L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de fragments polyépitopiques d'une protéine déterminée pour la préparation de médicaments destinés à la prévention ou au traitement de pathologies dans lesquelles ladite protéine est reconnue par le système immunitaire cellulaire.

Avantageusement, lesdits fragments polyépitopiques sont tels que leur acide aminé N-terminal correspond à l'acide aminé N-terminal de l'épitope situé en amont d'un ou plusieurs autres épitopes d'une région polyépitopique de ladite protéine, et leur acide aminé C-terminal correspond à l'acide aminé C-terminal de l'épitope situé en aval du ou des épitopes susmentionnés de ladite région polyépitopique.

Ainsi, les fragments protéiques polyépitopiques susmentionnés de la présente invention correspondent avantageusement aux régions polyépitopiques d'une protéine déterminée, à savoir aux régions contenant plusieurs épitopes reconnus par les cellules T en association avec les différentes molécules du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH), lesdites régions étant sélectionnées parmi celles ayant la caractéristique d'tre dégradées in vitro en peptides plus courts par des protéasomes, tel que le protéasome 20S, lorsque le fragment protéique testé est mis en présence dudit protéasome, notamment selon la méthode détaillée suivante. Le fragment protéique (environ 75 ug lorsqu'il s'agit d'un polypeptide d'environ 30 acides aminés) est incubé à 37°C avec environ 15pg de protéasome 20S (Calbiochem Ref 539150, La Jolla, CA, USA) dans 500 Ill du tampon suivant : 20 mM Tris-HCl pH8,0,5 mM EDTA. Des aliquots de 50 ll sont prélevés après des temps d'incubation de 24 et 48 heures, et sont analysés par chromatographie liquide haute pression (HPLC). Les produits de digestion des protéasomes sont séparés par RP-HPLC (Perkin Elmer) en utilisant une colonne C18 et un gradient acétonitrile (de 0 à 100 % contenant 0,1 % d'acide trifluoroacétique, en 90

mn, taux d'élution 0,8 ml/mn). Les produits de clivage sont détectés à 214 nm par un détecteur à absorption (759A, Applied Biosystems).

Avantageusement les régions polyépitopiques définies ci-dessus possèdent la caractéristique de contenir des acides aminés hydrophobes.

Les différents épitopes de la région polyépitopique de la protéine déterminée, et délimitant les fragments protéiques polyépitopiques, sont avantageusement sélectionnés parmi les peptides ; -se liant à une molécule déterminée du CMH, notamment à une molécule de type HLA déterminé, et ce jusqu'à des concentrations d'environ 10 Ma environ 10M en peptide pour des concentrations d'environ 10 en molécule HLA, notamment dans les conditions décrites ci-après, -et formant un complexe stable avec cette molécule du CMH, à savoir notamment un complexe dans lequel ledit peptide reste lié à ladite molécule pendant au moins environ 3 heures à 37°C.

A titre d'illustration, les épitopes susmentionnés de l'invention sont sélectionnés parmi les peptides susceptibles : -d'une part de s'associer avec les molécules du CMH, notamment par mise en oeuvre de la méthode suivante : . incubation (notamment pendant environ 2 heures à 25°C, puis environ 15 heures à 4°C) du peptide en présence de molécules du CMH, provenant de la lyse de cellules humaines ou animales, ou purifiées notamment par chromatographie d'affinité à partir de lignées cellulaires humaines ou animales, . piégeage des complexes formés lors de l'étape précédente sur un support solide recouvert d'un premier anticorps, notamment monoclonal, reconnaissant spécifiquement les molécules du CMH dans leur conformation dépendante de leur liaison audit peptide, . addition sur le support solide précédent d'un deuxième anticorps marqué, notamment par couplage à un marqueur radioactif, enzymatique ou fluorescent, ledit anticorps marqué reconnaissant spécifiquement soit les chaînes lourdes du CMH dans leur conformation dépendante de leur liaison au peptide, soit la chaîne légère du CMH ou la 2-microglobuline se liant spécifiquement aux différentes chaînes lourdes du CMH dans leur conformation susmentionnée,

. détection, après rinçage du support solide, de l'éventuelle présence du deuxième anticorps marqué resté fixé sur le support solide, témoignant d'un effet d'association entre les molécules du CMH et le peptide étudié, -et, d'autre part, de former un complexe avec lesdites molécules du CMH, dont la stabilité peut tre évaluée par mise en oeuvre d'une méthode de suivi dans le temps de la liaison établie entre le peptide et les molécules du CMH, cette méthode étant avantageusement effectuée selon un protocole identique à la méthode précédente, mais dans laquelle l'étape d'incubation du peptide en présence des molécules du CMH sur le support solide recouvert dudit premier anticorps, est précédée par une étape préalable d'élimination du peptide libre susceptible d'tre présent dans le milieu réactionnel, notamment par lavage du support solide, ladite étape d'incubation étant effectuée (avantageusement à une température de 37°C) pendant des temps variables de lh, 3h, 5h, 24h et 48h.

Comme mentionné ci-dessus, les épitopes de l'invention doivent tre reconnus par les cellules T en association avec les molécules du CMH et s'associer à ces dernières, notamment dans le cadre de la mise en oeuvre du test de reconnaissance décrit ci-dessus.

Cette association peut tre faible (détectable à des concentrations en analogues peptidiques de l'ordre de 10-4 à 10-5 M), intermédiaire (détectable à des concentrations en analogues peptidiques de l'ordre de 10-6 à lot M), ou forte (détectable à des concentrations en analogues peptidiques de l'ordre de 10-8 à 10-9 M). Les peptides associés aux molécules du CMH dans le cadre de la présente invention sont de préférence susceptibles de se lier pendant au moins environ 3 heures auxdites molécules du GMH.

L'invention a plus particulièrement pour objet les épitopes (encore désignés peptides ci-dessus et ci-après) tels que décrits ci-dessus et caractérisés en ce qu'ils sont sélectionnés parmi ceux susceptibles : -d'induire in vitro la cytolyse par des lymphocytes T cytotoxiques, de cellules cibles présentant à leur surface le peptide susmentionné associé aux molécules du CMH, lesdits lymphocytes T cytotoxiques étant avantageusement prélevés sur un patient atteint d'une pathologie dans laquelle est impliqué le peptide étudié, -et d'induire in vitro la sécrétion de cytokines (ou interleukines) par les lymphocytes T cytotoxiques susmentionnés, notamment IL-2, IL-4 ou l'interféron y.

Le cas échéant, les épitopes susmentionnés sont choisis parmi ceux capables d'induire in vitro l'apparition et la croissance de lymphocytes T cytotoxiques à partir de cellules humaines ou animales, notamment à partir de cellules mononucléées issues du sang périphérique (PBMC), en présence de facteurs nécessaires à la croissance et la différenciation des cellules T cytotoxiques.

Les fragments protéiques polyépitopiques de l'invention sont davantage caractérisés en ce qu'ils sont susceptibles de contenir des épitopes CD4 reconnus par les cellules T auxiliaires en association avec les molécules du CMH de classe II, cette propriété favorisant l'induction et le maintien des cellules T CD8+ reconnaissant les épitopes compris dans lesdits fragments.

La présente invention est illustrée à l'aide des figures 1 et 2 représentant respectivement les séquences peptidiques de la protéine E6 et E7 de la souche 16 des papillomavirus humains (HPV 16), ainsi que les fragments polyépitopiques de l'invention, et les épitopes au sein de ces fragments.

L'invention a plus particulièrement pour objet les fragments polyépitopiques de la protéine E6 ou E7 d'HPV, et plus particulièrement ceux de la protéine E6 représentée sur la figure 1, ou par SEQ ID NO : 2, ou de la protéine E7, représentée sur la figure 2, ou par SEQ ID NO : 11, de HPV 16, caractérisés en ce qu'ils comprennent une séquence peptidique d'environ 15 à environ 30 acides aminés, cette séquence peptidique contenant les séquences en acides aminés d'au moins 3 épitopes différents, et de préférence d'au moins 4 épitopes différents se liant de façon stable à des molécules HLA de type identique ou différent, lorsque ces épitopes sont obtenus par dégradation enzymatique de ladite séquence peptidique, notamment dans le protéasome, de sorte qu'au moins 4 molécules HLA de différents types, et de préférence au moins 5 molécules HLA de différents types, se lient à ces épitopes, ces 4 ou 5 molécules HLA étant choisies parmi celles de type Al, A2, A3, Al 1, A24, A29, B7, B8, B18, B27, B35, B44, B51, et B62.

Avantageusement, les fragments polyépitopiques selon l'invention sont tels que le nombre d'acides aminés de leur séquence peptidique est supérieur ou égal à 17, et inférieur ou égal à 30.

L'invention concerne plus particulièrement les fragments polyépitopiques de la protéine E6 de HPV définis ci-dessus, caractérisés en ce qu'ils comprennent une séquence peptidique d'environ 15 à 30 acides aminés, cette séquence peptidique contenant les séquences en acides aminés d'au moins 5 épitopes différents, et de

préférence d'au moins 6 épitopes différents se liant de façon stable à des molécules HLA de type identique ou différent, lorsque ces épitopes sont obtenus par dégradation enzymatique de ladite séquence peptidique, notamment dans le protéasome, de sorte qu'au moins 6 molécules HLA de différents types, et de préférence au moins 7 molécules HLA de différents types se lient à ces épitopes, ces 6 ou 7 molécules HLA étant choisies parmi celles de type A1, A2, A3, Al 1, A24, A29, B7, B8, B18, B27, B35, B44, et B51.

Avantageusement, les fragments polyépitopiques de la protéine E6 selon l'invention, sont tels que le nombre d'acides aminés de leur séquence peptidique est supérieur ou égal à 20 (de préférence supérieur ou égal à 22), et inférieur ou égal à 30.

Avantageusement encore, les fragments polyépitopiques susmentionnés de la protéine E6 de HPV, sont caractérisés en ce qu'ils comprennent tous un épitope se liant à la molécule HLA de type B35, un épitope se liant à la molécule HLA de type B44, et un épitope se liant à la molécule HLA de type B51.

L'invention a plus particulièrement pour objet, le fragment polyépitopique de la protéine E6 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 30 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 15 et 44 de la séquence peptidique de la protéine E6 de HPV, et caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 4 suivante : (15) RPRKLPQLCTELQTTIHDIILECVYCKQQL (44) ledit fragment contenant 9 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 8 molécules HLA de types suivants : A2, All, A29, B7, B8, B35, B44, ou B51, lesdits épitopes étant les suivants : - (15) RPRKLPQL (22) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B7, ou B35, - (18) KLPQLCTEL (26) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (19) LPQLCTEL (26) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B51, - (21) QLCTELQTTI (30) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (24) TELQTTIHDI (33) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (29) TIHDIILRCV (38) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (33) IILECVYCK (41) se liant de façon stable aux molécules HLA de type Al 1, - (35) LECVYCKQQL (44) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (37) CVYCKQQL (44) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8.

L'invention concerne également le fragment polyépitopique de la protéine E6 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 17

acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 46 et 62, ou au fragment de 22 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 46 et 67 de la séquence peptidique de la protéine E6 de HPV, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 6 suivante : (46) RREVYDFAFRDLCIVYRDGNPY (67) ledit fragment contenant 6 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 10 molécules HLA de types suivants : A2, A3, All, A24, A29, B7, B27, B35, B44, ou B51, lesdits épitopes étant les suivants : - (46) RREVYDFAFR (55) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (49) VYDFAFRDL (57) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (50) YDFAFRDL (57) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (52) FAFRDLCIV (60) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, B35, B51, ou B7, - (54) FRDLCIVYR (62) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, ou Al 1, - (59) IVYRDGNPY (67) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, ou Al 1.

L'invention a également pour objet le fragment polyépitopique de la protéine E6 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 29 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 80 et 108 de la séquence peptidique de la protéine E6 de HPV, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 8 suivante : (80) ISEYRHYCYSLYGTTLEQQYNKPLCDLLI (108) ledit fragment contenant 6 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 10 molécules HLA de types suivants : A1, A3, All, A24, A29, B7, B18, B35, B44, ou B51, lesdits épitopes étant les suivants : - (80) ISEYRHYCY (88) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A1, ou B18, - (81) SEYRHYCY (88) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (87) CYSLYGTTL (95) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (94) TLEQQYNK (101) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, ou Al 1, - (95) LEQQYNKPL (103) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (101) KPLCDLLI (108) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B7, B35, ou B51.

L'invention a plus particulièrement pour objet le fragment polyépitopique de la protéine E6 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au

fragment de 22 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 118 et 139 de la séquence peptidique de la protéine E6 de HPV, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 10 suivante : (118) CPEEKQRHLDKKQRFHNIRGRW (139) ledit fragment contenant 6 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 7 molécules HLA de types suivants : A24, B8, B18, B27, B35, B44, ou B51, lesdits épitopes étant les suivants : - (118) CPEEKQRHL (126) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8, B18, B35, B51, - (119) PEEKQRHL (126) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (127) DKKQRFHNI (135) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8, - (128) KKQRFHNIR (136) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (130) QRFHNIRGRW (139) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (131) RFHNIRGRW (139) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24.

L'invention concerne également les fragments polyépitopiques de la protéine E7 de HPV tels que définis ci-dessus, caractérisés en ce qu'ils comprennent une séquence peptidique d'environ 15 à 30 acides aminés, cette séquence peptidique contenant les séquences en acides aminés d'au moins 3 épitopes différents, et de préférence d'au moins 4 épitopes différents se liant de façon stable à des molécules HLA de type identique ou différent, lorsque ces épitopes sont obtenus par dégradation enzymatique de ladite séquence peptidique, notamment dans le protéasome, de sorte qu'au moins 4 molécules HLA de différents types, et de préférence au moins 5 molécules HLA de différents types se lient à ces épitopes, ces 4 ou 5 molécules HLA étant choisies parmi celles de type A1, A2, A3, Al l, A29, B7, B18, B35, B44, et B62.

Avantageusement, les fragments polyépitopiques de la protéine E7 selon l'invention, sont tels que le nombre d'acides aminés de leur séquence peptidique est supérieur ou égal à 17, et inférieur ou égal à 23.

Avantageusement encore, les fragments polyépitopiques de la protéine E7 de HPV susmentionné, sont caractérisés en ce qu'ils comprennent tous un épitope se liant à la molécule HLA de type B44.

L'invention a plus particulièrement pour objet le fragment polyépitopique de la protéine E7 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 23 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 3 et 25 de la séquence peptidique de la protéine E7 de HPV, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 14 suivante :

(3) GDTPTLHEYMLDLQPETTDLYCY (25) ledit fragment contenant 5 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 6 molécules HLA de types suivants : A1, A2, B18, B35, B44, ou B62, lesdits épitopes étant les suivants : - (3) GDTPTLHEY (11) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (5) TPTLHEYML (13) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (11) YMLDLQPETT (20) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (15) LQPETTDLY (23) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (16) QPETTDLYCY (25) se liant de façon stable aux molécules HLA de type Al, ou B18.

L'invention concerne également le fragment polyépitopique de la protéine E7 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 17 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 44 et 60 de la séquence peptidique de la protéine E7 de HPV, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 16 suivante : (44) QAEPDRAHYNIVTFCCK (60) ledit fragment contenant 4 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 6 molécules HLA de types suivants : A1, A3, All, A29, B7, B18, B35, ou B44, lesdits épitopes étant les suivants : - (44) QAEPDRAHY (52) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A1, ou B18, - (45) AEPDRAHY (52) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (46) EPDRAHYNIV (55) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B7, ou B35, - (53) NIVTFCCK (60) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, ou Al 1.

L'invention a également pour objet le fragment polyépitopique de la protéine E7 de HPV tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 19 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 79 et 97 de la séquence peptidique de la protéine E7 de HPV, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique SEQ ID NO : 18 suivante : (79) LEDLLMGTLGIVCPICSQK (97) ledit fragment contenant 4 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 5 molécules HLA de types suivants : A2, A3, A11, A29, ou B44, lesdits épitopes étant les suivants : - (79) LEDLLMGTL (87) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, ou B44, - (82) LLMGTLGIV (90) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (86) TLGIVCPI (93) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2,

- (89) IVCPICSQK (97) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, ou Al 1.

L'invention a également pour objet les fragments polyépitopiques de la protéine p53 humaine caractérisés en ce qu'ils comprennent une séquence peptidique d'environ 20 à environ 35 acides aminés, cette dernière contenant les séquences en acides aminés d'au moins 3 épitopes différents se liant de façon stable à des molécules HLA de type identique ou différent, lorsque ces épitopes sont obtenus par dégradation enzymatique de ladite séquence peptidique, notamment dans le protéasome, de sorte qu'au moins 3 molécules HLA de différents types soient reconnues par lesdits épitopes et se lient à ces derniers, ces 3 molécules HLA étant choisies parmi celles de type A1, A2, A3, A24, B7, B8, B27, B35, B44, et B62.

L'invention concerne également les fragments polyépitopiques de la protéine p53 humaine susmentionnés, caractérisés en ce qu'ils comprennent une séquence peptidique d'environ 20 à environ 35 acides aminés, cette dernière contenant les séquences en acides aminés d'au moins 5 épitopes différents, et de préférence d'au moins 6 épitopes différents se liant à des molécules HLA de type identique ou différent, de sorte qu'au moins 3 molécules HLA de différents types, et de préférence au moins 4 molécules HLA de différents types soient reconnues par lesdits épitopes et se lient à ces derniers, ces 3 ou 4 molécules HLA étant choisies parmi celles de type A2, A24, B27, B35, B44, et B62.

L'invention a plus particulièrement pour objet le fragment polyépitopique de la protéine p53 humaine tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 32 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 106 et 137 de la séquence peptidique de la protéine p53, ou au fragment de 36 acides aminés délimité par les acides aminés aux positions 102 et 137 de ladite séquence peptidique, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique suivante : (102) TYQGSYGFRLGFLHSGTAKSVTCTYSPALNKMFCQL (137) ledit fragment contenant 6 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 4 molécules HLA de types suivants : A2, A24, B35, ou B62, lesdits épitopes étant les suivants : - (102) TYQGSYGFRL (111) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (105) GSYGFRLGFL (114) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (106) SYGFRLGFL (114) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (118) TAKSVTCTY (126) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (125) TYSPALNKMF (134) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24,

- (129) ALNKMFCQL (137) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35.

L'invention a également pour objet le fragment polyépitopique de la protéine p53 humaine tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 21 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 149 et 169 de la séquence peptidique de la protéine p53, et caractérisé par la séquence peptidique suivante : (149) STPPPGTRVRAMAIYKQSQHM (169) ledit fragment contenant 6 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 6 molécules HLA de types suivants : A2, A3, A24, B27, B35, ou B62, lesdits épitopes étant les suivants : - (149) STPPPGTRV (157) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (152) PPGTRVRAM (160) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (155) TRVRAMAIYK (164) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (156) RVRAMAIY (163) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (156) RVRAMAIYK (164) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, - (162) IYKQSQHM (169) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24.

L'invention concerne également le fragment polyépitopique de la protéine p53 humaine tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 26 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 187 et 212 de la séquence peptidique de la protéine p53, ou au fragment de 34 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 187 et 220 de ladite séquence peptidique, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique suivante : (187) GLAPP QHLIRVEGNLRVEYLDDRNTFRHSWVPY (220) ledit fragment contenant 11 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 7 molécules HLA de types suivants : Al, A2, A24, B7, B8, B27, ou B44, lesdits épitopes étant les suivants : - (187) GLAPPQHLIRV (197) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (189) APPQHLIRV (197) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B7, - (195) IRVEGNLRVEY (205) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (196) RVEGNLRVEY (205) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (197) VEGNLRVEY (205) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (201) LRVEYLDDR (209) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (203) VEYLDDRNTF (212) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (204) EYLDDRNTF (212) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24,

- (210) NTFRHSVVV (218) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8, - (211) TFRHSVVV (218) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (212) FRHSVVVPY (220) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27.

L'invention a également pour objet le fragment polyépitopique de la protéine p53 humaine tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 18 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 226 et 243 de la séquence peptidique de la protéine p53, et caractérisé par la séquence peptidique suivante : (226) GSDCTTIHYNYMCNSSCM (243) ledit fragment contenant 3 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 3 molécules HLA de types suivants : Al, A24, ou B44, lesdits épitopes étant les suivants : - (226) GSDCTTIHY (234) se liant de façon stable aux molécules HLA de type Al, - (227) SDCTTIHYNY (236) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (235) NYMCNSSCM (243) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24.

L'invention concerne également le fragment polyépitopique de la protéine p53 humaine tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il correspond au fragment de 25 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 249 et 273 de la séquence peptidique de la protéine p53, ou au fragment de 26 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 248 et 273 de ladite séquence peptidique, ou au fragment de 33 acides aminés délimité par les acides aminés situés aux positions 248 et 280 de ladite séquence peptidique, ce dernier fragment étant caractérisé par la séquence peptidique suivante : (248) RRPILTIITLEDSSGNLLGRNSFEVRVCACPGR (280) ledit fragment contenant 8 épitopes se liant de façon stable à l'une au moins des 6 molécules HLA de types suivants : A2, B7, B27, B35, B44, ou B62, lesdits épitopes étant les suivants : - (248) RRPILTIITL (257) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (249) RPILTIITL (257) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35 et B7, - (255) ITLEDSSGN (263) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (257) LEDSSGNLL (265) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (263) NLLGRNSF (270) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (264) LLGRNSFEV (272) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (266) GRNSFEVR (273) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (272) VRVCACPGR (280) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27.

L'invention concerne également les séquences peptidiques dérivées des fragments polyépitopiques susmentionnés de la protéine E6 ou E7, ou de la protéine p53, notamment ; -par substitution, et/ou suppression, et/ou addition d'un ou plusieurs acides aminés, des fragments susmentionnés, et/ou -par modification d'au moins une liaison peptidique-CO-NH-de la chaîne peptidique des fragments susmentionnés, notamment par introduction d'une liaison du type rétro, ou rétro-inverso, et/ou -par substitution d'au moins un acide aminé de la chaîne peptidique de la séquence ou du fragment susmentionnés, par un acide aminé non protéinogénique, lesdites séquences dérivées contenant des peptides ou pseudopeptides se liant spécifiquement à la ou aux mmes molécules du CMH que celles se liant aux peptides contenus dans les fragments polyépitopiques susmentionnés dont elles dérivent.

Par séquence dérivée par introduction d'une liaison rétro-inverso, il faut entendre tout analogue peptidique d'un fragment susmentionné, ledit analogue étant constitué d'une chaîne peptidique dans laquelle l'un au moins des résidus d'une part est lié à au moins un résidu voisin par une liaison-NH-CO-, et d'autre part, est de chiralité opposée à celle de ce mme résidu aminoacyle dans la chaîne peptidique du peptide parent (à savoir du fragment susmentionné dont elle dérive).

Par séquence dérivée par introduction d'une liaison rétro, il faut entendre tout analogue peptidique d'un fragment susmentionné, ledit analogue étant constitué d'une chaîne peptidique dans laquelle l'un au moins des résidus, est lié à au moins un résidu voisin par une liaison-NH-CO-, la chiralité de la totalité des résidus aminoacyles impliqués dans au moins une liaison-NH-CO-étant conservée par rapport aux résidus correspondant de la chaîne peptidique du peptide parent.

Il va de soi que les liaisons-CO-NH-et-NH-CO-doivent tre prises en compte dans ce qui précède, dans le sens de la chaîne peptidique parente allant de l'extrémité aminoterminale (N-terminale) vers l'extrémité carboxyterminale (C-terminale).

Par"acide aminé protéinogénique", on entend, dans ce qui précède, tout acide aminé entrant dans la constitution d'une protéine ou d'un peptide naturel.

Par"acide aminé non protéinogénique", on entend par opposition à la définition précédente, tout acide aminé n'entrant pas dans la constitution d'une protéine ou d'un peptide naturel. On entend plus particulièrement par"acide aminé non

protéinogénique", tout acide aminé dont le carbone portant la chaîne latérale R, à savoir le groupe-CHR-, situé entre-CO-et-NH-dans la chaîne peptidique naturelle, est remplacé par un motif n'entrant pas dans la constitution d'une protéine ou d'un peptide naturel.

L'invention a plus particulièrement pour objet les séquences dérivées telles que décrites ci-dessus, caractérisés en ce que l'une au moins des liaisons peptidiques-CO- NH-de la chaîne peptidique du peptide parent est remplacée par une liaison différente de la liaison-CO-NH-, ladite liaison différente étant notamment choisie parmi les suivantes : -CH2-NH- (méthylène amino) ; -CH2-CH2- (carba) ; -CO-CH2- (cétométhylène) ; -CH2-O- (méthylène-oxy) ; -CHOH-CH2- (hydroxyéthylène) ; -CHOH-CHOH- (di-hydroxyéthylène) ; -CH=CH- (EouZ oléfine) ; -CHCN-NH- (cyanométhylène amino) ; -S-CH2- (thiométhylène) ; -CH2-S- (méthylène thio) ; -CS-NH- (thioamide) ; -PO2-NH- (phosphonamide) ; -CHOH- (hydroxyméthylène) ; -NH-CO-NH- (urée) ; -CH(oxirane) ; o (tétrazole) ; -CH2-CO-NH- (p-homologation) ; -CHOH-CH2-NH- (hydroxyéthylène amino) ;

-CO-NH-NH- (hydrazino).

L'invention a également pour objet les séquences nucléotidiques codant pour un fragment polyépitopique de la protéine E6 ou E7, ou pour une séquence peptidique dérivée, tels que définis ci-dessus, lesdites séquences nucléotidiques étant issues de la séquence SEQ ID NO : 1 codant pour la protéine E6, ou de la séquence SEQ ID NO 11 codant pour la protéine E7.

A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet les séquences nucléotidiques définies ci-dessus, choisies parmi les suivantes : -la séquence SEQ ID NO : 3, codant pour le fragment polyépitopique SEQ IDNO : 4 susmentionné de la protéine E6, -la séquence SEQ ID NO : 5, codant pour le fragment polyépitopique SEQ IDNO : 6 susmentionné de la protéine E6, -la séquence SEQ ID NO : 7, codant pour le fragment polyépitopique SEQ IDNO : 8 susmentionné de la protéine E6, -la séquence SEQ ED NO : 9, codant pour le fragment polyépitopique SEQ ID N0 : 10 susmentionné de la protéine E6, -la séquence SEQ IID NO : 13, codant pour le fragment polyépitopique SEQ ID N0 : 14 susmentionné de la protéine E7, -la séquence SEQ IID NO : 15, codant pour le fragment polyépitopique SEQ IDNO : 16 susmentionné de la protéine E7, -la séquence SEQ NID Nô : 17, codant pour le fragment polyépitopique SEQ IDNO : 18 susmentionné de la protéine E7.

L'invention a également pour objet les séquences nucléotidiques codant pour un fragment polyépitopique de la protéine p53, ou pour une séquence peptidique dérivée, tels que définis ci-dessus.

L'invention a également pour objet tout vecteur, notamment plasmide, cosmide ou phage, contenant au moins une séquence nucléotidique susmentionnée placée sous le contrôle des éléments nécessaires à la transcription de ladite séquence, notamment sous le contrôle d'un promoteur et d'un terminateur de transcription.

L'invention concerne également les cellules hôtes, notamment bactéries, virus, levures, cellules eucaryotes, transformées à l'aide d'un vecteur susmentionné selon l'invention, de manière à intégrer de façon stable dans leur génome ou à maintenir de

manière stable dans leur cytoplasme, au moins une séquence nucléotidique selon l'invention.

L'invention concerne également tout vecteur comprenant un ou plusieurs fragments polyépitopiques et/ou une ou plusieurs séquences peptidiques dérivées tels que définis ci-dessus, ou tout vecteur comprenant une ou plusieurs séquences nucléotidiques susmentionnées, lesdits vecteurs étant choisis parmi ceux capables d'assurer une protection desdits fragments ou séquences nucléotidiques dans l'organisme et/ou leur pénétration dans les cellules de l'organisme.

Dans le cas de l'utilisation de fragments polyépitopiques et/ou de séquences peptidiques dérivées susmentionnés, de tels vecteurs sont choisis parmi les acides gras (dans le cadre de la préparation de lipopeptides), les liposomes etc.

A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet tout lipopeptide caractérisé en ce qu'il comprend : -une partie peptidique comprenant un ou plusieurs fragments protéiques polyépitopiques choisis parmi ceux définis ci-dessus, ou toute séquence peptidique dérivée desdits fragments telle que définie ci-dessus, -et une ou plusieurs parties lipophiles, avantageusement choisies parmi celles comprenant : * une chaîne hydrocarbonée en C4 à C20, saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, * ou un groupe stéroïde, le cas échéant lié à la chaîne hydrocarbonée susmentionnée, lesdites parties lipophiles étant éventuellement associées à un court peptide vecteur (pour former ainsi des motifs lipopeptidiques vecteurs) comportant une ou plusieurs fonctions ionisées à pH physiologique, et une fonction permettant la fixation covalente de ladite chaîne hydrocarbonée et/ou dudit groupe stéroïde.

Par partie lipophile, dans ce qui précède et ce qui suit, on entend toute molécule lipophile, insoluble dans l'eau, permettant, lorsqu'elle est liée à la partie peptidique définie ci-dessus, un passage intracellulaire passif du lipopeptide obtenu, grâce aux propriétés hydrophobes de ladite molécule. Avantageusement le lipopeptide résultant de la liaison de la partie lipophile à la partie peptidique, est soluble dans 1'eau.

De préférence, la chaîne hydrocarbonée des parties lipophiles, est choisie parmi celles de :

-l'acide palmitique, -l'acide oléique, -l'acide linoléique, -l'acide linolénique.

De préférence également, le groupe stéroïde de la ou des parties lipophiles, est choisi parmi les dérivés du cholestérol tel que l'acide cholest-5-ényl-3-oxy acétique, ou l'acide cholest-5-ényl-3-oxycarbonique.

L'invention a plus particulièrement pour objet tout lipopeptide tel que décrit ci- dessus, caractérisé en ce que la ou les parties lipophiles sont liées de façon covalente à un ou plusieurs acides aminés de la partie peptidique.

Avantageusement, la ou les parties lipophiles sont liées de façon covalente à la fonction aNH2 ou sNH2 d'une lysine située en position N-terminale ou C-terminale de la partie peptidique, ou à la fonction thiol d'une cystéine, ou à toute fonction amino, alcool ou thiol éventuellement ajoutée au peptide avec un espaceur simple.

A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet tout lipopeptide tel que défini ci-dessus, dans lequel la ou les parties lipophiles sont représentées par un groupe Na-acétyl-Lysine N£ (palmitoyl) (encore désigné par l'abréviation Ac-K (Pam)).

La présente invention a également pour objet, des micelles ou micro-agrégats d'un ou plusieurs lipopeptides différents définis ci-dessus.

Avantageusement, lesdits micelles ou micro-agrégats ont une taille inférieure à environ lum.

De préférence, les micelles ou micro-agrégats selon l'invention, sont tels qu'obtenus par dispersion desdits lipopeptides dans une solution d'acide acétique concentrée à environ 80%, ou tout autre solvant capable d'assurer une dispersion moléculaire des lipopeptides en solution.

Dans le cas de l'utilisation de séquences nucléotidiques définies ci-dessus selon l'invention, les vecteurs susmentionnés sont choisis parmi les virus, notamment les rétrovirus, les adénovirus et les virus associés (AAV Adeno Associated Virus).

L'invention a également pour objet les anticorps dirigés contre les fragments protéiques polyépitopiques ou les épitopes ou leurs séquences peptidiques dérivées (ou analogues) tels que définis ci-dessus, lesdits anticorps étant tels qu'obtenus par immunisation d'un animal avec au moins un des complexes susmentionnés, lesdits

anticorps étant susceptibles de former un complexe avec ces fragments polyépitopiques ou ces épitopes ou leurs analogues.

Les anticorps selon l'invention sont des anticorps polyclonaux ou monoclonaux.

Les anticorps polyclonaux susmentionnés sont obtenus par immunisation d'un animal avec au moins un fragment protéique polyépitopique ou un épitope ou un analogue selon l'invention, suivie de la récupération des anticorps recherchés sous forme purifiée, par prélèvement du sérum dudit animal, et séparation desdits anticorps des autres constituants du sérum, notamment par chromatographie d'affinité sur une colonne sur laquelle est fixée un antigène spécifiquement reconnu par les anticorps, notamment un fragment protéique polyépitopique ou un épitope ou un analogue selon l'invention.

Les anticorps monoclonaux selon l'invention peuvent tre obtenus par la technique des hybridomes dont le principe général est rappelé ci-après.

Dans un premier temps, on immunise un animal, généralement une souris, (ou des cellules en culture dans le cadre d'immunisations in vitro) avec un fragment protéique polyépitopique ou un épitope ou un analogue selon l'invention, contre lesquels les lymphocytes B de l'animal sont alors capables de produire des anticorps. Ces lymphocytes producteurs d'anticorps sont ensuite fusionnés avec des cellules myélomateuses"immortelles" (notamment murines) pour donner lieu à des hybridomes.

A partir du mélange hétérogène des cellules ainsi obtenu, on effectue alors une sélection des cellules capables de produire un anticorps particulier et de se multiplier indéfiniment. Chaque hybridome est multiplié sous la forme de clones, chacun conduisant à la production d'un anticorps monoclonal dont les propriétés de reconnaissance vis-à-vis du fragment protéique polyépitopique ou épitope ou analogue de l'invention pourront tre testées par exemple en ELISA, par immunotransfert en une ou deux dimensions, en immunofluorescence, ou à l'aide d'un biocapteur. Les anticorps monoclonaux ainsi sélectionnés, sont par la suite purifiés notamment selon la technique de chromatographie d'affinité décrite ci-dessus.

L'invention concerne également l'utilisation d'un ou plusieurs anticorps susmentionnés pour la mise en oeuvre d'une méthode de diagnostic in vitro des pathologies susmentionnées.

A ce titre l'invention a également pour objet des trousses ou kits comprenant lesdits anticorps, pour la mise en oeuvre d'une méthode de diagnostic telle que définie ci-dessus.

L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques, ou vaccins, caractérisés en ce qu'ils comprennent : * a) -au moins un fragment polyépitopique de la protéine E6 ou E7 tel que défini ci- dessus, -et/ou au moins une séquence peptidique dérivée de ce fragment, telle que définie ci-dessus, -et/ou au moins un vecteur approprié, notamment des lipopeptides et/ou micelles définis ci-dessus, contenant au moins un fragment polyépitopique susmentionné de la protéine E6 ou E7, et/ou au moins une séquence dérivée susmentionnée de ces fragments, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable, ledit fragment protéique polyépitopique et/ou sa séquence dérivée étant le cas échéant associés à un ou plusieurs autres épitopes exogènes reconnus par des cellules T auxiliaires (encore désignés épitopes CD4 ou T helper), lesdits épitopes étant choisis notamment parmi les suivants : . le fragment peptidique délimité par les acides aminés situés aux positions 830 et 846 de la séquence peptidique de la toxine tétanique, ledit fragment répondant à la formule suivante : QYIKANSKFIGITELKK, . l'hémagglutinine (Prevost-Blondel et al., 1995, J. Virol., 62, n°12, pp 8046- 8055), . l'épitope PADRE (Alexander et al., 1994, Immunity, 1,751).

* ou b) -au moins une séquence nucléotidique telle que définie ci-dessus, codant pour un fragment polyépitopique susmentionné de la protéine E6 ou E7, -et/ou au moins une séquence nucléotidique codant pour une séquence peptidique dérivée de ce fragment, telle que définie ci-dessus, les séquences nucléotidiques susmentionnées pouvant tre utilisées nues, en tant que minigènes, -et/ou au moins un vecteur approprié susmentionné, choisi notamment parmi les virus tels que définis ci-dessus, contenant au moins une séquence nucléotidique susmentionnée, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable,

* ou c) -des anticorps définis ci-dessus, dirigés contre un fragment polyépitopique de la protéine E6 ou E7, et/ou contre une séquence peptidique dérivée de ces fragments, tels que définis ci-dessus, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable.

Avantageusement les compositions pharmaceutiques, ou vaccins, susmentionnés, se présentent sous une forme administrable par voie sous-cutanée, notamment à raison de plusieurs injections (avantageusement 3 injections) d'environ 500 jj. g du fragment polyépitopique sous forme lipopeptidique, à environ un mois d'intervalle.

L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de fragments polyépitopiques de la protéine E6 ou E7 définis ci-dessus, ou de séquences peptidiques dérivées susmentionnées, ou de séquences nucléotidiques définies ci-dessus, ou d'anticorps susmentionnés, ou de lipopeptides définis ci-dessus, pour la préparation d'un médicament ou vaccin destiné à la prévention ou au traitement de pathologies liées à l'infection d'individus par les papillomavirus humains, telles que les néoplasies cervicales intraépithéliales (CIN), le cancer invasif du col de l'utérus, les néoplasies vulvaires intraépithéliales (VIN).

L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques, ou vaccins, caractérisés en ce qu'ils comprennent : * a) -au moins un fragment polyépitopique de la protéine p53 tel que défini ci-dessus, -et/ou au moins une séquence peptidique dérivée de ce fragment, telle que définie ci-dessus, -et/ou au moins un vecteur approprié, notamment des lipopeptides et/ou micelles définis ci-dessus, contenant au moins un fragment polyépitopique susmentionné de la protéine p53, et/ou au moins une séquence dérivée susmentionnée de ces fragments, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable, ledit fragment protéique polyépitopique et/ou sa séquence dérivée étant le cas échéant associés à un ou plusieurs autres épitopes exogènes reconnus par des cellules T auxiliaires (encore désignés épitopes CD4 ou T helper), lesdits épitopes étant choisis notamment parmi ceux définis ci-dessus, * ou b) -au moins une séquence nucléotidique telle que définie ci-dessus, codant pour un fragment polyépitopique susmentionné de la protéine p53,

-et/ou au moins une séquence nucléotidique codant pour une séquence peptidique dérivée de ce fragment, telle que définie ci-dessus, les séquences nucléotidiques susmentionnées pouvant tre utilisées nues, en tant que minigènes, -et/ou au moins un vecteur approprié susmentionné, choisi notamment parmi les virus tels que définis ci-dessus, contenant au moins une séquence nucléotidique susmentionnée, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable, * ou c) -des anticorps définis ci-dessus, dirigés contre un fragment polyépitopique de la protéine p53, et/ou contre une séquence peptidique dérivée de ces fragments, tels que définis ci-dessus, en association avec un véhicule physiologiquement acceptable.

L'invention a également pour objet l'utilisation : -d'au moins un fragment polyépitopique de la protéine p53, choisi parmi ceux définis ci-dessus, -et/ou d'au moins une séquence peptidique dérivée de ce fragment, telle que définie ci-dessus, -ou d'au moins une séquence nucléotidique, telle que définie ci-dessus, codant pour un fragment polyépitopique de la protéine p53, et/ou pour une séquence peptidique dérivée de ce fragment, tels que définis ci-dessus, pour la préparation d'un médicament ou vaccin destiné à la prévention ou au traitement des cancers, notamment les cancers du sein, du colon, du poumon, ou de la vessie.

L'invention concerne également les peptides ou épitopes de la protéine E6 d'HPV choisis parmi les suivants : - (19) LPQLCTEL (26) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B51, - (21) QLCTELQTTI (30) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, - (24) TELQTTIHDI (33) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29 et B44, - (33) IILECVYCK (41) se liant de façon stable aux molécules HLA de type Al 1, - (35) LECVYCKQQL (44) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29 et B44, - (37) CVYCKQQL (44) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8, - (46) RREVYDFAFR (55) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (49) VYDFAFRDL (57) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (50) YDFAFRDL (57) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, B44,

- (52) FAFRDLCIV (60) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A2, B35, B51, - (54) FRDLCIVYR (62) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, Al 1, - (59) IVYRDGNPY (67) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, Al 1, - (81) SEYRHYCY (88) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, B44, - (87) CYSLYGTTL (95) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (94) TLEQQYNK (101) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, Al 1, - (95) LEQQYNKPL (103) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, B44, - (101) KPLCDLLI (108) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B7, B35, B51, - (118) CPEEKQRHL (126) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8, B18, B35, B51, - (119) PEEKQRHL (126) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (127) DKKQRFHNI (135) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B8, - (128) KKQRFHNIR (136) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (130) QRFHNIRGRW (139) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (131) RFHNIRGRW (139) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24.

L'invention concerne également les peptides ou épitopes de la protéine E7 d'HPV choisis parmi les suivants : - (3) GDTPTLHEY (11) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (5) TPTLHEYML (13) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (15) LQPETTDLY (23) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (16) QPETTDLYCY (25) se liant de façon stable aux molécules HLA de type Al, B18, - (45) AEPDRAHY (52) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, B44, - (46) EPDRAHYNIV (55) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B7, ou B35, - (53) NIVTFCCK (60) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, Al 1, - (79) LEDLLMGTL (87) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A29, B44, - (89) IVCPICSQK (97) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A3, Al 1.

L'invention concerne également les séquences peptidiques dérivées des peptides susmentionnés, lesdites séquences dérivées, ou analogues, étant telles que définies ci- dessus dans le cadre des séquences dérivées des fragments protéiques polyépitopiques susmentionnés.

L'invention a également pour objet les séquences nucléotidiques codant pour les peptides des protéines E6 ou E7 susmentionnés, à savoir : -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 43 et 66 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (15) RPRKLPQL (22),

-la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 52 et 78 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (18) KLPQLCTEL (26), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 55 et 78 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (19) LPQLCTEL (26), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 61 et 90 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (21) QLCTELQTTI (30), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 70 et 99 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (24) TELQTTIHDI (33), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 97 et 123 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (33) IILECVYCK (41), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 103 et 132 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (35) LECVYCKQQL (44), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 109 et 132 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (37) CVYCKQQL (44), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 136 et 165 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (46) RREVYDFAFR (55), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 145 et 171 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (49) VYDFAFRDL (57), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 148 et 171 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (50) YDFAFRDL (57), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 154 et 180 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (52) FAFRDLCIV (60), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 160 et 186 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (54) FRDLCIVYR (62), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 175 et 201 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (59) IVYRDGNPY (67), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 241 et 264 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (81) SEYRHYCY (88), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 259 et 285 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (87) CYRLYGTTL (95), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 280 et 303 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (94) TLEQQYNK (101), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 283 et 309 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (95) LEQQYNKPL (103),

-la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 301 et 324 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (101) KPLCDLLI (108), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 352 et 378 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (118) CPEEKQRHL (126), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 355 et 378 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (119) PEEKQRHL (126), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 379 et 405 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (127) DKKQRFHNI (135), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 382 et 408 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (128) KKQRFHNIR (136), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 388 et 417 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (130) QRFHNIRGRW (139), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 391 et 417 de la séquence SEQ ID NO : 1, codant pour (131) RFHNIRGRW (139), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 7 et 33 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (3) GDTPTLHEY (11), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 13 et 39 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (5) TPTLHEYML (13), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 43 et 69 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (15) LQPETTDLY (23), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 46 et 75 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (16) QPETTDLYCY (25), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 133 et 153 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (45) AEPDRAHY (52), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 136 et 165 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (46) EPDRAHYNIV (55), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 157 et 180 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (53) NIVTFCCK (60), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 235 et 261 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (79) LEDLLMGTL (87), -la séquence délimitée par les nucléotides situés aux positions 265 et 291 de la séquence SEQ ID NO : 2, codant pour (89) IVCPICSQK (97).

L'invention a également pour objet les épitopes de la protéine p53 choisis parmi les suivants :

- (102) TYQGSYGFRL (111) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (105) GSYGFRLGFL (114) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (106) SYGFRLGFL (114) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (118) TAKSVTCTY (126) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (125) TYSPALNKMF (134) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (152) PPGTRVRAM (160) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (155) TRVRAMAIYK (164) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (156) RVRAMAIY (163) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (162) IYKQSQHM (169) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (195) IRVEGNLRVEY (205) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (197) VEGNLRVEY (205) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (201) LRVEYLDDR (209) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (203) VEYLDDRNTF (212) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (204) EYLDDRNTF (212) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (211) TFRHSVW (218) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (212) FRHSVVVPY (220) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (227) SDCTTIHYNY (236) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (235) NYMCNSSCM (243) se liant de façon stable aux molécules HLA de type A24, - (249) RPILTIITL (257) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B35, - (257) LEDSSGNLL (265) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B44, - (263) NLLGRNSF (270) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B62, - (266) GRNSFEVR (273) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27, - (272) VRVCACPGR (280) se liant de façon stable aux molécules HLA de type B27.

L'invention a également pour objet tout procédé de préparation de fragments polyépitopiques, d'épitopes simples (peptides susmentionnés), ou de séquences dérivées, par synthèse peptidique classique en phase liquide ou en phase solide.

En variante, les fragments polyépitopiques, épitopes simples, ou séquences peptidiques dérivées, tels que définis ci-dessus selon l'invention, peuvent tre obtenus sous forme de polypeptides recombinants par transformation de cellules hôtes appropriées telles que définies ci-dessus à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique recombinante telle que définie ci-dessus selon l'invention, et récupération, le cas échéant après purification, du polypeptide recombinant codé par ladite séquence nucléotidique et produit par les cellules hôtes susmentionnées.