本发明涉及化妆品技术开发领域， 具体涉及一种保湿祛皱及舒敏功效的植物组合 物及其制备方法。

背景技术

现代人皮肤瘙痒、 起皱、 敏感等皮肤干燥现象严重。 皮肤水含量充足， 是皮肤屏 障、 吸收、 代谢等生理功能的基础。 充分的水合作用有利于酶反应并可促进角质层 成 熟， 保持角质层的弹性;有利于角质层细胞自身发� �膨胀， 结构的致密程度降低， 物质 的渗透性增加； 含水较多的角质层有规则的反射可形成明亮的 光泽， 而干燥、 有鳞屑 的角质层以非镜面反射的形式反射光线， 使皮肤灰暗。 因此， 如今绝大部分的女性将 护肤重点集中到了皮肤保湿上， 保湿功效也成为护肤品中的重中之重。

皮肤保持水的能力主要和角质层有关， 角质层对水损失起了屏障作用。 角质层存 在氨基酸或盐、糖等水溶性的保湿物质 (natural moisturizing factor, 简称 NMF， 也称自 然保湿因子)和细胞脂质、皮脂等油性成分（� �在于皮肤表皮的称表皮皮脂)，其中天然 保湿因子占 30%， 油性成分占 11%， 这些油性成分与天然保湿因子相结合， 或包围天 然保湿因子防止其流出， 对水分挥发起着适当的控制作用。 此外， 皮肤中还存在着若 干水通道影响皮肤水分运输。 水通道蛋白 3 (AQP3 )是皮肤中表达最多的水通道， 使 用 RT-PCR方法发现 AQP3在人表皮角质细胞和角质层中含量都最为� �富。 AQP3对 角质细胞的水保持具有十分重要的意义。对 AQP3基因敲除的无毛小鼠表型观察发现， 该小鼠发育基本正常， 但 AQP3基因敲除小鼠的表皮角质细胞含水量显著� �低， 暴露 于干燥情况下水损失数量也明显高于正常小鼠 。

"健康、 天然"是美容事业的口号。 中国有着制造和使用天然植物化妆品的悠久 历史， 丰富的实践经验和技术优势， 而且中国地大物博， 在其独特的地理环境及气候 条件下， 生长着许多各具特色的天然植物。 这些植物因其不同的特性，长期以来用于美 容，具有滋润肌肤，防止外界各种有害因素对 肌肤伤害的作用。

本专利正是基于此， 从天然植物中开发以保湿功效为主， 并且具有抗衰老与抗敏 感作用的化妆品添加剂， 对多种植物提取复配， 通过成膜、 持水、 维持正常水通道蛋 白生理功能等途径， 协同增效， 到达全方位的保湿抗衰老抗敏感效果。 本发明的目的是提供一种保湿祛皱及舒敏功效 的植物组合物及其制备方法。

本发明提供的中药组合物， 其活性成分为如下原料混合物的水提液- 石斛、 三色堇、 麦冬、 银耳和燕麦原料; 说 明 书 其中， 所述燕麦原料为燕麦粒、 燕麦粉或燕麦麸皮。

上述组合物中， 燕麦粒为带麸皮或不带麸皮的燕麦粒；

所述燕麦粉为全籽燕麦粉或燕麦精粉； 所述全籽燕麦粉为将全籽燕麦粉碎后过

100目筛而得。

所述石斛、 三色堇、 麦冬、 银耳和燕麦原料的质量比为

5-15： 2-10： 2-10： 1-5： 1-5， 具体为 12: 6： 3： 2： 2、 5： 8： 2： 1： 1、 12： 3： 6： 5： 4、 5-12： 3-8： 1-5： 1-4、 12： 3-6： 2-5： 2-4；

所述水提液中， 水提步骤所用水与石斛的质量比为 160-220: 5-15, 具体为 160: 12、 220： 5、 200： 12、 160-200： 12、 200-220： 5-12、 160-220： 5-12。

所述水提液为按照包括如下歩骤的方法制备而 得：

将所述石斛、 三色堇、 麦冬、 银耳、 燕麦原料和水按配比混匀后提取而得； 所述提取歩骤中， 温度为 60-100°C， 具体为 65°C、 80°C、 100°C、 65°C-100°C、 80°C-100°C或 65-80°C ; 时间为 1-4小时， 具体为 2小时。

本发明提供的制备所述组合物的方法， 包括如下步骤- 将所述石斛、 三色堇、 麦冬、 银耳、 燕麦原料和水按照权利要求 2或 3所述配比 混匀后于提取得到水提液。

上述方法所述提取歩骤中， 温度为 60-100°C， 具体为 80°C ; 时间为 1-4小时， 具 体为 1、 2、 4、 1-2小时或 2-4小时。

所述方法还包括如下步骤- 在所述提取歩骤之后， 将所得水提液静置后过滤， 收集滤液。

其中， 所述静置步骤中， 温度为室温， 时间为 1-4小时， 具体为 1、 2、 4小时； 过滤歩骤中， 滤孔的目数为 100-200目。

另外， 上述本发明提供的组合物在制备具有如下任一 一种功能产品中的应用， 也 属于本发明的保护范围-

1 ) 保湿；

2) 抗衰老；

3 ) 抗过敏；

4) 防皲裂。

本发明选用石斛、 三色堇、 麦冬、 燕麦原料、 银耳五种植物组合提取后外用， 通 过持水、维持正常水通道蛋白生理功能等途径 ，达到保湿作用同时兼具延缓皮肤衰老、 抗敏感及防皲裂的功效。

附图说明

图 1为皮肤表面的含水量百分比随时间的变化曲� �。 说 明 书 图 2为皮肤表面的水份散失量随时间的变化曲线� �

图 3为组合物对 DPPH的清除效果。

图 4为组合物对透明质酸酶的抑制效果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一歩阐述， 但本发明并不限于以下实施例。 所 述方法如无特别说明均为常规方法。 所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径 而 得。 实施例 1、

按照如下歩骤制得中药组合物：

1 ) 将石斛、 麦冬、 银耳剪碎， 三色堇、 燕麦麸皮粉碎后， 按照质量配比石斛- 三色堇： 麦冬： 银耳： 燕麦麸皮： 水 =12: 6： 3： 2： 2： 160混匀后放置于电热恒温水 浴锅中， 于 80°C提取 2小时， 将提取结束的溶液从恒温水浴锅中取出， 在室温下静置 冷却 2h至常温后， 用 200目纱布进行粗过滤， 滤出药渣， 得滤液。在布氏漏斗里铺两 层滤纸，滤纸中间夹 0.5cm左右硅藻土，将粗过滤所得滤液进行真空� ��滤，收集滤液， 得到本发明提供的中药组合物 A。 实施例 2、

按照如下歩骤制得中药组合物-

1 ) 将石斛、 麦冬、 银耳剪碎， 三色堇、 燕麦麸皮粉碎后， 按照配比石斛： 三色 堇- 麦冬： 银耳： 燕麦麸皮： 水 =5: 8： 2： 1： 1： 220， 混匀后放置于电热恒温水浴锅 中， 于 100°C提取 4小时， 将提取结束的溶液从恒温水浴锅中取出， 在室温下静置冷 却 4h至常温后， 用 100目纱布进行粗过滤， 滤出药渣， 得滤液。在布氏漏斗里铺两层 滤纸， 滤纸中间夹 0.5cm左右硅藻土， 将粗过滤所得滤液进行真空抽滤， 收集滤液， 得到本发明提供的中药组合物 B。 实施例 3、

按照如下步骤制得中药组合物-

1 ) 将石斛、 麦冬、 银耳剪碎， 三色堇、 燕麦麸皮粉碎后， 按照配比石斛： 三色 堇： 麦冬： 银耳： 燕麦麸皮： 水 =12: 3： 6： 5： 4： 200， 混匀后放置于电热恒温水浴 锅中， 于 65°C提取 1小时， 将提取结束的溶液从恒温水浴锅中取出， 在室温下静置冷 却 lh至常温后， 用 200目纱布进行粗过滤， 滤出药渣， 得滤液。在布氏漏斗里铺两层 滤纸， 滤纸中间夹 0.5cm左右硅藻土， 将粗过滤所得滤液进行真空抽滤， 收集滤液， 说 明 书 得到本发明提供的中药组合物 C。 实施例 4、 实施例 1、 实施例 2、 实施例 3所得中药组合物 A、 B、 C的保湿效果 评价

1.保湿效果——人体皮肤角质层水合率试验 /角质层水分散失试验

测试样品为膏霜， 均按照如下方法配制而得- 将实施例 1-3任一所得中药组合物加入到空白膏霜基质的 B相得到膏霜， 其中中 药组合物在膏霜中的质量百分含量均为 5%。

其中， 实施例 1所得中药组合物 A对应膏霜 1， 实施例 2所得中药组合物 B对应 膏霜 2， 实施例 3所得中药组合物 C对应膏霜 3。

另以所用空白膏霜基质作为空白对照。

所用空白膏霜基质的制备方法如下- 按照表 1所得配方， 将 A相各原料加热， 混合均匀， 加热到 82 ; 将 B相各原 料加热， 混合均匀， 加热到 82°C ; 在 B相中于 2000r/min的转速下均质， 将 A相缓慢 倒入 B相中， 均质 5min; 均质完成后， 搅拌降温； 40Ό时加入 C相， 搅拌均匀， 即 得空白膏霜基质。

表 1、 空白膏霜基质配方

测试前经专业人员培训过的健康受试者 30名 (男女各 15名)， 年龄在 20~30岁， 说 明 书 所有受试者均无皮肤或系统性疾患史， 受试部位无异常， 且受试期间不涂抹任何与实 验无关的药物或者化妆品。

测试场所室温 （25±1 ) V , 相对湿度 （40±5 ) %, 测试前受试者应保持机体为稳 定状态。使用 35Ό左右的清水擦拭受试者双臂后， 于测试环境下静坐 30min后开始测 试。

在受试者手臂内侧距手掌基部 5cm处， 标记受测区域 （4 _C mx4 _C m)， 同一手臂可 同时标记多个区域 （间隔 lcm) , 测试样品均随机分布。 先测量各测试区域的空白值， 然后测试样按 （2.0±0.1 ) mg/cm ² 的用量进行单次涂布， 涂布后釆用多功能皮肤水分 测试仪和皮肤水分散失仪分别测量 0.5h、 l h 、 2 h和 4 h受试区域和空白对照区域的 皮肤水合状态值、 水分散失量值。

测试将受试者涂抹同一样品区域内 5次测得的数据取平均值， 采用 SPSS统计软 件进行 t检验分析。

实验结果

①皮肤水分含量变化

水分含量变化反映在测试周期内， 实验区域水分含量随时间变化规律其值越大， 水分含量越大， 反之， 水分含量越小。

水合率 = (样品组水分含量一起始水分含量 )/起始水分含量

所得结果如图 1所示。

结果显示： 各实施例所得中药组合物均具有很好的抗干燥 保湿作用， 其中以实施 例 1 中药组合物 A 的抗干燥保湿效果最好。

②皮肤水分散失变化

皮肤水分散失量 （Transepidermal water loss,TEWL) 反映了测试周期内， 实验区 域水分散失随时间的变化规律， 它可以表征测试样品的锁水功能， 其值越小， 水分散 失越少， 锁水能力越强； 反之， 锁水能力越弱。

失水率 (％ _H 样品组水分散失量一起始水分散失量 )/起始水分散失量 X 100 水分散失结果见图 2。

结果显示： 4h 内， 各实施例所得中药组合物均具有锁水效果， 且中药组合物 A 的失水率最低， 锁水效果最显著。

综上所诉， 本发明提供的中药组合物能使皮肤水分含量升 高， 水分散失降低， 具 有很好的锁水能力， 对皮肤具有显著的保湿效果。 实施例 5、实施例 1、实施例 2、实施例 3所得中药组合物 A、 B、 C对 AQP3 mRNA 说 明 书 表达量的影响

水通道蛋白 (aquaporins, AQPs)是一组与水、甘油及部分小分子物质跨膜� ��运相关 的细胞膜转运蛋白。 AQP3表达于包括皮肤在内的多种组织和器官。 正常表皮 KC仅 在基底细胞层表达 AQP3。 AQP3为上皮细胞膜提供一个孔道，保持细胞内� �透压和细 胞容积， 在水的转运中发挥作用。 AQP3 的甘油转运功能对皮肤的水合作用， 弹性保 持及损伤后的修复功能起着关键性作用。 本研究的组合物可通过保湿途径发挥修复皮 肤屏障和提高角质层水含量作用外， 可能还通过调节 AQP3水平而发挥这些作用， 我 们对 C3H鼠在应用中药组合物 A、 B、 C溶液后，采用实时定量 PCR检测鼠皮中 AQP3 mRNA的表达含量， 并与生理盐水做对照。

实验方法：

( 1 ) 分组： 实验小鼠共 20只， 分为实施例 1样品组 A、 实施例 2样品组 B、 实 施例 3样品组 C、 阴性对照组， 每组 5只。

样品组： 将实施例 1-3任一所得中药组合物和去离子水以 5: 95的质量比混匀而 得中药组合物的水溶液， 将该中药组合物的水溶液分别涂抹在实验小鼠 上， 每天涂抹 1次；

对照组： 每天涂抹生理盐水 1次， 即保持正常生理状态的皮肤。

(2)先用脱毛膏将小鼠上腹部毛发去除， 按分组分别每天在每只小鼠腹部涂抹 1 次， 吸收后放入词养盒中， 30天后处死取皮肤。

(3 ) 皮肤用 dispase分离表皮， 通过胰酶分离成单个角质形成细胞。 用 Trizol抽 提角质形成细胞中的 RNA, 并逆转录成 cDNA后通过实时定量 PCR SYBRGREEN法 (QIAGEN 204143) 。 PCR 的 引 物 序 列 及 条 件 如 下 ： aqp3 sense ： 5'-TTGGTGGCTGGCCAAGTGTC-3';aqp3

antisense: 5' -GTCTGTGCC AGTGC ATAGAT-3 ' ； B— actin sense ：

5'-TGTATGCCTCTGGTCGTACC-3';B— actin antisense ：

5' -C AGGTCC AGACGC AGGATG-3 '。

94°C2 min _; 94°C40 s _; 62°C30 s _; 72°C20 s; 35个循环。

(4)统计学方法结果用 One— way ANOVA t检验。

不同方法处理后 AQP3 mRNA表达量如表 2:

表 2、 不同添加量组合物溶液对小鼠皮肤 AQP3表达量的影响

] AQP3/B-actin

实施例 1样品组 A ~~ (5.004+0.015) E-03*

实施例 2样品组 B ( 4.08+0.05 ) E-03 说 明 书

实施例 3样品组 C (4.31+0.17) E-03

阴性对照组 （3.89±0.26) E-03

*表示与空白对照相比， P<0.05

实验结果显示，正常小鼠皮肤中，中药组合物 有上调 AQP3 mRNA表达量的作用， 通过激发角质层水或甘油的运输， 增强皮肤水合作用， 皮肤中水分结合分子 （如透明 质酸） 的产生增强、 皮肤干燥脱落现象减轻。 实施例 6、 实施例 1、 实施例 2、 实施例 3所得中药组合物 A、 B、 C的抗衰老功 能评价

现代研究表明， 日光辐射能够引发皮肤光老化。 日光中的紫外辐射能够引发皮肤 氧化应激反应， 产生过量的自由基， 造成细胞损伤； 而红外辐射能够引起皮肤真皮细 胞中基质金属蛋白酶 -1 (MMP-1 ) 的高表达， 进而加速真皮层中弹性蛋白和胶原蛋白 的降解， 令肌肤弹性丧失、 纹理加深。 本专利中涉及的中药组合物具有清除自由基与 抑制 MMP-1的功效， 能够延缓因日光中紫外与红外辐射造成的皮肤 光老化现象。

1 ) 自由基清除功效

DPPH (1， l-disphenyl-2-picryl-hydrazyl),化学命名为 1， 1二苯基 -2-三硝基苯肼， 是一种稳定的有机自由基。采用分光光度法进 行定量分析实施例 1、实施例 2、实施例 3所得的中药组合物 A、 B、 C对自由基的清除情况。

将实施例 1-3任一所得中药组合物和去离子水以 5: 95的质量比混匀， 得到中药 组合物的水溶液；

以该中药组合物的水溶液作为试验组；

其中， 实施例 1所得中药组合物 A对应样品 1 ;

实施例 2所得中药组合物 B对应样品 2 _;

实施例 3所得中药组合物 C对应样品 3; 将试验组中的中药组合物替换为维生素 C衍生物， 所得水溶液作为阳性对照； 测定结果如图 3。

实验结果表明，各实施例所得中药组合物在其 水溶液中的质量百分含量为 5.0%时， 均巳具有对 DPPH清除能力， 具有降低羟自由基、 烷自由基或氧化自由基的有效浓度 和打断脂质过氧化链反应的作用， 从而具有良好的延缓皮肤光老化的作用。

2) 基质金属蛋白酶 -1抑制作用

采用荧光底物法检测中药组合物对 MMP-1活性的影响。 实验方法参照 《两种化 说 明 书 妆品延缓衰老功效添加剂体外筛选方法的建立 及应用研究》（来吉祥， 2007)所述实验 方法。

将实施例 1-3任一所得中药组合物和去离子水以 5: 95的质量比混匀， 得到中药 组合物的水溶液；

对上述水溶液进行测定， 所得结果如表 3 ;

表 3、 组合物对 MMP-1抑制效果

名称 抑制率 （％)

1 实施例 1组合物 A 81.63

2 实施例 2组合物 B 47.64

3 实施例 3组合物 C 60.98 结果显示， 各实施例组合物， 均具有对由红外辐射诱导产生的 MMP-1 的抑制作 用， 能够减少由于光照引起的胶原蛋白与弹性蛋白 的过度降解， 保持皮肤弹性， 减轻 皮肤光老化的作用。 实施例 7、 实施例 1、 实施例 2、 实施例 3所得中药组合物 A、 B、 C的抗敏功效 评价

透明质酸是组织基质中具有限制水分及其它细 胞外物质扩散作用的成分， 经透明 质酸酶水解后， 细胞间则成为非粘性， 细胞脱颗粒和合成的新介质渗出， 发挥生物效 应， 导致速发型过敏反应的发生。 因此常用样品对透明质酸酶的抑制程度来反应 样品 对 I型超敏反应的缓解和改善作用。

按照下述方法测定实施例 1、 实施例 2、 实施例 3所得中药组合物 、 B、 C对透 明质酸酶的抑制程度- 将实施例 1所得中药组合物 A和去离子水以 5: 95的质量比混匀得到样品溶液

C1 ;

将实施例 2所得中药组合物 B和去离子水以 5: 95的质量比混匀得到样品溶液

C2;

将实施例 3所得中药组合物 C和去离子水以 5: 95的质量比混匀得到样品溶液

C3;

试验设三次重复。 每次重复的处理方法如下：

取 7个试管， 分别标记为 A、 B、 Cl-C3、 D和 E;

按照表 4各对应列的顺序添加试剂， 并进行相应步骤的操作: 说 明 书 其中， A管添加的为对照溶液， 对应表 4中 A列;

B管添加的为对照空白溶液， 对应表 4中 B列；

D管添加的为样品空白溶液， 对应表 4中 D列；

E管添加的为阳性对照溶液， 对应表 4中 E列；

C1-C3管均按照表 4中 C列的顺序添加试剂；

C1管添加的样品溶液为样品溶液 C1 ;

C2管添加的样品溶液为样品溶液 C2 _;

C3管添加的样品溶液为样品溶液 C3;

测定上述各管在波长为 555nm处的吸光度值， 也即 ABS值后， 按照如下抗过敏 活性计算公式计算样品溶液对透明质酸酶的抑 制率- 样品的透明质酸酶抑制率 =[ (A-B ) -(C-D)]/(A-B)xlOO%

阳性对照的透明质酸酶抑制率=[ (A-B ) -(E-D)]/(A-B)xlOO%

上述两公式中， A均为 A管的 ABS值；

B为 B管的 ABS值；

C为 C管的 ABS值 ；

D为 D管的 ABS值；

E为 E管的 ABS值； 其中， C管的 ABS值的测定方法如下-

1 ) 取 0.1 mL0.25 mmol/L CaCl ₂ 溶液和 0.5mL透明质酸酶液 37°C水浴保温培养 20min;

2) 再加入处理后的样品溶液 0.5 mL, 继续 37°C水浴保温培养 20 min;

3 ) 再加入 0.5 mL透明质酸钠水溶液 37°C水浴保温 30 min, 常温放置 5 min;

4) 再加入 0.1 mL0.4 mol/L NaOH水溶液和 0.5 mL乙酰丙酮， 置于沸水浴中加热 15 min后立即用冰水进行冷却 5 min;

5 )再加入埃尔利希试剂 l.O mL并用 3.0 mL无水乙醇进行稀释， 常温放置 20 min 显色， 用分光光度计测定其吸光度值， 所得结果即为 C——样品溶液的 ABS值； 上述 A组至 E组的试验步骤亦见于表 4中。

表 4、 透明质酸酶抑制实验操作表 说 明 书

注： "+"为此项添加， "- "为此项不添加， 但用等体积的醋酸缓冲溶液代替； " * " 为用等体积的质量百分浓度为 5%的甘草酸二钾的水溶液代替。

所得结果如图 4所示。

其中， 实施例 1所得组合物 A的透明质酸酶抑制率为 75.32% ;

实施例 2所得组合物 B的透明质酸酶抑制率为 59.89% ;

实施例 3所得组合物 C的透明质酸酶抑制率为 67.26%。

E管也即阳性对照的透明质酸酶抑制率为 92.12%。

实验结果表明， 各实施例组合物， 均具有体外抑制透明质酸酶功效， 能够抑制过 敏介质的释放， 从而具有良好的抗过敏的作用。 实施例 8、 实施例 1、 实施例 2、 实施例 3所得中药组合物 A、 B、 C的防皲裂效 果

在表 5所示空白膏霜基质配方 B相中分别加入 3%的中药组合物 A混匀， 即得实 施例 1组合物膏霜。

按照与上相同的方法，仅将中药组合物 A替换为实施例 2所得中药组合物 B或实 施例 3所得中药组合物 C , 依次得到实施例 2组合物膏霜、 实施例 3组合物膏霜。 说 明 书 将上述三种膏霜进行人体足部皮肤涂抹试验， 时间为一个月 (冬季)，试用人数 120 人， 每组 30人， 随机分为 4组， 分别为 A组、 B组、 C组、 空白对照组（空白膏霜基 质）。

其中， A组涂抹实施例 1组合物膏霜；

B组涂抹实施例 2组合物膏霜；

C组涂抹实施例 3组合物膏霜； 所用空白膏霜基质的制备方法如下：

按照表 5所得配方， 将 A相各原料加热， 混合均匀， 加热到 82°C ; 将 B相各原 料加热， 混合均匀， 加热到 82°C ; 在 B相中于 2000r/min的转速下均质， 将 A相缓慢 倒入 B相中， 均质 5min; 均质完成后， 搅拌降温； 40Ό时加入 C相， 搅拌均匀， 即 得空白膏霜基质。

表 5、 空白膏霜基质配方

使用者用后反映该产品不仅对皮肤有营养滋润 作用， 且对皮肤的干裂伤口有良好 的愈合修复作用， 试用结果如表 6:

表 6 对中药组合物防皲裂效果人体应用评估表

粗糙改善程度 湿润度 柔软性

明显 一般 无 明显 一般 无 明显 一般 无 实施例 1组合物 A 21 7 2 23 7 0 22 7 1 实施例 2组合物 B 15 12 3 25 5 0 18 10 2 实施例 3组合物 C 17 11 2 25 5 0 20 10 0 空白对照 11 15 4 20 9 1 17 7 6 说 明 书 调査结果证实中药组合物有如下特点：

1.产品中所含中草药有效成分能使其增强机体� ��卫能力， 刺激肉芽组织生长。

2.可在局部形成保护膜、 缩短凝血时间， 减少出血， 从而有利于创面的愈合。

3.能有效地保持肌肤的水分而无甘油类护肤� ��的油腻感， 使用之后柔润舒适。 产品中所含中草药有效成分能使皮肤增强机体 自卫能力， 可在局部形成保护膜、 减少出血， 从而有利于创面的愈合， 使用者反映良好。