VERCAUTEREN, Joseph (301 Chemin de Caylus, Castelnau-le-lez, Castelnau-le-lez, F-34170, FR)
| REVENDICATIONS 1 - Compositions de dérivés de polyphénols, caractérisées en ce qu'elles comprennent en combinaison au moins deux dérivés répondant chacun à la formule générale (I): dans laquelle les substituants présentent les significations suivantes: - m représente un nombre entier de 0 à 9, différent de 0 si n= 0 - n représente un nombre entier de 0 à 9, différent de 0 si m= 0 - R représente : ■ un hydrogène, ■ un radical alkyle en C1-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé ■ un radical d'alcool ou de polyol linéaire, cyclique saturé ou insaturé en C3-C22, ■ un résidu d'oside ou d'oligoside ■ un résidu d'acide-alcool ■ un résidu aromatique ou polyaromatique phénolique ou non ; - R1 représente : ■ un hydrogène, ■ un radical alkyle en C1-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé ■ un résidu d'oside ou d'oligoside ■ un résidu d'acide-alcool ■ un résidu aromatique ou polyaromatique phénolique ou non ; - R2 représente : ■ un hydrogène, ■ un ou plusieurs substituants identiques ou différents occupant une ou plusieurs des quatre positions libres sur le groupe para- hydroxyphényle, parmi: o alkyle en C1-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé o un éther de sucre, o un résidu d'oligoside, o un éther ou un ester d'acide-alcool o un éther ou un ester aromatique. 2- Compositions selon la revendication 1 , caractérisées en ce que les substituants de la formule (I) présentent les significations suivantes : « radical cyclique en C3-C6 » comprend l'acide shikimique, l'acide quinique ■ « résidu de sucre » comprend un résidu de glucose, galactose, rhammose ■ « oligoside », comprend le rutinose ■ « résidu d'acide-alcool » comprend acide malique ou lactique ■ « résidu aromatique » comprend un acide-phénol ou un polyphénol, « Acide-phénol » comprend l'acide gallique, l'acide cinnamique, l'acide caféique et polyphénol comprend phloroglucinol, resvératrol, catéchine. 3 - Composition, pour utilisation comme conservateur, comportant, en combinaison, au moins deux dérivés de formule générale I), dans laquelle n est différent de 0, ces dérivés répondant à la formule générale (II), (il) ou à la formule générale (III) vinyhgie type 2 (III) dans laquelle - n représente un nombre entier de 1 à 9 (formule II) ou de 0 à 8 (formule - m représente un nombre entier de 0 à 9 - R représente, quand m est un entier de 1 à 9 : - un radical alkyle en C9-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé. - un résidu d'alcool ou polyol, linéaire, cyclique, saturé ou insaturé en C3- C22- - un résidu d'oside ou d'oligoside - un résidu d'acide-alcool - un résidu aromatique ou polyaromatique, phénolique ou non R1 représente : - un radical alkyle en C2-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé - un éther d'oside ou d'oligoside - un acyle d'acide-alcool - un éther d'acide-alcool - un résidu aromatique, phénolique ou non R2 représente : - un ou plusieurs substituants identiques ou différents occupant une ou plusieurs des quatre positions libres sur le groupe para- hydroxyphényle, parmi : - alkyle en C1 -C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé - un O-héthéroside, - un résidu d'oligoside, - un éther ou un ester d'acide-alcool - un éther ou un ester aromatique. 4 - Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisées en ce que les dérivés de formule (I), (II) ou (III) proviennent du mélange d'au moins deux sources végétales différentes. 5 - Procédé de préparation de compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend, A) une délipidation d'une poudre de matière végétale, B) une macération-transestérification de l'ensemble des polyphénols vinylogues d'acide p-hydroxybenzoïques présents dans la partie de plante délipidée, C) une phase d'extraction des esters vinylogues de p- hydroxybenzoates ainsi formés, D) la lyophylisation de l'extrait obtenu. 6 - Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'étape A de délipidation d'une poudre de plante est réalisée, selon la nature de la partie de plante sélectionnée, par un solvant organique (procédé dit AcOEt) ou par traitement par un fluide supercritique (procédé dit FSC), en particulier en présence d'un co-solvant, la poudre délipidée obtenue étant ensuite séchée. 7 - Procédé selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que l'étape B, de « macération-transestérification » est réalisée sur une poudre d'un matériel végétal ou sur une poudre d'un mélange d'au moins deux matériels végétaux différents. 8- Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisée en ce que l'étape B de macération-transestérification est réalisée sur l'ensemble des polyphénols vinylogues d'acide p-hydroxybenzoïques présents dans la partie de plante délipidée, à l'aide d'un acide organique , d'un ou plusieurs alcool(s) . 9 - Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'étape d'extraction des esters vinylogues de p-hydroxybenzoates obtenus à l'issue de l'étape de macération-transestérification est réalisée à l'aide de fluides supercritiques en présence de co-solvant. 10 - procédé selon la revendication 9, caractérisé par l'utilisation de CO2 comme fluide supercritique. 1 1 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 10, caractérisé en ce que les matières végétales proviennent de plantes choisies parmi l'artichaut, la salade, le persil, les choux, le caféier, le théier, le cacaoyer, la vigne, le petit houx, le marronnier d'Inde, des Rosacées (pommier, abricotier) des Aurantiées (citron, orange, pamplemousse), des Fabacées (haricot glycine, sophora, soja, polygonum) ou de fruits divers (les fruits rouges, notamment). 12 - Utilisation des compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou telles qu'obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 1 1 , comme conservateurs en cosmétique. 13 - Utilisation des compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou telles qu'obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 1 1 .comme conservateurs dans le domaine alimentaire. 14- Utilisation des compositions selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou telles qu'obtenues par le procédé selon l'une quelconque des revendications 5 à 1 1 , comme conservateurs dans la fabrication de médicaments. |
bactéricide et fongicide
L'invention a pour objet des compositions de dérivés polyphénoliques, telles qu'obtenues par un procédé spécifique permettant de préparer, directement à partir des plantes, des extraits modifiés aux propriétés bactéricides et fongicides renforcées. Elle concerne également le procédé spécifique d'obtention de ces compositions ainsi que leurs applications, notamment, dans les domaines cosmétique, alimentaire et thérapeutique, tout particulièrement en tant que conservateurs.
En raison de leurs larges spectres antimicrobien et antifongique, les parabènes se sont imposés comme conservateurs dans la majorité des produits cosmétiques et diététiques, et plus encore, dans les médicaments.
Les parabènes répondent à la formule (A) :
(A)
Il s'agit de dérivés de l'acide parahydroxybenzoïque estérifié par un alcool . Les parabènes diffèrent les uns des autres par la nature du groupe R caractéristique de cet alcool.
Plusieurs études ont mis en cause l'utilisation des parabènes, pour leurs effets toxiques sur la santé humaine, liés à leur capacité à interagir avec les récepteurs aux œstrogènes. Cependant, la question fait encore largement débat, du fait de résultats contradictoires. Les conservateurs restant indispensables pour inhiber le développement des bactéries et/ou des champignons, plusieurs parabènes (esters de méthyle, éthyle, propyle, et même butyle) restent autorisés officiellement (comme conservateurs de médicaments, notamment), mais en mélange, car ils agissent en synergie, ce qui permet de diminuer les doses utiles. Des composés de remplacement sont cependant activement recherchés. Il s'agit de disposer de conservateurs au moins équivalents aux parabènes, mais qui n'en présenteraient pas les effets négatifs. Ainsi, des alcools gras ou des huiles essentielles, ont-ils été proposés. Mais ces alternatives ne constituent pas une solution entièrement satisfaisante, car elles posent d'autres problèmes, comme celui de présenter d'autres effets secondaires indésirables dus, par exemple, à leur pouvoir allergisant.
Les inventeurs sont partis de l'hypothèse que des vinylogues des parabènes (formule (B)) posséderaient les mêmes propriétés antibactérienne et antifongique. Il s'agit donc de dérivés dont la structure comporte au moins une double liaison supplémentaire insérée entre la fonction « para-hydroxyle » et la fonction « ester carboxylique ». Plusieurs types d'insertions sont possibles, mais pour conserver les propriétés antibactérienne et antifongique, le(s) groupement(s) vinyle(s) supplémentaire(s) doi(ven)t être localisé(s) entre l'hydroxyle et la fonction ester (vinylogie de type 1 : formule (C)), et/ou la fonction alcool de l'ester carboxylique (vinylogie de type 2 : formule (D)).
v ny og es poss es esters v ny ogues ac. para- y roxy enzo ques para-hydroxycinnamates
Dans le plus simple des cas, il s'agit de dérivés de l'acide para- hydroxycinnamique (acide p-coumarique, formule (E)).
Les recherches des inventeurs dans ce domaine ont conduit à mettre en évidence l'intérêt d'avoir recours, comme conservateurs, à des compositions de dérivés polyphénoliques, telles qu'obtenues par application directe, sur des végétaux choisis pour leur richesse en polyphénols, d'un procédé spécifique.
L'invention a donc pour but de fournir des compositions de dérivés polyphénoliques dotées de propriétés antibactérienne et antifongique. Elle vise également le procédé d'obtention de telles compositions qui comprend systématiquement une étape préalable à l'extraction de « macération- fonctionnalisation » du végétal sélectionné. Au cours de cette étape, les polyphénols naturels (tels que les acides phénols, anthocyanes, flavonoïdes, isoflavonoïdes, coumarines, chalcones, ...) sont soumis à des conditions d'estérifications et/ou de transestérifications, visant à accroître la formation des esters vinylogues de parabènes, à partir de leurs précurseurs naturels.
Selon encore un autre aspect, l'invention vise la mise à profit des propriétés antibactérienne et antifongique de ces compositions de dérivés polyphénoliques dans des applications à titre de conservateurs, notamment dans les domaines cosmétique, alimentaire et thérapeutique.
Chaque composition selon l'invention, utilisable en tant que conservateur, comporte en combinaison au moins deux dérivés répondant à la formule générale
(I):
(I)
dans laquelle
- m représente un nombre entier de 0 à 9, différent de 0 si n= 0
- n représente un nombre entier de 0 à 9, différent de 0 si m= 0
- R représente :
■ un hydrogène,
■ un radical alkyle en C1-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé
■ un radical d'alcool ou de polyol linéaire, cyclique saturé ou insaturé en
C3-C22,
■ un résidu d'oside ou d'oligoside
■ un résidu d'acide-alcool
un résidu aromatique ou polyaromatique phénolique ou non ; - R 1 représente :
■ un hydrogène,
■ un radical alkyle en C1-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé
■ un résidu d'oside ou d'oligoside
- un résidu d'acide-alcool
■ un résidu aromatique ou polyaromatique phénolique ou non ;
- R 2 représente :
■ un hydrogène
■ un ou plusieurs substituants identiques ou différents occupant une ou plusieurs des quatre positions libres sur le groupe para- hydroxyphényle, parmi:
o alkyle en C1-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé o un éther de sucre,
o un résidu d'oligoside,
o un éther ou un ester d'acide-alcool
o un éther ou un ester aromatique.
Plus particulièrement, les substituants de la formule (I) présentent les significations suivantes :
■ « radical cyclique en C 3 -C 6 » comprend l'acide shikimique, l'acide quinique
■ « résidu de sucre » comprend un résidu de glucose, galactose, rhammose
■ « oligoside », comprend le rutinose
■ « résidu d'acide-alcool » comprend l'acide malique ou lactique
■ « résidu aromatique » comprend un acide-phénol ou un polyphénol.
« acide-phénol » comprend avantageusement l'acide gallique, l'acide cinnamique, l'acide caféique et « polyphénol » comprend phloroglucinol, resvératrol, catéchine.
L'invention vise une composition, pour utilisation comme conservateur, comportant, en combinaison, au moins deux dérivés de formule générale I), dans laquelle m et/ou n est (sont) différents(s) de 0.
Ces dérivés répondent à la formule générale (II),
ou à la formule générale (III)
dans laquelle
- n représente un nombre entier de 1 à 9 (formule II) ou de 0 à 8 (formule III)
- m représente un nombre entier de 0 à 9
- R représente, quand m est un entier de 1 à 9 :
- un radical alkyle en C9-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé.
- un résidu d'alcool ou polyol, linéaire, cyclique, saturé ou insaturé en C 3 -
C22-
- un résidu d'oside ou d'oligoside
- un résidu d'acide-alcool
- un résidu aromatique ou polyaromatique, phénolique ou non
- R1 représente :
- un radical alkyle en C2-C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé
- un éther d'oside ou d'oligoside
un acyle d'acide-alcool - un éther d'acide-alcool
- un résidu aromatique, phénolique ou non
- R2 représente :
- un ou plusieurs substituants identiques ou différents occupant une ou plusieurs des quatre positions libres sur le groupe para- hydroxyphényle, parmi :
- alkyle en C1 -C22, linéaire, ramifié, cyclique, saturé ou insaturé
- un O-héthéroside,
- un résidu d'oligoside,
- un éther ou un ester d'acide-alcool
- un éther ou un ester aromatique.
Avantageusement, les compositions ci-dessus proviennent de plantes choisies parmi l'artichaut, la salade, le persil, les choux, le caféier, le théier, le cacaoyer, la vigne, le petit houx, le marronnier d'Inde, des Rosacées (pommier, abricotier) des Aurantiées (citron, orange, pamplemousse), des Fabacées (haricot glycine, sophora, soja, polygonum) ou de fruits divers (les fruits rouges, notamment).
Dans une composition préférée, les dérivés de formule (I) proviennent du mélange d'au moins deux sources végétales différentes.
Les compositions de l'invention sont avantageusement obtenues selon un premier procédé, dit « AcOEt », défini ci-dessous, comprenant :
A) une délipidation d'une poudre de matière végétale,
B) une macération-transestérification de l'ensemble des polyphénols vinylogues d'acide p-hydroxybenzoïques présents dans la partie de plante délipidée,
C) une phase d'extraction des esters vinylogues de p-hydroxybenzoates ainsi formés,
D) la lyophylisation de l'extrait obtenu.
L'étape A de délipidation d'une poudre de plante est réalisée selon la nature de la partie de plante sélectionnée, par un solvant organique ou par traitement par un fluide supercritique.
Des solvants appropriés comprennent l'hexane, l'éther de pétrole, voire, le dichlorométhane ; Le traitement par un fluide supercritique est réalisé en particulier dans le cas de parties de plantes riches en pigments (feuilles, ...) ou en arômes (huiles essentielles, ...) et fait appel, le plus souvent, à l'usage d'un cosolvant.
La délipidation peut être réalisée en même temps que la décoloration et la désaromatisation des matières traitées,
La poudre délipidée est ensuite séchée.
Dans un mode préféré de réalisation de l'invention, on utilise un mélange d'au moins deux poudres de plantes, avant de les soumettre au traitement de macération- transestérification.
De manière surprenante, l'utilisation de tels mélanges conduit à des actifs présentant des propriétés antimicrobienne et antifongique supérieures à celles obtenues en utilisant une seule matière végétale.
L'étape B, dite de « macération-transestérification », constitue la partie spécifique du procédé d'obtention des compositions de l'invention. Elle consiste à soumettre l'ensemble des polyphénols vinylogues d'acide p-hydroxybenzoïques présents dans la partie de plante délipidée, à des conditions favorisant la formation des esters vinylogues de parabènes, à partir de leurs précurseurs naturels. Ces conditions de macération sont mises en œuvre plus particulièrement pendant des temps allant de 2 à 24 h. La température est choisie notamment de la température ambiante à 45°C. De préférence, cette étape est réalisée sous atmosphère inerte, par exemple sous azote ou sous argon).
L'étape B comprend la mise en œuvre systématiquement :
o d'un acide organique, tel que l'acide formique, acétique, lactique, tartrique, citrique, gallique, ou autres, permettant d'ajuster le pH acide de la solution de macération, catalysant ainsi les estérifications et transestérifications, o d'un ou plusieurs alcool(s), aliphatique, alicyclique, phénolique, jouant le double rôle de solvant extracteur et de réactif d'estérification des acides vinylogues d'acide p- hydroxybenzoïques, natifs ou libérés par hydrolyse sous l'effet de l'acide organique,
dans le cas d'acides-alcools tels que les acides tartrique, malique, lactique, ou autres, ces deux premiers réactifs pouvant être confondus.
o de l'eau, dans différentes proportions par rapport à l'alcool. Pour l'étape C, la phase d'« extraction » des esters vinylogues de p- hydroxybenzoates ainsi formés, selon les quantités et la nature de l'alcool utilisé pendant la macération, il peut être nécessaire d'ajouter un volume d'éthanol important avant d'effectuer la filtration des marcs sur verre fritté. Après évaporation de l'éthanol (sous pression réduite), la phase aqueuse résiduelle est extraite par l'acétate d'éthyle qui est concentré à siccité sous vide.
L'étape D consiste à lyophiliser l'extrait obtenu. La poudre lyophilisée obtenue, contenant les actifs « AcOEt », sera avantageusement directement incorporée dans les formulations en tant que conservateurs.
Les compositions de l'invention sont aussi avantageusement obtenues selon le deuxième procédé dit « FSC », défini ci-dessous, ce procédé comportant :
■ dans une première étape A1 , une délipidation d'une poudre de matière végétale, suivie du séchage de la poudre délipidée ;
■ la deuxième étape B1 correspond à l'étape B définie ci-dessus ;
■ la troisième étape C1 est la phase d'« extraction » des esters vinylogues de p-hydroxybenzoates ainsi formés.
L'étape A1 de délipidation est réalisée, selon la nature de la partie de plante sélectionnée, par un solvant organique tel que l'hexane, l'éther de pétrole, voire le dichlorométhane.
L'étape B1 est avantageusement réalisée comme défini ci-dessus en rapport avec B.
Pour l'étape C1 , avec les parties de plantes qui le permettent (absence de chlorophylle, d'huiles essentielles), on traite le macérât par des fluides supercritiques (CO2), en présence d'environ 0,1 à 15% de « cosolvant » (avantageusement, il s'agit d'éthanol).
La poudre lyophilisée contenant les actifs, obtenue à l'issue de l'étape D1 est avantageusement directement incorporée dans les formulations en tant que conservateurs.
Avantageusement, les plantes sont choisies parmi l'artichaut, la salade, le persil, les choux, le caféier, le théier, le cacaoyer, la vigne, le petit houx, le marronnier d'Inde, des Rosacées (pommier, abricotier) des Aurantiées (citron, orange, pamplemousse) des Fabacées (haricot glycine, sophora, soja, polygonum) ou de fruits divers (les fruits rouges, notamment). Comme indiqué ci-dessus, l'utilisation en mélange de poudre de matières végétales différentes avant l'étape de macération-transestérification conduit à un effet synergique comparé aux effets obtenus avec une poudre issue d'une seule matière végétale.
A titre d'exemple, des mélanges avantageux comprennent des poudres obtenues à partir de feuilles d'artichaut et de grains de café vert ; ou encore de feuille de vigne et d'artichaut et/ou de café et/ou de feuilles de thé; ou de grains de café et de feuilles de thé.
Les procédés extractifs comprennent les analyses CLHP et LC-MS.
Les études réalisées sur les compositions définies ci-dessus ont montré que, de manière surprenante, un effet synergique était obtenu avec les dérivés de formule (I) et (II) ou (III), tels qu'obtenus selon l'invention.
Grâce à la structure des dérivés (I) et (II), ces compositions présentent notamment un caractère lipophile leur conférant une activité conservatrice plus importante que celle des parabènes, sans en présenter les inconvénients.
Les tests d'activité ont été réalisés, après incorporation de compositions conformes à l'invention dans des produits « finis », et les résultats ont été comparés aux produits existants, contre des germes habituellement utilisés : Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Candida albicans.
Ces études ont permis de démontrer que les compositions de l'invention sont actives sur un large spectre de microorganismes susceptible de se développer en particulier, dans les produits cosmétiques, alimentaires ou dans les médicaments, sans entraîner d'effets indésirables et constitue dons un produit de grand intérêt pour remplacer les parabènes.
L'invention vise donc leur utilisation comme conservateurs dans les produits cosmétiques, alimentaires, notamment diététiques et dans les médicaments.
De préférence, lesdits conservateurs sont présents à raison de 0,1 à 5 % en poids par rapport au poids de la composition.
L'utilisation des compositions de l'invention comme conservateurs dans le domaine alimentaire est particulièrement appropriée pour les boissons, par exemple jus de fruits, boissons toniques, produits laitiers et dérivés comme le beurre, sous forme liquide ou encore en granulés ou analogues, gels, pâtes, par exemple dans des confiseries comme les pâtes de fruits, bonbons, pâtes à mâcher. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention sont donnés dans les exemples qui suivent dans lesquels sont utilisées diverses matières végétales seules ou en mélanges.
Dans ces exemples, il est fait référence aux figures 1 à 3, qui représentent respectivement,
- la Figure 1 , le spectre HMBC d'une composition de l'invention et les Figures 2 et 3, les zooms sur 2 régions.
Description générale des actifs
L'étude en spectroscopie IR-FT, RMN des actifs permet d'établir des caractéristiques générales de la présence de dérivés cinnamiques :
IR : bande intense de fonction alcool vers 3300 cm "1 , bandes carbonyles d'esters entre 1700-1650 cm "1 , bandes des doubles liaisons conjuguées avec carbonyle vers 1600-1500 cm "1 , bandes de liaison carbone-oxygène de fonction d'éther entre 1260-1200 cm "1 . Le spectre RMN 2D HMBC montre des corrélations entre (a) les protons aromatiques (entre 8,0 et 6,0 ppm) et des carbonyles (170-180 ppm) ; ( b) les protons d'esters/éthers (entre 4,0 et 3,0 ppm) et des carbones d'esters/éthers (vers 150 ppm) et/ou des carbonyles (entre 170 et
180 ppm).
Un dosage analytique en HPLC permet d'établir la présence de minimum de plus de 5% de dérivés cinnamiques dans les extraits. Certains d'entre-eux peuvent contenir plus de 60% de ces dérivés.
Exemple 1 : Préparation d'actifs
Préparation de l'actif G
100 g de poudre de feuilles d'artichaut sont délipidés 2 fois par 600 ml de dichlorométhane à chaud, 40°C pendant 15 minutes suivie d'une filtration sur buchner. La poudre séchée est ensuite macérée à température ambiante dans 1 litre du mélange éthanol / eau / acide formique (50/50/0,01 % ; v/v/v), ajustement du pH à 3,2 sous argon pendant 2 heures. Après filtration, les actifs présents dans le filtrat sont extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 150 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec. L'extrait est ensuite dissous dans l'eau pour sa lyophilisation. 1 ,27 g de poudre sont obtenus (rendement : 1 ,3%).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif F
100 g de poudre de feuilles d'artichaut sont délipidés 2 fois par 600 ml d'hexane pendant 2 heures, suivie d'une filtration sur buchner. La poudre séchée est ensuite macérée dans 1 litre du mélange éthanol / eau / acide chlorhydnque (50/50/1 ; v/v/v), pendant une nuit à reflux sous argon. Après filtration, l'éthanol est évaporé. Les actifs présents dans le filtrat sont extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 150 ml).
Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec. L'extrait est ensuite dissous dans l'eau pour sa lyophilisation. 3 g de poudre sont obtenus (rendement : 3%).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif K
150 g de poudre de feuilles d'artichaut sont délipidés 2 fois par 900 ml de dichlorométhane pendant 15 minutesà 40°C, suivie d'une filtration sur buchner. La poudre séchée est ensuite macérée dans 1 ,5 litres du mélange éthanol / eau / acide citrique (50/50 v/v) à pH 3,2, pendant 3 heures à température ambiante et sous argon. Après filtration, l'éthanol est évaporé. Les actifs présents dans le filtrat sont extraits par l'acétate d'éthyle (3 fois 300 ml).
Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec. L'extrait est ensuite dissous dans l'eau pour sa lyophilisation. 3,2 g de poudre sont obtenus (rendement : 2,13%).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif Consl
10 g de poudre de feuilles d'artichaut sont délipidés 2 fois par 60 ml d'hexane pendant 2 heures, suivie d'une filtration sur buchner. La poudre séchée est ensuite macérée à température ambiante dans 100 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 2 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 60 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec. La quantité obtenue de l'extrait est de 90,0 mg (rendement : 0,9 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Consl 2
180 g de poudre de feuilles d'artichaut sont délipidés par un traitement fluide supercritique CO 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
La poudre est ensuite macérée dans 800 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 20 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 240 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait obtenu est de 91 1 mg (rendement : 0,5 %).
Les résultats des analyses spectrales sont identiques aux données générales.
Préparation de l'actif Consl 4
200 g de poudre de feuilles de thé vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
La poudre est ensuite macérée dans 800 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 25 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 270 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 9,8 g (rendement : 4,9 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons16
246 g de poudre de café vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique CO 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
La poudre est ensuite macérée dans 800 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 15 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 200 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 3,9 g (rendement : 1 ,6 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons21 a
130 g de poudre de café vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
124 g de poudre sont ensuite macérés dans 400 ml du mélange EtOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 6 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, l'éthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 100 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 1 ,5 g (rendement : 1 ,2 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif Cons21 b
130 g de poudre de café vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
124 g de poudre sont ensuite macérés dans 400 ml du mélange propanol / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 6,6 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le propanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 100 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 1 ,1 g (rendement : 0,85 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons21 c
130 g de poudre de café vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
120 g de poudre sont ensuite macérés dans 400 ml du mélange propanol / docosanol (90/10, v/v) avec 6 g d'acide tartrique, sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, 200 ml d'hexane sont ajoutés, ainsi que 200 ml d'eau. Le docosanol est éliminé dans la phase hexanique. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 200 ml). Après regroupement des phases acétate d'éthyle, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 1 g (rendement : 0,8 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif Cons21 d
130 g de poudre de café vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher. 125 g de poudre sont ensuite macérés dans 400 ml de butanol avec 6 g d'acide tartrique, sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, la phase butanolique est lavée avec 400 ml d'eau (2 fois). Les actifs sont ensuite séchés sur sulfate de sodium, concentrés à sec et lyophilisés. La quantité obtenue de l'extrait est de 1 ,3 g (rendement : 1 ,0 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons22
130 g de poudre de café vert sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
120 g de poudre sont ensuite macérées dans 400 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 3,3 avec l'acide malique (ajout de 13 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 140 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 2,7 g (rendement : 2,3 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons25
196 g de poudre de boutons floraux Sophora sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
La poudre est ensuite macérée dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 20 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Ensuite, le tout est mis à reflux pendant 1 heure. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle
(2 fois 500 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de
1 1 ,4 g (rendement : 5,7 %). Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons28
300 g de poudre d'albédo d'orange sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
145 g de poudre sont ensuite macérées dans 600 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 9 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Ensuite, le tout est mis à reflux pendant 1 heure. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 400 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 0,65 g (rendement : 0,2 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons30
486 g de poudre de feuilles de vigne sont délipidés par un traitement fluide supercritique CO2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
300 g de poudre sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 17 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 400 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 3 g (rendement : 1 ,02 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif Cons31
400 g de poudre de feuilles de vigne rouge sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
213 g de poudre sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 17 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 300 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 3,6 g (rendement : 1 ,69 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif Cons34
436 g de poudre d'écorces de marronnier d'Inde sont délipidés par un traitement fluide supercritique C0 2 + 10% d'EtOH. Trois cycles statiques et dynamiques (d'une durée de 20 minutes chacun) sont réalisés afin de délipider entièrement la plante. La poudre est ensuite récupérée et mise à sécher.
155 g de poudre sont ensuite macérées dans 800 ml du mélange MeOH / eau
(50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 20,5 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Ensuite, le tout est mis à reflux pendant 1 heure. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 600 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 8,9 g (rendement : 5,8 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons37
Le mélange de 150 g de poudre d'artichaut délipidée au SFE et 150 g de poudre de café vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 800 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 29,5 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 140 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 1 ,4 g (rendement : 0,47 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons38
Le mélange de 150 g de poudre de feuilles d'artichaut délipidée au SFE et 150 g de poudre de feuilles de thé vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 25 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 200 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 5,45 g (rendement : 1 ,82 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons39
Le mélange de 150 g de poudre de café vert délipidée au SFE et 150 g de poudre de feuilles de thé vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 27 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 200 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 7,29 g (rendement : 2,41 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons40
Le mélange de 100 g de poudre de feuilles de vigne délipidée au SFE et 100 g de poudre de café vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 26,8 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 375 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 4,06 g (rendement : 2,03 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons41
Le mélange de 100 g de poudre de feuilles de vigne délipidée au SFE et 100 g de poudre de feuilles de thé vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 15,4 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 270 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 5,57 g (rendement : 2,79 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons42
Le mélange de 100 g de poudre de feuilles de vigne délipidée au SFE et 100 g de poudre de feuilles d'artichaut délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1200 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 20,8 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 315 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 1 ,72 g (rendement : 0,86 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons44
Le mélange de 100 g de poudre de feuilles de vigne rouge délipidée au SFE et 100 g de poudre de feuilles d'artichaut délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1000 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 23,4 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 320 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 2,01 g (rendement : 1 ,0 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons45
Le mélange de 100 g de poudre de feuilles de vigne rouge délipidée au SFE et 100 g de poudre de café vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1000 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 28,6 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 330 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 3,77 g (rendement : 1 ,88 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Préparation de l'actif Cons46
Le mélange de 100 g de poudre de feuilles de vigne délipidée au SFE et 100 g de poudre de feuilles de thé vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1000 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 38,1 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 330 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 7,69 g (rendement : 3,84 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales. Préparation de l'actif Cons48
Le mélange de 50 g de poudre de feuilles de vigne rouge délipidée au SFE et 150 g de poudre de café vert délipidée au SFE sont ensuite macérées dans 1000 ml du mélange MeOH / eau (50/50, v/v), ajustement du pH à 2,9 avec l'acide tartrique (ajout de 23,9 g), sous argon à 40°C pendant une nuit. Après filtration à chaud, le méthanol est évaporé. Les actifs sont ensuite extraits par l'acétate d'éthyle (2 fois 230 ml). Après regroupement, les phases organiques sont séchées sur sulfate de sodium, concentrées à sec et lyophilisées. La quantité obtenue de l'extrait est de 4,55 g (rendement : 2,27 %).
Les études en spectroscopie IR-FT, RMN et en HPLC ont montré des données conformes aux formules générales.
Exemple 2 : Evaluation de l'activité antibactérienne
Le produit à tester est mis en flacons stériles à raison de 15 à 30 g par flacon. II est contaminé individuellement par les suspensions de souches microbiennes. Le niveau de contamination sera tel que le volume de la suspension de l'inoculum sera compris entre 0,5 et 1 % du volume de l'échantillon.
Exemple 3 : Formulations cosmétiques
FORMULE 1
phases Matières premières %
1
3
4
5
FORMULE 2
phases Matières premières m.
1 Eau (101 ) qsp 100
Acide citrique qsp pH final 5,5 (102) 0,15000 2 Gomme xanthique (201 ) 0,3000
Butylène glycol (202) 5,00000 3 Cétéareth-20 (301 ) 1 ,50000
Stéarate de glycéryle (302) 2,0000 Beurre de Butyrospermum parkii (303) 1 ,00000 Laurate d'hexyle (304) 4,00000 Squalane(305) 2,00000
Acétate de Tocophéryle (306) 0,50000
4 Composition de l'invention (401 ) 2,0000 5 Fragrance (501 ) 0,50000