MITOCHONDRIALE La présente invention a trait à la prévention des maladies dans lesquelles sont impliquées les espèces réactives de l'oxygène (ou ROS) d'origine mitochondriale. Elle concerne plus particulièrement l'utilisation d'un inhibiteur de la production de ROS mitochondriaux, en particulier de l'anéthole trithione, pour prévenir les effets négatifs des espèces réactives de l'oxygène d'origine mitochondriale.

ART ANTERIEUR

La mitochondrie participe à la pathogenèse de presque toutes les maladies associées au vieillissement, y compris les maladies cardiovasculaires, les maladies neurodégénératives (maladie de Parkinson, maladie d'Alzheimer, etc.), le diabète, ainsi que des dysfonctionnements tissulaires d'origine ischémique. Il est largement admis qu'elle joue un rôle central dans la «théorie des radicaux libres du vieillissement». Cette théorie affirme que l'accumulation de dommages causés par les espèces réactives de l'oxygène (ROS pour reactive oxygen species) affecte de nombreuses fonctions cellulaires, en particulier les fonctions mitochondriales, qui sont essentielles pour l'approvisionnement en énergie et le bon fonctionnement cellulaire. Les mitochondries apparaissent donc comme les cibles primaires des ROS du fait qu'un fonctionnement cellulaire optimal est crucial pour fournir l'énergie dont a besoin une cellule pour se réparer.

Si les mitochondries sont la principale source génératrice de ROS, elles sont aussi particulièrement sensibles aux dommages causés par ces ROS. Par conséquent, les mitochondries génèrent elles-mêmes les ROS à l'origine des dommages oxydatifs qu'elles subissent et qui contribuent à leur dysfonctionnement, ultérieurement et à la mort cellulaire.

De nombreuses études ont été menées pour évaluer la capacité d'anti-oxydants à contrecarrer l'effet des ROS. Plusieurs molécules anti-oxydantes ont donné satisfaction lors des études précliniques, mais leur efficacité n'a été que partiellement confirmée dans la plupart des essais cliniques (Orr et al, Free Radie Biol. Med, 2013, 65 : 1047-59).

De plus, des études récentes ont montré qu'une trop forte réduction des ROS a un effet délétère pour les cellules, suggérant qu'une production équilibrée des ROS contribue au bon fonctionnement cellulaire (Goodman et al., J. Natl. Cancer Inst., 2004, 96:1743-50; Bjelakovic G et al., JAMA. 2007, 297:842-57). PROBLEME TECHNIQUE ET SOLUTION APPORTEE PARL'INVENTION

Les travaux relatifs au rôle du stress oxydatif dans de nombreuses pathologies ont mis en évidence l'intérêt de disposer d'un inhibiteur sélectif de la production de ROS d'origine mitochondriale. Les anti-oxydants disponibles à ce jour ne présentent pas une telle spécificité avec, pour conséquence, le risque de survenue d'effets secondaires lorsque la production de ROS cytosolique est affectée, tout particulièrement en cas de traitement prolongé; ces effets secondaires sont bien décrits. En effet, à l'heure actuelle, beaucoup d'afflictions sont évoquées dans la littérature comme ayant une cause liée aux ROS d'origine mitochondriale. La seule solution offerte pour agir sur les ROS mitochondriaux est l'utilisation d'un anti-oxydant, dont l'effet est connu pour toucher à la fois les ROS cytosoliques et mitochondriaux. A cause des risques importants liés à l'inhibition des ROS cytosoliques, ce type de molécules n'est jamais utilisé.

Ainsi, il existe un besoin important de trouver une molécule pouvant agir sur les ROS mitochondriaux dans de nombreuses afflictions différentes, sans provoquer d'importants effets secondaires.

Les statines (inhibiteurs de l'hydroxy-méthyl-glutaryl coenzyme A (HMG Co A) réductase), sont des médicaments hypolipémiants prescrits dans la prévention des événements cardiovasculaires liés à la présence d'une dyslipidémie. Toutefois, ils sont responsables d'effets secondaires importants : musculaires, pancréatiques et hépatiques.

La toxicité musculaire des statines est maintenant bien établie; on en estime l'incidence, selon les séries cliniques publiées, à 7 à 29% des patients traités (du Souich P. et al., Pharmacol Ther, 2017, online 14 février 2017, doi:10.1016/j. pharmthera.2017.02.029).

Cette toxicité émerge lorsque les concentrations de statines mesurées dans les myocytes atteignent des valeurs élevées. Ceci est observé toutes les fois où (du Souich, 2017, voir ci- dessus):

- les capacités de métabolisation des statines sont mécaniquement entravées du fait d'une diminution de l'activité des transporteurs membranaires d'influx (OATP1B1) hépatocytaires.

- l'activité des transporteurs d'efflux de la cellule musculaire (MDR1 et BCRP) est diminuée. Au niveau moléculaire, il est notamment observé que cette myotoxicité s'accompagne d'un dysfonctionnement mitochondrial touchant la chaîne respiratoire et ceci se traduit par une baisse de la production d'ATP ainsi que par une surproduction de ROS mitochondriaux (mtROS) s'accompagnant d'une fuite de cytochrome C et d'ions calcium dans le cytosol ainsi que par une baisse des capacités antioxydantes de la cellule (du Souich, 2017). Par ailleurs, on observe, au niveau sarcoplasmique, une activation de la voie MAPK (mitogen-activated protein kinase) et, à l'opposé, une diminution de la voie RhoA/AKT/mTOR/PGClalpha, ensemble de mécanismes qui contribue à l'activation des phénomènes d'apoptose, de protéolyse et de remodelage musculaire (du Souich, 2017).

Et tout ceci s'inscrit dans un contexte où la présence d'une hypercholestérolémie est déjà elle-même source d'une hyperproduction de mtROS (Farnaghi S. et al., FASEB J, 2017, 31:356-367).

De plus, les statines inhibent la sécrétion d'insuline et majorent ainsi les risques de survenue d'un diabète chez les sujets recevant ces produits. Cet événement indésirable est lui aussi en lien avec une surproduction de mtROS (Sadighara M. et al., Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2017,120:131-137). Un mécanisme analogue est également retrouvé au niveau hépatocytaire et explique la toxicité hépatique de cette série médicamenteuse (Abdoli N. et al., J Biochem Mol Toxicol, 2013, 27:287-294; Abdoli N. et al., Adv Pharm Bull, 2014, 4:249- 254; Abdoli N. et al., Res Pharm Sci, 2015, 10:143-151; Pal S. et al., Food Chem Toxicol, 2015, 83:36-47).

Aucun traitement n'est proposé à ce jour pour prévenir les effets secondaires associés à la prise médicamenteuse de statines. Dans la présente invention, les inventeurs proposent de réduire, au niveau mitochondrial, la production de ROS associée à la prise de statines, en s'affranchissant des effets secondaires délétères des antioxydants non sélectifs. Ainsi, les inventeurs ont établi l'intérêt d'administrer un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale, en particulier l'anéthole trithione (ATT), pour prévenir les effets délétères des statines au niveau musculaire, en particulier musculo-squelettique, pancréatique et hépatique.

La présente invention propose donc, de manière tout a fait surprenante et innovante, d'utiliser ce médicament dans une nouvelle indication thérapeutique, à savoir pour prévenir les effets adverses des statines.

De la même manière, tout indique que les ROS mitochondriaux (mtROS) jouent un rôle déterminant dans la physiopathologie des différentes formes de glaucome puisqu'on retrouve, notamment dans les glaucomes à angle ouvert, à la fois (i) une élévation des taux de mtDNA muté (Abu-Amero KK. et al., Invest Ophtalmol Vis Sci, 2006, 47 :2533-2541), et (ii) un dysfonctionnement du complexe I mitochondrial (Lee S. et al., Invest Ophtalmol Vis Sci, 2012, 53 :2431-2437). Ces deux phénomènes ont pour conséquences une baisse notable de la production d'ATP, ce qui pénalise les possibilités de réparation des cellules ganglionnaires rétiniennes, et une forte élévation de la production de mtROS. Cette surproduction de mtROS trouve une traduction clinique claire, observable au travers des modèles animaux d'hypertension intraoculaire qui font état, outre une augmentation des taux de ROS, d'une augmentation de la peroxydation des lipides rétiniens et d'un effondrement des taux d'antioxydants rétiniens, autant de témoins de l'existence d'un stress oxydatif dont on retrouve des marqueurs également chez l'homme (Chrysostomou V. et al., Curr Opinion Pharmacol, 2013, 13 :12-15). L'hyperproduction de ROS et le stress oxydatif qui vont en être la conséquence sont centraux dans la dégénérescence des cellules ganglionnaires rétiniennes puisque ces deux phénomènes conjugués provoquent (Chrysostomou V. et al., idem ci-dessus) :

une dysrégulation du flux sanguin qui irrigue le nerf optique ;

l'apoptose des cellules ganglionnaires rétiniennes ; on notera d'ailleurs qu'un apport exogène de ROS induit, de la même manière, cette apoptose cellulaire via des voies caspase- indépendantes ;

- une modification du métabolisme du glutamate qui conduit à l'accumulation rétinienne de cet amino-acide neurotoxique qui va lui-même se comporter comme un inducteur de ROS.

De sorte que l'hypothèse qui prévaut aujourd'hui est que la destruction progressive des cellules ganglionnaires rétiniennes que l'on observe dans les glaucomes à angle ouvert, est le fait d'une atteinte mitochondriale de ces cellules dont le dysfonctionnement est générateur des mtROS qui, à terme, provoquent leur apoptose (Osborne NN. et al., Eur J Pharmacol, 2016, 787 :127-133). Ainsi, ces observations ont conduit les inventeurs à proposer l'administration d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale pour traiter le glaucome. En effet, ce type d'inhibiteur va agir spécifiquement au niveau des ROS mitochondriaux sans affecter le niveau de ROS cytosolique ; cette approche a l'avantage d'éviter l'induction d'effets secondaires associés aux anti-oxydants "classiques" (non-sélectifs).

Il n'existe à ce jour aucun traitement du glaucome.

Les inventeurs ont ainsi établi l'intérêt d'administrer un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale, en particulier l'anéthole trithione (ATT), dans le traitement du glaucome.

Le présent objet de l'invention consiste à proposer de manière tout à fait surprenante et innovante, d'utiliser ce médicament dans une nouvelle indication thérapeutique, à savoir pour traiter le glaucome.

De la même manière, tout indique que le stress oxydant que provoque l'exposition aux UV, c'est-à-dire aux rayonnements de haute énergie, est responsable d'une surproduction de ROS par les mélanocytes, tout particulièrement chez les sujets à fort rapport phaeomélanine : eumélanine c'est-à-dire chez les sujets les plus à risque de développer un mélanome (Liu-Smith et al., Exp Dermatol, 2015, 24 :171-174). A ce jour, la source de cette surproduction de ROS est encore discutée. Selon la littérature, elle serait à attribuer aux mélanosomes, hypothèse jusqu'à présent la plus étudiée, avec la participation des NOX (NADPH Oxydase des phagolysosomes, système enzymatique précurseur de ROS) et celle également des neuronal NOS (nNOS ou NO synthase de type I cytosolique) (Venza et al., Oxid Med Cell Longev, 2015, ID 481782). Par contre, l'implication de la production mitochondriale (complexes I et III de la chaîne respiratoire) ne semble pas avoir été regardée peut-être pour des raisons de difficultés techniques. Or, à la différence de la surproduction de ROS d'origine iatrogène qui cible le plus souvent de manière très spécifique une structure particulière - les lysosomes dans le cas des aminosides ou bien les mitochondries dans le cas des anthracyclines, par exemple - on est en droit de penser que dans le cas d'une production liée à l'exposition à des rayonnements, c'est l'ensemble des structures cellulaires productrices de ROS qui vont être simultanément stimulées par la réaction inflammatoire globale ainsi induite ce qui inclut la production mitochondriale.

Par ailleurs, les UV, par activation d'un facteur de transcription, l'USF-1, stimulent la prolifération des mélanocytes et leur activité, ce qui contribue mécaniquement à l'élévation de la production de ROS.

Les systèmes antioxydants cellulaires sont alors rapidement débordés et les ROS en excès vont ainsi pouvoir induire la synthèse d'a-Melanocyte Stimulating Hormone (α-MSH ou hormone mélanotrope) (Huang et al., Int J Mol Sci, 2014, 15 :16665-16679) et, par là, la production de mélanine. Or, si la mélanine joue un rôle protecteur, donc bénéfique, à l'égard de l'exposition aux UV, un excès de production peut avoir un effet inverse et devenir délétère pour la cellule (Chaiprasongsuk et al., Redox Biol, 2016, 8 :79-90). En effet, la fixation de Γ α-MSH sur son récepteur MC1R (récepteur de type 1 de la mélanocortine) induit une augmentation de la concentration intracellulaire d'AMP cyclique et de l'activité PKA (protéine kinase A) ce qui provoque tout à la fois une stimulation de la mélanogenèse ainsi qu'un effet mitogène sur les mélanocytes, source de dysplasie cellulaire.

Parallèlement, la surproduction de ROS, à partir d'un certain seuil, est responsable à terme d'une déstructuration des mélanosomes avec fuite de ses différents composants, notamment des ROS (en forte quantité en cas de phaeomélanosomes), RNS (Reactive nitrogen species, produits de l'action des NOS), mélanine et substance amyloïde ; or, cette dernière vient potentialiser l'effet inducteur des ROS vers la forme melanoma au même titre que les cassures d'ADN provoquées directement par les UV (Liu-Smith, 2015).

Réduire la production de ROS par la cellule et la contenir à un niveau qui permette la clairance des cellules à ADN endommagé (effet préventif d'une transformation maligne) et qui favorise, par ailleurs, une juste augmentation de la synthèse de mélanine (effet protecteur à l'égard des UV, la mélanine venant au contact du noyau des kératinocytes protéger l'ADN de la cellule) devrait constituer une bonne approche préventive du mélanome. Il n'existe en effet, à ce jour, aucun traitement préventif des mélanomes, autres que les crèmes solaires dont les bénéfices sont limités. Dans la présente invention, les inventeurs proposent de réduire la production de ROS au niveau mitochondrial pour bénéficier de l'effet préventif pour la cellule sans subir les effets secondaires délétères des antioxydants non sélectifs. Ainsi, les inventeurs ont établi l'intérêt d'administrer un inhibiteur spécifique de la production de ROS mitochondriale, en particulier l'anéthole trithione (ATT), pour prévenir les dommages cutanés liés à l'exposition aux UV ainsi que dans la survenue des mélanomes.

La présente invention propose, de manière tout à fait surprenante et innovante, d'utiliser ce médicament dans une nouvelle indication thérapeutique, à savoir pour prévenir les dommages cutanés liés à l'exposition aux UV ainsi que pour prévenir la survenue des mélanomes.

Plusieurs éléments plaident également en faveur d'un effet délétère des ROS sur le tissu pulmonaire. En effet, il est connu de la littérature que tout excès de ROS qui ne servira pas à la signalisation cellulaire, est toxique et potentiellement promoteur de fibrose. Ces observations sont corrélées par différentes publications (Faner R. et al. Am J Respir Crit Care Med, 2012, 186 : 306-313 ; Kliment CR. et al. Free Rad Biol Med, 2010, 49 :707-717 ; Liu RM., Gaston Pravia KA. Free Rad Biol Med, 2010, 48 :1-15 ; Liu RM et al. Free Rad Biol Med, 2012,53 :554-563 ; Liu G. et al. Annu Rev Pathol : Mech Dis, 2013, 8 :161-187) qui rapportent que:

• des produits d'oxydation des lipides et des protéines sont retrouvés en excès dans des lavages broncho-alvéolaires (BAL) ainsi que dans les prélèvements de tissu pulmonaire fibrotique ;

• de la même manière, des taux élevés des produits d'oxydation de protéines, d'ADN et de lipides sont détectés dans les modèles de fibrose à la bléomycine;

• de l'ADN oxydé est retrouvé chez les patients souffrant de fibrose pulmonaire idiopathique ainsi que chez les sujets atteint d'asbestose ou de silicose et dans les modèles animaux d'asbestose ou de silicose ;

• enfin, les antioxydants et les chélateurs de fer atténuent la sévérité des modèles de fibrose à la bléomycine ou celle des modèles d'asbestose.

Dans ce contexte, la production mitochondriale de ROS apparaît pivotale dans la constitution de la fibrose pulmonaire. A titre d'exemple, Carter et al. ont montré le rôle clef de la production mitochondriale d'H ₂ 0 ₂ par les macrophages alvéolaires dans la constitution d'une asbestose (Osborn-Herford HL et al., J Biol Chem, 2012, 287 :3301-3312 ; Murthy S. et al., J Biol Chem, 2010, 285 :25062-25073 ; Murthy S. et al., Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2009, 297 : L846-L855 ; He C. et al., J Biol Chem, 2011, 286 : 15595-15607). Il apparaît ainsi que tout contexte biologique ou environnemental qui conduit à une surproduction de ROS, qu'elle soit mitochondriale ou extramitochondriale, favorise la constitution d'une fibrose. Il y a d'ailleurs une interrelation étroite entre les deux voies de production de ROS, l'une provoquant la stimulation de l'autre. Le rôle des ROS dans la fibrose pulmonaire est cohérent avec les observations qui suivent :

1) La voie des NOX - NOX2 et NOX4 - a notamment été impliquée dans la constitution de la fibrose pulmonaire (Crestani B. et al., Int J Biochem Cell Biol, 2011, 43 :1086-1089 ; Hecker L. et al., Cell Molec Life Sci, 2012, 69 : 2365-2371). Cette voie NOX est connue pour promouvoir une surproduction de ROS. Dans ce contexte, l'inhibition de NOX4 prévient d'ailleurs l'induction expérimentale d'une fibrose par la bléomycine et, parallèlement, on note une surexpression de NOX4 dans la fibrose à la bléomycine comme d'ailleurs dans la fibrose idiopathique chez l'homme. De la même manière, la souris rendue déficiente en NOX2 ne développe pas de fibrose à la bléomycine.

2) Le rôle central des ROS mitochondriaux a également été mis en évidence au travers des phénomènes d'apoptose et d'hypoxie. En effet, l'apoptose des cellules épithéliales alvéolaires apparaît comme un mécanisme facilitateur et donc majeur de la constitution d'une fibrose pulmonaire dans la mesure où elle va limiter la réparation normale des cellules dont l'ADN mitochondrial a été touché au point que le seul fait de bloquer cette apoptose permet de prévenir une fibrose (Lee CG. et al., J Exp Med, 2004, 200 :377-389 ; Budinger GR., Proc Nat Acad Sci USA, 2006, 103 : 4604-4609).

3) Le processus fibrotique est lié à la situation d'hypoxie que créent la perte de cellules endothéliales vasculaires (EMT pour transition épithélio-mésenchymateuse) et la raréfaction des capillaires, et qui conduit à la promotion d'HIFla (Hypoxia Inducible Factor), facteur qui active l'EMT ainsi que la production de NOX4, elle-même, responsable de l'induction d'une surproduction de ROS ce qui entretient le système (Richter K. et Kietzmann T., Cell and Tissue Research, 2016, 365 :591-605 ; Richter K. et al., Redox Biol, 2015, 6 : 344-352).

4) Enfin, la dernière pièce du puzzle est le TGF (Transforming Growth Factor) qui est la cytokine la plus fibrogénique et qui forme une boucle vicieuse avec NOX4 et les ROS (chacun stimulant la production de l'autre) comme cela est illustré sur la figure ci-dessous (où « mtROS » correspond à ROS mitochondriaux).

Cette surproduction de TGFfi a quatre conséquences contributives dans la promotion de la fibrose pulmonaire (Cheresh P. et al., Biochim Biophys Acta, 2013, 1832 : 1028-1040), à savoir :

- l'activation de la production de fibroblastes et de collagène ;

- l'induction de la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) et donc l'expension des myofibroblastes (les cellules épithéliales [ou endothéliales = EndoMT] acquièrent alors un phénotype mésenchymal [fibroblaste-like] et par là des propriétés invasives) ;

- la promotion de l'apoptose des cellules épithéliales ;

- enfin, l'activation de l'expression du gène ECM (Extracellular Matrix) et la suppression de la dégradation des protéines de la matrice cellulaire qui s'accumulent au niveau du tissu interstitiel.

Toutes ces observations convergent et prônent le rôle déterminant des ROS dans la fibrose pulmonaire, en particulier des ROS mitochondriaux.

La fibrose pulmonaire ne bénéficie, à ce jour, d'aucun traitement permettant une guérison.

Ainsi, dans la présente invention, les inventeurs proposent de réduire la production de ROS, en agissant au niveau mitochondrial, pour prévenir l'apparition d'une fibrose pulmonaire dans toute situation susceptible de favoriser l'apparition d'une telle pathologie, ou pour traiter une fibrose pulmonaire déjà installée. Cette approche présente l'avantage de permettre d'envisager un bénéfice à la fois dans un cadre préventif et curatif, tout en évitant les effets secondaires délétères associés aux antioxydants « classiques » (non sélectifs).

Les inventeurs ont établi, de manière tout à fait innovante, l'intérêt de l'anéthole trithione (ATT) en tant qu'inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale dans le traitement et dans la prévention de la fibrose pulmonaire. L'ATT bénéficie déjà d'une autorisation de mise sur la marché sous le nom commercial de Sulfarlem ^® pour augmenter la sécrétion de la bile et de la salive. Il est utilisé pour traiter les digestions difficiles et la sécheresse de la bouche. Depuis 70 ans que ce produit est commercialisé en France, aucun effet secondaire n'a été rapporté à ce jour relatif à une utilisation à long terme de cette molécule.

En effet, le mécanisme d'action d'ATT peut être déduit des résultats d'une autre expérience non publiée à ce jour : les inventeurs ont traité avec succès un chat victime d'une intoxication aiguë aux organochlorés. Ce résultat fait la démonstration que la cible de l'ATT est le complexe I (ou III) ou, éventuellement, le supercomplexe l-lll mitochondrial et ceci en lien avec les résultats décrits en 2012 par Tebourbi (Tebourbi et al., Molecular mechanism of pesticide toxicity. In: STOYTCHEVA M. Ed. Pesticides in the modem world. Pests control and pesticides exposure and toxicity assessment. InTech publisher, 2012, chapter 15.). Tout en sachant que dès lors que des ROS sont surexprimés par la mitochondrie, cela induit une surproduction simultanée de ROS cytosolique, dont la source de production est la NADPH oxydase (ou NOX, en général NOX4 et NOX2), certains auteurs en arrivent à la conclusion que les NOX sont les 1ers responsables lorsqu'il s'agit en réalité d'une production mitochondriale (Gosh R. et al., J.Clin. Diagn. Res., 2017, 11 : BC09- BC12 ; Mangum LC. et al., Chem. Res. Toxicol, 2015, 28 : 570-584). De plus, l'ATT est, à la différence de la majorité des autres antioxydants, une molécule liposoluble ce qui lui confère une excellente pénétration tissulaire comme cellulaire (le Vd de l'ADT est, chez le rat, de l'ordre de 2L/kg, soit près de 10 fois le volume des liquides extracellulaires [Yu H-Z et al. J Pharm Sci, 2011, 100:5048-5058]), expliquant son accès à la mitochondrie. Ainsi, l'ATT agit à des concentrations de l'ordre du micromolaire, 10μΜ dans le travail de Pouzaud et al. (2004), concentration qu'il est aisé d'atteindre aux doses usuellement pratiquées ; et cette molécule semble présenter des effets persistants dans le temps, certainement de plusieurs heures ce qui devrait faciliter le mode d'administration du produit.

Enfin, après administration chez l'animal comme chez l'homme, l'ATT subit rapidement une déméthylation formant un dérivé lui-même très vraisemblablement actif, la 4-OH- anetholtrithione (ou ATX), porteur d'une fonction alcool sur le cycle aromatique ; cette fonction est estérifiable et peut ainsi donner accès à des esters hydrosolubles alors même que l'ATT et son métabolite ATX sont insolubles dans l'eau. Les inventeurs ont donc ainsi établi que l'ATT, à la différence des anti-oxydants classiques, agit directement et de manière sélective sur la production de ROS mitochondriaux, majoritairement au niveau du complexe I (ou du complexe III) de la chaîne respiratoire mitochondriale, sites qui sont à la fois les sites principaux de production de ROS et les sites principaux des dysfonctionnements mitochondriaux (Tebourbi O., 2012, idem ci-dessus). L'ATT est donc le premier médicament à usage humain autorisé par la FDA et ΓΕΜΑ qui empêche les mitochondries de produire des ROS au niveau des complexes I ou I II de la chaîne respiratoire.

DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION

L'objet principal de la présente invention concerne l'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS mitochondriale pour prévenir les effets adverses des espèces réactives de l'oxygène d'origine mitochondriale.

Par « inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale », on entend tout composé capable d'inhiber spécifiquement la production de ROS au niveau de la chaîne respiratoire mitochondriale, sans affecter la production de ROS cellulaire au niveau du cytosol ; cette spécificité est primordiale car elle prévient les effets secondaires associés à un défaut de ROS au niveau du cytosol, ainsi qu'on peut l'observer en cas d'inhibition excessive de la production de ROS par un anti-oxydant non sélectif. Dans un mode de réalisation préféré, cet inhibiteur est capable d'induire une inhibition spécifique de la production de ROS au niveau du complexe I (ou II I) de la chaîne respiratoire mitochondriale.

De tels inhibiteurs sont, à titre d'exemple, ΓΑΤΤ, l'ATX ou le NC-POBS, mais tout autre composé présentant la même spécificité d'inhibition est approprié.

Au sens de l'invention, l'utilisation d' « un inhibiteur » s'entend de l'utilisation d'au moins un inhibiteur spécifique de la production de ROS mitochondriaux ; il peut donc s'agir d'un inhibiteur ou d'une association de plusieurs inhibiteurs, comme cela est décrit par la suite. L'ATT, pour anéthole trithione, est une 5-(4-méthoxyphényl)-3H-l,2-dithiole-3-thione. Elle est aussi connue sous le nom de ADT. Sa formule est la suivante:

L'ATX correspond à la forme phénolique de ΓΑΤΤ telle qu'elle est métabolisée par le foie, à la fois chez l'homme et chez l'animal. Cette forme 4-OH-anethole trithione a été décrite précédemment (Li et al., J Pharm Biomed Anal, 2008, 47 : 612-617). La structure d'ATT étant conservée lors de cette métabolisation, il y a tout lieu de penser que l'activité antiROS portée par ATT est retrouvée dans ATX, ce d'autant qu'après administration orale qui est actuellement la forme commercialisée, l'essentiel du produit circulant retrouvé est ΓΑΤΧ (Yu, 2011). De plus, ΓΑΤΧ porte un groupement phénol en para qui permet la formation d'esters. Dans un mode de réalisation particulier, l'ATX est utilisé sous sa forme estérifiée, par exemple sous forme d'ester : de phosphate, d'éthylidenephosphate, de sulfate, d'hémisuccinate, d'acétate, de propionate, d'isobutyrate, d'hexanoate, de pivalate, d'éthoxycarbonate, de nicotinate, ou encore d'ester d'amino-acides comme le glycine, diéthylglycine ou valine ester, et la liste n'est pas limitative.

Le NC-POBS correspond au N-cyclohexyl-4-(4-nitrophénoxy)benzènesulfonamide, seule molécule décrite dans la literature à ce jour en tant qu'un inhibiteur spécifique de la production de ROS mitochondriaux au site l _Q de la chaîne respiratoire (Orr et al., Free Radie. Biol. Med., 2013,65: 1047-1059).

Un premier objet de la présente invention concerne l'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS mitochondriale pour prévenir des effets adverses associés à la prise médicamenteuse de statines.

Dans un mode de réalisation préféré, l'inhibiteur spécifique est choisi parmi l'ATT, l'ATX et un ester d'ATX. Dans un mode de réalisation particulier, la prévention des effets adverses associés à la prise médicamenteuse de statines est obtenue grâce à l'association d'au moins deux molécules parmi l'ATT, l'ATX et un ester d'ATX.

Par « prévention», on entend au sens de l'invention le fait d'inhiber la production de ROS mitochondriaux avant que ceux-ci ne provoquent des effets délétères, en particulier au niveau musculaire, en particulier musculo-squelettique, pancréatique et hépatique. La prévention s'entend également de la diminution du risque de survenue d'effets adverses associés à la prise médicamenteuse de statines. Le sujet à traiter est de préférence un être humain.

Dans un mode de réalisation préféré, l'administration d'un inhibiteur de la production de mtROS a pour objectif de prévenir les effets délétères au niveau musculo-squelettique (myalgies, myosites, myopathies, rhabdomyolyses ... )

Ainsi, les inventeurs proposent d'associer l'administration d'un inhibiteur de la production de ROS d'origine mitochondriale avec la prise de statines. L'inhibiteur de la production de ROS mitochondriale peut être administré avant ou simultanément à la prise médicamenteuse de statines. Ces deux prises de médicaments peuvent être indépendantes.

Des exemples de médicaments comprenant un inhibiteur de l'hydroxy-méthyl-glutaryl coenzyme A (HMG Co A) réductase sont, à titre d'exemples : la rosuvastatine (Crestor ^® ), la pravastatine (Elisor ^® ), l'atorvastatine (Tahor ^® ) et la simvastatine (Zocor ^® ). Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne également une méthode de prévention des effets adverses associés à la prise médicamenteuse de statines consistant à administrer une dose efficace d'un point de vue thérapeutique d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale à un patient qui en a besoin.

Dans un mode de réalisation préféré, l'inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale décrit dans les applications citées précédemment, est l'anéthole trithione (ATT) utilisé en monothérapie.

Dans un autre mode de réalisation préféré, la dose journalière d'anéthole trithione pour son utilisation dans la prévention de la toxicité musculaire et/ou hépatique associée à la prise médicamenteuse de statines est comprise entre 40 et 400mg. Préférentiellement cette dose journalière est comprise entre 80 et 240 mg.

Dans un mode de réalisation encore plus préféré, la dose journalière d'anéthole trithione est séparée en deux prises comprises entre 20 à 200mg chacune, encore plus préférentiellement en deux prises comprises entre 40 à 120mg chacune. A titre d'exemple, chaque prise peut comprendre 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 ou 200 mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione est de 80mg par prise.

Dans un mode de réalisation particulier, l'anéthole trithione est utilisé en monothérapie dans la prévention de la toxicité musculaire et/ou hépatique associée à la prise médicamenteuse de statines dans une population pédiatrique. Dans ce mode de réalisation particulier, la dose journalière d'ATT est comprise entre 40 et 120 mg.

Préférentiellement, la dose journalière d'anéthole trithione pour une population pédiatrique est séparée en deux prises de 20 à 60mg d'ATT. A titre d'exemple, chaque prise peut comprendre 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione en population pédiatrique est de 20 à 60 mg par prise, selon l'âge et le poids de l'enfant ou de l'adolescent. Ainsi, l'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant 20 à 60 mg d'ATT et des excipients pharmaceutiquement acceptables. Cette composition est particulièrement adaptée pour prévenir les effets adverses associés à la prise médicamenteuse de statines dans une population pédiatrique, notamment la toxicité musculaire et/ou hépatique associée à la prise médicamenteuse de statines.

Dans un mode de réalisation particulier, la prévention de la toxicité musculaire et/ou hépatique associée à la prise médicamenteuse de statines se fait par l'utilisation conjointe d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale et du coenzyme Q10 (CoQlO ou Ubiquinone).

Un mode de réalisation particulier du présent objet de l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant de ΓΑΤΤ et/ou de l'ATX et/ou un ester d'ATX et des excipients appropriés pour prévenir la toxicité musculo-squelettique et /ou hépatique associée à la prise médicamenteuse de statines.

Cette composition sera de préférence formulée sous une forme galénique adaptée à une administration orale.

Ainsi, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant 40mg d'ATT et des excipients pharmaceutiquement acceptables.

L'invention concerne également une composition pharmaceutique à usage pédiatrique comprenant de 20 à 60 mg d'ATT et des excipients pharmaceutiquement acceptables.

Un mode de réalisation préféré concerne une composition pharmaceutique comprenant à la fois (i) de ΓΑΤΤ et/ou de l'ATX et/ou un ester d'ATX et (ii) une statine, ainsi que les excipients appropriés.

Un autre mode de réalisation préféré concerne une composition pharmaceutique comprenant à la fois (i) de l'anéthole trithione et (ii) une statine ainsi que les excipients appropriés. Les doses d'ATT comprises dans ces combinaisons sont adaptées à l'administration d'une dose journalière telle que définie précédemment.

Un second objet de la présente invention concerne l'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale pour traiter le glaucome.

Dans un mode de réalisation préféré, l'inhibiteur spécifique est choisi parmi ΓΑΤΤ, l'ATX et un ester d'ATX. Dans un mode de réalisation particulier, le traitement du glaucome est obtenu grâce à l'association d'au moins deux molécules parmi ΓΑΤΤ, l'ATX et un ester d'ATX. De plus, une publication très récente (Williams PA. et al., 2017, Vitamin B3 modulâtes mitochondrial vulnerability and prevents glaucome in aged mice. Science, in press) montre l'intérêt du nicotinamide (ou vitamine B3) dans le traitement du glaucome. Cette application thérapeutique inattendue de la vitamine B3, précurseur du NAD, part de l'observation suivante : les auteurs avaient constaté que le taux de NAD chez des lignées de souris prédisposées au glaucome diminue avec l'âge, d'où l'idée d'administrer à ces souris, le précurseur en question. L'administration de vitamine B3 en supplémentation alimentaire non seulement prévient la survenue de glaucome chez ces souris hautement susceptibles à la maladie, mais bloque également l'évolution de la maladie chez les souris déjà atteintes. Compte tenu de ces résultats encourageants, les inventeurs proposent d'associer ATT (ou ATX ou un ester d'ATX) au nicotinamide.

Ainsi, le présent objet de l'invention concerne également l'association de ATT et/ou ATX et/ou d'une ester d'ATX avec le nicotinamide pour prévenir et/ou traiter le glaucome. Cette association peut être administrée simultanément ou de manière séquentielle. L'administration de chacune des molécules se fera préférentiellement par voie orale.

Par « traitement », on entend au sens de l'invention le traitement d'un glaucome déjà installé et la prévention de la survenue d'une telle pathologie. Le traitement s'entend de la diminution partielle ou totale des symptômes. Le sujet à traiter peut être un être humain ou un animal.

Par « prévention», on entend au sens de l'invention le fait de ralentir l'apparition des signes associés à la pathologie, de prévenir l'aggravation des symptômes de la pathologie ou de ralentir la dégénérescence des cellules ganglionnaires rétiniennes. Le sujet à traiter est un être humain ou un animal.

Il existe de nombreuses formes de glaucome associées à des mécanismes d'action différents.

Le traitement selon la présente invention est particulièrement adapté au glaucome à angle ouvert, forme la plus courante de glaucome.

Le présent objet de l'invention concerne également une méthode de traitement du glaucome consistant à administrer une dose efficace d'un point de vue thérapeutique d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale à un patient qui en a besoin. Cette méthode de traitement du glaucome peut en outre comprendre l'administration d'une dose efficace d'un point de vue thérapeutique de nicotinamide.

Le présent objet de l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant de ΓΑΤΤ et/ou de ΓΑΤΧ et/ou un ester d'ATX et des excipients appropriés pour traiter le glaucome. Une telle composition peut en outre comprendre du nicotinamide.

Dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant à la fois (i) de ΓΑΤΤ et (ii) du nicotinamide, ainsi que les excipients appropriés.

Les compositions selon l'invention peuvent être formulées pour une administration orale ou ophtalmique. Dans un mode de réalisation particulier, le traitement/la prévention du glaucome peut consister à administrer un inhibiteur de la production de ROS mitochondriaux et/ou du nicotinamide à la fois par voie orale et locale. Dans un autre mode de réalisation préféré, la dose journalière d'anéthole trithione pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement du glaucome est comprise entre 40 et 400mg. Préférentiellement cette dose journalière est comprise entre 80 et 240 mg.

Dans un mode de réalisation encore plus préféré, la dose journalière d'anéthole trithione est séparée en deux prises comprises entre 20 à 200mg chacune, encore plus préférentiellement en deux prises comprises entre 40 à 120mg chacune.

A titre d'exemple, chaque prise peut comprendre 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 ou 200mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione est de 80 mg par prise.

Dans un mode de réalisation particulier, l'anéthole trithione est utilisé dans la prévention et/ou le traitement du glaucome dans une population pédiatrique. Dans ce mode de réalisation particulier, la dose journalière d'ATT est comprise entre 40 et 120 mg.

Préférentiellement, la dose journalière d'anéthole trithione pour une population pédiatrique est séparée en deux prises de 20 à 60 mg d'ATT chacune.

A titre d'exemple, chaque prise chez l'enfant peut comprendre 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione en population pédiatrique est de 20 à 60mg par prise, selon l'âge et le poids de l'enfant ou de l'adolescent. Ainsi, l'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant de 20 à 60 mg d'ATT et des excipients pharmaceutiquement acceptables. Cette composition est particulièrement adaptée pour prévenir ou traiter le glaucome dans une population pédiatrique.

La composition pour administration ophtalmique peut consister en des gouttes, des solutions de bain d'œil, ou tout autre forme appropriée.

Un troisième objet de la présente invention concerne l'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale pour prévenir les dommages cutanés dus au expositions aux UV et les mélanomes. Dans un mode de réalisation préféré, l'inhibiteur spécifique est choisi ΓΑΤΤ, ΓΑΤΧ ou un ester d'ATX. Dans un mode de réalisation particulier, l'inhibition des dommages liés aux UV est obtenue grâce à l'association d'au moins deux molécules parmi l'ATT, l'ATX et un ester d'ATX.

Pour assurer une protection optimale contre les UV, il est possible d'associer ATT et ATX à des filtres UVA et UVB et, éventuellement, à des ROS scavengers (piègeurs de ROS) autres si le niveau de réduction des ROS cutanés obtenu avec le couple ATT/ATX ne semble pas suffisant. A ce titre, le choix de l'edaravone, commercialisée par les laboratoires Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation sous le nom de Radicut°, nous paraît particulièrement intéressant comme partenaire du couple ATT/ ATX, dans la mesure où cette molécule est un puissant inhibiteur spécifique des nNOS (neuronal NOS ou NOS de type I) et des iNOS (inducible NOS ou NOS de type I I cytosolique) qui respecte par ailleurs l'activité eNOS (ou NOS de type I II endothéliale) [Yoshida et al., CNS Drug Rev, 2006, 12 : 9-20] .

Ainsi, dans un mode de réalisation particulier, l'inhibiteur spécifique de la production de ROS mitochondriale est l'ATT ou une combinaison d'ATT et d'ATX et est associé à des filtres UVA et/ ou UVB. I l peut être également aussi associé a des ROS scavengers (piègeurs de ROS), tels que l'edaravone.

Par « prévention», on entend au sens de l'invention le fait d'inhiber les effets délétères des UV au niveau cellulaire et moléculaire (lésions au niveau de l'ADN). La prévention s'entend également de la diminution et du ralentissement de l'accumulation des dommages liés à l'exposition aux UV au niveau de la peau. La prévention des dommages dus aux UV s'étend à toute pathologie liée à l'accumulation de dommages au niveau de l'ADN comme les mélanomes. Le sujet à traiter est de préférence un être humain.

Par « prévention des dommages cutanés dus aux expositions aux UV », on entend également la prévention du vieillissement cutané, au niveau physiologique et d'un point de vue cosmétique.

Ainsi les inhibiteurs de la production de ROS mitochondriaux peuvent être mis en oeuvre à la fois dans des applications thérapeutiques, par exemple chez les sujets à risque de développement des mélanomes, et dans des applications cosmétiques, pour lutter contre le vieillissement cutané.

Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention s'applique à la prévention des mélanomes chez les sujets présentant un fort rapport phaeomélanine : eumélanine, chez le sujets à peau claire travaillant au soleil (agriculteurs, travailleurs du bâtiment) et chez les personnes à peau claire résidant dans un pays à fort ensoleillement (par exemple en Australie). Dans un autre mode de réalisation préféré, une composition selon l'invention comprend de ΓΑΤΤ, de ΓΑΤΧ ou un dérivé et des filtres UVA et UVB. Cette composition peut en outre comprendre des piégeurs de ROS.

Une telle composition peut être utilisée pour prévenir un mélanome ou pour prévenir les dommages liés à l'exposition aux UV, notamment le vieillissement.

La composition selon l'invention est de préférence formulée de sorte à être adaptée à un usage topique. Sachant qu'il s'agit, ici, de protéger la peau de l'effet des rayonnements solaires, les formes à application locale qui apparaissent appropriées sont par exemple les émulsions Huile dans Eau (H/E) ou Eau dans Huile (E/H), ces dernières présentant comme on le sait, l'avantage de posséder un fort coefficient d'absorption (entre 40 et 80), et donc potentiellement un très bon pouvoir protecteur. Grâce à ses deux phases, l'émulsion permet d'incorporer à la fois des molécules hydrophiles et des molécules lipophiles, avantage dont on tire parti pour associer différents filtres UV et accroître ainsi le niveau de protection des préparations antisolaires. Ici, ATT est strictement liposoluble ; toutefois, in vivo, ATT est métabolisé chez l'animal comme chez l'homme en un composé phénolique par le foie, ΓΑΤΧ ou 4-OH-anéthole trithione (Li et al., J Pharm Biomed Anal, 2008, 47 : 612-617), ce qui autorise la synthèse d'esters, voie d'accès potentielle à des dérivés hydrosolubles (exemples : sulfate, hémisuccinate, phosphate, éthylidenephosphate, esters d'amino-acides ...).

Dans la prévention des dommages liés aux UV, notamment du mélanome, une administration orale de l'inhibiteur selon l'invention pourrait être proposée en sus de l'application topique d'une crème le contenant. Cette démarche mettrait, au moins partiellement, à l'abri des problèmes d'observance des traitements locaux, tout en en renforçant l'action. Dans un mode de réalisation préféré, la présente invention concerne l'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale pour prévenir les mélanomes.

Dans un mode de réalisation préféré, l'inhibiteur spécifique est choisi parmi ΓΑΤΤ, ΓΑΤΧ et un ester d'ATX. Dans un mode de réalisation particulier, la prévention du mélanome est obtenue grâce à l'association d'au moins deux molécules parmi ΓΑΤΤ, ΓΑΤΧ et un ester d'ATX.

Dans un mode de réalisation encore plus préféré, l'inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale est l'anéthole trithione, en usage topique et/ou oral. Dans un autre mode de réalisation préféré, la dose journalière d'anéthole trithione pour son utilisation dans la prévention des mélanomes par voie orale est comprise entre 40 et 400mg. Préférentiellement cette dose journalière est comprise entre 80 et 240 mg. Dans un mode de réalisation encore plus préféré, la dose journalière d'anéthole trithione par voie orale est séparée en deux prises comprises entre 20 à 200mg chacune, encore plus préférentiellement en deux prises comprises entre 40 à 120mg chacune.

A titre d'exemple, chaque prise peut comprendre 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 ou 200mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione par voie orale est de 80mg par prise. Dans un mode de réalisation particulier, l'anéthole trithione par voie orale est utilisé en monothérapie dans la prévention des mélanomes dans une population pédiatrique. Dans ce mode de réalisation particulier, la dose journalière d'ATT est comprise entre 40 et 120 mg. Préférentiellement, la dose journalière d'anéthole trithione pour une population pédiatrique est séparée en deux prises de 20 à 60mg d'ATT chacune.

A titre d'exemple, chaque prise chez l'enfant peut comprendre 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione par voie orale en population pédiatrique est de 20 à 60mg par prise, selon l'âge et le poids de l'enfant ou de l'adolescent. Ainsi, l'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant 20 à 60 mg d'ATT et des excipients pharmaceutiquement acceptables. Cette composition est particulièrement adaptée pour prévenir les mélanomes. Un quatrième objet de l'invention concerne l'utilisation d'un inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale pour prévenir et /ou traiter la fibrose pulmonaire.

Dans un mode de réalisation préféré, l'inhibiteur spécifique est choisi entre ΓΑΤΤ, l'ATX ou un ester d'ATX. Dans un mode de réalisation particulier, le traitement de la fibrose pulmonaire est obtenu grâce à l'association d'au moins deux molécules parmi ΓΑΤΤ, l'ATX et un ester d'ATX.

Par « traitement », on entend au sens de l'invention à la fois le traitement d'une fibrose déjà établie et la prévention de la survenue d'une telle pathologie. Le traitement s'entend également de la diminution des symptômes et du ralentissement de l'apparition des signes associés à la pathologie. Le sujet à traiter peut être un être humain ou un animal.

La fibrose pulmonaire encore appelée « pneumopathie interstitielle diffuse », correspond à la modification du tissu pulmonaire normal en un tissu fibreux pathologique. Cette fibrose se localise préférentiellement dans les espaces interalvéolaires, là où se font les échanges gazeux d'oxygène et de gaz carbonique, d'où une baisse de l'oxygénation du sang et une insuffisance respiratoire. La fibrose pulmonaire dite « idiopathique » est une maladie chronique, dévastatrice et mortelle, caractérisée par la dégradation progressive des fonctions pulmonaires. Une fibrose pulmonaire peut être associée à une asbestose ou à une silicose.

Dans un mode de réalisation particulier, la présente invention consiste à traiter une fibrose associée à un œdème pulmonaire.

Dans un autre mode de réalisation particulier, la présente invention concerne une méthode de prévention de la fibrose pulmonaire associée à une asbestose ou une silicose.

L'asbestose est une affection pulmonaire grave qui touche les personnes ayant inhalé de la poussière d'amiante. Après l'inhalation de cette poussière, les fibres d'amiante microscopiques se déposent dans les poumons où elles peuvent causer des lésions permanentes pouvant conduire à une fibrose pulmonaire.

La silicose est une maladie pulmonaire provoquée par l'inhalation de particules de poussières de silice (silice cristalline) dans les mines, les carrières, les percements de tunnel ou les chantiers du BTP, les usines de confection des « jeans », voire les moulins à farine. Il s'agit d'une maladie professionnelle irréversible.

Par « prévention », on entend prévenir toute situation où le risque d'apparition d'une fibrose pulmonaire est connu et prévisible, par exemple une exposition à l'amiante ou à la silice, ou encore la nécessité d'un traitement par la bléomycine.

La présente invention concerne également une méthode de traitement de la fibrose pulmonaire consistant à administrer une dose efficace d'un point de vue thérapeutique d'ATT à un patient qui en a besoin.

Dans un mode de réalisation encore plus préféré, l'inhibiteur spécifique de la production de ROS d'origine mitochondriale est l'anéthole trithione, en monothérapie, en usage topique ou oral.

Dans un autre mode de réalisation préféré, la dose journalière d'anéthole trithione pour son utilisation dans la prévention et /ou le traitement de la fibrose pulmonaire en monothérapie par voie orale est comprise entre 40 et 400mg. Préférentiellement cette dose journalière est comprise entre 80 et 240 mg.

Dans un mode de réalisation encore plus préféré, la dose journalière d'anéthole trithione par voie orale est séparée en deux prises comprises entre 20 à 200mg chacune, encore plus préférentiellement en deux prises comprises entre 40 à 120mg chacune.

A titre d'exemple, chaque prise peut comprendre 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 150 ou 200mg d'ATT. Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione par voie orale est de 80mg par prise.

Dans un mode de réalisation particulier, l'anéthole trithione par voie orale est utilisé en monothérapie dans la prévention et /ou le traitement de la fibrose pulmonaire dans une population pédiatrique. Dans ce mode de réalisation particulier, la dose journalière d'ATT est comprise entre 40 et 120 mg.

Préférentiellement, la dose journalière d'anéthole trithione pour une population pédiatrique est séparée en deux prises de 20 à 60mg d'ATT chacune. A titre d'exemple, chaque prise chez l'enfant peut comprendre 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110 ou 120 mg d'ATT.

Dans un mode de réalisation préféré, la dose d'anéthole trithione par voie orale en population pédiatrique est de 20 à 60mg par prise, selon l'âge et le poids de l'enfant ou de l'adolescent. Ainsi, l'invention concerne aussi une composition pharmaceutique comprenant 20 à 60mg d'ATT et des excipients pharmaceutiquement acceptables. Cette composition est particulièrement adaptée dans la prévention et /ou le traitement de la fibrose pulmonaire.

La présente invention concerne également l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant de ΓΑΤΤ, de l'ATX ou un ester d'ATX pour traiter la fibrose pulmonaire.

Dans un mode de réalisation préféré, l'invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant de l'anéthole trithione (ATT) pour traiter la fibrose pulmonaire. Une telle composition est adaptée aux utilisations thérapeutiques de la présente invention et peut être administrée par exemple par voie orale ou intraveineuse.

EXEMPLES

EXEMPLE 1 : Modèle de nécrose musculaire provoquée par les statines chez le rat Objectif : reprendre le modèle de nécrose musculaire développé par El- Ganainy ¹ chez le rat recevant de manière chronique de l'atorvastatine (2016) pour évaluer l'effet protecteur d'ATT dans ce contexte.

Méthode : le présent protocole est conduit chez le rat traité par atorvastatine pendant 21 jours, les rats selon les groupes d'animaux recevant ou non de l'ATT. Les animaux sont sacrifiés à J22 et l'évaluation est à la fois biochimique et histologique.

En pratique, les rats par groupes de 10 animaux sont traités de la manière suivante :

· Groupe 1 (ou groupe contrôle) : chaque animal reçoit quotidiennement par gavage le véhicule utilisé pour traiter les animaux des groupes 2 et 3 ;

• Groupe 2 (ou groupe témoin positif) : les animaux, dans ce groupe, reçoivent quotidiennement par gavage 100 mg/kg d'atorvastatine en suspension dans une solution de triglycérides à chaîne moyenne de type huile extra vierge, première pression à froid, de noix de coco.

• Groupe 3 (ou groupe traité) : dans ce même véhicule, les rats reçoivent par gavage de l'atorvastatine (100 mg/kg) additionnée d'ATT à la dose de 10 mg/kg.

A J22, les animaux sont sacrifiés. Sur chaque animal, est prélèvé le biceps femoris (ou biceps fémoral) ainsi que du sang dont on laisse exsuder le sérum.

Sur les sérums, sont mesurés les taux de CPK et de myoglobine.

Sur les homogénats de broyats de muscles, sont mesurés les taux de LDH, d'acide lactique et d'acide pyruvique ainsi que le contenu en ATP musculaire.

Enfin, une étude histologique est pratiquée afin d'évaluer l'indice de nécrose selon Westwood (2005). ²

Résultats attendus : une protection par ATT à l'égard du risque d'augmentation des taux sériques de CPK et de myoglobine ; une moindre augmentation dans le bras traité des rapports musculaires lactate sur pyruvate ainsi que de la LDH et du contenu en ATP. Enfin, l'ATT devrait permettre de réduire la sévérité de la nécrose tissulaire observée.

EXEMPLE 2 : Traitement du glaucome : modèle d'ischémie rétinienne

Principe : l'élévation de la pression intraoculaire au-dessus de la pression artérielle systémique provoque une ischémie globale par chute des débits uvéaux et rétiniens. Cette ischémie rétinienne obtenue chez le rongeur par l'hypoxie que l'on vient ainsi d'induire, mime ce qui est observé lors d'une occlusion de l'artère centrale de la rétine ou lors d'un

¹ El-Gamayni SO, El-Mallah A, Abdallah D. et al. Elucidation of the mechanism of

atorvastatin-induced myopathy in a rat model. Toxicology, 2016, 159-160 : 29-38.

² Westwood FR, Bigley A, Randall K. et al. Statin-induced muscle necrosis in the rat :

distribution, development, and fiber selectivity. Toxicol Pathol., 2005, 33 : 246-257. glaucome à angle ouvert (Osborne, 1999 ³ et 2004 ⁴ ; Tielsch, 1995 ⁵ ). Ce modèle a été récemment adapté à la gerbille (Mongolian Gerbila) par Isabelle Ranchon-Cole de l'Université d'Auvergne (UMR INSERM 1107) de manière à pouvoir disposer d'une espèce à vie diurne qui possède donc une rétine beaucoup plus riche en cônes que celles du rat ou de la souris. Ce modèle rétinien d'ischémie-reperfusion permet ainsi d'étudier l'effet protecteur des médicaments sur les deux types de photorécepteurs, cônes et bâtonnets.

Le protocole général : la chambre antérieure de l'œil est canulée et la pression y est portée à 110 mmHg et maintenue à ce niveau pendant 60 min. L'évaluation de l'atteinte rétinienne est effectuée par mesure électrorétinographique et sur les coupes histologiques de tissu rétinien.

Protocole détaillé :

• l'étude est réalisée sur 4 groupes de 5 gerbilles :

o bras A : traité à l'ATT

o bras B : traité au Nicotinamide

o bras C : traité par l'ATT et le Nicotinamide utilisé conjointement

o bras D : non traité (ou bras témoin) ;

• un électrorétinogramme (ERG d'entrée ou ERG ₀ ) est réalisé sur chaque œil 24h avant l'ischémie (J_i) afin de disposer d'une image de l'état basai de la fonction rétinienne de chaque animal avant l'ischémie ;

• une injection intrapéritonéale d'ATT (5 mg/kg) est pratiquée 30 min avant l'élévation de la pression intraoculaire à chacun des animaux du groupe traité A ;

• une injection intrapéritonéale de nicotinamide (5 mg/kg) est pratiquée 30 min avant l'élévation de la pression intraoculaire à chacun des animaux du groupe traité B ; · une injection intrapéritonéale d'ATT (5 mg/kg) associée à du nicotinamide (5 mg/kg) est pratiquée 30 min avant l'élévation de la pression intraoculaire à chacun des animaux du groupe traité C ;

• Un bras témoin ne recevant ni ATT ni nicotinamide.

• réalisation sur chaque animal et sur un seul œil de l'hypertension intraoculaire (HTIO), 30 min après l'injection i.p. d'ATT ou du véhicule ; la pression intraoculaire est maintenue à 110 mmHg pendant 60 min ;

³ Osborne NN et al. The potential of neuroprotection in glaucoma treatment. Curr Opin Ophtalmol., 1999, 10 : 82-92.

⁴ Osborne NN et al. Retinal ischemia : mechanisms of damage and potential therapeutic stratégies. Prog Retin Eye Res., 2004, 23 : 91-147.

⁵ Tielsch JM et al. Hypertension, perfusion pressure, and primary open-angle glaucoma. A population based assessment. Arch Ophtalmol., 1995, 113 : 216-221. • au terme de ces 60 min, une seconde i.p., identique à la première, est pratiquée, d'ATT et de nicotinamide pour les bras traités et de véhicule pour le bras témoin ;

• au temps 24h (Ji) est effectué un nouvel électrorétinogramme (ERGi) ;

• au 15 ^eme jour, est de nouveau réalisé un électrorétinogramme des 2 yeux (ERG ₂ ) ; · les animaux sont sacrifiés au décours immédiat d'ERG ₂ et le tissu rétinien est prélevé pour analyse histologique.

Résultats attendus : Cette étude préclinique a pour objectif de démontrer l'effet protecteur de l'association ATT/Nicotinamide. Un résultat positif quant à l'action de ces composés sera validé si l'on observe une réduction du degré de dégénérescence rétinienne à l'histologie et une moindre atteinte à l'ERG de la fonctionnalité des cellules photosensibles de la rétine, cônes et bâtonnets.

EXEMPLE 3 : Fibrose pulmonaire idiopathique : modèle murin à la bléomycine

Principe : la physiopathologie de la fibrose pulmonaire idiopathique reste méconnue, même si, la recherche progressant, on a pu montrer récemment que les récepteurs CXCR4 paraissent impliqués dans la constitution de cette fibrose pulmonaire puisque les inhibiteurs de ces récepteurs améliorent les animaux présentant une fibrose expérimentale à la bléomycine (Griffith, ⁶ 2018), mais ce n'est là qu'un maillon intermédiaire d'une chaîne dont on ne connaît toujours pas l'amorce. Pour avancer sur ce sujet et pouvoir évaluer les rares nouveaux traitements qui se présentent les modèles animaux disponibles sont relativement nombreux (Moore ⁷ , 2008) : administration de bléomycine, intratrachéale d'isothiocyanate de fluorescéine, irradiation, aérosol de silice, souris transgéniques, vecteurs viraux délivrant des médiateurs inducteurs de fibrose, transfert de fibroblastes humains à des souris immunodéficientes ; toutefois, c'est le modèle à la bléomycine qui est le plus utilisé et le mieux connu avec deux variantes : soit, la bléomycine est administrée par voie parentérale, IV ou i.p., sur 4 à 8 semaines, soit, l'administration est unique et intratrachéale ; cette dernière modalité permet d'obtenir une fibrose plus rapidement mais, s'éloigne davantage, dans son expression, de la pathologie humaine que la version parentérale. C'est au modèle parentéral que nous faisons ici appel pour tester la valeur potentielle d'ATT dans cette pathologie pour laquelle nous ne disposons que de traitements aux effets limités, essentiellement la pirfénidone et le nintedanib qui ralentissent l'évolution de la maladie, maladie dont la médiane de survie n'est que de 3 à 5 ans.

Protocole détaillé : deux groupes de 10 souris, un groupe témoin non traité, et un groupe traité quotidiennement par de ΓΑΤΤ, reçoivent de la bléomycine pendant 8 semaines par

⁶ Griffith K, Habiel DM, Jaffer J. et al. Antifibrotic effects of CXCR4-targeting i-body AD-114 in preclinical models of pulmonary fibrosis. Sci Rep. 2018, 8 : 3212

⁷ Moore BB, Hogaboam CM,. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2008, 294 : L152-L160. voie intraveineuse à la dose de 20 mg/kg, à raison de 2 administrations par semaine. Les animaux sont sacrifiés au temps 10 semaines pour évaluation.

Le traitement : les animaux du groupe traité reçoivent quotidiennement par gavage 10 mg/kg d'ATT en suspension dans une solution de triglycérides à chaîne moyenne de type huile extra vierge, première pression à froid de noix de coco.

L'évaluation est histologique.

Résultats attendus : comparativement au groupe non traité, on devrait observer dans le groupe recevant quotidiennement de ΓΑΤΤ :

• une moindre cellularité,

• une protection de l'architecture alvéolaire avec un moindre épaississement des septa alvéolaires,

• une moindre extension de la fibrose avec des lésions de plus petites tailles.