WO/2021/072773 | ORLISTAT CAPSULE AND PREPARATION METHOD THEREFOR |
WO/2001/064221 | LOW DOSE ENTECAVIR FORMULATION AND USE |
JP2022544369 | Bacteria containing the myo-inositol-propionate pathway |
JUN HYE SUK (KR)
WO2015110656A1 | 2015-07-30 |
KR20120105116A | 2012-09-25 | |||
KR20090089474A | 2009-08-21 | |||
KR20110019327A | 2011-02-25 |
청구범위 [청구항 1] 생리활성물질로서루테인또는루테인함유추출물을포함하는코어; 상기코어를둘러싸고있는생분해성고분자층; 상기생분해성고분자층위에코팅된,점막부착성고분자및유화제함유 코팅층; 을포함하는이증층구조의고분자캡슐. [청구항 2] 제 1항에 있어서, 상기루테인함유추출물은,루테인을 10~90%(w/w)의양으로포함하는 것을특징으로하는고분자캡슐. [청구항 3] 제 1항에 있어서, ' 상기고분자캡슐은고분자캡술총중량을기준으로루테인을 1.0~ 95.0%(w/w)로함유하는것을특징으로하는고분자캡슐. [청구항 4] 제 1항에 있어서, 상기생분해성고분자층은폴리 -L-락트산,폴리 -글리콜산, 폴리 -D-락트산-코 -글라콜산,폴리 -L-락트산-코 -글리콜산, 폴리 -D,L-락트산-코 -글리콜산,폴리-카프로락톤,폴리-발레로락톤, 폴리 -하어드록시부티레이트및폴리 -하이드록시발러레이트로구성된 군으로부터선택된 1종이상의생분해성고분자로이루어진것을 특징으로하는이중층구조의고분자캡슐. [청구항 5] 제 1항에있어서, 상기점막부착성고분자는,알지네이트또는그의염 ,젤라틴, 을리고키토산 (chitooligosaccharide),키토산 (chitosan),글라이신 (glycine), 아르기닌 (arginine),라이신 (lysine),및사이클로덱스트린 (cyclodextrin)으로 구성된군에서선택된 1종이상의점막부착성고분자인것을특징으로 하는이중층구조의고분자캡슐. [청구항 6] 게 1항에 있어서, 상기유화제는수크로오스 (sucrose),폴리비닐파롤리돈 (polyvinyl pyrrolidone)및폴리비닐알코올 (polyvinyl alcohol)로구성된군으로부터 선택된 1종이상인것을특징으로하는이증층구조의고분자캡슐. [청구항 7] 제 1항내지제 6항증어느한항에기재된이중층구조의고분자캡슬의 제조방법으로서, : 생리활성물질인루테인또는루테인함유추출물과,생분해성고분자를 유기용매쎄용해시켜 , 1차에멀젼을생성하는단계 (1단계); 상기 1차에멀젼을점막부착성고분자와유화제가용해된수용액에 분산시키고균질화하여미립구를형성한후원심분리및동결건조하는 단계 (2단계); 를포함 -하는것을특징으로하는이중층구조의고분자캡슐의제조방법. [청구항 8] 제 1항내지제 6항중어느한항에기재된이증층구조의고분자캡술을 포함하는안과질환예방또는치료용약제학적조성물. [청구항 9] 제 1항내지제 6항증어느한항에기재된이증층구조의고분자캡슐을 포함하는안과질환예방또는개선용건강기능식품. [청구항 10] 제 1항내지제 6항증어느한항에기재된이중층구조의고분자캡슐을 포함하는화장료조성물. |
발명의명칭:루테인의용출률및안정성이 개선된이중층구조의 고분자캡슐,이의제조방법 및:이를함유하는안과질환예방또는 치료용약제학적조성물
기술분야
[1] 본발명은루테인의용출률및안정성이개선된이 증층구조의고분자캡슐,및 그제조방법에관한것이다.더욱구체적으로는 화에민감한루테인을 안정화시키고,안구내에서루테인의효능을장 기간발휘할수있는고분자 캡슐에관한것이다.또한,상기고분자캡슐을 용할수있는안과질환예방 또는치료용조성물,또는화장료조성물에관한 이다.
배경기술
[2] 하기화학식 1의루테인은카로티노이드 (carotenoids)의잔토필류 (xanthophyll) 중에서가장다량으로존재하는색소이며 (C 4(i H 56 0 2 ,주황색결정,융점약 193°C, 빛의흡수극대파장은 508, 475, 445 nm),이의동질이성질체인하기화학식 2의 제아잔틴 (Zeaxanthin)과함께눈의각막,동공및황반의주요 성성분으로서이 조직에존재하는유일한카로티노이드임이최근 연구에의해:밝혀졌다.
[5] 루테인은눈에흡수된높은에너지의청색광에대 한필터로작용하거나광촉매 기 (radical)나활성산소종을제거함으로써,눈을보 호해주는역할을한다.인간의 경우카로티노이드를합성하지못하므로루테인 이포함된음식또는
건강보조식품을통해루테인을섭취할수있다.
[6] 루테인을섭취하면황반색소의밀도가증가하여 눈질환이 있는환자들에게서 시각기능을개선시킬수있으며,눈의유해활성 산소에의한시세포손상에따른 노화과정을효과적으로억제함으로써 백내장이나노인성황반변성 (Age-related macular degeneration)과같은안구질환의발생율을감소시 수있다 (Bernstein P.S. et al., Ophthalmology, 2002(109), 1780-1787; Kvansakul J. et al., Ophthalmic and Physiological Optics, 2006(26), 362-371).
[7] 그런데,눈은생물학적장벽의여러층에의해분 리되어 있기때문에루테인을 황반에국소전달시키는데에 있어효율성올어떻게증진시킬것인지가 문제되고있다.루테인은황반에도달하기위해 막의견고한접합,점막표면, 혈액망막장벽을포함하는장애물을극복해야한 다.경구투여가간초회통과 효과 (liver first-pass effect)를피할수없는반면에,투여편리한점안 (eye drops)은누액과함께소실및배출됨으로써안구에 남아서약효를 : 발휘하는 양이적어안구생체이용률 (ocular bioavailability)이낮은문제가있고점도를 상승시킨연고제등의경우는점안감이불량하고 점안과정이불편한등의 문제가있다.
[8] 또한,루테인은 9개이상의이중결합이 있는불포화구조를포함하고있어빛, 열,공기 (산소)등의환경에매우불안정하며쉽게산화된 .따라서,차광,저은, 진공등의조건에서저장되어야하며보호제를첨 가하여산화를방지시켜야 한다ᅳ아울러 ,루테인은물에아주난용성이며,지방및오일 도용해도가낮다. 특하루테인의매우낮은수용해도 (1.3xl0 9 M)는생체이용률에단점을 나타낸다.
[9] 일반적으로난용성약물은생체내에서의용출속 도가느려흡수속도가늦고: 이에따라약효의발현및생체이용률도낮아지므 로,난용성약물의
생체어용률을증가시키기위해서는용출률이우 수한제제를설계하는것이 요구된다.
[10] 이에따라,루테인,오일및계면활성제를함유 하는액상제제를제조하여
루테인의난용성을개선시키고자하는연구들이 시도되었으나,용해성이 개선된제제를제조하는것은어려을뿐만아니라 ,용해성이일부극복되더라도 보관중에층분리현상또는주성분의침전현상이 일어나는등일반적으로 알려져있는방법으로는안정성및용출률이우수 한루테인약학제제의개발이 쉽지않다.또한,루테인등의카로티노이드는 포재생및항산화능에의해 피부주름개선및노화방지등의우수한효능으로 인해화장품에와도입이 시도되어왔지만,공기나수분둥외부자극과의 접촉으로쉽게변색및변취 . 현상이일어나고역가가장기적으로떨어져효능 이감소하는문제점을가진다.
[11] 이러한문제점들을개선하기위한종래선행기술 로서한국공개특허
제 2009-0070161호는카로티노이드를포함하는양이온 성고분자캡슬과상기 캡슐의표면에코팅된음이온성고분자층을포함 하는고분자캡술을개시하고 있고,한국공개특허제 2012-0108170호는루테인,인지질,오일및계면활 제의 흔합물을액상형태로연질또는경질캡슐에층진 시켜 약물의용출률및 생체이용률을제고시킨제제를개시하고있으며 ,국제공개특허
WO2016/025394는제인단백질또는폴리머를포함하 나노입자로
캡슐화하거나,또는상기나노입자와하이드로 겔의흔합물형태의조성물을 개시하고있으나,이들선행기술도루테인의안 정성및용출률을모두 개선시키는데에한계가있다.
[12] 이에,본발명자들은,루테인을안정화하면서 지속적인루테인용출을
가능하게하는새로운이중층구조의고분자캡슐 을제조하여,기존제제의 한계를극복하는.효과가있음을확인하고본발 을완성하게되었다.
발명의상세한설명
기술적과제
[13] 본발명의목적은,루테인을안정화할수있으며, 테인의 ^출률이개선된 이중층구조의고분자캡슐및그제조방법을제공 하는것이다.
[14] 또한,본발명의다른목적은상기고분자캡슐을 함유하여,활성물질의효능을 장기간발휘할수있는안과질환예방또는치료용 약제학적조성물또는 건강기능식품을제공하는것이다.
[15] 본발명의또다른목적은상기고분자캡슐을함유 하여,항산화활성을갖는 화장료조성물을제공하는것이다.
과제해결수단
[16] 본발명은,생리활성물질로서루테인또는루테 인함유추출물을포함하는 코어 ;상기코어를둘러싸고있는생분해성고분자층; 상기생분해성 고분자층상에코팅된,점막부착성고분자와유 화제의흔합층;을포함하는 이중층구조의고분자캡슐에관한것이다.
[17] 상기루테인함유추출물은,루테인함유추출물 총중량을기준으로
루테인을 10~90%(w/w)의양으로포함할수있다.
[18] 상기고분자캡슐은,고분자캡슐총중량을기준 로루테인을
1.0~95.0%(Ww)로함유할수있다.바람직하게는 3.0~90.0%(w/w)로함유할수 있고,보다바람직하게는 5.0~75.0%(w/w)로함유할수있다.
[19] 상기생분해성고분자층은폴리 -L-락트산,폴리 -글리콜산,
폴리 -D-락트산-코 -글리콜산,폴리 -L-락트산—코 -글리콜산,
폴리 -D,L-락트산-코 -글리콜산,폴리-카프로락톤,폴리-발레로락 론,
폴리 -하이드록시부티레이트및폴리 -하이드록시발러레이트로구성된 군으로부터선택된 1종이상으로이루어질수있다.
[2이 상기점막부착성고분자는,알지네이트또는그 염 ,젤라틴,
올리고키토산 (chitooligosaccharide),키토산 (chitosan),글라아신 (glycine), 아르기닌 (arginine),라이신 (lysine),및사이클로덱스트린 (cyclodextrin)으로 구성된군에서선택된 1종이상일수있다.
[21] 상기유화제는수크로오스 (sucrose),폴리비닐피를리돈 (polyvinyl pyrrolidone) 및폴리비닐알코올 (poly vinyl alcohol)로구성된군으로부터선택된 1종이상일수 있다.
[22] 본발명의다른양태에따르면,상기이증층구조 의고분자미립구캡술의
제조방법에관한것이다.구체적으로,상기제 방법은:,생리활성물질인루테인 또는루테인함유추출물과,생분해성고분자를 유기용매에용해시켜, 1차 에멀견을생성하는단계 (1단계);상기 1차에멀견을점막부착성고분자와 유화제가용해된수용액에분산시키고균질화하 여미립구를형성한후 원심분리및동결건조하는단계 (2단계);를포함한다.
[23] 본발명의다른양태에따르면,상기이중층구조 고분자캠슐을포함하는 안과질환예방또는치료용약제학적조성물에관 한것이다.
[24] 본발명의다른양태에따르면,상기이중층구조 의고분자캡슐을포함하는 안과질환예방또는개선용건강기능식품에관한 것이다.
[25] 본발명의또다른양태에따르면,상기이중층구 의고분자캡슐을포함하는 화장료조성물에관한것이다.
[26] 이하,본발명을더상세하게설명한다.
[27] 본발명은코어 -쉘 (Core-shell)형태의이중층구조의고분자캡슐로서 ,산화에 민감한루테인을생분해성고분자입자로일차캡 슐화하고,이일차캡슐의 외벽에점막부착성고분자와유화제의흔합층을 형성함으로써 ,루테인을 안정화시키면서;도,루테인의효능이안구내 서장기간발휘할수있는효과가 있다.
[28] 본명세서에서, '고분자캡슐'이란루테인또는루테인함유추출 이생분해성 고분자,및점막부착성고분자와유화제에의해 캡슐화된것 (encapsulation)을 의미하며, '미립구,, '고분자미립구,또는 '고분자미립구캡슐,이라고도 지칭한다.
[29] 본발명의이중층구조의고분자캡슐의제조방법 은,생리활성물질인루테인 또는루테인함유추출물과,생분해성고분자를 유기용매에용해시켜, 1차 에멀젼을생성하는단계 (1단계);상기 1차에멀견을점막부착성고분자와 유화제가용해된수용액에분산시키고균질화하 여미립구를형성한후 원심분리및동결건조하는단계 (2단계);를포함한다.
[30] 상기 1단계에 있어서,생리활성물질로서의루테인은루테인 자체로써분리된 순도 90%이상의순수한물질도이용될수있으나,식물 또는동물로부터추출한 루테인 10~90%함유추출물이이용될수있다.본발명에 있어서,바람직하게는 루테인 10~40%함유추출물이이용될수있고,이때추출물 은식물성오일에 분산시킨형태일수있으며,상기식물성오일로 서해바라기씨유,홍화씨유, 올리브유등이이용될수있다.
[31] 상기생분해성고분자는미립구제조시사용되는 통상의고분자들이사용될수 있으며,고분자의종류를제한하지는않지만, 본발명에서는폴리 -L-락트산, 폴리 -글리콜산,폴리 -D-락트산-코 -글리콜산,폴리 -L-락트산-코 -글리콜산, 폴리 -D,L-락트산-코 -글리콜산,폴리-카프로락톤,폴리-발레로락 톤,
폴리 -하이드록시부티:레이트및폴리 -하이드록시발러레이트로이루어진 군에서 1종이상이사용될수있다.또한,바람직하게는 리 -L-락트산, 폴리 -D-락트산-코 -글리콜산,폴리 -L-락트산-코-글리콜산및 폴리 -D,L-락트산-코-글리콜산 (PLGA)으로이루어지는군으로부터선택되는 1종 이상의고분자를사용할수있다.바람직하게는
폴리 -D,L-락트산-코-글리콜산 (PLGA)및폴리 -L-락트산중에서단독또는 2종을 흔합하여사용한다.
[32] 상기생분해성고분자는중량평균분자량이 60,000이하인것,바람직하게는 60,000~5,000인것이사용된다.예를들면,분자량 약 13,000인
폴리 -D,L-락트산-코 -글리콜산 (50:50),분자량약 33,000인
폴리 -D,L-락트산-코-글리콜산 (50:50),분자량약 52,000인
폴리 -D,L-락트산-코-글리콜산 (50:50),분자량약 20,000인
폴리 -D,L-락트산-코-글리콜산 (75:25),분자량약 16,000인폴리 -L-락트산 (100:0) 등을사용하는것이가능하다.
[33] 이와같은생분해성고분자는,예를들면,베링 거인겔하임 (Boehringer
Ingelheim)사의 Resomer L 206S, L 207S, L 209S, L 210, L 210S, LR 704S, LR 706S, LR 708, LR 927S, LG 824S, LG 855S, LG 857S, LC 703S, R 207S, RG 509S, X 206S, R 202S, R 202H, R 203H, R 205S, RG 502, RG 502H, RG 503, RG 503H, RG 504, RG 504H, RG 505, RG 653H, RG 752H, RG 752S, RG 753S, RG 755S, RG 756S, RG 757S, RG 750S, RG 858S일수있다.
[34] 또한,상기 : 1단계에서,유기용매로는생분해성고분자에대 용매성과증발을 통한제거용이성이모두뛰어난휘발성유기용매 이면특별히제한되지않으나, 바팜직하게는메틸렌클로라이드,에틸아세테 드,클로로포름,아세톤, 다이메틸설폭사이드,다이메틸포름아마이드 , N-메틸피롤리돈,다이옥산, 테트라하이드로퓨란,에틸아세테이트,메틸 에틸케톤및아세트니트릴에서 선택되는 1종의용매또는 2종이상의흔합용매가사용될수있으며,더
바람직하게는메틸렌클로라:이드,에틸아세 이트,클로로포름및
테트라하이드로퓨란에서선택되는 1종의용매또는 2종이상의흔합용매가 사용될수있으며,가장바람직하게는메틸렌클 라이드및
에틸아세테이트에서선택되는 1종또는 2종의혼합용매가사용될수있다.이때, 본발명의실시예에서는,생분해성고분자와루 테인 20%추출물을용해시키는 유기용매로서,수용해도가 20g/L(20°C)로낮은편인메틸렌클로라이드가 사용되었다.
[35] 다음으로,상기 1차에멀견을점막부착성고분자와유화제가용 된수용액에 분산시키고균질화하여미립구를형성한후원심 분리및동결건조하는
단계 (2단계)를진행한다.
[36] 이때사용되는점막부착성고분자는눈점막에부 착될수:있는물질이라면
어떤것이라도사용가능하다.바람직하게는알 네이트:또는그의염,젤라틴, 을리고키토산 (chitooligosaccharide),키토산 (chitosan),글라이신 (glycine), 아르기닌 (arginine),라이신 (lysine),및사이클로텍스트린 (cyclodextrin)으로 이루어지는군에서선택되는 1종이상의점막부착성고분자가사용되며,보 바람직하게는알지네이트,또는그의염이사용 되며,가장바람직하게는 알지네이트소디움이사용된다.점막부착성고 자를사용하여미립구를 형성함으로써 ,눈점막에서의체류시간을길게하는효과가있 .
[37] 또한,상기유화제로는고분자미립구를제조할 때사용하는통상의유화제를 이용할수있으며,바람직하게는수용액에분산 되는친수성유화제 (hydrophilic emulsifier)를사용할수있고,보다바람직하게는 크로오스 (sucrose), 폴리비닐프를리돈 (poly vinyl pyrrolidone)및폴리비닐알코올 (poly vinyl alcohol)로 이루어지는군으로부터 1종이상선택되는유화제가사용되며,가장
바람직하게는폴리비닐알코올을사용한다.또 ,상기폴리비닐알코올은 바람직하게는분자량 10,000-200,000인것을사용하며,더바람직하게는
50,000-200,000,가장바람직하게는 100,000~200,000인것을사용한다.
[38] 또한,상기 2단계에서,루테인분산체오일용액과,유화제 점막부착성
고분자가용해된수용액은,조건에따라적절하 조절가능하나,바람직하게는 1:1-50,더바람직하게^ 1:5-30,가장바람직하게는 1:5~20의부피비로흔합되어 분산될수있다.
[39] 상기 2단계에서루테인분산체용액을수용액에분산 킴으로서 OA 형의 이중유화미립구가형성될수있다.
[40] 상기미립구를포함하는 0/W형에멀견용액에 있어서,루테인의함량은용법, 용량에따라적절히조절가능하나,바람직하게 0.01~1.0%(w/v)이고,더 바람직하게는 O.l l.O^i w/v),가장바람직하게는 0.1~0.5%(w/v)이고,생분해성 고분자의함량은조건에따라적절하게조절가능 하나,바람직하게는
0.05~2.5%(w/v),더바람직하게는 0.1~1.0%(w/v),가장바람직하게는
0.25~1.0%(w/v)이다.
[41] 또한,상기 0/W형에멀젼용액에 있어서,점막부착성고분자의함량은조건에 따라적절하게조절가능하나,바람직하게는 0.01~3.0% (w/v),더바람직하게는, 0.01-1.0% (w/v),가장바람직하게는 0.01~0.7% (w/v)이다.아을러,유화제의 함량도적절하게조절가능하나,바람직하게는 0.01~10%(w/v),더바람직하게는 0.1~5%(w/v),가장바람직하게는으 5~3.0%(w/v)이다.
[42] 상기 2단계에서의균질화는통상적인균질기를이용 여수행할수있으며, 어떤것을사용해도균질화정도는거의유사하다 .이때,바람직하게는 교반기 (Stirrer),균질기 (Homogenizer)및초음파분쇄기 (Ultrasonicator)로 이루어진군에서선택되는것을이용하여수행할 수있다.
[43] 또한,동결건조하여미립구를건조하기위해, 원심분리법을통해미립구를 회수한후미립구를동결건조법,진공건조법, 무건조법등한가지이상의 방법을사용하여건조하여,이중층구조의생분 해성,점막부착성고분자캡슐을 생산한다.
[44] 본발명에따라생성된이중층구조의고분자캡슐 은,미립구형태를
유지하면서내부에루테인을함유하여루테인을 안정화시키고,고분자가 서서히분해되면서내부의루테인을지속적으로 방출해주는효과가있다.
[45] 상기고분자캡술은,고분자캡슐총중량올기준 로루테인을
1.0~95.0%(w/w)로함유한다.바람직하게는 3.0~90.0%(w/w)로함유하고,보다 바람직하게는 5.0~75.0%(w/w)로함유한다.
[46] 본발명의다른양태에따르면,상기이중층구조 고분자미립구캡슐을
포함하는안과질환예방또는치료용약제학적조 성물을제공한다.
[47] 상기약제학적조성물은,백내장,노인성황반변 ,녹내장,당뇨병성안과질환, 안구건조증,저시력등의안과질환의예방또는 료에적용될수있다.
[48] 본발명의안과질환예방또는치료용약제학적조 성물은임상투여시에경구 또는비경구로투여할수있으며 ,예를들어정맥및동맥내,근육내,피하,복 내,점막또는국소 (예,점안),안구,경피등에적용될수있다.:
[49] 상기조성물은경구투여용제형 ,예를들면,정제,트로키제 (troches),
로진지 (lozenge),수용성또는유성현탁액,조제분말또 과립,에멀젼,경질 또는연질캡슐,시럽또는엘릭실제 (elixirs)등으로제제화된다.정제및캡슐 등의제형으로제제화하기위해,약제학적으로 허용가능한담체또는
첨가제로서,락토오스,사카로오스,솔비를, 니를,전분,아밀로펙틴,
셀를로오스또는젤라틴과같은결합제;디칼슴 스페이트와같은부형제;
옥수수전분또는고구마전분과같은붕괴계;스 아린산마그네슘,스테아린산 칼슴,스테아릴푸마르산나:트륨과같은활택 가함유될수있다.캡술제형의 경우는상기에서언급한물질이외에도지방유와 같은액체담체를함유할수 있다.
[50] 또한,본발명의조성물은비경구로투여할수있 으며 ,비경구투여는피하주사, 정맥주사,근육내주사,복강내주사주입방식 점막,또는국소에적용되는데, 분산제,좌제,분제,에어로졸 (비강스프레이또는흡입제),점안제,겔,
현탁액제 (수성,또는비수성액상현탁액,수중유에멀견 는유중수에멀견), 용액제등비경구투여에적합한액상투여형태둥 에의한다ᅳ비경구투여용 제형으로제제화하기위해서는상기조성물을안 정화제또는완층제등과함께 물에서흔합하여용액으로제조하고,단위투약 앰플또는다수화투약형태로 제조할수있다.
[51] 본발명의조성물은,특히 약학적으로허용가능한첨가제와함께배합하여
점안제로제형화할수있고,점안제는통상등장 성수용액또는현탁액인것이 바람직하다.상기약학적으로허용가능한첨가 로서,예를들면,염화나트륨, 염화칼륨등의등장화제;아미노카프론산,인산 수소나트륨,및
인산어수소나트륨등의완충제;에데트산나트 ,과붕산나트륨등의안정화제; 염산,수산화나트륨등의 pH조절제등을들수있다.용제로는멸균정제수또 는 주사용증류수를사용하는것이바람직하다.상 점안제조성물에는필요에 따라보존제,방부제둥을부가할수있다.
[52] 본발명의약제학적조성물와적합한투여량은환 자의질환종류,질환의경증, 제형의종류,환자의연령,성별,체중,건강 상태,식이,약제학적치료용 조성물의투여시간및투여방법,투여경로,배 설속도및반응감웅성과같은 요인들에의해다양하게처방될수있다.바람직 게는,본발명의약제학적 조성물의투여량은성인기준으로 1일당 0.001~100mg/kg이고,보다
바람직하게는 a01~80mg/kg (체중)이며,가장바람직하게는
0.1~60mg/kg (체중)이다.또한,의사또는약사의판단에따라 일정시간간격으로
1일 1회내지수회로분할투여할수도있다.특히,점 투여의경우에는, 0.001 내지 3%(w/v,이하동일),바람직하게는 0.01내지 1%정도의제제를 1일 1회 내지수회점안한다.
[53] 본발명의다른양태에따르면,루테인함유이중 구조의고분자캡슐을
포함하는안과질환예방또는개선용건강기능식 품을제공한다.상기
건강기능식품은정제,캡슐제,환제또는액제 의형태로제조될수있다.상기 건강기능식품은식품제조시통상적으로첨가되 는성분을포함할수있으며, 예를들어단백질,탄수화물,지방,각종비타민 영양소및조미제를포함한다.
[54] 본발명의또다른양태에따르면,루테인함유이 층구조의고분자캡술을 포함하는화장료조성물을제공한다.본발명의 분자캡슐은,루테인의항산화 효과에의한피부주름개선또는피부노화방지효 과를가질뿐만아니라, 루테인의안정화및지속적방출을가능하게하므 로,화장료조성물로유용하게 적용될수있다.
[55] 상기화장료조성물은유연화장수,영양화장수 영양크림,맛사지크림,
에센스,아이크림,해어토닉,샴푸,린스, 클렌징크림,클렌징폼,클렌징워터,팩, 스프레이및파우더의제형으로제조될수있다. 한,상기화장료조성물은 화장료에통상적으로이용되는성분을포함할수 있다.예를들면,유화제, 점증제,유제,계면활성제,윤활제,알코올류 수용성고분자제,겔화제, 안정화제,비타민,무기염류,유화제,향료 은일반적인보조성분을포함할수 있다.상기성분들은제형또는사용목적에따라 첨가량을화장료고유의 효과를손상시키지않는범위내에서선택할수있 다.
발명의효과
[56] 본발명의이중층구조의고분자캡슐은,안과질 환치료에유용하고항산화한 활성을갖는루테인을안정화하면서,루테인의 용해도및용출률을개선시켜, 루테인의효능을장기간발휘시킬수있는효과가 있다.따라서,상기고분자 캡슐은,안과질환예방또는치료용조성물,또 는피부주름개선또는피부 노화방지를위한화장료조성물로유용하게적용 될수있다.
도면의간단한설명
[57] 도 1은실시예 1내지 7에서제 2된이중층미립구에대한시차주사
전자현미경 (Scanning Electronic Microscope, SEM)사진아다.
[58] 도 2는비교예 1내지 8에서제조된입자에대한시차주사전자현미경 (Scanning Electronic Microscope, SEM)사진이다.
[59] 도 3은실험예 2(용해도시험)에 있어서,루테인 20%추출물과실시예 2에따라 제조된이중층미립구의용해도비교시험결과를 나타낸그래프이다.
[60] 도 4는실험예 3(In vitro시험관내방출)에 있어서,실시예 1내지 7의시간
경과에따른루테인누적방출량을측정하여나타 낸그래프이다.
[61] 도 5는실험예 4(DSC의분석)에 있어서,루테인 20%추출물, PLGA,및실시예
1, 2및 5에따라제조된이중층미립구의 DSC의결과를나타낸도면이다.
[62] 도 6은실험예 5(PXRD의분석)에 있어서,루테인 20%추출물,
알지네이트소디움, PLGA,폴리비닐알코올,및실시예 1내지 7에따라제조된 이중층미립구의 PXRD의결과를나타낸도면이다.
[63] 도 7은실험예 6(안정성시험)에:있어서,실시예 1, 2및 5에따라제조된이중층 미립구의보관온도조건에따른루테인의잔존량 (%)을나타낸안정성결과 도면이다.
[64] 도 8은실험예 6(안정성시험)에 있어서,비교예 1내지 6에따라제조된이중층 미립구의보관온도조건에따른루테인의잔존량 (%)을나타낸안정성결과 도면이다.
발명의실시를위한최선의형태
[65] 이하본발명의바람직한실시예를상세하설명하 기로한다.그러나,본발명은 여기서설명되는실시예에한정되지않고다른형 태로구체화될수도있다. 오히려,여기서소개되는내용이철저하고완전 해지고,당업자에게본발명의 사상을층분히전달하기위해제공하는것이다.
[66] <실시예 1내지 7.본발명에따른미립구의쩨조 (OAV형 )>
[67] :하기표 1의실시예 1내지 7의성분조성으로미립구제형을제조하기위해 먼저생분해성고분자 PLGA 250mg~l,000mg(Boehringer Ingelheim)및루테인 20%추출물 500mg (루테인 100mg함유,해바라기씨유에분산된마리골드( Tagetes erecta L.)추출물,프랑스 DSM사제품)을메틸렌클로라이드쎄완전히 용해시켜오일용액 (8ml)을제조하였다.
[68] 알지네이트소디움 100mg~500mg (삼전화학제품)및폴리비닐알코올
500mg~1000mg(Sigma사제품)이용해된수용액 92ml에상기오일용액을 주입하여 0/W형에멀젼을형성하였고,이때각실시예에 있어서 O/W형 에멀견에함유된각성분의종류및농도 C¾(w/ V ))를정리하면하기표 1과같다.
[69] 이후,초음파분쇄기를사용하여균질화시킨후 유화시켜미립구를
형성하였다.이렇게형성된미립구를 6시간동안실온에서 ,상압하에서 교반하여메틸렌클로라이드를공기중으로서서 히증발시키면서경화시키고 이를증류수로세척을위해원심분리한후 (12000 rpm, 10분, 3회) pellet을 회수하였다. -70°C에서동결한다음 3일간동결건조하여최종적으로우수한 안정성을지닌,실시예 1내지 7의루테인함유미립구제형을제조하였다. [70] [표 1]
[71] <비교예 1내지 8.미립구의제조 (O/W형)〉
[72] 하기표 2의비교예 1내지 8의성분조성으로미립구제형을제조하기위해, 먼저생분해성고분자 PLGA 250mg~500mg(Boehringer Ingelheim)및루테인 20% 추출물 500mg (루테인 lOOmg함유,해바라기씨유에분산된마리골드 (ragetes erecta L.)추출물,프랑스 DSM사제품)을메틸렌클로라이드에완전히용해 켜 오일용액 (8ml)을제조하였다.점막부착성고분자로서 POLYOX™또는 Tween, 및 /또는유화제로서폴리비닐알코올또는폴록사 가용해된수용액 92ml에 상기오일용액을주입하여 0/W형에멀견을형성하였고,이때각비교예에 있어서 0/W형에멀젼에함유된각성분의종류및농도 (9 (w/v))를정리하면 하기표 2 와같다.
[73] 이후,초음파분쇄기를사용하여균질화사킨후 화시켜미립구를
형성하였다.이렇게형성된미립구를 6시간동안실온에서,상압하에서 교반하여메틸렌클로라이드를공기중으로서서 히증발시키면서경화시키고 이를증류수로세척을위해원심분리한후 (12000 rpm, 10분, 3희) pellet을 회수하였다. -70°C에서동결한다음 3일간동결건조하여최종적으로우수한 안정성을지닌,비교예 1내지 8의루테인함유미립구제형을제조하였다.
[74] [표 2]
[75] <실험예 1. PLGA함유미립구의표면형태측정 >
[76] 실시예 1내지 7,및비교예 1내지 8에따라제조된미립구의표면을
주사전자현미경 (SEM)을사용하여관찰하고,그측정결과를도 1및도 2에각각 나타내었다.도 1에와하면,본발명의실시예 1내지 7에따라,이중층구조의 표면이매끄러운미립구 (고분자:캡술)가형성된점이확인된다.반면에 비교예 1 내지 8에의해서는,도 2에서:확인되는바와같이미립구가전혀형성 지않고 그물구조의결정성이그대로남아있거나,또는 미립구가완전하지않은형태로 형성된상태였다.
[77] <실험예 2.용해도시험 >
[78] 루테인 20%추출물및실시예 2에의해제조된미립구제형을루테인으로써 1 mg/mL의농도로정제수,다양한 pH (1.2, 4.0, 6.8, 7.4)에분산시킨후,초음파 추출 (25°C, 1 h)을하였다. HPLC조건에따라생리활성물질인루테인 20% 추출물및실시예 2에의해제조된미립구제형을루테인으로서용 도를 측정하였다 (n=3).도 3은이증층미립구의용해도가비교군인루테인 20% 추출물에비해다양한 pH조건에서크게개선되었음을나타낸다ᅳ
[79] HPLC분석조건
[80] 하기조건을이용하여용해도시험의샘플 (n=3)을 HPLC분석하였다.
[81] 장비 : Agilent 1 100 series
[82] 검출기 : UV (446 nm)
[83] 컬럼: Prontosil;C18 (5 ra, 4.6 x 150 mm)
[84] 이동상: 0.1%암모늄아세테이트를포함한메탄올:아세 니트릴:
디클로로메탄 = 2:6:2 (V/V/V)
[85] 유속: 1.0 mL/분
[86] 주입량: 10 μ
[87] 유의성평가 : Τ < 0.05, * < 0.01
[88] <실험예 3.제조된미립구의 In vitro시험관내방출 >
[89] 하기의조건에서실시예 1 ~7에서제조된루테인함유미립구의시험관내 (in vitro)루테안방출특성평가를수행하였다.루테 으로써 10 mg의건조된 미됩:구들을 10mL의 PBS (Phosphate buffered saline, pH 7.4, 1M)용액으로 분산시킨후프랜즈다퓨견셀 (Franz Diffusion Cell,랩화인, FCDV-15)의멤브레인 free모델을이용하여 32±0.5°C, 200 rpm조건에서시간경과에따라 lmL샘플을 취하고여과하여약물꾀농도를실험예 2의 HPLC분석조건에따라 HPLC로 측정하여미립구로부터방출되는루테인의양을 측정하였다.샘플을취한후 신선한 PBS 7Λ로다시보층하였다. 72시간동안측정된미립구로부터방출되는 루테인의방출량 (%)를도 3에나타내었다 (n=3).도 4를참고하면,루테인
20%추출물 (대조군)은 72시간동안거의방출이일어나지않은반면에, 시예 1 내지 7에따른미립구는초기과다방출이없고, 0차방출을유지하며 72시간 동안지속적으로방출되므로서방형제제로유용 하게사용될수있음아 확인된다.
[90] <실험예 4.루테인 20%추출물및제조된미립구의시차주사열량법 (DSC)의 분석 >
[91] 루테인 20%추출물, PLGA,알지네이트소디움, PVA를각각시차주사열량기 (DSC1,메를러토레도,스위스)를이용하여측정하 다.각각의샘플은 2 mg 정확히취해알루미늄팬에올려놓고 0-600 o C까지 10 o C/분승온시키며열변량 곡선을측정하였다.도 5a는루테인 20%추출물의 DSC열곡선이다. 156.12°C, 431.05 o C에서흡열반응을나타내며이것은이물질 녹는점과관계있다.
[92] 도 5b은 PLGA (50:50)의 DSC열곡선이다. 46.81°C, 338.63°C에서흡열반웅을 나타낸다.도 5c내지 5e는각각실시예 1의미립구 (도 5c),실시예 2의미립구 (도 5d),실시예 3의미립구 (도 5e)에대한열곡선이다.모두 PLGA와유사한상전이 온도를나타내는바,이는루테인이외부환경으 부터차단되어 PLGA에 안정적으로봉입되었고,외부환경에노출되는 루테인의양이제로화되어 루테인이효율적으로안정화되었음을의미한다 ᅳ
[93] <실험예 5.제조된미립구의분말 X-선회절 (PXRD, Powder X-Ray
Diffraction)의분식 >
[94] 루테인 20%추출물, PLGA,알지네이트소디움, PVA및실시예 1내지 7을각각 분말 X-선회절 (D8 DISCOVER,브룩커,독일)을이용하여측정하였다.데 이터는 산란각 2theta 5-70°, step size ().02 ο 으로얻었다.도 6는루테인 20%추출물 자체에는 2theta 10~30°에서결정성을나타낸반면실시예 1내지실시예 7의 이중층미립구에서의분말회절은 PLGA와유사한패턴의무정형을나타내어 PLGA에봉입이성공적으로이루어졌음을나타낸 .이는루테인을효과적으로 외부환경으로부터차단하여안정성을보장하고 입자표면의결정성소실로 인해용해도를높일수있었다는점을제시하는것 이다.
[95] <실험예 6.제조된미립구의안정성시험 >
[96] (1)루테인 20%추출물,및실시예 1,실시예 2,실시예 5를각각 4°C,실온, 40°C에 저장후시간 (초기, 1주, 2주, 4주)의변화에따른안정성을루테인 보유양으로써시험하였다.초기는동결건조가 료된시점에측정되었고 샘플은모두 3회시험되었다.
[97] 4°C에서비교군인루테인 20%추출물및실시예 1, 2,및 5의이중층미립구가 4주동안안정한결과를확인할수있었다 (도 7a).
[98] 실은에서비교군인루테인 20%추출물은초기에비교해서 4주후 -10.2%의 함량감소를보인반면실시예 1, 2,및 5의이중층미립구의시험결과는각각 -5.1%, -2.7%,및 -2.5%의경시변화를확인할수있었다 (도 7b).
[99] 40°C에서저장한비교군인루테인 20%추출물은초기에비교해서 1주, 2주및 4주후,각각, -16.3%. -25.2%, -40.8%의눈에띄는함량감소 #보여루테인 자체가열에취약하다는사실을재확인할수있었 다.그러나,본발명의실시예 1, 2,및 5의이증층미립구의시험결과는 4주후측정결과각각 -4.3%, -6.7%,및 -4.8%의경시변화만을나타내어,본발명이루테인 을완전히캡슬화함으로써 온도에 예민한자체의성질을보호함으로써안정:성이 저하개선되었음을 확인할수있었다 (도 7c).
[100] (2)루테인 20%추출물,및비교예 1내지 6을각각 4 0 C,실욘, 40 o C에저장후 시간 (초기, 1주및 2주)의변화에따른안정성을루테인보유양으로 시험 하였다.초기는동결건조가완료된시점에측정 었고샘플은모두 3회시험 되었다.
[101] 비교예 1내지 6은,이미실험예 1을통해미립구가전혀형성되지않거나, 불완전한미립구를형성하는것으로확인되었던 바,도 8에서와같이, 4°C,실은, 및 40°C에서의 2주안정성시험결과,모든시험조건에서루테 20%추출물 보다역가가현저히저하되어안정성이확보되지 않는것으로나타났다.