L'extension géographique des maladies parasitaires, et tout spécialement du paludisme, est considérable.

Plus de 100 pays sont touchés à ce jour par le paludisme et plus de 2 milliards de personnes sont exposées au risque d'infection, soit près de la moitié de la population mondiale (pour la situation du paludisme dans le monde, voit Butler et al, Nature, 1997,386,535- 540).

La recrudescence de souches chimiorésistantes de Plasmodium falciparum (1'espèce mortelle pour l'homme) en Asie, en Afrique et en Amérique latine est plus que jamais d'actualité et limite considérablement l'efficacité des traitements disponibles.

On mesure ainsi l'urgence de disposer de médicaments ainti-paludiques efficaces.

Dans des travaux précédents, certains des co- inventeurs de la présente demande de brevet ont développé un modèle pharmacologique original capable d'empêcher la reproduction du parasite. Les composés synthétisés

présentent une structure de type bis-ammonium quaternaire avec un bras espaceur, l'un des composés les plus étudiés étant constitué par le 1,16-hexadécaméthylène bis- (N- méthylpyrrolidinium), répondant à la formule Ce composé sera appelé ci-après G25.

Si de tels composés présentent un intérêt considérable compte tenu des guérisons qu'ils entraînent in vivo, sans rechutes, il s'avère toutefois que leur activité par voie orale est inférieure par un facteur d'au moins 100 à celle observée par voie intramusculaire.

La poursuite des travaux des inventeurs pour rechercher de nouveaux composés présentant une efficacité accrue lorsqu'on les administre par voie orale les a conduits à étudier une stratégie basée sur l'élaboration de prodrogues neutres, a priori plus facilement absorbables, capables de générer in vivo la drogue active qui se présente sous forme ionisée.

De manière surprenante, ces travaux ont permis de développer des prodrogues de sels de bis-ammonium quaternaire de grande efficacité, dotées d'une activité anti-parasitaire élevée, aisément absorbables, générant in vivo des drogues actives dont la biodisponibilité est élevée.

L'invention vise donc à fournir de nouveaux dérivés neutres, à activité antipaludique élevée, administrables aussi par voie orale, ainsi que des métabolites ionisés générés in vivo.

Elle vise également un procédé de synthèse de ces prodrogues.

Selon encore un autre aspect, l'invention vise la mise à profit des propriétés de ces prodrogues pour l'élaboration de principes actifs de médicaments utilisables pour le traitement des maladies parasitaires, et en particulier du paludisme et des babésioses animales ou humaines.

Les précurseurs de drogues. à effet anti- paludique selon l'invention sont caractérisés en ce qu'il s'agit de produits capables de générer des sels de bis- ammonium quaternaire et qu'ils répondent à la formule générale (I) dans laquelle -A et A'sont identiques ou différents l'un de l'autre et représentent . soit, respectivement, un groupe A1 et A'1 de formule où n est un entier de 2 à 4 ; R'1 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle en Cià C5, éventuellement substitué par un radical aryle (notamment un radical phényle), un hydroxy, un alkoxy, dans lequel le radical alkyle comprend de 1 à 5 C, ou aryloxy (notamment phénoxy) ; et W représente un atome d'halogène choisi parmi le chlore, le brome ou l'iode, ou un groupe

nucléofuge, comme le radical tosyle CH3-C6H4-SO3, mésityle CH3-SO3, CF3-SO3, NO2-C6H4-SO3 . soit un groupe Ao qui représente un radical formyle -CHO, ou acétyl-COCH3, -B et B'sont identiques ou différents l'un de l'autre et représentent . soit respectivement les groupes Bi et B11, si A et A' représentent respectivement A1 et A'1, B1 et B'1 représentant un groupe R1 qui présente la même définition que R'1 ci-dessus, mais ne peut pas être un atome d'hydrogène, . soit respectivement les groupes B2 et B'7s si A et A' représentent A2, B ou B'2 étant le groupe Ri tel que défini ci-dessus, ou un groupement de formule dans lequel-Ra représente un groupe RS-ou RCO-, où R est un radical alkyle en Cl à C6, notamment de Cl à C5, linéaire, ramifié ou cyclique, le cas échéant substitué par un ou plusieurs groupements hydroxy ou alcoxy, ou aryloxy ou un groupe amino et/ou un groupe- COOH ou COOM, où M est un alkyle en Cl à C3 ; un radical phényle ou benzyle, dans lequel le radical phényle est le cas échéant substitué par au moins un radical alkyle ou alcoxy en Cl à C5, ceux-ci étant éventuellement substitués par un groupe amino, ou par un hétérocycle azoté ou oxygéné, un groupe-COOH ou-COOM ; ou un groupe -CH2-hétérocycle, à 5 ou 6 éléments, azoté et/ou oxygéné ; R5 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle

en Cl à C5, ou un groupe -CH2-COO-alkyl (C1 à C5) ; et R3 représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle ou alkényle en Cl à C5, le cas échéant substitué par-OH, un groupement phosphate, un radical alkoxy, dans lequel le radical alkyle est en Cl à C3, ou aryloxy, ou un groupe alkyl (ou aryl) carbonyloxy ; ou encore R et R3 forment ensemble un cycle à 5 ou 6 atomes de carbone ; R et R3 peuvent être reliés pour former un cycle de 5 à 7 atomes (carbone, oxygène, soufre) -a représente . soit une simple liaison, lorsque A et A'représentent A1 et A'1 : ou lorsque A et A'représentent A2, c'est-à- dire un groupe-CHO ou-COCH3, et B2 et B'9 représentent . soit, lorsque A et A'représentent A2 et B° et B'2 représentent R1, un groupement de formule ou un groupement de formule dans lesquels (a) représente une liaison vers Z et (b) une liaison vers l'atome d'azote,

-Z représente un radical alkyle en C6 à C21, notamment en C13 à C21, le cas échéant avec insertion d'une ou de plusieurs liaisons multiples, et/ou d'un ou plusieurs hétéroatomes 0 et/ou S, et/ou d'un ou de plusieurs cycles aromatiques, et les sels pharmaceutiquement acceptables de ces composés.

A moins de précisions contraires,"aryle"et "aromatique"tels qu'utilisés pour définir les produits de l'invention désignent un phényle ou tout cycle, ou hétérocycle, ayant un caractère aromatique comme les cycles pyridine, oxazole, thiazole,"alkényl"désigne un alkyl comportant une ou plusieurs insaturations,"groupe amino"désigne-NH2 ou dialkyl (C1-C3) amino, et liaison multiple désigne une insaturation (double ou triple liaison) entre 2 atomes de carbone.

Un groupe préféré de composés selon l'invention est constitué par des haloalkylamines, précurseurs de sels de bis-ammonium quaternaire, qui répondent à la formule générale (II) Dans ces composés, Rl, R'1 W, n et Z sont tels que définis ci-dessus.

Dans une famille préférée de ces composés, Z représente un radical alkyle en C13 à C21.

Dans des dérivés préférés, Z représente un groupe-(CH2) 16

Dans un sous-groupe de cette famille, R1 est avantageuse- ment un radical méthyle.

Dans un autre sous-groupe, R1 est un radical méthyle et _ est soit un atome d'hydrogène, soit un radical méthyle, et W est un atome de chlore.

Des composés particulièrement préférés sont choisis parmi le dichlorhydrate du N, N'-diméthyl-N, N'- (5-chloropentyl)- 1,16-hexadécanediamine, ou le dichlorhydrate du N, N'- dimthyl-N,N'-(4-chloropentyl)-1,16-hexadécanediamine.

Un autre groupe préféré de composés selon l'invention est constitué par des précurseurs de thiazolium et répondent à la formule générale (III) dans laquelle Ra/R, R3, et Z sont tels que définis ci- dessus.

Dans un sous-groupe préféré de cette famille, Ra représente un radical RCO-. Des composés particulièrement préférés sont choisis parmi le N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-S-thiobenzoyl-4-méthoxybut-1- ényl]-1, 12-diaminododécane (désigné dans les exemples par TE4c), le N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-S-(p-diéthylaminométhylphényl- carboxy)thio-4-méthoxybut-1-ényl]-1,12-diaminododécane(TE 4f),

le N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-S-(p-morpholino- méthylphénylcarboxy)-thio-4-méthoxybut-1-ényl]-1,12- diaminododécane (TE4g), le N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-S-thiobenzoyl-4- méthoxybut-1-ényl]-1, 16-diaminohexadécane (TE8), le N, N'-diformyl-N, N'-di [1 (2-oxo-4,5-dihydro-1,3- oxathian-4-ylidène) éthyl] l, 12-diaminododécane (TE3) Dans un autre sous-groupe préféré, Ra représente un radical RS-.Descomposésparticulièrementpréférés sont choisis parmi le N,N'-diformyl-N,N'-di[1-méthyl-2-tétrahydrofurfuryl- méthyldithio-4-hydroxybut-1-ényl]-1, 12-diaminododécane (TS3a), le N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-propyl-dithio-4- hydroxybut-1-ényl]-1, 12-diaminododécane (TS3b), le N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-benzyl-dithio-4- hydroxybut-1-ényl]-1, 12-diaminododécane (TS3c), le N, N'-diformyl-N, N'-di [l-méthyl-2- (2-hydroxyéthyl)- dithio-4-hydroxybut-1-ényl]-1,12-diaminododécane(TS3d) le N, N'-diformyl-N, N'-di [l-méthyl-2-propyldithio-4-métho- xybut-1-ényl]-1, 12-diaminododécane (TS4b), le N, N'-diformyl-N, N'-di [l-méthyl-2-propyldithio-éthényl]-, 1,12-diaminododécane (TS6b).

Un autre groupe préféré de composés selon l'invention est constitué aussi par des précurseurs de sels de thiazolium qui répondent à la formule générale (IV)

dans laquelle Ra, R9, R1 et Z sont tels que définis ci- dessus.

Des composés particulièrement préférés sont choisis parmi le 2,17- (N, N'-diformyl-N, N'-diméthyl) dzamino-3,16-S-thio- p-méthoxybenzoyl-6,13-dioxaoctadéca-2, 16-diène (TE9), le 2,17 (N, N'-diformyl-N,N'-dibenzyl)diamino-3, 16-S-thio- p-méthoxybenzoyl-6,13-dioxaoctadéca-2,16-diène (TE10), le 3,18 (N, N'-diformyl-N, N'-diméthyldiamino-4,17-S- thiobenzoyl-eicosa-3,17-diénedioate d'éthyle (TE12), le 3,18- (N, N'-diformyl-N, N'-dibenzyl) diamino-4,17-S- thiobenzoyl-eicosa-3, 17-diènedioate d'éthyle (TE13).

Un autre groupe préféré de composés selon l'invention est constitué encore par des précurseurs de sels de thiazolium qui répondent à la formule générale (V) dans laquelle Ra, R3, R1 et Z sont tels que définis ci- dessus.

Des composés particulièrement préférés sont choisis parmi le 2,15-(N, N'-diformyl-N, N'-diméthyl) diamino-1,16-S-thio- benzoyl-hexadéca-1,15-diène (TE15), le 2,15- (N, N'-diformyl-N, N'-dibenzyl) diamino-1,16-S-thio- benzoyl-hexadéca-1,15-diène (TE16).

Les précurseurs selon l'invention se présentent le cas échéant sous forme de sels. On citera à titre d'exemples les chlorhydrates, les citrates, les tartrates, les maléates ou les lactates.

L'invention vise également les dérivés cyclisés générés à partir des précurseurs de thiazolium définis ci-dessus.

Ces dérivés répondent à la formule générale (VI) dans laquelle . Rb représente R1 ou T, T représentant le groupe de formule . Rd représente R9 ou P, P représentant le groupe de formule Re représente Rs ou U, U représentant le groupe de formule

Rl, R9, R3 et Z étant tels que définis ci- dessus, étant entendu que Rb = T si Rc = R3 et R = R2 ; Rj = P si roc = R3 et Rb = R1 ; et R, = U si Rb = Ri, et Rd = R2- Conformément à l'invention, les précurseurs de thiazolium de formule générale (III) à (IV) définis ci- dessus peuvent être obtenus par un procédé caractérisé en ce qu'il comprend la réaction en milieu basique d'un dérivé de thiazole de formule (VI), comme illustré dans les exemples.

De manière avantageuse, pour obtenir Ra = RCO-, on fait réagir un dérivé de thiazolium de formule (VI) avec un dérivé RCOR', où R est tel que défini ci-dessus et R'est un atome d'halogène, et pour obtenir Ra = RS- on fait réagir lesdits dérivés de thiazolium de formule (VI) avec un dérivé de thiosulfate RS203Na.

La série N-dupliquée des sels de thiazolium est obtenue, de manière générale, en faisant réagir un dérivé de thiazole convenablement substitué avec un dihalogénure d'alkyle à reflux dans un solvant organique.

La série C dupliquée sur le carbone C5 du cycle thiazole, qui comporte un oxygène dans la chaîne Z, est obtenue par réaction d'un dérivé de thiazole de formule générale (VII)

avec un dihalogénure d'alcane, en milieu basique, puis 1'addition de R1X, le milieu réactionnel étant avantageusement porté à reflux dans un solvant organique, notamment alcoolique comme 1'éthanol, pendant une durée suffisante pour obtenir la quaternisation de l'atome d'azote du thiazole par fixation de R1.

L'ouverture du cycle thiazolium obtenu est ensuite effectuée en milieu basique, et par action soit de R-COCl, soit de R-S203Na.

Pour obtenir la série C-dupliquée sur le carbone 5 du cycle thiazole et ne comportant pas d'oxygène dans la chaîne Z, on synthétise tout d'abord un composé de structure 00 00 , 'II aikyl-O'v v CHZ) n v'O-alkyl par réaction d'un acétoacétate d'alkyle avec NaH, dans un solvant organique, à une température de l'ordre de 0°C, puis on alkyle le composé formé avec par exemple un alkyllithium et on ajoute au milieu réactionnel un dihalogénoalcane.

Le composé obtenu est dibromé par addition de brome à une température de l'ordre de 0°C, puis additionné de thioformamide et laissé sous reflux plusieurs jours. Par addition de R1X au mélange réactionnel, soumis ensuite à reflux pendant plusieurs

jours, on obtient un thiazolium dont l'ouverture est ensuite réalisée en milieu basique.

Pour obtenir la série C-dupliquée sur le carbone C4 du cycle thiazole, et ne comportant pas d'oxygène dans la chaîne Z, on fait réagir un composé Z (CO-CH2X) 2 avec CH (=S) NH2, puis on ajoute R1X.

L'invention vise également"un procédé d'obtention des haloalkylamines répondant à la formule générale (II). Ce procédé est caractérisé par l'alkylation d'un aminoalcool de formule par un a, o-dihalogénure d'alkyle X-Z-X, ce qui conduit à un bis-aminoalcool traité par un composé capable de libérer le groupe W.

L'alkylation de l'aminoalcool est réalisée par exemple avec un a,-dichlorure d'alkyle, de formule Cl-Z- Cl, dans l'éthanol, en présence de diisopropyléthylamine, l'aminoalcool étant en large excès par rapport à l'halogénure (d'environ 2,1/1). Le bis-aminoalcool obtenu est ensuite traité par un composé capable de libérer W, qui peut être par exemple du chlorure de thionyle, dans du dichlorométhane, pour obtenir un composé dans lequel W représente Cl, ou par le chlorure d'un acide sulfonique, par exemple le chlorure de tosyle pour obtenir un composé dans lequel W = CH3-C6H4-SO3-.

L'étude de l'activité des produits de l'invention vis-à-vis de parasites, et notamment de

Plasmodium, a montré qu'ils présentent une forte activité in vitro.

Ainsi, les valeurs de CI50 (concentration inhibant 50% du parasite) sont de l'ordre du nM vis-à-vis de P. falciparum.

L'invention vise donc la mise à profit des propriétés des précurseurs de l'invention et des composés cyclisés thiazolium pour l'élaboration de compositions pharmaceutiques.

Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont caractérisées en ce qu'elles renferment une quantité efficace d'au moins un précurseur tel que défini ci- dessus, ou d'au moins un composé cyclisé de thiazolium, en association avec un véhicule pharmaceutique inerte ou d'au moins un composé cyclisé thiazolium.

L'invention vise également l'utilisation d'au moins l'un desdits précurseurs, ou d'au moins l'un desdits composés cyclisés de thiazolium, pour fabriquer des médicaments pour le traitement des maladies infectieuses, en particulier du paludisme ou des babésioses chez l'homme ou l'animal.

Ces compositions renferment le cas échéant des principes actifs d'autres médicaments. On citera notamment leur association avec d'autres antipaludiques (tels que les agents lysosomotropes, l'atovaquone, les antifoliques ou antifoliniques, ou l'artémisinine ou l'un de ses dérivés) pour raison de synergie pharmacologique ou d'évitement de résistance.

On les utilisera également avec avantage en association avec des composés facilitant leur assimilation.

Les compositions pharmaceutiques de l'invention sont administrables sous différentes formes, plus spécialement par voie orale ou injectable ou encore par voie rectale.

Pour l'administration par voie orale, on a recours en particulier à des comprimés, pilules, tablettes, gélules, gouttes.

D'autres formes d'administration comprennent des solutions injectables par voie intra-veineuse, sous- cutanée ou intra-musculaire, élaborées à partir de solutions stériles ou stérilisables. Il peut s'agir également de suspensions ou d'émulsions.

On peut également utiliser des suppositoires pour d'autres formes d'administration.

Les compositions de l'invention sont particulièrement appropriées pour le traitement des maladies infectieuses chez l'homme et l'animal, en particulier du paludisme ou des babésioses.

A titre indicatif, la posologie utilisable chez l'homme correspond aux doses suivantes : ainsi on administre par exemple au patient de 0,02 à 80 mg/kg en une ou plusieurs prises.

L'invention vise encore les réactifs biologiques renfermant comme principes actifs, les précurseurs de thiazolium définis plus haut.

Ces réactifs peuvent être utilisés comme références ou étalons dans des études d'éventuelles activités anti-parasitaires.

D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront dans les exemples qui suivent relatifs à l'obtention de précurseurs de thiazolium et à l'étude de leur activité anti-parasitaire. Dans ces exemples, il sera fait référence aux figures 1 à 8, qui représentent respectivement, -la figure 1, l'activité antipaludique d'un précurseur de thiazolium (désigné par TE4c dans les exemples), et du thiazolium correspondant (T4) en fonction de la concentration en drogue, selon le test de Desjardins, (Desjardins R. E. et al, Antimicrob. Agents Chemother. 1979,16,710-718), -les figures 2 et 3, la pharmacocinétique chez la souris d'un précurseur de thiazolium selon l'invention à faible dose (désigné par TE4c dans les exemples) après administration par voie ip et per os, -la figure 4, une représentation semi- logarithmique de la pharmacocinétique chez la souris de précurseurs et de drogue selon l'invention, après administration par voie ip et per os, -les figures 5A et 5B, la pharmacocinétique d'un précurseur et d'une drogue de l'invention chez la souris après administration par voie ip et per os, -les figures 6 et 7, les pharmacocinétiques chez la souris après administration par voie ip per os, et

-les figures 8A et 8B, la pharmacocinétique de précurseurs de l'invention chez le singe.

Dans les différents schémas donnés dans les exemples, les substituants présentent les significations données ci-dessus, X représente un contre-ion, Me = méthyle, Et = éthyle, Ph ou = C6H5-, DMSO=diméthylsulfoxyde, THF= tétrahydrofuranne, Bu = butyl.

I. SYNTHESE DES PRECURSEURS DE THIAZOLIUM A. Synthèse des prodrogues disulfures (TS) : NaS S02 + RX NaO EtOH,H20 reflux I RS Rd, S2 Rc, Rd Ruz Na0 S CHO T°amb. T TS

Schéma 1 Mode opératoire général : a) Synthèse du thiosulfate d'alkyle (sel de Bunte)

30 mmoles de dérivé halogéné sont dissous dans 15 mL d'éthanol et 5g (30 mmol) de thiosulfate de sodium dans le minimum d'eau sont ajoutés. Le mélange est chauffé à reflux pendant 5 jours. La solution est évaporée à sec et le residu brut obtenu est utilisé sans purification. b) Synthèse de la prodrogue disulfure 2,6 mmoles de drogue thiazolium sont dissous dans 10mL d'eau. 0,6g de NaOH puis 10mL de CHCl3 sont ajoutés et le mélange est agité vigoureusement pendant 10mn. On ajoute ensuite goutte à goutte 7,8 mmoles de thiosulfate d'alkyle obtenu précédemment et le mélange est agité à température ambiante pendant 2 heures. La phase organique est séparée et lavée par une solution 5% HC1. Elle est ensuite neutralisée par une solution de NaHC03, séchée par du Na, S04 et concentrée. L'huile obtenue est purifiée sur gel de silice en éluant par un mélange CH2Cl2/MeOH 1. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1- méthyl-2-tétrahydro-furfurylméthyldithio-4- hydroxybut-1-ényl]-1,12-diaminododécane (TS3a) a) Préparation du thiosulfate de tétrahydrofurfurylméthyl Il est réalisé selon le §a du mode opératoire général ci- dessus, à partir du chlorure de tétrahydrofurfuryle.

RMN 1H (250 MHz, D2O) : # 4,04 (m, 1H, CH2-CH-O), 3,61 (m, 2H, -CH2-0), 3,00 (m, 2H, S-CH2-CH), 1,47-l, 88 (m, 4H,-CH-CH2-CH,-) b) Synthèse de TS3a

Selon le §b du mode opératoire général ci-dessus, à partir de T3 (voir sa préparation plus loin) et du sel de Bunte obtenu précédemment, on obtient une huile jaunâtre.

RMN 1H (250 MHz, CDC13) 5 7,88-7,99 (2s, 2H, CHO), 3,95 (m, 2H, O-CH2-CH2), 3,7 (m, 8H,-CH2-OH+CH-OCH2-CH2), 3,32 (m, 4H, S-CH2-), 2,8 (m, 8H, N-CH2-+=C-CH2), 1,64-1,94 (m, 18H, -N-CH2-CH2-+-CH-CH2-CH2-+CH3-C=), 1,26 (m, 16H, (CH2)8).

2. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1- méthyl-2-propyl-dithio-4-hydroxybut-1-ényl]- 1,12-diaminododécane(TS3b) a) Préparation du thiosulfate de propyle Il est réalisé selon le §a du mode opératoire général ci- dessus, à partir du bromure de propyle.

RMN 1H (250 MHz, D2O) : # 0,74 (t, 2H,-CH3), 1,51 (m, 2H, (t,2H,S-CH2-CH2-)-CH2CH2CH3),2,86 b) Préparation de TS3b Selon le §b du mode opératoire général ci-dessus, à partir de T3 (voir sa préparation plus loin) et du sel de Bunte obtenu précédemment, on obtient une huile jaunâtre.

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7,91-7,99 (2s, 2H, CHO), 3,8 (m, 4H,-CH2-OH), 3,39 (m, 4H, S-CH2-), 2,91 (t, 4H, =C-CH2), 2,62 (t, 4H, N-CH2-), 2,00 (d, 6H, CH3-C=), 1,64 (m, 8H,-N-CH2- CH2-+-S-CH2-CH2-), 1, 26 (m, 16H,- (CH2) e-), 0,97 (t, 6H,-S-CH2- CH2-CH3).

3. Synthèse de N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl- 2-benzyl-dithio-4-hydroxybut-1-ényl]-1,12- diaminododécane (TS3c) a) Préparation du thiosulfate de benzyle Il est réalisé selon le § a du mode opératoire général ci-dessus, à partir du bromure de benzyle.

RMN IH (250 MHz, D2O) : # 4, 13 (s, 2H, -CH2-), 7,23 (m, 5H,- ArH). b) Préparation de TS3c Selon le § b du mode opératoire général ci-dessus, à partir de T3 (voir sa préparation plus loin) et du sel de Bunte obtenu précédemment, on obtient une huile jaunatre.

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7,91-7,99 (2s, 2H, CHO), 3,89 (s, 4H, S-CH2-Ph), 3,73 (t, 4H, CH2-OH), 3,40 (t, 4H, N-CH2-), 2,75 (t, 4H, =C-CH2), 1,96 (s, 6H, CH3-C=), l, 52 (m, 4H,-N-CH2- (m,16H,-(CH2)8-).CH2-),1,25 4 Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl- 2-(2-hydroxyéthyl) dithio-4-hydroxybut-1- ényl]-1,12-diaminododécane(TS3d) a) Préparation du thiosulfate de 2- hydroxyéthyle Il est réalisé selon le §a du mode opératoire général ci- dessus, à partir du 2-chloroéthanol.

RMN 1H (250 MHz, D2O) : # 3, 32 (t, 2H, S-CH2), 3,98 (t, 2H,- CH2-OH) b) Préparation de TS3d Selon le §b du mode opératoire général ci-dessus, à partir de T3 (voir sa préparation plus loin) et du sel de Bunte obtenu précédemment, on obtient une huile.

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7, 91-7,87 (2s, 2H, CHO), 4,61 (m, 4H, -S-CH2-CH2-OH), 3,75 (m, 4H, =C-CH2-CH2-OH), 3,33 (m, 4H, S-CH2-), 2,87 (t, 4H, =C-CH2), 2,78 (t, 4H, N-CH2-), 1,95 (d, 6H, CH3-C=), 1,45 (m, 4H, -N-CH2-CH2-), 1,20 (m, 16H,- (CH2)8-).

5. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl- 2-propyldi'thio-4-méthoxybut-1-ényl]-1,12- diaminododécane (TS4b) Selon le § b du mode opératoire général ci-dessus, à partir de T4 (voir sa préparation plus loin) et du thiosulfate de propyle, on obtient une huile jaunâtre.

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7, 91 et 7,99 (2s, 2H, CHO), 3,8 (m, 4H,-CH2-OH), 3,39 (m, 4H, S-CH2-), 2,91 (t, 4H, =C-CH2), 2,62 (t, 4H, N-CH2-), 2,00 (s, 6H, CH3-C=), 1,64 (m, 9H, -N-CH2-CH2- + -S-CH2-CH2-), 1,26 (m, 16H,- (CH2) e- ), 0, 97 (t, 6H, -S-CH2-CH2-CH3).

6. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl- 2-propyldithio-ethényl]-1, 12-diaminododécane (TS6b) Selon le § b du mode opératoire général ci-dessus, à partir de T6 (voir sa préparation plus loin) et du thiosulfate de propyle, on obtient une huile jaunâtre.

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 8, 02 (s, 2H, CHO), 6,03 (s, 2H, =C-H), 3,47 (t, 4H, N-CH2-), 2,69 (t, 4H, S-CH2-), 1,95 (s, 6H, CH3-C=), 1,72 (m, 4H, -S-CH2-CH2-), 1,59 (m, 4H, -N-CH2-CH2-), 1, 26 (m, 16H,- (CH2) 8-), 0,99 (t, 6H,- S-CH2-CH2-CH3).

composés R3 R Rdt % CI50 (nM) 601.0TS3a-CH2-# -CH2-CH2-OH TS3b"-C3H763f3 -CH2-C6H5581,6TS3c" <BR> <BR> <BR> <BR> TS3d'-CH2-CH2-OH 30 2, 2<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> <BR> TS4b-CH2-CH2-OCH3-C3H7 60 3, 5 -C3H7343.1TS6bH Tableau 1 B. Synthèse des prodrogues thioesters (TE) : R Rd Rc wRd 1) NaOH, H20, T°amb. 15mn I S N-Rb I +'g N-Rb SX, RCOCI, T°amb. 3h RC CHO R-C CHO 0 T TE

Schéma 2 Mode opératoire général : 3,15 mmoles du sel de thiazolium sont mis en suspension.. dans 10mL d'eau et 0,75g (6 équivalents) de NaOH sont' rajoutés. La solution obtenue est laissée sous agitation. magnétique pendant 15 min. Ensuite, 9,6 mmoles (3 équivalents) de chlorure d'acide en solution dans 20 mL

de CHC13 sont ajoutées goutte à goutte et le mélange réactionnel est agité à température qambiante pendant 3 heures. La phase organique est séparée, lavée avec de 1'eau saturée en NaCl puis séchée sur. MgS04 et concentrée à l'évaporateur. Le résidu obtenu es. t : purifié sur gel de silice (éluant CH2Cl2/MeOH : 95/5).

1. Synthèse des dérivés thioesters de la série N dupliquée (composés TE4a-j, TE3 et TE8) : composés R n Rdt % CI50 (nM) TE4a Me-12 69 14 TE4b t-Bu-12 72 12 TE4c C6H5-12 70 2,0 TE4d (-(MeO) C6H4-12-65 3,4 TE4e o N (CH2) 20-C6H4-12 84 6,4 TE4f/-(Et2N-CH2)-C6H4-12(Et2N-CH2)-C6H4-12 71 2,3 TE4g o N-cH2-c6H4-12 ^ 80 2,3 TE4j 4- (MeOCO)- C6H4-12 76 2,7 TE8 C6H5-16 70 0,6 0 TE3 C-S N- (CH2) 6- 20 3 ° H- J2

Tableau 2 1.1. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1- méthyl-2-S-thiobenzoyl-4-méthoxybut-1-ényl]- 1,12-diaminododécane (TE4c) Selon le mode opératoire décrit ci-dessus, à partir de T4 et en utilisant le chlorure de benzoyle, on obtient une poudre blanche (Rdt = 70%) RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7,90-7,36 (m, 12H, CHO + ArH), 3,52-3,29 (m, 8H, CH30CH2-, N-CH2-), 3,30 (s, 6H, CH30), 2,75 (t, 4H, CH3OCH2CH2-), 2,06 (s, 6H, CH3-C=), 1,57-1,09 (m, 2 OH,- (CH2) lo-).

MS ES+ : m/e 725 ( [M+H]+, 100).

1.2. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1- méthyl-2-S-(p-diéthylaminométhylphénylcarboxy)- thio-4-méthoxybut-1-ényl]-1,12-diaminododécane (TE4f) a) Synthèse de l'acide a-diéthylamino- paratoluique lg (1 équivalent) d'acide a-chloroparatoluique et 1,22mL (2 équivalents) de diéthylamine sont mis en solution dans 30mL d'acétonitrile. Le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 48h. Le solvant est évaporé sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (CH2Cl2/MeOH 60/40 puis MeOH pur). Le produit est obtenu sous forme d'une poudre blanche après précipitation dans l'hexane. (Rdt = 63%).

RMN 1H (250 MHz, DMSOD6) : # 7, 84 et 7.29 (2d, 2x2H, ArH), 3,50 (s, 2H, N-CH2-Ar), 2,40 (q, 4H, N (CH2-CH3) 2), 0, 9 (t, 6H, N (CH2-CH) 2).

MS ES+ : m/e 208 ([M+H] +, 100). b) Synthèse du chlorure de l'acide a- diéthylaminoparatoluique 0,3g (1,45mmol) d'acide a-diéthylaminoparatoluique sont placés dans 10mL de CHCl3 et 0,32mL de SOC12 sont rajoutés. La solution est portée au reflux pendant 12h.

Le solvant est évaporé sous vide et le résidu est recristallisé dans de l'éther éthylique. On obtient 323mg de produit, sous forme de son chlorhydrate (Rdt = 85%).

MS ES+ : m/e 226 ([M+H] +, 100), 228 ([M+H] +, 30). c) Synthèse du TE4f (sous la forme de chlorhydrate) 0,7g (0,95mmol) de T4 sont mis en suspension dans 10mL d'eau et 0,23g (5,71mmol) de NaOH sont rajoutés. La solution obtenue est laissée sous agitation pendant 15 min. Ensuite, 0,75g (2,86mmol) du chlorure de l'acide a- diéthylaminoparatoluique en solution dans 20 mL de CHCl3 et 0,4mL (2,86mmol) de triéthylamine sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 4h. La phase organique est séparée, lavée à 1'eau et séchée sur MgS04 et concentrée au rotavapor. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice (CH2Cl2/MeOH 95/5 puis MeOH pur). Le chlorhydrate est obtenu par barbotage de HCl gazeux dans une solution de la base dans

de l'éther à 0°C pendant 3h. Ce sel est obtenu sous forme de précipité mousseux. (Rendement = 54%).

RMN 1H de la base libre : (250 MHz, CDCl3) : # 8, 00-7,48 (m, 10H, CHO+ ArH), 3,62-3,37 (m, 12H, CH3OCH2-CH2-+ N- CH2-Ar), 3,35 (s, 6H, CH30), 2,80 (t, 4H, N-CH2-), 2,50 (q, 8H, N (CH2-CH3) 2), 2,15 (s, 6H, CH3-C=), 1,50-1,12 (m, 20H,- (CH2) 10-), 1,08 (t, 12H, N (CH2-CH3) 2).

MS ES+ : m/e 448,5 ( [M+2H] +, 100).

1.3. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1- méthyl-2-S-(p-morpholino-méthylphénylcarboxy)- thio-4-méthoxybut-1-ényl]-1,12-diaminododécane (TE4g) a) Synthèse de 1'acide a- morpholinoparatoluique 4,04g (1 équivalent) d'acide a-chloroparatoluique et 4,13g (2 équivalents) de morpholine sont mis en solution dans 150 mL de toluène. Le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 24h. Le chorhydrate de la morpholine est éliminé par filtration à chaud sur buchner. Le produit cristallise à température ambiante dans le filtrat. Après filtration et séchage, 3,63g de produit sont obtenus sous forme d'une poudre blanche (Rdt = 70%).

RMN 1H (250 MHz, DMSOD6) : # 7,84 et 7.37 (2d, 2x2H, ArH), 3,53 (t, 4H, CH2OCH2), 3,48 (s, 2H, Ar-CH2-), 2,31 (t, 4H, CH2-N-CH2-).

MS m/e222([M+H]+,100).:

b) Synthèse du chlorure de 1'acide a- morpholinoparatoluique 2,33g d'acide a-morpholinoparatoluique sont placés dans 30mL de CH2Cl2 et 3,76g de SOC12 sont rajoutés. La solution pas très homogène est portée au reflux pendant 48h. Le précipité blanc obtenu est filtré, lavé au CH2C12 et séché. On obtient 2,65g de produit (Rdt = 70%).

RMN 1H (250 MHz, DMSOD6) : å 7,97 et 7.78 (2d, 2x2H, ArH), 4,40 (s, 2H, Ar-CH2-), 3,86 (m, 4H, CH2OCH2-), 3,18 (m, 4H, CH2-N-CH2-)- MS ES+ : m/e 240 ([M+H] +, 100), 242 ([M+H]+, 30). c) Synthèse du TE4g (sous la forme du sel de dioxalate TE4go ou de ditartrate TE4gt) 1,08g de T4 sont mis en suspension dans 10mL d'eau et 0,37g (6 équivalents) de NaOH sont rajoutés. La solution obtenue est laissée sous agitation pendant 15 min.

Ensuite, 1,15g (3 équivalents) du chlorhydrate du chlorure de l'acide a-morpholinoparatoluique en solution dans 20 mL de CHC13 et 0,42g de triéthylamine sont ajoutés goutte à goutte. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 3h. La phase organique est extraite puis séchée sur MgSO4 et concentrée au rotavapor. Le résidu obtenu est repris dans de l'éther et de 1'eau. La phase organique est extraite, lavée 2 fois à l'eau puis séchée sur MgS04 et concentrée. L'huile obtenue est reprise dans un minimum d'éther et est ajoutée à une solution éthérée contenant 0,41g d'acide oxalique. Un précipité blanc se forme immédiatement (TE4go : Rendement = 80%).

Un autre échantillon d'huile (7,7 g) est mis en solution avec une solution aqueuse (1N) contenant 2 équivalents d'acide tartrique (+). La solution est évaporée à sec. Le résidu est dissous dans de l'éthanol, la solution est à nouveau évaporée. On obtient un solide mousseux (TE4gt, 82-85°C).Pf: Caractérisation de la base libre : RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7,90-7,36 (m, 10H, CHO + ArH), 3,69 (t, 8H, CH2OCH2-), 3,52-3,32 (m, 12H, CH3OCH2CH2- + N-CH2-Ar), 3,30 (s, 6H, CH30), 2,77 (t, 4H, N-CH2-), 2,42 (t, 8H,-CH,-N-CH2-), 2,09 (s, 6H, CH3-C=), 1,57-1,09 (m, 2 OH,- (CH2) lo-).

MS ES+ : m/e 462 ( [M+2H] +, 100), m/e 923 ( [M+H] +, 10).

1.4. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-S-(p- phtaloyl)-thio-4-méthoxybut-1-ényl]-1,12-diaminododécane (TE4j) Selon le mode opératoire décrit ci-dessus, à partir de T4 et en utilisant le chlorure de p-méthoxycarbonylbenzoyle, on obtient une poudre blanche (Rdt = 76%).

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7,90-7,36 (m, 10H, CHO + ArH), 3,97 (s, 6H, CH30CO), 3,57-3,35 (m, 8H, CH3OCH2CH2-), 3,30 (s, 6H, CH30), 2,82 (t, 4H, N-CH2-), 2,13 (s, 6H, CH3-C=), 1,58-1,17 (m, 20H,- (CH2) 10-).

MS ES+ : m/e 421 ( [M+2H] ++, 20). 841 ( [M+H] +, 100).

1.5. Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1-méthyl-2-S- thiobenzoyl-4-méthoxybut-1-ényl]-1, 1 6-diaminohexadécane (TE8) Selon le mode opératoire général décrit ci-dessus, à partir du diiodure de 1,16-hexadécaméthylène bis [4- méthyl-5-(2-méthoxyétnyl) thiazolium], T8, et en utilisant le chlorure de benzoyle, on obtient une huile jaunâtre (Rdt = 72%).

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 7, 90-7,36 (m, 12H, CHO + ArH), 3,50-3,32 (m, 8H, CH30CH2-, N-CH2), 3,30 (s, 6H, CH30), 2,75 (t, 4H, CH30CH2CH2-), 2,06 (s, 6H, CH3-C=), 1,57-1,09 (m, 28H,-(CH2) 10-).

MS m/e781([M+H]+,100).: 1.6Synthèse du N, N'-diformyl-N, N'-di [1 (2-oxo-4,5-dihydro-1,3- oxathian-4-ylidène) éthyl] 1, 12-diaminododécane (TE3) 2,8 mmoles (2g) du sel de thiazolium T3 [dibromure de 1, 12- dodécaméthylène bis [4-méthyl-5-(2-hydroxyéthyl) thiazolium] sont dissous dans 4,4 mL d'éthanol et 12,2 mmol (4,5 mL, 4 équivalents) de NaOH (10%) sont rajoutés.

La solution obtenue est laissée sous agitation magnétique pendant 15 min. Ensuite, 6 mL (1,12 g, 2 équivalents) de 4-nitrophénylchloroformate en solution dans de l'acétate d'éthyle sont ajoutés goutte à goutte et le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 2 heure. On ajoute de l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée successivement avec de l'eau, une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, de l'eau, puis séchée sur MgSO4 et concentrée à l'évaporateur. L'huile jaune obtenue est purifiée sur gel de silice (éluant CH, Cl-,, puis en ajoutant 1% de MeOH, puis 2%). Rendement : 20%.

RMN 1H (250 MHz, CDC13) 6 8,2 et 7,88 (2s, 2H, CHO) ; 4,43-4,40 (t, 4H, -CH2OCO-) ; 3, 33-3,27 (t, N-CH2) ; 2,79-2,77 (t, 4H, CH2-CH2=) ; l, 88 (s, 6H, CH3 ; 1,46-l, 13 (m, 20H, (CH2) 1o).

MS m/e541([M+H]+,100).: 2. Synthèse des thioesters de la série C dupliquée 2.1. Composés C5 dupliqués comportant un 0 dans la chaîne alkyle (TE9 et TE10) : Ces prodrogues sont synthétisées selon le mode opératoire général décrit précédemment (schéma 2).

A partir du diiodure de 3,10-dioxadodécaméthylènebis [5- (1, 4-diméthyl)thiazolium], T9, et du chlorure de p- méthoxybenzoyle, on obtient le 2,17- (N, N'-diformyl-N, N'- diméthyl) diamino-3,16-S-thio-p-méthoxybenzoyl-6,13- dioxaoctadéca-2,16-diène, TE9, sous forme d'une huile incolore. Rendement : 65 %.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : # 7,93-6,87 (m, 10H, CHO + ArH), 3,58 (s, 6H, 2CH3), 3,55 (t, 4H, 2CH2) , 3,37 (t, 4H, 2CH2), 2,89 (s, 6H, 2CH3), 2,77 (t, 4H, 2CH2), 2,03 (s, 6H, 2CH3), 1,52- 1,30 (m, 8H, 4CH2).

A partir du dibromure de 3,10-dioxadodécaméthylènebis [5- (l-benzyl, 4-méthyl)-thiazolium], T10, et du chlorure de p-méthoxybenzoyle, on obtient le 2,17- (N, N'-diformyl- N, N'-dibenzyl) diamino-3,16-S-thio-p-méthoxybenzoyl-6,13- dioxaoctadéca-2, 16-diène, TE10, sous forme d'une huile incolore. Rendement : 70 %.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : # 8,06-6,92 (m, 20H, CHO + ArH), 4,68 (s, 4H, 2 CH2), 3,91 (s, 6H, 2 CH3), 3,50 (t, 4H, 2CH2), 3,38 (t, 4H, 2CH2), 2,75 (t, 4H, 2CH2), 2,07 (s, 6H, 2CH3), 1,56-1, 31 (m, 8H, 4CH2).

composes R1 CIso (nM) TE9 CH3 260 TE10 C6H5-CH2 12 Tableau 3 2.2. Composés C5 dupliqués ne comportant pas d'O dans la chaîne alkyle (TE12 et TE13) : Ces prodrogues sont synthétisées selon le mode opératoire général décrit précédemment (schéma 2).

A partir du diiodure de dodécaméthylènebis [5- (l-méthyl-4- éthoxycarbonylétnyl)-thiazolium], T12, on obtient le 3,18- (N, N'-diformyl-N, N'-diméthyl) diamino-4,17-S- thiobenzoyleicosa-3, 17-diénedioate d'éthyle TE12.

Huile incolore. Rendement 70%.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : 6 7,94-7,39 (m, 12H, CHO + ArH), 4,14 (q, 4H, 2 OCH2-), 3,45 (s, 4H, 2 CH2), 2,88 (s, 6H, 2 CH3), 2,44 (t, 4H, 2CH2), 1,27-1,19 (m, 26H-(CH2) 1o+ 2 CH3).

A partir du dibromure de dodécaméthylènebis [5- (l-benzyl- 4-éthoxycarbonylétnyl)-thiazolium], T13, on obtient le 3,18- (N, N'-diformyl-N, N'-dibenzyl) diamino-4,17-S- thiobenzoyleicosa-3, 17-diènedioate d'éthyle TE13.

Huile incolore. Rendement 64%.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : # 8, 24-7,26 (m, 22H, CHO + ArH), 4,70 (s, 4H, 2CH2-Ar), 4,23 (q, 4H, 2OCH2-), 3, 44 (s, 4H, 2CHz), 2,51 (t, 4H, 2CH2), 1,52-1,29 (m, 26H, -(CH2)10+ 2CH3). composés RI CIso (nM) TE12 CH3-16 TE13 C6H5-CH2-650 Tableau 4 2.3. Composés C4 dupliqués ne comportant pas d'O dans la chaîne alkyle.

Ces prodrogues sont synthétisées selon le mode opératoire général décrit précédemment (schéma 2).

A partir du diiodure de dodécaméthylènebis [4-(1-méthyl)- thiazolium], T15, on obtient le 2,15- (N, N'-diformyl-N, N'- diméthyl) diamino-1, 16-5-thiobenzoyl-hexadéca-1, 15-diène, TE15.

Huile incolore. Rendement 70%.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : 6 7,94-7,39 (m, 12H, CHO + ArH), 5,7 (2H, =CH), 2,88 (s, 6H, 2 N-CH3), 2,48 (t, 4H, 2 =C- (m,2OH,-(CH2)10).CH2),1,27-1,19 A partir du dibromure dedodécaméthylènebis[4-(l-benzyl)- thiazolium], T16, on obtient le 2,15- (N, N'-diformyl-N, N'- dibenzyl) diamino-1, 16-S-thiobenzoyl-hexadéca-1, 15-diène, TE16.

Huile incolore. Rendement 64%.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : 6 8,24-7,56 (m, 22H, CHO + ArH), 5,7 (2H, =CH), 4,37 (s, 4H, 2CH2-Ar), 2,51 (t, 4H, 2 =C- CH2), 1,52-1,29 (m, 20H).

composés RI CI50 (nM) TE15 CH3-7 nM TE16 nM12 Tableau 5 II. SYNTHESE DES SELS DE THIAZOLIUM A. Synthèse des composés de la série N dupliquée (composés T3, T4, T6 et T8) : KI/acetone P205. HPO3 HO- (CH-OH Br- (CH2) n-OH reflux Ki, 100-C R3 R2 R3 R2 R2 R3 i acetonitrile, \ + + s N : + I- (CH2) n-I reflux, 3 joufs s I N* (CH2) n N s- W T3, T4, T6, T8, T14

Schéma 3 Mode opératoire général de synthèse des dihalogénures de α,#-polyméthylène bis thiazolium : Le thiazole convenablement substitué (11,5 mmol) est dissous dans 30mL d'acétonitrile. 3,8 mmol du diiodure

(ou dibromure) d'alkyle sont ajoutés et le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 3 jours. La solution est concentrée à l'évaporateur rotatif et le résidu huileux obtenu est repris dans de 1'eau et de l'éther. La phase aqueuse est lavée à l'éther puis concentrée sous pression réduite. Le produit est ensuite cristallisé dans l'isopropanol.

Le 1,12-diiodododécane est synthétisé de la façon suivante : On mélange 10,22g (1 équivalent) de 1,12-dibromododécane avec 14,26g (3 équivalents) dtiodure de sodium dans 150 mL d'acétone. Après 15 minutes d'agitation à température ambiante, la solution est portée au reflux pendant 3 heures.

L'acétone est ensuite évaporée au rotavapor, le résidu est repris dans de l'éther éthylique et de 1'eau et le produit est extrait trois fois à l'éther. Les phases étherées sont regroupées et sont séchées sur sulfate de magnésium. Le solide blanc obtenu est ensuite recristallisé dans le méthanol (Pf 42-43°C). Rendement= 95%.

Le 1,16-diiodohexadécane est obtenu à partir de 1'hexadécane-1,16-diol, par addition de 5g de ce diol et 19g d'iodure de potassium à une solution de 2,5g d'anhydride phosphorique et 5,2mL d'acide phosphorique 85%. Le mélange est chauffé à 100°C pendant 5h. Une huile dense se forme, et le mélange est versé dans 50mL d'eau.

La phase organique est séparée, et la phase aqueuse extraite à l'éther. Les phases organiques sont décolorées par agitation avec 50mL d'une solution de thiosulfate de sodium 10%. L'éther est évaporé. L'huile obtenue est cristallisée dans le méthanol (Pf= 52°C). Rendement : 82%.

1-Synthèse du dibromure de 1,12-dodécaméthylène bis [4- méthyl-5- (2-hydroxyéthyl) thiazolium] (T3) Selon le mode opératoire décrit ci-dessus, à partir du 4- méthyl-5-[2-hydroxyéthyl][2-hydroxyéthyl] thiazole et du 1,12- dibromododécane, on obtient une poudre blanche hygroscopique (Rdt = 75%) RMN 1H (250 MHz, DMSO D6) : # 10, 08 (s, 2H, S-CH=), 4,45 (t, 4H, +N-CH2-), 3,62 (t, 4H, HOCH2CH2-), 3,02 (t, 4H, HOCH2CH2-), 2,50 (s, 6H, CH3-C=), 1,77 (m, 4H, +N-CH2CH2-), 1,60-1,25 (m, 16H, -(CH2)8-).

MS ES+ : m/e 227 (M++, 100), m/e 533-535 (M++Br-, 10) 2-Synthèse du diiodure de 1,12-dodécaméthylène bis [4- méthyl-5-(2-méthoxyéthyl) thiazolium] (T4) Selon le mode opératoire général décrit ci-dessus, à partir du 4-méthyl-5- (2-méthoxyéthyl) thiazole et du 1,12-diiodododécane, on obtient une poudre blanche hygroscopique (Rdt = 70%) RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 10, 92 (s, 2H, S-CH=), 4,66 (t, 4H, +N-CH2-), 3,60 (t, 4H, CH3OCH2CH2-), 3,35 (s, 6H, CH30), 3,07 (t, 4H, CH3OCH2CH2-), 2,52 (s, 6H, CH3-C=), 1,92 (m, 4H, +N-CH2CH2-), 1,57-1,25 (m, 16H, -(CH2)8-).

MS ES+ : m/e 241 (M++, 100), m/e 609 (MI-, 5) Le 4-méthyl-5- [2-méthoxyéthyl] thiazole est synthétisé selon le procédé ci-dessous : 10,20mL de 4-méthyl-5- [2-hydroxyéthyl] thiazole sont dissous dans 180 mL de DMSO anhydre et 19g de potasse en poudre sont ajoutés. Après 5 mn d'agitation, 5,30mL d'iodure de méthyle sont introduits. Le mélange réactionnel est agité pendant 30 mn à température ambiante sous atmosphère inerte. A l'issue de la réaction (suivie par CCM), le mélange est versé dans 100 mL d'eau

et on extrait 3 fois à l'éther. La phase organique est ensuite lavée à 1'eau, puis à l'eau saturée en NaCl et enfin, séchée sur sulfate de sodium. Le produit obtenu est purifié sur gel de silice en étulant avec un mélange AcOEt/hexane (1/3). On obtient une huile jaune (Rdt = 60%) RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 2,39 (s, 3H, CH3C=}, 3,00 (t, 2H,-CH2C=), 3,36 (s, 3H, CH30), 3,55 (t, 2H, O-CH2-), 8,56 (s, 1H, S-CH=).

3-Synthèse du diiodure de 1, 12-dodécaméthylènebis (4- méthylthiazolium) (T6) Selon le mode opératoire général décrit ci-dessus, à partir du 4-méthylthiazole et du 1,12-diiodododécane, on obtient une poudre blanche (Rdt = 50%) RMN 1H (250 MHz, DMSO D6) 5 10,11 (s, 2H, S-CH=), 8,02 (s, 2H, S-CH=), 4,42 (t, 4H, +N-CH2-), 2,55 (s, 6H, CH3- C=), 1,80 (m, 4H, +N-CHCH2-), 1,25 (m, 16H, -(CH2)8-).

MS ES+ : m/e 183 (M+t, 100), m/e 493 (M++I-, 5) 4-Synthèse du diiodure de 1,16-hexadécaméthylènebis [4- méthyl-5-(2-méthoxyétnyl)thiazolium](T8) Selon le mode opératoire général décrit ci-dessus, à partir du 4-méthyl-5- [2-méthoxyéthyl] thiazole et du 1, 16-diiodohexadécane. on obtient une poudre blanche (Rdt = 80%). Pf : 210°C.

RMN 1H (250 MHz, CDCl3) : # 10, 92 (s, 2H, S-CH=), 4,66 (t, 4H, +N-CH2-), 3,60 (t, 4H, CH3OCH2CH2-), 3,35 (s, 6H, CH30), 3,07 (t, 4H, CH3OCH2CH2-), 2,52 (s, 6H, CH3-C=), 1,92 (m, 4H, (m,24H,-(CH2)8-).1,57-1,25 MS ES+ : m/e 269 (M++, 100), m/e 665 (M++I-, 10)

composes R3 n X CI50 (mM) T3-CH2-CH2-OH 12 Br 2, 25 ""0,65T4-CH2-CH2-OCH3 <BR> <BR> <BR> T6 H"I 3<BR> <BR> <BR> <BR> <BR> T8-CH2-CH2-OCH3 16"l, 1 Tableau 6 B. Synthèse des composés de la série C dupliquée (T9, T10, T12 et T13) : 1-Synthèse des composés dupliqués sur le carbone C5 du cycle thiazole.

1-1-Synthèse des composés comportant un O dans la chaîne alkyle (T9, T10) : OH R2\_ 0- (CH2) n"0 R2 DMSO, KOH /+-CH" am. mn N.,S W RlX, méthanol absolu reflux, 7 jours r z, 2X R2' (CHz) ri R +N s s N-Rl T9, T10

Schéma 4 Mode opératoire général de synthèse des diiodures de 3, 10-dioxadodécaméthylènebis [5- (l-alkyl-4- méthyl) thiazolium] : T9, T10) (Schéma 4).

lève étape : Dissoudre le 4-méthyl-5- hydroxyéthylthiazole (20,9 mmol) dans du DMSO anhydre (50 ml). Ajouter 1'hydroxyde de potassium (83,6 mmol) et laisser agiter pendant lOmn. Ajouter le dérivé diiodé (6,9 mmol) et laisser agiter à température ambiante pendant 30mn. Ajouter de 1'eau et extraire 3 fois à l'éther. Laver la phase éthérée avec de l'eau, la sécher sur sulfate de sodium. Purifier par chromatographie sur gel de silice en éluant avec AcOEt-Hexane (1-3).

2sème étape : Alkylation du bis-thiazole : Dissoudre le bis-thiazole (1 mmol) dans de l'éthanol absolu (40 ml). Ajouter le dérivé halogéné souhaité (2 mmol) et chauffer le mélange sous reflux pendant environ une semaine. Evaporer l'éthanol et recristalliser dans un mélange iPrOH- (iPr) 20. a) Synthèse du 1,6-bis [2- (4-méthylthiazol-5- yl) éthoxyhexane : Selon le mode opératoire général 1ère étape) décrit ci- dessus, à partir du 4-méthyl-5-hydroxyéthylthiazole et du 1,6-diiodohexane, on obtient une huile incolore (Rdt = 60%) RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 8,51 (s, 2H, CH), 3,54 (t, 4H,-CH2-), 3,39 (t, 4H,-CH2), 2,96 (t, 4H,-CH2-), 2,32 (s, 6H, CH3), 1,57-1,28 (m, 8H,-CH2-CH2-). b) Synthèse du diiodure de 3,10- dioxadodécaméthylènebis [5-(1, 4-diméthyl) thiazolium] (T9) Selon le mode opératoire général (2ème étape) décrit ci- dessus, à partir du produit précédemment obtenu et de

l'iodure de méthyle, on obtient un solide blanc hygroscopique (Rdt = 60%) RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 10,99 (s, 2H, S-CH=), 4,33 (s, 6H, 2N+CH3), 3,71 (t, 4H, 2CH2-0), 3,52 (t, 4H, 20- CH2), 3,03 (t, 4H, 2CH2), 2,51 (s, 6H, 2 =C-CH3), 1,65- 1,47 (m, 8H, 4-CH2-). c) Synthèse du dibromure de 3,10- dioxadodécaméthylènebis [5- (l-benzyl, 4-méthyl)-thiazolium] (T10) Selon le mode opératoire général (2ème étape) décrit ci- dessus, à partir du produit obtenu dans la les étape et du bromure de benzyle, on obtient un solide blanc hygroscopique (Rdt = 74%) RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 11,45 (s, 2H, S-CH=), 7,36- 7,28 (m, 10H, 2ArH), 3,65 (t, 4H, 2CH2-0), 3,44 (t, 4H, 20-CH2), 3,03 (t, 4H, 2CH2), 2,51 (s, 6H, 2 =C-CH3) 1,57-1,34 (m, 8H, 4-CH2-). composés R1 X C150 (nM) T9 CH3 I 70 T10 C6H5-CH2-Br 2,5 Tableau 7 1-2-Composés ne comportant pas d'0 dans la chaîne alkyle (T12, T13) Cette synthèse se fait en 4 étapes selon le schéma 5. Na+ O 0 1) NaH, THF, 0°C, 10mn O O i L li+HZC \OCZHg J H3C'/OC2H5 2) BuLi, O*C, lomn Br- (CH2) n- Br THF, T° amb., 1h 0°C, 30mn 0°C, 30mn p O O O II [I O O--O O II l 2) T° amb. 1h C H50% --, CH2) n.. ^, i \OC H CzH50'v -WCH2) n j . , % 'OCZHg 2 Br Br H =S, (CH3) 2CO H2N reflux, 1 semaine Rl. \+ N ^S RX, ethanol O N ^S , reflux,reftux. 1semame CHsCCHn/z-,. 2X- C2HsO (CH2) n/2- 2 ' (CH2) n/z 2 CZHSO- T12, T13

Schéma 5 a) Synthèse du 3,18-dioxoeicosanedioate d'éthyle : Dans un bicol sous argon, mettre en suspension NaH (43,7 mmol) dans du THF anhydre (100 ml). Refroidir le milieu réactionnel dans un bain de glace et ajouter goutte à goutte l'acétoacétate d'éthyle (39,7 mmol).

Laisser agiter pendant lOmn à 0°C. Ajouter goutte à goutte du n-BuLi (1,56 M ; 43,7 mmol). Laisser agiter lOmn supplémentaires à température ambiante avant de passer à l'alkylation.

A la solution précédente, on ajoute goutte à goutte le dibromododécane (15,9 mmol) en solution dans 20 ml de THF anhydre. On laisse revenir le milieu réactionnel à température ambiante et on continue l'agitation pendant lh. On ajoute de 1'eau et on extrait à l'éther (3 fois).

La phase organique est lavée avec une solution NaCl saturée, séchée sur sulfate de sodium, filtrée et

évaporée à sec. On purifie le produit par chromatographie sur gel de silice en éluant avec de l'AcOEt-Hexane (1-1).

On obtient solide blanc (Rdt = 65 %) ; Pf = 60°C.

RMN 1H (200 MHz, Cl3) : d 4,16 (q, 4H, 2CH2), 3,41 (s, 4H, 2CH2), 2,50 (t, 4H, 2CH2), 1,56-121 (m, 30H). b) Synthèse du 4,17-dibromo-3,18-dioxoeicosanedioate d'éthyle :

Le composé précédent (3,8 mmol) est dissous dans 20 ml de CCl4. La solution est refroidie à 0°C, et on ajoute goutte à goutte du brome (76 mmol), on laisse agiter à la même température pendant 30mn, puis température ambiante pendant lh. On evapore le solvant. Reprendre Le résidu est dissous dans de l'eau, et on extrait à l'acétate d'éthyle, la phase organique est séchée sur sulfate de sodium, filtrée et évaporée à sec. On purifie par chromatographie sur gel de silice en éluant avec l'AcOEt- Hexane (1-1). On obtient une huile jaunâtre (Rdt = 64 %).

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 4,42 (m, 6H, 2CH2+CH), 3,78- 3,48 (m, 4H, 2CH2), 1,94-1,14 (m, 30H). c) Synthèse du dodécaméthylènebis [5- (4-éthoxycarbony- léthyl) thiazole] :

A une solution de 11,7 mmol de bis-bromoacétoacétate d'éthyle dans 5 ml d'acétone on ajoute. du thioformamide (23,4 mmol) en solution dans 5 ml d'acétone et on agite à 40°C pendant une semaine. Le solvant est évaporé, et le résidu. dissous dans 1'eau. La solution est extraite à l'AcOEt. On purifie par chromatographie (AcOEt-Hex :

1/1). On obtient solide blanc (Rdt = 50 %) ; Pf = 112- 114°C.

RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 8,54 (s, 2H, 2CH), 4,17 (q, 4H, 2CH2), 3,72 (s, 4H, 2CH2), 2,72 (t, 4H, 2CH2), 1,56- 121 (m, 30H). d) Alkylation du dodécaméthylènebis [5- (4- éthoxycarbonyléthyl) thiazoles : Le composé précédent conduit par alkylation sur l'atome d'azote (selon le procédé habituel décrit pour T3 ou T4) soit à T12 en utilisant l'iodométhane, soit à T13 en utilisant le bromure de benzyle.

Diiodure de dodécaméthylènebis [5- (l-méthyl-4- éthoxycarbonyléthyl)-thiazolium] (T12) : Solide jaune Pf = 112°C ; Rdt = 55 % RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 10,91 (d, 2H, 2CH), 4,42 (6H, N-CH3), 4,25-4,16 (m, 8H, 2CH2+2CH2), 2,91 (m, 4H, 2CH2), 1,62-1,26 (m, 26H).

Dibromure de dodécaméthylènebis [5- (l-méthyl-4- éthoxycarbonyléthyl)-thiazolium] (T13) : Huile jaune ; Rdt = 50 % RMN 1H (200 MHz, CDCl3) : d 11,26 (d, 2H, 2CH), 7,36-7,26 (m, 10H, ArH), 6,07 (s, 4H, 2CH2), (m, 12H, 6CH2), 2,91 (m, 4H, 2CH2), 1,62-1,26 (m, 26H). XCI50(nM)composésR1 <BR> <BR> Tl2 CH3 I 13<BR> <BR> T13 C6H5-CH2-Br 250

Tableau 8 2-Synthèse des composés dupliqués sur le carbone C4 du cycle thiazole (T15 et T16).

Cette synthèse se fait en 5 étapes selon le schéma 6.

Schéma 6 L'acide tétradécanediolque est converti en son chlorure (Jayasuriya et coll. ; J. Amer. Chem. Soc. ; 112 ; 15 ; 1990 ; 5844-5850). Celui-ci est traité par le diazométhane pour conduire au 1,16-bis-diazo-hexadécane-2,15-dione (Canonica et coll. ; Atti Accad. Naz. Lincei Cl. Sci. Fis. Mat. Nat. Rend. ; 8,10 ; 1951 ; 479-484), qui est traité par HC1 et donne la 1,16-dichlorohexadécane-2,15- dione (même référence). Ce dernier composé est ensuite traité par la thioformamide dans les mêmes conditions que pour la synthèse du dodécaméthylènebis [5- (4- éthoxycarbonyléthyl) thiazoles (schéma 5,3 étape) pour donner le dodécaméthylènebis (4-thiazole).

Celui-ci conduit par alkylation sur l'atome d'azote (selon le procédé habituel décrit pour T3 ou T4) soit au diiodure de dodécaméthylènebis [4- (l-méthyl)-thiazolium], T15, en utilisant l'iodométhane, soit au dibromure de dodécaméthylènebis [4- (l-benzyl)-thiazolium], T16, en utilisant le bromure de benzyle.

composés R1 X CIso (nM) I4R15CH3- T16 C6H5-CH2-Br 10 Tableau 9 III. SYNTHESE DES HALOALKYLAMINES 1) Chlorhydrate du N,N'-diméthyl-N,N'-(5-chloropentyl)- 1,16-hexadecanediamine (P1). a) 5-Méthylamino-1-pentanol.

10,8g (0.088 mole) de 5-chloro-1-pentanol sont ajoutés à 45ml d'une solution 8M de MeNH2 (0,36 mole) dans le MeOH.

Le mélange réactionnel est chauffé à 100°C dans un autoclave pendant 48h. Le résidu obtenu après évaporation du MeOH est distillé sous pression réduite pour donner 6,2g (65%) d'aminoalcool.

RMN 1H (CDC13) 8 3,60 (t, 2H, CH20H), 2,56 (t, 2H, CH2NH), 2,40 (s, 3H, CH3NH), (m, 6H, (CH2) 3).

SM (Electrospray, mode positif) m/z 118 (M+H1+, 100). b) N, N'-diméthyl-N, N'- (5-hydroxypentyl)-1,16- hexadécanediamine.

0,57g (0,0048 mole) de diisopropyléthylamine et 0,58g (0,0045 mole) de 5-Méthylamino-1-pentanol sont ajoutés à 1,08g (0,0022 mole) de diiodohexadecane dissous dans 50mL d'éthanol. Le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 48 h, l'éthanol est ensuite éliminé sous pression

réduite. L'analyse par CCM du résidu montre la formation du produit attendu et indique la présence d'une petite quantité d'un composé très polaire identifié par spectrométrie de masse comme étant le sel d'ammonium quaternaire présenté sur la figure ci-dessous.

Le résidu est partiellement dissous dans l'eau et le N,N'-diméthyl-N,N'-(5-hydroxypentyl)-1,16-hexadécane- diamine est extrait dans l'éther avec K2CO3, laissant le contaminant polaire dans 1'eau. Les phases éthérées sont séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous pression réduite.

RMN 1H (CDCl3) # 3,60 (t, 4H, CH2OH), 2,65-2,40 (m, 8H, CH2-NH-CH2), ), 2,37 (s, 6H, CH3N), 1,60-1,21 (m, 40H, 2 (CH2) 3 + (CH2) 14). c) Chlorhydrate du N, N'-diméthyl-N, N'-(5- chloropentyl)-1,16-hexadecanediamine (P1).

Le résidu obtenu ci-dessus est dissous dans 10 ml de CH2Cl2 et 1,7ml de chlorure de thionyle sont ajoutés. Le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 5h après quoi tous les produits volatiles sont éliminés sous pression réduite. Le résidu est trituré dans l'éther jusqu'à ce qu'un précipité apparaisse. Le précipité est filtré puis recristallisé dans un mélange éthanol-éther pour donner 0,408g (32%) de Chlorhydrate de N, N'- diméthyl-N, N'- (5-chloropentyl)-1, 16-hexadécanediamine.

RMN 1H (CDC13) 8 3,48 (t, 4H, CH2Cl), 3,00-2,80 (m, 8H, CH2-NH+ (CH3)-CH2)), 2,70 (d, 6H, CH3NH+), (m, 40H, 2(CH2)3 + (CH2) 14).

SM (Electrospray, mode positif) m/z 247 (M++, 100), m/z 529/531 20).

2) Chlorhydrate du N, N'-diméthyl-N, N'- (4-chloropentyl)- 1,16-hexadécanediamine (P2). a) 5-Méthylamino-2-pentanol.

10,59g (0,10 mole) de y-valérolactone sont ajoutés à 60ml d'une solution 8M de MeNH (0,48 mole) dans le MeOH. Le mélange réactionnel est chauffé à 100°C dans un autoclave pendant 48h. Le résidu obtenu après évaporation de l'excès de MeNH2 sous pression réduite est dissous dans 20ml de THF et est ajouté à une solution de 6,26g (0,17mol) de LiAlH4 dans 80 ml de THF durant lh pour obtenir un léger reflux. Le reflux est maintenu pendant 48h, une solution de soude 5M est ensuite ajoutée goutte à goutte jusqu'à obtention d'une suspension blanchâtre.

Le mélange réactionnel est extrait à l'éther, les phases éthérées sont séchées sur MgSO4 anhydre et le solvant est éliminé sous pression réduite. Le résidu obtenu est distillé sous pression réduite pour donner 6,27g (63%) de 5-methylamino-2-pentanol.

RMN 1H (CDC13) 6 3,72 (m, 1H, CHOH), 2,76-2,48 (m, 2H, CH-NH), 2,47 (s, 3H, CH3NH), 2,66-1,32 (m, 6H, (CHz) 3).

SM (Electrospray, mode positif) m/z 118 (M+Hl+, 100). b) N, N'-diméthyl-N, N'-(4-hydroxypentyl)-1, 16- hexadécanediamine.

0,59g (4,6 mmole) de diisopropyléthylamine et 0,61g (5,8 mmole) de 5-methylamino-2-pentanol sont ajoutés à 1,10g (2,3 mmole) de diiodohexadécane dissous dans 50mL d'éthanol. Le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 48 h, l'éthanol est ensuite éliminé sous pression réduite. L'analyse par CCM du résidu montre la formation du produit attendu et indique la présence d'une petite quantité d'un composé très polaire identifié par spectrométrie de masse comme étant le sel d'ammonium quaternaire présenté sur la figure ci-dessous

Le résidu est partiellement dissous dans 1'eau et la N, N'-diméthyl-N, N'- (4-hydroxypentyl)-1,16- hexadécanediamine est extrait dans l'éther avec K2CO3, laissant le contaminant polaire dans 1'eau. Les phases éthérées sont séchées sur MgS04, filtrées et concentrées sous pression réduite.

RMN 1H (CDC13) S 3,70-3,58 (m, 2H, CHOH), 2,40-2,24 (m, 8H, CH2-NH+ (CH3)-CH2), 2,16 (s, 6H, CH3NH+), 1,66-1,10 (m, 42H, 2 (CHz) 2 + 2 (CH3CH) + (CH2) 14). c) Chlorhydrate du N, N'-diméthyl-N, N'- (4-chloropentyl)- 1,16-hexadécanediamine (P2).

Le résidu obtenu ci-dessus est dissous dans 10 ml de CH2Cl2 et 2mL de chlorure de thionyle sont ajoutés. Le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 5h après quoi tous les produits volatiles sont éliminés sous pression réduite. Le résidu est trituré dans l'éther jusqu'à ce qu'un précipité apparaisse. Le précipité est filtré puis recristallisé dans un mélange éthanol-éther pour donner 0,415g (32%) de chlorhydrate de N, N'- diméthyl-N, N'- (4-chloropentyl)-1, 16-hexadécanediamine.

RMN 1H (CDCl3) # 4,00 (m, 2H, CHCl), 3,00-2,87 (m, 8H, CH2-NH+ (CH3)-CH2),), 2,72 (d, 6H, CH3NH+), 1, 86-1,19 (m, 42H, 2 (CH2) 2 + 2 (CH3CH) + (CH2) 14)- SM (Electrospray, mode positif) m/z 247 (M++, 100), m/z 529/531 (M++Cl-, 20).

Etude des activités pharmacologiques de précurseurs selon l'invention.

A. Activité antipaludique contre P. falciparum in vitro On rapporte dans les tableaux 10 et 11 ci-après les résultats des valeurs de CI50 en nM pour les prodrogues de type disulfure (tableau 10) et celles de type thio- ester (tableau 11) selon l'invention, ainsi que pour les drogues correspondantes.

Les mesures de CI50 sont déterminées vis-à-vis de P. falciparum selon la méthode de Desjardins dans laquelle l'incorporation d' [3 H] hypoxanthine (fig. 1) dans les acides nucléiques sert d'index de la viabilité cellulaire. Dans chacun des cas, des contrôles en microscopie optique sont réalisés.

Tableau 10 Prodrogue TS (Ra = S-R) Drogue T RRZ IC50nomIC50nom (nK (nrvl) THF-CH2-TS3a 1 HO-CH2-CH2-TS3b1,3T32,25C3H7--(CH2)12- TS3c1,6C6H5-CH2-- 2,5HO-CH2-CH2-TS3d 3,5C3H7-TS4b T40,65"CH3O-CH2-CH2- Et2N (CH2) 2- TS4c 2, 8 C6H5-COO-(CH3)2-TS522/C3H7" C3H7-"H-TS6b3,1 T6 3 Tableau 11 A Prodrogues TE (Rn=RCO) N-dupliquécs Drogue T Z nom Icso nom IC50 ; (nM) (rilm) CH3--(CH2) 12-TE4a 14 (CH3C-"TE4b 12 CJ-"TE4c 2 p-CH30-C6H4-tt TE4d 3,4 T4 0,65 O N- (CH2) 2-O-C6H4- rr4e 6, =4 (C2H5) 2N-CH2-C6H4-"TE4f 2,3 1 0/--\ N-CHZ-CgH4-TE4 2, 3 U CH300C-C6H4-tt TE4j 2,7 C6Hs~-(CH2) 16 TE8 0,(CH2) 16 TE8 0, 6 T8 1,1 -cl3 -TE3 2, 6 T3 2,25 2 Tableau 11B

ProdroguesC-dupliquéesDrogueT'Ra=RCO) R R1 nomIC50nomIc50Z (nM)(nM) CH3--(CH2)2O(CH2)6O(CH2)2-TE1012T102,5p-CH3O-C6H4-C6H5-CH2 CH2CO2Et-(CH2)12-TE1216T1213C6H5-CH3-

Ces résultats montrent que les valeurs de CI50 obtenues sont très faibles aussi bien dans la série disulfure que dans la série thioester et sont de l'ordre de 1 à 14 nM pour les dérivés de type bis avec un bras espaceur formé par une chaîne dodécyle.

On remarquera avec intérêt que la valeur de CI50 pour les composés cyclisés ionisés est sensiblement du même ordre de grandeur que celle des prodrogues neutres correspondantes.

A titre de comparaison, on a mesuré la valeur de CI50 sur un composé ne pouvant pas se cycliser par hydrolyse enzymatique et répondant à la formule On obtient une valeur de CI,. c, > 10-5 M ce qui indique que la cyclisation est nécessaire pour une forte activité antipaludique et suggère également que la cyclisation s'est effectivement produite en présence de sérum et/ou des érythrocytes infectés durant les 48 heures du test in vitro de mesure de l'activité antipaludique.

Dans le tableau 12 ci-après, on donne les résultats des mesures de CIso effectuées sur des haloalkylamines selon l'invention. Ces résultats concernent les prodrogues appelées Pl et P2 et les dérivés cyclisés correspondants G26 et G27 respectivement.

Tableau 12 R'1R1nWCI50(nM)NomZ P1- (CHz) 16- H CH3 4 Cl 1, 7

"""I0,55G26" P2"CHs"3Ct0,5 G27 4 B) Activité antipaludique in vivo chez la souris infectée par P. vinckei et tolérance après administration dans des conditions aiguës ou semi-chroniques.

On rapporte dans le tableau 13 ci-après, les résultats obtenus avec des prodrogues selon l'invention de type disulfure (TS3b), de type thioester (TE4c, TE4a et TE4e), la drogue correspondante T3 et, à titre de comparaison, le dérivé d'ammonium quaternaire G25.

Tableau 13 InvivoInvivoInvitro DL50(mg/kg)Indiced'DE50(mg/kg)CI50(nM) Drogue (souris) [T1] aigûesasemichroniqueboralec(P.vinckel)(P.falciparum) G25 0, 6 ip 1, 27 1,15 87 0,22 [5,2] @0 130 [4,4#15 T3 2, 25 ip 10 7,5 70 0,2 [38l po 700 160 TS3b 24090(32*)6,7#7[4,6*<TI#12,8]ip po 1600 410 ~1SU 12, 3/ TE4c 100#30d#101[#30]eip #300po#1000 30 > x > 1 [10<TI<100 TE4a #50n.d.#20ip po-1000 TE4e 6,4ip-50

La CI50 est la concentration qui inhibe de 50 % la croissance in vitro de P. falciparum : la DL50 est la dose léthale correspondant à la mort de 50 % des souris et la DE50 est la dose efficace pour inhiber de 50 % la croissance in vivo de P. vinckei selon un test suppressif de 4 jours, IT correspond à l'indice thérapeutique, IT = DL50 (semi-chronique)/DE50 ; ip : administration intra-péritonéale ; po : per os.

Dans ce tableau, a) à e) ont les significations suivantes : a) : correspond à une seule dose ; b) correspond à une administration deux fois par jour, pendant 4 jours consécutifs ; c) correspond au rapport CL50 po/DL50 ip dans des conditions d'administration aiguë, rapport appelé ci- après"indice d'absorption orale" ; d) correspond à la mort de seulement 25 % des souris.

"*"La DLSO (semi-chronique) diminue chez les souris infectées par le paludisme ;

e) TE4c a été utilisé dans un mélange 50/50 de PEG/huile de castor.

Ces résultats montrent que les prodrogues de l'invention possèdent une forte activité antipaludique in vitro et in vivo ainsi qu'une bonne tolérance et une absorption élevées.

C) Caractéristiques pharmacocinétiques et taux sérique.

Cl. Paramètres pharmacocinétiques chez la souris On rapporte ci-après les résultats des paramètres pharmacocinétiques après administration par voie intra- péritonéale ou orale chez la souris pour une prodrogue de type disulfure (TS3b) et une prodrogue de type thioester (TE4c).

Pour la détermination du niveau sérique, on utilise des bio-essais ex vivo : brièvement, le médicament est administré à l'animal, puis on procède à des prélèvements sanguins répétés. Les sera sont décomplémentés pendant 30 min à 56°C. Le contenu en métabolite actif est alors déterminé par incubation de différentes concentrations (dilution dichotomique) de chaque sérum, en présence de suspensions d'érythrocytes infectés par P. falciparum, selon la méthode de DESJARDINS à la [3H] hypoxanthine.

Les résultats sont exprimés en SI50, ce qui correspond au pourcentage de sérum (contenant un métabolite actif) capable d'inhiber la croissance de P. falciparum de 50 %.

Cette valeur est alors transformée en concentration sérique, (habituellement exprimée en ng/ml) en testant le composé actif directement (sans passage chez l'animal), sur la même suspension infectée par P. falciparum et en déterminant sa valeur de CI50 (en ng/ml) [taux sérique = C15')] (en ng/ml) x 100/SI50 (en %)].

Les résultats sont exprimés en log (taux sérique de médicaments), en fonction du temps, ce qui permet l'évaluation du demi-temps pour la distribution vers le compartiment sérique tl/2 (d) ; du demi-temps pour l'élimination du compartiment sérique (t ; (e)) ; de CO)/ correspondant au taux sérique extrapolé à l'origine dans la phase d'élimination ; de AUC (qui indique la quantité de drogue circulant dans le courant sanguin) ; et la bio- disponibilité relative dans le mode d'administration par voie orale, versus le mode par voie intrapéritonéale [AUC (po)/AUC (ip)] qui est significatif du degré d'absorption par voie orale.

. Pharmacocinétiques de TE4c On administre à des souris des doses de 3 et 50 mg par kg de TE4c, par voie intrapéritonéale et par voie orale, ce qui correspond à des DL50/33 et DL50/20 respectivement.

Le composé est solubilisé dans du DMSO à 10 %. Même à ces faibles doses, on observe des taux sériques élevés avec un profil pharmacocinétique bi-phasique pour les deux voies. Les résultats sont donnés sur la figure 2 qui indique la concentration en métabolite actif sérique en ng/ml) en fonction du temps en heures.

Sur cette figure, (-v-) correspond à 1'administration ip à 3 mg/kg et la courbe avec (-o-) à l'administration po à 50 mg/kg.

Dans la première phase, on observe très rapidement un pic (en moins de deux heures) avec des taux sériques diminuant jusqu'à 4 à 7 heures, puis augmentant et on note à nouveau un pic autour de 15 heures, et ceci pour les deux voies d'administration.

Ces résultats suggèrent une première phase rapide au cours de laquelle la prodrogue est distribuée et entre

dans le compartiment sérique. Une fois dans ce compartiment, la prodrogue se transforme vraisemblablement en composé ammonium quaternaire.

La deuxième phase peut alors être exploitée pour déterminer les paramètres pharmacocinétiques du dérivé ionise.

En considérant que la transformation en drogue ionisée est totale, le profil pharmacocinétique peut être redessiné sur la base de la CI50 de la drogue et non sur celui de la prodrogue (voir figure 3, où les légendes des courbes sont les mêmes que dans la figure 2). La représentation semi-logarithmique permet de déterminer les paramètres pharmacocinétiques principaux du métabolite actif (qui est supposé être la drogue ammonium quaternaire T4) pour les deux voies d'administration (voir figure 4 où les résultats sont redessinés à partir des figures 2 et 3). Les paramètres pharmacocinétiques sont Cl-180 ng/ml, tel = 12 heures, AUC = 3,3 ug. h/ml après administation ip à 3 mg/kg, et Co = 130 ng/ml, t@ = 12 h 30, AUC = 2,7 µg. h/ml après administration orale à 50 mg/kg. Dans ces conditions, la biodisponibilité relative est de 5 %.

Dans une autre série d'expériences, on a étudié la pharmacocinétique à des doses plus élevées de TE4c (10 mg/kg ip et 150 mg/kg po).

Un profil biphasique a également été observé avec des taux sériques plus élevés et dans ce cas le second pic s'est produit légèrement plus tard (autour de 23 h) comme le montrent les figures 5A et 5B.

Estimation des paramètres pharmacocinétiques : par voie orale, _ Co = 1 ug/ml et ti/i. autour de 10 heures.

. Pharmacocinétique de TS3b TS3b a été administré à la souris à des doses de 50 et 400 mg/kg, respectivement par voie intrapéritonéale et par voie orale (DL50/3 approximativement).

On observe des taux sériques élevés formant des pics 2 à 4 heures après 1'administration de drogues (figure 6). Les paramètres pharmacocinétiques ont été alors estimés à partir de la représentation semi-logarithmique de la concentration sérique (calculée sur la base de la CI5 de TS3b en fonction du temps).

Après administration intra-péritonéale à 50 mg/kg, on obtient Co de 2,75 ug/ml avec tel/2 d'environ 6 heures.

Par voie orale à 400 mg/kg, Co est de 1,8 ug/ml, indiquant de très hauts taux sériques. Le tel, apparent est de 13 heures. Une telle différence dans les t1/2 entre les deux voies d'administration pourrait indiquer une différence de métabolisation de la prodrogue.

Le profil de pharmacocinétique observé sur la figure 6, pourrait refléter seulement la première phase d'un profil biphasique, correspondant à une phase absorption /distribution, comme celle observée pour la prodrogue de type thioester TE4c.

Une autre série d'expériences a été réalisée pour vérifier l'existence d'un profil biphasique, avec des prélèvements sanguins jusqu'à 30 heures après 1'administration de la drogue par voie ip (voir figure 7 qui donne la concentration de TS3b sérique en ng/ml en fonction du temps en heures).

On constate qu'on obtient bien un profil biphasique, bien qu'incomplet.

La première phase se caractérise par un pic à environ 2 heures avec des taux sériques diminuant jusqu'à 10 heures ; entre 10 et 24 heures, on n'observe qu'une