苯胺取代的喹唑啉衍生物及其制备方法与应用 技术领域

本发明属于医药技术领域， 具体涉及苯胺取代的喹唑啉衍生物、 其药学上可接受的盐及其立体异构体， 以及其制备方法， 含有所述化 合物的药物组合物和药物制剂， 以及所述化合物在治疗过度增生疾病 和慢性阻塞性肺病以及制备治疗过度增生疾病 和慢性阻塞性肺病的药 物方面的应用。 背景技术

蛋白酪氨酸激酶是一类将磷酸基团从 ATP催化转移到位于蛋白质 底物的酪氨酸残基的酶， 其在正常细胞生长中起作用。 许多生长因子 受体蛋白通过酪氨酸激酶起作用， 并且通过该过程影响信号通路的传 导， 进而调节细胞生长。 然而， 在某些条件下， 这些受体或者突变或 者过量表达， 变得异常， 引起细胞繁殖不受控制， 导致肿瘤生长， 最 终引发熟知的疾病——癌。 生长因子受体蛋白酪氨酸激酶抑制剂通过 抑制上述磷酸化过程， 起到治疗癌和其他特征为非控制的或异常细胞 生长的疾病。

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR)是一种 广泛分布于人体各组织细胞膜上的多功能糖蛋 白， 是鸟类成红细胞白 血病病毒 (avian erythroblastic leukemia viral, v-erb-b)致癌基因同源体。 人 EGFR/HERl/ErbB-1 与 HER2 (human epidermal growth factor receptor-2)/ErbB-2/Teu/pl 85 , HER3/ErbB-3 , HER4/ErbB-4 等被归入 HER/ErbB家族， 同属于蛋白酪氨酸激酶 (PTKs)。 临床研究表明， EGFR 等在上皮来源的肿瘤， 如头颈部鳞状细胞癌、 乳腺癌、 直肠癌、 卵巢 癌、 前列腺癌、 非小细胞肺癌等多种肿瘤中都过表达。 Pan-HER 酪氨 酸激酶抑制剂通过与 ATP 竟争性结合胞内区激酶催化位点， 阻断分子 内酪氨酸的自身磷酸化， 阻断酪氨酸激酶活化， 抑制 HER家族激活， 从而抑制细胞周期进程、 加速细胞凋亡发挥治疗作用。

EGFR与配体结合后， 与 HER家族亚型形成二聚体， 然后与 ATP 结合激活 EGFR 自身酪氨酸激酶活性， 使胞内激酶区的数个酪氨酸位 点发生自身磷酸化。 Pan-HER 酪氨酸激酶抑制剂通过同时作用于 EGFR、 HER2/4 , 抑制 HER家族激活， 起到良好的抑制肿瘤生长的作 用。

研究表明， Pan-HER酪氨酸激酶不可逆抑制剂除了有效抑制 EGFR 夕卜， 还对 HER2/4具有抑制作用， 这种对 HER/ErbB家族均有不可逆抑 制作用的药物除了提高了药物活性外， 还减少了耐药性的产生， 对 erlotinib耐药的 H1975细胞系具有显著抑制作用。

目前上市的药物包括选择性 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼 (gefitinb, Iressa, ZD1839)、 埃罗替尼 (erlotinib, Tarceva, OSI-774)以及 EGFR/HER2 双重抑制剂拉帕替尼 （Lapatinib, Tykerb, GW572016), 结 构如下所示。 以上三个药物均为可逆性 EGF受体酪氨酸磷酰化激酶抑 制剂。 研究发现， 某些肿瘤初始对其产生良好的治疗反应， 然而治疗 几个月后又出现疾病进展， 产生天然或继发性耐药。

Gefitinb erlotinib Lapatinib 据文献 ( Bioorganic & Medicinal Chemistry (2008) 16 page 3482-3488 ) 报道， 上市药物例如吉非替尼和埃罗替尼已经在临床 广泛 使用 , 晚期 NSCLC ( non-small cell lung cancer, 非小细胞性肺癌 ) 长 期治疗后， 可发生获得性耐药， 影响治疗效果。

据认为，可逆性 EFG受体酪氨酸激酶抑制剂与 ATP竟争着与 EFG 受体酪氨酸激酶结合， 由于细胞内 ATP的浓度较高 （mM级） ， 使体 外测试表现出高活性的可逆性 EGF受体酪氨酸激酶抑制剂难以在动物 病理模型上显效。 而不可逆型的 EGF受体酪氨酸激酶抑制剂不与 ATP 成竟争关系， 因而预期不可逆型的 EGF受体酪氨酸激酶抑制剂可能会 具有较好的体内活性。

W097/38983公开了一类不可逆的 EGF受体酪氨酸激酶抑制剂， 这类抑制剂在喹唑啉的 6-位引入一个 Michael受体， 使之与 EGF受体 酪氨酸激酶活性中心口袋壁上的半胱氨酸 （ Cys773 ) 上的 -SH 发生 Michael加成反应。并且，这类抑制剂的活性与� �们与半胱氨酸上的 -SH 发生 Michael加成反应的难易程度成正相关的构效关� �。

DE 10042061 A1公开了一类在喹唑啉的 -7位具有内酯结构的 4-苯 胺喹唑啉衍生物， 据认为其对由酪氨酸激酶介导的信号转导有抑 制活 性。

据文献 （ Adv Ther (201 1) 28(2) p. 1-8 ) 报道， PF-299 (Pfizer)和 Afatinib (BIBW2992) ( Boehringer Ingelheim ) 均处于临床三期研究阶 段， Neratinib (HKI292) 处于临床二期研究阶段， 据认为这些化合物 均是不可逆酪氨酸激酶抑制剂， 可能克服 EGFR抗性。

据文献 ( IDrugs (2004) 7(1 ) p.58-63 ) 报道， Canertinib (CI-1033) 处于临床二期研究阶段， 对一些肿瘤类型具有活性， 并在实验模型中 无毒性。 C nertinib (CI-1033)结构如下：

Canertinib (CI-1033)

本发明人在开发具有优良的抗肿瘤作用、 减少耐药性产生并同时 具有良好耐受性的药物时， 发现了一类具有 Pan-HER不可逆抑制作用 的 P奎。坐啉 (汁生物。

发明内容

因此， 本发明提供下述通式 （I ) 所示的化合物、 其药学上可接受 的盐以及它们的立体异构体： 其中，

R ¹ 选自未被取代或被 1 至 2个取代基 取代的以下基团： 6- 10 元并环 Co. ₆ 烷基、 7-10元螺环 C _G . ₆ 烷基或 7-10元桥环 Co.6烷基， 其中 所述并环、 螺环或桥环中的 1〜3个碳原子可以被 1〜3个相同或不同的 选自 0、 S(0) _m 、 N(H) _m 、 NCH ₃ 和 C(O)的杂原子和 /或基团置换， 但置 换后的环中 O和 C(O)互不相邻，

Q,选自下列一组基团： 素， 羟基， 氨基， 羧基， 氰基， d_ ₆ 烷 基， 烷氧基， d. ₆ 烷基胺基， 二 (C^烷基)胺基， Ci— ₆ 烷基羰氧基， d. ₆ 烷基酰胺基， （^_ ₆ 烷基磺酰基， d. ₆ 烷基亚磺酰基， d. ₆ 烷基磺酰胺 基和 C ₃ _ ₈ 环烷基；

R ² 选自氢， 未被取代或被 1 至 2个取代基 Q ₂ 取代的 d. ₆ 烷基或 Ci _-6 烷氧基， 被取代基 Q ₂ 取代的曱酰基或 N(H) _m ，

Q ₂ 选自下列一组基团： 卤素， 羟基， 氨基， 羧基， 氰基， C,. ₆ 烷 基， CL ₆ 烷氧基， d. ₆ 烷基胺基， 二 (d. ₆ 烷基)胺基， d_ ₆ 烷基羰氧基， C ₆ 烷基酰胺基， ₆ 烷基磺酰基， d. ₆ 烷基亚磺酰基， d. ₆ 烷基磺酰胺 基， C ₃ . ₈ 环烷基， 不饱和的 C ₅ . ₇ 环烃基以及饱和或不饱和的 3-8元杂 环基， 其中所述（： ₃ _ ₈ 环烷基、 不饱和的 C ₅ . ₇ 环烃基以及饱和或不饱和 的 3-8元杂环基可以进一步被 1至 2个取代基 Q ₃ 取代，

Q ₃ 选自下列一组基团： 卤素， 羟基， 氨基， 羧基， 氰基， d. ₆ 烷 基， d- ₆ 烷氧基， d. ₆ 烷基胺基， 二 (C^ ₆ 烷基)胺基， C ₆ 烷基羰氧基，

C^ ₆ 烷基酰胺基， C,. ₆ 烷基磺酰基， ^ ₆ 烷基亚磺酰基， _ ₆ 烷基磺酰胺 基和 素取代的 ₆ 烷氧基；

R ³ 选自氢， 1¾素， 羟基， 氰基， 硝基， Ci. ₆ 烷基， d. ₆ 烷氧基， 卤 素取代的 d. ₆ 烷基或 d. ₆ 烷氧基， d.6烷基羰氧基， C^ ₆ 烷基酰胺基， C,_ ₆ 烷基磺酰基， d_ ₆ 烷基亚磺酰基或 烷基磺酰胺基；

R ⁴ 、 R ⁵ 和 R ⁶ 各自独立地选自氢， 卤素， C _1-6 烷基， C _1-6 烷氧基， 卤素取代的 烷基或 C^ ₆ 烷氧基， C^ ₆ 烷基胺基或二 (C _{1 -6} 烷基)胺基； L选自共价键, 0， S(0) _m , N(H) _m , NCH^ C(O);

n选自 1 , 2或 3; 和

m选自 0， 1或 2。

本发明还提供含有所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或其 立体异构体的药物组合物。

本发明还提供含有所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或其 立体异构体以及药用载体的药物制剂。

本发明还提供所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或其立体 异构体以及含有所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或其立体异 构体的药物组合物作为治疗过度增生疾病和慢 性阻塞' f生肺病的药物。

本发明还提供所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或其立体 异构体以及含有所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或其立体异 构体的药物组合物在制备治疗过度增生疾病和 慢性阻塞性肺病的药物 方面的应用。

本发明还提供治疗过度增生疾病和慢性阻塞性 肺病的方法， 包括 给予有需要的对象有效量的所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐 或其立体异构体或者含有所述通式 (I)化合物、 其药学上可接受的盐或 其立体异构体的药物组合物的步骤。

本发明还提供所述通式 (I)化合物的制备方法， 所述方法包括下列 步骤：

反应流程：

原料 1 中间体 1 中间体 2

原料 3

式 （ I ) 化合物

其中， I ¹ 、 R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 L和 n如前文所定义； 原料 1 按照 US 2005/0250761 A1 中提供的方法合成， 原料 2 =R ^! -LH; 原料 3 =R ² CH=CH-C(0)C1或者 R ² CH=CH-COOH,

(1) 将原料 2溶于非质子极性有机溶剂中， 在碱存在下与原料 1反应， 得到中间体 1;

(2) 使中间体 1任选在酸存在下与还原剂反应得中间体 2; 以及

(3) 将中间体 2溶于有机溶剂中， 在有机碱存在下与原料 3反应， 得到 式 （I) 化合物。

在本发明中， 术语"卤素"是指氟、 氯、 溴或碘。

在本发明中， 术语 "C^烷基"指含有 1-6个碳原子的直链或支链 烷基基团， 其实例包括但不限于例如甲基、 乙基、 正丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基、 正戊基、 异戊基、 2-曱基丁基、 新 戊基、 1-乙基丙基、 正己基、 异己基、 4-甲基戊基、 3-曱基戊基、 2-曱 基戊基、 1-曱基戊基、 3,3-二曱基丁基、 2,2-二曱基丁基、 1,1-二曱基丁 基、 1,2-二曱基丁基、 1,3-二曱基丁基、 2,3-二曱基丁基、 2-乙基丁基、 1-曱基 -2-曱基丙基等。

在本发明中， 术语" d_ ₆ 烷氧基 "指 " _ ₆ 烷基 -0-" 基团， 其中的 CL ₆ 烷基如前文所定义； 其实例包括但不限于例如曱氧基、 乙氧基、 丙 氧基、 异丙氧基、 丁氧基、 异丁氧基、 叔丁氧基、 仲丁氧基、 戊氧基、 新戊氧基、 己氧基等。

在本发明中， 术语 "C ₃ . ₈ 环烷基"指含有 3〜8个例如 3、 4、 5、 6、 7或 8个、优选 3〜6个例如 3〜5个碳原子的单环饱和碳环基团， 其实例 包括但不限于例如环丙基、 环丁基、 1 -曱基环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 环辛基等。

在本发明中， 术语" .6烷基胺基" 指 " . ₆ 烷基- NH-" 基团， 其 中的 C^ ₆ 烷基如前文所定义； 其实例包括但不限于例如曱胺基、 乙胺 基、 丙胺基、 异丙胺基、 丁胺基、 异丁胺基、 叔丁胺基、 仲丁胺基、 戊胺基、 新戊胺基、 己胺基等。

在本发明中， 术语"二 (d. ₆ 烷基)胺基" 指 "(d. ₆ 烷基 ) ₂ -N-" 基团， 其中的两个 C^ ₆ 烷基可以相同或不同， 分别如前文所定义； 其实例包 括但不限于例如二曱胺基、 二乙胺基、 二丙胺基、 二丁胺基等。

在本发明中， 术语" CL ₆ 烷基羰氧基"、 "d— ₆ 烷基酰胺基"、 "d_ ₆ 烷 基磺酰基"、 "d. ₆ 烷基磺酰胺基 "以及 "C^ ₆ 烷基亚磺酰基"分别指 "d. ₆ 烷基 -C(0)0-，， 、 "C _{1 -6} 烷基 -C(0)NH-，， 、 "C _{1 -6} 烷基 -S0 ₂ -，， 、 "C, _-6 烷基 -S0 ₂ NH-'， 和 "d. ₆ 烷基 -SO-" 基团， 其中的 d. ₆ 烷基如前文所定 义。

在本发明中， 术语" 6-10 元并环 "是指由至少两个环状结构彼此共 用两个相邻的原子连接起来形成的含有 6-10个碳原子的饱和或不饱和 的稠环体系， 其中的环碳原子可以被 1〜3 个相同或不同的选自 0、 S(0) _m 、 N(H) _m 、 NCH ₃ ^ C(O) 的杂原子和 /或基团置换， 但置换后的环 中 O和 C(O)互不相邻。 其实例包括但不限于例如 5，6-二氢咪唑 [ 1.2-a] 吡嗪 -7(8H)-基、 5，6-二氢 -1，7-萘啶 -7(8H)-基、 5H-吡咯 [3.4-b]吡啶 -6(7H)- 基、 7,8-二氢吡啶 [4.3-d]嘧啶 -6(5H)-基、 2,3，6，7-四氢 -1H-吡唑 [4.3-c]吡 啶 -5(4H)-基、 6，7-二氢噻唑 [5.4-c]吡啶 -5(4H)-基、 3-曱基 -6,7-二氢 -3H- 吡唑 [4.5-c]吡啶 -5(4H)-基， 2-曱基六氢环戊并 [c]吡咯 -5-基等。

在本发明中， 术语" 7-10 元螺环 "是指由至少两个环共享一个原子 形成的含有 7- 10个碳原子的饱和或不饱和的稠环体系， 其中的环碳原 子可以被 1 ~3 个相同或不同的选自 0、 S(0) _m 、 N(H) _m 、 NCH ₃ 和 C(O) 的杂原子和 /或基团置换， 但置换后的环中 0和 C(O)互不相邻。 其实例 包括但不限于例如 6-氮螺 [2.5]辛烷 -6-基、 7-氮螺 [3.5]壬烷 -7-基、 8-氮 螺 [4.5]癸烷 -8-基、 1 -曱基 - 1 ,7-二氮螺 [4.4]壬烷 -7-基、 2-甲基 -2，6-二氮螺 [3.4]辛烷 -6-基、 6-氮螺 [3.4]辛烷 -6-基、 2-氧杂 -7-氮螺 [4.5]癸烷 -7-基、 2-氧杂 -8-氮螺 [4.5]癸烷 -8-基、 2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷等。

在本发明中， 术语" 7-10 元桥环 "是指任意两个环共用两不直接相 连的原子形成的含有 7- 10个碳原子的饱和或不饱和的稠环体系， 其中 的环碳原子可以被 1〜3个相同或不同的选自 0、 S(0) _m 、 N(H) _m 、 NCH ₃ 和 C(O)的杂原子和 /或基团置换， 但置换后的环中 0和 C(O)互不相邻。 其实例包括但不限于例如（l S,4S)-2-甲基 -2-氮双环 [2.2.1 ]己烷、 2-氮双 环 [2.2.1 ]庚烷、 8-曱基双环 [3.2.1 ]辛烷、 3-氧杂 -8氮双环 [3.2.1 ]辛烷、 2- 氮双环 [2.2.2]辛烷、 7-氮双环 [2.2.1 ]庚烷、 3-氮双环 [3.2.1 ]辛烷、 3-氮双 环 [3.3.2]癸烷、 7-氧杂双环 [2.2.1 ]庚烷、 8-氧杂双环 [3.2.1 ]辛烷等。

在本发明中， 术语 "不饱和的 C _5-7 环烃基" 指含有 5~7个例如 5、 6或 7个碳原子的单环不饱和碳环基团，其实例包� �但不限于例如环戊 烯基、 环己烯基、 环己二烯基、 环庚烯基、 环庚二烯基、 环庚三烯基 等。

在本发明中， 术语" 3-8元杂环基" 是指由 3-8个例如 3、 4、 5、 6、

7或 8个、 优选 5~8个碳原子和选自氮、 氧和硫的杂原子构成的环状体 系， 其实例包括但不限于例如下列环形成的基团： 氮杂环丙烷、 2H-氮 杂环丙烷、 二氮杂环丙烷、 3H-二氮杂环丙烯、 氮杂环丁烷、 1 ,2-二氮 杂环丁烷、 氮杂环丁二烯、 1，2-二氮杂环丁烯、 吡咯、 二氢吡咯、 吡咯 烷、 咪唑、 4,5-二氢咪唑、 咪唑烷、 吡唑、 4，5-二氢吡唑、 吡唑貌、 1 ,2,3- 三唑、 1 ,2,4-三唑、 四唑、 吡 、 2-吡啶酮、 4-吡啶酮、 哌 ¹ 定、 。达。秦、 嘧啶、 吡嗪、 哌嗪、 1，2，3-三嗪、 1 ,2,4-三嗪、 1 ,3,5-三嗪、 1 ,2,4,5-四嗪、 氮杂环庚三烯、 1，2-二氮杂环庚三烯、 1，3-二氮杂环庚三烯、 1 ,4-二氮杂 环庚三烯、 氮杂环辛四烯、 1,4-二氢 -1,4-二氮杂环辛三烯、 环氧乙烷、 二氧杂环丙烷、 硫杂环丙烷、 氧杂环丁烷、 1,2-二氧杂环丁烷、 硫杂环 丁烷、 1，2-二石 ϋ杂环丁烯、 呋喃、 四氢呋喃、 噻吩、 2，5-二氢噻吩、 四 氢噻吩、 1,3-二氧杂环戊烷、 1,3-二氧杂环戊烯 -2-S同、 1,2-二硫杂环戊 烯、 1,3-二硫杂环戊烷、 2Η-吡喃、 2Η-吡喃 -2-酮、 3,4-二氢 -2Η-吡喃、 4Η-吡喃、 四氢吡喃、 4Η-吡喃 -4-酮、 1,4-二氧杂环己二烯、 1，4-二硫杂 环己二烯、 1,4-氧硫杂环己二烯、 1,4-二氧杂环己烷、 1,3-二氧杂环己烷、 1,3-氧硫杂环己烷、 氧杂环庚三烯、 硫杂环庚三烯、 1，4-二氧杂环辛三 烯、 氧氮杂环丙烷、 "恶唑、 4，5-二氢 ¹¹ 恶唑、 异 ¹¹ 恶唑、 4，5-二氢异 ^w 恶唑、 2，3- 二氢异 ^ff 恶唑、 1,2,3-恶二唑、 l，2,5-^ 二唑、 噻唑、 4,5-二氢噻唑、 异噻 唑、 1，2，3-噻二唑、 1，2,4-噻二唑、 1,3，4-噻二唑、 2H-1,2- ^P 恶嗪、 4H-1，2-^ 嗪、 6H-1,2-嗝嗪、 2H-1,3-恶嗪、 4H-l,3-恶嗪、 5，6-二氢 -4H-1，3- "恶嗪、 6H-l,3- ^ff 恶嗪、 2Η-1,4- ^Ρ 恶嗪、 4H-1,4 恶嗪、 2H-1,3-噻嗪、 4H-1，3-噻嗪、 5,6-二氢 -4H-1,3-噻嗪、 6H-1，3-噻嗪、 2H-1,4-噻嗪、 4H-1,4-噻嗪、 吗啉 等。

本发明式 （I)化合物可以以游离的形式或其药学上可接� ��的盐的 形式使用。 本发明式 （I) 化合物的药学上可接受的盐包括在碱性基团 部位 （如氨基等） 形成的盐以及在酸性基团部位 （如羟基、 羧基等） 形成的盐。 在碱性基团部位形成的盐包括与无机酸形成的 盐， 如盐酸 盐， 氢溴酸盐， 硫酸盐等； 与有机羧酸形成的盐， 如酒石酸盐， 曱酸 盐， 乙酸盐、 乳酸盐， 柠檬酸盐， 三氯乙酸盐， 三氟乙酸盐等； 与磺 酸形成的盐， 如曱磺酸盐， 苯磺酸盐， 对-曱苯磺酸盐， 萘磺酸盐等； 在酸性基团部位形成的盐包括与碱金属如钠， 钾等形成的盐； 与碱土 金属如钙， 镁等形成的盐； 铵盐； 以及与含氮有机碱形成的盐， 所述 有机碱包括但不限于例如三曱基胺， 三乙基胺， 三丁基胺， 吡啶， Ν,Ν- 二曱基苯胺， Ν-甲基哌啶， Ν-曱基吗啉， 二乙基胺， 二环己基胺， 普 鲁卡因， 二苄基胺， Ν-苄基 -β-苯乙基胺， 1-二苯羟曱胺， Ν,Ν'-二苄基 亚乙基二胺等。

本发明式 (I)化合物包括所有可能的光学异构体和非对映 异构体混 合物和纯的或部分纯的化合物。 本发明包括这些化合物的所有立体异 构形式。

本发明式 (I)化合物含有烯烃双键， 除非特别说明， 本发明包括其 顺式异构体和反式异构体。

本发明式 (I)化合物可以以互变异构体形式存在， 各互变异构体及 其混合物都包括在本发明范围内。 在本发明通式 (I)化合物的一个优选实施方案中，

R ¹ 选自未被取代或被 1 至 2个取代基 取代的以下基团： 6- 10 元饱和并环 C。_ ₄ 烷基、 7- 10元饱和螺环 C _Q . ₄ 烷基或 7- 10元饱和桥环 Q 烷基， 其中所述并环、 螺环或桥环中的 1〜3个碳原子可以被 1〜3个相 同或不同的选自 0、 S(0) _M 、 N(H) _M 、 NCH ₃ 和 C(O) 的杂原子和 /或基团 置换， 但置换后的环中 O和 C(O)互不相邻，

选自下列一组基团： [¾素， 羟基， 氨基， 羧基， 氰基， C _M 烷 基， CM烷氧基， d. ₄ 烷基胺基， 二 (d. ₄ 烷基)胺基， CM烷基羰氧基， d. ₄ 烷基酰胺基， CM烷基磺酰基， d. ₄ 烷基亚磺酰基， C _M 烷基磺酰胺 基和 C ₃ — ₆ 环烷基； . .

R ² 选自氢， 未被取代或被 1 至 2个取代基 Q ₂ 取代的 CM烷基或 d. ₄ 烷氧基， 被取代基 Q ₂ 取代的曱酰基或 N(H) _M ,

Q ₂ 选自下列一组基团： 卤素， 羟基， 氨基， 氰基， C _M 烷基， CM 烷氧基， C _M 烷基胺基， 二 (d. ₄ 烷基)胺基， CM烷基羰氧基， C _M 烷基 酰胺基， CM烷基磺酰基， d. ₄ 烷基亚磺酰基， CM烷基磺酰胺基， C^ ₆ 环烷基， 不饱和的 C ₅ 环烃基以及饱和或不饱和的 5-8元杂环基， 其中 所述 Q ^环烷基、不饱和的 C ₅ _ ₇ 环烃基以及饱和或不饱和的 5-8元杂环 基可以进一步被 1至 2个取代基 Q ₃ 取代，

Q ₃ 选自下列一组基团： 鹵素， 羟基， 氨基， 氰基， d. ₄ 烷基， d. ₄ 烷氧基， C _M 烷基胺基， 二 (C _M 烷基)胺基， d. ₄ 烷基羰氧基， C _M 烷基 酰胺基， C _M 烷基磺酰基， C _M 烷基亚磺酰基， C _M 烷基磺酰胺基和卤 素取代的 C _M 烷氧基； R ³ 选自！ ¾素， 氰基， 硝基， C _M 烷基， CM烷氧基， |¾素取代的 CM烷基或 CM烷氧基， C _M 烷基羰氧基， C _M 烷基酰胺基， d_ ₄ 烷基磺 酰基， d. ₄ 烷基亚磺酰基或 C _M 烷基磺酰胺基；

R ⁴ 、 R ⁵ 和 R ⁶ 各自独立地选自氢， 1¾素， C _M 烷基， CM烷氧基， 鹵素取代的 C _M 烷基或 CM烷氧基， C _M 烷基胺基或二 (CM烷基)胺基；

L选自共价键， 0, S(0) _m 或 N(H) _m ;

n选自 1， 2或 3; 和

m选自 0, 1或 2。

在本发明通式 (I)化合物的另一个优选实施方案中，

R ¹ 选自未被取代或被 1 至 2 个取代基 取代的下列基团；

P , 其中环上的 1~3个碳原子可以被 1~3个 相同或不同的选自 0、 S(0) _m 、 N(H) _m 、 NCH ₃ 和 C(O) 的杂原子和 /或基 团置换， 但置换后的环中 O和 C(O)互不相邻，

p选自 0， 1或 2，

选自下列一组基团： 卤素， 羟基， 氨基， 羧基， d_ ₄ 烷基， d. ₄ 烷氧基， d. ₄ 烷基胺基， 二 (C _M 烷基)胺基和 C ₃ . ₆ 环烷基；

R ² 选自氢， 未被取代或被 1至 2个取代基 Q ₂ 取代的 C _M 烷基， 被 取代基 Q ₂ 取代的曱酰基或 N(H) _m ，

Q ₂ 选自下列一组基团： 鹵素， 羟基， 氨基， d. ₄ 烷基， C _M 烷氧基， C _M 烷基胺基， 二 (C _M 烷基)胺基， C _M 烷基羰氧基， C _M 烷基酰胺基， d. ₄ 烷基磺酰基， C _M 烷基磺酰胺基， 环烷基以及饱和或不饱和的 5-8元杂环基， 其中所述 环烷基、 饱和或不饱和的 5-8元杂环基可 以进一步被 1至 2个取代基 Q ₃ 取代，

Q ₃ 选自下列一组基团： 鹵素， 羟基， 氨基， d. ₄ 烷基， d_ ₄ 烷氧基， d- ₄ 烷基胺基， 二 (C _M 烷基)胺基， d. ₄ 烷基羰氧基， d. ₄ 烷基酰胺基， CM烷基磺酰基， CM烷基磺酰胺基和 素取代的 CM烷氧基；

R ³ 选自氟， 氯， 溴， CM烷基或 d. ₄ 烷氧基；

R ⁴ 、 R ⁵ 和 R ⁶ 各自独立地选自氢， 氟或氯；

L选自共价键， 0,

n选自 1 , 2或 3; 和

m选自 0, 1或 2。

在本发明通式 (I)化合物的又一个优选实施方案中， R ¹ 选自未被取

p选自 0， 1或 2,

选自下列一组基团： [¾素， 氨基， C _M 烷基， CM烷基胺基和二 (d. ₄ 烷基)胺基；

R ² 选自氢， 未被取代或被 1至 2个取代基 Q ₂ 取代的甲基或乙基， 被取代基 0 ₂ 取代的甲酰基或 N(H) _M ,

Q ₂ 选自下列一组基团：

( 1 ) 1¾素， 羟基， 氨基， （ _1-4 烷氧基， C _1-4 烷基胺基， 二 (C _{1 -4} 烷 基)胺基， 乙酰氧基， 乙酰胺基， 曱基磺酰基和曱基磺酰胺基，

( 2 ) 环丙基， 环戊基， 哌啶基， 哌嗪基， 吗啉基， 吡咯烷基， 呋 喃基， 噻吩基， 吡咯基， 咪唑基， 噻唑基， 异噻唑基， 唑基， 吡啶基， 吡嗪基和嘧啶基， 所述这些 Q ₂ 基团可以进一步被 1 至 2个取代基 Q ₃ 取代， '

Q ₃ 选自下列一组基团： 卤素， 羟基， 氨基， CM烷基， d. ₄ 烷氧基， d. ₄ 烷基胺基， 二 (C _M 烷基)胺基， ！¾素取代的。 烷氧基， 乙酰氧基， 乙酰胺基， 曱基磺酰基和曱基磺酰胺基；

R ³ 选自氟或氯； R ⁴ 、 R ⁵ 和 R ⁶ 为氢;

L选自共价键或 0;

n为 2; 和

m选自 0， 1或 2。

本发明通式（I)化合物的再一个优选实施方案� ��，

或

R ² 选自氢， 未被取代或被 1至 2个取代基 Q ₂ 取代的曱基或乙基 Q ₂ 选自下列一组基团：

( 1 ) 曱氧基和二 (d. ₄ 烷基)胺基， ( 2 ) 哌啶基， 哌嗪基， 吗啉基， 吡咯烷基， 呋喃基， 环丙烷基， 环戊烷基， 吡咯基， 吡啶基， 嘧啶基和噻唑基， 所述这些 Q ₂ 基团可以 进一步被 1至 2个取代基 Q ₃ 取代，

Q ₃ 选自下列一组基团： 卤素， 羟基、 氨基， d. ₄ 烷基， d— ₄ 烷氧基, d. ₄ 烷基胺基， 二 (d. ₄ 烷基)胺基和 1¾素取代的 C _M 烷氧基；

R ³ 选自氟或氯；

R ⁴ 、 R ⁵ 和 R ⁶ 为氢；

L选自共价键或 0; 和

n为 2。

I)化合物进一步优选的实施方案中， R ¹ 选自：

R ² 选自氢， 未被取代或被 1至 2个取代基 Q ₂ 取代的曱基或乙基， Q ₂ 选自下列一组基团： 曱氧基， 二曱胺基， 二乙胺基， 哌啶基， 哌。秦基和吗啉基；

R ³ 选自氟或氯；

R ⁴ 、 R ⁵ 和 R ⁶ 为氢;

L选自共价键或 O; n为 2。

在本发明通式 (I)化合物制备方法的一个实施方案中，本发明 通式（ I ) 化合物可以通过例如以下具体步骤来制备：

反应流程如下：

上述反应流程中， R R ² 、 R ³ 、 R ⁴ 、 R ⁵ 、 R ⁶ 、 L和 n如前文所定 义；原料 1按照 US 2005/0250761 A1中提供的方法合成；原料 2 -Ri-LH; 原料 3 =R ² CH=CH-C(0)C1或者 R ² CH=CH-COOH ,

1、 中间体 1的制备

( 1 ) 将原料 2 溶于非质子性极性有机溶剂 （例如 THF (四氢呋喃） 、 DMF (二曱基曱酰胺） 、 乙腈或二氧六环等） 中， 搅拌下向其中分 批加入碱（如 NaH ,碳酸钾、三乙胺或 DIEA (二异丙基乙胺）等）， 然后向该混合物中加入原料 1 固体， 室温或加热回流反应数小时。 (2) 将反应液冷却至室温， 加水， 过滤， 将滤饼真空干燥得中间体 1 ; 或者将反应液冷却至室温， 加水， 用有机溶剂 （例如乙酸乙酯、 二 氯曱烷或氯仿等） 萃取， 将有机层蒸干后得到中间体 1。

2、 中间体 2的制备

( 1) 将中间体 1分批加到含有酸 （如醋酸或稀盐酸等） 或不含酸的溶剂

(如乙醇或 THF等） 中， 然后加入还原剂 （例如铁粉， 鋅粉、 钯 / 碳或兰尼镍等） ， 于室温或加热反应。

(2) 反应结束后， 将反应混合物冷至室温， 用有机溶剂 （如二氯曱烷， 乙酸乙酯或氯仿等）萃取， 将有机层蒸干， 所得粗品可进一步经柱 色谱分离 （硅胶柱或制备色谱柱） 得中间体 2。

3、 式 （I ) 化合物的制备

( 1 )将中间体 2溶于有机溶剂 （例如 THF、 二氯甲烷、 乙腈或 DMF 等） 中， 依次加入有机碱（如三乙胺或 DIEA等） 和原料 3 , 室温下搅 拌反应数小时； 或者将中间体 2， 原料 3和有机碱（例如 DIEA或三乙 胺等） 溶于有机溶剂 （如二氯甲烷、 DMF、 THF、 乙腈或 DMF等） 中， 加入缩合剂 （例如 HATU ( 2-(7-偶氮苯并三氮唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四曱基脲 六氟磷酸酯） 、 EDC ( 1 -乙基 -3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺） 或 DCC (二环己基碳二亚胺） 等） 。

(2)向反应混合物中加入水， 用有机溶剂 （例如二氯甲烷、 乙酸乙 酯或氯仿等） 萃取， 合并有机层， 蒸干后经柱色谱分离 （硅胶柱或制 备色谱柱） 得式 （I ) 化合物。 本发明通式 (I)化合物及其药学上可接受的盐以及它们的立 体异构 体可以经口服、 肠胃外 （静脉内、 肌肉内、 皮下或直肠等）、 经肺、 局 部等给药方式施用于哺乳动物， 例如人。 本发明化合物的日剂量可以 为大约 1至大约 1000 mg范围。

本发明式 (I)化合物或其药学上可接受的盐、 或它们的立体异构体 可以单独给药， 或者与其他治疗剂联合用药， 特别是与选自抗肿瘤剂 和免疫抑制剂的第二治疗剂组合用药， 所述第二治疗剂选自： 抗代谢 物， 包括但不仅限于例如卡培他滨、 吉西他滨等； 生长因子抑制剂， 包括但不仅限于例如帕唑帕尼、 伊马替尼等； 抗体， 包括但不仅限于 例如赫赛汀、 贝伐单抗等； 有丝分裂抑制剂， 包括但不仅限于例如紫 杉醇、 长春瑞滨、 多西他赛、 多柔比星等； 抗肿瘤激素类， 包括但不 仅限于例如来曲唑、 他莫西芬、 氟维司群等； 烷化剂类， 包括但不仅 限于例如环磷酰胺、 卡莫司汀等； 金属铂类， 包括但不仅限于例如卡 铂、 顺铂、 奥沙利铂等； 拓朴异构酶抑制剂， 包括但不仅限于例如拓 朴特肯等； 免疫抑制类， 包括但不仅限于例如依维莫司等。 待组合的 各成分可同时给药或依次顺序地分开用药， 以同一制剂形式或以分开 的不同制剂的形式联合给药。

本发明式 （I )化合物、 其药学上可接受的盐或其立体异构体可用 于治疗过度增生疾病和慢性阻塞性肺病， 过度增生疾病包括癌症和非 癌性疾病， 所述癌症选自： 脑瘤、 肺癌、 非小细胞性肺癌、 鳞状上皮 细胞、 膀胱癌、 胃癌、 卵巢癌、 腹膜癌、 胰腺癌、 乳腺癌、 头颈癌、 子宫颈癌、 子宫内膜癌、 结直肠癌、 肝癌、 肾癌、 食管腺癌、 食管鳞 状细胞癌、 实体瘤、 非霍奇金淋巴瘤、 中枢神经系统肿瘤 （神经胶质 瘤、 多形性胶质母细胞瘤、 胶质肉瘤） 、 前列腺癌或曱状腺癌； 非癌 性疾病为例如皮肤或前列腺的良性增生。

本发明还提供药物组合物， 它含有上面所述的本发明通式 (I)化合 物或其药学上可接受的盐、 或它们的立体异构体与一种或多种药用载 上可接受的盐、 或其立体异构体与一种或多种常规药用栽体和 /或稀释 剂混合来制备。 所述组合物可以制成临床上或药学上可接受的 任一剂 型， 以口服、 肠胃外、 经肺或者局部给药等方式施用于需要这种治疗 的患者。

用于口服给药时， 可将本发明通式 （I )化合物或其药学上可接受 的盐、 或它们的立体异构体配制成常规的固体制剂， 如片剂、 胶嚢剂、 丸剂、 颗粒剂、 粉剂等； 也可制成口服液体制剂， 如口服溶液剂、 口 服混悬剂、 糖浆剂等。 在制备口服制剂时， 可以加入适宜的填充剂、 粘合剂、 崩解剂、 润滑剂、 稀释剂等。 常用填充剂包括淀粉、 糖粉、 磷酸钙、 硫酸钙二水物、 糊精、 微晶纤维素、 乳糖、 预胶化淀粉、 甘 露醇等； 常用粘合剂包括羧曱基纤维素钠、 PVP-K30、 羟丙基纤维素、 淀粉浆、 曱基纤维素、 乙基纤维素、 羟丙曱纤维素、 胶化淀粉等； 常 用崩解剂包括干淀粉、 交联聚维酮、 交联羧甲基纤维素钠、 羧甲基淀 粉钠、 低取代羟丙基纤维素等； 常用润滑剂包括硬脂酸镁、 滑石粉、 十二烷基硫酸钠、 微粉硅胶等； 常用稀释剂包括水、 乙醇、 丙三醇等。

用于肠胃外给药时， 可按常规方法将本发明通式 （I )化合物或其 药学上可接受的盐、 或它们的立体异构体配制成注射剂， 包括注射液、 注射用无菌粉末与注射用浓溶液。 制成注射剂时， 可采用制药领域中 的常规方法生产， 可选用水性溶剂或非水性溶剂。 最常用的水性溶剂 为注射用水， 也可用 0.9 %氯化钠溶液或其他适宜的水溶液； 常用的非 水性溶剂为植物油， 例如供注射用大豆油， 其他还有乙醇、 丙二醇、 聚乙二醇等的水溶液等。 配制注射剂时， 可以不加入添加剂， 也可根 据药物的性质加入适宜的添加剂， 如渗透压调节剂、 pH值调节剂、 增 溶剂、 填充剂、 抗氧剂、 抑菌剂、 乳化剂、 助悬剂等。

用于经直肠、 肺或局部给药时， 可采用常规方法将本发明通式（ I ) 化合物或其药学上可接受的盐、 或它们的立体异构体配制成栓剂、 吸 入剂、 喷雾剂、 软膏剂、 乳膏剂、 凝胶剂、 散剂、 洗剂、 滴剂、 透皮 贴剂等。

实验证明， 本发明化合物具有优异的抗肿瘤作用， 预期对过度增 生疾病和慢性阻塞性肺病具有优良的治疗效果 ； 并减少了耐药' \ί的产 生； 另外， 本发明化合物制备工艺简单， 质量稳定， 易于进行大规模 工业生产。 具体实施方式

以下通过具体实施例， 对本发明的上述内容作进一步的详细说明。 但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下实 施例。 凡基于本发明上 述内容所能实现的技术均属于本发明的范围。

在实施例中， 所使用的原料化合物， 除作出特别说明的外， 均是市 售可得的， 获自景颜化工 （上海） 科技有限公司； 上海泰坦化学有限 公司； 上海达瑞精细化学品有限公司； 北京偶合科技有限公司； 郑州 泰基鸿诺药物科技有限公司； 四川广瀚生物技术有限公司； 韶远 （上 海） 化学科技有限公司； 阿法埃莎 （天津） 化学有限公司； TCI (上 海） 化成工业发展有限公司； 北京百灵威科技有限公司； 上海毕得医 药科技有限公司等公司。

实施例中， 缩写所代表的含义如下：

DMF代表二曱基曱酰胺

THF代表四氢呋喃

DIPEA/DIEA代表二异丙基乙胺

ΕΑ代表乙酸乙酯

EtOH代表乙醇

DCM代表二氯曱烷

MeOH代表曱醇

HATU代表 2-(7-偶氮苯并三氮唑) -Ν,Ν,Ν',Ν'-四甲基脲六氟磷酸酯 DCC代表二环己基碳二亚胺 EDC代表 1 -乙基 -3-(3-二曱基氨基丙基)碳酰二亚胺

DMAP代表 4-二曱氨基吡啶

I. 本发明化合物的制备实施例 按照 US 2005/0250761 A1合成 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6硝基 喹唑啉 _4-胺作为本发明化 料：

反流流程： 将 2-氨基 -4-氟苯曱酸、 醋酸和曱脒在 2-曱氧基乙醇存在下加热回 流反应， 得 7-氟 -3Η-喹唑啉 -4-酮。 将所得产物硝化得 7-氟 -6- 肖基 -3Η- 喹唑啉 -4-S同， 将其用二氯亚砜处理， 得 4-氯 -6硝基 -7-氟 -3Η-喹唑啉。 将所得产物溶于异丙醇中， 加入 4-氟 -3-氯苯胺， 得 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯 基)) -7-氟 -6硝基喹唑啉 -4-胺。 实施例 1 (Ε)-Ν-Γ7-(8-氧杂双环「3.2.11辛烷-3-基氣基)-4-^- 氯-4-氟苯胺 基)喹唑啉 -6-基 1-4- (哌啶 - 1 -基) -2-丁烯酰胺 (化合物 1 )的制备

(1) 7-(8-氧杂双环 [3.2.1]辛烷 -3-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-6-硝基 喹唑啉 -4-胺的制备

0 ₂ N-

冰浴下将 20 mL DMF加到含有 NaH (468 mg, 12 mmol)的圆底烧 瓶中 ,滴加 8-氧杂双环 [3.2.1]辛烷 -3-醇（1.0 g， 7.8 mmol)溶于 2 mL DMF 中的溶液， 搅拌 30 min, 然后分批加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6- 硝基喹唑啉 -4-胺（1.75 g, 5.2mmol), 自然升到室温反应过夜， 力口入 60mL-80mL水， 析出沉淀， 抽滤， 将所得固体真空干燥， 得 7-(8-氧杂 双环 [3,2,1]辛烷 -3-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-6-硝基喹唑啉 -4-胺 2.3 g, 产率 100%。

(2) 7-(8-氧杂双环 [3.2.1]辛烷 -3-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基))喹唑啉 -4,6-二胺

将 7-(8-氧杂双环 [3.2.1]辛烷-3-基氧基)-^(4-(3-氯-4-氟苯基))-6-硝 基喹唑啉 _4-胺 (2.3 g, 5.2 mmol) 溶于 120 mL冰醋酸与乙醇的混合溶液 (冰醋酸 /乙醇 = 1/3 ) 中， 然后加入铁粉 (2.04 g, 36.4 mmol), 自然升温 到室温， 反应过夜， 抽滤， 真空下除乙醇， 加入适量水， 用饱和碳酸 氢钠溶液中和至混合物呈中性， 用乙酸乙酯萃取， 将有机相浓缩得粗 产物， 将其用硅胶柱色谱提純 (DCM/甲醇 = 10/1 洗脱）, 得 7-(8-氧杂双 环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基） -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基）)喹唑啉 -4,6-二胺 500 mg, 产率 23%。

(3) (E)-N-[7-(8-氧杂双环 [3,2.1 ]辛烷 -3-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹 唑啉 -6-基] -4-溴 -2-丁烯酰胺的制备

将 7-(8-氧杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基))喹唑 啉 -4,6-二胺（500 mg, 1.2 mmol) 溶于 20 mL二氯曱烷中， 依次加入 976 mg三乙胺和 4-溴 -2-丁烯酰氯 (275 mg， 1.5 mmol), 室温下搅拌 12 h, 向反应混合物中加入适量水， 然后用乙酸乙酯萃取， 将有机相用无水 硫酸钠干燥， 浓缩， 得粗产物， 不经提纯将其直接用于下一步。

(4) (E)-N-[7-(8-氧杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹 唑啉 -6

将上一步产物（Ε)-Ν-[7-(8-氧杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹唑啉 -6-基] -4-溴 -2-丁烯酰胺溶于 20 mL 乙腈中，加入哌 啶（ 205 mg， 2.4 mmol ) 和碳酸铯（ 787 mg, 2.4 mmol ) ， 40°C下搅拌 反应 12 h, 向反应液中加入适量水， 用二氯曱烷萃取， 将有机相用无 水硫酸钠干燥， 浓缩， 经硅胶柱色谱（二氯曱烷 /曱醇 =5/1洗脱）纯化， 得 (E)-N-[7-(8-氧杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹唑 啉 _6-基] -4- (哌啶 -1-基) -2-丁烯酰胺 20 mg， 产率 3%。

分子式： C ₃ 。H ₃₃ C1FN ₅ 0 ₃

质谱 (m/e): 566.3 (M+1) 283.6 ( M/2 )

^! HNMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) 5 9.13(s, I H), 8.67 (s, I H), 8.10 (s, I H), 8.00 (d, I H), 7.54 (m, 2H), 7.18 (t， I H), 7.07 (m, I H), 6.22 (d, IH), 4.98 (m, I H), 4.60 (m, 2H)， 3.25 (m, 2H), 2.51 (m, 4H), 2.23 (m, 4H), 1.88-2.03 (m, 10H)。

实施例 2 (E)-N-『7-(7-氧杂双环「2.2.11庚

胺基)喹唑啉 -6-基 1-4- (哌啶 -1-基) -2-丁烯酰胺 (化合物 2)的制

7-(7-氧杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基氧基) -Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-6-硝基 喹唑啉 -4-胺的制备

冰浴下将 20 mL DMF加到含有 NaH(531 mg， 22 mmol)的圓底烧 瓶中， 向其中滴加 7-氧杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-醇（1.0 g, 8.8 mmol)溶于 2 mL DMF中的溶液，搅拌 30 min,然后分批加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- 氟 -6硝基喹唑啉 -4-胺（1.98 g， 5.9 mmol), 自然升到室温， 反应过夜， 加入 60mL-80mL水， 析出沉淀， 抽滤， 将滤饼真空干燥， 得 7-(7-氧杂 双环 [2.2.1]庚烷 -2-基氧基） -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基）)-6-硝基喹唑啉 -4-胺 2.5 g, 产率 100%。

(2) 7-(7-氧杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基))喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 7-(7-氧杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-6-硝 基喹唑啉 _4-胺 (2.5 g, 5.8 mmol) 溶于 120 mL冰醋酸与乙醇的混合溶液 (冰醋酸 /乙醇 =1/3 ) 中， 然后加入铁粉 (2.28 g， 40.7 mmol), 自然升温 到室温， 反应过夜， 抽滤， 真空下除乙醇， 加入适量水， 用饱和碳酸 氢钠溶液中和至混合物呈中性， 用乙酸乙酯萃取， 将有机相浓缩， 得 粗产物， 将其用硅胶柱色谱提纯 (DCM/曱醇 =10/1 洗脱）， 得 7-(7-氧杂 双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基氧基）-N-(4-(3-氯 -4-氟苯基））喹唑啉 -4，6-二胺 600mg, 产率 25%。

(3) (E)-N- [7-(7-氧杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹 唑啉 -6- -4-溴 -2-丁烯酰胺的制备

将 7-(7-氧杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基))喹唑 啉 -4,6-二胺 （600 mg, 1.5 mmol)溶于 20 mL二氯曱 '烷中，依次加入 1.21 g三乙胺和 4-溴 -2-丁烯酰氯 (366 mg， 2.0 mmol), 室温下搅拌 12 h， 向 反应液中加入适量水， 用乙酸乙酯萃取， 将有机层用无水硫酸钠干燥， 浓缩， 得粗产物。 该粗产物不经提纯直接用于下一步。

(4) (E)-N-[7-(7-氧杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹 唑啉 -6- -4- (哌啶- 1 -基) -2-丁烯酰胺的制备

将上一步产物（E)-N-[7-(7-氧杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹唑啉 -6-基] -4-溴 -2-丁烯酰胺溶于 20 mL 乙腈中，加入哌 啶 (255 mg， 3.0 mmol)和碳酸铯 (978 mg, 3.0 mmol), 40Ό下搅拌反应 12 h， 向反应液中加入适量水， 用二氯曱烷萃取， 将有机层用无水硫酸 钠干燥， 浓缩， 经硅胶柱色谱（二氯曱烷 /甲醇 =5/1 洗脱）纯化， 得 (E)-N-[7-(7-氧杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基氧基 )-4-(3-氯 -4-氟苯胺基)喹唑啉 -6-基] -4- (哌啶 - 1-基) -2-丁烯酰胺 25 mg， 产率 3%。

分子式： C ₂₉ H ₃₁ C1FN ₅ 0 ₃

质谱 (m/e): 552.2 (M+1) '

'HNMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.13(s， 1 Η)， 8.65 (s， 1 Η), 8.20 (s， 1 H), 7.97 (d, 1 H), 7.72 (s, 1H)， 7.54 (m, 1 H), 7.18 (m， 2H), 6.23 (d, 1 H), 4.80 (m, 2H), 4.64 (m, 1 H), 3.23 (m, 2H), 2.49 (m, 4H)， 2.20 (m, 2H), 1.88-2.03 (m 10H) o

实施例 3 (E)-N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-甲基 -2,7-二氮螺「4.51癸烷 -7- 基)喹唑啉 -6-基 1-4- (哌啶 -1 -基) -2-丁烯酰胺 (化合物 3)的制备

( 1 ) !^-(4-(3-氯-4-氟苯基))-7-(2-曱基-2，7-二氮螺[4.5]� ��烷-7-基)-6-硝基 喹唑啉 _4_胺的制备

C1 F

将 2-曱基 -2，7-二氮螺 [4.5]癸烷 (500 mg， 3.2 mmol), 碳酸钾（1.0 g， 7.2 mmol)和 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (560 mg, 1.7 mmol)溶于 20 mL乙腈中， 加热到 82°C反应 4h, 冷却至室温， 加入 30 mL水， 用乙酸乙酯萃取， 将有机层用无水石巟酸钠干燥， 过滤， 浓缩。 浓缩物经硅胶柱色谱 (二氯曱烷 /曱醇 =40/1洗脱)提纯， 得 N-(4-(3-氯 -4- 氟苯基 ))-7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 600 mg, 产率 75 %。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-曱基 -2，7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基)喹唑啉 -4,6-二胺

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基) -6- 硝基喹唑啉 -4-胺 (600 mg, 1.3 mmol)溶到 9 mL乙醇和 3 mL醋酸中， 加热到 80°C反应 2h， 反应结束后， 将溶剂蒸干， 用乙酸乙酯萃取， 将 萃取液用无水硫酸钠干燥， 浓缩至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2- 曱基 -2,7-二氮螺 [4,5]癸烷 -7-基)喹唑啉 -4,6-二胺 500mg， 产率 87 %。 (3) (E)-N-[4-(3-氯 -4氟苯胺基) -7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基)喹 唑啉 -6- -4-溴 -2-丁烯酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基)喹唑 啉 -4，6-二胺 (500mg, 1.1 mmol)和（E)-4-溴 -2-丁烯酰氯（l . lg, 6mmol)溶 于 20 mL THF中， 依次加入 2 mL DIPEA, 室温下搅拌 1 h， 向溶液中 加入 30 mL水， 用乙酸乙酯萃取， 合并有机层， 用无水硫酸钠干燥， 蒸干。 所得固体经硅胶柱色谱（二氯曱烷 /曱醇 =60/1 洗脱）提纯， 得 _(E )_ _N _[4-(3-氯 -4 氟苯胺基) -7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基)喹唑啉 -6-基] -4-溴 -2-丁烯酰胺 230 mg， 产率 36 %。

(4) (E)-N-[4-(3-氯 -4 氟苯胺基) -7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基)喹 唑啉 -6-基] -4- (哌啶 -1-基) -2-丁烯酰胺的制备

将 (E)-N-[4-(3-氯 -4氟苯胺基) -7-(2-曱基 -2,7-二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基) 喹唑啉 -6-基] -4-溴 -2-丁烯酰胺 (240 mg, 0.4 mmol), 啶 (70 mg, 0.8 mmol)和碳酸钾（1 10 mg， 0.8 mmol)溶于 20mL乙腈中， 于 50。C反应 8h, 反应结束后向反应混合物中加入适量水， 用乙酸乙酯萃取， 将有机层 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 将滤液浓缩。 浓缩物经硅胶柱色谱 (二氯曱 烷 /曱醇 =15/1 洗脱)提纯， 得 (E)-N-[4-(3-氯 -4 氟苯胺基) -7-(2-甲基 -2,7- 二氮螺 [4.5]癸烷 -7-基)喹唑啉 -6-基] -4- (哌啶 -1 -基) -2-丁烯酰胺 18 mg， 产率 8 %。

分子式： C32H39CIFN7O

质谱 (m/e): 592.3 (M+1), 296.6 ( M/2 )

^! HNMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.00(s, 1 Η), 8.74 (s, 1 H), 8.65 (s， 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.99 (d, 1 H), 7.58 (s， 1 H), 7.58 (s， 1 H), 7.08 (m, 2H), 6.16 (d, 1 H), 3.21 (d， 2H), 2.90-3.20 (m, 7H)， 2.46-2.78 (m， 5H)， 2.38 (s, 3H)， 1.28- 1.79 (m,12H)。

实施例 4 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基 V7-(8-甲基 -8-氮杂双环「3.2.11辛烷 -3-基 氧基)喹唑 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 4)的制备

(1) Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- ( 8-曱基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 8-曱基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-醇 (0.7 g， 5 mmol)溶于 20 mL DMF中 ,于冰浴并在 Ν ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠 (0.4 g, 10 mmol), 移至室温搅拌 lh， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基喹唑啉 -4-胺

(1.12 g, 3.3 mmol), 50°C搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用

EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8- 甲基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 560mg, 产 率 37%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基)

_4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧 基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (560 mg, 1.22 mmol)溶于 20 mL乙酸与乙醇混合 溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉 (343 mg， 6.12 mmol), 升温 至 70°C搅拌 lh， 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH , 加入 30 mL 水， 用 EA萃取， 将混合物用 l mol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA 萃取， 将有机相减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -8-氮杂欢环 [3.2.1]辛烷 -3-基氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 360 mg, 产率 69%。 (3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(8-曱基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基) 喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺的制备

将丙婦酸 (243 mg， 3.37 mmol)溶于 10 mL DMF中， 于冰浴下加入 DMAP(162 mg, 1.35 mmol), N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-甲基 -8-氮杂双 环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基）喹唑啉 -4，6-二胺（360 mg , 0.84 mmol)和 EDC( 193 mg, 1.01 mmol), 室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL 水， 用 EA 萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 残渣用乙醚洗涤， 得 _N -[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(8-甲基 -8-氮杂双环 [3.2.1 ]辛烷 -3-基氧基)喹 唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 54mg, 产率 13%。

分子式： C ₂₅ H ₂₅ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 482.2 (M+1), 241.6 ( M/2 )

'HNMR: (400MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.78 (s, 1Η), 9.55(s, 1H), 8.72 (s, 1H)， 8.52 (s, 1H), 8.14 (d， 1H), 7.80 (d, 1H), 7.41 (t, 1H)， 7.11 (s, 1H), 6.58 (m， 1H), 6.30 (d, 1H), 5.80 (d, 1H), 4.83 (m, 1H), 3.03 (m， 2H), 2.12 (s, 3H), 2.10 (m, 2H), 1.88 (m, 6H)。

实施例 5 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(8-甲基- 氣杂 -8-氮杂螺环 C4.51癸 烷 -3-基氧基)喹唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 5)的制备

(1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3-基 氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3-醇 (0.4 g, 2.5 mmol)溶于 60 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（0.4 g， 10 mmol), 移至室温搅拌 lh, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基 喹唑啉 -4-胺（1.12g, 3.3mmol), 50°C搅拌过夜，反应完毕后，加入 50 mL 水， 用 EA 萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基)) -7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3-基氧基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺 1.0 g， 产率 82%。

(2) N-(4-(3-氯 _ ⁴ _氟苯基 ))-7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3-基 氧基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备 C1

将^(4_(3_氯 _ ₄ _氟苯基 ))_ ₇ _(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3- 基氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺（1.0 g, 2.05 mmol)溶于 80 mL乙酸与乙醇混 合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（1.5 g, 26 mmol), 升温至 70°C搅拌 lh, 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH， 加入 30 mL水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相减 压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基小氧杂 -8-氮杂螺 环 [4.5]癸烷 -3-基氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 400 mg， 产率 43%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3-基 氧基)喹唑啉 -6-基] -丙婦酰胺的制备

将 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-甲基小氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3- 基氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 (400 mg, 0.9 mmol)溶于 20 mL DCM中， 加入 0.3 mL三乙胺和丙烯酰氯（81 mg, 0.9 mmol), 室温搅拌 30 min, 反应 完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 残渣经硅胶柱色谱分离 （二氯曱烷 /曱醇 =5/1 洗脱） ， 得 N-[4-(3-氯 -4- 氟苯胺基) -7-(8-曱基 - 1 -氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -3-基氧基)喹唑啉 -6- 基] -丙烯酰胺 100 mg, 产率 22%。

分子式： C ₂₆ H ₂₇ C1FN ₅ 0 ₃

质谱 (m/e): 512.2 (M+1), 256.6 ( M/2 )

'HNMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.15(s, 1 Η), 8.64(s, 1 H), 7.98 (s， 1 H), 7.96 (d, I H), 7.55 (m， 2H)， 7.16 (t, I H), 7.12 (s， I H), 6.50 (d， IH), 6.35 (m， I H) 5.92 (d, 1 H)， 5.20 (m, I H), 4.23 (m, 2H), 3.07(m, I H), 2.96 (m, 2H)， 2.64 (s， 3H), 2.38 (m, 4H), 2.04 (d, I H), 1.84 (d, I H), 1.44(t, 1 H)。

实施例 6 N-f4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((8-曱基 - 1 -氧杂 -8-氮杂螺「4.51癸烷

-3-基）甲氧基)喹唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 6)的制备

( 1 ) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((8-曱基小氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3-基）曱 氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 (8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3-基）曱醇 (300 mg, 1.08 mmol) 溶于 20 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（97 mg, 2.43 mmol), 移至室温搅拌 lh, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6- 硝基喹唑啉 -4-胺 (362 mg, 1.08 mmol), 于 50°C搅拌过夜， 反应完毕后， 加入大量水， 过滤， 将滤饼真空干燥， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((8- 曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3-基）曱氧基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺 516 mg, 产率 95%。

(2) N-( ⁴ -(3-氯 - ⁴ -氟苯基 ))-7-((8-曱基小氧杂 -8-氮杂螺 [ ⁴ . ⁵ ]癸烷 -3-基）甲 氧基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((8-曱基小氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3- 基）曱氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 (516 mg, 1.03 mmol)溶于 60 mL乙酸与 乙醇混合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe 粉（346 mg , 6.18 mmol), 室温搅拌 12h, 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH, 加入 30 mL水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相浓缩， 所得残余物经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 =10/1 洗 脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((8-曱基 - 1 -氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3- 基）曱氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 lOO mg, 产率 21%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((8-曱基 -1 -氧代 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3-基)

在反应瓶中将 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3-基）曱氧基)喹唑啉 -4，6-二胺（100 mg, 0.21 mmol) 溶于 10 mL二氯曱烷中， 降温至 0 °C， 加入三乙胺 42 mg(0.42 mmol)。 取丙烯 酰氯 17 mg(0.19 mmol)溶于 1 mL DCM, 将所得溶液緩曼加入反应弁瓦 中， 于室温反应 30 min, 反应液用 10 mL蒸馏水洗涤三次， 减压蒸馏 除去二氯曱烷， 得黄色粉末状粗品， 该粗品经硅胶柱色谱分离 (DCM/MeOH=15/l 洗脱）， 得淡黄色粉末状固体 N-[4- (3-氯 -4-氟苯胺 基) -7-((8-曱基 -1 -氧杂 -8-氮杂螺 [4.5]癸烷 -3-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -丙 烯酰胺 15 mg, 产率 14%。 分子式： C ₂₇ H ₂₉ C1FN ₅ 0 ₃

质谱 (m/e): 526.2 (M+l), 263.6 ( M/2 )

CDC1 ₃ ) 6 9.10(s, IH), 8.63(s, 1H)， 8.32 (s, IH), 7.86 (d, 1H)， 7.74 (s， IH), 7.48(d, I H), 7.15 (s, 1H)， 7.10 (m, IH), 6.48 (d, I H), 6.38 (m, I H), 5.86 (d, IH), 4.18 (t, 2H), 4.08 (t, IH), 3.87(t, IH), 2.91 (s， H), 2.60 (m, 4H), 2.36 (m, 3H), 2.13(t, 1H)， 1.80-2. l l(m, 4H), 1.60(m， 1H)。

实施例 7 Ν-Γ4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(8-甲基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 Γ4.51 癸 烷 -2-基曱氣基)喹唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 7)的制备

(1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2-基 曱氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 8-曱基- 氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2-基甲醇 (280 mg, 1.5 mmol) 溶于 20 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（1.1 g, 27 mmol), 移至室温搅拌 lh， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝 基喹唑啉 _4-胺 (508 mg, 1.5 mmol), 于 50°C搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3- 氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2-基曱氧基) - 6- 硝基喹唑啉 -4-胺 380 mg, 产率 50%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基 -1 -氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2-基 曱 -4,6-二胺的制备

将 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-8-曱基 - 1-氧杂- 8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2- 基曱氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (380 mg, 0.76 mmol)溶于 8 mL乙酸与乙 醇混合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中，加入 Fe粉 (343mg, 6.12 mmol), 升温至 70°C搅拌 lh,反应结束后，减压旋转蒸发除去 EtOH，加入 30 mL 水， 混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相 减压旋转蒸干， 所得残渣经硅胶柱色谱 (二氯甲烷 /曱醇 = 15/1 洗脱)提 纯， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-曱基小氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2- 基曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 180 mg, 产率 50%。

(3) N-[ ⁴ -(3-氯 _ ⁴ _氟苯胺基) -7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [ ⁴ .5]癸烷 - ² _基 曱氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺的制备

0

ΗΝ CI

HN - CI

Η,Ν NH

COCI

' 、、0" W、 N

将 _N _(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(8-甲基 -1 -氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2- 基曱氧基)喹唑啉 -4，6-二胺（175 mg,0.38 mmol)溶于 30 mL二氯曱烷中， 加入 77 mg三乙胺， 冰水浴下滴加丙烯酰氯 (31 mg, 0.34 mmol), 室温 搅拌 0.5 h， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压 旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱 (二氯曱烷 /曱醇 =20/1 洗脱)提 纯，得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(8-曱基 -1-氧杂 -8-氮杂螺环 [4.5]癸烷 -2- 基曱氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 14mg， 产率 8%。

分子式： C ₂₇ H ₂₉ C1FN ₅ 0 ₃

质谱 (m/e): 526.2 (M+1), 263.7(M/2)

^NMR; (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.92 (s, IH), 8.55(s, IH), 7.98 (d, IH), 7.62 (d, IH), 7.20(s, IH), 7.13 (t, IH), 6.47 (d, 2H), 5.86 (d, IH), 4.47 (m, 1H)， 4.24 (d, 1H)， 4.10 (t, IH), 3.05 (m, 4H), 2.49 (s， 3H), 1.78-1.97 (m,8H)。 实施例 8 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(TlR,5S,6S)-3-曱基 -3-氮杂双环

Γ3.1.01己烷 -6-基乙氣基)喹唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 8)的 制备

(1) >^-(4-(3-氯-4-氟苯基))-7-(2-((11 ,58,65)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0]己 烷 -6-基乙氧基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

F

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0 ₂ N../,. /!,. _N H OH L^A ... |l ., .!；

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将 2-((11 ,58,68)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基乙醇(0.2 g, 1.4 mmol)溶于 10 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化 钠（1.12 g, 2.8 mmol), 移至室温搅拌 30 min, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基)) -7-氟 -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (470 mg, 1.4 mmol), 于 50°C搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至 干， 得 ^(4-(3-氯-4-氟苯基))-7-2-((11 ,58，68)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0] 己烷 -6-基乙氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 500mg， 产率 78%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-((l R,5S，6S)-3-曱基 -3-氮杂双环 [3.1.0]己 烷 -6-基乙氧基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

. F

HN CI HN

将 |-(4-(3-氯-4-氟苯基))-7-2-((11 ,58,65)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0] 己烷 -6-基乙氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (500 mg, 1.1 mmol)溶于 10 mL EtOH和 3 mL CH ₃ COOH的混合溶剂中，加入 Fe粉 (343 mg, 6.12 mmol), 于室温搅拌反应 12h, 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH , 加入 30 mL水， 将混合物用 l mol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将 有机相减压旋转蒸发至干， 所得残余物经硅胶柱色 "i普 (二氯曱烷 /曱醇 = 10/1 洗脱)纯化， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-((l R，5S,6S)-3-甲基 -3- 氮杂双环 [3.1.0]己烷 -6-基乙氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 200 mg, 产率 43%。 (3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-((lR, 5S , 68)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0]

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-((lR,5S,6S)-3-曱基 -3-氮杂双环 [3.1.0]己烷 -6-基乙氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 (200 mg, 0.47 mmol)溶于 20 mL二氯曱烷中、 冰浴条件下加入 200 mg三乙胺和丙烯酰氯 (43 mg, 0.47 mmol), 于室温搅拌 30 min, 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA 萃取， 将有机层减压旋转蒸发至千， 所得残渣经硅胶柱色谱提纯 (二氯 曱烷 /曱醇 =5/1洗脱）， 得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-((l R， 5S , 6S)-3- 曱基 -3-氮杂双环 [3.1.0]己烷 -6-基乙氧基）喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 40 mg, 产率 18%。

分子式: C ₂₅ H ₂₅ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 482.2 (M+l)， 241.6 (M/2)

^! HNMR; (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.15(s, 1 H), 8.94 (s, 1 H), 8.60 (s， 1 H), 7.89 (s, 1 H), 7.83 (d, 1 H), 7.58 (d, 1 H), 7.22 (t， 1 H), 7.05 (m, 1 H)， 6.49 (d, 1 H), 5.86 (d, 1 H), 4.38 (t， 2H), 3.78 (d, 2H), 3.10 (d, 2H), 2.80 (s， 3H), 2.39 (m, 1 H), 1.83 (m, 2H), 1.74 (m, 2H)。

实施例 9 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-ίί2-甲基八氢环戊「c！吡咯 -4-基）曱氧 基)喹唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 9)的制备

(1 ) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基 )-6- 硝基喹唑啉 -4-胺的制备

F

F ,-ί'■

OH HN ' CI

Η C1 Ο,Ν

Ο-,Ν 丫

将 (2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱醇 (380 mg, 2.45 mmol)溶于 20 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（1.6 g， 40 mmol), 移至室温搅拌 1 h, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-肖基喹 唑啉 -4-胺（1.08 g, 3.2 mmol), 于 50°C搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟 苯基) )-7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 318 mg, 产率 28%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基)喹唑 啉 -4,6-二胺

将 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧 基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺 (318 mg, 0.68 mmol)溶于 8 mL乙酸与乙醇混合 溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉 (200 mg, 3.57 mmol), 升温 至 70°C搅拌 1.5 h, 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH， 加入 30 mL 水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机 相减压旋转蒸发至千后经硅胶柱色谱 (二氯曱烷 /曱醇 = 15/ 1洗脱)純化， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基)喹唑 啉 -4,6-二胺 90 mg, 产率 30%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基)喹 唑 -6-基] -丙烯酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基) 喹唑啉 -4,6-二胺（80 mg, 0.18 mmol)溶于 30 mL二氯曱烷， 加入 40 mg 三乙胺，冰水浴下滴加丙烯酰氯（16 mg, 0.18 mmol), 于室温搅拌 0.5 h， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至 干，所得残渣经硅胶柱色谱 (二氯曱烷 /曱醇 =20/1洗脱)纯化，得 N-[4-(3- 氯 -4-氟苯胺基) -7-((2-曱基八氢环戊 [c]吡咯 -4-基）曱氧基) -丙烯酰胺 20 mg, 产率 22%。

分子式： C ₂₆ H ₂₇ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 496.3(M+1), 248.7 ( M/2 ) 'HNMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 8.79 (s, 1H), 8.56 (s， 1H), 7.96 (d， 1H)， 7.61 (d, 1H), 7.29 (s, 1H)， 7.15 (m, 1H), 6.70 (m, 1H), 6.51 (d, 1H), 5.85 (d， 1H), 4.18 (m, 1H), 4.10 (m,lH), 3.41-3.95 (m, 2H), 3.38 (d, 1H), 3.03-3.12 (m, 4H), 2.82 (s， 3H), 2.15 (s， 3H), 1.22 (m, 3H)。

实施例 10 ]^-「4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-((7-曱基-7-氮杂双环� �2.2.11庚烷-2- 基）甲氣基) -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 10)的制备

(1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基）曱氧

将 (7-曱基 -7-氮杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基）曱醇 (283 mg, 2.0 mmol)溶 于 10 mLDMF中，于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（160 g， 4.0 mmol), 移至室温搅拌 lh, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基 喹唑啉 _4-胺（1.13 g， 3.0 mmol), 于 50Ό搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶 柱色谱 (二氯曱烷 /曱醇 =8/1 洗脱)纯化， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7- 甲基 -7-氮杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基）曱氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 427mg， 产率 47%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-甲基 -7-氮杂双环 [2.2.1]庚烷 -2-基）曱氧 基)喹唑啉 -4，6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-甲基 -7-氮杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基) 曱氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 (427 mg， 0.93 mmol)溶于 28 mL 乙酸与乙 醇混合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中，加入 Fe粉（ 312 mg, 5.58 mmol ) , 升温至 70°C搅拌 lh,反应结束后，减压旋转蒸发除去 EtOH，加入 30 mL 水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机 相减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 157mg, 产率 40%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基）曱 氧基)喹唑啉 -6- -丙烯酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基) 曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺（157 mg, 0.37 mmol)溶于 10 mL二氯曱烷中， 冰水浴下加入三乙胺（1 1 1 mg , 1.10 mmol)和丙烯酰氯（33 mg , 0.37 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱 (二氯曱烷 /甲醇 = 15/1 洗脱）纯化， 得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂双环 [2.2.1 ]庚烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 20 mg, 产率 1 1%。 分子式： C ₂₅ H ₂₅ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 482.2 (M+1), 241.7(M/2)

^! HNMR; (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.08 (s, 1 H)， 8.64 (s， IH), 8.16 (s, I H), 7.88 (m， 2H), 7.51 (d, I H), 7.24(s, I H), 7.10 (t, I H), 6.48 (d, I H), 6.38 (m, 1H), 5.88 (d, 1H), 4.22 (m, 1H), 4.10 (t， 1H), 3.56 (s, 1H), 3.44 (s, 1H), 2.94 (m, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.25 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.70 (m, 1H)， 1.68 (m， 1H), 1.41 (m, 1H), 1.05 (m, 1H)。

实施例 Π N-「4-G-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(3-甲基 -3-氮杂双环 Γ3.2.Π辛烷

-8-基）乙氧 物 11 )的制备

(1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮杂双环 [3.2.1]辛烷 -8-基）乙 氧基 -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 2-(3-曱基 -3-氮杂双环 [3.2.1]辛烷 -8-基）乙醇（338 mg, 2 mmol) 溶于 20 mLDMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（0.4 g, 10 mmol), 移至室温搅拌 1 h， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6- 硝基喹唑啉 -4-胺（1.12 g， 3.3 mmol), 于 50°C搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 50mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至千， 得 N-(4-(3- 氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮杂双环 [3.2.1]辛烷 -8-基）乙氧基) - 6-硝 基喹唑啉 -4-胺 560mg, 产率 58%。

(2) N-( ⁴ -( ³ _氯 _ ⁴ _氟苯基 ))- ⁷ _( ² _(3-曱基 -3-氮杂双环 [3. ² .1]辛烷 -8-基）乙 氧基喹唑啉 -4，6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-甲基 -3-氮杂双环 [3.2.1]辛烷 -8-基) 乙氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 (560 mg, 1.15 mmol)溶于 20 mL乙酸与乙醇 混合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉 (343 mg， 6.12 mmol), 升温至 70Ό搅拌 1 h， 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH， 加入 30 mL水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将 有机相减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮 杂双环 [3.2.1]辛烷 -8-基）乙氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 360 mg, 产率 69%。 (3) 1-[4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-(2-(3-曱基-3-氮杂双环[3. 2.1]辛烷-8-基）乙 氧基)喹唑 -6-基] -丙烯酰胺的制备

H ₂ N

入 Z、o

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮杂 环 [3.2.1]辛烷 -8-基) 乙氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 (360 mg, 0.79 mmol)和 112 mg三乙胺溶于 20 mL二氯曱烷中， 滴加丙烯酰氯 (71 mg， 0.79 mmol), 于室温搅拌 lh， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 减压旋转蒸发至干， 用乙 醚洗涤残渣， 得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(3-曱基 -3-氮杂双环 [3.2.1] 辛烷 -8-基）乙氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 34mg， 产率 8%。

分子式： C ₂₇ H ₂₉ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 510.3(M+1), 255.8 ( M/2 )

^NMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ9.13 (s, IH), 8.67 (s, IH), 8.15 (s, IH), 7.94 (d, IH), 7.61 (s, 1H)， 7.53 (d， IH), 7.15 (t， 1H)， 6.50 (d, IH), 6.34 (m, IH), 5.90 (d, IH), 4.29 (m, 2H), 2.69 (t, IH), 2.66 (d, IH), 2.50 (s, 3H), 1.27-2.35 (m, 11H)。

实施例 12 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基 V7-((5-曱基 -5-氮杂螺环「2.41庚烷 -1- 基）甲氧 合物 12)的制备 .

(1 ) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((5-曱基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷 -1 -基）曱氧 -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 (5-甲基 -5-氮杂螺环 [2.4]厌烷 -1 -基）曱醇（370 mg, 2.62 mmol)溶 于 20 mL DMF中， 于水浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（157 mg, 3.93 mmol), 移至室温搅拌 1 h, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (588 mg， 1.75 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕 后， 加入 20 mL 水， 过滤， 将滤饼真空干燥， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基 ))_ ₇ _(( ₅ _甲基 _5-氮杂螺环 [2.4]庚烷 -1 -基）甲氧基 )- 6-硝基喹唑啉 -4-胺 690 mg, 产率 86%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((5-曱基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷小基）曱氧基) 喹唑啉 _4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯- 4-氟苯基 ))-7-((5-曱基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷小基）曱 氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 (69 mg, 1.51 mmol)溶于 60 mL乙酸与乙醇混 合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉 (507 mg， 9.06 mmol), 升 温至 30Γ搅拌 12 h,反应结束后，减压旋转蒸发除去 EtOH,加入 30 mL 水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机 相减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 =10/1 洗脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((5-甲基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷 -1-基）曱氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 lOOmg, 产率 15%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((5-曱基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷 -1-基）曱氧 基) 酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((5-甲基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷- 基）甲 氧基)喹唑啉 -4,6-二胺（100 mg, 0.23 mmol)溶于 10 mL DCM中， 加入 三乙胺 (46 mg, 0.46 mmol),冰水浴下滴加丙烯酰氯（19 mg, 0.21 mmol ), 于室温搅拌 30 min， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 减压 旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色语分离（二氯 烷/曱醇 = 15/1 洗 脱）， 得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((5-甲基 -5-氮杂螺环 [2.4]庚烷 -1-基） 曱氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 14mg, 产率 14%。

分子式： C ₂₅ H ₂₅ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 482.3 (M+1), 241.6 (M/2)

'HNMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.35 (s, IH), 9.00 (s, IH), 8.60 (s， IH), 7.98 (s， IH), 7.78 (d, IH), 7.54 (d， IH), 6.95(m, 2H), 6.52 (m, 2H), 5.83 (m, IH), 4.57 (m, IH), 3.65 (m， IH), 0.68-3.23 (m, 12H)。

实施例 13 Ν-「4-ί3-氯 -4-氟苯胺基) -7-ίί6-曱基 -6-氮杂螺环「2.51辛烷 -1-基) 甲氧基)喹唑 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 13)的制备

(1) Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基）曱氧 基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 (6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基）曱醇 (400 mg, 2.58 mmol)溶 于 20 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（230 mg, 3.87 mmol), 移至室温搅拌 l h， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6- 硝基喹唑啉 -4-胺 (954 mg, 2.83 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 20 mL水，过滤，将滤饼真空干燥，得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((6- 曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基）曱氧基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺 300 mg, 产率 25%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 - -基）曱氧 基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((6-甲基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 - 1-基）曱 氧基 )_6-硝基喹唑啉 -4-胺（300 mg, 0.64 mmol)溶于 60 mL乙酸与乙醇混 合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（177 mg， 3.18 mmol), 升 温至 30°C搅拌 12 h，反应结束后，减压旋转蒸发除去 EtOH，加入 30 mL 水， 将混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机 相减压旋转蒸发至干， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 - 1 -基）曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 200 mg， 产率 71 %。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((6-甲基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1 -基）甲氧 基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基）曱 氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 (200 mg， 0.45 mmol)溶于 10 mL DCM中， 加入 三乙胺 (46 mg, 0.46 mmol),冰水浴下滴加丙烯酰氯（39 mg， 0.43 mmol), 于室温搅拌 30 min, 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有 机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 = 15/1 洗脱）， 得 -[4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-((6-曱基-6-氮杂螺环[2.5]� �� 烷 -1-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 25mg， 产率 12%。

分子式： C ₂₆ H ₂₇ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 496.2 (M+1), 248.6 ( M/2 )

^NMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.13 (s, IH), 8.66 (s， 1H)， 8.32 (s, IH), 7.97 (d, IH), 7.66 (s， 1H)， 7.55 (d, IH) , 7.25 (s, 1H)， 7.17 (t, IH), 6.52 (d, IH), 6.42 (m, IH), 5.90 (d, IH), 4.39 (m, IH), 4.07 (t， IH), 2.69 (m， 2H), 2.55 (m， 2H), 2.40 (s, 3H), 2.04 (s， IH), 1.80 (m, 2H), 1.56 (m, 2H), 1.30 (m, 2H).

实施例 14 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基 V7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环『2.51辛烷 -1- 基）乙氧基) -6-基 1-丙烯酰胺 ί化合物 14)的制备

(1) Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基）乙氧 基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2,5]辛烷 -1-基）乙醇 (9 g, 53 mmol)溶于 200 mL DMF中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（10g， 0.25 mol), 移至室温搅拌 l h， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基 喹唑啉 -4-胺（18 g, 53 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 20 mL水， 过滤， 滤饼经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 =20/1 洗脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 - 1 -基）乙氧 基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 17.0 g， 产率 66%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1 -基）乙氧 基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基) 乙氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺（17g, 35 mmol)溶于 300 mL乙酸与乙醇混 合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（13.6g, 243 mmol), 室温 搅拌 12 h， 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH, 加入 30 ml水， 将 混合物用 l mol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相减压 旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 =20/1 洗 脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1 -基) 乙氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 8.2g， 产率 51 %。

(3) N-[ ⁴ _( ³ _氯 _ ⁴ _氟苯胺基) _ ⁷ -( ² _(6-曱基 -6-氮杂螺环 [ ² . ⁵ ]辛烷 -1-基）乙 氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺的制备

将 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(6-曱基 -6-氮杂螺环 [2.5]辛烷 -1-基) 乙氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 (300 mg, 6.6 mmol)溶于 50 mL DCM中， 加入 三乙胺（2.0 g， 145 mmol), 冰水浴下滴加丙烯酰氯 (600 mg， 6.7 mmol), 于室温搅拌 30 min, 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有 机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯甲烷 /曱醇 =30/1 洗脱）， 得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-( ² _(6-曱基 -6-氮杂螺环 [ ² .5] 辛烷 -1-基）乙氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 0.5g, 产率 15%。

分子式： C ₂₇ H ₂₉ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 510.2 (M+1), 255.9 ( M/2 )

'Η NMR: (400MHZ, CDC1 ₃ ) δ9.14 (s， 1H), 8.69 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.99 (d, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.53(m, 1H), 7.27 (s， 1H), 7.19 (t， 1H), 6.52 (d, 1H), 6.41 (m, 1H)， 5.90 (d, 1H), 4.34 (m, 2H), 2.82 (m， 2H), 2.80(m， 2H), 2.38(s, 3H), 0.62-2.19 (m, 9H)。

实施例 15 (Ε)-Ν-Γ4-0-氯 -4-氟苯胺基 7-(2- iR,5S.6SV3-甲基 -3-氮杂 双环「3.1.01己烷 -6-基）乙氧基)喹唑啉 -6-基 1-2-丁烯酰胺 (化合 物 15)的制备

按照实施例 8 步骤 （ 1 ) 和 （ 2 ) 制备得到 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基))-7-(2-((11 ,55,68)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基）乙氧� ��）喹唑 啉 -4,6-二胺。

将反式 -2-丁烯酸 (0.12 g, 1.2 mmol)溶于 5 mL DMF, 然后加入

HATU (0.05 g, 1.32 mmol) , 0.5 mL 三乙胺和 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基))-7-(2-((11 ,55,68)-3-甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基）乙氧� ��)喹唑 啉 -4，6-二胺 (500 mg， 1.2 mmol), 于室温搅拌 12h， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用二氯曱烷萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经 硅胶柱色谱分离（二氯甲烷 /曱醇 =10/1-5/1洗脱）， 得 (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟 苯胺基）-7-(2-((11 ,55,65)-3-曱基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基）乙氧� ��） 喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 30mg， 产率 5%。

分子式： C ₂₆ H ₂₇ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 496.2 (M+1), 248.6(M/2)

lU NMR: (400MHz, DMSO-d ₆ ) δ 10.45 (br s，lH)， 9.40 (br s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.72 ( m, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.29 (m, 1H), 6.98 (m, 1H), 6.47 (d, 1H), 4.26 (m, 2H), 3.54 (m, 2H), 3.34 (m, 3H), 2.76 (s, 3H), 1.74-1.91 (m, 6H), 1.23 (m, 1H)。

实施例 16 (E)-N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基 V7-((7-曱基 -7-氮杂螺环「3.51壬烷

按照实施例 18 步骤 （ 1 ) 和 （ 2 ) 制备得到 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基)) _ ₇ _(( ₇ _曱基 _ ₇ _氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -4，6-二胺。

将反式 -2-丁烯酸 (98 mg, 1.1 mmol)溶于 lOmL DMF, 然后加入 HATU (563 g, 1.32 mmol). DIEA(441 mg, 3.4 mmol)和 N-(4-(3-氯 -4- 氟苯基 )-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基))曱氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 (400 mg, 0.88 mmol), 于室温搅拌 12h, 反应完毕后， 加入 50mL水， 用二氯曱烷萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色 谱分离（二氯曱烷 /曱醇 = 10/1-5/1 洗脱）， 得（E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺 基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基)）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -2-丁烯 酰胺 30mg， 产率 7%。

分子式： C ₂₈ H ₃₁ C1FN ₅ 0 ₂ 分子量： 524

质谱 (m/e): 524.2 (M+1), 262.6(M/2)

^J H NMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.08 (s，l H), 8.65 (s, 1H), 8.03 (s， 1 H), 7.96 (d, 1 H), 7.52 (d, 1 H), 7.23(s, 1 H), 7.15 (t, 1 H), 7.06 (m, 1 H), 5.99 (d, 1 H), 4.17 (d, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.27 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 2.00 (m, 2H), 1.97 (d, 3H), 1.62- 1.82 (m， 6H)。

实施例 17 (EVN-「4-0-氯 -4-氟苯胺基) -7-ί(7-曱基 -7-氮杂螺环「3.51壬烷

-2-基） 曱氧基)喹唑啉 -6-基 1-2-戊烯酰胺 ί化合物 17)及其盐酸

( 1 ) Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

按照实施例 18 步骤 （ 1 ) 和 （ 2 ) 制备得到 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯 基)) -7-((7-甲基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）甲氧基)喹唑啉 -4,6-二胺。

( 2 ) (Ε)-Ν-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -2-戊烯酰胺的制备

将反式 -2-戊烯酸 (86 mg, 0.86 mmol)溶于 10 mL DMF, 然后加入 HATU (425 g, 1.12 mmol) DIEA(333 mg, 2.6 mmol)和 N-(4-(3-氯 -4- 氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 4,6-二胺 (300 mg, 0.66 mmol), 于室温搅拌 12h, 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用二氯曱烷萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色 谱分离（二氯曱烷 /曱醇 = 10/1-5/1 洗脱）， 得（E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺 基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -2-戊烯 酰胺 30mg， 产率 8%。

( 3 ) (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -2-戊烯酰胺 （化合物 17) 盐酸盐的制备

将 (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2- 基）曱氧基)喹唑啉 -6-基] -2-戊烯酰胺 (58mg, O.llmmol)溶于 10 mL 曱醇 中， 室温下滴加 HC1, 搅拌下反应 2h 后， 将溶剂蒸干， 得黄色固体 ( _E )_N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）甲氧 基)喹唑啉 -6-基] -2-戊烯酰胺盐酸盐 61mg, 产率 100%。 分子式： C ₂₉ H ₃₄ C1 ₂ FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 538.1 (M+1), 269.6(M/2)

ΉΝΜΚ:(400ΜΗζ, DMSO-d ₆ ) δ 11.0(brs, lH),9.41(s, 1H), 9.01 (s,lH), 8.94 (s, 1H)， 8.82 (s, 1H)， 7.98 (d, 1H), 7.65(d, 1H)， 7.52 (t, 1H), 7.26 (s, 1H), 5.67 (m, 2H), 4.24 (d, 2H), 3.28 (d, 2H), 2.80 (m, 2H)， 2.74 (s, 3H)， 1.63-1.98 (m, 14H)。

实施例 18 N-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-甲基 -7-氮杂螺环「3.51壬烷 -2- 基） 甲氧基) 唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 18)的制备

(1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-甲基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）甲氧 基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将 (7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）甲醇 (9 g， 53 mmol)溶于 20 mL DMF中， 于冰浴并在 Ν ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（10 g, 0.25 mol), 移至室温搅拌 lh， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基喹唑 啉 -4-胺（18 g, 53 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 20 mL 水， 过滤， 将滤饼真空干燥， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮 杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基 )- 6-硝基喹唑啉 -4-胺 17 g, 产率 66%。 (2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧 基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱 氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺（17 g, 35 mmol)溶于 60 mL乙酸与乙醇混合溶 剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（13.6 g, 243 mmol), 于室温下 搅拌 12 h, 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH， 加入 30 mL水， 将 混合物用 lmol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相减压 旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 =10/1洗脱) 纯化， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 10 g， 产率 63%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧 基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱 氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 (3 g, 6.6 mmol)溶于 10 mL DCM中， 加入三乙胺 (2 g, 19.8 mmol), 冰水浴下滴加丙婦酰氯 (600 mg, 6.6 mmol), 于室温 搅拌 30 min， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 减压旋转蒸 发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 = 15/1 洗脱）， 得

_N -[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基) 喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 1.26g， 产率 37%。

分子式： C ₂₇ H ₂₉ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 510.2 (M+1), 255.8 ( M/2 )

^] H NMR: (400MHz, CDC1 ₃ ) δ 9.12 (s, 1 H), 8.67 (s, 1 H)， 8.18 (s, 1 H),

7.98 (d, 1 H), 7.55 (m, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 7.17 (t, 1 H), 6.50 (d, 1 H), 6.34 (m, 1H), 5.88 (d, 1H), 4.21 (d, 2H), 2.86 (m, 1 H), 2.21 -2.50 (m, 7H), 2.07 (t, 2H), 1.82 (m,2H), 1.63-1.71 (m, 4H)。

实施例 19 Ν-『4-Π-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 f3.51壬烷 -2- 基）乙氣基)喹唑啉 -6-基 1-丙烯酰胺 (化合物 19)及其盐酸盐的 制备

( 1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(7-甲基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）乙氧

将 2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）乙醇 (2.7 g, 14.8 mmol)溶 于 20 mL DMF中，于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（1.78 g, 44.5 mmol), 移至室温搅拌 1 h, 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝 基喹唑啉 _4-胺 (4.95 g， 14.7 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加 入 20 mL水， 过滤，将滤饼真空干燥，得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(7- 曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）乙氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 5.0 g，产率

68%。

(2) N-(4-(3-氯 _ ⁴ _氟苯基 ))-7-( ² _( ⁷ -曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 _ ² _基）乙氧 基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 乙氧基 )-6-硝基喹唑啉 -4-胺 (5 g, 10 mmol)溶于 250 mL乙酸与乙醇混合 溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（1.96 g, 35 mmol), 升温至 30°C搅拌 12 h,反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH ,加入 30 mL水， 将混合物用 l mol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相减 压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /甲醇 = 10/1 洗 脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 乙氧基)喹唑啉 -4，6-二胺 2.5 g, 产率 53%。

(3) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）乙 氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺的制

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(7-甲基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 乙氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 (300 mg, 0.64 mmol)溶于 10 mL DCM中 , 力口 入三乙胺（194 mg, 1.92 mmol), 冰水浴下滴加丙烯酰氯 (60 mg, 0.67 mmol), 于室温搅拌 30 min, 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 / 曱醇 = 15/1 洗脱)， 得 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3. ⁵ ]壬烷 _ ² _基）乙氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 100 mg, 产率 30%。

(4) N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）乙 氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺 (化合物 19)盐酸盐的制备

将 _N _[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 乙氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺（lOOmg, 0.19mmol)溶于 10 mL 曱醇中， 冰水浴下通入 HC1气体， 搅拌下反应 30min后， 将溶剂蒸干， 得白色 固体 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）乙 氧基)喹唑啉 -6-基] -丙烯酰胺盐酸盐 105mg， 产率 97%。

分子式： C ₂₈ H ₃₂ C1 ₂ FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 524.0 (M+1 ), 262.5 (M/2)

'HNMR: (400MHz, DMSO-d ₆ ) δ 10.72 (br s, 1 H),9.77 (br s， I H), 9.73 (s, I H), 9.00 (s, IH), 8.75 (s, I H), 8.03 (d, I H), 7.52(d, I H), 7.49 (t， I H), 7.36 (s, I H), 6.73 (m, IH), 6.30 (d, IH), 5.83 (m, 1 H)， 4.18 (t， 2H)， 2.81 (m, I H), 2.77 (m, I H), 2.68 (s, 3H), 1.52-2.08 (m, 13H).

实施例 20 (Ε)-Ν-(4-ί3-氯 -4-氟苯胺基 )-7-((7-甲基 -7-氮杂螺环「3.51壬 烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-二曱胺基 -2-丁烯酰胺 (化合物 20)的制备

(E)_ _N _(4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-溴 -2-丁烯酰胺的制备

按照实施例 18 步骤 （ 1 ) 和 （ 2 ) 制备得到 N-(4-(3-氯 -4-氟苯 基) )_ ₇ _(( ₇ _甲基 _ ₇ _氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺。

氮气下， 将 4-溴巴豆酸 (900 mg, 5.5 mmol)溶于 10 mL THF中， 冰浴下加入 DCC(1 130 mg， 5.5 mmol), 搅拌 0.5 h， 然后加入 N-(4-(3- 氯 -4-氟苯基 ))-7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基）喹唑啉 -4，6-二胺 （500 mg， 1.1 mmol)的 DMF(10 mL)溶液， 4觉拌 40 min后， 得到（E)-N-(4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基） 曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-溴 -2-丁烯酰胺粗产物， 该粗产物不经提纯直接 用于下一步。

(2) (E)-N-(4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基） 曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-二曱胺基 -2-丁烯酰胺的制备

向上一步产物 (Ε)- Ν-(4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-溴 -2-丁烯酰胺中，依次加入二曱 胺盐酸盐（1.25 g， 15.3 mmol)和 DIEA(2.68 mL, 15.4 mmol), 冰浴下继 续搅拌 2 h, 移至室温搅拌过夜。 向反应液中加饱和碳酸氢钠溶液， 用 乙酸乙酯萃取， 将有机层用无水硫酸钠干燥， 浓缩， 然后将浓缩物用 反相制备柱（C ₁₈ , ODS-AQ 40-60um, 流动相为曱醇 /水 = 50/50 )分离， 得到（E)-N-(4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((7-曱基 -7-氮杂螺环 [3.5]壬烷 -2-基) 曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-二曱胺基 -2-丁烯酰胺 120 mg, 产率 19.2%。 分子式： C ₃ 。H ₃₆ C1FN ₆ 0 ₂

质谱 (m/e): 567 (M+1)

'HNMR: (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.79 (s, 1 Η ) , 9.46 (s， 1 H), 8.80 (s, 1 H), 8.54 (s, 1 H)， 8.13-8.17(m, 1 H), 7.79-7.83(m， 1 H), 7.39-7.46 (m, 1 H), 7.27 (s, 1 H), 6.77 (dd, 1H), 6.51 (d， 1 H), 4.17 (d, 2H), 3.08 (d, 2H), 2.70-2.82 (m， 1 H), 2.21 (m， 10H), 2.1 l (s, 3H)， 1.88 (t， 2H), 1.71 (t, 2H), 1.22- 1.51 (m, 4H)。

实施例 21 (£)-^「4-0-氯-4-氟苯胺基)-7-((2-0-曱基-3-氮-双环 『3丄01-6- 己基) -乙氧基）喹唑啉 -6-基) -4-二甲胺基 1-巴豆酰胺（化合物 21)的制备

( 1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基)) - 7-(2-(3-甲基-3-氮双环[3.1.0] -6-己基) -乙氧 基) - -硝基喹唑啉 -4-胺的制备

将2-(3-甲基-3-氮-双环[3.1.0] -6-己基) -乙醇（7.5 g, 53 mmol)溶于 20 mL DMF 中， 于冰浴并在 N ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（10g, 0.25mol), 移至室温搅拌 lh， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基喹 唑啉 -4-胺（18 g, 53 mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 20 mL 水， 过滤， 将滤饼真空干燥， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-甲基 -3- 氮 -双环 [3丄0]-6-己基) -乙氧基) -6-硝基喹唑啉 -4-胺 14.8 g, 产率 61%。 (2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3丄 0] -6-己基) -乙氧 基)喹唑啉 -4,6-二胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己基) -乙 氧基) )-6-硝基喹唑啉 -4-胺（14.8 g， 32 mmol)溶于 60 mL乙酸与乙醇混 合溶剂（CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（13.6 g, 243 mmol), 于室 温下搅拌 12 h, 反应结束后， 旋转蒸发去除 EtOH , 加入 30 mL水， 将 混合物用 l mol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相减压 旋转蒸发至干后经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /曱醇 = 10/1 洗脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己基) -乙氧基)) 喹唑啉 -4，6-二胺 8.3g， 产率 62%。

(3) (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((2-(3-甲基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己 基) -乙氧基) -喹唑啉 -6基 -4-氯)] -巴豆酰胺的制备 F

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-(2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己基) -乙 氧基))喹唑啉 -4,6-二胺 (2.73 g, 6.6 mmol)溶于 10 mL DCM中， 加入三 乙胺（2 g , 19.8 mmol), 冰水浴下滴加（E)-4-氯-巴豆酰氯 (600 mg, 6.6 mmol), 于室温搅拌 30min, 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干后， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯甲烷 / 曱醇 =15/1洗脱），得 (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己基) -乙氧基) -喹唑啉 -6基 -4-氯)] -巴豆酰胺 2.81g， 产率 81 %。 (4) ^[4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-(2-(3-曱基-3-氮-双环[3丄0 ] -6-己基) -乙 氧基) -喹唑啉 -6-((E)-4-二甲胺基)] -巴豆

将 N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-(2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己基) - 乙氧基) -喹唑啉 -6-((E)-4-氯)] -巴豆酰胺 (0.23g, 0.4 mmol) 溶于乙腈（30 mL)中， 氮气保护下加入甲胺盐酸盐 (0.32 g, 4 mmol)和碳酸铯 （2.6 g, 8 mmol), 加热至回流， 过滤， 将滤液减压旋转蒸发至干后直接用反向制 备柱（C18, ODS-AQ 40-60um， 流动相为曱醇 /水 = 50/50 )分离， 得到 化合物（E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-((2-(3-曱基 -3-氮 -双环 [3.1.0]-6-己 基) -乙氧基)喹唑啉 -6-基) -4-二曱胺基] -巴豆酰胺 0.14g， 产率 37%。

分子式： C ₂₈ H ₃₂ C1FN ₆ 0 ₂

质谱 (m/e): 539.2 (M+1), 270 ( M/2 )

!HNMR: (400MHz, CD ₃ OD) δ 9.20 (s, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 7.94 (d, 1 H), 7.68-7.64 (m， 1 H), 7.40-7.35 (m, 2H), 7.1 1-7.00 (m, 2H), 4.44-4.41 (m, 2H), 4.08 (d, 2H), 3.73 (d, 2H), 3.36 (s, 4H), 3.00-2.67 (m, 8H), 1.96-1.92 (m, 2H)， 1 .82- 1.75 (m， 3H)。

实施例 22 (Έ)-Ν-「4-(3-氯 -4-氟苯胺基 V7-(((螺环 Γ3.51辛烷 -2-基）曱氧基) 喹唑啉 -6-基) -4-二曱胺基 1-巴豆酰胺 (化合物 22)的制备

(1) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- ((螺环 [3.5]辛烷 -2-基）曱氧基 )-6-硝基喹唑 啉 _4-胺的制备

将 (螺环 [3.5]辛烷 -2-基）曱醇 (8.16 g， 53 mmol)溶于 20 mL DMF中 , 于冰浴并在 Ν ₂ 气氛下分批加入 60%的氢化钠（10 g， 0.25 mol), 移至室 温搅拌 l h， 加入 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-氟 -6-硝基喹唑啉 -4-胺（18g， 53mmol), 于室温搅拌过夜， 反应完毕后， 加入 20ml水， 过滤， 将滤 饼真空干燥， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- ((螺环 [3.5]辛烷 -2-基）曱氧基) - 6-硝基喹唑啉 -4-胺 18.68g, 产率 75%。

(2) N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7-((螺环 [3 · 5 ]辛烷 -2-基）曱氧基) -喹唑啉 -4,6-二

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- ((螺环 [3.5]辛烷 -2-基)曱氧基 )-6-硝基喹 唑啉 -4-胺（16.45 g， 35 mmol)溶于 60 mL 乙酸与 乙醇混合溶剂 (CH ₃ COOH/EtOH=l/3)中， 加入 Fe粉（13.6 g, 243 mmol), 于室温下搅 拌 12h， 反应结束后， 减压旋转蒸发除去 EtOH , 加入 30mL水， 将混 合物用 l mol/L的 NaOH溶液调至碱性， 用 EA萃取， 将有机相减压旋 转蒸发至干后经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 /甲醇 =10/1 , V/V 洗脱）， 得 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- ((螺环 [3.5]辛烷 -2-基）甲氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 10 g, 产率 63%。

(3) ((E)-4-二曱胺基) -巴豆酰氯盐酸盐的制备

将 ((E)-4-二曱胺基) -巴豆酸盐酸盐（1.65 g, 10 mmol)溶于 THF 50ml 中， 加入 O. l mL DMF, 冷却至 0°C , 緩慢滴加 SOCl ₂ (5 mL)， 将反应液 升至室温， 0.5h 后开始加热至回流， 回流搅拌 3 h, 降至室温， 氮气保 护下蒸干多余的 SOCl ₂ ， 直接用于下一步反应。

(4) (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7- ((： (螺环 [3.5]辛烷 -2-基）曱氧基)喹唑 啉 -6- -4-二曱胺基] -巴豆酰胺的制备

将 N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-7- ((螺环 [3.5]辛烷 -2-基）曱氧基)喹唑啉 -4,6-二胺 (3 g， 6.6 mmol)溶于 10 mL DCM中， 加入三乙胺 (2 g, 19.8 mmol) , 冰水浴下滴加 6-((Ε)-4-二曱胺基）] -巴豆酰氯（600 mg， 6.6 mmol), 于室温搅拌 30 min， 反应完毕后， 加入 50 mL水， 用 EA萃取， 将有机层减压旋转蒸发至干， 所得残渣经硅胶柱色谱分离（二氯曱烷 / 曱醇 = 15/1 洗脱）， 得 (E)-N-[4-(3-氯 -4-氟苯胺基) -7-( ((螺环 [3.5]辛烷 -2- 基）曱氧基)喹唑啉 -6-基) -4-二曱胺基] -巴豆酰胺 1.26 g, 产率 38%。

分子式： C ₃ 。H ₃₅ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 552.2 (M+1 ), 256.2 ( M/2 )

^! HNMR: (400MHz , CD ₃ OD) δ 9.21 (s， 1Η), 8.79 (s, 1 H), 7.96 (d, 1H), 7.69-7.68 (m， 1 H), 7.42 (d, 1 H ) ， 7.34 (s, 1 H), 7.04 (t, 1 H), 6.84 (d， 1 H), 4.37 (d, 2H)， 4.09 (d, 2H), 3.0-2.96 (m, 7H)， 2.10-2.05 (m, 5H), 1.77- 1.63 (m，7H), 1.37-1.33 (m, 3H)。

实施例 23 (E)-N-(7- (双环 [3.1.0]己烷-6-基甲氧基)-4-(3-氯-4-氟苯氨基) 喹唑啉 -6-基) -4- (二曱基氨基)丁基 -2-烯酰胺 (化合物 23)的制 备

7- (双环 [3.1.0]己烷 -6-基甲氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-6-硝基喹唑 啉 _4-胺 制备

将双环 [3.1.0]己烷 -6-基曱醇（3.36g， 30mmol)\ 碳酸钾（4.14g， 30mmol)和 7-氟 -4-(3-氯 -4-氟苯胺 )-6-硝基喹唑啉 (3.36g， lOmmol)加入 二氧六环 (50 ml)中， 于室温搅拌 24小时， 反应完毕后加水， 并用乙酸 乙酯萃取， 将有机相用无水硫酸钠千燥， 用硅胶柱色谱纯化（石油醚 / 乙酸乙酯 =1/1洗脱）， 得产品 7.57g, 产率 59%。

(2) 7- (双环 [3.1.0]己烷 -6-基曱氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟笨基))喹唑啉 -4,6- 二

将 7- (双环 [3.1.0]己烷 -6-基曱氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基 ))-6-硝基 喹唑啉 -4-胺（1.71 g, 4 mmol) 和钯 /碳 (0.2 g)加入至四氢呋喃 （30 mL) 中， 于室温搅拌过夜， 反应完毕后加水， 并用乙酸乙酯萃取， 将有机 相蒸干， 得产品 1.40 g, 产率 88%。

(3) (E)-N-(7- (双环 [3.1.0]己烷-6-基曱氧基)-4-(3-氯-4-氟苯氨基）喹� ��

_ ₆ -基) -4- (二曱基氨基)丁基 -2-烯酰胺的制备

将 4- (二曱基氨基)丁基 -2-烯酸 (0.52 g, 4 mmol ) 加入至 20 mL二 氯乙烷中， 冰浴下滴加二氯亚砜 (0.95 g, 8 mmol), 加热回流 2小时， 反应完毕后将反应液蒸干， 用 50mL乙腈溶解， 滴加入三乙胺 (0.3 g， 3 mmol)和 7- (双环 [3.1.0]己烷 -6-基曱氧基) -N-(4-(3-氯 -4-氟苯基))喹唑 啉 -4，6-二胺（1.19g， 3 mmol)在四氢呋喃（100 mL)中的溶液， 搅拌 12 h， 加水， 并用二氯曱烷萃取， 将有机相用无水硫酸钠干燥， 经制备液相 ( C ₁₈ , ODS-AQ 40-60um , 流动相为曱醇 /水 = 50/50 ) 纯化， 得 (Ε)-Ν-(7- (双环 [3.1.0]己烷-6-基曱氧基)-4-(3-氯-4-氟苯氨基）喹� ��啉-6- 基)-4-(二曱基氨基)丁基-2-烯酰胺0.168g, 产率： 11%。

分子式： C ₂₇ H ₂₉ C1FN ₅ 0 ₂

质谱 (m/e): 510 (M+1), 255.7 ( M/2 )

^! HNMR (400 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 9.78 (s, 1H), 951-9.54 (m, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.51-8.52 (m, 1H), 8.11-8.13 (m, 1H), 7.78-7.80 (m, 1H) , 7.41 (t, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.77-6.81 (m, 1H), 6.54-6.57 (m, 1H), 4.21-4.23 (m, 1H) 4.05-4.07 (m, 1H), 3.08-3.09 (m， 2H), 2.19 (s, 6H)， 1.95-2.01 (m, 1H), 1.83-1.91 (m, 2H),1.88 (m, 2H), 1.71-1.73 (m, 2H), 1.36 (m, 1H), 1.04 (m, 1H)。 化合物 1~16、 18和 20~23均可采取化合物 17和化合物 19的成盐 方法成盐。

参考上述制备方法， 还可以制备以下化合物:

- OL -

M00/ll0ZM3/X3d 096而 OAV - \L-

-T00/ll0ZN3/X3d 096而 iIOZ OAV II. 本发明化合物的体外抗肿瘤活性测定

以下通过体外酶学抑制活性以及体外细胞学抑 制活性进一步阐述 本发明化合物的有益效果， 但不应将此理解为本发明化合物仅具有下 列有益效果。

实验例 1 本发明化合物的体外酶学抑制活性

供试品：

对照药： Gefitinib> erlotinib盐酸盐， 购自安庆沃德化工有限公司； lapatinib 二对曱苯磺酸盐， 购自台州市晟欣医药化工有限 公司； CI-1033盐酸盐， 购自上海瀚香香料有限公司； 以及 本发明化合物： 自制， 其化学名称和结构式与制备方法见各化合物 的制备实施例。

实验方法：

下述实验中缩写所代表的含义如下：

HEPES: 羟乙基哌嗪乙硫磺酸；

Brij-35 : 十二烷基聚乙二醇醚；

DTT: 二石充苏糖醇；

Coating Reagent #3： #3被膜剂；

EDTA: 乙二胺四乙酸， 购自 Sigma公司；

FAM标记的肽： 荧光素标记肽 22 ( GL Biochem ) ；

ATP: 三磷酸腺苷 （Sigma ) ；

DMSO: 二曱基亚砜；

EGFR: 人表皮生长因子受体 （Carna ) ；

HER2: 人表皮生长因子受体 2 ( Carna ) ；

HER4: 人表皮生长因子受体 4 ( Carna ) 。

1. 试验用试剂配制

① 1.25倍不含 MnCl ₂ 的激酶緩沖液 （62.5 mM HEPES, PH 7.5 ,

0.001875% Brij-35 , 12.5 mM MgCl ₂ , 2.5 mM DTT ) ； ② 1.25 倍含 MnCl ₂ 的激酶緩沖液 （62.5 mM HEPES, pH 7.5 , 0.001875% Brij-35 , 12.5 mM MgCl ₂ ， 12.5 mM MnCl ₂ , 2.5 mM DTT ) ；

③ 终止液（ lOO mM HEPES, pH 7.5， 0.015% Brij-35 , 0.2% Coating Reagent #3， 50 mM EDTA ) ；

④ 2.5倍激酶溶液（ 1.25倍激酶緩沖液中加入相应的激酶配制 2.5 倍 EGFR、 HER2、 HER4激酶溶液） ；

⑤ 2.5倍肽溶液 （ 1.25倍激酶緩沖液中加入 FAM标记的肽和 ATP 配制肽溶液） ；

⑥ 5倍化合物溶液（采用 100% DMSO配制 50倍不同浓度梯度的 化合物溶液， 用水稀释 10倍， 为 5倍不同浓度梯度的化合物溶液） ；

2. 取 5μί 5倍化合物溶液加入 384孔板；

3. 加入 10 2.5倍酶溶液孵育 lOmin;

4. 然后加入 lO L 2.5倍肽溶液， 28 °C , 反应 lh;

5. 最后加入 25 L终止液终止反应， Caliper读取数据。

6. 曲线拟合得出 IC ₅₀

计算抑制率 （％) = (最大转换率 -转换率） I (最大转换率 -最小 转换率） X 100

采用 Xlfit软件进行曲线拟合， 得出 IC ₅₀ 值。

实验结果如下：

表 1 体外酶学抑制活性

酶学抑制活性 IC ₅ Q ( nM ) 化合物

EGFR HER2 HER4 化合物 1 1 0.8 12 8.3 化合物 14 0.39 2.6 1.2 化合物 18 1 6.5 1.9 化合物 19盐酸盐 0.56 3.1 3.7

实验结论：

由表 1可见， 本发明化合物对 EGFR、 HER2、 HER4激酶均有较 强的抑制活性， 与 CI-1033盐酸盐活性相当； 对 HER2激酶的抑制活性 显著优于 gefitinib和 erlotinib盐酸盐；对 HER4激酶的抑制活性显著优 于 erlotinib盐酸盐和 lapatinib二对曱苯磺酸盐。 实验例 2 本发明化合物的体外细胞学抑制活性

供试品：

对照药： Gefitinib 、 erlotinib盐酸盐， 购自安庆沃德化工有限公司； lapatinib 二对曱苯磺酸盐， 购自台州市晟欣医药化工有限 公司； CI-1033盐酸盐， 购自上海瀚香香料有限公司； 以及 本发明化合物： 自制， 其化学名称和结构式与制备方法见各化合物 的制备实施例。

实验方法：

下述实验中缩写所代表的含义如下：

XTT: 3,3'-[ 1 - (苯氨酰基) -3,4-四氮唑] -二 (4-曱氧基 -6-硝'基)苯磺酸钠 /2,3- 双（2-曱氧基 -4- 肖基 -5-磺苯基）-2H-四唑 -5-曱酰胺盐， 购 自

Amresco公司；

RPMI1640: Roswell Park Memorial Institute罗斯韦尔公园纪念研究所研 究的培养液名称： 购自 Hyclone公司；

FBS: 胎牛血清， 购自 Hyclone公司； PBS: 磷酸盐緩沖液， 购自 Homemade公司。

1. 试剂和化合物配制

1 ) PBS 配制:

分别称取： 8g NaCl, 0.2g KC1 , 1.44g Na ₂ HP0 ₄ , 0.24 g KH ₂ PO ₄ , 加入 800 mL 超纯水， 调 pH=7.4， 加入超纯水， 定容至 1L, 高压灭 菌 20 min„

2) XTT ^^测工作液配制：

称取 100 mg XTT 粉末， 避光溶解于 300 ml 加热至 50°C 不含 酚红的无血清 RPMI1640培养液中， 过滤， 分装， 立即或一周内使用， 所有过程需避光。

3) 配制测试化合物

• 配制测试化合物储液:将化合物粉末溶解于 DMSO中，到 10 mM 浓度。

· 配制测试化合物梯度稀释溶液: 首先， 取 10 mM 的测试化合物 储液用 DMSO 4 倍连续梯度稀释， 共 10 个浓度。 再分别取 2 L 的 DMSO 稀释的化合物加到 998μί含 10% FBS 的培养液中， 化合物最 高浓度为 20μΜ， DMSO 浓度为 0.2%, 共 10个浓度梯度。

2. 细胞培养方法

1) 细胞复苏：

• 从液氮中取出细胞冻存管， 置于 37 °C ~ 39°C 水浴中， 快速融 化。

• 将冻存液转移至 15 ml 无菌离心管中， 加入 10 倍于冻存液体 积的培养液， 于 1000 rpm、 4°C离心 5 min。 弃除离心管中培养液， 加 入含 10% FBS 培养液， 重悬细胞， 转移到培养 中， 第二天换液。

2) 细胞传代

• 对数生长期细胞， 弃除培养液， 加入适量体积 PBS 洗一次， 再 加入适量体积的含 0.25% 胰酶和 0.02% EDTA 的消化液。 37°C放置 2 ~ 5 min, 弃去消化液， PBS 洗一次。 加入适量体积含 10% FBS 培养 液终止消化， 移液管轻轻吹打， 将细胞消化下来制成细胞悬液供传代 和实验。

3) 细胞冻存

· 对数生长期细胞， 用含 0.25% 胰酶和 0.02% EDTA 的消化液 消化细胞， 制成细胞悬液， 于 1000 rpm、 4°C离心 5 min。 弃去培养液， 加入含 10% DMSO 和 90% FBS 的冻存液， 重悬细胞， 每管 2x l0 ⁶ 个 细胞分装于冻存管中。 将冻存管置于程序降温盒中， -80 °C放置 24 h 后， 转移到液氮中冻存。

3. 细月包 板

1 ) 制备细胞悬液

• 去除培养瓶中的培养基； 用 PBS 润洗细胞两遍； 加胰酶消化离 心收集；用含 10% 胎牛血清的培养基重悬，计数并调整到合适浓 度（细 胞活力必须大于 90%); 细胞浓度为： 5xl0 ⁴ /ml。

2) 将细胞悬液加入 96孔板每孔 lOO L;

3) 37°C , 5% C0 ₂ 培养箱中培养过夜。

4. 药物处理

将药物加入细胞培养板中，放入 37°C， 5% C0 ₂ 培养箱中培养 72 小 时。

5. XTT 法检测细胞活力

加入 XTT工作液， 在 37°C , 5% C0 ₂ 培养箱中放置 2 小时， 放入 酶标仪中读取 450nm 吸光。

6. 数据处理

1 ) 百分之抑制率采用以下公式计算

%抑制= (读数（溶媒） -读数（化合物 )/(读数（溶媒） -读数（阳 性对照） X 100% ；

2) 输入 GraphPad Prism5.0作图， 得到曲线及 IC ₅₀ 。

实验结果： 表 2 对 H1975 (NSCLC, 非小细胞性肺癌）体外细胞学抑制活性

对 Calu-3(NSCLC， 非小细胞性肺癌）体外细胞学抑制活性

表 4 对 A431 (Epidermoid carcinoma, 类上皮癌)体夕卜细胞学抑制活性

注：上述实验用细胞 HI 975、 Calu-3和 A431均来源于 Chinese Vendor。 实验结论：

由表 2可见， 本发明化合物对 H1975 (NSCLC, 非小细胞性肺癌） 细胞增殖抑制作用显著优于 erlotinib盐酸盐、lapatinib二对曱苯磺酸盐。 由表 3可见， 本发明化合物对 Calu-3 (NSCLC, 非小细胞性肺癌）细胞 增殖抑制作用优于 lapatinib二对曱苯磺酸盐， 显著优于 erlotinib盐酸 盐和 CI-1033盐酸盐。 由表 4可见， 本发明化合物对 A431 (Epidermoid carcinoma, 类上皮癌）细胞增殖抑制作用优于 CI-1033盐酸盐， 显著优 于 erlotinib盐酸盐、 lapatinib二对甲苯磺酸盐。