КИШЕЧНО-ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА

Область техники

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой средство в форме геля ректального для лечения заболеваний кишечно- пищеварительного тракта, в том числе неспецифического язвенного колита, болезни Крона, свищей, и т.д., а также осложнений в ходе течения вышеназванных заболеваний.

Изобретение обеспечивает противомикробное и противопротозойное действие, а так же обладает хорошей проникающей способностью.

Предшествующий уровень техники

Неинфекционные воспалительные заболевания кишечно-пищеварительного тракта, к которым относятся язвенный колит и болезнь Крона, были и остаются одной из наиболее серьезных проблем современной гастроэнтерологии. Заболеваемость язвенным колитом и болезнью Крона во всем мире возрастает с каждым годом, причем преимущественно среди трудоспособного контингента населения, что делает их социально значимыми заболеваниями.

Сходство этих поражений кишечно-пищеварительного тракта заключается в том, что в их основе лежит хроническое разрушение слизистой оболочки; течение заболеваний носит фазный характер с периодами обострения и стадиями ремиссии. До настоящего времени истинная этиопатогенетическая причина возникновения обоих воспалительных процессов и их перехода в хроническую форму не выяснена. В то же время эти болезни существенно различаются по макроскопической, гистологической картине, а также по месту локализации в пищеварительном тракте.

При язвенном колите воспаление захватывает, исключительно слизистую оболочку толстой кишки, последовательно распространяясь от ее дистальной к проксимальной части, в тяжелых случаях охватывая весь толстый кишечник, включая прямую кишку.

При болезни Крона воспалительный процесс может поражать любые отделы, начиная от рта и кончая задним проходом. Наиболее часто при этом заболевании отмечается комбинированное поражение нижних отделов тонкого кишечника и толстой кишки, с сегментированной локализацией поражений, когда рядом с пораженным участком обнаруживаются места с неизмененной слизистой. Для лечения неинфекционных воспалительных болезней кишечника используют различные препараты, в частности, Известен препарат сульфасалазин (Энциклопедия лекарств. Регистр лекарственных средств России PJIC, Москва, ООО РЛС-2005, 2004, 12-й выпуск, с. 826 - 827), обладающий противобактериальным и противовоспалительным действием. В соединительной ткани кишки распадается на 5-аминосалициловую кислоту (5-АСК), обуславливающую противовоспалительные свойства сульфасалазина, и сульфапиридин - конкурентный антагонист парааминобензойной кислоты, прекращающий синтез фолатов в клетках микроорганизмов и обуславливающий антибактериальную активность. Недостатками препарата при лечении язвенного колита и болезни Крона являются сильная зависимость от состояния нормофлоры кишечника, которая участвует в биотрансформации сульфасалазина и высвобождении активного компонента - 5-АСК, при этом второй компонент препарата сульфапиридин угнетает бактерии, фактически тормозит и останавливает специфическую активность препарата. Возможно, в связи с этим резко усиливаются аллергические проявления, дискинетические расстройства и нарушается функция печени.

Кроме того, известен препарат салофальк - таблетки, покрытые оболочкой, растворимой в кишечнике, содержащие месалазин - 5-аминосалициловую кислоту. (Энциклопедия лекарств. Регистр лекарственных средств России РЛС, Москва, 000 РЛС- 2005, 2004, 12-й выпуск, с. 780-781). Препарат является противовоспалительным средством, ингибирует синтез метаболитов арахидоновой кислоты, активность нейтрофильной липооксигеназы, тормозит миграцию, дегрануляцию и фагоцитоз нейтрофилов, секрецию иммуноглобулинов лимфоцитами, связывает и разрушает свободные радикалы кислорода. Показан для лечения язвенного колита и болезни Крона. К недостатком препарата можно отнести наряду с резко выраженными аллергическими проявлениями, расстройства функции кишечника, нервной, сердечно-сосудистой и мочевыделительной систем, заявленных в качестве побочных действий. Отсюда рекомендации применения препарата только под контролем врача и регулярных анализов крови и мочи.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является создание препарата для лечения воспалительных заболеваний кишечно-пищеварительного тракта, не имеющего указанных недостатков, а также обладающего антимикробными, местноанестезирующми и противовоспалительными свойствами, не вызывающего реакцию активной кожной анафилаксии и не оказывающего раздражающего действия на слизистую прямой кишки. Технический результат, достигаемый при реализации заявленного изобретения, заключается в повышении эффективности лечения неинфекционных воспалительных болезней кишечника и сокращении сроков лечения на фоне отсутствия побочных эффектов и осложнений, что достигается комплексным подходом к формированию набора компонентов и подтверждено данными осмотров пациентов, проходивших курс лечения этими препаратами, независимыми специалистами. Также технический результат заключается в обеспечении комплексного воздействия препарата как на слизистую оболочку кишки, так и на подслизистый слой, благодаря чему достигается стойкий лечебный эффект и создаются условия для профилактики рецидивов.

Указанный технический результат достигается за счет того, что поликомплексный гель для лечения заболеваний кишечно-пищеварительного тракта содержит в качестве действующих веществ метронидазол и тимоген и вспомогательные вещества в следующем составе и соотношении компонентов при общей массе геля 150 г, в г:

метронидазол - 0,1 г - 2 г;

тимоген - 0,001 г - 0,05 г;

карбопол - 0,2 г - 1,0 г;

пропиленгликоль - 8,0 г - 11 ,0 г;

динатриваевая соль ЭДТА - 0,001 г - 0,08 г;

пропилпарагидроксибензоат - 0,015 г - 0,04 г;

метилпарагидроксибензоат - 0,035 г - 0,08 г;

натрия гидроксид - достаточное количество для получения необходимого Ph;

вода дистиллированная - остальное.

Фармакологическое действие активных компонентов:

Метронидазол - обладает противомикробным и противопротозойным действием. Механизм действия заключается в проникновении нитрогруппы препарата в дыхательную цепь простейших и анаэробов. Таким образом, нарушается процессы дыхания в микроорганизмах, что способствует гибели клеток. А у некоторых видах анаэробных микроорганизмов препарат нарушает синтез ДНК, что обуславливает ее деградацию. Метронидазол активен в отношении: простейших (Trichomonas vaginalis, Lamblia, Entamoeba histolytica, Leishmania), аэробных грамотрицательных микроорганизмов (бактероиды Bacteroides fragilis, В. caccae, В. uniformis, В. fragilis, В. ovatus, B.thetaiotaomicron, В. distasonis, В. Vulgatus, фузобактерии Prevotella P. buccae,P. bivia, P. Disiens), анаэробных грамотрицательных палочек (Clostridium, Eubacterium), анаэробных грамположительных кокков (Peptococcus spp., Peptostreptococcusspp). Тимоген - обладает иммуномодулирующим действием и представляет собой дипептид, оказывающий влияние на реакции клеточного, гуморального иммунитета и неспецифическую резистентность организма. Стимулирует процессы регенерации в случае их угнетения, улучшает течение процессов клеточного метаболизма. Усиливает процессы дифференцировки лимфоидных клеток, обладает способностью стимулировать колониеобразующую активность клеток костного мозга, индуцирует экспрессию дифференцировочных рецепторов на лимфоцитах, нормализует количество Т-хелперов, Т- супрессоров и их соотношение у больных с различными иммунодефицитными состояниями.

Выбор вспомогательных веществ обусловлен требованиями к гелю в целом, в результате которых были выбраны:

1. Карбопол, который использован в качестве гелеобразователя, поскольку он обладает динамическим пределом текучести и пластической вязкостью.

2. Пропиленгликоль введён в состав геля для улучшения растворимости метилпарагидроксибензоата и пропилпарагидроксибензоата.

3. Динатриваевая соль ЭДТА (трилон Б) введена с состав геля в связи с тем, что в используемых составляющих возможны следы металлов переменной валентности, провоцирующие процессы окисления.

4. Для предупреждения образования нежелательной микрофлоры использованы консерванты: метилпарагидроксибензоат и пропилпарагидроксибензоат.

Основным преимуществом заявленного поликомплексного геля является его эффективность на фоне отсутствия побочных эффектов и осложнений, что достигается комплексным подходом к формированию набора компонентов и подтверждено данными осмотров пациентов, проходивших курс лечения этими препаратами, независимыми специалистами. Также целесообразно отдельно отметить комплексное воздействие заявленного поликомплексного геля как на слизистую оболочку кишки, так и на подслизистый слой, благодаря чему достигается и стойкий лечебный эффект, и создаются условия для профилактики рецидивов. Важным моментом является то, что неспецифический язвенный колит является аутоиммунным заболеванием, а наличие в составе геля тимогена блокирует развитие аутоиммунных местных реакций. Таким образом, разрывается патологический порочный круг, и создаются условия нормализации стенки кишки. Этот эффект усиливается присутствием в составе геля метронидазола, который позволяет восстанавливать повреждённые структуры как слизистой оболочки, так и подслизистого слоя, а так же обладает противомикробным и противопротозойным действием. Механизм действия заключается в проникновении нитрогруппы препарата в дыхательную цепь простейших и анаэробов. Взаимодействие метронидазола и тимогена обладает обширным комплексным лечебным воздействием, нормализует ионный, кислотно-щелочной и солевой баланс, стабилизируя мембрану клетки, инактивируя цитокины и медиаторы воспаления. В свете всего вышеописанного основным достоинством заявленного поликомплексного геля является его комплексное воздействие на все системы гомеостаза толстой кишки. Благодаря сочетанию компонентов геля наступает нормализация тканевого метаболизма и микроциркуляции, а, как следствие - устранения заболевания, а сочетание метронидазола с тимогеном позволяет и основное заболевание лечить, и предупредить развитие осложнений. Имеющиеся в настоящий момент препараты таким эффектом, к сожалению, не обладают.

Поликомплексный гель для лечения заболеваний кишечно-пищеварительного тракта относится к классу веществ, регулирующих внутритканевой обмен веществ на уровне внутриклеточного метаболизма, стабилизируя водно-электролитный, кислотно- щелочной баланс, стабилизируя клеточную мембрану и снижая проявления воспалительной реакции, уменьшая концентрация провоспалительных цитокинов, простагландинов и других медиаторов воспаления в тканях.

Механизм лечебного действия препарата связан со стабилизацией клеточной мембраны микроциркуляторного русла, улучшением реологических свойств в капиллярной сети слизистой оболочки толстой кишки и в блокировании первичной аутоиммунной воспалительной реакции в стенке кишки, что, в конечном итоге приводит, к остановке патологических процессов в стенке толстой кишки, нормализации тканевого метаболизма и обратному развитию патологических процессов.

При этом отмечается дополняемость компонентов препарата - тимоген дополняет лечебный эффект метронидазола, и сочетание этих активных веществ оказывает выраженный местный противовоспалительный и репаративный эффект.

Благодаря инновационным технологиям, на основе которых спроектирован препарат, удалось достичь свойств, которые на данный момент не доступны современным препаратам:

- способность полностью восстанавливать нормальное состояние толстой кишки и анального канала;

- высокая безопасность благодаря минимальной токсичности и физиологическим технологиям обратных связей. Кроме того, необходимо отметить, что заявленный поликомплексный гель характеризуется отсутствием аллергизирующих свойств. Учитьшая, что на сегодняшний день непременным этапом изучения нового лекарственного препарата является оценка его аллергенности, заявленный поликомплексный гель прошел проверку на основе теста Артюса-Сахарова. С этой целью шести кроликам обоего пола массой 2,0-2,5 кг вводили стерильно под кожу спины тимоген в дозе 10 мг/кг в 1,0 мл изотонического раствора хлорида натрия с одной стороны и 1 мл лошадиной сыворотки под кожу спины с другой стороны. Кроликам контрольной группы вместо тимогена вводили 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. Инъекции тимогена и лошадиной сыворотки повторяли 6 раз с интервалом 5-6 дней. На месте введения лошадиной сыворотки у кроликов обеих групп наблюдали одинаковую местную реакцию в виде гиперемии, кровоизлияний и отечности. На месте введения тимогена и изотонического раствора хлорида натрия никаких реакций не выявлялось. Продолжительное внутривенное введение тимогена тремя курсами по 5 дней каждый с интервалом в 7 дней не сопровождалось нарастанием титра аллергических агглютинирующих аутоантител.

Таким образом, исследование поликомплексного геля стандартными методами показало, что тимоген не аллергенен. Более того, в последующих клинических наблюдениях было установлено, что тимоген обладает определенными десенсибилизирующими свойствами, что позволило применять его в комплексной терапии атопических состояний.

Наличие в составе геля ректального тимогена и его десенсибилизирующие свойства и определили гипоаллергенность поликомплексного геля, что подтвердилось исследованиями самого геля на аллергенность, которые проводили в соответствии с методическими рекомендациями ФГУ НЦЭСМП («Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств», часть 1. Москва, 2012).

В экспериментах использовалось 30 белобоких морских свинок обоего пола с массой тела 250-300 г.

Активная кожная анафилаксия. Активная кожная анафилаксия изучалась согласно «Методическим рекомендациям по оценке аллергизирующих свойств лекарственных средств» на морских белобоких свинках обоего пола весом 250-300 г. Сенсибилизация животных проводилась путем ректального введения препарата в течение 21 дня. Дозировка поликомплексного геля определяется исходя из терапевтической дозы для человека по действующему веществу - метронидазолу (100 мг или 1,43 мг/кг), так что для морских свинок терапевтическая доза с учетом коэффициента видового пересчета 4,7 составляет 6,7 мг/кг. Для сенсибилизации использовали 2 дозы: терапевтическую - 6,7 мг/кг и двукратную - 13,4 мг/кг.

В опыте было использовано 30 морских свинок. Животных разделили на 3 группы по 10 особей (5S и 5$) методом случайной выборки:

1 группа - контроль (введение плацебо геля);

2 группа - поликомплексный гель 6,7 мг/кг;

3 группа - поликомплексный гель 13,4 мг/кг.

Для выявления сенсибилизации использовали внутрикожную инъекцию исследуемого поликомплексного геля в объеме 50 мкл. В предварительных экспериментах на интактных морских свинках было определено, что внутрикожное введение исследуемого препарата не вызывает раздражения.

Через 14 дней после последней сенсибилизации у морских свинок выстригали шерсть, а затем вводили внутрикожно 50 мкл исследуемого поликомплексного геля. Для контроля реактивности кожи тому же животному на другом участке вводили 50 мкл геля плацебо.

Через 30 минут после введения препарата всем подопытным и контрольным животным внутривенно делали инъекцию 0,5 мл 1 % раствора красителя Эванса.

Через 30 минут животных подвергали эвтаназии и на внутренней стороне кожи в местах введения поликомплексного геля и плацебо геля определяли размеры окрашенных пятен. Результаты экспериментов представлены в таблице.

Таблица 25

Реакция активной кожной анафилаксии у морских свинок (самцы и самки) при ректальном введении исследуемого поликомплексного геля*

Препарат, доза, Диаметр синего пятна [мм] в месте введения:

вводимая

морским свинкам 0,9% раствора

препарата

для натрия хлорида сенсибилизации М SD М SD

Плацебо 3,5 0,55 3,7 0,63

Исследуемый поликомплексный гель

6,7 мг/кг 3,8 0,75 3,4 1,0

13,4 мг/кг 4,1 0,65 3,9 0,45 * - достоверных отличий между группами лабораторных животных не наблюдается.

Как видно из таблицы, размеры окрашенных пятен на внутренней поверхности кожи в месте разрешающей инъекции у сенсибилизированных животных не превьппали таковые у животных контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют о том, что исследуемый поликомплексный гель не вызывает реакцию активной кожной анафилаксии у морских свинок. Таким образом, исследование аллергизирующей активности поликомплексного геля, проведенное с помощью оценки активной кожной анафилаксии на морских свинках, показало, что изучаемый препарат не проявляет аллергизирующих свойств.

Поликомплексный гель для лечения неспецифического язвенного колита прошел оценку местнораздражающего действия, которую проводили в ходе изучения субхронической токсичности на кроликах. Так как, исследуемый препарат представлен в лекарственной форме «гель ректальный», т.е. разработан для ректального способа введения, оценку местнораздражающего действия проводили по состоянию слизистой прямой кишки. Для этого после эвтаназии и некроскопии с помощью бинокулярной линзы проводили визуальный осмотр слизистой стенок прямой кишки с целью выявления петехий (мелкоочаговых кровоизлияний) и язвенных поражений слизистой. Показано, что как в контрольных группах (плацебо) животных, так и в группах животных, получавших исследуемый препарат, слизистая прямой кишки без отека, кровоизлияний и изъязвлений.

Кроме того, были проведены гистологические исследования. На срезах прямой кишки животных всех групп хорошо просматриваются слизистая, мышечная и серозная оболочки. Наблюдалась типичная картина инфильтрации слизистой лейкоцитами. Солитарные фолликулы без изменений. Мышечная и серозная оболочки прямой кишки имели нормальную структуру.

Изучение местнораздражающего действия, показало, что введение заявленного поликомплексного геля ректального в течение 30 дней не оказывает раздражающего действия на слизистую прямой кишки.

Проведено изучение и дана оценка острой и субхронической токсичности, последействия и местнораздражающего действия, аллергизирующих свойств и специфической активности поликомплексного геля для лечения неспецифического язвенного колита. При ректальном введении исследуемого препарата во всех дозах не было зафиксировано ни одного летального случая. Не наблюдалось достоверных изменений в относительной массе внутренних органов: печени, почек, надпочечников, селезенки, тимуса, желудка, поджелудочной железы, сердца, легких, головного мозга. Не было зафиксировано и каких-либо иных видимых признаков интоксикации. Прирост массы тела и температура животных, получавших препарат во всех трех дозах, не отличались от соответствующих показателей контрольных животных, которым вводили плацебо.

Показано, что ректальное введение исследуемого препарата в течение 30 суток во всех трех дозах не приводит к статистически значимым отличиям в таких биохимических и гематологических параметрах, как содержание общего белка, глюкозы, мочевины; креатинина, активность ферментов - АЛТ, ACT и щелочной фосфатазы, концентрация гемоглобина, гематокрит, содержание эритроцитов, лейкоцитов, ретикулоцитов и тромбоцитов и параметры лейкоцитарной формулы крови.

Изучение последействия исследуемого препарата, проведенное через две недели после окончания 30-дневного ректального введения, показало, что все исследованные показатели у животных, которым вводили исследуемый препарат в дозах 23, 115 и 230 мг/кг, через 2 недели после окончания курса введения не отличались от соответствующих показателей животных групп плацебо.

Предварительные результаты патологоанатомического вскрытия показали, что в экспериментах по определению субхронической токсичности не обнаруживается морфологических изменений в печени, почках, надпочечниках, селезенке, тимусе, желудке, поджелудочной железе, сердце, легких, яичниках, семенниках и в ткани головного мозга под действием исследуемого препарата.

Проведенный сравнительный гистологический анализ показал, что и цитоморфологические изменения под действием исследуемого препарата в исследованных внутренних органах и тканях не развиваются.

Изучение местнораздражающего действия, проведенное на кроликах обоего пола, показало, что введение поликомплексного геля для лечения неспецифического язвенного колита в течение 30 дней не оказывает раздражающего действие на слизистую прямой кишки.

Предварительное исследование аллергизирующих свойств поликомплексного геля для лечения неспецифического язвенного колита, показало, что изучаемый препарат не проявляет аллергизирующего действия.

При изучении местноанестезирующей активности установлено, что исследуемый препарат не оказывает никакого местнораздражающего действия на роговицу глаза кролика. Показано, что поликомплексный гель для лечения неспецифического язвенного колита обладает заметным противовоспалительным действием.

На основании результатов оценки острой и субхронической токсичности, последействия и местнораздражающего действия, оценки аллергизирующих свойств и специфической фармакологической активности (антимикробной, местноанестезирующей и противовоспалительной) исследуемого препарата «поликомплексный гель для лечения неспецифического язвенного колита», полученных в результате биохимических, гематологических и гистологических методов исследования, можно рекомендовать данный препарат для лечения неспецифического язвенного колита, болезни Крона и свищей, как осложнений в ходе течения вышеназванных заболеваний, а так же других заболеваний кишечника.

Варианты осуществления изобретения

Поликомплексный гель для лечения неспецифического язвенного колита применяется ректально, ежедневно (вечером) 1 раз в день. Курс лечения определяется тяжестью заболевания.

Пример 1.

Для лечения неспецифического язвенного колита может быть использован поликомплексный гель следующего состава:

метронидазол - 1,0 г;

тимоген - 0,01 г;

карбопол - 1,0 г;

пропиленгликоль - 10,0 г;

динатриваевая соль ЭДТА - 0,05 г;

пропилпарагидроксибензоат - 0,02 г;

метилпарагидроксибензоат - 0,04 г;

натрия гидроксид - достаточное количество для получения необходимого Ph;

вода дистиллированная - остальное.

Пример 2.

Для лечения болезни Крона может быть использован поликомплексный гель следующего состава:

метронидазол - 0,8г;

тимоген - 0,002 г; карбопол -1,0 г;

пропиленгликоль - 10 г;

динатриваевая соль ЭДТА - 0,04г

пропилпарагидроксибензоат - 0,025г

метилпарагидроксибензоат - 0,04 г;

натрия гидроксид - достаточное количество для получения необходимого Ph; вода дистиллированная - остальное.

Пример 3.

Для лечения свищей может быть использован поликомплексный гель следующего состава:

метронидазол - 1,2г;

тимоген - 0,015 г;

карбопол -1,0 г;

пропиленгликоль - 10 г;

динатриваевая соль ЭДТА - 0,05г

пропилпарагидроксибензоат - 0,02г

метилпарагидроксибензоат - 0,04 г;

натрия гидроксид - достаточное количество для получения необходимого Ph; вода дистиллированная - остальное.