 或任选被〗 - 3个羟基、 卤素原子、 氰 基、 羧基、 氨基磺酰基、 氨基甲酰基、 磺酰胺基取代的 d_6烷基;

R9为氢, 或任选被 1 ~3 个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 羧基、

-NR8aR8b、 氨基磺醜基、 氨基甲酰基中的取代基取代的 C1-6烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 4。

3. 如权利要求 2所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异 构体、 溶剂化物:

X、 Y分别为 0;

A和 B分别为 CH;

R1为任选被 1 ~ 3个 R7a取代的 6 ~ 10元芳基、 5 ~ 6元单杂芳基、 9 ~ 10元稠杂芳基、 5 ~6元单杂环基、 9 - 10元稠杂环基;

R2为任选被 1 ~3个 R7b取代的 6~ 10元芳基、 5 ~6元单杂芳基、 9 ~ 10元稠杂芳基、 5 ~6元单杂环基、 9 ~ 10元稠杂环基;

R3为氢;

R4为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 羧基中的取代基 取代的 烷基;

R7a、 R7b分别独立地为

( 1 ) 卤素原子、 氰基、 羟基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9

-(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nS(〇)mNR8aR8b 、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mR9 、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b 、 -(CH2)nOC(0)R9 、 -(CH2)nC(0)(CH2)nOR9 、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9,

(2)任选被 1 -3 个选自 素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 Ci-6烷基、 Ci_6烷氧基, 或;

(3)任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C1-6 烷基、 C1-6烷氧基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b、 -(CH2)nS(0)mRv 、 -(CH2)nS(0)mNR8aR8b 、 -(CH2)nN(R8a)S(0)mRy 、 -(CH2)nOC(0)R9、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9中的取代基取代的 5 ~ 10元杂芳 基、 5 ~ 10元杂环基;

R8a、 R8b分别独立地为氢或 d_6烷基;

R9为氢, 或任选被 1 ~3个选自鹵素原子、 氰基、 羟基、 -NR8aR8b 中的取代基取代的 烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 3。

4. 如权利要求 3所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异 构体、 溶剂化物:

X、 Y分别为 0;

A和 B分别为 CH;

R1为任选被 1 ~ 3个 R7a取代的 6- 10元芳基、 5 - 6元单杂芳基; R2为任选被 1 ~3个 R7b取代的 6 ~ 10元芳基、 5 ~6元单杂芳基、 9~ 10元稠杂芳基;

R3为氢;

R4为氢, 或任选被羟基取代的 烷基;

R7a、 R7b分别独立地为

( 1 ) 卤素原子、 氰基、 羟基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nS(0)mR9 、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b 、 -C(0)(CH2)nOR9 、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9,

(2)任选被 1~3 个选自 1¾素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 d.6烷基、 ^6烷氧基, 或

(3)任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C1-6 烷基、 C1-6烷氧基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b、 -(CH2)nOC(0)R9 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9中的取代基取代的 5 ~ 6元单杂 芳基、 5 ~6元单杂环基;

R8a、 R8b分别独立地为氢或 C1-6烷基;

R9为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 -NR8aR8b 中的取代基取代的 C1-6烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 3。

5. 如权利要求 4所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异 构体、 溶剂化物: X、 Y分别为 ο;

Α和 Β分别为 CH;

R1为任选被 1 ~3个 R7a取代的苯基、 吡啶基、 嘧啶基;

R2为任选被 1 ~ 3个 R7b取代的苯基、 吡啶基、 嘧啶基、 噻吩基、 吡唑基、 吲唑基、 吲味基、 吡17定并吡咯基、 吡唑并吡定基、 p r淋基; R3为氢;

R4为氢, 曱基, 乙基或羟基甲基;

R7a、 R7b分别独立地为

( 1 ) 氰基、 羟基、 三氟甲基、 -NR8aR8b、 -C(0)R9、 -S(0)mR9、 -C(0)NR8aR8b、 -C(0)(CH2)nOR9、 -N(R8a)C(0)R9

(2)任选被 1 ~3 个选自 素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 d_6烷基、 C1-6烷氧基, 或

(3)任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C1-6 烷基、 C1-6烷氧基、 -NR8aR8b、 -C(0)R9、 -C(0)NR8aR8b、 -OC(0)R9、 -N(R8a)C(0)R9中的取代基取代的吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基;

R8a、 R8b分别独立地为氢或 C^6烷基;

R9为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 氰基、 羟基中的取代基 取代的 C^6烷基;

m为 0、 1或 2。

6. 如权利要求 3所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异 构体、 溶剂化物:

X、 Y分别为 0;

A和 B分别为 CH;

R1为任选被 1 ~3个 R7a取代的 5-6元单杂环基;

R2为任选被 1 ~3个 R7b取代的 6 ~ 10元芳基、 5 ~6元单杂芳基、 9~ 10元稠杂芳基;

R3为氢;

R4为氢, 曱基, 或羟基甲基;

R7a、 R7b分别独立地为

( 1 )氰基、羟基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nS(0)mR9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8\ -C(0)(CH2)nOR9 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9, (2)任选被 1 ~3 个选自 |¾素原子、 羟基、 氨基中的取代基取代 的 C1-6烷基、 烷氧基, 或

(3)任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟曱基、 C1-6 烷基、 C1-6烷氧基、 -(CH2)nNR8aR8b、 -(CH2)nC(0)R9、 -(CH2)nC(0)NR8aR8b、 -(CH2)nOC(0)R9、 -(CH2)nN(R8a)C(0)R9中的取代基取代的 5 ~ 6元单杂 芳基、 5 ~6元单杂环基;

R8a、 R8b分别独立地为氢或 d_6烷基;

R9为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 -NR1QaR1()b 中的取代基取代的 C1-6烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 3。

7. 如权利要求 1所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异

190ΪΟΟ/£ΪΟΖΜ3/ΧΟ<Ι 赌 ΙΟΖ OAV

构体、 溶剂化物, 其选自如下:

190100/εΐΟΖΝ3/Χ3ί £L£O O/nOZ OAV

- 81 - - 8"

ΐ90ΪΟΟ/εΐΟΖΝ3/13<Ι PCT/CN2013/001061

WO 2014/040373

190T00/C10ZN3/X3d

iLtoto/noz O -98"

190ΪΟΟ/εΐΟίΝ3/Χ3«Ι

9. 药物组合物, 该组合物含有权利要求 1 所述的化合物或其药学 上可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化物以及一种或多种药用载体, 该 组合物任选进一步含有一种或多种抗肿瘤剂和免疫抑制剂, 所述的抗 肿瘤剂和免疫抑制剂为:

( 1 ) 抗代谢物, 选自卡培他滨、 吉西他滨、 培美曲塞二钠; (2) 生长因子抑制剂, 选自帕唑帕尼、 伊马替尼、 埃罗替尼、 拉 帕替尼、 吉非替尼、 凡德他尼;

(3 ) 抗体, 选自赫赛汀、 贝伐单抗;

(4) 有丝分裂抑制剂, 选自紫杉醇、 长春瑞滨、 多西他赛、 多柔 比星;

( 5 )抗肿瘤激素类, 选自来曲唑、 他莫西芬、 氟维司群、 氟他胺、 曲普瑞林;

(6) 烷化剂类, 选自环磷酰胺、 氮芥、 马法兰、 瘤可宁、 卡莫司 汀;

(7) 金属铂类, 选自卡铂、 顺铂、 奥沙利铂;

(8) 拓朴异构酶抑制剂, 选自拓朴特肯喜树碱、 拓朴替康、 依立 替康;

(9) 免疫抑制剂类, 选自依维莫司、 西罗莫司、 特癌适;

( 10) 嘌呤类似物, 选自 6-巯基嘌呤、 6-硫鸟嘌呤、 硫唑嘌呤; ( 11 ) 抗生素类, 选自菌素 D、 柔红霉素、 阿霉素、 米托蒽醌、 博来霉素、 普卡霉素; 或

( 12) 肾上腺皮质抑制剂氨鲁米特。

10. 权利要求 1所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异构 体、 溶剂化物在制备治疗和 /或预防增殖性疾病的药物中的用途, 所述 增殖性疾病为癌症或非癌性增殖性疾病, 所述癌症选自脑瘤、 肺癌、 非小细胞性肺癌、 鳞状上皮细胞癌、 膀胱癌、 胃癌、 卵巢癌、 腹膜癌、 胰腺癌、 乳腺癌、 头颈癌、 子宫颈癌、 子宫内膜癌、 结直肠癌、 肝癌、 ' 癌、 食管腺癌、 食管鳞状细胞癌、 实体瘤、 非霍奇金淋巴瘤、 神经 胶质瘤、 多形性胶质母细胞瘤、 胶质肉瘤、 前列腺癌、 甲状腺癌、 雌 性生殖道癌、 原位癌、 淋巴瘤、 组织细 '淋巴瘤、 神经纤维瘤病、 骨 癌、 皮肤癌、 结肠癌、 睾丸癌、 小细胞肺癌、 胃肠道间质瘤、 前列腺 肿瘤、 肥大细胞肿瘤、 多发性骨髓瘤、 黑色素瘤、 胶质瘤、 胶质母细 胞瘤、 星形细胞瘤、 神经母细胞瘤、 肉瘤; 所述非癌性增殖性疾病选 自皮肤或前列腺的良性增生。

〗1. 治疗和 /或预防增殖性疾病的方法, 该方法包括给患者施用治 疗有效量的权利要求 1 所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体 异构体、 溶剂化物。

Description:
PI3K和 /或 mTOR抑制剂 本申请要求申请日为 2012年 9月 12 日、申请号为 201210334795.0 的中国专利申请的优先权, 该优先权文本的内容在本申请中全部引用 作为参考。 本申请中所引用的全部文献的内容也全部作为 本申请的一 部分。 技术领域

本发明涉及磷脂酰肌醇 3激酶 (PI3K ) 和 /或哺乳动物雷帕霉素靶 蛋白 (mTOR )抑制剂、 或其药学上可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化 物, 这些化合物的制备方法, 含有这些化合物的药物组合物, 以及这 些化合物在制备治疗和 /或预防增殖性疾病的药物中的应用。 背景技术

肿瘤是机体在各种致瘤因子作用下, 引起细胞遗传物质改变, 导 致基因表达失常, 细胞异常增殖而形成的新生物。 肿瘤细胞失去正常 生长调节功能, 具有自主或相对自主生长能力, 即使致瘤因子消失后, 肿瘤细胞仍能继续生长, 大量消耗人体的营养物质。 如果发现和治疗 不及时, 癌细胞还可转移到全身各处生长繁殖, 并释放出多种毒素, 导致人体消瘦、 贫血、 脏器功能受损乃至死亡。

治疗肿瘤的方法主要包含三个方面: 药物治疗、 手术治疗和放射 治疗。 由于手术治疗、 放射治疗难以彻底根除肿瘤, 而且对中晚期肿 瘤病人作用不明显, 因此药物治疗在肿瘤治疗中的地位越来越明显 。 传统抗肿瘤药物无法区分肿瘤细胞和正常组织 细胞, 常导致严重的副 作用。 靶向药物以癌细胞作为特异性靶点, 能准确地作用于肿瘤, 极 大地提高了治疗水平, 并降低了不良反应率, 例如使晚期大肠癌的中 位生存时间增加 66.7%, 晚期乳腺癌的治疗有效率提高 71.3%。

由于诸多制药公司对靶向类抗肿瘤药的研制加 速, 再加上市场对 这一类别的抗肿瘤药需求强劲, 分子靶向药物已经成为了全球抗肿瘤 药物市场中增长最快的单元。 PI3K通路是人体癌细胞中最常发生变异 的地方, 可导致细胞增殖, 活化, 放大信号。 PI3K和 mTOR是 PI3K信 号通路的重要激酶。 PI3K是脂激酶家族成员, 可通过磷脂酰醇的 3位磷酸化产生磷脂酰 肌醇三磷酸脂 (PIP3)来调节细胞代谢和生长。 该脂类的第二信使 PIP3可 以使 P 13K与下游的效应物 (特别是 Akt) 己对结合, 从而导致膜募集和磷 酸化, 细胞增殖, 活化。 因此抑制磷脂酰肌醇 3激酶, 可以影响 PI3K通 路, 从而抑制癌细胞增殖, 活化。

mT〇R是存在于胞浆中的一种丝 /苏氨酸蛋白激酶,属于磷酸肌醇 激酶相关蛋白激酶家族, 在生物体内以两种复合物的形式存在, 即 mTORC l (雷帕霉素的作用靶点) 和 mTORC2 (不被雷帕霉素抑制) 。 m T 0 R是一种细胞信号转导蛋白,它调节肿瘤细胞 养分和生长因子的 反应, 并通过对血管内皮生长因子的作用控制肿瘤的 血液供给。 mTOR 抑制剂会使癌细胞饥饿, 并且通过抑制 mTOR的作用使肿瘤体积缩小。

目前已有人对 PI3K和 /或 mTOR抑制剂类药物进行开发, 但是暂无 药品上市。 现有技术文献 Jow «a/ of Medicinal Chemistry (201 1 ), 54(5), 1473- 1480 , "Discovery of 9-(6-Aminopyridin- 3-yl)- l -(3-(trifluoromethyl) phenyl)benzo[h] [ 1 ,6]naphthyridin-2( 1 H)-one (Torin2) as a potent, selective, and orally available mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor for treatment of cancer. 中公开了名为 Torin2的化合物, 并报道 了其体内药代动力学

对于激酶抑制剂 (包括 PI3K和 /或 mTOR抑制剂) 的研究, 需要 特别注意激酶靶点的选择性, 因为激酶的同源性很高, 小分子化合物 在抑制 PI3K和 /或 mTOR的同时, 有可能抑制到其它的激酶靶点, 由 于这些激酶在生物信号传导中具有重要作用, 一旦将其抑制, 将会引 起信号通路传导紊乱, 表现出对机体有害的不良反应或毒性, 因此临 床急需对于 PI3K和 /或 mTOR激酶具有良好选择性的激酶抑制剂。

在激酶选择性的同时, 对于其它非激酶靶点的选择性也具有重要 的意义。 非激酶靶点, 例如离子通道、 各种受体等, 对于信号传导、 神经递质的释放等生理过程具有重要的影响, 一旦这些非激酶靶点被 抑制, 机体将出现代谢紊乱, 生理功能受到损害, 对患者的安全造成 严重影响。

综上所述, 寻求对于 PI3K和 /或 mTOR具有选择性高、 抑制活性 好、 药代动力学性质好的化合物, 已成为当前抗肿瘤药物研究的热点。 发明内容

本发明的目的是提供一种 PI3K和 /或 mTOR抑制剂, 具体地, 本 发明涉及:

( I ) 下述通式(I )所示的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体 异构体、 溶剂化物:

X、 Y分别独立地为 0或 S;

A和 B分别独立地为 CR 6 , R 6 为氢、 鹵素原子、 氰基、 羟基、 羧 基 、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)(CH 2 ) n OR 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 , 或任 选被 1 - 3个选自 [¾素原子、 羟基、 羧基中的取代基取代的 C 1-6 烷基、

Ci_6统 基;

R 1 为氢, 或任选被 1 ~ 5个 R 7a 取代的 C 1-6 烷基、 C 2-8 烯基、 C 2-8 炔基、 C 3-8 环烷基、 6 - 14元芳基、 5 - 14元杂芳基、 3 ~ 14元杂环基、 7 ~ 12元螺环基、 7 - 12元桥环基;

R 2 为氢, 或任选被 1 - 5 个 R 7b 取代的 d_ 6 烷基、 C 2-8 烯基、 C 2-8 炔基、 C 3-8 环烷基、 6 ~ 14元芳基、 5 - 14元杂芳基、 3 - 14元杂环基、 7 ~ 12元螺环基、 7 ~ 12元桥环基;

R 3 为氢、 羧基, 或任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 羧基中的 取代基取代的 C^ 6 烷基;

R 4 为氢, : 3 . 8 环烷基, 或任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 羧 基中的取代基取代的 C 1-6 烷基; R 7a 、 R 7b 分别独立地为

( 1 ) 鹵素原子、 氰基、 羟基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)(CH 2 ) n OR 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 ,

(2)任选被 1 ~3 个选自 素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 C 1-6 烷基、 C 2 _ 8 烯基、 C 2-8 炔基、 C 1-6 烷氧基;

(3 )任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C I-6 烷基、 C 2-8 烯基、 C 2-8 炔基、 d. 6 烷氧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n S(〇) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 中的取 代基取代的 C 3-8 环烷基、 6 - 14元芳基、 5 - 14元杂芳基、 3 ~ 14元杂 环基;

R 8a 、 R 8b 分别独立地为氢, 或任选被 1 ~3个羟基、 卤素原子、 氰 基、 羧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 氨基磺酰基、 氨基甲酰基、 磺酰胺基取代 的 C 1-6 烷基、 C 3-8 环烷基、 6 ~ 14元芳基、 5 - 14元杂芳基、 3 - 14元 杂环基;

R 9 为氢, 或任选被 1 ~3 个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 羧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 氨基磺酰基、氨基曱酰基中的取代基取代的 C 1-6 烷基、 C 1-6 烷氧基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 4。

( II) 上述 (I) 中所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体 异构体、 溶剂化物, 其中,

A 和 B 分别独立地为 CR 6 , R 6 为氢、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b , 或任选被 1 ~ 3个选自卤 素原子、 羟基、 羧基中的取代基取代的 烷基、 烷氧基;

R 1 为任选被 1 ~3个 R 7a 取代的 C 3-8 环烷基、 6 ~ 10元芳基、 5 ~ 10 元杂芳基、 5 ~ 10元杂环基;

R 2 为任选被 1 ~3个 R 7b 取代的 C 3-8 环烷基、 6~ 10元芳基、 5 ~ 10 元杂芳基、 5 ~ 10元杂环基;

R\ R 4 分別独立地为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 羧基中的取代基取代的 C^ 6 烷基; R 7a 、 R 7b 分别独立地为

( 1 ) 鹵素原子、 氰基、 羟基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(〇)R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)(CH 2 ) n OR 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 ,

(2)任选被 1 ~ 3 个选自 素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 烷基、 C 1-6 烷氧基, 或

(3 )任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟曱基、 C 1-6 坑基、 C 1-6 垸氧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(〇)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 中的取代基取代的 C 3-8 环烷基、 6 ~ 10元芳基、 5 ~ 10元杂芳基、 5 - 10元杂环基;

R 8a 、 R 8b 分别独立地为氢, 或任选被 1 ~ 3个羟基、 卤素原子、 氰 基、 羧基、 氨基磺酰基、 氨基甲酰基、 磺酰胺基取代的 C 1-6 烷基;

R 9 为氢, 或任选被 1 ~ 3 个选自鹵素原子、 氰基、 羟基、 羧基、

-NR 8a R 8b 、 氨基磺酰基、 氨基甲酰基中的取代基取代的 C I-6 烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0— 4。

( III)上述(II) 中所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体 异构体、 溶剂化物, 其中,

X、 Y分别为 0;

A和 B分别为 CH;

R 1 为任选被 1 ~3个 R 7a 取代的 6 ~ 10元芳基、 5 ~6元单杂芳基、 9 ~ 10元稠杂芳基、 5 ~6元单杂环基、 9 ~ 10元稠杂环基;

R 2 为任选被 1 ~ 3个 R 7b 取代的 6~ 10元芳基、 5 ~6元单杂芳基、 9 ~ 10元稠杂芳基、 5 ~6元单杂环基、 9 ~ 10元稠杂环基;

R 3 为氢;

R 4 为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 羧基中的取代基 取代的 d. 6 烷基;

R 7a 、 R 7b 分别独立地为

( 1 ) 卤素原子、 氰基、 羟基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9

-(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)(CH 2 ) n OR 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R y ,

(2)任选被 1 ~3 个选自 1¾素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 C 1-6 烷基、 C 烷氧基, 或

(3)任选被 1 ~3个选自鹵素原子、 羟基、 氰基、 三氟曱基、 Ci -6 烷基、 C 1-6 烷氧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b

-(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 中的取代基取代的 5 ~ 10元杂芳 基、 5~ 10元杂环基;

R 8a 、 R 8b 分别独立地为氢或 C 1-6 烷基;

R 9 为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 -NR 8a R 8b 中的取代基取代的 d_ 6 烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 3。

在本发明通式 (I)化合物的进一步优选的实施方案中:

X、 Y分别为〇;

A和 B分别为 CH;

R 1 为任选被 1 ~3个 R 7a 取代的 6~ 10元芳基、 5-6元单杂芳基;

R 2 为任选被 1 ~3个 R 7b 取代的 6 ~ 10元芳基、 5-6元单杂芳基、 9~ 10元稠杂芳基;

R 3 为氢; R 4 为氢, 或任选被羟基取代的 烷基;

R 7a 、 R 7b 分别独立地为

( 1 ) 鹵素原子、 氰基、 羟基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -C(0)(CH 2 ) n OR 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 ,

(2)任选被 1 ~3 个选自 1¾素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 C 1-6 烷基、 C 1-6 烷氧基, 或

(3)任选被 1 ~3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C 1-6 烷基、 C 1-6 烷氧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 中的取代基取代的 5 ~ 6元单杂 芳基、 5 ~6元单杂环基;

R 8a 、 R 8b 分别独立地为氢或 d_ 6 烷基;

R 9 为氢, 或任选被 1 ~3个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 -NR 8a R 8b 中的取代基取代的 烷基; m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 3。

在本发明通式 (I)化合物的进一步优选的实施方案中:

X、 Y分别为 0;

A和 B分别为 CH;

R 1 为任选被 1 ~3个 R 7a 取代的苯基、 吡啶基、 嘧啶基;

R 2 为任选被 1 ~3个 R 7b 取代的苯基、 吡啶基、 嘧啶基、 噻吩基、 吡唑基、 吲唑基、 吲。呆基、 吡 17 定并吡 基、 吡唑并吡 17 定基、 喹淋基; R 3 为氢; R 4 为氢, 甲基, 乙基或羟基甲基;

R 7a 、 R 7b 分別独立地为

( 1 )氰基、 羟基、 -NR 8a R 8b 、 -C(0)R 9 、 -S(0) m R 9 、 -C(0)NR 8a R 8b 、 -C(0)(CH 2 ) n OR 9 、 -N(R 8a )C(0)R 9 ,

(2)任选被 1 -3 个选自 1¾素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 烷基、 d_ 6 烷氧基, 或

(3 )任选被 1 -3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 C 1-6 烷基、 C 6 烷氧基、 -NR 8A R 8B 、 -C(0)R 9 、 -C(0)NR 8A R 8B 、 -OC(0)R 9 、 -N(R 8a )C(0)R 9 中的取代基取代的吡咯基、 吡唑基、 咪唑基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基;

R 8a > R 8b 分别独立地为氢或 C 1-6 烷基;

R 9 为氢, 或任选被 1 ~3个选自 [¾素原子、 氰基、 羟基中的取代基 取代的 d. 6 烷基;

m为 0、 1或 2。

(IV)上述(III) 中所述的化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异 构体、 溶剂化物, 其中,

X、 Y分别为 0;

A和 B分别为 CH;

R 1 为任选被 1 ~3个 R 7a 取代的 5 ~6元单杂环基;

R 2 为任选被 1 ~3个 R 7b 取代的 6~ 10元芳基、 5 ~6元单杂芳基、 9~ 10元稠杂芳基;

R 3 为氢; R 4 为氢, 甲基, 或羟基甲基;

R 7a 、 R 7b 分别独立地为

( 1 )氰基、羟基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n S(0) m R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8 \ -C(0)(CH 2 ) n OR > -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 , (2 ) 任选被 1 ~3 个选自卤素原子、 羟基、 氰基中的取代基取代 的 C 1-6 烷基、 d. 6 烷氧基, 或

( 3 )任选被 1 ~ 3个选自卤素原子、 羟基、 氰基、 三氟甲基、 Ci -6 烷基、 C 1-6 烷氧基、 -(CH 2 ) n NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n C(0)R 9 、 -(CH 2 ) n C(0)NR 8a R 8b 、 -(CH 2 ) n OC(0)R 9 、 -(CH 2 ) n N(R 8a )C(0)R 9 中的取代基取代的 5 ~ 6元单杂 芳基、 5 -6元单杂环基;

R 8a 、 R 8b 分别独立地为氢或 C^ 6 烷基;

R 9 为氢, 或任选被 1 -3个选自卤素原子、 氰基、 羟基、 -NR 1Qa R 1Qb 中的取代基取代的 d. 6 烷基;

m为 0、 1或 2; n为 0 ~ 3。

( V) 药物组合物, 该组合物含有上述 (I ) ~ ( IV) 中任意一项 所述的化合物或其药学上可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化物以及一 种或多种药用载体, 该组合物任选进一步含有一种或多种抗肿瘤剂 和 免疫抑制剂, 所述的抗肿瘤剂和免疫抑制剂为:

( 1 ) 抗代谢物, 选自卡培他滨、 吉西他滨、 培美曲塞二钠;

(2 ) 生长因子抑制剂, 选自帕唑帕尼、 伊马替尼、 埃罗替尼、 拉 帕替尼、 吉非替尼、 凡德他尼;

(3 ) 抗体, 选自赫赛汀、 贝伐单抗;

(4)有丝分裂抑制剂, 选自紫杉醇、 长春瑞滨、 多西他赛、 多柔 比星;

( 5 )抗肿瘤激素类, 选自来曲唑、 他莫西芬、 氟维司群、 氟他胺、 曲普瑞林;

(6 ) 烷化剂类, 选自环磷酰胺、 氮芥、 马法兰、 瘤可宁、 卡莫司 汀;

( 7)金属铂类, 选自卡铂、 顺铂、 奥沙利铂;

( 8) 拓朴异构酶抑制剂, 选自拓朴特肯喜树碱、 拓朴替康、 依立 替康;

(9 ) 免疫抑制剂类, 选自依维莫司、 西罗莫司、 特癌适;

( 10) 嘌呤类似物, 选自 6-巯基嘌呤、 6-硫鸟嘌呤、 硫唑嘌呤; ( 11 ) 抗生素类, 选自菌素 D、 柔红霉素、 阿霉素、 米托蒽醌、 博来霉素、 普卡霉素; 或

( 12 ) 肾上腺皮质抑制剂氨鲁米特。 ( VI ) 上述 (I ) - ( IV ) 中任意一项所述的化合物、 或其药学上 可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化物在制备治疗和 /或预防增殖性疾病 的药物中的用途, 所述增殖性疾病为癌症或非癌性增殖性疾病, 所述 癌症选自脑瘤、 肺癌、 非小细胞性肺癌、 鳞状上皮细胞癌、 膀胱癌、 胃癌、 卵巢癌、 腹膜癌、 胰腺癌、 乳腺癌、 头颈癌、 子宫颈癌、 子宫 内膜癌、 结直肠癌、 肝癌、 肾癌、 食管腺癌、 食管鳞状细胞癌、 实体 瘤、 非霍奇金淋巴瘤、 神经胶质瘤、 多形性胶质母细胞瘤、 胶质肉瘤、 前列腺癌、 甲状腺癌、 雌性生殖道癌、 原位癌、 淋巴瘤、 组织细胞淋 巴瘤、 神经纤维瘤病、 骨癌、 皮肤癌、 结肠癌、 睾丸癌、 小细胞肺癌、 胃肠道间质瘤、 前列腺肿瘤、 肥大细胞肿瘤、 多发性骨髓瘤、 黑色素 瘤、 胶质瘤、 胶质母细胞瘤、 星形细胞瘤、 神经母细胞瘤、 肉瘤; 所 述非癌性增殖性疾病选自皮肤或前列腺的良性 增生。

( VII )治疗和 /或预防增殖性疾病的方法, 该方法包括给患者施用 治疗有效量的上述 (I ) ~ ( IV ) 中任意一项所述的化合物、 或其药学 上可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化物。

本发明优选以下化合物、 或其药学上可接受的盐、 立体异构体、 溶剂化物:

本发明优选化合物

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I90l00/C10ZN3/X3d CO請 ΪΟΖ OAV 本发明优选化合物

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I90l00/C10ZN3/X3d

I90l00/C10ZN3/X3d CO請 ΪΟΖ OAV 本发明所述的 "1¾素原子"包括氟原子、 氯原子、 溴原子和碘原子。 本发明所述的 "d_ 6 烷基"可以为直链或支链状, 包括例如" CM烷 、 "C 1-3 烷基"、 "C 1-2 烷基"等, 具体实例包括但不限于: 曱基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 2-甲基丙基、 曱基丙基、 1,1-二甲基乙基、 正戊基、 3-曱基丁基、 2-甲基丁基、 1-甲基丁基、 1-乙基丙基、 正己基、 4-甲基戊基、 3-曱基戊基、 2-甲基戊基、 1-甲基戊基、 3,3-二甲基丁基、

2.2-二甲基丁基、 1,1-二曱基丁基、 1,2-二甲基丁基、 1,3-二甲基丁基、

2.3-二曱基丁基、 2-乙基丁基、 1,2-二曱基丙基等。

本发明所述的 "C 3-8 环烷基 "包括例如" 环烷基"、 "C 3-6 环烷基"、 "C 4-6 环烷基"、 "C 5-6 环烷基 "等, 具体实例包括但不限于: 环丙基、 环 丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 环辛基等。

本发明所述的 "(^ 8 烯基"可以为直链或支链或环状, 包括例如" 烯基"、 "C 2 . 4 烯基"、 "C 2 . 3 烯基"、 "C 3-6 环烯基 "等, 具体实例包括但不 限于: 乙烯基、 1-丙烯基、 2-丙烯基、 2-丁烯基、 3-丁烯基、 2-甲基 -1- 丙烯基、 1-曱基 -2-丙烯基、 1-戊烯基、 2-戊烯基、 3-戊烯基、 2-曱基 -1- 丁烯基、 3-曱基 -1-丁婦基、 2-甲基 -3-丁烯基、 1,1-二甲基 -2-丙烯基、 1- 乙基 -2-丙烯基、 2-己烯基、 3-己烯基、 2-甲基小戊烯基、 3-甲基小戊烯 基、 1-甲基 -2-戊烯基、 3-甲基 -2-戊烯基、 2-甲基 -3-戊烯基、 1-甲基 -4- 戊烯基、 3-甲基 -4-戊烯基、 1,1-二甲基 -3-丁烯基、 1,2-二曱基 -3-丁烯基、

1.3-二甲基 -2-丁浠基、 2,2-二甲基 -3-丁烯基、 2,3-二甲基 -2-丁烯基、 2,3- 二甲基 -3-丁烯基、 2-乙基 -1-丁烯基、 2-乙基 -3-丁烯基、 2-庚烯基、 3- 庚烯基、 4-庚烯基、 1-辛烯基、 3-辛烯基、 4-辛烯基、 1,3-丁二烯基、

2.4-戊二烯基、 1,4-己二烯基、 2,4-己二烯基、 1,5-庚二烯基、 2,5-庚二 烯基、 2,6-辛二烯基、 环戊烯基、 1,3-环戊二烯基、 环己烯基、 1,4-环己 二烯基、 环庚烯基、 1,4-环庚二烯基、 环辛烯基等。

本发明所述的 "c^ 8 炔基"可以为直链或支链状, 其中包括例如 "C 2-5 炔基"、 "Cw炔基"、 "C 2-3 炔基"等, 具体实例包括但不限于: 乙炔基、

1-丙炔基、 2-丁炔基、 1-甲基 -2-丙炔基、 2-戊炔基、 3-戊炔基、 1-曱基 -2-丁炔基、 2-甲基 -3-丁炔基、 1,1-二甲基 -2-丙炔基、 1-乙基 -2-丙炔基、

2-己炔基、 3-己炔基、 1-甲基 -2-戊炔基、 1-曱基 -3-戊炔基、 2-曱基 -3- 戊炔基、 1,1-二甲基 -3-丁炔基、 2-乙基 -3-丁炔基、 2-庚炔基、 3-庚炔基、 4-甲基 -2-己炔基、 5-曱基 -2-己炔基、 2-甲基 -3-己炔基、 5-甲基 -3-己炔 基、 2-曱基 -4-己炔基 4-曱基 -5-己炔基、 2-辛炔基、 3-辛炔基、 4-辛炔基、 4-甲基 -2-庚炔基、 5-甲基 -3-庚炔基、 6-甲基 -3-庚炔基、 2-甲基 -4-庚炔 基、 2-甲基 -5-庚炔基、 3-甲基 -6-庚炔基等。 本发明所述的 "C 1-6 烷氧基 "是指 "C 1-6 烷基 -0-", 其中" c 6 烷基"的 定义如前文所述。

本发明所述的 "c 1-6 烷基羰基"是指" c 1-6 烷基 -c(o)-", 其中" c 1-6 烷 基"的定义如前文所述。

本发明所述的 "6 ~ 14元芳基 "包括 6 ~ 8元单环芳基和 8- 14元稠 环芳基。 6~ 8 元单环芳基包括例如苯基、 环辛四烯基等。 8~ 14 元稠 环芳基包括萘、 菲、 2,3-二氢 茚基、 茚基、 1,2,3,4-四氢萘基、 1,4-二氢萘基等。

本发明所述的 "5 ~ 14元杂芳基"包括 5 ~ 8元单杂芳基、 6 ~ 14元稠 杂芳基, 所述的杂原子有氮、 氧和硫等, 同时包括碳原子、 氮原子和 硫原子被氧代的情况。

5 ~ 8元单杂芳基的具体实例包括但不仅限于呋喃 、 噻吩基、 吡 咯基、 噻唑基、 异噻唑基、 噻二唑基、 噁唑基、 异噁唑基、 噁二唑基、 咪唑基、 吡唑基、 1,2,3-三唑基、 1,2,4-三唑基、 1,2,3-噁二唑基、 1,2,4- 噁二唑基、 1,2,5-噁二唑基、 1,3,4-噁二唑基、 吡啶基、 2-吡啶酮、 4-吡 啶酮、嘧啶基、 1,4-二氧杂环己二烯基、 2/ -1,2-噁嗪基、 4/ -1,2-噁嗪基、 6 /-1,2-噁嗪基、 4/7-1,3-噁嗪基、 6/ -1,3-噁嗪基、 4/ -1,4-噁嗪基、 哒嗪 基、 吡嗪基、 1,2,3-三嗪基、 1,3,5-三嗪基、 1,2,4,5-四嗪基、 氮杂环庚三 烯基、 1,3-二氮杂环庚三烯基、 氮杂环辛四烯基等, 优选为 "5 ~6元单 杂芳基"。

6~ 14元稠杂芳基的具体实例包括但不限于: 苯并呋喃基、 苯并异 呋喃基、 苯并噻吩基、 吲哚基、 异吲哚、 苯并噁唑基、 苯并咪唑基、 吲唑基、 苯并三唑基、 喹啉基、 2-喹啉酮、 4-喹啉酮、 1-异喹啉酮、 异 喹啉基、 吖啶基、 菲啶基、 苯并哒嗪基、 酞嗪基、 喹唑啉基、 喹喔啉 基、 朌嗪基、 喋啶基、 嘌呤基、 萘啶基、 吩嗪、 吩噻嗪等, 优选为 "9~ 10元稠杂芳基"。

本发明所述的 "3 ~ 14元杂环基"包括 3 ~ 8元单杂环基, 6~ 14元 稠杂环基。 所述的杂原子有氮、 氧和硫等, 同时包括碳原子、 氮原子 和硫原子被氧代的情况。

所述的 "3 ~ 8 元单杂环基"的具体实例包括但不仅限于: 氮杂环丙 烷基、 2 -氮杂环丙烷基、 二氮杂环丙烷基、 3//-二氮杂环丙烯基、 氮 杂环丁烷基、 1,4-二氧杂环己烷基、 1,3-二氧杂环己烷基、 1,3-二氧杂环 戊烷基、 1,4-二氧杂环己二烯基、 四氢呋喃基、 二氢吡咯基、 吡咯烷基、 咪唑烷基、 4,5-二氢咪唑基、 吡唑烷基、 4,5-二氢吡唑基、 2,5-二氢噻吩 基、 四氢噻吩基、 4,5-二氢噻唑基、 哌啶基、 哌嗪基、 吗啉基基、 4,5- 二氢噁唑基、 4,5-二氢异噁唑基、 2,3-二氢异噁唑基、 2 -1,2-噁嗪基、 6 -1,3-噁嗪基、 4 -1,3-噻嗪基、 6 -1,3-噻嗪基、 2 -吡喃基、 2 -吡喃 -2-酮基、 3,4-二氢 -2/ -吡喃基等, 优选为 "5-6元单杂环基"。

所述的 "6~ 14元稠杂环基"的具体实例包括但不仅限于: 四氢咪唑 并 [4,5-c]吡啶基、 3,4-二氢喹唑啉基、 1,2-二氢喹喔啉基、 苯并 [ [1,3] 二氧杂环戊烯基、 1,3-二氢异苯并呋喃基、 2//-色原烯基、 2 -色原烯 -2- 酮基、 4 -色烯基、 4 -色烯 -4-酮基、 色满基、 4/ -1,3-苯并噁嗪基、 4,6- 二氢 呋喃并 [3,4-ί]咪唑基、 3",4,6,6"-四氢 呋喃并 [3,4-ί]咪唑 基、 4,6-二氢 噻吩并 [3,4- ]咪唑基、 4,6-二氢 吡咯并 [3,4-GT]咪唑 基、 4,5,6,7-四氢 苯并 [ί/]咪唑基等, 优选为 "9 ~ 10元稠杂环基"。

本发明所述的术语 "7- 12 元桥环基"是指任意两个环共用两个不 直接相连的原子形成的环原子全部为碳原子的 7~ 12 元桥环基, 或其 中含有至少一个杂原子的 7~ 12 元桥杂环基, 所述杂原子有氮、 氧和 硫等。7- 12元桥环基和 7 ~ 12元桥杂环基可以是饱和的或部分饱和的。

饱和桥环基是指该桥环中的所有环均为饱和的 环状基团, 优选为

7~ 8元饱和桥环,具体实例包括但不限于: ^、 ^、 ^、 ^ ^ ΝΗ

HN \> (^χΝΗ I Λ

ΗΝ^λ^ 、 蘭、 ^、 、W kZNH k NH . U- H HN.、 1 1 U 1 1 1 1

o、

NH ¾ φ、 O J 、

部分饱和桥环基是指该桥环中至少有一个环为 不饱和的环状基 团, 优选为 7~ 8 元部分饱和桥环, 具体实例包括但不限于

™ " .ΝΗ L7义 义 等, 在本发明中, 术语" 7 ~ 12元螺环基"是指一类至少有两个环共享一 个原子形成的环原子全部为碳原子的 7- 12 元螺环基, 或其中含有至 少一个杂原子的 7~ 12元螺杂环基,所述的杂原子有氮、氧和硫等 7~ 12元螺环基和 7- 12元螺杂环基可以是饱和的或部分饱和的。

饱和螺环基是指该螺环中的所有环均为饱和的 环状基团, 具体实 例包括但不仅限于 NH HN、 X ,ΝΗ ΗΝ、 X Ο ΗΝ、

部分饱和螺环基是指该螺环中至少有一个环为 不饱和的环状基

本发明上述化合物可以采用下述流程中描述的 方法和 /或本领域普 通技术人员已知的其它技术来合成, 但不仅限于以下方法。

反应步骤:

(1) 中间体 2的制备

将中间体 1 ( 自制)、 1.5倍当量的 R 1 - NH 2 ,和适量的碱(例如碳 酸钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠、 醋酸钾等) 溶于醇类溶剂中 (例如曱醇、 乙醇、 异丙醇、 叔丁醇等) 中, 加热进行反应。 用 TLC监测确定反应 完毕后, 自然冷却, 旋蒸除去醇类溶剂, 通过硅胶柱层析分离或重结 晶得中间体 2。

(2) 中间体 3的制备

将中间体 2 溶于能与水互溶的溶剂 (例如甲醇、 乙醇、 四氢呋喃 或它们的混合物) 中, 滴加 3倍当量的碱(例如氢氧化锂、 氢氧化钾、 氢氧化钠等) 的水溶液。 滴加完毕后, 在室温下反应 2 - 6小时, 旋蒸 除去有机溶剂, 加适量水, 用盐酸调节 pH值至产品完全析出, 抽滤或 经重结晶或硅胶柱层析纯化得中间体 3。

(3) 中间体 4的制备

将中间体 3 悬浮于适量有机溶剂 (例如氯化亚砜、 甲苯、 氯仿、 四氯化碳等) 中反应数小时, 浓缩除去挥发性物质。 然后, 室温下将 其分散于适量极性溶剂 (例如四氢呋喃、 乙酸乙酯、 曱醇、 乙醇、 异 丙醇、 吡啶、 丙酮、 三乙胺等) 中, 控制温度在约 0 °C , 滴加适量的 碱性溶剂 (例如甲胺、 三甲胺、 二乙胺, 三乙胺、 二异丙胺、 乙二胺、 三乙醇胺等) 和连有保护基的胺类物质 (PG-NH 2 )的混合物。 将反应液 在室温下搅拌至通过 TLC监测确定反应完毕, 旋蒸除去溶剂, 通过重 结晶或硅胶柱层析获得中间体 4。

(4) 中间体 5的制备

将中间体 4 分散于适量酯类溶剂 (例如氯甲酸乙酯、 醋酸曱酯、 醋酸乙酯、 醋酸丙酯等) 中, 搅拌回流, 至通过 TLC监测确定反应完 毕, 旋蒸除去挥发性物质, 通过重结晶或硅胶柱层析得中间体 5。

(5) 中间体 6的制备

根据保护基 PG的不同, 选择相应的反应条件脱掉氨基保护基, 得 中间体 6。

(6) 中间体 7的制备

将中间体 6和 1.5倍当量的 R 4 -Hal及适量碱 (例如碳酸钾、 碳酸 钠、 碳酸氢钠、 醋酸钾等) 溶于溶剂中, 搅拌, 通过 TLC监测确定反 应完毕后, 旋蒸除去溶剂, 通过重结晶或硅胶柱层析得中间体 7。

(7) 本发明化合物的制备

将 (例如碳酸钾、 碳酸钠、 碳酸 氢钠、 醋酸钾等) , 及钯试剂和 /或相应膦配体 (例如四(三苯基膦)钯 等) 置于有机溶剂(如甲苯、 二氧六环、 二甲基曱酰胺、 乙二醇二曱醚 等)和水的混合溶剂中, 在氮气保护下, 加热反应至 TLC监测到原料消 耗完毕, 通过硅胶柱层析分离得本发明化合物。

反应方程式中, I 1 、 R 2 、 R 3 、 R 4 、 Υ、 Α和 Β如前文所定义, Hal 代表卤素, 选自氟原子、 氯原子、 溴原子、 碘原子。

在进行上述反应时, 可以根据所用保护试剂的种类选择合适的碱 或酸制造碱性或者酸性环境, 所述的碱包括有机碱和无机碱, 所述的 酸包括有机酸和无机酸。

所述无机碱选自例如, 但不仅限于, 氢氧化锂、 氢氧化钾、 氢氧 化钠、 氢氧化镁、 氢氧化钙、 碳酸钾、 碳酸氢钾、 碳酸钠、 碳酸氢钠 等。

所述有机碱选自例如, 但不仅限于, 胺类化合物, 如甲胺、 三曱 胺、 二乙胺, 三乙胺、 二异丙胺、 乙二胺、 三乙醇胺、 二异丙基乙胺、 三丁基胺、 N,N-二甲基苯胺等; 碱性氨基酸类, 如赖氨酸、 组氨酸等; 季铵碱类, 如甜菜碱、 胆碱等; 生物碱类, 如普鲁卡因、 咖啡因、 麻 黄碱等; 醇的碱金属盐类, 例如甲醇钠、 乙醇钾、 叔丁醇钾等; 锂化 合物, 例如丁基锂、 二异丙基胺基锂 (LDA ) 、 六甲基二硅胺基锂 ( LiHMDS ) 等。

所述无机酸选自例如, 但不限于, 氢溴酸、 盐酸、 硫酸、 亚硫酸、 硝酸、 磷酸等。

所述有机酸选自例如, 但不限于, 曱確酸、 2-萘磺酸、 苯磺酸、 草 酸、 2,2-二氯乙酸、 2-羟基乙磺酸、 L-天冬氨酸、 马来酸、 乙磺酸、 对 甲苯磺酸等。

本发明式 (I )化合物的"药学上可接受的盐"是指式(I )化合物中 存在的酸性官能团 (例如 -COOH、 -OH、 S0 3 H等) 与适当的无机或者 有机阳离子 (碱) 形成的盐, 包括与碱金属或碱土金属形成的盐、 铵 盐, 以及与含氮有机碱形成的盐; 以及式 (I ) 化合物中存在的碱性官 能团 (例如 -NH 2 等) 与适当的无机或者有机阴离子 (酸) 形成的盐, 包括与无机酸、 有机羧酸等形成的盐。

本发明式(I )化合物的"立体异构体"是指当式 (I )化合物存在不 对称碳原子时, 会产生对映异构体, 当化合物存在碳碳双键或环状结 构时, 会产生顺反异构体, 当化合物存在酮或肟时, 会产生互变异构 体, 所有式 (I ) 化合物的对映异构体、 非对映异构体、 消旋异构体、 顺反异构体、 互变异构体、 几何异构体、 差向异构体及其混合物, 均 包括在本发明范围中。

本发明式(I )化合物的"溶剂化物"是指其与溶剂締合形成的 物质。 所述溶剂可以是有机溶剂 (例如甲醇、 乙醇、 丙醇、 乙腈等) 、 水等。 例如本发明式(I )化合物可以与乙醇形成乙醇化物, 与水形成水合物。

本发明的式 (I )化合物、 其药学上可接受的盐、 溶剂化物或它们 的立体异构体可以治疗和 /或预防增殖性疾病。 所述的增殖性疾病包括 癌症和非癌性疾病, 所述癌症选自脑瘤、 肺癌、 非小细 ^^性肺癌、 鳞 状上皮细胞癌、 膀胱癌、 胃癌、 卵巢癌、 腹膜癌、 胰腺癌、 乳腺癌、 头颈癌、 子宫颈癌、 子宫内膜癌、 结直肠癌、 肝癌、 肾癌、 食管腺癌、 食管鳞状细胞癌、 实体瘤、 非霍奇金淋巴瘤、 神经胶质瘤、 多形性胶 质母细胞瘤、 胶质肉瘤、 前列腺癌、 甲状腺癌、 生殖道癌、 原位癌、 淋巴瘤、 组织细胞淋巴瘤、 神经纤维瘤、 骨癌、 皮肤癌、 脑癌、 结肠 癌、 睾丸癌、 小细胞肺癌、 胃肠道间质瘤、 前列腺肿瘤、 肥大细胞肿 瘤、 多发性骨髓瘤、 黑色素瘤、 胶质瘤、 胶质母细胞瘤、 星形细胞瘤、 神经母细胞瘤、 肉瘤; 非癌性疾病选自皮肤或前列腺的良性增生。

本发明式 ( I ) 化合物、 其药学上可接受的盐、 溶剂化物或它们的 异构体, 可以与一种或多种药用载体制成药学上可接受 的药物制剂。 所述药物制剂指临床上使用的常规制剂, 可以口服或肠胃外给药等方 式施用于需要这种治疗的患者。 用于口服给药时, 可制成常规的固体 制剂, 如片剂、 胶嚢剂、 丸剂、 颗粒剂等; 也可制成口服液体制剂, 如口服溶液剂、 口服混悬剂、 糖浆剂等。 用于肠胃外给药时, 可制成 注射剂, 包括注射液、 注射用无菌粉末、 注射用浓溶液、 注射用混悬 剂。 用于直肠给药时, 可制成栓剂等。 用于经肺给药时, 可制成吸入 剂或喷雾剂等。 用于局部或经皮给药时, 可制成软膏剂、 糊剂、 霜剂、 洗剂、 凝胶剂、 粉剂、 溶液或透皮贴剂等。 这些制剂可以通过常规方 法, 添加药用载体如赋形剂、 黏合剂、 增湿剂、 崩解剂、 增稠剂等制 备而成。

本发明化合物的施用量和施用频率可以根据临 床医生或药师的判 断考虑例如以下的一些因素而作出调整: 患者的年龄、 体重、 待治疗 病征的严重性。 一般而言, 以单次剂量或分剂量给予患者的本发明化 合物的日剂量可为 20mg ~ 500mg, 优选 50 ~ 300mg。

本发明的式 (I ) 化合物、 其药学上可接受的盐、 溶剂化物或它们 的立体异构体还可以与一种或多种抗肿瘤剂和 免疫抑制剂并用。 所述 抗肿瘤剂和免疫抑制剂选自抗代谢物, 包括但不仅限于卡培他滨、 吉 西他滨、 培美曲塞二钠; 生长因子抑制剂, 包括但不仅限于帕唑帕尼、 伊马替尼、 埃罗替尼、 拉帕替尼、 吉非替尼、 凡德他尼; 抗体, 包括 但不仅限于赫赛汀、 贝伐单抗; 有丝分裂抑制剂, 包括但不仅限于紫 杉醇、 长春瑞滨、 多西他赛、 多柔比星; 抗肿瘤激素类, 包括但不仅 限于来曲唑、 他莫西芬、 氟维司群、 氟他胺、 曲普瑞林; 烷化剂类, 包括但不仅限于环磷酰胺、 氮芥、 马法兰、 瘤可宁、 卡莫司汀; 金属 铂类, 包括但不仅限于卡铂、 顺铂、 奥沙利铂; 拓朴异构酶抑制剂, 包括但不仅限于拓朴特肯、 喜树碱、 拓朴替康、 依立替康; 免疫抑制 类, 包括但不仅限于依维莫司、 西罗莫司、 特癌适; 嘌呤类似物, 包 括但不仅限于 6-巯基嘌呤、 6-充鸟嘌呤、 ϋ唑嘌呤; 抗生素类, 包括 但不仅限于菌素 D、 柔红霉素、 阿霉素、 米托蒽醌、 博来霉素、 普卡 霉素; 肾上腺皮质抑制剂类, 包括但不仅限于氨鲁米特。

以下进一步阐述本发明化合物的有益效果, 本发明其它化合物与 解为本发明化 ^物仅具有下列有益效果。 5 、 、 、; ' 下述实验中缩写所代表的含义如下:

HEPES: 羟乙基哌嗪乙硫磺酸;

Brij-35 : 十二烷基聚乙二醇醚;

EDTA: 乙二胺四乙酸;

EGTA: 乙二醇二乙醚二胺四乙酸;

CHAPS: 3-[3- (胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐

DTT: 二石克苏糖醇; PIP2: 4,5-二磷酸磷脂酰肌醇;

ATP: 三磷酸腺苷;

DMSO: 二甲基亚砜;

DMF: 二甲基曱酰胺;

Tween-20: 吐温 20;

PEG: 聚乙二醇。 实验例 1-1 本发明化合物的激酶选择性

目的 考察测试物对下表 3 中所列激酶的抑制活性, 从而考察本 发明化合物的选择性。

测试物 本发明化合物 5, 自制, 其化学名称和结构式见制备实施 例 1。

试^ r方法

表 3中除了 BRAF V600E激酶外 ,其他激酶采用 Mobility shift assay 分析法进行测定。

1. 试剂配制

1.1 不含 MnCl 2 的 1倍激酶緩沖液: 50mMHEPES, pH 7.5, 0.0015%Bnj-35, 10 mM MgCl 2 , 2 mM DTT。

1.2 含 MnCl 2 的 1倍激酶緩冲液: 50 mM HEPES, pH 7.5, 0.0015%Brij-35, 10 mM MgCl 2 , 10 mM MnCl 2 , 2 mM DTT。

1.3 终止液: 100 mM HEPES, pH 7.5, 0.0015%Brij-35 , 0.2%Coating Reagent#3, 50mM EDTA。

1.4 2.5 倍激酶溶液: 将激酶加入 1 倍激酶緩冲液, 形成 2.5 倍激酶溶液。

1.5 2.5倍底物溶液: 将 FAM荧光标记的多肽和 ATP加入 1 倍激酶緩沖液, 形成 2.5倍底物溶液。

2.5倍化合物配制

化合物检测终浓度最高为 10 uM。 首先用 100%DMSO配置成 50 倍浓度, 即 500μΜ。用 100%DMSO 5倍稀释该化合物,共 5个浓度(依 次为 500 μΜ, 100 μΜ, 20μΜ, 4 μ Μ, 0.8 μΜ) 。 然后用 1倍的激 酶緩沖液 10倍稀释后, 取 5μ1 到 384 孔反应板, 每行设阴性对照孔 和阳性对照孔各 2个。 96孔板中按照 5倍化合物的 5个浓度进行左右 复孔。 阳性对照孔加 10%DMSO , 阴性对照孔中加 5μ1 250mM 的 EDTA。

3. 实验步骤

3.1 往 384孔反应板分别加入 5μ1 /孔的 10% DMSO 溶解的 5 倍化合物。

3.2 在 384 孔反应板中加入 ΙΟ μΙ/孔的 2.5 倍激酶溶液, 室 温下孵育 10 分钟。

3.3 在 384孔反应板中加入 10 μΐ/孔的 2.5倍底物溶液, 28 °C 下孵育一定时间。

3.4 加 25 μΐ 终止液终止反应, Caliper上读取转化率数据。

4. 抑制率计算

抑制率 (%) = (最大值-样本值) /(最大值 -最小值) OO

其中"最大值 "为 DMSO 对照孔的转化率, "最小值"为不加激酶的 对照孔转化率。

BRAF V600E 激酶采用 Lanthascreen分析法

1. 试剂配制

1.1 2倍激酶溶液: 吏用 1倍激酶緩冲液配置 2倍激酶溶液, 终浓度为 BRAFV600E 0.35ηΜ;

1.2 4倍底物溶液: 使用 1倍激酶緩沖液配置 4倍底物溶液, 底物溶液终浓度为 Fluorescein-MAP2Kl 0.2 uM, ATP 1.5 uM。

2. 4倍化合物配制

化合物检测终浓度最高为 lO uM。首先用 100% DMSO配置成 100 倍浓度, 即 1000uM。 100°/。DMSO 5倍稀释该化合物, 共 5个浓度。 化 合物排列同 Mobility Shift Assay分析法。用 1倍激酶緩沖液 25倍稀释, 在振板机上振荡混勾 10 分钟。

3. 实验步骤

3.1 384孔反应板中加入 2.5μ1 的 10% DMSO 溶解的 4倍化 合物;

3.2 在 384 孔反应板中加入 5μ1/孔的 2倍激酶溶液, 阴性对 照孔中加入 1倍激酶緩冲液, 振荡, 混匀, 室温下静置。

3.3 在 384孔反应板中加入 2.5μ1/孔的 4倍底物溶液, 反应, 振荡, 混匀, 室温下孵育 1小时; 3.4 反应结果的检测: 配制 2倍检测溶液, 终浓度为 Antibody 2nM, EDTA 10mM。 转移 ΙΟμΙ检测溶液到 384孔板终止反应。 在振板 机上轻轻振荡 30分钟。

4. 抑制率计算

在 Victor 读取样品荧光数值, 340nm 激发,读取 520nm 吸收值。 抑制率%= (最大值-样本值) I (最大值-最小值) X 100

其中"最大值"为不加激酶的对照孔读数, "最小值"为 DMSO 的对 照孔读数。

将数据导入 MS Excel 并使用 Graphpad 5.0 进行曲线拟合。

实验结果

表 3 本发明化合物 5对激酶的抑制活性 IC 5 。 (n 激酶种类 IC 50 (nM) 激酶种类 IC 50 (nM)

ABL 〉10000 JNK2 >10000

AKT1 >10000 KDR 〉10000

AL 1 170 LC 1 126

AMPKal 〉10000 LYNa 1370

AUR A >10000 MAPKAPK2 >10000

AXL 2138 MARKl >10000

BRAF V600E >10000 MSK1 >10000

CAM 2a 〉10000 MST2 〉10000

CD 2 >10000 NEK2 >10000

CKIT 〉10000 p38a 〉10000

CKld 〉10000 P70s6k >10000

C ET >10000 PAK2 〉10000

CHK1 > 10000 PD 1 >10000

CSK 〉10000 PDGFRb 〉10000

DYRKlb 〉10000 PIM1 〉10000

EGFR >10000 PKCa 〉10000

EphAl 1467 PKACa 〉10000

ER 2 〉10000 PKD1 2407

FES 〉10000 ROCK2 〉10000

FGFR1 >10000 RSK2 〉10000

FLT3 6247 SGK >10000

GSK3 β >10000 SRC 842

IGF1R 〉10000 SYK >10000

IK B >10000 TAOK2 >10000

IRAK4 〉10000 Tie2 2430

JAK2 〉10000 ZAP70 >10000

JA 3 〉10000 实验结论

由表 3可以看出, 本发明化合物 5对于所列激酶的 IC 5 o均较差, 大部分〉10000 nM, 说明本发明化合物 5对于上述激酶没有抑制活性, 而通过下面的实验,可以证明本发明化合物 5对 PI3K酶和 mTOR酶具 有良好的抑制活性,说明本发明化合物 5对于 PI3K酶和 mTOR酶具有 良好的选择性并且抑制活性高。 实验例 1 -2 本发明化合物的体外酶学抑制活性

测试物

本发明化合物, 自制, 其化学名称和结构式见各化合物的制备实 施例。

mTOR酶学实险方法

1. 试剂配制

1.1 1倍激酶緩冲液: 50 mM HEPES , pH 7.5 , 10 mM MgCl 2 , 1 mM EGTA, 3 mM MnCl 2 , 0.01 % Tween-20 , 2 mM DTT;

1.2 4倍激酶溶液: 1倍激酶缓冲液中加入 mTOR激酶, 配制 4倍激酶溶液, 终浓度为 2.5 nM;

1.3 2倍底物和 ATP溶液: 1倍激酶緩沖液中加入底物 4EBP1 和 ATP, 配制 2倍底物溶液, 4EBP1终浓度为 50 nM, ATP终浓度为 10.8μΜ;

1.4 4倍测试物溶液: 采用 100% DMSO配制 100倍不同浓度 梯度的测试物溶液, 用 1倍激酶緩沖液稀释 25倍, 得到 4倍不同浓度 梯度的测试物溶液;

1.5 检测液的配制: 配制含 2倍终浓度 EDTA和 4EBP1磷酸 化抗体的检测液, EDTA终浓度为 8 mM, 4EBP璘酸化抗体终浓度为 2 nM。

2. 实^ r步骤

2.1 往 384孔板中每孔加入 2.5 μL 系列稀释的 4倍测试物溶 液, 复孔;

2.2 每孔加入 2.5 4倍激酶溶液, 孵育 10 min;

2.3 然后每孔加入 5 μL 2倍底物和 ATP溶液, 室温孵育 1小 时; 2.4 最后加入 10 μL检测液终止反应 , 60分钟后 , Envision 读 取数据 Lance signal ( 665 nM ) 。

3. 数据处理

抑制率 (%) = (样本值-最小值) /(最大值 -最小值) χΙΟΟ

其中"最大值 "为 DMSO对照孔读数, "最小值,,为不加激酶的对照 孔读数。

输入 GraphPadPrism5.0 作图, 得到曲线及 IC 50 值。

ΡΙ3Κα酶学实验方法

1. 试剂配制

1.1 1倍激酶緩冲液: 50 mMHEPES, pH7.5, 3 mM MgCl 2 ,

I mMEGTA, 100 mM NaCl, 0.03% CHAPS, 2 mM DTT ) ;

1.2 4倍激酶溶液: 1倍激酶緩冲液中加入 ΡΙ3Κα激酶, 配制 4倍激酶溶液, 终浓度为 1.65 nM;

1.3 2倍底物和 ATP溶液: 1 倍激酶緩沖液中加入底物 PIP2 和 ATP,配制 2倍底物溶液,PIP2终浓度为 50μΜ,ΑΤΡ终浓度为 25μΜ;

1.4 4倍测试物溶液: 采用 100% DMSO配制 100倍不同浓度 梯度的测试物溶液, 用 1倍激酶緩沖液稀释 25倍, 得到 4倍不同浓度 梯度的测试物溶液;

1.5 Kinase-Glo reagent试剂盒, 将其放至升温到室温。 2. 实验步骤

2.1 往 384孔板中每孔加入 2.5 μL系列稀释的 4倍测试物溶 液;

2.2 每孔加入 2.5 4倍激酶溶液, 孵育 10分钟;

2.3 每孔加入 5 2倍底物和 ΑΤΡ溶液, 室温孵育 1小时; 2.4 最后加入 10 检测溶液终止反应, 15分钟后, Envision 读取数据 Lance signal ( 665 nM ) 。

3. 数据处理

抑制率 (%) =100- (样本值-最小值 )/(最大值 -最小值) χΙΟΟ 其中"最大值"为不加激酶的对照孔读数, "最小值"为 DMSO对照 孔读数。

输入 GraphPad Prism5.0 作图, 得到曲线及 IC 50

实验结果 本发明化合物的体外酶学活性 (IC 50 ) 测试物 ΡΙ3 α (ηΜ) mTOR (nM)

化合物 2 79 57

化合物 5 7.8 2.5

化合物 6 65.8 5.4

化合物 17 40.7 39.3

化合物 20 15.2 2.66

化合物 30 15.0 1.12 实验结论

由表 4可以看出, 本发明化合物对 ΡΙ3Κα和 mTOR酶均具有 4艮好 的抑制活性。 实验例 1-3 本发明化合物对药物靶点放射性配体的竟争结 合性 实验

目的 考察测试物浓度为 10 μΜ时, 对表 5所列主要非激酶药物 ί巴点放射性配体的竟争结合性 ( Broad ligand profiling completedLead Profiling Screen ) , 测试物对于这些靶点的抑制率大于 50%, 则认为测 试物对该靶点有抑制活性; 测试物对于这些靶点的抑制率小于 50%, 认为测试物对该靶点无抑制活性, 说明测试物对这些靶点无选择性, 不存在潜在副作用。

测试物

本发明化合物 5 , 自制, 其化学名称和结构式见制备实施例 1。 试马 方法

放射性配体结合实险 ( Radioligand Binding assay )

实验方法和条件参见国际药品检测解决方案服 务商 Eurofins Panlabs官网。

测试物浓度 10μΜ, 复孔, 用放射标记配体的方法, 检测测试物对 表 5所列靶点配体的抑制率。 实验结果 本发明化合物 5的配体竟争结合抑制率 (%)

实验结论

由表 5可知, 本发明化合物 5对所列的非激酶药物靶点配体的抑 制率均小于 50%, 无抑制作用, 说明本发明化合物 5 具有非常好的选 择性, 仅对激酶靶点具有良好的抑制作用。 实验例 2 本发明化合物的体外细胞学抑制活性

测试物 本发明化合物, 自制, 其化学名称和结构见制备实施例。 下述实验中所用细胞株代表的含义如下:

A549: 人肺癌细胞株;

U87MG: 人脑星形胶质母细胞瘤细胞株;

PC-3: 人前列腺癌细胞株;

SKOV-3: 人卵巢癌细胞株;

Lovo: 人结肠癌细胞株;

HCT116: 人结肠癌细胞株;

BT474: 人乳腺导管瘤细胞株;

786-0: 人肾透明细胞癌细胞株;

MCF-7: 人乳腺癌细胞株;

A498: 人肾癌细胞株。

实验方法

1. 试剂和化合物配制

1.1 配制磷酸緩沖液 (PBS) : 分别称取 8gNaCl, 0.2g KC1, 1.44gNa 2 HP0 4 和 0.24 gKH 2 P0 4 , 加入 800 mL 超纯水, 调至 pH=7.4, 加入超纯水, 定容至 1L, 高压灭菌 20min。

1.2 配制 XTT检测工作液: 称取 lOOmg 曱基四氮盐 (XTT) 粉末,避光溶解于 300 mL 加热至 50°C的不含酚红的无血清 RPMI1640 培养液中, 过滤, 分装, 立即或一周内使用, 所有过程需避光。

1.3 配制测试化合物

配制测试化合物储液: 将化合物粉末溶解于 DMSO中, 浓度为

10 mM。

配制测试化合物梯度稀释溶液: 取 10 mM 的测试化合物储液 用 DMSO 4倍连续梯度稀释, 共 10个浓度。 然后分别取 2 L的 DMSO 稀释的化合物加到 998 L含 10% 胎牛血清 (FBS) 的培养液中, 测试 物最高浓度为 20μΜ, DMSO 浓度为 0.2%, 共 10个浓度梯度。

2. 细胞培养: 2.1 细胞复苏 .·

从液氮中取出细胞冻存管,置于 rc ~ 39°c水浴中,快速融化。 将冻存液转移至 15 mL 无菌离心管中, 加入 10倍于冻存液体 积的培养液, 于 1000 rpm, 4 °C离心 5 miru 弃除离心管中培养液 , 力口 入含 10% FBS的培养液, 重悬细胞, 转移到培养瓶中, 第二天换液。

2.2 细胞传代

取对数生长期细胞, 弃除培养液, 加入适量体积 PBS洗一次, 再加入适量体积的含 0.25%胰酶和 0.02% EDTA 的消化液。 37 放置 2 ~ 5 mm, 弃去消化液, PBS洗一次。 加入适量体积含 10% FBS 的培 养液终止消化, 移液管轻轻吹打, 将细胞消化后制成细胞悬液供传代 和实验。

2.3 细胞冻存

取对数生长期细胞, 用含 0.25%胰酶和 0.02% EDTA 的消化液 消 细月包, 制成细月包悬液, 于 1000 rpm、 4°C离心 5 min。 弃去培养液, 加入含 10% DMSO和 90% FBS 的冻存液, 重悬细胞, 每管 2 >< 10 6 个 细胞分装于冻存管中。将冻存管置于程序降温 盒中,在- 80 °C放置 24 h 后, 转移到液氮中冻存。

3. 细胞铺板

3.1 制备细胞悬液: 去除培养瓶中的培养基; 用 PBS 润洗细 胞两遍; 加胰酶消化离心收集; 用含 10% FBS胎牛血清的培养基重悬, 计数并调整到合适浓度(细胞活力必须大于 90%); 细胞浓度为 5 χ 10 4 /mL;

3.2 将细胞悬液加入 96孔板每孔 100 μΐ , 置于 37°C , 5% C0 2 细胞培养箱中培养过夜;

4. 药物处理: 向细胞培养板中加入稀释好的测试化合物, 共三个 重复, 每孔 ΙΟΟμΙ , 终体积 200μ1, 起始浓度为 10 μΜ, 4 倍稀释, 共 10个浓度梯度; 放入 C0 2 细胞培养箱中培养 72小时;

5. XTT 法检测细胞活力: 去除培养基, 加入 XTT检测工作液, 150μί每孔, 在 37°C、 5% C0 2 细胞培养箱中放置 2小时, 放入酶标仪 中读取 450nm吸光;

6. 数据处理

1) 抑制率 (%) = (溶剂对照孔读数-测试物孔读数 )/(溶剂对照 孔读数 -空白对照孔读数 ) X 100%;

2) 输入 GraphPadPrism5.0作图, 得到曲线及 IC

实验结果

本发明化合物 体外细胞学活性 (ic

表 8 本发明化合物的体外细胞学活性 (IC 50 , n ) 测试物 U87MG A549 PC-3 SKOV-3 化合物 6 37.65 89.53 35.81 63.06 表 9 本发明化合物 体外细胞学活性 (IC 50 , nM)

测试物 U87MG A549 PC-3 SKOV-3 化合物 30 28.30 106.6 25.65 57. 实验结论

由表 6~9可以看出,本发明化合物可以有效地抑制 U87MG、A549 等细^的增殖。 实验例 3 本发明化合物的大鼠体内药代动力学实验

受试动物 雄性 SD大鼠(体重 190g~260g),静脉推注给药(I.V) 和灌胃给药(P.O), 每种给药途径分别采用大鼠 3只。

测试物 本发明化合物, 自制, 其化学名称和结构见各制备实施 例。

化合物 5 的 I.V和 P.0给药均采用 30%DMF+50% PEG400+20% (0.9%氯化钠注射液)(用盐酸水溶液 (2mol/L) 适量调节 pH) 溶解。 化 合 物 6 的 I.V 和 P.O 给 药 均 采 用 30%DMF+30%PEG400+5%0.1mol/l盐酸 +45%生理盐水溶解。

化合物 30的 I.V给药采用 30%DMF+50°/。PEG400+20%生理盐水溶 解。 P.0给药采用 5%DMSO+30%聚氧乙烯蓖麻油 +65%生理盐水溶解。

化合物 30盐酸盐的 I.V给药采用 30%DMF+50%PEG400+20%灭菌 注射用水溶解。

实验方法

1. 给药 测试物给药方式与剂量见下表 10-1 ,10-2。 表 10-1 测试物给药方式、 剂量及体积

表 10-2

2. 采血 I.V采血时间点: 给药后 0.083 h、 0.25 h、 0.5 h、 1 h、 2 h、 4 h、 6 h、 8 h和 24 h,

P.O采血时间点: 给药后 0.17 h、 0.5 h、 1 h、 2 h、 4 h、 6 h、 8 h 和 24 h。

每个时间点采取 100 左右全血, 肝素钠抗凝。 在 8000转 /分钟 的高速离心机中离心 6分钟分离血浆, 血浆于 -80 °C;水箱冻存。 3. 血浆样品分析 采用液液萃取法进行血浆样品处理, 取 20μί 血浆, 加入浓度为 10ng/mL的 ΒΕΖ-235(诺华, 临床 II期)叔丁基甲醚 溶液 600 作为内标, 1500转 /分钟涡旋 10分钟, 然后 12000转 /分钟 离心 5分钟, 取上清液 40(^L于氮气下吹千, 用 200μΙ^甲醇:水 (7:3 , V/V ) 复溶; LC-MS/MS分析。

实验结果 见下表 1 1、 12- 1、 12-2。

计算公式 绝对生物利用度?% = [AUC] last (P.o)*Dose (I .v) I [AUC] last (i.v) *Dose p. 0 ) 表 1 1 本发明化合物的大鼠 PK评价结果 (I.V)

本发明化合物的大鼠 PK评价结果 (P.O)

AUCi ast 代表药时曲线下面积

AUC lnf 代表药时曲线下面积

CL代表清除率

V ss 代表表观分布容积

T 1/2 代表半衰期

T max 代表血药达峰时间

C max 代表血药峰浓度

F%代表绝对生物利用度 实验结论

由表 1 1、 12-1、 12-2可看出, 无论静脉注射给药或口服给药, 本 发明化合物具有良好的药代动力学特性。 具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式, 对本发明的上述内容作进 一步的详细说明。 但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限 于以 下实施例。

下文中所用缩写的名称如下:―.

EtOAc: 乙酸乙酯;

EA: 乙酸乙酯;

PE: 石油醚;

HATU: 2-(7-偶氮苯并三氮唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四曱基脲六氟磷酸酯; DCM: 二氯甲烷;

DMF: 二甲基甲酰胺。

5-(4,4,5,5-四甲基 - 1 ,3,2-二氧杂环戊硼烷 -2-基)吡啶 -2-胺, 自制, 制 备方法如下:

将 2-氨基 -5溴吡啶(5.1 g, 30 mmol )、联硼酸频那醇酯( 10.7 g, 45 mmol )、碳酸钾 ( 8.3 g, 60 mmol )、四(三苯基膦)钯 ( 693 mg, 0.6 mmol ) 加入到 150 mL二氧六环和 2 mL水中,在氮气保护下回流反应 4小时。 冷却到室温, 过滤, 浓缩, 粗品溶于 300 mL二氯甲烷, 用水洗涤, 用 无水硫酸钠干燥, 浓缩至剩余少量溶剂时, 向其中加入石油醚析出黄 色固体, 过滤, 得到产物 ( 1.8 g ) 。

5-(4,4,5,5-四甲基 -1 ,3,2-二氧杂环戊硼烷 -2-基)嘧啶 -2-胺, 购自南京 药石药物研发有限公司;

(2-甲氧基嘧啶 -5-基)硼酸, 购自 J&K Scientific Ltd.公司;

(6-曱氧基吡啶 -3-基)硼酸, 购自 J&K Scientific Ltd.公司;

5-(4,4,5,5-四曱基 - 1,3,2-二氧杂环戊硼烷 -2-基) 吡咯 [2,3-6]吡 啶, 购自南京药石药物研发有限公司; 实施例 1 9-(6-氨基吡啶 -3-基) -1-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶并 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1//,3//)-二酮 (化合物 5 ) 的制备

1 ) 6-氯 -4-((3- (三氟甲基)苯基)氨基) -1 -萘啶 -3-甲酸乙酯

将 4,6-二氯 - 1 ,5-萘啶 -3-羧酸乙酯(5.4 g, 20 mmol)(其制备方法参见 WO2013/2071698说明书第 38页)、间三氟甲基苯胺(4.5 g, 28 mmol) 和 碳酸钾 (5.5 g, 40 mmol)加入到 150 mL叔丁醇中, 加热至 90 °C反应 18 小时。将反应液冷却至室温后旋干, 加入 300 mL水, 将所得固体过滤, 用乙酸乙酯和石油醚(1/20, 50 mL)洗涤, 得到 6-氯 -4-((3- (三氟曱基)苯 基)氨基) - 1 ,5-萘啶 -3-甲酸乙酯, 为黄色固体 (6.0 g)。

2 ) 6-氯 -4-((3- (三氟甲基)苯基)氨基) -1 ,5-萘啶 -3-羧酸

将 6-氯 -4-((3- (三氟曱基)苯基)氨基) -1 ,5-萘啶 -3-甲酸乙酯 (3.95 g, 10 mmol)溶于 50 mL甲醇和 50 mL四氢呋喃中, 滴加氢氧化锂(1.26 g, 30 mmol)的水 (50 mL)溶液。 滴加完毕后, 在室温下反应 4小时。 将反 应液浓缩, 加入 200 mL水, 用盐酸调节 pH值至 3 , 将所得固体过滤, 真空干燥得到黄色固体 P.6 g:)。

3 ) ΛΚ4-甲氧苄基) -6-氯 -4-((3- (三氟曱基)苯基)氨基) -1,5-萘啶 -3-甲 酰

将 6-氯 -4-(3- (三氟甲基)苯基氨基) -1,5-萘啶 -3-羧酸 (3.6 g, 9.8 mmol) 悬浮于 50 mL氯化亚砜中, 搅拌加热至 75 °C保持反应 4小时。 自然冷 却至室温, 浓缩, 得到黄色固体。 将其分散于 100 mL四氢呋喃中, 在 0 °C下滴入三乙胺 (3.03 g, 30 mmol)和对曱氧基苄胺(1.6 g, 13 mmol)的 混合物。 将反应液在室温下搅拌 4 小时, 旋蒸除去溶剂, 向残余物加 入 300 mL水, 抽滤, 滤饼用乙酸乙酯和石油醚 (体积比 1/10, 100 mL) 洗涤, 干燥, 得到 ΛΚ4-甲氧苄基) -6-氯 -4-(3- (三氟甲基)苯基氨基) -1,5- 萘啶 -3-曱酰胺, 为淡黄色固体 (4.5 g)。

4 ) 9-氯 -3-(4-曱氧基苄基) -1-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶并 [5,4-c][l,5〗 萘啶 -2,4( 1 H,3Fi)-二酮的制备

7V-(4-甲氧苄基 )-6-氯 -4-(3- (三氟甲基)苯基氨基) -1,5-萘啶 -3-甲酰胺 (4.5 g, 9.2 mmol)悬浮于氯甲酸乙酯(50 mL)中,加热至 90 °C ,搅拌 120 小时。 旋蒸除去挥发性物质, 硅胶柱层析 (EtOAc/PE=0~l/4)分离得到 9-氯 -3-(4-曱氧基苄基) -1-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶并 [5,4-c][l, 5 ]萘啶 -2,4( 1 Η,3Η)-二酮, 为黄色油状物(700 mg)。

5 )9-氯-1-(3-(三氟甲基)苯基)嘧啶[5,4 ][1,5]萘啶-2,4(1/ ,3 /)-二酮 的制备

将 9-氯 -3-(4-甲氧基苄基) -1-( 3 - (三氟甲基)苯基)嘧啶 [ 5 ,4-c|[l, 5 ]萘 啶 -2,4(1 ,3//)-二酮(700 mg, 1.36 mmol)溶于乙腈 (40 mL)和水(10 mL) 中, 在室温下分批加入硝酸铈铵 (2.9 g, 5.65 mmol)。 将反应液在室温下 搅拌 18小时后旋蒸除去溶剂,粗品硅胶柱层析 (EtOAc/PE=0〜l/4)分离得 到黄色固体 (400 mg)。

-(6-氨基吡啶 -3-基) -1 -(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶 [5,4-c|[l ,5]萘啶

将 9-氯- (3- (三氟曱基)苯基)嘧啶 [5,4-c][ l,5]萘啶 -2,4(1 3 )-二酮

(400 mg, 1 mmol)、 5-(4,4,5,5-四甲基 -1 ,3,2-二氧杂环戊硼烷 -2-基)吡啶 -2-胺 (440 mg, 2.0 mmol)、 碳酸钾 (414 mg, 3.0 mmol)和四(三苯基膦)钯 (58 mg, 0.05 mmol) 加入到 40 mL二氧六环和 2 mL水中 , 在氮气保护 下回流反应 18 h, 冷却到室温, 用硅藻土过滤, 浓缩, 通过硅胶柱层 析 (EtOAc/PE=0〜: 10/1 )分离得到粗品, 用甲醇洗涤, 得 9-(6-氨基吡啶 -3- 基) - 1-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶 [5,4-c|[ l ,5]萘啶 -2,4(1/ ,3/ )-二酮,为黄色 固体 (56 mg)。

分子式: C 22 H I3 F 3 N 6 0 2 LC-MS(m/e): 451.1(M+H)

^-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 12.28 (br. s., 1 H), 9.26 (s, 1H), 8.33 (m, 1 H), 8.21 - 8.26 (m, 1H), 8.16 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.81 (br. s., 1H), 7.70 (m, 2H), 6.76 (m, 1H), 6.46 (s, 2H), 6.24 (m, 1H). 实施例 2 9-(6-甲氧基吡啶 -3-基) -l -(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶并 [5,

将 9-氯 -1-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1 ,3 /)-二酮 (300 mg, 0.77 mmol)、(6-甲氧基吡啶 -3-基)硼酸(1 18 mg, 0.77 mmol)、碳 酸钾 (317 mg, 2.3 mmol)和四(三苯基膦)钯 (58 mg, 0.05 mmol)加入到 40 mL二氧六环和 2 mL水中, 在氮气保护下回流反应 18 h, 冷却到室温, 用硅藻土过滤, , 析出固体, 抽滤得粗品, 依次用 水、 乙酸乙酯和甲醇洗, 得 9-(6-甲氧基吡啶 -3-基) - 1-(3- (三氟甲氧基) 苯基)嘧啶 [5,4- ][l ,5]萘啶 -2,4(1/7,3//)-二酮(150 mg)。

分子式: C 23 H 14 F 3 N 5 0 3 LC-MS(m/e): 466.1(M+H)

! Η-ΝΜΚ(400Μζ, DMSO-d 6 ) δ: 12.32(br. s., IH), 9.33(s, IH), 8.45(d, J = 9.2, I H), 8.35(m, 2H), 7.89(m, 2H), 7.74(m, 2H), 7.05(m, IH), 6.65(m, IH), 3.89(s, 3H). 实施例 3 9-(2-甲氧基嘧啶 -5-基) - l-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶升

[

将 9-氯小 (3- (三氟甲基)苯基)嘧啶 [5,4-c)[l,5]萘啶 -2,4(1//,3/ )-二酮 (300 mg, 0.77 mmol)、 (2-甲氧基嘧啶 -5-基)硼酸(1 19 mg, 0.77 mmol)、碳 酸钾 (317 mg, 2.3 mmol)和四(三苯基膦)钯 (45 mg, 0.04 mmol)加入到 40 mL二氧六环和 2mL水中, 在氮气保护下回流反应 18 h, 冷却到室温, 用硅藻土过滤, 浓缩, 加水 40mL , 过滤得到粗品, 依次用乙酸乙酯 ( 30mL ) 和甲醇 UOmL ) 洗涤, 得 9-(2-甲氧基嘧啶 -5-基) -1-(3- (三氟 甲基)苯基)嘧啶 [5,4-c][l ,5]萘啶 -2,4(1//,3//)-二酮(150 mg)。 分子式: C 22 H 13 F 3 N 6 0 3 LC-MS(m/e): 467. 1(M+H)

J H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 12.35 (br. s., 1H), 9.35(s, 1H) ;

8.51 (d, J = 8.8 1H), 8.37 (d, J = 8.8, 1H), 8.31(s, 2H), 7.90 (s, 1H) ;

7.70-7.83 (m, 3H), 3.96 (s, 3H). 实施例 4 9-(2-氨基嘧啶 -5-基) -l -(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶并 [5,4-c l,5]萘啶 -2,4(1 ,3 )-二酮 (化合物 20 ) 的制备

将 9-氯 -1 -(3- (三氟曱基)笨基)嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1//,3/ )-二酮 (300 mg, 0.77 mmol), 5-(4,4,5,5-四甲基 - 1 ,3,2-二氧杂环戊硼烷 -2-基)嘧 啶 -2-胺(170 mg, 0.77 mmol), 碳酸钾 (317 mg, 2.3 mmol)和四(三苯基膦) 钯 (45 mg, 0.04 mmol) 加入到 40 mL二氧六环和 2 mL水中, 在氮气保 护下回流反应 18 h, 冷却到室温, 浓缩, 加入 400mL水, 过滤得到粗 品。 将粗品溶于 20mL 6M浓盐酸中, 用二氯曱烷洗涤( 4 x 50mL ) , 将水相滴加到碳酸钠水溶液中, 过滤, 水洗,粗品用甲醇洗涤,得 9-(2- 氨基嘧啶 -5-基) -1 -(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶 [ 5 ,4-c][l,5]萘啶 -2,4(l ,3/ )- 二酮(160 mg)。

分子式: C 21 H 12 F 3 N 7 0 2 LC-MS(m/e): 452.1(M+H)

^-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 12.25 (br. s., 1H), 9.29(s, 1H), 8.38 (d, 1H), 8.24 (d, J = 9.2, 1 H), 8.00 (s, 2H), 7.70-7.84 (m, 4H), 7. 14 (s 2H) 实施例 5 9-(1 -吡咯 [2,3-b]吡啶 -5-基) -l-(3- (三氟甲基)笨基)嘧啶 并 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4( 1 ,3/ )-二酮 (化合物 30 ) 的制备

将 9-氯 -l-(3- (三氟甲基)苯基)嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1/7,3//)-二酮 (300 mg, 0.77 mmol)、 5-(4,4,5,5-四曱基 -1 ,3,2-二氧杂环戊硼烷 -2- 基) 吡咯 [2,3-6]吡啶(188 mg, 0.77 mmol),碳酸鉀 (317 mg, 2.3 mmol) 和四(三苯基膦)钯 (45 mg, 0.04 mmol)加入到 40 mL二氧六环和 2mL水 中, 在氮气保护下回流反应 18 h, 冷却到室温, 浓缩, 加水 40 mL, 过 滤得到粗品。将粗品溶于 10 mL 6N盐酸中,用 00^洗涤(4 5011^ ) , 水相滴加到碳酸钠水溶液中, 过滤, 水洗, 粗品用甲醇洗涤, 得 9-(1 /- 吡咯 [2,3-b]吡啶 -5-基 )-1 -(3-(三氟曱基)苯基)嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1 ,3 )-二酮(170 mg)。

分子式: C 24 H 13 F 3 N 6 0 3 LC-MS(m/e): 475.1(M+H)

^-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 1 1.84 (br. s., 1H), 9.31 (s, 1H), 8.42 (s, 2H), 8.24 (m, 1H), 7.89 (s, 2H), 7.75 (s, 2H), 7.52 (s, 3H), 6.50 (s, 1H).

化合物

将化合物 30 ( 43mg, 0.09mmol )分散在 10mL甲醇中,加入 O. lmL 浓盐酸, 搅拌 1小时, 真空浓缩得到化合物 30的盐酸盐。 实施例 6 2-(4-(9- (氨基吡啶 -3-基) -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l ,5]萘啶 -1(2/ )-基)苯基) -2-曱基丙腈 (化合物 41)的制备

1) 2-甲基 -2-( -硝基苯基)丙腈

将 2-(4-硝基苯基)乙腈 (4.86 g, 30 mmol)溶于 50mL二氯曱烷中, 向 其中滴加301«1^氢氧化钠(3.6 g, 90 mmol)的水溶液, 然后向其中滴加碘 甲烷(10.65 g, 75 mmol)。 滴加完毕后, 在室温下避光反应 16小时。 加入 50 mL水和 lOO mL 二氯甲烷, 分液, 水相用 100 mL二氯甲烷萃取, 合 并有机相, 用无水石 酸钠干燥, 浓缩, 粗品通过硅胶柱层析 (EtOAc/PE=0~l/20)得到淡黄色固体 2-甲基 -2-(4-硝基苯基)丙腈 (4.5 g) 2) 2-(4-氨基 -2-曱基丙腈

将 2-甲基 -2-(4-硝基苯基)丙腈 (4.5 g, 23.6 mmol)力。到反应瓶中, 依 次加入 Pd/C (450 mg) 和 50 mL乙酸乙酯, 体系抽真空, 通入氢气, 在 室温下反应 15小时, 所得反应液通过硅藻土过滤, 用乙酸乙酯洗涤, 所得滤液浓缩得到无色油状物 2-(4-氨基苯基) -2-甲基丙腈 (3.5 g)。

3 6-氯 -4-((4-(2-氰基丙 -2-基)苯基)氨基) - 1 ,5-萘啶 -3-羧酸乙酯

将 4,6-二氯 -1 ,5-萘啶 -3-羧酸乙酯 (5.9 g, 21.9 mmol)和 2-(4-氨基苯 基) -2-曱基丙腈 (3.5 g, 21.9 mmol) 溶于 lOOmL叔丁醇中, 加入碳酸钾 (6.0 g, 43.8 mmol) , 加热至回流反应 15小时。 反应液冷却至室温后减压 浓缩,残余物加入 100 mL水和 100 mL DCM,分液,水相用 100 mL DCM 萃取, 合并有机相, 用无水硫酸钠干燥, 浓缩, 粗品通过硅胶柱层析 (EtOAc/PE=0~l/2)得到淡黄色固体 6-氯 -4-((4-(2-氰基丙 -2-基)苯基)氨 基) - 1 ,5-萘啶 -3-羧酸乙酯 (6.9 g)。

4) 6-氯 -4-((4-(2-氰基丙 -2-基)苯基)氨基) -ΛΚ4-甲氧苄基) - 1 ,5-萘啶 -3

将 6-氯 -4-((4-(2-氰基丙 -2-基)苯基)氨基) - 1,5-萘啶 -3-羧酸乙酯 (6.9 g. 17.5 mmol)溶于 50mL曱醇和 50mL四氢呋喃中,室温下滴加 50mL氢氧化 锂 (2.2 g, 52.4 mmol)的水溶液。 滴加完毕后, 在室温下反应 4小时。 将 反应液浓缩, 加入 200mL水, 用盐酸调节 pH值至 2 - 3, 将所得固体过 滤, 真空干燥得到黄色固体。 然后将其分散于 lOOmL二氯甲烷中, 加入 0.05mL DMF。 在水浴下, 向其中滴加草酰氯 (4.2 g, 33.3 mmol), 滴加 完毕后升至室温反应 4小时, 减压蒸除溶剂并用 lOOmL二氯甲烷溶解, 水浴下滴入三乙胺 (5.0 g, 49.8 mmol) 和对甲氧基苄胺 (2.7 g, 19.9 mmol) 的混合物。 滴加完毕后, 反应液在室温下反应 15小时, 加入 50 mL水和 100 mL DCM , 分液, 水相用 100 mL DCM萃取, 合并有机相, 用无水 疏酸钠干燥, 浓缩, 粗品硅胶柱层析 (EtOAc/PE=l/10〜3/2)得到淡黄色 固体 (4.0 g)„

5) 2-(4-(9-氯 -3-(4-曱氧苄基) -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l ,5] 萘 - 1 (2/ )-基)苯基) -2-甲基丙腈

将氢化钠(1.0 g, 25 mmol)悬浮于 25 mL DMF中 ,室温下往其中慢慢 滴入 6-氯 -4-((4-(2-氰基丙 -2-基)苯基)氨基) -N-(4-甲氧'苄基) -1,5-萘啶 -3- 甲酰胺 (2.43 g, 5 mmol)的 DMF溶液 (25 mL),滴加完毕后升温至 60°C反 应 1小时。 ;水浴下将氯甲酸乙酯(1.36 g, 12.5 mmol)緩慢滴加至反应液 中, 滴加完毕后升温至 60°C反应 16小时。 冷却至室温后緩慢倒入水中, 用乙酸乙酯萃取 (3x l 50mL) , 合并有机相, 用饱和食盐水洗涤, 用无水 硫酸钠干燥, 浓缩, 粗品通过硅胶柱层析 (EtOAc/PE=0 ~ 1/5), 得到淡 黄色固体(1.2 g)。

6) 2-(4-(9-氯 -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l ,5]萘啶 -1(2/ )-基)苯 基) -2-

2 _(4-(9-氯 -3-(4-甲氧苄基) -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l ,5] 萘啶 -1(2//)-基)苯基) -2-甲基丙腈(1.2 g, 2.3 mmol) 溶于乙腈 (80 mL)和 水 (20mL)中, 在室温下分批加入硝酸铈铵 (5.1 g, 9.4 mmol)。 反应液在 室温下反应 16小时后浓缩, 加入 100 mL水, 过滤, 固体用 EA和 PE(1:1) 洗涤, 真空千燥, 得到黄色固体 (600 mg)。

7) 2-(4-(9-(6-氨基吡啶 -3-基) -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l,5] 萘 - 1 (2/ )-基)苯基) -2-甲基丙腈

将 2-(4-(9-氯 -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -1(2 )-基)苯 基) -2-甲基丙腈 (392 mg, 1.0 mmol), 5-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂环戊 硼烷 -2-基)吡啶 -2-胺 (440 mg, 1.0 mmol, 含量 50%)和四(三苯基膦)钯 (46 mg, 0.04 mmol) 溶于 40 mL二氧六环中,往其中加入碳酸钾 (276 mg, 2 mmol)的 1 mL水溶液。 在氮气保护下于 100°C反应 15 ~ 18小时, 然后 冷却到室温, 浓缩, 过滤, 水洗, 粗品依次用乙酸乙酯、 甲醇洗涤, 得到淡黄色固体 2-(4-(9-(6-氨基吡啶 -3-基) -2,4-二氧代 -3,4-二氢嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -1(2/ )-基)苯基) -2-甲基丙腈 (150 mg)。

分子式: C 25 H 19 N 7 0 2 LC-MS(m/e): 450.1(M+H) lU NMR(400Mz, OMSO-d 6 ) δ: 12.19(br. s, 1H), 9.24(s, 1H), 8.30(d, J = 8.8, 1H), 8.17(d, J = 8.8, 1H), 7.97(m, 1H), 7.59(m, 2H), 7.42(m, 2H), 7.20(m, 1H), 6.32~6.40(m, 3H), 1.73(s, 6H). 实施例 7 9-(6-氨基吡啶 -3-基) -3-甲基 -l-(3- (三氟曱基)苯基)吡啶 [ 5 ,4-c][l, 5 ]萘啶 -2,4(1 ,3 )-二酮(化合物 6 )的制备

1) 6- -4-((3- (三氟曱基)苯基)氨基) -1,5-萘啶 -3-甲酰胺

将 6-氯 -4-((3- (三氟甲基)苯基)氨基) -1,5-萘啶 -3-甲酸乙酯 (3.95g, lOmmol)溶于 50mL 曱醇和 50mL 四氢呋喃中, 滴力。 50mL 氢氧化锂 (1.26g, 30mmol)的水溶液, 滴加完毕后, 室温搅拌 4小时, 将反应液浓 缩, 加入 200mL水, 用盐酸调 pH值为 2〜3, 抽滤, 干燥。

将所得固体和甲胺盐酸盐 (924mg, 13.7mmol)置于 40mL DMF中, 加入三乙胺 (5.99g, 58.8mmol), 然后加入 HATU(5.6g, 14.7mmol), 将反 应液在室温下搅拌 4小时, 加 300mL水, 抽滤, 滤饼经水洗, 通过硅 胶柱层析(乙酸乙酯 /石油醚 = 0- 1/1)分离得 6-氯 -Λ-甲基 -4-((3- (三氟 甲基)苯基)氨基 -1,5-萘啶 -3-甲酰胺, 为淡黄色固体 (2.5g)。

2) 9-氯 -3-甲基 -1-(3-(三 氟曱基)苯基)嘧啶 [5,4-c][l,5]萘 啶) -2,4(1/,3 -二酮

将氢化钠(1.3g, 33mmol)悬浮于 40mL DMF中, 在 0°C下, 将 6- 氯 _AL曱基 _ 4 _((3- (三氟甲基)苯基)氨基 -1 ,5-萘啶 -3-甲酰胺 (2.5g, 6.6mmol) 的 DMF(60mL)溶液緩慢滴入, 滴加完毕后升至室温搅拌 1 小时, 冰水 浴下, 将氯甲酸乙酯(1.8g, 16.5mmol)緩慢滴加至反应液中, 完毕后升 至 60。C搅拌 16小时, 然后冷却至室温加水, 用乙酸乙酯萃取, 合并 有机相并将其用饱和氯化钠溶液洗涤, 用无水硫酸钠干燥, 通过硅胶 柱层析(乙酸乙酯 /石油醚 =0- 1/5)得黄色油状物(1.2g)。

3) 9-(6-氨基吡啶 -3-基) -3-甲基 -1-(3- (三氟甲基)苯基)吡啶

[5,4-c l,5]萘啶 -2,4(1 3 /)-二酮

将 9-氯 -3-甲基 -1-(3-(三氟甲基)苯基) -嘧啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1 ,3/ )-二酮 (609mg, 1.5mmol)、 5-(4,4,5,5-四曱基 -1,3,2-二氧杂环 戊硼烷 -2-基)吡啶 -2-胺 (660mg, 1.5 mmol, 含量 50%)和四(三苯基膦) 4巴(70mg, 0.06mmol)力口入 i'J 40mL 二氧六不中, 力口入 20mL 酸 4甲 (621mg, 4.5mmol)水溶液, 在氮气保护下, 在 105°C反应 18小时, 然 后冷却, 用硅藻土过滤, 浓缩, 通过硅胶柱层析(乙酸乙酯 /石油醚 =0~ 10/1)得到粗品, 将其溶于 50mL 6M盐酸, 用二氯曱烷洗涤, 水相滴加 至碳酸钠水溶液中, 抽滤, 依次用水、 曱醇洗涤, 干燥, 得 9-(6-氨基 吡啶 -3-基 )-3-曱基 -1-(3-(三氟曱基)苯基)吡啶 [5,4-c][l,5]萘啶 -2,4(1 /,3 )-二酮(500mg)。

lH NMR(400Mz, OMSO-d 6 ) δ: 9.33(s, 1H), 8.34(m, 1H), 8.25(m, 1H),

8.16(m, 1H), 7.91(s, 1H), 7.82(m, 1H), 7.71(m, 2H), 6.78(m, 1H), 6.47(s, 2H), 6.25(m, 1H), 3.37(s, 3H)