Dans le cadre des analyses d'échantillons après séparation par électrophorèse, notamment à des fins cliniques, et en particulier lors d'analyses de routine pour la détermination de pathologies, il est nécessaire pour la sécurité des résultats produits d'tre en mesure de suivre de façon fiable le devenir de chaque échantillon au cours de l'analyse. En particulier, il est nécessaire de s'assurer que le résultat obtenu à l'issue de la séparation par électrophorèse peut sans aucun doute tre attribué à l'échantillon auquel il correspond en théorie (échantillon primaire).

L'incertitude quant à l'attribution d'un résultat au bon échantillon primaire, peut résulter par exemple des opérations exécutées manuellement et dont la bonne exécution dépend de ce fait essentiellement de l'attention de l'opérateur.

Dans la pratique actuelle de ce type d'analyse, une erreur peut ne pas tre détectée.

L'invention propose ainsi des moyens d'identification qui permettent de repérer un échantillon ou une série d'échantillons et de l'identifier sur le support d'électrophorèse, à l'issue de la séparation électrophorétique. Ces moyens peuvent tre mis en oeuvre dans le cadre de toute séparation électrophorétique, employant toute technique appropriée pour réaliser une électrophorèse de zone sur un support.

L'invention concerne également des applicateurs d'échantillons, utilisables pour déposer les échantillons à analyser sur le support d'électrophorèse, et pourvus des moyens d'identification (appelés"marqueurs d'identification") selon l'invention.

L'invention propose également des kits comprenant lesdits moyens d'identification.

Les moyens définis dans le cadre de l'invention peuvent tre intégrés dans un système de repérage global des échantillons analysés à tous les stades de l'analyse, depuis le prélèvement de l'échantillon, jusqu'à la transmission du résultat.

On rappellera, sans en limiter la définition aux modalités décrites ci- après, que les techniques d'électrophorèse de zone réalisées notamment en gel d'agarose, permettent la séparation des constituants protéiques contenus dans des échantillons biologiques tels que sérum, sang, urine, liquide céphalo- rachidien, larmes etc... Dans un milieu d'électrophorèse contenant une solution tampon, les échantillons contenant les protéines sont déposés au moyen d'un applicateur d'échantillons à la surface du gel, où elles s'ionisent et, sous l'effet d'un champ électrique, migrent à des vitesses différentes en fonction de leur charge respective. Après l'étape de migration qui permet la séparation des constituants protéiques des échantillons, ces protéines sont révélées, par exemple par coloration au moyen d'un colorant spécifique et quantifiées par exemple par une lecture densitométrique.

Comme la majorité des techniques modernes d'analyse, l'électrophorèse a été portée à un degré important d'automatisation afin d'une part, de faciliter sa mise en oeuvre et d'autre part de la fiabiliser. Ainsi les étapes de chargement des échantillons sur les applicateurs, dépôt des applicateurs sur le gel, migration et séchage du gel, coloration et décoloration du gel, lecture du gel peuvent maintenant tre réalisées de façon automatique. En revanche, l'étape de transfert du ou des applicateurs d'échantillons, depuis l'appareil de chargement des échantillons, vers l'instrument d'électrophorèse reste encore une étape manuelle et donc sujette aux erreurs de manipulations. Ainsi, par exemple, dans le cas où 2 instruments d'électrophorèse sont utilisés simultanément, I'applicateur destiné au premier peut tre chargé sur le second et réciproquement. Un autre exemple, plus fréquent, est le cas où plusieurs applicateurs doivent tre déposés sur un mme gel. II peut arriver qu'ils ne soient pas déposés au niveau qui leur était destiné (inversion de 2 rangées ou plus). Dans ce cas, it devient impossible de déterminer, par l'examen de l'image finale du gel coloré, à quel applicateur correspond une rangée de dépôts donnée.

L'invention fournit des moyens permettant d'attribuer une série d'échantillons déposée sur le support d'électrophorèse sous forme d'une rangée d'échantillons, à un applicateur d'échantillons donné, par le simple examen de l'image électrophorétique de cette rangée.

L'invention permet d'identifier sans erreur un applicateur et en conséquence une série d'échantillons à analyser associés à cet applicateur, par l'examen de l'image électrophorétique de l'applicateur obtenue, après les opérations de dépôt, migration, coloration et séchage, des moyens d'identification de l'applicateur et simultanément, des échantillons analysés.

L'utilisation de la présente invention, en association avec les méthodes classiques d'identification (par exemple les codes à barres ou les codes bidimensionnels tels que les codes à matrice) des différentes composantes du système d'analyse notamment les tubes échantillons, I'applicateur et le gel, permet l'identification et la traçabilité des échantillons depuis le tube primaire contenant le prélèvement, jusqu'au résultat final.

Un applicateur d'échantillons utilisable dans le cadre de la présente invention peut tre constitué par tout type de dispositif permettant de charger des échantillons à analyser, notamment par prélèvement de ces échantillons à partir de tubes dans lesquels ils sont contenus et permettant en outre de charger, en une zone déterminée, un marqueur d'identification de l'applicateur selon l'invention. Un applicateur d'échantillons peut tre chargé manuellement ou de préférence automatiquement, avec les échantillons.

Des applicateurs utilisables ont été décrits dans l'état antérieur de la technique et sont par exemple les peignes à"membrane" (ou à dents) décrits par exemple dans les demandes de brevets et brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516, les peignes à"gorge"les peignes à"lamelles", ou de façon générale, tout dispositif utilisable pour charger et ensuite déposer sur un support d'électrophorèse des échantillons à analyser.

Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les marqueurs d'identification de l'applicateur qui font l'objet de l'invention, peuvent tre constitués par toute espèce chimique susceptible d'tre révélée sur le support d'électrophorèse, à l'issue des étapes de dépôt, de migration, de coloration et de séchage du support d'électrophorèse.

Les marqueurs de l'invention doivent pouvoir tre détectés directement par examen du support d'électrophorèse après électrophorèse ou au moyen des techniques de détection des constituants des échantillons séparés par électrophorèse.

L'expression"espèce chimique"s'applique dans le cadre de l'invention, à toute entité, chimique ou biologique, capable d'tre détectée, directement ou indirectement, y compris des composés, molécules, complexes, ions, associations (par exemple de type Anticorps-Antigènes) fonctionnels chimiquement ou biologiquement, ou non fonctionnels. Des exemples particuliers de ces espèces chimiques sont les espèces chimiques colorées ou susceptibles d'tre colorées, notamment les protéines, ou des espèces fonctionnelles telles que les anticorps.

Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, les espèces chimiques utilisées sont capables de migrer dans un champ électrique.

Le marqueur peut tre constitué de mélanges des susdites espèces que ces espèces appartiennent ou non au mme groupe chimique ou biologique, et possèdent ou non des propriétés fonctionnelles de mme nature. A titre d'exemple le marqueur peut tre composé d'un mélange d'espèces chimiques capables de migrer dans un champ électrique et d'espèces ne migrant pas mais précipitant au niveau de leur zone de dépôt.

Naturellement, ces compositions ne doivent pas pouvoir tre confondues, par l'image électrophorétique à laquelle elles donnent lieu, avec les échantillons analysés, séparés par l'électrophorèse. Ainsi, et à titre d'exemple, on propose d'utiliser comme moyens d'identification de chaque applicateur d'échantillons, des espèces chimiques colorées ou des mélanges de ces espèces, mélanges dans lesquels plusieurs espèces chimiques sont présentes et chacune ou certaines d'entre elles possédant une mobilité électrophorétique différente par rapport à celle des autres espèces, ou de certaines des autres.

Pour tre efficace dans le cadre de l'identification recherchée, sur un mme support d'électrophorèse, ou sur plusieurs supports d'électrophorèse, chacun des applicateurs utilisés, portant des séries différentes d'échantillons distincts, doit tre associé à un marqueur déterminé qui lui est spécifique dans la mesure où il le distingue des autres applicateurs ou en variante doit tre associé à un marqueur commun à différents applicateurs mais cependant localisé différemment au niveau de l'applicateur et en conséquence, au niveau du support d'électrophorèse après réaction, par la localisation des pistes du support d'électrophorèse marquées. Un marqueur commun peut tre constitué par l'une quelconque des espèces chimiques définies ci-dessus, par un mélange des ces espèces, y compris par de 1'eau physiologique : Selon une autre variante de réalisation de l'invention, le marquage d'une série d'échantillons résulte de l'absence de chargement d'une zone (puits) des applicateurs d'échantillons, cette zone normalement destinée à charger les échantillons, étant localisée différemment pour chaque applicateur, de façon à donner une image électrophorétique différente (par absence de bandes séparées et révélées) sur le support d'électrophorèse. En d'autres termes, la spécificité du marqueur est due soit à la nature et/ou à la concentration des espèces chimiques qui le constitue, soit à la localisation en une zone spécifique de l'applicateur, de cette composition, voire à une combinaison des paramètres précédentes, la spécificité du marqueur devant se traduire par une image électrophorétique différente pour chaque applicateur liée par exemple, à la couleur, au positionnement, au nombre ou à l'intensité des bandes obtenues pour chaque marqueur sur sa piste d'électrophorèse, à l'issue de l'analyse électrophorétique. Un marqueur peut aussi tre identifié par la piste qu'il occupe sur le support d'électrophorèse, par rapport aux pistes occupées par les autres marqueurs sur le mme ou sur un autre support.

A titre d'exemple, les marqueurs d'identification suivants peuvent tre mis en oeuvre : -un colorant ou un mélange de colorants, ou toute autre espèce colorée, par exemple une protéine colorée de façon covalente, migrant ou non, chaque applicateur étant repéré par une couleur particulière, ou un mélange de bandes colorées, -une protéine, une association de protéines, sous forme de monomères ou de polymères (ou toute autre espèce chimique, susceptible de migrer ou non, et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoschwarz, violet acide, etc...) possédant une mobilité électrophorétique particulière, chaque applicateur étant repéré par une bande protéique (ou de l'espèce chimique) située à une position donnée sur le profil, position différente en fonction de l'identifiant ; on citera également des associations Anticorps-Antigènes utilisés à la limite de la solubilité, une protéine polymérisée telle que la y- globuline bovine ; -un mélange de protéines (ou toute autre espèce chimique susceptible de migrer et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoschwarz, violet acide, etc...) possédant des mobilités électrophorétiques différentes, chaque applicateur étant repéré par un nombre de bandes correspondant au nombre de protéines (ou d'espèces chimiques) contenues dans l'identifiant, -une protéine (ou toute autre espèce chimique susceptible de migrer et de se colorer, par exemple lors de la coloration du gel par les colorants protéiques classiques : amidoswchwarz, violet acide, etc...) ou un mélange de protéines ou d'espèces chimiques) présentes à des concentrations variables dans chacun des marqueurs. Chaque applicateur sera repéré par l'intensité de la ou des fractions correspondant à la concentration de la ou des protéines (ou espèces chimiques), -des combinaisons des marqueurs précédemment identifiés dès lors que le marqueur constitué est identifiable par son image électrophorétique -alternativement, un mme marqueur d'identification choisi parmi les précédents, peut tre utilisé pour l'ensemble des applicateurs d'échantillons mis en oeuvre, dès lors que ce marqueur est placé sur chaque applicateur, dans un puits prédéterminé, distinct pour chaque applicateur, ce qui permet à l'issue de la séparation des échantillons par électrophorèse, de repérer l'image d'un mme marqueur en une zone différente pour chaque applicateur. Le marquage peut en variante résulter dans ce cas de l'absence de profil électrophorétique pour une piste spécifique pour chaque rangée d'échantillons, correspondant aux puits de l'applicateur laissés libres.

L'invention a aussi pour objet un procédé d'analyse par électrophorèse, dans lequel plusieurs applicateurs sont utilisés pour déposer des séries d'échantillons sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, ces applicateurs ayant au préalable été chargés d'une part avec les échantillons à analyser, d'autre part avec un marqueur spécifique pour chacun des applicateurs ou un marqueur commun chargé en une zone spécifique différente pour chaque applicateur.

Un procédé d'analyse par électrophorèse, des constituants d'échantillons, notamment d'échantillons biologiques prélevés chez des patients comprend les étapes suivantes : -le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant des moyens pour l'identifier (marqueur d'identification), identifiables par l'examen du support d'électrophorèse à l'issue de l'électrophorèse ; -l'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ; -la détection des constituants des échantillons, séparés par électrophorèse et du marqueur d'identification de chaque applicateur.

Le procédé ainsi défini pour l'analyse par électrophorèse des constituants d'échantillons à analyser, peut tre intégré dans un système dans lequel les moyens d'identification de l'applicateur sont associés à un système de repérage complet de l'ensemble des composantes du système d'analyse dans le processus d'identification des échantillons à analyser par rapport au résultat obtenu à l'issue de l'électrophorèse.

Chaque marqueur d'identification, déposé sur le support d'électrophorèse, en mme temps que les échantillons, et soumis à l'électrophorèse, donne une image électrophorétique particulière qui devra tre repérable, notamment visible, sur le support d'électrophorèse, après les différentes étapes de l'analyse : migration, coloration et séchage. Ce repérage peut se faire de manière manuelle par un opérateur ou de façon automatique, par exemple lors de l'analyse du support d'électrophorèse par un densitomètre.

Le repérage du marqueur peut s'inscrire dans un système d'identification des différentes composantes du système d'analyse tel que le code à barres, code bidimensionnel (ou tout autre système d'identification). Les différentes composantes du système comprenant les tubes échantillons, les tubes des marqueurs pour applicateur, les applicateurs, le support d'analyse sont alors repérées par un code.

Durant l'étape du chargement des applicateurs notamment par un automate, on lit le code des différents tubes primaires des échantillons, du ou des tubes de marqueurs et du ou des applicateurs. On charge ensuite, de préférence au moyen d'un automate, le marqueur et les échantillons sur des positions repérées du ou des applicateurs correspondants. Après cette étape, chaque applicateur et les échantillons correspondants qu'il porte sont donc totalement identifiés. L'applicateur ou les applicateurs ainsi chargés et le support d'électrophorèse sont introduits dans l'instrument d'électrophorèse après lecture de leur code respectif. A ce niveau, chaque support d'électrophorèse est associé à un ou plusieurs applicateurs. Après les étapes de migration, coloration et séchage, le support est introduit dans le densitomètre après lecture de son code. Le densitomètre, ou l'opérateur, repère sur chaque rangée le marqueur, ce qui permet au système d'identifier sans erreur les échantillons de cette rangée et donc de leur attribuer un résultat. Ce système permet donc d'assurer la traçabilité totale des échantillons depuis le tube primaire jusqu'au résultat final.

Selon le premier mode de réalisation préféré de l'invention, le procédé d'analyse par électrophorèse comprend, pour la détection des constituants séparés et/ou des marqueurs d'identification d'applicateurs, une étape de révélation des constituants séparés à l'issue de l'électrophorèse.

Selon un mode particulier de l'invention, on met en oeuvre différents applicateurs d'échantillons pour déposer plusieurs rangées d'échantillons différents sur un mme support d'électrophorèse.

Selon un autre mode de réalisation de l'invention ci-dessus décrite, on met en oeuvre différents applicateurs d'échantillons pour déposer plusieurs rangées d'échantillons différents sur différents supports d'électrophorèse. Dans ce cas, on peut réaliser en parallèle, plusieurs électrophorèses sur différents instruments, en parallèle.

Dans un procédé d'analyse défini selon les modalités précédentes y compris les combinaisons des modes de réalisation particuliers proposés ci- dessus, le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition spécifique pour chaque applicateur, déposée sur une piste déterminée sur le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons.

Alternativement, le marqueur d'identification de chaque applicateur est constitué par une composition commune à tous les applicateurs, ladite composition étant déposée sur le support d'électrophorèse au niveau d'une piste différente pour chaque applicateur et donc pour le support d'électrophorèse, simultanément aux échantillons.

Dans le cadre de la réalisation du procédé de l'invention, le marqueur d'identification d'applicateurs d'échantillons est constitué par toute composition telle que définie précédemment.

Les différents marqueurs précédemment décrits peuvent tre mis en oeuvre dans un procédé comprenant les étapes suivantes : -le dépôt des échantillons biologiques, au moyen de plusieurs applicateurs d'échantillons, sur un ou plusieurs supports d'électrophorèse, chaque applicateur comprenant des moyens pour l'identifier (marqueur d'identification), identifiables par l'examen du support d'électrophorèse à l'issue de l'électrophorèse ; -I'application d'un champ électrique pour permettre la migration des constituants des échantillons ; -le séchage du ou des supports d'électrophorèse, -la coloration du ou des supports d'électrophorèse, -la décoloration du ou des supports d'électrophorèse, -le séchage du ou des supports d'électrophorèse.

Dans le cadre de ce procédé, le marqueur d'identification peut tre identifié avant t'étape de coloration du support d'électrophorèse, ou s'il ne s'agit pas d'un marqueur coloré, par coloration lors de l'étape de détection des constituants des échantillons qui comprend la coloration du support d'électrophorèse.

Dans un autre mode de réalisation de l'invention, les espèces chimiques colorées sont des anticorps, de préférence monoclonaux de façon à obtenir une bande distincte, et dans l'hypothèse de l'utilisation d'un mélange d'anticorps monoclonaux, chaque anticorps a une mobilité telle qu'il conduit à l'obtention d'une bande distincte de celles obtenues avec les autres anticorps du mélange.

Ces anticorps peuvent tre détectés par toute méthode connue en soi, applicable dans le cadre d'une analyse comportant une séparation électrophorétique.

De mme, on peut ajouter au procédé ainsi défini, une étape de détection par analyse quantitative des différents constituants séparés.

La séparation électrophorétique est réalisée sur tout type de support d'électrophorèse et en particulier sur des supports tels que des gels, notamment des gels d'agarose, des gels de polyacrylamide, ou sur des membranes d'acétate de cellulose. De façon générale, on aura recours à tout support poreux permettant la diffusion des échantillons et leur migration dans le support pour permettre la séparation des constituants contenus dans ces échantillons.

Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le procédé est un procédé d'immunofixation dans lequel les constituants séparés des échantillons sont révélés de toute façon en soi connue, au moyen d'anticorps, ledit procédé incorporant, dans l'étape de dépôt des échantillons à analyser, le dépôt d'un marqueur d'identification de l'applicateur d'échantillons.

L'invention concerne aussi un procédé d'identification positive d'échantillons, pour permettre d'associer l'image électrophorétique d'un échantillon analysé, à un échantillon prélevé, comprenant une étape de marquage de l'applicateur d'échantillons au moyen d'un marqueur d'identification, identifiable par son image électrophorétique et l'utilisation de l'applicateur d'échantillons ainsi marqué pour le dépôt des échantillons à analyser sur un support d'électrophorèse.

Pour la mise en oeuvre de ce procédé, tous les marqueurs décrits précédemment, utilisables dans le cadre du procédé d'analyse par électrophorèse de l'invention, peuvent tre mis en oeuvre.

L'invention a également pour objet un kit (trousse) pour la réalisation de l'analyse des constituants d'échantillons par électrophorèse, comprenant : un support d'électrophorèse comprenant un matériau poreux approprié pour recevoir les échantillons à analyser et le marqueur d'identification de l'applicateur d'échantillon et permettre leur migration électrophorétique, 'une ou plusieurs compositions constituée (s) par des espèces chimiques, utilisables lors d'une analyse électrophorétique pour l'identification d'applicateur (s) d'échantillons, cette (ces) composition (s) étant identifiable (s) par son (leur) image électrophorétique.

Le marqueur d'applicateur d'échantillons utilisé dans ce kit répond aux définitions données précédemment, prises isolément ou en combinaison.

En outre, le kit peut comprendre tout réactif habituellement utilisé pour des analyses par électrophorèse, en particulier tout ou partie des réactifs suivants : -un ou plusieurs réactifs pour la révélation des constituants séparés des échantillons ; -un ou plusieurs réactifs pour la révélation des marqueurs d'identification des applicateurs.

D'autres propriétés et avantages particuliers de l'invention apparaissent encore dans les exemples qui suivent et les figures qui les accompagnent.

Figures 1 à 7 : Profils d'analyse électrophorétique de plusieurs séries d'échantillons, associés à différents marqueurs d'applicateurs d'échantillons tels que décrits dans les exemples 1 à 7.

Exemples Exemple n° 1 : Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes : -marqueur n° 1 : solution de rouge soudan dans la dimethylformamide 5mg/ml- -marqueur n° 2 : solution de noir soudan dans la dimethylformamide 5mg/ml.

On dépose 10 ut de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 2 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 ut de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 1, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant : -rangée inférieure, dépôt n° 1 : bande rouge, marqueur n° 1 -rangée supérieure, dépôt n° 16 : bande noire, marqueur n° 2.

Exemple n° 2 : Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes : -marqueur n° 1 : anticorps monoclonal anti apo B clone 1,3 mg/ml dans !'eau physiologique -marqueur n° 2 : hémoglobine 3 mg/ml dans l'eau physiologique, -marqueur n° 3 : albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique.

On dépose 10 pI de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 ut de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 2, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant : -rangée inférieure, dépôt n°1 : 1 bande, marqueur n° 1 -rangée intermédiaire, dépôt n°19 : 1 bande, marqueur n° 2 -rangée supérieure, dépôt n° 37 : 1 bande, marqueur n° 3.

Les marqueurs se différencient dans ce cas par la position différente de leur bande respective.

Exemple n°3 : Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes : -marqueur n° 1 : hémoglobine 2 mg/ml dans l'eau physiologique, -marqueur n° 2 : hémoglobine 2 mg/ml et ovalbumine 10 mg/ml dans l'eau physiologique, -marqueur n°3 : hémoglobine 2 mg/ml, ovalbumine 10 mg/ml et albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique.

On dépose 10 ut de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 ut de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 3, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant : -rangée inférieure, dépôt n° 1 : 1 bande, marqueur n° 1 -rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 2 bandes, marqueur n° 2 -rangée supérieure, dépôt n° 37 : 3 bandes, marqueur n° 3.

Les marqueurs se différencient dans ce cas par le nombre de bandes présentes.

Exemple n° 4 : Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes : -marqueur n° 1 : anticorps monoclonal anti apo B clone 1 à 3 mg/ml dans l'eau physiologique, -marqueur n° 2 : anticorps monoclonaux anti apo B clone 1 et clone 2 à3 mg/ml chacun dans l'eau physiologique, -marqueur n° 3 : anticorps monoclonaux anti apo B clone 1, clone 2 et clone 3 à3 mg/ml chacun dans l'eau physiologique.

On dépose 10 pi de chaque marqueur dans le puis de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 ut de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 4, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée, le marqueur correspondant : -rangée inférieure, dépôt n°1 : 1 bande, marqueur n°1 -rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 2 bandes, marqueur n° 2 -rangée supérieure, dépôt n° 37 : 3 bandes, marqueur n° 3.

Les marqueurs se différencient dans ce cas par le nombre de bandes présentes.

Exemple n° 5 : Les marqueurs sont constitués des solutions suivantes : -marqueur n°1 : albumine bovine 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique -marqueur n° 2 : albumine bovine 13,5 mg/ml dans l'eau physiologique -marqueur n° 3 : albumine bovine 80 mg/ml dans l'eau physiologique.

On dépose 10 NI de chaque marqueur dans le puits de la première dent de 3 applicateurs de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5.464.515, US 5.405.516. Dans les autres puits, on dépose 10 pi de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 5, on reconnaît sur la première ligne de chaque rangée le marqueur correspondant : -rangée inférieure, dépôt n° 1 : 1 bande, concentration faible -rangée intermédiaire, dépôt n° 19 : 1 bande, concentration intermédiaire -rangée supérieure, dépôt n° 37 : 1 bande, concentration forte Les marqueurs se différencient dans ce cas par l'intensité de la bande correspondante.

Exemple n° 6 : L'identification est réalisée de la façon suivante : -peigne n° 1 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 1, -peigne n ° 2 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 2, -peigne n° 3 : aucun échantillon ou de l'eau physiologique sur la dent 3.

On dépose 10psi d'eau physiologique (ou rien) respectivement dans le puits de la dent 1 du 1er applicateur, de la dent 2 du 2ième applicateur et de la dent 3 du 3ième applicateur de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.

Dans les autres puits, on dépose 10 ut de chaque sérum à analyser. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 30 secondes, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant l'analyse des protéines sériques. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 6 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le gel est séché puis coloré à l'amidoschwarz. Après coloration, le gel est décoloré et séché à nouveau. Sur la figure 6, on reconnaît sur chaque rangée le marqueur correspondant : -rangée inférieure, dépôt n° 1 : absence de profil -rangée intermédiaire, dépôt n° 20 : absence de profil -rangée supérieure, dépôt n° 39 : absence de profil Exemple n° 7 Le marqueur est une solution à 2,5 mg/ml dans l'eau physiologique, de gamma globuline bovine partiellement polymérisée (avec du glutaraldéhyde), )'identification est réalisée de la façon suivante : -peigne n° 1 : dépôt du marqueur par la dent 1 (piste de gauche) -peigne n° 2 : dépôt du marqueur par la dent 8 (piste du milieu) -peigne n° 3 : aucun échantillon sur la dent 15 (piste de droite) On dépose 10ut de solution de marqueur respectivement dans le puits de la dent 1 du 1er applicateur, de la dent 2 du 2ième applicateur et de la dent 3 du 3ième applicateur de dépôt du type de ceux décrits dans les brevets EP 0 493 996, US 5,464,515, US 5,405,516.

Les échantillons à analyser sont dilués au tiers pour les pistes IgA, IgM, IgK, IgS, et au sixième pour la piste IgG, et on dépose 10 pi de chaque dilution dans les puits correspondants. Ces applicateurs sont ensuite appliqués pendant 1 minute, à une distance définie les uns des autres, à la surface d'un gel permettant de réaliser une immunofixation. La séparation des échantillons est obtenue par électrophorèse pendant 8 minutes environ et à une puissance de 20 W, sur un instrument permettant de réguler la température à 20°C.

Après migration, le typage des paraprotéines a été réalisé en incubant chaque piste de migration avec un antisérum spécifique (anti IgG, anti IgA, anti IgM, anti IgK, anti IgR) et la piste correspondant au profil électrophorétique avec une solution de fixation des protéines. La piste du marqueur ne subit aucun traitement particulier. L'excès de réactifs a été éliminé, le gel a été séché et coloré au violet acide. Chaque peigne est repéré par la position de la bande colorée correspondant au marqueur : -rangée inférieure, dépôt de gauche : présence d'une bande colorée -rangée intermédiaire, dépôt central : présence d'une bande colorée -rangée supérieure, dépôt de droite : présence d'une bande colorée.