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Title:
PLATINUM(II) COMPOUND, PREPARATION METHOD THEREFOR, AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND APPLICATION THEREOF
Document Type and Number:
WIPO Patent Application WO/2014/198140
Kind Code:
A1
Abstract:
Disclosed are a platinum(II) compound, a preparation method therefor, and a pharmaceutical composition and an application thereof. The preparation method comprises the following steps: enabling dihydrate diammineplatinum nitrate (4) to react with the carboxylate ligand derivative (5) in water, to produce a platinum(II) compound. Also provided are an application of the platinum(II) compound in preparation of an antitumor drug, and a pharmaceutical composition. The pharmaceutical composition contains an active component and a medicinal carrier, the active component containing the platinum(II) compound, and the mass percentage of the active component being 0.1%-95%. The platinum(II) compound of the present invention is well water-soluble, low toxic, easily prepared, and efficient in antitumor activity.

Inventors:
ZHU BAOQUAN (CN)
SHU YONGZHI (CN)
LIN JUN (CN)
HU HAIFENG (CN)
LIU QUANHAI (CN)
ZHOU BIN (CN)
Application Number:
PCT/CN2014/073660
Publication Date:
December 18, 2014
Filing Date:
March 19, 2014
Export Citation:
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Assignee:
SHANGHAI INST PHARM INDUSTRY (CN)
CHINA STATE INST PHARM IND (CN)
International Classes:
C07F15/00; A61K31/282; A61P35/00
Foreign References:
CN1683379A2005-10-19
CN1923837A2007-03-07
Other References:
YE, QINGSONG ET AL.: "Synthesis and in Vitro Cytotoxicity of Novel Lipophilic (Diamine) Platinum(II) Complexes of Salicylate Derivatives", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, vol. 17, no. 8, 1 February 2007 (2007-02-01), pages 2144 - 2147
Attorney, Agent or Firm:
SHANGHAI BESHINING LAW OFFICE (CN)
上海弼兴律师事务所 (CN)
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Claims:
权利要求

1、 一种铂 (Π ) 配合物 I, 其结构如下: 和 各自独立地为: 氢或被 d~12烃基取代的羟基, 或者, 和 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~12元饱和或不饱和的碳环。

2、 如权利要求 1所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 所述的 ^或 R2中, 所述的 Cw2烃基为 烃基; 所述的 Ri或 R2中, 所述的 3~12元饱 和或不饱和的碳环为 4~8元饱和或不饱和的碳环。

3、 如权利要求 2所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 所述的 ^或 R2中, 所述的 4~8元饱和或不饱和的碳环为 6元饱和碳环。

4、如权利要求 1所述的铂( II )配合物 I, 其特征在于: 所述的铂( II ) 配合物 I中, R^P R2均为氢; 或者 Ri, R2相互连接且与其相连的碳原子一 起形成 4~8元的饱和碳环。

5、 如权利要求 4所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于: 或 中, 所述的 4~8元的饱和碳环为 6元饱和碳环。

6、 如权利要求 1所述的铂 (Π ) 配合物 I, 其特征在于:

所述的铂 (Π ) 配合物 I为顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ); 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( 11 )。

7、 如权利要求 1~6任一项所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特 征在于包括以下步骤: 在水中, 将二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍 生物 (5) 反应, 得到铂 (Π ) 配合物 I;

其中, ^和 R2各自独立地为氢或 CM2烃基, 或者, 和 相互连接 且与其相连接的碳原子一起形成 3~12 元饱和或不饱和的碳环; R4为氢或

Cl-12烃基。

8、 如权利要求 7所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的 R4为 烃基。

9、 如权利要求 8所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的 R4中, 所述 烃基为乙基。

10、 如权利要求 7所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的羧酸配体衍生物 (5) 为 3-乙氧基丙烯酸钠盐。

11、 如权利要求 7所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在制备铂( II )配合物 I的方法中,所述的反应包括以下步骤:在 30~80°C 温度下, 将二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的水溶液与羧酸配体衍生物 (5) 水溶 液混合, 避光反应即可。

12、 如权利要求 11所述的铂 (Π) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在制备铂 (Π) 配合物 I 的方法中, 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍生物 (5) 的摩尔比为 1: (1-2);

在制备铂 (Π)配合物 I的方法中, 所述的水的用量为 50-150ml/g二水 二氨合铂硝酸盐 (4);

在制备铂 (Π) 配合物 I 的方法中, 所述的羧酸配体衍生物 (5) 水溶 液的质量浓度为 10-500 ml/g;

在制备铂 (Π) 配合物 I的方法中, 所述的反应的温度为 40°C至 70°C。 13、 如权利要求 12所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的羧酸配体衍生物 (5 ) 水溶 液的质量浓度为 50-100 ml/g;

在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的反应的温度为 60°C~65°C。

14、 如权利要求 7所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法包括如下步骤: 在水中, 将式 (3 ) 的化合物与硝酸银, 避光进行反应, 得到所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4);

(3) (4)

其中, R3为 I或 CI; ^和 R2各自独立地为氢或 Cw2烃基, 或者, 和 R2相互连接且与其相连接的碳原子一起形成 3~12 元饱和或不饱和的碳 环。

15、 如权利要求 14所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法包括如下步骤: 将式 (3 ) 化合物的水溶液与硝酸银水溶液混合, 于 10°C-100°C避光反应, 即可。

16、 如权利要求 14所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 式 (3 ) 的化合物与硝酸银 的摩尔比为 1: ( 1-2);

在二水二氨合铂硝酸盐 (4)的制备方法中,所述的水的用量为 50-150ml/g 化合物 (3 );

在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 所述的反应的温度为 40°C 至 70°C。

17、 如权利要求 15所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 所述的硝酸银水溶液的浓度为 18、 如权利要求 16所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 在二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的制备方法中, 所述的反应的温度为 50~55°C。

19、 如权利要求 14所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其特征在于: 制备二水二氨合铂硝酸盐 (4) 的反应结束后, 其反应体系经过滤处理, 得 到的滤液直接用于铂 (Π ) 配合物 I的制备;

制备二水二氨合铂硝酸盐(4)的反应结束后,滤液直接用于制备铂( II ) 配合物 I时, 所述的铂 (Π ) 配合物 I的制备包括以下步骤: 在 30~80°C下, 将所述的滤液与羧酸配体衍生物 (5) 混合, 避光反应, 得到铂 (Π ) 配合 物 I即可。

20、 如权利要求 1~6任一项所述的铂 (Π ) 配合物 I在制备抗肿瘤药物 中的应用。

21、 一种药物组合物, 其含有活性组分及可药用载体, 所述的活性组分 含有如权利要求 1~6任一项所述的铂 ( II ) 配合物 I; 所述的活性组分的质 量占药物组合物总质量的 0.1%~95%。

22、 如权利要求 21 所述的药物组合物, 其特征在于: 所述的药物组合 物为针剂; 所述的可药用的载体包括惰性的稀释剂, 水和有机溶剂中的一种 或多种。

23、 如权利要求 21 所述的药物组合物, 其特征在于: 所述的药物组合 物中, 所述的活性组分还含有其他一种或多种抗肿瘤药物。

Description:
一种铂 (Π ) 配合物、 其制备方法、 药物组合物及应用 技术领域

本发明涉及生物制药领域, 具体涉及一种铂(Π )配合物、其制备方法、 药物组合物及用途。 背景技术

顺铂 (Cisplatin) 自发现以来, 作为抗肿瘤药已在临床上广泛应用于各 种实体瘤的治疗, 对于泌尿生殖癌、 鼻咽癌、 头颈部癌、 肺癌等多种癌症疗 效显著。 然而, 顺铂存在肾毒性、 神经毒性、 耳毒性、 胃肠道等不良反应, 严重的毒副作用限制了该药的剂量和长期用药 。作为第二代铂类抗癌药的卡 铂(Carboplatin, 又名碳铂)其抗癌谱与顺铂相似, 毒副作用明显低于顺铂, 但是药效较顺铂略差, 且有交叉耐药性, 并且依然存在骨髓抑制。 因此, 寻 找高效、 低毒的铂类抗癌药物依然是国内外抗癌药物研 发的热点。

据报道, 近年来有多种铂类抗癌药物进入临床试验, 如 Zeniplatin、 Sebriplatin、 Ormaplatin、 Iproplatin, JM-20、 PHIC等。 但这些新的铂类化合 物多因水中溶解度差、 抗肿瘤株与顺铂大致相同, 无更广的抗瘤谱, 毒副作 用大等原因未能进入临床应用。尽管如此,铂 类化合物由于其抗癌机制独特, 作用谱广, 毒性谱与许多天然和有机合成药物不同, 对其进行修饰和改进, 进而开发成为抗癌药物的研宄从未停止。

专利 (JP昭 59-222497) 公开了一种具有抗癌作用的铂类衍生物奈达铂 (顺式 -乙醇酸-二氨合铂 (11 )), 其结构与本发明差异很大。 本发明是一项 开拓性发明, 具有十分重要的意义。 发明内容

本发明所要解决的技术问题在于, 为了克服现有铂类衍生物抗癌药物的 水溶性差、 毒副作用强、 广谱性不高等缺陷, 而提供一种铂 (Π ) 配合物、 其制备方法、 药物组合物及应用。 本发明的铂 (Π ) 配合物, 水溶性好, 毒 性低, 制备简易, 具有高效抗肿瘤活性。

本发明提供了一种铂 (Π 结构如下: 其中, R^P R 2 各自独立地为: 氢或被 d~ 12 烃基取代的羟基; 或者, 和 R 2 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~12元饱和或不饱和的碳环。

所述的 1^优选氢。

所述的 R 2 优选氢。

所述的 Ri或 R 2 中, 所述的 Cw2烃基优选 烃基。

所述的 或 R 2 中, 所述的 3~12元饱和或不饱和的碳环优选 4~8元饱 和或不饱和的碳环, 更优选 6元饱和碳环。

所述的铂 (Π ) 配合物 I优选,

Ri和 R 2 均为氢;

或者, Ri, R 2 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~8元的饱和碳环 (优选 6元饱和碳环)。

所述的铂 (Π ) 配合物 I更优选, 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ); 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( II ) (6)。

所述的铂( II )配合物 I最 基丙烯酸二氨合铂( II ) (2);

3 。

(2)

本发明还提供了上述铂 (Π ) 配合物 I的制备方法, 其包括以下步骤: 在水中, 将二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍生物 (5) 反应, 生成铂 ( II ) 配合物 I;

其中, 和 各自独立地为: 氢或 C M2 烃基; 或者, 和 相互连 接且与其相连接的碳原子一起形成 3~12元饱和或不饱和的碳环;

R 4 为氢或 C M2 烃基。

所述的 1^优选氢。

所述的 R 2 优选氢。

所述的 Ri或 R 2 中, 所述的 Cw2烃基优选 烃基。

所述的 或 R 2 中, 所述的 3~12元饱和或不饱和的碳环优选 4~8元饱 和或不饱和的碳环, 更优选 6元饱和碳环。

所述的 R4优选 d_ 6 烃基。 所述 d_ 6 烃基优选乙基。

所述的铂 (Π ) 配合物 I优选,

Ri和 R 2 均为氢;

或者, Ri, R 2 相互连接且与其相连的碳原子一起形成 3~8元的饱和碳环 (优选 6元饱和碳环)。

所述的铂 (Π ) 配合物 I更优选, 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ); 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( 11 )。

所述的铂( II )配合物 I最优选,顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II ) (2); 所述的羧酸配体衍生物 (5) 优选 3-乙氧基丙烯酸钠盐。

在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的反应优选包括以下步骤: 在 30~80°C温度下,将二水二氨合铂硝酸盐(4)的 溶液与羧酸配体衍生物(5 ) 水溶液混合, 避光反应即可。

在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 与羧酸配体衍生物 (5) 的摩尔比优选 1: ( 1~2)。

在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的水的用量一般为不影响反应 的进行即可, 优选为 50-150ml/g二水二氨合铂硝酸盐 (4)。

在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的羧酸配体衍生物 (5 ) 水溶 液的质量浓度优选 10-500 ml/g, 更优选 50-100 ml/g。

在制备铂( II )配合物 I的方法中,所述的反应的温度优选 40°C至 70°C, 更优选 60°C~65°C。

在制备铂 (Π ) 配合物 I的方法中, 所述的反应的进程可通过 HPLC或 TLC进行监测, 通常以反应物 (4) 消失时作为反应的终点, 反应时间一般 为 2至 24小时, 优选 3-8小时。

在制备铂 (Π ) 配合物 I的反应结束后, 制得的铂 (Π ) 配合物 I还可 以通过后处理被进一步纯化。 所述的后处理优选包括以下步骤: 过滤反应体 系, 浓縮至固体析出, 冷却过滤, 洗涤, 烘干即可。 所述的洗涤优选分别用 冷水和无水乙醇洗涤。 所述的烘干的温度优选为 40-70°C。 所述的浓縮优选 为减压浓縮。所述的减压浓縮的条件和步骤可 为本领域常规的减压浓縮的条 件和步骤。 所述的减压浓縮的温度优选为 45°C~50°C。

在制备铂 (Π ) 配合物 I 的方法中, 所述的二水二氨合铂硝酸盐 (4) 优选通过以下方式制得: 在水中, 将式 (3 ) 的化合物与硝酸银, 避光进行 反应, 得到二水二氨合铂硝酸盐 (4); Ri— 2

(N〇 3 ) 2

R 2 — H 2

(3) (4)

其中, R 3 为 I或 CI; Ri或 R 2 同上所述。

制备化合物 (4) 的步骤中, 优选包括以下步骤: 将式 (3 ) 化合物的水 溶液与硝酸银水溶液混合, 于 10°C-100°C避光反应, 即可。

制备化合物 (4) 的步骤中, 式 (3 ) 的化合物与硝酸银的摩尔比优选 1: ( 1~2)。

制备化合物 (4) 的步骤中, 所述的水的用量一般为不影响反应的进行 即可, 优选 50-150ml/g化合物 (3 )。

制备化合物 (4) 的步骤中, 所述的硝酸银水溶液的浓度优选 15-60ml/g

制备化合物 (4) 的步骤中, 所述的反应的温度优选 40 °C至 70 °C, 更优 选 50~55°C。

制备化合物(4)的步骤中, 所述的反应所述的反应的进程可通过 HPLC 或 TLC进行监测, 通常以反应物 (3 ) 消失时作为反应的终点, 反应时间一 般为 2至 24小时, 优选 3-8小时。

制备化合物 (4) 的反应结束后, 其反应体系优选经过滤处理, 得到的 滤液直接用于铂 (Π ) 配合物 I的反应。

当制备化合物 (4) 的反应结束后, 滤液直接用于制备铂 (Π )配合物 I 时, 所述的铂 (Π ) 配合物 I的方法优选包括以下步骤: 在 30~80°C下, 将 所述的滤液与羧酸配体衍生物 (5) 混合, 避光反应, 生成铂 (Π ) 配合物 I 即可。 R— NH 2 / R 3

R 2 — R 3

(3) (4)

本发明还提供了上述铂 (Π ) 配合物 I在制备抗肿瘤药物中的应用。 本发明的铂 (Π ) 配合物 I可适用于制备哺乳动物的抗肿瘤药物, 特别 是人的抗癌剂。

具体地说, 本发明铂 (Π ) 配合物 I具有治疗人体多种肿瘤的活性, 例 如, 肾、 肝、 食管、 胃、 膀胱、 乳房、 卵巢、 结肠、 前列腺、 胰腺、 肺、 甲 状腺、 肌瘤、 阴道、 子宫颈癌、 成胶质细胞瘤、 头颈部癌 (包括鼻腔、 鼻窦 肿瘤、 喉咽和颈段食管肿瘤、 口咽肿瘤、 甲状腺肿瘤) 以及白血病和恶性淋 巴瘤。

本发明还提供了一种药物组合物, 其含有活性组分及可药用载体, 所述 的活性组分含有上述铂 (Π ) 配合物 I; 所述的活性组分的质量占药物组合 物总质量的 0.1%~95%。

所述的药物组合物中, 铂 (Π )配合物 I优选顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合 铂 (II ), 或者, 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 (II ), 更优选顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) (2)。

所述的药物组合物的制备方法可按本领域常规 的制备药物组合物的方 法进行, 具体可参见袁其朋的 《现代药物制剂技术》 , 化学工业出版社, 第 1版, 2005年。

本发明的药物组合物的制备方法优选包括以下 步骤:将活性组分与可药 用载体混合即可。

所述的药物组合物可以以针剂的形式给药。

所述的可药用的载体可包括惰性的稀释剂, 水和有机溶剂中的一种或多 种。 所述的药物组合物中, 所述的活性组分还可含有其他一种或多种抗肿 瘤 药物。 当所述的活性组分含有其他一种或多种抗肿瘤 药物时, 所述的药物组 合物的使用方式可以为把各个单独的药物活性 组分按同时、 顺序、 循环或分 开剂量给药来实现。

本发明中, 术语 "d~ 12 烃基"是指只含有碳、 氢两种原子的官能团, 其 中,碳原子的个数为 1~12。烃基可以看作是相应的烃失去一个氢原 后剩下 的自由基, 其可为垸基、 环垸基、 烯基或炔基等; 其结构可为直链、 支链或 环状。

术语 "d~ 6 烃基" 的定义如术语 "d~ 12 烃基", 差别仅在于其含有的碳 原子数为 1~6个。

术语 "d~ 3 烃基" 的定义如术语 "d~ 12 烃基", 差别仅在于其含有的碳 原子数为 1~3个。

在本发明中, 术语 "碳环"是指仅由碳原子形成的饱和或不饱和的 状 结构, 可被本领域中常规的取代基所取代。 所述的 "碳环"可为环垸烃 (例 如, 环己基等)、 环烯烃或环炔烃。

在不违背本领域常识的基础上, 上述各优选条件, 可任意组合, 即得本 发明各较佳实例。

本发明的制备方法通常在常压下进行。

本发明所用试剂和原料均市售可得或可通过现 有技术制得。

本发明的积极进步效果在于: 本发明的铂 (II) 配合物 I的水溶性好, 并具有良好的抗肿瘤活性。 具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但 并不因此将本发明限制在 所述的实施例范围之中。 下列实施例中未注明具体条件的实验方法, 按照常 规方法和条件, 或按照商品说明书选择。

(2)

1 )取 3-乙氧基丙烯酸 1.0g, 100ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.34g NaOH), 调节 PH值至中性, 反应液浓縮至干得黄色产物, 过滤以水、 乙醇 分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 1.15g, 产率 97.1%。

2) 取顺式-二碘二氨合铂 (Π ) ((NH 3 ) 2 PtI 2 ) 4.16g用 300ml纯水溶解, 加入 50ml AgNO 3 水溶液(含 2.92gAgN0 3 ), 搅拌, 于 50°C避光反应 4小时 后, 过滤。 将滤液缓慢加入 100 ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液 (含 1.15 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 65°C避光反应 4小时后, 过滤, 滤液 于 45°C减压浓縮至约 15ml, 白色沉淀析出, 过滤, 沉淀用冷的纯水和无水 乙醇分别洗涤 2次, 60°C烘干, 得顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 1.10g, 产率 40.5%, 水溶性大于 25mg/ml (室温)。

上述实施例 1制备的式 (2) 的顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 为白 色无定形粉末, 通过质谱、 元素分析、 核磁共振、 红外光谱等方法确证了顺 式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的结构。

顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 ( II ) 的质谱 ESI-MS m/z: 316 [M+H] + 。 分子量: 315; 高分辨质谱 HR-ESI-MS m/z: 316.0263 [M+H] + , 计算分子式: C 3 H 8 N 2 0 3 Pt。

顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的元素分析 C, H, N结果如下: 计算值 (%): C: 11.43; H: 2.56; N: 8.89

实测值(%): C: 10.93; H: 2.98; N: 8.54

顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的核磁数据:

¾j

位置 δ Η (mult, J, Hz) 5c (mult) 2 4.14 (1H, d, 6) 95.7

3 6.55 (1H, d, 6) 164.7

NH 3 3.92 (3H, brs)

NH 3 3.86 (3H, brs)

表 1 中, 位置中所列出的 1、 2、 3分别表示化合物 (2) 结构中所标示 位置上的氢。

顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的红外光谱解析(cnr 1 , KBr压片):

3284 强峰为 N-H伸縮振动峰

1584 强峰为 C=0伸縮振动峰

1521强峰为 C=C伸縮振动峰

1287 强峰为 C-N伸縮振动峰

1437 强峰为 C-H 弯曲振动峰

1347 强峰为 C-0伸縮振动峰。

实施例 2 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 的制备:

1 )取 3-乙氧基丙烯酸 2.0g, 100ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.68g NaOH), 调节 pH值至中性, 反应液浓縮至干得黄色产物, 过滤以水、 乙醇 分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 2.31g, 产率 97.5%。

2) 取顺式-二碘二氨合铂 (Π ) ((NH 3 ) 2 PtI 2 ) 4.16g用 450ml纯水溶解, 加入 20ml AgNO 3 水溶液(含 2.92gAgN0 3 ), 搅拌, 于 52°C避光反应 4小时 后, 过滤。 将滤液缓慢加入 100 ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液 (含 2.31 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 70°C避光反应 4.5小时后, 过滤, 滤 液于 55°C减压浓縮至约 15ml, 白色沉淀析出, 过滤, 沉淀用冷的纯水和无 水乙醇分别洗涤 2次, 60°C烘干,得顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II ) 1.16g, 产率 45.1%。

实施例 3 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 ( II ) 的制

( 6 )

1 )、取 3-乙氧基丙烯酸 1.0g, 100ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.34g NaOH) ,得 3-乙氧基丙烯酸钠溶液, 调节 PH值至中性, 反应液浓縮至干得 黄色产物, 过滤以水、 乙醇分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 1.16g, 产率 97.5%。

2)、 取顺式 -二碘 (反式- (-) -1 ,2-环己二胺)合铂 (Π ) 3.40g, 用 300ml 纯水溶解, 加入 AgN0 3 溶液 (含 1.46g AgN0 3 ), 搅拌, 于 55 °C避光反应 5 小时后,过滤。将滤液缓慢加入 100ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液(含 1.16 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 60°C避光反应 5小时后, 过滤, 滤液 于 50°C减压浓縮至约 15ml, 得粗产物。 通过反相硅胶 (40g, AQ-C 18 )纯化粗 产物, 以 10:90=甲醇: 水 (体积比) 洗脱, 收集洗脱液 50 °C减压浓縮至干 得白色固体, 60°C烘干, 得纯产物顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) - 1 ,2-环己二 胺)合铂 (Π ) 0.766g, 产率 32.1%, 水溶性大于 20mg/ml (室温)。

其特征结构参数为: 质谱 ESI-MS m/z: 396.09 [M+H] + 。 元素分析实测 值 C: 26.95 %, H: 4.05 %, N: 6.97 % 与计算值 C: 27.34 %, H: 4.08 %, N: 7.09 %—致, 其核磁数据见下表 2。 这些参数符合所发明的配合物的结构。

表 2

位置 δ Η ( mult, J, Hz)

2 4.24 (1H, d, 6)

6.68 (1H, d, 6)

4、 2.13 ( 2H, S )

1.46 (2H, d, 8) 6b、 9a 1.81 (2H, d, 11.2)

7a、 8b 1.20 (2H, d, 9.2)

7b、 8a 1.00 (2H, t)

NH 3 3.92 (3H, brs)

NH 3 3.86 (3H, brs)

表 2 中, 位置中所列出的 2、 3、 4、 5、 6a、 6b、 7a、 7b、 8a、 8b、 9a 和 9b分别表示化合物 (6) 结构中所标示位置上的氢, 其中 6a、 6b是指 6 位上的两个氢; 同理, 7a、 7b; 8a、 8b; 9a、 9b分别表示 7、 8、 9位上的两 个氢。

实施例 4 顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 (Π ) 的制 备:

1 )、取 3-乙氧基丙烯酸 1.4g, 80ml纯水溶解,加入 NaOH溶液(含 0.48g NaOH) ,得 3-乙氧基丙烯酸钠溶液, 调节 PH值至中性, 反应液浓縮至干得 黄色产物, 过滤以水、 乙醇分别洗涤, 烘干, 得 3-乙氧基丙烯酸钠 1.60g, 产率 96.5%。

2)、 取顺式 -二碘 (反式- (-) -1,2-环己二胺)合铂 (Π ) 3.40g, 用 300ml 纯水溶解, 加入 AgN0 3 溶液 (含 1.46g AgN0 3 ), 搅拌, 于 50 °C避光反应 5 小时后,过滤。将滤液缓慢加入 100ml 3-乙氧基丙烯酸钠水溶液(含 1.60 g 3- 乙氧基丙烯酸钠) 中, 将此混合溶液于 40°C避光反应 8小时后, 过滤, 滤液 于 50°C减压浓縮至约 15ml, 得粗产物。 通过反相硅胶 (40g, AQ-C 18 )纯化粗 产物, 以 10:90=甲醇: 水 (体积比) 洗脱, 收集洗脱液 50°C减压浓縮至干 得白色固体, 60°C烘干, 得纯产物顺式 -3-羟基丙烯酸 (反式- (-) -1,2-环己二 胺)合铂 (Π ) 0.730g, 产率 30.5%。

效果实施例 1

对顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) (2) 进行了体外抗肿瘤实验。 在体外用 MTT法实验测定化合物对人体肿瘤细胞株的细胞 毒性作用。 具体步骤如下:

取肿瘤细胞(人低分化胃癌 BGC-823、人乳腺癌 Bcap37、人口腔癌 KB) 分别培养于 10%小牛血清, 接种于 96孔板, 2 10 5 细胞/? , 置于 37°C, 5%

C0 2 孵化箱中。将顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II )溶解于二甲亚砜(DMSO) 中, 得到浓度为 10mg/ml的溶液, 再用憐酸缓冲液稀释至所需浓度, 分别加 入上述 96孔板中, 每个浓度 2孔, 每孔 ΙΟμΙ, 每个浓度作两个平行测试。 将 DMSO相应作梯度稀释后加入板中, 作为对照。

将上述 96孔板在 37°C、 5 % C0 2 细胞培养箱中培养 48小时后, 每孔中 加入 20 μΐ 5 mg/ml MTT溶液,继续在培养箱中保温 3〜4小时。每孔加入 100 μΐ 溶解液, 继续在培养箱中保温过夜, 使生成的甲臢晶体充分溶解。 测定

492nm光吸收值。

根据光吸收值计算化合物处理后细胞相对存活 率。 计算公式如下:

药物处理组的光吸收值一背景光吸收值

细胞相对存活率: X 100

DMSO处理组的光吸收值一背 1:光吸收值

通过软件计算化合物对各肿瘤细胞的 IC 50

顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂( II )对多种肿瘤细胞株的体外增殖抑制作 用见表 1 :

表 1

以上的体外抗肿瘤实验结果表明铂 (Π ) 配合物 I尤其是式 (2) 式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 具备良好的抑制肿瘤细胞的活性。

效果实施例 2 对顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 进行了体内抗肿瘤实验。 在体内以 ICR小鼠 S180移植瘤为模型, 测定化合物的抗肿瘤作用。 具 体步骤如下: 1 ) 试验样品 样品: 顺式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (II ), 编号: SIPI-601。 阳性对照: 注射用奥沙利铂, 江苏恒瑞医药股份有限公司, 产品批号: 13082811, 50mg/瓶。

2) 配制方法 样品: SIPI-601 , 配制时用 10%葡萄糖注射液溶解。 阳性对照: 注射用奥沙利铂, 用 10%葡萄糖注射液溶解。

3 ) 动物和瘤株

ICR小鼠 32只, 雄性, 体重 18— 20g, 由西必凯实验动物有限责任公司 提供, 合格证: SCXK (沪) 2008-0016。 瘤株: ICR小鼠 S180腹水瘤 2只, 由上海医药工业研宄院药理室传代 维持。

4) 试验方法 取生长旺盛期的 ICR小鼠 S180腹水瘤 2只, 无菌条件下抽取腹水, 用 生理盐水 1 : 6稀释, 按 0.2ml/只给小鼠腋皮下接种。 次日将小鼠随机均分 为 4组, 每组 8只。 分别为空白对照组、 SIPI-601 60mg/kg iv组 (三天给药一次)、 SIPI-601 120mg/kg iv组 (六天给药一次)、 奥沙利铂 9mg/kg iv组 (隔天给药)。 小鼠接种后第二天开始给药, 给药剂量及给药方案在以下表格中。 治疗 结束后存活下来的动物被执行安乐死, 取瘤块称重, 计算抑瘤率。

Λ _ η /

100/0

5) 试验结果 样品 SIPI-601静脉给药对 ICR小鼠 S180移植瘤的抑瘤率见表 2: 表 2 组别 起始体重 (g) 最终去瘤体重(g) 抑瘤率 (%) 空白 22.81 24.56 -

SIPI-601

22.21 22.46 64.39 ( 60mg/kg iv)

SIPI-601

22.78 20.34 66.83 ( 120mg/kg iv)

奥沙利铂

23.18 19.92 62.42 ( 9mg/kg iv ) 以上的体内抗肿瘤实验结果表明铂 (Π ) 配合物 I尤其是式 (2) 的顺 式 -3-羟基丙烯酸二氨合铂 (Π ) 在体内具备良好的抗肿瘤活性。