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CHINA STATE INST PHARM IND (CN)
CN1683379A | 2005-10-19 | |||
CN1923837A | 2007-03-07 |
上海弼兴律师事务所 (CN)
权利要求 1、 一种铂 (Π ) 配合物 I, 其结构如下: 和 各自独立地为: 氢或被 d~12烃基取代的羟基, 或者, 和 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~12元饱和或不饱和的碳环。 2、 如权利要求 1所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 所述的 ^或 R2中, 所述的 Cw2烃基为 烃基; 所述的 Ri或 R2中, 所述的 3~12元饱 和或不饱和的碳环为 4~8元饱和或不饱和的碳环。 3、 如权利要求 2所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 所述的 ^或 R2中, 所述的 4~8元饱和或不饱和的碳环为 6元饱和碳环。 4、如权利要求 1所述的铂( II )配合物 I, 其特征在于: 所述的铂( II ) 配合物 I中, R^P R2均为氢; 或者 Ri, R2相互连接且与其相连的碳原子一 起形成 4~8元的饱和碳环。 5、 如权利要求 4所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 或 中, 所述的 4~8元的饱和碳环为 6元饱和碳环。 6、 如权利要求 1所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 所述的铂 (Π ) 配合物 I为顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ); 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( 11 )。 7、 如权利要求 1~6任一项所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特 征在于包括以下步骤: 在水中, 将二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍 生物 (5) 反应, 得到铂 (Π ) 配合物 I; 其中, ^和 R2各自独立地为氢或 CM2烃基, 或者, 和 相互连接 且与其相连接的碳原子一起形成 3~12 元饱和或不饱和的碳环; R4为氢或 Cl-12烃基。 8、 如权利要求 7所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的 R4为 烃基。 9、 如权利要求 8所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的 R4中, 所述 烃基为乙基。 10、 如权利要求 7所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的羧酸配体衍生物 (5) 为 3-乙氧基丙烯酸钠盐。 11、 如权利要求 7所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在制备铂( II )配合物 I的方法中,所述的反应包括以下步骤:在 30~80°C 温度下, 将二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的水溶液与羧酸配体衍生物 (5) 水溶 液混合, 避光反应即可。 12、 如权利要求 11所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在制备铂 (Π) 配合物 I 的方法中, 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍生物 (5) 的摩尔比为 1: (1-2); 在制备铂 (Π)配合物 I的方法中, 所述的水的用量为 50-150ml/g二水 二氨合铂硝酸盐 (4); 在制备铂 (Π) 配合物 I 的方法中, 所述的羧酸配体衍生物 (5) 水溶 液的质量浓度为 10-500 ml/g; 在制备铂 (Π) 配合物 I的方法中, 所述的反应的温度为 40°C至 70°C。 13、 如权利要求 12所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的羧酸配体衍生物 (5 ) 水溶 液的质量浓度为 50-100 ml/g; 在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的反应的温度为 60°C~65°C。 14、 如权利要求 7所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法包括如下步骤: 在水中, 将式 (3 ) 的化合物与硝酸银, 避光进行反应, 得到所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4); (3) (4) 其中, R3为 I或 CI; ^和 R2各自独立地为氢或 Cw2烃基, 或者, 和 R2相互连接且与其相连接的碳原子一起形成 3~12 元饱和或不饱和的碳 环。 15、 如权利要求 14所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法包括如下步骤: 将式 (3 ) 化合物的水溶液与硝酸银水溶液混合, 于 10°C-100°C避光反应, 即可。 16、 如权利要求 14所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 式 (3 ) 的化合物与硝酸银 的摩尔比为 1: ( 1-2); 在二水二氨合铂硝酸盐 (4)的制备方法中,所述的水的用量为 50-150ml/g 化合物 (3 ); 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 所述的反应的温度为 40°C 至 70°C。 17、 如权利要求 15所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 所述的硝酸银水溶液的浓度为 18、 如权利要求 16所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 所述的反应的温度为 50~55°C。 19、 如权利要求 14所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 制备二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的反应结束后, 其反应体系经过滤处理, 得 到的滤液直接用于铂 (Π ) 配合物 I的制备; 制备二水二氨合铂硝酸盐(4)的反应结束后,滤液直接用于制备铂( II ) 配合物 I时, 所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备包括以下步骤: 在 30~80°C下, 将所述的滤液与羧酸配体衍生物 (5) 混合, 避光反应, 得到铂 (Π ) 配合 物 I即可。 20、 如权利要求 1~6任一项所述的铂 (Π ) 配合物 I在制备抗肿瘤药物 中的应用。 21、 一种药物组合物, 其含有活性组分及可药用载体, 所述的活性组分 含有如权利要求 1~6任一项所述的铂 ( II ) 配合物 I; 所述的活性组分的质 量占药物组合物总质量的 0.1%~95%。 22、 如权利要求 21 所述的药物组合物, 其特征在于: 所述的药物组合 物为针剂; 所述的可药用的载体包括惰性的稀释剂, 水和有机溶剂中的一种 或多种。 23、 如权利要求 21 所述的药物组合物, 其特征在于: 所述的药物组合 物中, 所述的活性组分还含有其他一种或多种抗肿瘤药物。 |
本发明涉及生物制药领域, 具体涉及一种铂(Π )配合物、其制备方法、 药物组合物及用途。 背景技术
顺铂 (Cisplatin) 自发现以来, 作为抗肿瘤药已在临床上广泛应用于各 种实体瘤的治疗, 对于泌尿生殖癌、 鼻咽癌、 头颈部癌、 肺癌等多种癌症疗 效显著。 然而, 顺铂存在肾毒性、 神经毒性、 耳毒性、 胃肠道等不良反应, 严重的毒副作用限制了该药的剂量和长期用药 。作为第二代铂类抗癌药的卡 铂(Carboplatin, 又名碳铂)其抗癌谱与顺铂相似, 毒副作用明显低于顺铂, 但是药效较顺铂略差, 且有交叉耐药性, 并且依然存在骨髓抑制。 因此, 寻 找高效、 低毒的铂类抗癌药物依然是国内外抗癌药物研 发的热点。
据报道, 近年来有多种铂类抗癌药物进入临床试验, 如 Zeniplatin、 Sebriplatin、 Ormaplatin、 Iproplatin, JM-20、 PHIC等。 但这些新的铂类化合 物多因水中溶解度差、 抗肿瘤株与顺铂大致相同, 无更广的抗瘤谱, 毒副作 用大等原因未能进入临床应用。尽管如此,铂 类化合物由于其抗癌机制独特, 作用谱广, 毒性谱与许多天然和有机合成药物不同, 对其进行修饰和改进, 进而开发成为抗癌药物的研宄从未停止。
专利 (JP昭 59-222497) 公开了一种具有抗癌作用的铂类衍生物奈达铂 (顺式 -乙醇酸-二氨合铂 (11 )), 其结构与本发明差异很大。 本发明是一项 开拓性发明, 具有十分重要的意义。 发明内容
本发明所要解决的技术问题在于, 为了克服现有铂类衍生物抗癌药物的 水溶性差、 毒副作用强、 广谱性不高等缺陷, 而提供一种铂 (Π ) 配合物、 其制备方法、 药物组合物及应用。 本发明的铂 (Π ) 配合物, 水溶性好, 毒 性低, 制备简易, 具有高效抗肿瘤活性。
本发明提供了一种铂 (Π 结构如下: 其中, R^P R 2 各自独立地为: 氢或被 d~ 12 烃基取代的羟基; 或者, 和 R 2 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~12元饱和或不饱和的碳环。
所述的 1^优选氢。
所述的 R 2 优选氢。
所述的 Ri或 R 2 中, 所述的 Cw2烃基优选 烃基。
所述的 或 R 2 中, 所述的 3~12元饱和或不饱和的碳环优选 4~8元饱 和或不饱和的碳环, 更优选 6元饱和碳环。
所述的铂 (Π ) 配合物 I优选,
Ri和 R 2 均为氢;
或者, Ri, R 2 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~8元的饱和碳环 (优选 6元饱和碳环)。
所述的铂 (Π ) 配合物 I更优选, 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ); 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( II ) (6)。
所述的铂( II )配合物 I最 基丙烯酸二氨合铂( II ) (2);
3 。
(2)
本发明还提供了上述铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其包括以下步骤: 在水中, 将二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍生物 (5) 反应, 生成铂 ( II ) 配合物 I;
其中, 和 各自独立地为: 氢或 C M2 烃基; 或者, 和 相互连 接且与其相连接的碳原子一起形成 3~12元饱和或不饱和的碳环;
R 4 为氢或 C M2 烃基。
所述的 1^优选氢。
所述的 R 2 优选氢。
所述的 Ri或 R 2 中, 所述的 Cw2烃基优选 烃基。
所述的 或 R 2 中, 所述的 3~12元饱和或不饱和的碳环优选 4~8元饱 和或不饱和的碳环, 更优选 6元饱和碳环。
所述的 R4优选 d_ 6 烃基。 所述 d_ 6 烃基优选乙基。
所述的铂 (Π ) 配合物 I优选,
Ri和 R 2 均为氢;
或者, Ri, R 2 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~8元的饱和碳环 (优选 6元饱和碳环)。
所述的铂 (Π ) 配合物 I更优选, 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ); 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( 11 )。
所述的铂( II )配合物 I最优选,顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II ) (2); 所述的羧酸配体衍生物 (5) 优选 3-乙氧基丙烯酸钠盐。
在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的反应优选包括以下步骤: 在 30~80°C温度下,将二水二氨合铂硝酸盐(4)的 溶液与羧酸配体衍生物(5 ) 水溶液混合, 避光反应即可。
在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍生物 (5) 的摩尔比优选 1: ( 1~2)。
在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的水的用量一般为不影响反应 的进行即可, 优选为 50-150ml/g二水二氨合铂硝酸盐 (4)。
在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的羧酸配体衍生物 (5 ) 水溶 液的质量浓度优选 10-500 ml/g, 更优选 50-100 ml/g。
在制备铂( II )配合物 I的方法中,所述的反应的温度优选 40°C至 70°C, 更优选 60°C~65°C。
在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的反应的进程可通过 HPLC或 TLC进行监测, 通常以反应物 (4) 消失时作为反应的终点, 反应时间一般 为 2至 24小时, 优选 3-8小时。
在制备铂 (Π ) 配合物 I的反应结束后, 制得的铂 (Π ) 配合物 I还可 以通过后处理被进一步纯化。 所述的后处理优选包括以下步骤: 过滤反应体 系, 浓縮至固体析出, 冷却过滤, 洗涤, 烘干即可。 所述的洗涤优选分别用 冷水和无水乙醇洗涤。 所述的烘干的温度优选为 40-70°C。 所述的浓縮优选 为减压浓縮。所述的减压浓縮的条件和步骤可 为本领域常规的减压浓縮的条 件和步骤。 所述的减压浓縮的温度优选为 45°C~50°C。
在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 优选通过以下方式制得: 在水中, 将式 (3 ) 的化合物与硝酸银, 避光进行 反应, 得到二水二氨合铂硝酸盐 (4); Ri— 2
(N〇 3 ) 2
R 2 — H 2
(3) (4)
其中, R 3 为 I或 CI; Ri或 R 2 同上所述。
制备化合物 (4) 的步骤中, 优选包括以下步骤: 将式 (3 ) 化合物的水 溶液与硝酸银水溶液混合, 于 10°C-100°C避光反应, 即可。
制备化合物 (4) 的步骤中, 式 (3 ) 的化合物与硝酸银的摩尔比优选 1: ( 1~2)。
制备化合物 (4) 的步骤中, 所述的水的用量一般为不影响反应的进行 即可, 优选 50-150ml/g化合物 (3 )。
制备化合物 (4) 的步骤中, 所述的硝酸银水溶液的浓度优选 15-60ml/g
制备化合物 (4) 的步骤中, 所述的反应的温度优选 40 °C至 70 °C, 更优 选 50~55°C。
制备化合物(4)的步骤中, 所述的反应所述的反应的进程可通过 HPLC 或 TLC进行监测, 通常以反应物 (3 ) 消失时作为反应的终点, 反应时间一 般为 2至 24小时, 优选 3-8小时。
制备化合物 (4) 的反应结束后, 其反应体系优选经过滤处理, 得到的 滤液直接用于铂 (Π ) 配合物 I的反应。
当制备化合物 (4) 的反应结束后, 滤液直接用于制备铂 (Π )配合物 I 时, 所述的铂 (Π ) 配合物 I的方法优选包括以下步骤: 在 30~80°C下, 将 所述的滤液与羧酸配体衍生物 (5) 混合, 避光反应, 生成铂 (Π ) 配合物 I 即可。 R— NH 2 / R 3
R 2 — R 3
(3) (4)
本发明还提供了上述铂 (Π ) 配合物 I在制备抗肿瘤药物中的应用。 本发明的铂 (Π ) 配合物 I可适用于制备哺乳动物的抗肿瘤药物, 特别 是人的抗癌剂。
具体地说, 本发明铂 (Π ) 配合物 I具有治疗人体多种肿瘤的活性, 例 如, 肾、 肝、 食管、 胃、 膀胱、 乳房、 卵巢、 结肠、 前列腺、 胰腺、 肺、 甲 状腺、 肌瘤、 阴道、 子宫颈癌、 成胶质细胞瘤、 头颈部癌 (包括鼻腔、 鼻窦 肿瘤、 喉咽和颈段食管肿瘤、 口咽肿瘤、 甲状腺肿瘤) 以及白血病和恶性淋 巴瘤。
本发明还提供了一种药物组合物, 其含有活性组分及可药用载体, 所述 的活性组分含有上述铂 (Π ) 配合物 I; 所述的活性组分的质量占药物组合 物总质量的 0.1%~95%。
所述的药物组合物中, 铂 (Π )配合物 I优选顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合 铂 (II ), 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 (II ), 更优选顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) (2)。
所述的药物组合物的制备方法可按本领域常规 的制备药物组合物的方 法进行, 具体可参见袁其朋的 《现代药物制剂技术》 , 化学工业出版社, 第 1版, 2005年。
本发明的药物组合物的制备方法优选包括以下 步骤:将活性组分与可药 用载体混合即可。
所述的药物组合物可以以针剂的形式给药。
所述的可药用的载体可包括惰性的稀释剂, 水和有机溶剂中的一种或多 种。 所述的药物组合物中, 所述的活性组分还可含有其他一种或多种抗肿 瘤 药物。 当所述的活性组分含有其他一种或多种抗肿瘤 药物时, 所述的药物组 合物的使用方式可以为把各个单独的药物活性 组分按同时、 顺序、 循环或分 开剂量给药来实现。
本发明中, 术语 "d~ 12 烃基"是指只含有碳、 氢两种原子的官能团, 其 中,碳原子的个数为 1~12。烃基可以看作是相应的烃失去一个氢原 后剩下 的自由基, 其可为垸基、 环垸基、 烯基或炔基等; 其结构可为直链、 支链或 环状。
术语 "d~ 6 烃基" 的定义如术语 "d~ 12 烃基", 差别仅在于其含有的碳 原子数为 1~6个。
术语 "d~ 3 烃基" 的定义如术语 "d~ 12 烃基", 差别仅在于其含有的碳 原子数为 1~3个。
在本发明中, 术语 "碳环"是指仅由碳原子形成的饱和或不饱和的 状 结构, 可被本领域中常规的取代基所取代。 所述的 "碳环"可为环垸烃 (例 如, 环己基等)、 环烯烃或环炔烃。
在不违背本领域常识的基础上, 上述各优选条件, 可任意组合, 即得本 发明各较佳实例。
本发明的制备方法通常在常压下进行。
本发明所用试剂和原料均市售可得或可通过现 有技术制得。
本发明的积极进步效果在于: 本发明的铂 (II) 配合物 I的水溶性好, 并具有良好的抗肿瘤活性。 具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但 并不因此将本发明限制在 所述的实施例范围之中。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法, 按照常 规方法和条件, 或按照商品说明书选择。
(2)
1 )取 3-乙氧基丙烯酸 1.0g, 100ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.34g NaOH), 调节 PH值至中性, 反应液浓縮至干得黄色产物, 过滤以水、 乙醇 分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 1.15g, 产率 97.1%。
2) 取顺式-二碘二氨合铂 (Π ) ((NH 3 ) 2 PtI 2 ) 4.16g用 300ml纯水溶解, 加入 50ml AgNO 3 水溶液(含 2.92gAgN0 3 ), 搅拌, 于 50°C避光反应 4小时 后, 过滤。 将滤液缓慢加入 100 ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液 (含 1.15 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 65°C避光反应 4小时后, 过滤, 滤液 于 45°C减压浓縮至约 15ml, 白色沉淀析出, 过滤, 沉淀用冷的纯水和无水 乙醇分别洗涤 2次, 60°C烘干, 得顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 1.10g, 产率 40.5%, 水溶性大于 25mg/ml (室温)。
上述实施例 1制备的式 (2) 的顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 为白 色无定形粉末, 通过质谱、 元素分析、 核磁共振、 红外光谱等方法确证了顺 式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的结构。
顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 ( II ) 的质谱 ESI-MS m/z: 316 [M+H] + 。 分子量: 315; 高分辨质谱 HR-ESI-MS m/z: 316.0263 [M+H] + , 计算分子式: C 3 H 8 N 2 0 3 Pt。
顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的元素分析 C, H, N结果如下: 计算值 (%): C: 11.43; H: 2.56; N: 8.89
实测值(%): C: 10.93; H: 2.98; N: 8.54
顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的核磁数据:
¾j
位置 δ Η (mult, J, Hz) 5c (mult) 2 4.14 (1H, d, 6) 95.7
3 6.55 (1H, d, 6) 164.7
NH 3 3.92 (3H, brs)
NH 3 3.86 (3H, brs)
表 1 中, 位置中所列出的 1、 2、 3分别表示化合物 (2) 结构中所标示 位置上的氢。
顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的红外光谱解析(cnr 1 , KBr压片):
3284 强峰为 N-H伸縮振动峰
1584 强峰为 C=0伸縮振动峰
1521强峰为 C=C伸縮振动峰
1287 强峰为 C-N伸縮振动峰
1437 强峰为 C-H 弯曲振动峰
1347 强峰为 C-0伸縮振动峰。
实施例 2 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的制备:
1 )取 3-乙氧基丙烯酸 2.0g, 100ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.68g NaOH), 调节 pH值至中性, 反应液浓縮至干得黄色产物, 过滤以水、 乙醇 分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 2.31g, 产率 97.5%。
2) 取顺式-二碘二氨合铂 (Π ) ((NH 3 ) 2 PtI 2 ) 4.16g用 450ml纯水溶解, 加入 20ml AgNO 3 水溶液(含 2.92gAgN0 3 ), 搅拌, 于 52°C避光反应 4小时 后, 过滤。 将滤液缓慢加入 100 ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液 (含 2.31 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 70°C避光反应 4.5小时后, 过滤, 滤 液于 55°C减压浓縮至约 15ml, 白色沉淀析出, 过滤, 沉淀用冷的纯水和无 水乙醇分别洗涤 2次, 60°C烘干,得顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II ) 1.16g, 产率 45.1%。
实施例 3 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( II ) 的制
( 6 )
1 )、取 3-乙氧基丙烯酸 1.0g, 100ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.34g NaOH) ,得 3-乙氧基丙烯酸钠溶液, 调节 PH值至中性, 反应液浓縮至干得 黄色产物, 过滤以水、 乙醇分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 1.16g, 产率 97.5%。
2)、 取顺式 -二碘 (反式- (-) -1 ,2-环己二胺)合铂 (Π ) 3.40g, 用 300ml 纯水溶解, 加入 AgN0 3 溶液 (含 1.46g AgN0 3 ), 搅拌, 于 55 °C避光反应 5 小时后,过滤。将滤液缓慢加入 100ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液(含 1.16 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 60°C避光反应 5小时后, 过滤, 滤液 于 50°C减压浓縮至约 15ml, 得粗产物。 通过反相硅胶 (40g, AQ-C 18 )纯化粗 产物, 以 10:90=甲醇: 水 (体积比) 洗脱, 收集洗脱液 50 °C减压浓縮至干 得白色固体, 60°C烘干, 得纯产物顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) - 1 ,2-环己二 胺)合铂 (Π ) 0.766g, 产率 32.1%, 水溶性大于 20mg/ml (室温)。
其特征结构参数为: 质谱 ESI-MS m/z: 396.09 [M+H] + 。 元素分析实测 值 C: 26.95 %, H: 4.05 %, N: 6.97 % 与计算值 C: 27.34 %, H: 4.08 %, N: 7.09 %—致, 其核磁数据见下表 2。 这些参数符合所发明的配合物的结构。
表 2
位置 δ Η ( mult, J, Hz)
2 4.24 (1H, d, 6)
6.68 (1H, d, 6)
4、 2.13 ( 2H, S )
1.46 (2H, d, 8) 6b、 9a 1.81 (2H, d, 11.2)
7a、 8b 1.20 (2H, d, 9.2)
7b、 8a 1.00 (2H, t)
NH 3 3.92 (3H, brs)
NH 3 3.86 (3H, brs)
表 2 中, 位置中所列出的 2、 3、 4、 5、 6a、 6b、 7a、 7b、 8a、 8b、 9a 和 9b分别表示化合物 (6) 结构中所标示位置上的氢, 其中 6a、 6b是指 6 位上的两个氢; 同理, 7a、 7b; 8a、 8b; 9a、 9b分别表示 7、 8、 9位上的两 个氢。
实施例 4 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 (Π ) 的制 备:
1 )、取 3-乙氧基丙烯酸 1.4g, 80ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.48g NaOH) ,得 3-乙氧基丙烯酸钠溶液, 调节 PH值至中性, 反应液浓縮至干得 黄色产物, 过滤以水、 乙醇分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 1.60g, 产率 96.5%。
2)、 取顺式 -二碘 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 (Π ) 3.40g, 用 300ml 纯水溶解, 加入 AgN0 3 溶液 (含 1.46g AgN0 3 ), 搅拌, 于 50 °C避光反应 5 小时后,过滤。将滤液缓慢加入 100ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液(含 1.60 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 40°C避光反应 8小时后, 过滤, 滤液 于 50°C减压浓縮至约 15ml, 得粗产物。 通过反相硅胶 (40g, AQ-C 18 )纯化粗 产物, 以 10:90=甲醇: 水 (体积比) 洗脱, 收集洗脱液 50°C减压浓縮至干 得白色固体, 60°C烘干, 得纯产物顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二 胺)合铂 (Π ) 0.730g, 产率 30.5%。
效果实施例 1
对顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) (2) 进行了体外抗肿瘤实验。 在体外用 MTT法实验测定化合物对人体肿瘤细胞株的细胞 毒性作用。 具体步骤如下:
取肿瘤细胞(人低分化胃癌 BGC-823、人乳腺癌 Bcap37、人口腔癌 KB) 分别培养于 10%小牛血清, 接种于 96孔板, 2 10 5 细胞/? , 置于 37°C, 5%
C0 2 孵化箱中。将顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II )溶解于二甲亚砜(DMSO) 中, 得到浓度为 10mg/ml的溶液, 再用憐酸缓冲液稀释至所需浓度, 分别加 入上述 96孔板中, 每个浓度 2孔, 每孔 ΙΟμΙ, 每个浓度作两个平行测试。 将 DMSO相应作梯度稀释后加入板中, 作为对照。
将上述 96孔板在 37°C、 5 % C0 2 细胞培养箱中培养 48小时后, 每孔中 加入 20 μΐ 5 mg/ml MTT溶液,继续在培养箱中保温 3〜4小时。每孔加入 100 μΐ 溶解液, 继续在培养箱中保温过夜, 使生成的甲臢晶体充分溶解。 测定
492nm光吸收值。
根据光吸收值计算化合物处理后细胞相对存活 率。 计算公式如下:
药物处理组的光吸收值一背景光吸收值
细胞相对存活率: X 100
DMSO处理组的光吸收值一背 1:光吸收值
通过软件计算化合物对各肿瘤细胞的 IC 50 。
顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II )对多种肿瘤细胞株的体外增殖抑制作 用见表 1 :
表 1
以上的体外抗肿瘤实验结果表明铂 (Π ) 配合物 I尤其是式 (2) 式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 具备良好的抑制肿瘤细胞的活性。
效果实施例 2 对顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 进行了体内抗肿瘤实验。 在体内以 ICR小鼠 S180移植瘤为模型, 测定化合物的抗肿瘤作用。 具 体步骤如下: 1 ) 试验样品 样品: 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ), 编号: SIPI-601。 阳性对照: 注射用奥沙利铂, 江苏恒瑞医药股份有限公司, 产品批号: 13082811, 50mg/瓶。
2) 配制方法 样品: SIPI-601 , 配制时用 10%葡萄糖注射液溶解。 阳性对照: 注射用奥沙利铂, 用 10%葡萄糖注射液溶解。
3 ) 动物和瘤株
ICR小鼠 32只, 雄性, 体重 18— 20g, 由西必凯实验动物有限责任公司 提供, 合格证: SCXK (沪) 2008-0016。 瘤株: ICR小鼠 S180腹水瘤 2只, 由上海医药工业研宄院药理室传代 维持。
4) 试验方法 取生长旺盛期的 ICR小鼠 S180腹水瘤 2只, 无菌条件下抽取腹水, 用 生理盐水 1 : 6稀释, 按 0.2ml/只给小鼠腋皮下接种。 次日将小鼠随机均分 为 4组, 每组 8只。 分别为空白对照组、 SIPI-601 60mg/kg iv组 (三天给药一次)、 SIPI-601 120mg/kg iv组 (六天给药一次)、 奥沙利铂 9mg/kg iv组 (隔天给药)。 小鼠接种后第二天开始给药, 给药剂量及给药方案在以下表格中。 治疗 结束后存活下来的动物被执行安乐死, 取瘤块称重, 计算抑瘤率。
仙 Λ _ η /
抑 100/0
5) 试验结果 样品 SIPI-601静脉给药对 ICR小鼠 S180移植瘤的抑瘤率见表 2: 表 2 组别 起始体重 (g) 最终去瘤体重(g) 抑瘤率 (%) 空白 22.81 24.56 -
SIPI-601
22.21 22.46 64.39 ( 60mg/kg iv)
SIPI-601
22.78 20.34 66.83 ( 120mg/kg iv)
奥沙利铂
23.18 19.92 62.42 ( 9mg/kg iv ) 以上的体内抗肿瘤实验结果表明铂 (Π ) 配合物 I尤其是式 (2) 的顺 式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 在体内具备良好的抗肿瘤活性。