CHEN XIN (CN)
CHEN YINGWEI (CN)
CONG JUNJIE (CN)
LI XINGWEN (CN)
TIANJIN MICHELE SCI TECH DEV CO LTD (CN)
ZHANG HESHENG (CN)
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| WO2010088842A1 | 2010-08-12 |
| CN1509283A | 2004-06-30 | |||
| CN1258278A | 2000-06-28 |
北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 (CN)
| 权利要求书 1. 通式 (I)的化合物或其药物可接受的盐， (I) 其中： X为 N或 CH; n为 3-10的整数； Y为 -O-、 -S -、 -NR3-、 -OC(O)-或 -NR3C(O)-， 其中 R3为 H或 C1-6 烷基； Ri为被一个或多个 F或 CI取代的曱氧基， 优选为位于苯环 2-位或 3-位的被至少两个 F或 C1取代的曱氧基； 为 11、 C1-6烷基、 C1-6烷氧基、 羟基、 氰基、 硝基、 曱酰氨基、 氨基硫酰基、鹵素、任意被卤素取代的 烷基或任意被卤素取代的 烷氧基。 2. 根据权利要求 1的化合物或其药物可接受的盐， 其中 X为 N; n为 4-8的整数； Y为 -O-、 -S -、 -NR3-、 -OC(O)-或 -NR3C(O)-， 其中 R3为 H或 C1-6 烷基； 为被至少两个 F取代的曱氧基，优选为位于苯环 2-位的被至少两 个 F取代的甲氧基； 为 11、 C^6烷基、 硝基、 卤素或任意被卤素取代的 C^6烷基。 3. 根据权利要求 1或 2的化合物或其药物可接受的盐， 其中 X为 N; n为 4-8的整数； Y为 -0-、 NH-或 -OC(O)-; Ri为位于苯环 2-位的被至少两个 F取代的甲氧基； 为 11、 CM烷基、 硝基、 卤素。 4. 根据权利要求 1-3中任一权利要求的化合物或其药物可接受的盐， 其中： X为 N; n为 4-8的整数； γ为— 0-、 -ΝΗ-或 -OC(O)-; i为位于苯环 2-位的 OCF3或 OCHF2; 1 2为11、 CM烷基、 F、 CI或 Br。 5.根据权利要求 1-4中任一权利要求的化合物或其药物可接受的盐， 其中： X为 N; n为 4-8的整数； Y为 -0-； Ri为位于苯环 2-位的 OCF3或 OCHF2; 1 2为11、 C1-4烷基、 F、 C1或 Br。 6. 下列化合物或其药物可接受的盐： N-氰基 -N，-(6-(2-二氟甲氧基 -5-氯苯氧基）己基) -N，，-(4-吡1 胍； N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，，- -吡17^^)胍； N-氰基 -N，-(6- (间三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，-( 吡1^)胍； N-氰基 -N，-(6- (对三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，-( 吡1^)胍； N-氰基 -N，-(5- (邻三氟曱氧基苯氧基)戊基) -N"-(44t:p i 胍； N-氰基 -N，-(8- (邻三氟曱氧基苯氧基)辛基) -N，，-(4-吡1^ )胍； N-氰基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-溴苯氧基）己基) -N，，-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯氨基）己基) -N，，-(4-吡1^ )胍； N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯曱酰氧基)己基) -N，，-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基 -5-叔丁基苯氧基）己基) ->1，，-(4-吡 )胍； N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，-( 吡1^)胍； N-氰基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基 -4-氯苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-氯苯氧基）己基) -N，，-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-硝基苯氧基）己基) -N，，-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-氟苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6-(5-曱基 -2-二氟曱氧基苯氧基)己基) -N，，-(4-吡啶基)胍； N-氰基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基苯氧基）己基) -Ν，，-(4 )胍； Ν-氰基 -Ν，-(6-(2-二氟曱氧基 -5-氟苯氧基）己基) -Ν，，-(4-吡啶基)胍。 7. 药物组合物， 包含治疗有效量的权利要求 1-6中任一权利要求的化合物 或其药物可接受的盐， 和药物可接受的载体。 8. 根据权利要求 7的药物組合物， 其中药物组合物用于治疗癌症。 9. 权利要求 1-6中任一权利要求的化合物或其药物可接受的盐在制备用于 治疗癌症的药物中的应用。 10. 通式 (I)化合物或其药物可接受的盐的制备方法， 包括， 优选在碱的存 在下， 将通式 (II)的化合物 和通式 (III)的化合物反应 (ΠΙ), 其中， R是 烷基或芳基或被卤素、 烷基取代的芳基， X、 Y、 η、 和 R2同前定义， 以及 任选地， 将所得到的通式 (I)的化合物制成其药物可接受的盐。 11. 抑制肿瘤细胞生长的方法， 包括将抑制有效量的权利要求 1-6中任一权 利要求的化合物或其药物可接受的盐或者权利要求 7或 8所述的药物组合物施 用于所述肿瘤细胞。 12. 根据权利要求 11 的方法， 其中所述肿瘤选自胰腺癌、 急性淋巴细胞白 血病、 肺癌如肺腺癌、 咽鳞癌、 淋巴瘤、 胃癌、 乳腺癌、 黑色素瘤、 神经内分 泌瘤、 肠癌、 多发性骨髓瘤、 纤维肉瘤、 前列腺癌和肝癌。 |
本申请涉及胍类化合物及其应用 , 特别涉及含吡啶基氰基胍衍生物及其应 用。 背景技术
现有技术已报道吡啶基氰基胍类化合物具有抗 肿瘤活性。 例如美国专利
US5,563,160中公开了一系列吡啶基 胍类化合物， 具有抑制癌细胞的活性。 但是， 该专利文件仅仅对通式中数个化合物给出了实 验数据。
本申请的发明人对有关吡啶基氰基胍类化合物 进行了研究， 发现某些特定 结构的吡啶基氰基胍类化合物具有意想不到的 生物活性。 由此， 提出本申请。 发明概述
一方面， 本申 及下列通式 (I)的化合物或其药物可接受的盐，
其中： X为 N或 CH;
n为 3-10的整数；
Y为 -0-、 -S -、 -N ; -OC(O)-或 -NR 3 C(O)-， 其中 R 3 为 H或 C 烷基；
R!为被一个或多个 F或 C1取代的曱氧基， 优选为位于苯环 2-位或 3-位的被至少两个 F或 C1取代的曱氧基；
R 2 为 H、 C 1-6 烷基、 C 1-6 烷氧基、 羟基、 氰基、 硝基、 曱酰氨基、 氨基硫酰基、卤素、任意被卤素取代的 烷基或任意被卤素取代的 烷氧基。
另一方面， 本申请涉及药物组合物， 包含治疗有效量的上述通式 (I)化合物 或其药物可接受的盐， 和药物可接受的载体。
再一方面， 本申请涉及通式 (I)的化合物或其药物可接受的盐在制备用于治 疗癌症的药物中的应用。
又一方面， 本申请涉及通式 (I)化合物或其药物可接受的盐的制备方法， 包 括， 优选在碱的存在下， 将通式 (II)的化合物
和通式 (III)的化合物反应
(πι),
其中， R是 C 1-6 烷基或芳基或被卤素、 C 1-6 烷基取代的芳基， X、 Y、 η、 和
R 2 同前定义， 以及
任选地， 将所得到的通式 (I)的化合物制成其药物可接受的盐。
另一方面， 本申请还涉及抑制肿瘤细胞生长的方法， 包括将抑制有效量的 通式 (I)化合物或其药物可接受的盐或者上文所述的 药物组合物施用于所述肿瘤 细胞。
另一方面，本申请还涉及治疗个体肿瘤的方法 ， 包括将治疗有效量的通式 (I) 化合物或其药物可接受的盐或者上文所述的药 物组合物对所述个体给药。
发明人通过研究发现， 对于通式 (I)所示的化合物， 如果末端苯环上具有至 少一个被至少一个 F或 C1取代的曱氧基时，优选在其 2-或 3-位，特别在 2-位时， 这些化合物与其它取代的化合物相比， 具有意想不到的高的细胞活性。 另外， 本申请的通式化合物具有提高了的亲水性， 在形成相应的制剂方面具有优势。 发明详述
在通式 (I)化合物的上述定义和下文所述的实施方案中 , 本文中所用的术语 具有如下含义：
术语" d_ 6 坑基，，意指具有一到六个碳原子的直链 或支链的饱和烃基， 优选为 具有一到四个碳原子的 C M 烷基。 Ci_ 6 烷基的实例具体包括但不限于： 曱基、 乙 基、 丙基、 异丙基、 丁基、 异丁基、 1-曱基丙基、 叔丁基、 戊基、 异戊基、 1,2- 二曱基丙基、 2,2-二曱基丙基、 己基、 异己基等。
术语" d_ 6 烷氧基，，意指具有一到六个碳原子的直 链或支链的饱和烃氧基， 优 选为具有一到四个碳原子的 CM烷氧基。 烷氧基的实例具体包括但不限于： 曱氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 丁氧基、 异丁氧基、 1-曱基丙氧基、 叔丁 氧基、 戊氧基、 异戊氧基、 1 ,2-二曱基丙氧基、 2,2-二曱基丙氧基、 己氧基、 异 己氧基等。
术语"芳基"表示含 6-20碳原子的单环或稠合芳香环。 非限制性实例包括苯 基、 萘基。
术语"卤素"是指氟、 氯、 溴或碘。
本申请中所述的"药物组合物"指本申请化合物 通常被本领域所接受的将 生物活性化合物输送至诸如人类等哺乳动物的 介质所形成的制剂。 这样的介质 包括所有药物可接受的载体。
本申请中所述的"药物可接受的载体，，意指 括但不限于已经被美国食品与 药品管理局 (FDA)认可的、 可用于人类或动物的任何佐剂、 赋形剂、 助流剂、 甜 味剂、 稀释剂、 防腐剂、 染料 /着色剂、 香味增强剂、 表面活性剂、 润湿剂、 分 散剂、 助悬剂、 稳定剂、 等渗压剂、 崩解剂、 溶剂或乳化剂等对组成药物组合 物无副作用的各种形式的载体。
本申请中所述的"抑制有效量"和"治疗有效量" 互换地使用，意指当对个体 优选哺乳动物， 较优选对人类给药时， 本申请化合物足以有效抑制肿瘤细胞或 治疗肿瘤的量。 根据所选化合物、 施药对象的状态， 构成"抑制有效量，，或"治疗 有效量 "的本申请化合物的量将会不同， 但是本领域的技术人员根据其自身的知 识以及本申请的公开可以依本领域常识确定本 申请化合物的有效量。
术语"治疗 "意为将本发明所述化合物或制剂进行给药以 防、改善或消除疾 病或与所述疾病相关的一个或多个症状， 且包括：
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现， 特别是当这类哺乳动物易患有 该疾病状态， 但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
(ii)抑制疾病或疾病状态， 即遏制其发展；
(iii)緩解疾病或疾病状态， 即使该疾病或疾病状态消退。
"药物可接受的盐"包括"药物可接受的酸加合盐 "和"药物可接受的碱加合
¾- "。
"药物可接受的酸加合盐"指保持游离碱的生物 有效性和性质的那些盐，所 述酸加合盐是在生物学或其它方面合适的并且 是使用无机酸或有机酸来形成 的， 所述无机酸例如但不限于盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸等， 所述有机 酸例如但不限于乙酸、 2，2-二氯乙酸、 己二酸、 褐藻酸、 抗坏血酸、 天冬氨酸、 苯磺酸、 苯羧酸、 4-乙酰胺基苯羧酸、 樟脑酸、 樟脑 -10-磺酸、 癸酸、 己酸、 辛 酸、 碳酸、 肉桂酸、 柠檬酸、 环己烷基氨基磺酸、 十二烷基硫酸、 乙烷 -1,2-二磺 酸、 乙烷磺酸、 2-羟基乙烷磺酸、 曱酸、 富马酸、 粘酸、 龙胆酸、 葡庚糖酸、 葡 糖酸、 葡糖醛酸、 谷氨酸、 戊二酸、 2-氧代-戊二酸、 甘油磷酸、 乙醇酸、 马尿 酸、 异丁酸、 乳酸、 乳糖醛酸、 月桂酸、 马来酸、 苹果酸、 丙二酸、 扁桃酸、 曱烷磺酸、 萘 -1,5-二磺酸、 萘 -2-磺酸、 1-羟基 -2-蔡曱酸、 烟酸、 油酸、 乳清酸、 棕榈酸、 双羟萘酸、 丙酸、 焦谷氨酸、 丙酮酸、 水杨酸、 4-氨基水杨酸、 癸二酸、 硬脂酸、 丁二酸、 酒石酸、 硫氰酸、 对甲苯磺酸、 三氟乙酸、 十一碳烯酸等。
"药物可接受的碱加合盐"指保持游离酸的生物 有效性和性质的那些盐，所 述碱加成盐是在生物学或其它方面合适的。 向游离酸中加入无机碱或有机碱来 制备这些盐。 本申请中， 由无机碱衍生的盐是优选的， 包括但不限于钠、 钾、 本申请一方面 I)的化合物或其药物可接受的盐
(I)
其中： X为 N或 CH;
n为 3-10的整数；
Y为 -0-、 -S -、 -NR 3 -、 -OC(O)-或 -NR 3 C(O)-， 其中 R 3 为 H或 C 1-6 基；
Ri为被一个或多个 F或 C1取代的曱氧基， 优选为位于苯环 2-位或 3-位的被至少两个 F或 C1取代的曱氧基；
R 2 为 H、 C 1-6 烷基、 C 1-6 烷氧基、 羟基、 氰基、 硝基、 曱酰氨基、 氨基硫酰基、卤素、任意被卤素取代的 d_ 6 烷基或任意被卤素取代的 d_ 6 烷氧基。
在涉及本申请的各个方面中的通式 (I)化合物的一些优选实施方案中， 是 被至少两个 F或 C1取代的甲氧基， 优选为被两个 F取代的曱氧基， 最优选为三 氟曱氧基。
在一些优选实施方案中， 在苯环的 2-位。
在另一些优选实施方案中， X为 N, 更优选地， N位于胍基的对位。
在另一些实施方案中， Y 为 -0-、 -S -、 -NR 3 -、 -OC(O)-或 -NR 3 C(O)-， 其中 R 3 为 H或曱基； 优选地， Y为 -O-、 -NR 3 -、 -OC(O)-或 -NR 3 C(O)-， 其中 R 3 为 H 或曱基； 更优选地， Y为 -0-、 -NH-或 -OC(O)-; 最优选地， Y为 -0-。
在另一些实施方案中， n为 4-8的整数。
在又一些实施方案中， 为 11、 C 1-6 烷基、 C 1-6 烷氧基、 羟基、 硝基、 甲酰 氨基、 卤素、 任意被卤素取代的 烷基或任意被卤素取代的 d_ 6 烷氧基； 优选 地， 为 11、 烷基、 硝基、 卤素或任意被卤素取代的 烷基； 更优选地， 为 11、 C M 烷基、 硝基、 卤素； 最优选地， 为 11、 C M 烷基、 F、 C1或 Br。 在本申请的上述各个方面中的通式 (I)化合物的一些方案中，
X为 N;
n为 4-8的整数；
Y为 -O-、 -S -、 -NR 3 -、 -OC(O)-或 -NR 3 C(O)-， 其中 R 3 为 H或 C 1-6 烷基；
i为被至少两个 F取代的曱氧基，优选为位于苯环 2-位的被至少两 个 F取代的甲氧基；
为 11、 C 烷基、 硝基、 卤素或任意被卤素取代的 C 6 烷基。 在本申请的上述各个方面中的通式 (I)化合物的另一些方案中， X为 N;
n为 4-8的整数；
γ为— 0-、 -NH-或 -OC(O)-;
i为被至少两个 F取代的甲氧基，优选位于苯环 2-位的被至少两个 F取代的曱氧基；
为 11、 d— 4 烷基、 硝基、 卤素。
在本申请的上述各个方面中的通式 (I)化合物的另一些方案中，
X为 N;
n为 4-8的整数；
Y为 -0-、 -NH-或 -OC(O)-;
Ri为 OCF 3 或 OCHF 2 , 优选位于苯环 2-位的 OCF 3 或 OCHF 2 ; 1 2 为 11、 C 1-4 烷基、 F、 C1或 Br。
在本申请的上述各个方面中的通式 (I)化合物的另一些方案中，
X为 N;
n为 4-8的整数；
Y为 -O-;
Ri为 OCF 3 或 OCHF 2 , 优选位于苯环 2-位的 OCF 3 或 OCHF 2 ; 1 2 为 11、 C 1-4 烷基、 F、 C1或 Br。
在另一实施方案中， 本申请提供了以下的通式 (I)的化合物或其药物可接受 的盐：
N-氰基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基 -5-氯苯氧基）己基) -N，，-(4-吡 1 胍；
N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯氧基）己基) -！^，，- -吡 1 ^)胍；
N-氰基 -N，-(6- (间三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，-( 吡 1 ^)胍；
N-氰基 -N，-(6- (对三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，-( 吡 1 ^)胍；
N-氰基 -N，-(5- (邻三氟曱氧基苯氧基)戊基) -N，，-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(8- (邻三氟曱氧基苯氧基)辛基) -N，，-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-溴苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯氨基）己基) -N，，-(4-吡 1 ^ )胍；
N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯曱酰氧基)己基) -N，，-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-( 6 -( 2 -二氟曱氧基 - 5 -叔丁基苯氧基）己基) -1^"-( 4 -吡 )胍；
N-氰基 -N，-(6- (邻三氟曱氧基苯氧基）己基) ^，-( 吡 1 ^)胍；
N-氰基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基 -4-氯苯氧基）己基) -N，，-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6-(2-三氟甲氧基 -4-氯苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6-(2-三氟甲氧基 -4-硝基苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6-(2-三氟甲氧基 -4-氟苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6-(5-甲基 -2-二氟曱氧基苯氧基)己基) -N"-(4-吡啶基)胍；
N-氰基 -N，-(6-(2-二氟甲氧基苯氧基）己基) -Ν，，-(4 )胍； N-氰基 -N，-(6-(2-二氟甲氧基 -5-氟苯氧基）己基) -N"-(4-吡啶基)胍。 本申请还提供药物组合物， 包含治疗有效量的本申请的通式 (I)的化合物或 其药物可接受的盐， 和药物可接受的载体。 在某些实施方案中， 该药物组合物 用于治疗癌症。
本申请的通式 (I)的化合物或其药物可接受的盐， 以及所述的药物组合物可 抑制哺乳动物优选人类肿瘤细胞。 所述肿瘤包括但不限于胰腺癌、 急性淋巴细 胞白血病、 肺癌如肺腺癌、 咽鳞癌、 淋巴瘤、 胃癌、 乳腺癌、 黑色素瘤、 神经 内分泌瘤、 肠癌、 多发性骨髓瘤、 纤维肉瘤、 前列腺癌或肝癌。 因此， 本申请 的通式 (I)的化合物或其药物可接受的盐可期待作为治 疗上述肿瘤 (癌症)的药物。
药物组合物中含有治疗有效量的通式 (I)的化合物或其药物可接受的盐， 和 药物可接受的载体。 本领域所属技术人员根据所选化合物、 给药对象的情况可 以确定组合物中具体的治疗有效量。 在一些实施方案中， 有效量可以占组合物 重量的 0.01-99.99%, 优选为 0.1-75%, 更优选为 0.5-50%。
本申请涉及的药物组合物可制成用于治疗性给 药的各种给药途径的各种制 剂。 例如制备成适合局部给药的形式、 口服给药的形式、 静脉内给药的形式及 肌肉内给药的形式。 所述的制剂， 可通过包括口服、 口腔、 直肠、 非肠道、 腹 腔内、 皮内、 透皮、 气管内等等不同的给药途径对需要该药物的个 体或患者给 药。
局部给药制剂可以是透皮贴剂、 栓剂、 糊剂、 洗剂、 膏剂、 胶剂等等的形 式。 局部制剂可包括一种或多种渗透剂、 增稠剂、 稀释剂、 乳化剂、 分散剂或 结合剂。 当所述组合物制备成为透皮传输时， 所述组合物可与渗透增强剂一同 组方或与其一同使用。 渗透增强剂包括化学渗透增强剂和物理渗透增 强剂， 能 促进所述组合物通过皮肤传输。
当所述组合物与化学渗透增强剂组方时， 所述的渗透增强剂选自与所述化 合物匹配的并以满足促进所述化合物通过个体 皮肤传输的剂量存在， 例如用于 将该化合物对该个体全身循环的传输。
对于口服制剂， 所述的化合物可单独或与适合的添加剂组合来 制备片剂、 粉剂、 颗粒和胶嚢， 例如， 与常规的添加剂， 诸如乳糖、 甘露醇、 玉米淀粉或 马铃薯淀粉； 与混合剂， 诸如结晶纤维素、 纤维素衍生物、 阿拉伯胶、 玉米淀 粉或明胶； 与崩解剂， 诸如玉米淀粉、 马铃薯淀粉或羧曱基纤维素钠； 与润滑 剂， 诸如滑石或硬脂酸镁； 如需要， 与稀释剂、 緩冲剂、 润湿剂、 防腐剂及调 味剂组合。 特别有益的是， 所述化合物与緩冲剂的组方可提供所述化合物 对低 pH的胃酸环境的保护的作用。 也可优选提供一种肠包被来避免通过胃时产生 所 述化合物的沉淀。 类似的油、 合成脂肪酸甘油酯、 高级脂肪酸酯或丙烯乙二醇）中溶解、 悬浮或乳 化组方到注射制剂中。 如果需要， 可与常规的添加剂 (诸如增溶剂、 等渗剂、 悬 浮剂、 乳化剂、 稳定剂及防腐剂)组合。 特别有益的增溶剂包括维生素 E TPGS (d-a-生育酚聚乙烯乙二醇 1000琥珀酸酯）、 环糊精等等。
又一方面， 本申请涉及通式 (I)化合物或其药物可接受的盐的制备方法， 包 括将通式 (II)的化合物
和通式 (III)的化合物反应
(ΠΙ),
其中， R是 C 1-6 烷基或芳基或被卤素、 C 1-6 烷基取代的芳基， X、 Y、 η、 和
R 2 同前定义， 以及
任选地， 将所得到的通式 (I)的化合物制成其药物可接受的盐。
通式 (II)和通式 (III)化合物的用量可以为摩尔比 1 : 1 , 但是可以理解， 其中一 个过量将有利于最终产物的收率。 一般地， 通式 (II)化合物和通式 (III)化合物的 摩尔比可为 1.2-1.5 : 1。
在本申请制备方法的一些优选实施方案中， 反应在碱的存在下进行。 所述 碱可以是有机碱， 优选使用叔胺例如三乙胺、 吡啶。 其用量与基准反应物的摩 尔比可为 1.5-2.5: 1。
反应可以在对反应呈惰性的极性有机溶剂中进 行， 优选在具有较高极性的 溶剂中进行。 作为非限制性示例， 优选反应在下列溶剂中进行： 低级烷基醇如 曱醇、 乙醇、 丙醇， 酰胺类如二甲基曱酰胺、 二曱基乙酰胺， 砜类如二甲亚砜、 环丁砜， 醚类如四氢呋喃， 以及乙腈等。
上述反应的反应温度没有限制， 一般可以在常温下进行。 将反应体系置于 惰性气体保护下是优选的。
另一方面， 本申请还涉及抑制肿瘤细胞生长的方法， 包括将抑制有效量的 通式 (I)化合物或其药物可接受的盐或者上文所述的 药物组合物施用于所述肿瘤 细胞。
另一方面，本申请还涉及治疗个体肿瘤的方法 ， 包括将治疗有效量的通式 (I) 化合物或其药物可接受的盐或者上文所述的药 物组合物对所述个体给药。 具体实施方式：
下面提供的非限制性具体实施例， 其目的是使本领域的技术人员能更清楚 地理解和实施本发明。 它们不应该被认为是对本发明范围的限制。 中间体的制备
la. 5-氯 -2-二氟甲氧基苯酚
氩气保护并搅拌下，将一氯二氟醋酸钠 723 mg (5.0 mmol) ,氢氧化钠 220 mg (5.5 mmol)和 4-氯邻苯二酚 838 mg (5.5 mmol)依次加至 N,N-二甲基甲酰胺 7.0 mL 和水 0.1 mL的混合液中， 緩慢升温至 125°C反应 1.0小时。 停止反应， 降至室 温。 向反应液中加入 1.0 mol/L盐酸 10 mL, 调节溶液至酸性， 再加入水 50 mL 和乙酸乙酯 20 mL。 分离有机层， 水层以乙酸乙酯 20 mLx2萃取。 合并有机层， 依次以水 50 mL和饱和食盐水 50 mL洗涤， 无水硫酸镁干燥。 过滤， 浓缩， 制 备薄层硅胶 (流动相： 石油醚:乙酸乙酯 =4: 1)分离， 得到浅黄色油状物 189 mg, 收率 19.4%。 MS([M-Hr): 193。
用制备 la类似的方法制备 lb化合物 (5-叔丁基 -2-二氟甲氧基苯酚)和 lc化 合物 (5-曱基 -2-二氟曱氧基苯酚)。
Id. 4-硝基 -2-三氟甲氧基苯酚
氩气保护并搅拌下， 将无水硝酸铋 3.0 g (7.5 mmol)加至 2-三氟曱氧基苯酚 891 mg (5.0 mmol)的四氢呋喃 (重蒸） 20 mL溶液中， 緩慢升温至 50°C, 反应 10 min。 停止反应， 降温。 抽滤， 滤饼以四氢呋喃 20 mL洗。 滤液浓缩， 向残留物 中加入水 40 mL和乙酸乙酯 45 mL。 分离有机层， 水层以乙酸乙酯 40 mL 2萃 取。 合并有机层， 依次以水 110 mL和饱和食盐水 110 mL洗涤， 无水硫酸镁干 燥。 过滤， 浓缩， 柱层析硅胶 (流动相： 石油醚：乙酸乙酯 =15: 1)分离， 得到黄色 油状物 346 mg， 收率 31.4%。
le. 4- 基 -2-三氟曱氧基苯酚
氩气保护并机械搅拌下， 依次将 4-硝基 -2-三氟曱氧基苯酚 223 mg (1.0 mmol),还原铁粉 224 mg (4.0 mmol)和氯化按 321 mg (6.0 mmol)加至乙醇 20 mL 和水 6.0 mL的混合液中，緩慢升温至 50°C，反应 1.5 h,溶液呈棕色。停止反应， 自然降温。 抽滤， 滤饼以乙酸乙酯 10 mL洗。 向滤液中加入水 20 mL和乙酸乙 酯 20 mL， 分离有机层， 水层以乙酸乙酯 20 mLx2萃取。 合并有机层， 依次以 水 50 mL和飽和食盐水 50 mL洗， 无水硫酸镁干燥。 过滤， 浓缩， 得到暗红色 固体 144 mg, 收率 74.4%。
If. 4-氟 -2-三氟曱氧基苯酚
氩气保护并搅拌下，控制外浴温度为 0~5°C,将亚硝酸钠 33 mg (0.48 mmol) 加至 4-氨基 -2-三氟曱氧基苯酚 77 mg (0.4 mmol)的 65%(w/w)氢氟酸吡啶溶液 0.8 mL中。 夕卜浴升至 5~10°C, 擺掉 30 min, 溶液呈棕红色。 向上述反应液中依次 加入二水合氯化亚锡 90 mg (0.4 mmol)和三水合四丁基氟化铵 105 mg (0.4 mmol), 緩慢升温至 100。C, 反应 3.0 h, 溶液呈深棕色。 停止反应， 自然降温。 将反应液倒入冰水，加入乙酸乙酯 15 mL,分离有机层，水层以乙酸乙酯 15 mLx2 萃取。 合并有机层， 依次以水 30 mL和饱和食盐水 30 mL洗涤， 无水硫酸镁干 燥。 过滤， 浓缩， 制备薄层硅胶 (流动相： 石油醚：乙酸乙酯 =2: 1)分离， 得到淡黄 色油状物 14 mg, 收率 17.9%。
lg.对氯邻三氟曱氧基苯酚
取 1.78 g邻三氟甲氧基笨酚，溶于 5 mL甲苯，冰水浴搅拌 20 min。将 1.485 g磺酰氯在 10 min内滴入反应体系， 滴毕， 搅拌 20 min后移入 30°C水浴， 继续 搅拌 1 h。 向体系中加入 200 mL 5%碳酸钠水溶液、 50 mL甲苯， 充分振荡后分 液 (测水层 pH为 10)。 水层用 2 N盐酸水溶液调节 pH为 2, 用 50 mL甲苯再次 萃取。 合并两次甲苯层， 依次用 100 mL水、 100 mL飽和氯化钠水溶液洗涤， 加无水硫酸镁 5 g干燥 30 min。 旋蒸浓缩， 得白色颗粒状固体。 MS 负离子峰 (M-H:213)。 冰浴搅拌下， 将 6-氨基己醇 5.85 g(0.05 mol)加至二氯曱烷 (分子筛处理 )30 mL中， 固体未完全溶解。 将二碳酸二叔丁基酯 12.0 g (0.055 mol)的二氯曱烷 (分 子筛处理） 20 mL溶液滴至上述溶液中。 滴毕得白色浑浊液。 室温反应 2.5 h, 停 止反应， 向反应液中加入水 50 mL, 分离有机层， 水层以二氯曱烷 50 mL><2萃 取。 合并有机层， 依次以 5.0 %柠檬酸水溶液 125 mL、 饱和碳酸氢钠水溶液 125 mL和饱和食盐水 125 mL洗， 无水硫酸镁千燥。 过滤， 浓缩， 得到淡黄色油状 物 10.9 g, 直接用于下一步。
水浴搅拌下， 将上一步产物 (0.05 mol计)和对曱苯磺酰氯 11.4 g (0.06 mol) 加至二氯曱烷 (分子筛处理） 50 mL中， 固体全溶。将吡啶 12.1 mL (0.15 mol)滴至 上述溶液中。 滴毕， 室温搅拌过夜。 停止反应， 向反应液中加入水 50 mL, 分离 有机层， 水层以二氯曱烷 50 mLx2萃取。 合并有机层， 依次以 5.0 %柠檬酸水溶 液 125 mL、 水 125 mL和饱和食盐水 125 mL洗， 无水充酸镁千燥。 过滤， 浓缩， 真空干燥， 得到白色固体 13.9 g， 收率 74.7%。
用制备 2a类似的方法合成 2b化合物 (6- (叔丁氧羰基氨基)己基 2- (三氟曱氧 基)苯曱酸酯)。
3a . 6-(5-氯 -2-二氟甲氧基-苯氧基)己胺基曱酸叔丁基酯
氩气保护并冰浴搅拌下，将 5-氯 -2-二氟曱氧基苯酚 189 mg (0.97 mmol)和氢 化钠 47 mg (1.94 mmol)加至 N,N-二曱基曱酰胺 3.0 mL中，搅拌 1.0 h。将 6-氨基 曱酸叔丁酯基-对曱苯磺酸己酯 721 mg (1.94 mmol)的 N，N-二曱基曱酰胺 3.0 mL 溶液滴至上述溶液中。 滴毕， 室温搅拌过夜。 停止反应， 向反应液中加入乙酸 乙酯 40 mL和水 100 mL, 分离有机层， 水层以乙酸乙酯 40 mLx2萃取。 合并有 机层， 依次以饱和碳酸氢钠水溶液 120 mL、 水 120 mL和饱和食盐水 120 mL洗 涤， 无水硫酸镁干燥。 过滤， 浓缩， 柱层析硅胶 (流动相： 石油醚：乙酸乙酯 =15: 1) 分离得到淡黄色油状物 198 mg, 收率 51.8%。 MS([M+Na] + ): 416。
用制备 3a类似的方法合成 3b化合物 (叔丁基 6-(2- (三氟曱氧基)苯基氨基) 己基氛基曱酸酯)。
4a. 6-(5-氯 -2-二氟甲氧基-苯氧基)己基小胺 氩气保护并冰浴搅拌下， 将三氟醋酸 0.6 mL(8.0 mmol)加至 6-(5-氯 -2-二氟 甲氧基-苯氧基）己胺基甲酸叔丁基酯 198 mg (0.5 mmol)的二氯曱烷 (分子筛处理) 5.0 mL溶液中， 有气泡产生， 搅拌 3.0 h。 停止反应， 旋干溶剂， 向残留物中加 入 5.0 mol/L氢氧化钠 10 mL， 调节溶液至碱性， 加入乙酸乙酯 15 mL, 分离有 机层， 水层以乙酸乙酯 15 mLx2萃取。 合并有机层， 依次以水 40 mL和饱和食 盐水 40 mL洗， 无水硫酸镁干燥。 过滤， 浓缩， 得到淡黄色油状物 144 mg, 收 率 98.0 %。
用类似的方法合成 4b-4t的化合物：
4b. 6-(2- (三氟甲氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4c. 6-(3- (三氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4d. 6-(4- (三氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4e. 5-(2- (三氟曱氧基)苯氧基)戊基 -1-胺
4f. 6 -( 4 -溴 - 2 - (三氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4g. N-(6-氨基己基) -2- (三氟甲氧基)苯胺
4h. 6-氨基己基 2- (三氟甲氧基)苯曱酸酯
4i. 6-(3-叔丁基 -2- (二氟甲氧基)苯氧基)己基小胺
4j. 6-(4-氯 -2- (二氟甲氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4k. 6-(4-氯 -2- (三氟曱氧基)苯氧基）己基 -1-胺
41. 6-(4-硝基 -2- (三氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4m. 6-(4-氟 -2- (三氟甲氧基)苯氧基）己基 -1-胺
4n. 6-(3-曱基 -2- (二氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4o. 6-(2- (二氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4p. 6-(3-氟 -2- (二氟曱氧基)苯氧基)己基 -1-胺
4q. 5-(2- (曱氧基)苯氧基)戊基 -1-胺
4r. 6-(4-氯苯氧基）己基 -1-胺
4s. 6-( 2 -氯苯氧基）己基 -1-胺
4t. 6-(2- (甲氧基)苯氧基)己基 -1-胺
5a. 苯基 -3- (吡啶 -4-基) -异脲
氩气保护并搅拌下， 将二苯基 -N-氰基碳酸酯 10.0 g (0.042 mol)和 4-氨基吡 啶 2.44 g (0.026 mol)依次加至四氢呋喃 (重蒸） 10 mL中， 緩慢升温至 50°C，反应 2.5 h, 固体全部溶解。 降至室温搅拌过夜。 停止反应， 将反应液置于水箱中 20 min。 抽滤， 得固体 4.7 g, 收率 75.9 %。
用制备 5a的合成方法合成 5b (1-氰基 -2-苯基 -3- (吡啶 -3-基) -异脲)。
6. 2-(7-羟基庚基)异吲哚 -1，3-二酮
取 585 mg 7-溴代庚醇， 溶于 5 mL DMF , 将 833 mg邻苯二甲酰亚胺钟盐加 入， 搅拌 4 h。 向体系中加入 50 mL水， 50 mL DCM, 充分振荡后分液。 水层用 50 mL DCM再次萃取。 合并两次有机层， 依次用 100 mL水、 100 mL饱和氯化 钠水溶液洗涤，无水硫酸镁 5 g干燥 30 min。旋蒸浓缩，得淡黄色透明油状液体。 7. 7-(l，3-二氧代异吲哚 -2-基)庚基 -4-曱基^ ^酸酯
将 783 mg 2-(7-羟基庚基)异吲哚 -1,3-二酮加入 40 mL DCM中， 将 800 mg 对曱苯磺酰氯加入， 搅拌下将吡啶滴入， 搅拌过夜。 24 h后， 向反应体系中加 入 100 mL水， 充分振荡后分液， 水层用 50 mL DCM萃取一次。 合并有机相， 依次用 100 mL 5%柠檬酸水溶液， 100 mL饱和碳酸钠水溶液， 100 mL饱和氯化 钠水溶液洗涤， 5 g硫酸镁干燥 30 min, 旋蒸浓缩， 得油状液体。
8. 2-(7-(2-曱氧基苯 )庚基)异吲哚 -1,3-二酮
邻曱氧基苯酚 745 mg,溶于 10 mL DMF中，力 144 mg氢化钠，搅拌 20 min 后将 7-(1,3-二氧代异吲哚 -2-基)庚基 4-甲基苯蹟酸酯 1.25 g加入反应体系。搅拌 反应过夜。 16 h后， 向体系中加入 50 mL水， 50 mL乙酸乙酯， 充分振荡后分 液， 水层用 50 mL 乙酸乙酯萃取后合并有机层， 依次用饱和碳酸钠水溶液 100 mL, 饱和氯化钠水溶液 100 mL洗涤， 5 g ^酸镁干燥 30 min, 旋蒸浓缩， 得黄 棕色油状物。快速柱层析， 洗脱剂乙酸乙酯:正己烷 1 :2。得黄色透明油状物， 500 mg o
9a. 7-(2-曱氧基苯 庚小胺
500 mg 2-(7-(2-曱氧基苯氧基)庚基)异吲哚 -1,3-二酮， 溶于 0.5 mL THF, 加 0.5 mL曱胺水溶液。 搅拌过夜 20 h后， 加 50 mL水， 50 mL乙酸乙酯， 充分振 荡， 分液。 乙酸乙酯层依次用 100 mL饱和碳酸氢钠水溶液， 100 mL饱和氯化 钠水溶液洗涤， 3 g硫酸镁干燥 l h。 旋千， 得淡黄色油状物。
用合成 9a类似的方法合成 9b化合物 (8-(2- (三氟曱氧基)苯氧基)辛基 -1-胺)。 本发明化合物的制备
实施例 1. N-氰基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基 -5-氯苯氧基)己基) -N"-(4-¾b 基)胍
氩气保护并搅拌下，将三乙胺 0.17 mL(1.2 mmol)和 1 -氰基 -2-苯基 -3- (吡啶 -4- 基) -异脲 140 mg (0.59 mmol)依次加至 6-(5-氯 -2-二氟曱氧基-苯氧基）己基 -1-胺 144 mg (0.49 mmol)的乙醇 (重蒸）5.0 mL溶液中。 室温搅拌 2.0 h。 停止反应， 旋 干溶剂， 向残留物中加入加入乙酸乙酯 25 mL和水 20 mL , 分取有机层， 水层 以乙酸乙酯 20 mL 2萃取。 合并有机层， 依次以饱和碳酸氢钠水溶液 50 mL、 水 50 mL和饨和食盐水 50 mL洗， 无水硫酸镁干燥。 过滤， 浓缩， 制备薄层硅 胶 (流动相：氯仿:曱醇 =12:1)分离，得到浅黄近白色针状固体 115 mg,收率 53.5%。 MS([M _ H]— ): 436。 用合成实施例 1类似的方法合成实施例 2-实施例 18和对照 1-对照 4的化合 物。
实施例 2. N-H^-N，-(6- (邻三氟曱氧基苯 己基) -N，，-(3-¾b¾^)胍
MS([M+H] T ): 422
实施例 3. N-H^-N，-(6- (间三氟曱氧基苯 己基) -N"-(4-吡 1 ^ )胍
MS([M+H] + ): 422 实施例 4. -氰基 -N，-(6- (对 .氟曱氧基苯 己基) -N" -(4-吡"^ )胍 MS([M+H] + ): 422 实施例 5. ) -N" -(4-吡 胍
MS([M+H] + ): 408 实施例 6. N-氰基 -N，-(8- (邻三氟曱氧基苯 辛基) -N" -(4-吡 1 ¾)胍 MS([M+H]卞)： 450 实施例 7. N-H^-N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-溴苯 )己基) -N"-(4-吡^)胍 MS([M+H]十)： 501
1H NMR ( 600M, DMSO-d 5 ) δ: 1.314-1.457 ( m, 4Η, CiL ), 1.516-1.563 ( m, 2H, CH 2 ), 1.704-1.750 ( m, 2H, CHs ), 3.265 ( q, 2H, NH-CHs, J 2 =6.3 ),
4.062 ( t, 2H, O-CH 2 , J=12.6 ), 7.202-7.231 ( m, 3H, 苯基， 吡 1 7.547 ( q, 1H， 苯基）， 7.591-7.602 ( m, IH, 苯基）， 7.835 ( t, IH, NH ), 8.386 ( d, 2H, 吡啶基）， 9.353 ( bs, IH, NH ) 0 实施例 8. N-H^-N，-(6- (邻三氟曱氧基^ J 己基) -N，，-(4-吡 1 胍
MS([M+H]十)： 421 实施例 9. (邻三氟曱氧基苯曱酰 己基) -N"-(4-吡^)胍
MS([M+H]卞)： 450 实施例 10. N-氣基 -N，-(6-(2-二氟曱氧基 -5-叔丁基苯氧基)己基) -N"-(4-吡啶基)胍
实施例 11
MS([M+H]+): 422
1H NMR ( 600M, CDCI3 ) δ: 1.431-1.489 ( m, 2H, CH 2 ), 1.515-1.566 ( m, 2H, CH 2 ), 1.630-1.676 ( m, 2H, Ci^ ), 1.802-1.848 ( m, 2H, )， 3.379 ( q, 2H, NH-CH 2 ), 4.009 ( t, 2H, 0-CH 2 ), 6.902-6.984 ( m, 3H ), 7.206-7.271 ( m, 4H ), 8.500 ( d, 2H )。
，-(6-(2-二氟曱氧基 -4-氯苯氧基)己基) -N，，-(4-吡啶基)胍
MS([M - H]— ): 436; MS([M+H] † ): 438 实施例 13. N-氣基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-氯苯氧基)己基) -N，，-(4-吡啶基)胍
实施例 14. N-氰基 -N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-硝基苯氧基)己基) -N，，-(4-吡 基)胍 实施例 15. N-^J^-N，-(6-(2-三氟曱氧基 -4-氟苯 iLi 己基) -N"-(4-吡 )胍
MS([M+H] + ): 440
，-(6-(5-曱基 -2 苯氧基)己基) -N"-(4-吡 胍
MS([M - H] "): 416; MS([M+H] + ): 418 实施例 17. N- L^-N，-(6-(2-二氟曱氧基苯氧基)己基) -N"-(4-吡 胍
MS([M+H] + ): 404
实施例 18. ¾ 胍
对照化合物 1. N-氣基 -N，-(5- (邻曱氧基苯氧基)戊基) -N，，-(4-吡啶基)胍
MS([M - H]— ): 352; MS([M+H] 354
对照化合物 2. N-^ L-N，-(6-(4-氯苯 fl^)己基) -1^"-(4-吡》¾_¾ 胍 对照化合物 3. N-氰 -N，-(6-(2-氯笨氧基)己基) -N，，-(4- '比 ¾J胍
对照化合物 4. ^^ -^-(6-(2-曱 苯氧基)己基)-^-(4-吡¾^)胍
MS([M H]— ): 366; MS([M+H] + ): 368
药理活性测试
本实验以本领域常规实验操作进行， 具体采用如下材料和方法：
1. 受试化合物
实施例 1、 2、 4-7、 10-12和 16, 对照化合物 1-4。
2. 细胞株：
人胰腺癌 AsPC-1 ; 人急性淋巴细胞白血病耐紫杉醇细胞株 CCRF-CEM/T; 人肺腺癌 NCI-H1975; 人咽鳞癌 Fadu; 人 B淋巴细胞瘤 BA25; 人 B淋巴细胞 瘤 BA91 ; 人 B淋巴细胞瘤 BA127; 人胃癌 NCI-N87; 人非小细胞肺癌 A549; 人肝癌 SK-Hep-1 ; 人肺癌 NCI-H460; 人前列腺癌 PC-3。
3. 实验方法：
3.1 贴壁细胞
将以下各种细胞分别在下列条件下培养：
AsPC-1 : 90% RPMI1640, 10% FBS;
NCI-H1975: 90% PMI1640, 10% FBS;
Fadu: 90% EMEM, 10% FBS;
NCI-N87: 90% RPMI1640, 10% FBS;
37°C, 5% CO 2 , 饱和湿度培养。
细胞培养至融合后， 用胰酶消化细胞， 以完全培养基制成单细胞悬液。 以适当浓度的细胞 (AsPC-1 : 8000细胞 /孔； CI-H1975: 5000细胞 /孔； Fadu: 6000细胞 /孔； CI-N87: 15000细胞 /孔)接种 96孔微孔板， 培养过夜使细胞贴 壁。
将受试化合物溶于 DMSO中制成 2 mM储液， 用基础培养基 (不含血清)稀 释至 20 μΜ或 2 μΜ的 10x工作液， 并以 1/3梯度稀释， 保持稀释过程中 DMSO 浓度不变， 一共 8个剂量组。 向实验孔加入 20 μΐ的 lOx化合物工作液， 最终每 孔体积为 200 μΐ, DMSO浓度为 1%。； 同时设不含化合物的溶剂对照组 (PC)和不 含细胞及化合物的溶剂对照组 (NC)。 继续培养细胞 72 h。
然后用四氮唑盐还原法 (； MTT 法；)测量细胞的活性， 具体方法为吸走孔里的 培养基， 加入含 0.5 mg/ml MTT的基础培养基， 100 μΐ/孔， 继续培养 3 h, 再吸 走含 MTT的培养基，加入 DMSO 100 μΐ/孔，使 ΜΤΤ结晶溶解，酶标仪测 OD 490 nm值。
用下式计算化合物的抑制率： 抑制率 = [1- (给药组 OD值 -NC OD值) /(PC OD值 -NC OD值)] χ100% 然后以化合物浓度的对数为横坐标， 抑制率为纵坐标作图， 以 Logistic 4参 数方程拟合曲线， 曲线上 50%抑制率对应的化合物浓度即为 IC50值。
3.2 悬浮细胞
将细胞在以下条件下培养：
完全培养基： 90% RPMI1640, 10% FBS; 37。C, 5% C0 2 , 饱和湿度培养。 细胞培养至对数生长末期后， 用完全培养基稀释细胞至所需浓度。
以适当浓度的细胞 (CCRF-CEM/T： 20000细胞 /孔； BA25： 20000细胞 /孔； BA91 : 60000细胞 /孔； BA127: 60000细胞 /孔)接种 96孔微孔板。
将受试化合物溶于 DMSO中制成 2 mM储液， 以基础培养基 (不含血清)稀 释至 20 μΜ或 2 μΜ的 10x工作液， 并以 1/3梯度稀释， 保持稀释过程中 DMSO 浓度不变， 一共 8个剂量组。 向实验孔加入 12 μΐ的 lOx化合物工作液， 最终每 孔体积为 120 μ1， DMSO浓度为 1%。； 同时设不含化合物的溶剂对照组 (PC)和不 含细胞及化合物的溶剂对照组 (NC)。 继续培养细胞 72 h。
然后以四氮唑盐还原法 (MTT 法）测细胞的活性， 具体方法为加入含 2.5 mg/ml MTT的 PBS 30μ1/孔，继续培养 3 h，再加入三联裂解液 (10% SDS, 5% 异 丁醇， 0.012 M HC1) 100 μΐ/孔，室温放置使 ΜΤΤ结晶溶解，酶标仪测 OD 570 nm。
用下式计算化合物的抑制率： 抑制率 = [1- (给药组 OD值 -NC OD值) /(PC OD值 -NC OD值)] χ100% 然后以化合物浓度的对数为横坐标， 抑制率为纵坐标作图， 以 Logistic 4参 数方程拟合曲线， 曲线上 50%抑制率对应的化合物浓度即为 IC50值。
4 试验结果
4.1 下表 1显示了部分化合物对 Aspc-1的体外生长抑制活性。 表 1. 部分化合物对 Aspc-1的体外生长抑制活性 化合物编号 IC 50 (nM) 化合物编号 IC 50 (nM) 对照 2 19 对照 3 7.2 对照 4 7.3 对照 1 135 实施例 11 2.1 实施例 12 2.3 实施例 16 0.9 从表 1可以看出， 实施例 11、 12和 16对人胰腺癌 AsPC-1的体外生长抑制 活性显著优于对照 1-4， 表明这些化合物对胰腺癌的显著疗效。
4.2 下表 2显示了部分化合物对 CCRF-CEM-T的体外生长抑制活性。 表 2. 部分化合物对 CCRF-CEM-T的体外生长抑制活性
从表 2可知， 实施例 1、 7、 11、 12和 16对人急性淋巴细胞白血病耐紫杉 醇细胞株 CCRF-CEM/T的体外生长抑制活性明显优于对照 1-4, 表明这些化合 物对急性淋巴细胞白血病的显著疗效。
4.3 下表 3显示了部分化合物对 BA25的体外生长抑制活性。 表 3. 部分化合物对 BA25的体外生长抑制活性
从表 3可以看出， 实施例 2、 5-7和 11的 IC 5 。值明显低于实施例 4的 IC 50 值， 表明 F取代的曱氧基在 2-位的化合物比在对位的化合物有更好的对人 B淋 巴细包瘤 BA25的^ ^制活性。
4.4 下表 4显示了部分化合物对 FaDu的体外生长抑制活性。 表 4. 部分化合物对 FaDu的体外生长抑制活性
可以看出， 实施例 1、 7、 10-12和 16对人咽鳞癌 Fadu的抑制活性明显优于 照 2。
4.5下表 5显示了部分化合物对 BA127体外生长抑制活性。
4.7 下表 7显示了部分化合物对肿瘤细胞的体外生长抑 活性 IC :
表 7. 部分化合物对肿瘤细胞的体外生长抑制活性 IC 5Q (nM)
上表显示出实施例 11对六种肿瘤细胞模型的体外生长抑制活性比 照 2和 4好得多。
应该理解， 本申请中针对本发明某一特定方面、 特定实施方式、 特定实施 例所描述的各具体技术特征、 各组成元素 (如化合物、 化合物结构单元、 基团、 组合物、 组合)， 并不限于这些特定方面、 特定实施方式、 特定实施例。 即从本 领域所属技术人员的高度理解， 除非所述的各具体技术特征、 各组成元素与本 申请中其它方面、 实施方式、 实施例中的各具体技术特征、 各组成元素 (如化合 物、 化合物结构单元、 基团、 组合物、 组合)特征冲突， 否则它们也可以用于本 申请中其它方面、 实施方式、 实施例。
同时， 除非相互冲突， 本申请中公开的所有技术特征、 组成元素（包括方法 中的所有步骤)可以以任意形式进行组合形成 同的本发明的技术方案。