本发明涉及一类作为酪氨酸激酶抑制剂的喹唑 啉衍生物， 以及 该衍生物作为表皮生长因子受体 （ EGFR ) 突变体 T790M 的抑制剂 和抗癌剂的应用。 本发明还涉及其制备方法， 以及包含所述喹唑 啉衍生物的药物组合物。 背景技术

癌症被认为是细胞内信号传导系统或信号传导 机制的疾病。癌症 的最常见病因是一系列的缺损， 所述缺损可以是蛋白质的缺损（当其 突变时） ， 或者是对细胞内蛋白质的量的调节的缺损， 从而使蛋白过 度产生或产生不足。 细胞表面受体的突变（该突变通常通过酪氨酸 激 酶将信号传递到细胞内 ）可导致激酶在缺乏配体的条件下被激活， 并 传递事实上并不存在的信号。 或者， 许多受体酪氨酸激酶可在细胞表 面过度表达， 导致对弱信号的过强响应。

肺癌是工业国家中导致癌症死亡的首要原因。 依据细胞在显微镜 下的表现， 肺癌被分为两种主要类型， 非小细胞肺癌和小细胞肺癌。 近 80%的肺癌属于非小细胞肺癌 （ NSCLC ) 。 NSCLC为美国、 日本和西 欧癌症致死的主要原因， 早期患者手术难， 且易复发。 化学疗法在生 存率方面能提供适度的帮助， 但是毒性太大， 因此迫切需要特异性地 靶向涉及肿瘤生长的治疗剂（ Sch i l l e r J H等， N. Eng l . J . Med.， 346 : 92-98， 2 002 ) 。

表皮生长因子受体（ EG FR )被确认为在细胞生长和增殖过程中至 关重要的驱动因素。 表皮生长因子受体家族由 EGFR (Erb- B1 ) 、 Er b- B2 (HER- 2 /neu)、 Er b- B3和 Erb- B4组成。 表皮生长因子受体与 大部分癌症的疾病进程有关， 如肺癌、 结肠癌、 乳腺癌等。 EGFR 的 过度表达和突变已被明确证实是预后不好的乳 腺癌的主要危险因素。 此外，已证实该受体家族的所有四个成员均可 与该家族的其它成员聚 合为异源二聚体， 形成信号传导复合物， 如果该家族中有一个以上的 成员在恶性肿瘤中过度表达， 便可导致协同的信号传导作用。 EGFR属于蛋白酪氨酸激酶（PTK) 家族， 蛋白酪氨酸激酶是一类 将磷酸基团从 ΑΤΡ催化转移到位于蛋白质底物的酪氨酸残基 的酶。蛋 白酪氨酸激酶在正常细胞生长中起作用。 EGFR 的过度表达或突变， 导致受体在缺乏配体的条件下被激活， 使某些蛋白发生磷酸化， 产生 了细胞分裂的信号。 因此， EGFR 通过自身酪氨酸激酶的作用， 导致 了弱信号的过度放大， 引起了细胞的过量增殖。

作为潜在抗癌治疗药物的特异性 PTK抑制剂倍受关注。目前上市 的 EGFR 可逆性抑制剂的典型代表是 2003 年上市的吉非替尼 ( Gef i t inib, 商品名为 Iressa, 由 AstraZeneca UK Ud.开发） ， 2004 年上市的埃罗替尼 （ Erlotinib, 商品名 为 Tarceva, 由 Genentech, Inc. 和 OSI Pharmaceuticals, Inc.开发 ) , 和 2007 年 上 市 的 拉 帕 替 尼 （ Lapatinib, 商 品 名 为 Tykerb, 由 GlaxoSmithKline开发） ， 其结构如下面的 "上市或在研的 EGFR抑 制剂结构一览" 所示。 它们均产生令人鼓舞的临床结果， 分别用于 NSCLC和乳腺癌的治疗（Sordella R等， Science, 305: 1163-1167， 2004; Pao, W. 等 ， Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. , 101: 13306-13311, 2004)。 临床研究证明， 吉非替尼、 埃罗替尼对 EGFR发生缺失或点突变 （L858R ) 的 NSCLC患者有良好的治疗作用。 然而， 它们的局限在于患者在接受治疗后产生耐药（ Kobayashi, M. 等， N. Engl. J. Med. , 352: 786-792, 2005) , 使得此类抑制剂在 临床上的进一步应用受到限制。 研究表明， 50%的吉非替尼、 埃罗替 尼治疗后耐药性的产生与 EGFR发生二次突变（Τ790Μ)相关 （Pao， W. 等， Plos Med. , 2: 1-11, 2005) , 可逆抑制剂失去疗效。

T790M位于 EGFR与 ATP结合口袋的入口， 其边链的大小直接影响 EGFR和 ATP的结合能力。 T790M突变在空间上阻碍 EGFR抑制剂与 ATP结 合位点的作用， 增加 EGFR对 ATP的亲和力， 从而使细胞对 EGFR抑制剂 产生耐药（Cai- Hong Yun等， Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. , 105: 2070-2075, 2008)。

中国专利 CN100503580C描述了作为酪氨酸激酶不可逆抑制剂 的 喹唑啉类化合物， 结构通式如下式（a)所示：

(a)

中国专利 CN1177833C公开了一类取代的间二氮杂萘衍生物� � 其在抗肿瘤治疗中的 结构通式如下式（b)所示：

(b)

与可逆性 EGFR抑制剂相比，不可逆 EGFR抑制剂具有非常突出的优 点。 不可逆 EGFR抑制剂可长时间地抑制 EGFR, 只受到受体再结合（也 称为恢复）的正常速率的限制。 有研究发现， 不可逆 EGFR抑制剂可通 过麦克尔加成反应与 EGFR上半胱氨酸残基（Cys797 )共价结合， 使不 可逆 EGFR抑制剂与 ATP结合位点扩大，从而能在一定程度上克服 T790M 突变引起的耐药性（Li D等， Oncogene, 27: 4702-4711, 2008)。 目前 在研的不可逆 EGFR抑制剂包括 HKI- 272 (Wyeth开发）、 EKB-569 (Wyeth 开发）、 CI- 1033 (Pfizer开发）、 BIBW2992 (Boehringer Ingelheim开 发）和 PF00299804 (Pfizer开发）等， 其结构如下面的 "上市或在研的 EGFR抑制剂结构一览" 所示。

然而， 能够抑制 EGFR T790M的不可逆 EGFR抑制剂， 通常带来较 大的毒副作用， 如腹泻、 皮疹、 恶心、 厌食、 虛弱无力（Besse, B. 等， Eur. J. Cancer Suppl. , 6， 64, abstr. 203, 2008; Janne, P. A. 等， J. Clin. Oncol.， 25: 3936-3944, 2007)， 由此中断药物开发， 如 Pfizer的 CI- 1033。 据文献报道， BIBW2992和 PF00299804具有显 著的抗肿瘤活性， 不仅能抑制 EGFR的活性， 而且能抑制 EGFR T790M 的活性， 目前分别在进行临床 ΠΙ期和临床 II期试验， （Li D 等，； Oncogene, 27: 4702-4711, 2008; Andrea J. Gonzales 等， Mol. Cancer Ther. , 7: 1880-1889, 2008)。 BIBW2992能同时抑制 EGFR1 和瞧 2 , PF00299804能同时抑制 HER-1、 HER- 2和 HER- 4受体

erlotinib

lapatinib neratinib(HKI-272)

pelitinib(EKB-569) canertinib(CI-1 033 )

BIBW-2992

上市或在研的 EGFR抑制剂结构一览 上述上市或在研的可逆或不可逆 EGFR抑制剂主要结构类型为喹 唑啉类化合物。 目前已报道的喹唑啉类 EGFR抑制剂均为野生型 EGFR 的 ATP 竟争型抑制剂， 非特异性作用于 EGFR T790M , 由此导致一些 副反应的发生。 最近研究人员报道了一类嘧啶类的特异性作用 于 EGFR T790M 的不可逆 EGFR抑制剂， 结构如下式（c)所示。 与现有的 苯胺喹唑啉类 EGFR抑制剂相比， 此类嘧啶化合物对 EGFR T790M的抑 制活性提高了 30- 1 00倍， 对野生型 EGFR 的抑制活性降低了 1 00倍 (Wenjun Zhou等， Na ture, 462: 1 070-1074 , 2009)。

X = 0, s

Y = H, OMe 为克服已上市 EGFR抑制剂类药物， 如吉非替尼、 埃罗替尼治疗 肿瘤后产生的耐药性问题， 研究特异性抑制 EGFR T790M的小分子抑 制剂已成为当前抗肿瘤领域的迫切需要。 本发明人在研究 EGFR抑制 剂的过程中，惊喜地发现了一类与现有公开的 喹唑啉化合物相类似的 化合物， 但却表现出能特异性作用于 EGFR L858R /T790M , 对 EGFR L858R /T790M的抑制活性显著高于对野生型 EGFR的抑制活性， 表现 出很好的选择性。 预期此类抑制剂将会有好的疗效， 而又有低的毒副 作用， 有望治疗和克服临床上应用吉非替尼、 埃罗替尼后产生的耐药 性问题。是针对耐药突变体的特异性治疗制剂 ，具有良好的开发前景。 发明内容

本发明提供新的通式（I)化合物及其药学上可� ��受的盐，

其中，

R'选自氢、 卤素、 C,-C ₄ 烷基、 d-C ₄ 烷氧基、 卤素取代的 C,-C ₄ 烷基、 素取代的 C,- C ₄ 烷氧基；

R ² 选自氢、 鹵素、 C,- C ₄ 烷基、 卤素取代的 d- 烷基、 d- C ₄ 烷氧基、 卤素取代的 氧基；

R ³ 为卤素。 本发明还提供所述通式（I)化合物 方法， 包括下列步骤:

(Id) (I) 化合物（Ic) ;

B.将化合物（Ic)用常规还原剂， 如铁粉还原， 得到化合物（Id) ; 以及 C.将化合物（Id)与酰 ， 例如酰氯， 反应得到目标化合物（I)； 式中 R'、 R ² 和 R ³ 与上述通式 （ I ) 化合物中的定义相同。

本发明还提供药物组合物， 它含有上述本发明通式 （ I ) 化合物 或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的 载体、赋形剂或稀释剂。

本发明还提供本发明通式 （ I ) 化合物或其药学上可接受的盐 作为治疗哺乳动物以异常 erbB 家族 PTKs 活性为特征的疾病、 特 别是肿瘤的药物， 以及本发明通式 （ I ) 化合物或其药学上可接受 的盐在制备治疗哺乳动物以异常 erbB 家族 PTKs 活性为特征的疾 病、 特别是肿瘤的药物方面的应用。

本发明还提供治疗哺乳动物以异常 erbB 家族 PTKs 活性为特 征的疾病的方法， 包括给需要此治疗的个体施用所述本发明通式 ( I ) 化合物或其药学上可接受的盐。

本发明还提供治疗哺乳动物肿瘤的方法， 包括给需要此治疗的 个体施用所述本发明通式 （ I ) 化合物或其药学上可接受的盐。

在本发明通式（ I )化合物的一个实施方案中， R ¹ 选自氢、 卤素、

(^烷基和 [¾素取代的 C,-C ₄ 烷基。

在本发明通式 （ I ) 化合物的一个优选的实施方案中， R ¹ 选自氢 或 C,- (^烷基； 在更优选的方案中， R ¹ 选自氢或曱基。. 在本发明通式 （ I ) 化合物的另一个优选的实施方案中， R ² 选自 氢或 C,-C ₄ 烷氧基； 在更优选的方案中， R ² 选自氢或曱氧基。

在本发明通式 （ I ) 化合物的另一个优选的实施方案中， R ³ 为氯。 在本发明通式（ I )化合物的更为优选的实施方案中， R ¹ 选自氢或 曱基， R ² 选自氢或曱氧基， 以及 R ³ 为氯。

在本发明中， 作为通式 U ) 所表示的化合物， 更加优选的具体 化合物为：

N- [4- ( 3-氯 -4-羟基-苯基氨基）- 7-曱氧基 -喹唑啉- 6-基] -巴豆 酰胺；

N- [ 4- ( 3-氯- 4-羟基-苯基氨基） -喹唑啉- 6-基] -巴豆酰胺；

N - [ 4- ( 3-氯 -4-羟基-苯基氨基） -喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺；

N - [4- ( 3-氯- 4-羟基-苯基氨基）- 7-曱氧基 -喹唑啉- 6-基] -丙烯 酰胺，

以及它们药学上可接受的盐。

在本发明中， 术语 " C,- C ₄ 烷基" 是指曱基、 乙基、 正丙基、 异 丙基、 正丁基、 异丁基、 仲丁基和叔丁基。

在本发明中， 术语 " C,- ( ₄ 烷氧基" 是指曱氧基、 乙氧基、 正丙 氧基、 异丙氧基、 正丁氧基、 异丁氧基、 仲丁氧基和叔丁氧基。

在本发明中， 术语 "卤素" 是指氟、 氯、 溴、 碘。

本发明中， 术语 "药学上可接受的盐" 是指相对无毒的本发明化 合物的酸加成盐或碱加成盐。 所述酸加成盐为式（I )化合物与合适的 无机酸或者有机酸形成的盐，这些盐可在化合 物最后的分离和提纯过 程中制备，或者是使纯化的化合物以其游离碱 形式与适宜的有机酸或 无机酸进行反应， 再将形成的盐分离来制备。 代表性酸加成盐包括， 但不限于， 例如氢溴酸盐、 盐酸盐、 硫酸盐、 硫酸氢盐、 亚硫酸盐、 乙酸盐、 草酸盐、 戊酸盐、 油酸盐、 棕榈酸盐、 硬脂酸盐、 月桂酸盐、 硼酸盐、 苯曱酸盐、 乳酸盐、 磷酸盐、 磷酸氢盐、 碳酸盐、 碳酸氢盐、 曱苯曱酸盐、 柠檬酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 琥珀酸盐、 酒石酸盐、 曱磺酸盐、对曱苯磺酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖 酸盐和月桂基磺酸盐等。 盐， 包括例如与碱金^、 碱土金属、 季铵阳离子形成的盐， 如钠盐'、 锂盐、 钾盐、 钙盐、 镁盐、 四曱基季铵盐、 四乙基季铵盐等； 胺盐，. 包括与氨 （ NH ₃ ) 、 伯胺、 仲胺或叔胺形成的盐， 如： 曱胺盐、 二曱 胺盐、 三曱胺盐、 三乙胺盐、 乙胺盐等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可给药于 哺乳动物（例如 人）， 可以采用口服、 直肠、 肠胃外（静脉内、 肌肉内或皮下）、 局部 5 给药（例如以粉剂、 软膏剂或滴剂等剂型）等方式。

本发明化合物的给药剂量可以为大约 0. 05 -5 0 mg / k g体重 /天， 例如 0. 1 - 4 5 mg /kg体重 /天， 0. 5 - 35 mg /k g体重 /天等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以配制 为用于口服给药 的固体剂型， 包括， 但不限于， 胶嚢剂、 片剂、 丸剂、 散剂和颗粒剂0 等。 在这些固体剂型中， 本发明化合物或其药学上可接受的盐与至少 一种常规惰性赋形剂（或载体）， 如柠檬酸钠或磷酸二钙混合， 或与下 述成分混合： （a) 填料或增容剂， 例如， 淀粉、 乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 甘露醇和硅酸； （b) .粘合剂， 例如， 羟曱基纤维素、 藻酸盐、 明胶、 聚乙烯基吡咯烷酮、 蔗糖和阿拉伯胶； （c) 保湿剂， 例如， 甘油； （d)5 崩解剂， 例如， 琼脂、 碳酸钙、 马铃薯淀粉或木薯淀粉、 藻酸、 某些 复合硅酸盐和碳酸钠； （e) 緩溶剂， 例如石蜡； （f ) 吸收加速剂， 例 . 如， 季胺化合物； （g) 润湿剂， 例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯； （h) 吸 附剂， 例如， 高岭土； 和（i ) 润滑剂， 例如， 滑石、 硬脂酸钙、 硬脂 酸镁、 固体聚乙二醇、 十二烷基硫酸钠， 或其混合物。 在胶嚢剂、 片0 剂和丸剂中， 也可包含緩沖剂。

所述固体剂型如片剂、 糖丸、 胶囊剂、 丸剂和颗粒剂可采用包衣 和壳材， 如肠衣和其它本领域公知的材料来包衣。 它们可包含不透明 ' 剂， 并且， 这种组合物中活性化合物的释放可以延迟的方 式在消化道 内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的物 质包括例如聚合物质和5 蜡类物质。 必要时， 本发明化合物或其药学上可接受的盐也可与上 述 赋形剂中的一种或多种形成微胶嚢形式。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以配制 为用于口服给药 的液体剂型， 包括， 但不限于， 例如药学上可接受的乳液、 溶液、 悬 浮液、糖浆或酊剂等。 除了作为活性化合物的本发明化合物或其药学 剂， 如水或其它溶剂、 增溶剂和乳化剂， 例知， 乙醇、 异丙醇、 碳酸 乙酯、 乙酸乙酯、 丙二醇、 1， 3 -丁二醇、 二曱基曱酰胺以及油， 特 别是棉籽油、 花生油、 玉米胚油、 橄榄油、 蓖麻油和芝麻油或这些物 质的混合物等。 除了这些惰性稀释剂外， 这些剂型中也可包含助剂， 如润湿剂、 乳化剂和悬浮剂、 甜味剂、 娇味剂和香料等。

除了本发明化合物或其药学上可接受的盐外， 悬浮液可包含悬浮 剂， 例如， 乙氧基化异十八烷醇、 聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、 微晶纤维素、 曱醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以配制 为用于肠胃外注 射的剂型， 包括， 但不限于， 例如生理上可接受的无菌含水或非水溶 液、 分散液、 悬浮液或乳液， 和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或 分散液的无菌粉末。 适宜的含水和非水载体、 稀释剂、 溶剂或赋形剂 包括水、 乙醇、 多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物及其药学上可接受的盐也可以配 制为用于局部给 药的剂型， 包括例如软膏剂、 散剂、 喷射剂和吸入剂等。 本发明化合 物或其药学上可接受的盐可在无菌条件下与生 理上可接受的载体及 任何防腐剂、 緩沖剂， 或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明还提供药物组合物， 它含有上述本发明通式 （ I ) 化合物 或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的 载体、赋形剂或稀释剂， 其中通式 （ I ) 化合物或其药学上可接受的盐的含量可以为 0.01 - lOOOmg, 例如 0.05 - 800mg, 0.1- 500mg、 0.1- 300mg、 0.1- 200mg、 0.05- 150mg、 0.05-50mg等。

本发明药物组合物可以采用常规方法， 通过将本发明通式 （ I ) 化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受 的载体、赋形剂或稀释 剂混合来制备。

本发明所述的化合物或其药学上可接受的盐可 以单独给药， 或 者与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，特 别是与其他抗肿瘤药物 组合。 所述治疗剂包括但不限于： 作用于 DNA化学结构的药物抗肿瘤 药如顺铂， 影响核酸合成的抗肿瘤药物如曱氨蝶呤（MTX)� � 5-氟尿嘧 啶（5FU)等， 影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、 表阿霉素、 阿克 拉霉素、 光辉霉素等， 作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、 长春瑞滨等， 芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、 兰特隆、 来曲唑、 瑞宁德 等， 细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制 剂伊马替尼 ( Imatinib ) 、 吉非替尼 ( Gef itinib ) 、 埃罗替尼 ( Er lot inib )等。 待组合的各成分可同时或顺序地给予，以单一 制剂形式或以不同制剂 的形式给予。所述组合不仅包括本发明化合物 和一种其它活性剂的组 合， 而且也包括本发明化合物和两种或更多种其它 活性剂的组合。

经激酶抑制实验（酶联免疫吸附测定法） ， 证明本发明化合物对 EGFR T790M具有特异性抑制作用。

此外， 通过对耐药性肿瘤细胞， 如非小细胞肺癌细胞 H1975体外 增值抑制实验， 证明本发明化合物具有癌细胞增殖抑制作用， 可用作 治疗以异常 erbB家族 PTKs活性为特征的疾病、特别是肿瘤例如癌症 的药物。 所述肿瘤包括但不限于， 例如肺癌、 卵巢癌、 乳腺癌、 胃癌、 结肠癌、 胰腺癌等， 尤其对于表皮生长因子受体 790位苏氨酸突变为 蛋氨酸 （EGFR T790M)的肿瘤类型有更好的应用。 举例来说， 本发明 化合物可作为和用于制备治疗非小细胞肺癌 (EGFR T790M)的药物。 可 用于克服临床上应用吉非替尼、 埃罗替尼后由 EGFR T790M引起的耐 药性问题。

本发明化合物抑制癌细胞增殖的药效可用常规 方法测定，一种常 用的评价方法为磺酰罗丹明 B (Su l forhodam i ne B， SRB)蛋白染色法。

下面结合具体实施例， 进一步阐述本发明。 应理解， 这些实施例 注明具体条件的实验方法 ,、通常按照常规条件， 或按照制 厂商所建 议的条件。 除非另外说明， 否则份数和百分比分别为重量份和重量百 分比。 具体实施方式

实施例 1 : Ν- [4- (3-氯 -4-羟基-苯基氨基） -7-曱氧基-喹唑啉- 6- 基] -巴豆酰胺的制备

在一个装有冷凝装置的烧瓶中， 加入 1.37g (5.6mmol)原料 (la- 1)4-羟基 -3-氯苯胺和 1.20g (5.7隱 ol) 原料（lb- 1) 6-硝基- 7- 曱氧基 -4-氯-喹唑啉以及 80ml异丙醇， 待原料溶解后回流反应 3h， 体系中析出大量黄色固体， 过滤， 将得到的固体用饱和碳酸氢钠水溶 液洗涤至 pH=8后将其真空干燥， 经鉴定， 确认该化合物为（Ic-1)。

在一个装有回流冷凝装置的烧瓶中加入 1.60g(3.77nimol)上述 (Ic-1)化合物， 1.05g (18.85mmol, 5eq)还原铁粉， 2ml冰醋酸和 40ml 曱醇， 于 85°C油浴中回流反应 2, 5h后， 过滤除去铁粉， 滤液用乙酸 乙酯稀释， 碳酸氢钠溶液洗涤， 水洗， 将有机相干燥浓缩， 得到黄色 固体， 经鉴定， 确认该化合物为（Id- 1)。

在一个 100ml 烧瓶中， 在冰浴冷却下加入 1.2g ( 3.04mmol ) 上 述（Id- 1)化合物， 0.8ml (6. lmmol, 2eq)三乙胺, 1.02ml (12.1隱 ol， 4eq)巴豆酰氯， 和 40ml THF， 逐渐升至室温反应， 3h后， 停止反应， 过滤， 将得到的固体水洗至中性， 干燥， 得到 1. Og 固体。 经鉴定， 确认该化合物为（1)， 收率 67%。

H'-NMR (400MHz, CDC1 ₃ +DMS0): δ 8.64 (s, 1Η) , 8.47 (s, 1H), 8.07 (d, 1H) , 7.51 (s, 1H)， 7.23 (s, 1H), 7.02-7.00 (d, 1H), 6.96-6.92 (m, 1H), 6.78-6.75 (d, 1H)， 5.97-5.93 (dd, 1H), 3.57 (s, 3H) , 1.84- 1.82 (d， 3H)。

ESI (+)： 385。 实施例 2: N- [4- (3-氯- 4-羟基-苯基氨基） -喹唑啉- 6-基]-巴豆酰胺

(ld-2)

在一个装有冷凝装置的烧瓶中， 加入 1.37g (5.6mmol)原料 (la- 1)4-羟基- 3-氯苯胺和 1.20g (5.7麵 ol)原料（lb- 2) 6-硝基- 4-氯 -喹唑啉以及 80ml 异丙醇， 待原料溶解后回流反应 3h， 体系中析出 大量黄色固体， 过滤， 将得到的固体用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤至 _P H=8后将其真空干燥。 经鉴定， 确认该化合物为（Ic- 2)。

在一个装有回流冷凝装置的烧瓶中加入 1.60g(3. ⁷ 7mmol)上述 (Ic-2)化合物， 1.05g(18.85匪。1， 5eq)还原铁粉， 2ml冰醋酸和 0ml 曱醇， 于 85°C油浴中回流反应 2.5h后， 过滤除去铁粉， 滤液用乙酸 乙酯稀释， 碳酸氢钠溶液洗涤， 水洗。 将有机相干燥浓缩， 得到黄色 固体。 经鉴定， 确认该化合物为（Id- 2)。

在一个 100ml 烧瓶中， 在冰浴冷却下加入 1.2g ( 3.04mmol ) 上 述（Id- 2)化合物， 0.8ml (6. lmmol, 2eq)三乙胺， 1.02ml (12.1醒 ol， 4eq)巴豆酰氯和 40ml THF, 逐渐升至室温反应， 3h后， 停止反应， 过滤， 将得到的固体水洗至中性， 干燥， 得到 l. lg 固体。 经鉴定， 确认该化合物为（2)， 收率 68%。

H'-NMR (400MHz, CDC1 ₃ +DMS0): δ 8.69 (s, 1Η), 8.57 (s, 1H), 8.10 (s, 3H) , 7.71-7.64 (d, 2H) , 6.99-6.94 (s, 1H), 6.78-6.75 (d, 1H) , 5.84-5.80 (d, 1H) ， 1.84 (d, 3H)。

ESI (+): 355。 实施例 3: N- [4- (3-氯- 4-羟基-苯基氨基）-喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 的制备

(ld-2) (3) 在一个 100ml烧瓶中， 在冰浴冷却下加入 l. ² g ( ³ .0½mol)上述 实施例 1 的（Id- 2)化合物， 0.8ml (6. lmmol, 2eq)三乙胺， 1.02ml (12. lmmol, 4eq)丙烯酰氯和 40ml THF, 逐渐升至室温反应， 3h后， 停止反应， 过滤， 将得到的固体水洗至中性， 干燥， 得到 l. lg固体。 经鉴定， 确认该化合物为（3) , 收率 68%。

H ¹ - NMR (400MHz, CDC +DMSO)： δ 8.63 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.14 (s, 3H) , 7.71-7.64 (dd, 2H) , 7.23 (s, 1H) , 7.06-7.02 (m, 2H) , 6.78-6.76 (d, 1H)， 5.92-5.89 (d, 1H)， 5.54-5.48 (m, 1H)。

ESI (+)： 341。 实施例 4 N- [4- (3-氯- 4-羟基-苯基氨基）- 7-曱氧基 -喹唑啉- 6- 基]-丙烯酰胺的制备

在一个 100ml烧瓶中， 在冰浴冷却下加入 1.2g (3.04隱 ol)上述 实施例 1 的（Id- 1)化合物， 0.8ml (6. lmmol, 2eq)三乙胺， 1.02ml (12. lmmol, 4eq)丙烯酰氯和 40ml THF, 逐渐升至室温反应， 3h后， 停止反应， 过滤， 将得到的固体水洗至中性， 干燥， 得到 l. lg 固体。 经鉴定， 确认该化合物为（4)， 收率 68%。 H ¹ -丽 R (400MHz, CDCI3+DMSO): δ 8.61 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.11 (s, 3H), 7.51 (s, 1H)， 7.23-7.22 (s, 1H) , 7.06-7.05 (d, 1H), 7.01- 6.99 (d， 1H)， 6.78-6.75 (d, 1H), 6.56-6.52 (dd, 1H) , 5.92-5.89 (dd, 1H) , 3.57 (s, 3H)。

ESI (+)： 371。 测试实施例 1: EGFR酪氨酸激酶抑制活性检测

酶反应底物 Poly(Glu,Tyr)4: 1 包被酶标板， T- PBS 洗板三次， 于 37。C烘箱中干燥； 每孔依次加入用反应緩沖液稀释的 ATP溶液、 梯度浓度的溶剂对照、 待测化合物或阳性对照 （Lapatinib, GS ) 、 以及受试酪氨酸激酶 （野生型 EGFR或 EGFR T790M/L858R ) , 启动反 应，置 37。C摇床反应 1 小时， T- PBS洗板三次；加入抗体 PY99于 37。C 反应 1 h， T-PBS洗板三次， 加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠的 IgG 于 37。C反应 l h， T- PBS洗板三次； 加入 0PD显色液， 室温避光反应 1-10 min; 加入 2 M H ₂ S0 ₄ 中止反应， 用可调波长式^：孔板酶标仪 VERSAmax测 A ₄₉₂ 值。 样品的抑制率通过下式求得： 化合物 0D值 -无酶对照孔 0D值

样品的抑制率％ = (1 - ) xl 00%

阴性对照 0D值-无酶对照孔 0D值 通过换算， 获得测试化合物对于野生型 EGFR或 EGFR T790M/L858R 的 IC ₅₀ 值：

测试结果表明： 本发明化合物对人 EGFR T790M/L858R 具有很强 的抑制作用， 对野生型 EGFR的抑制作用很弱， 具有良好的选择性。 测试实施例 2: 耐药性非小细胞肺癌钿胞增值抑制实验

将处于对数生长期的人非小细胞肺癌 H1975 细胞以约 5500 个 / 孔的密度接种于 96孔培养板， 180μ1/孔。 每个浓度设三复孔。 并设 相应浓度的溶媒对照及无细胞调零孔。 贴壁生长 24hr再加实施例化 合物 20μ1/孔， 细胞在 10% Hyclone胎牛血清、 37°C、 5%C0 ₂ 条件下 培养 72hr。 加入 50%的冷三氯乙酸 （TCA ) 50μ1， 4°C放置 1 小时， 固定细胞。 倾去液体， 用蒸馏水轻緩洗涤 5次， 空气中自然干燥。 加 入由 1 %冰醋酸配制的 SRB 4mg/ml 溶液 ΙΟΟμΙ/孔， 室温中染色 15 分钟。 弃上清液， 用 1%醋酸洗涤 5次， 空气中干燥。 每孔加入 150μ1 的 10 mM的 Tris 溶液 （ H 10.5 ) ,溶解结合的 SRB。 酶标仪 510nm 波长下测定 0D值，通过计算获得实施例化合物对于 H1975细胞的 IC ₅ 。 值介于 0.5- 5μΜ。 申请人已对本发明作了完整详细的说明。本文 中提及的所有文献 和出版物均通过援引将其全文或相关部分引入 本文。

显而易见， 在阅读了本发明的上述内容之后， 本领域技术人员可 以在不违背本发明的精神和范围的情况下对本 发明做出各种修饰、修 改和改变。这些等价形式同样落子本申请所附 权利要求书所限定的范 围。